Оптимизация агробактериального метода трансформации кукурузы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Данилова, Светлана Алексеевна

• Данилова, Светлана Алексеевна
• кандидат биологических наук
• 2001

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Данилова, Светлана Алексеевна

Введение

Обзор литературы

Глава I. Трансгенные растения для целей практической селекции.

1.1. Устойчивость к гербицидам

1.2. Устойчивость к насекомым

1.3. Устойчивость к вирусам

1.4. Устойчивость к фитопатогенам . Ю

I. 5. Устойчивость к абиотическим стрессам

1.6. Сбалансированный аминокислотный состав запасных белков

I. 7.Изменение состава вторичных метаболитов

I. 8.Получение вакцин с помощью трансгенных растений

1.9.Экологическая роль трансгенных растений

Глава П.Генетическая трансформация растений - представителей семейства злаковых

II. 1. Методы генетической трансформации однодольных растений

II. 1. 1. Метод "прямого" переноса генов в протопласты

II. 1. 2. Трансформация с помощью опыления

II. 1.3. Баллистическая трансформация

II. 1. 4. Трансформация с использованием агробактерий

II. 2. Маркёры трансформации

II. 2.1. Селективные гены

II. 2. 2. Репортёрные гены

II. 3. Экспрессия чужеродных генов и её регуляция в трансгенных растениях ЗЗ

II. 4. Генетическая трансформация кукурузы

Экспериментальная часть

Глава III. Материал и методы

Глава IV. Результаты и обсуждение

IV. 1.Влияние антибиотика канамицина на каллус и растения кукурузы

IV. 2. Влияние антибиотика цефотаксима на рост каллуса и регенерацию растений кукурузы

IV. 3. Трансформация кукурузы с использованием суспензии агробактерий

IV. 4. Оптимизация условий агробактериальной трансформации при культивировании каллуса кукурузы в суспензии агробактерий

IV. 5. Трансформация кукурузы путем культивирования на газоне агробактерий

IV.6. Тестирование семян полученных из канамицин устойчивых растений кукурузы'

IV. 7. Введение гена дефензина редьки

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Оптимизация агробактериального метода трансформации кукурузы»

В последние годы, в связи с задачами наращивания производства сельскохозяйственной продукции, большое внимание уделяется теоретическим разработкам и практической реализации достижений биотехнологии. Для обеспечения потребностей населения, численность которого достигнет к 2040 году 8,5 млрд.человек, потребуется при существующих площадях сельскохозяйственных угодий повысить урожайность возделываемых кулыур в 3 раза (Захаренко 2000). При ограниченных земельных ресурсах и почти исчерпанных возможностях увеличения урожайности за счет традиционных факторов интенсификации земледелия (химизация, механизация и мелиорация земель), внедрение новейших достижений биотехнологии и, в частности, генетической инженерии растений, является реальным направлением повышения продуктивности земледелия.

Генетическая инженерия дает возможность получения растений со свойствами, присутствие которых невозможно обеспечить методами традиционной селекции. Классическая селекция, в лучшем случае, могла использовать наследственный материал только ближайших родственников культурных растений, но и эта возможность сопровождалась дополнительным балластом нежелательных генов, от которых нужно было избавляться многократными возвратными скрещиваниями с большим риском утратить немногие полезные признаки. Весь же оставшийся генофонд живой природы был полностью недоступен для применения в селекционной практике. Методами генетической инженерии можно конструировать функционально активные генетические структуры in vitro из фрагментов генов различных организмов и вводить такие конструкции в клетку, создавая условия для экспрессии введенных, часто совершенно чужеродных генов. 4

Применение трансгенных растений, способных противостоять насекомым-вредителям, патогенам, неблагоприятным факторам окружающей среды без дополнительных обработок химическими веществами может значительно улучшить экологическое состояние природы и сделать более "органическими" продукты питания для человечества. Генетическая инженерия растений оперирует с теми же веществами -молекулами нуклеиновых кислот и белков, с которыми человечество сталкивается постоянно за своим обеденным столом. В отличие от химического производства, она не создает новые вещества, которые были бы незнакомы человеческому организму или природе в целом. Эта технология свободна от загрязняющих мир токсических отходов.

В настоящее время решены фундаментальные вопросы, связанные с передачей генов: разработаны методы трансформации, созданы плазмиды для переноса, подобраны условия эффективного введения чужеродных генов. С помощью генетической трансформации уже получены трансгенные растения, представляющие интерес для сельскохозяйственного производства, в том числе, обладающие такими признаками как устойчивость к гербицидам, насекомым, вирусам, фитопатогенам, абиотическим стрессам и др. Трансгенные формы картофеля, томатов, табака, риса, кукурузы, сои, подсолнечника, льна проходят испытания на экспериментальных полях, а некоторые уже составляют значительную часть в валовом сельскохозяйственном продукте ряда стран, в первую очередь, США. По данным международной службы по применению агробиотехнологических разработок за период с 1996 по 1999 г. площадь посевов трансгенных сортов расширилась с 1,7 до 39,9 млн. га. Общая прибыль от использования трансгенных сортов оценивается в сотни млн. долларов (Левенко, 2000, Захаренко, 2000). В России полученные трансгенные растения пока только проходят полевые и производственные испытания.

Кукуруза, которая является очень ценной зерновой и кормовой культурой, стала одним из первых объектов генетической трансформации, имеющей практическую 5 направленность. Трансгенные сорта, обладающие устойчивостью к гербицидам и насекомым-вредителям, уже возделываются на полях в США, Канаде и некоторых других странах. Тем не менее, до сих пор генетическая трансформация кукурузы остается серьезной проблемой. В настоящее время основным способом введения чужеродных генов в растения злаковых является баллистическая тр;шсфекция. Наряду с рядом преимуществ, этот способ имеет такие недостатки как низкая эффективность, нестабильность и малая емкость вводимых конструкций, высокая стоимость. Значительно большую экономическую эффективность и стабильность результатов обеспечивает введение генов, опосредованное агробактериями. Этот метод детально разработан для двудольных растений, но почти не используется для однодольных. Хотя в литературе встречаются отдельные сообщения о применении метода агробактериальной трансформации к зерновым, однако для кукурузы он практически не разработан.

Целью данной работы является разработка оптимальных условий генетической трансформации кукурузы с использованием Agrobacterium tumsfaciens, как одного из способов увеличения производства этой ценной сельскохозяйственной культуры. Для достижения поставленной цели нужно было решить сле дующие задачи:

1. оптимизировать условия агробактериального заражения эксплантов и отбора трансформированных растений;

2. получить трансгенные растения кукурузы;

3. проверить наследование введенных генов. 6

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

В 1983 г. были опубликованы первые работы по получению трансгенных растений табака, содержавших в качестве чужеродных генов селективные маркеры устойчивости к антибиотикам и гены - репортеры и использовавшихся, как чисто научные модели. Однако, уже через три года были проведены первые полевые испытания сельскохозяйственных трансгенных растений, а спустя десять лет генетическая инженерия растений решительно заявила о себе, предложив рынку десятки экономически важных трансгенных растений. В 1995 г. в США были получены первые разрешения на коммерциализацию трансгенных сортов растений и их продуктов.

В настоящее время различные методические приемы генетической инженерии стали составной частью современной молекулярной и клеточной биологии. К основным задачам генетической инженерии относятся генетическая трансформация различных видов растений, экспрессия чужеродных генов и её регуляция в клетках трансгенных растений.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Данилова, Светлана Алексеевна

ВЫВОДЫ

1. Оптимизирован метод генетической трансформации кукурузы путем кокультивирования с Agrobacterium tumefaciens, в частности, определены концентрации и время применения антибиотиков канамицина и цефотаксима, подобраны условия, способствующие более активному заражению эксплантов.

2. Показано, что применение вакуумной инфильтрации, ацетосирингона или экссудатов листьев табака способствуют повышению частоты трансформации.

3. Выявлено стимулирующее действие цефотаксима на регенерацию растений в культуре тканей кукурузы in vitro. Частота регенерации повышалась в 3 - 18 раз в зависимости от генотипа. Цефотаксим усиливал морфогенез, способствуя полной дифференцировке клеток в течение 4-5 месяцев.

4. Предложен новый способ агробактериальной генетической трансформации кукурузы, основанный на культивировании эксплантов на газоне агробактерий в течение 15 дней и позволяющий использовать в качестве эксплантов как незрелые зародыши, так и эмбриогенный каллус. Частота выделения устойчивых к канамицину растений этим методом была выше по сравнению с ранее предложенными способами трансформации кукурузы.

5. Показана зависимость эффективности генетической трансформации от частоты регенерации растений из каллусных тканей кукурузы.

6. Получены трансгенные растения кукурузы, со встроенными генами неомицинфосфотрансферазы II (npt II), (3-глюкуронидазы (uid А) и дефензина (rs). Встраивание генов npt II и rs подтверждено данными молекулярного анализа. Показана экспрессия генов npt II и uidA.

93

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате проведенной работы оптимизирован метод трансформации кукурузы с использованием A. tumefaciense. Разработан новый способ заражения: эксплантов кукурузы агробактериями, который заключается в продолжительном (15 дней) культивировании эксплантов на газоне агробактерий, активированных экссудатом листьев табака. Преимуществами данного способа по сравненк ю с культивированием эксплантов в суспензии агробактерий является длительный контакт растущих тканей растений и активных бактерий, что повышает вероятность заражения, при этом существенно снижается негативное влияние процедуры трансформации на ре генерационную способность эксплантов. Последнее особенно важно для высокочувствительных генотипов кукурузы.

Новый способ заражения эффективен при использовании з качестве эксплантов и незрелых зародышей, и эмбриогенного каллуса кукурузы. Пассируемый эмбриогенный каллус в качестве эксплантов при агробактериальной трансформации использован впервые.

Разработанный метод агробактериальной трансформации имеет ряд преимуществ по сравнению с используемыми ранее для кукурузы электропара цией протопластов или баллистической трансфекцией, прежде всего, из-за высокой эффективности. Если частота трансгенных растений, полученных путем электропоращш, составляет 1 -6 % [Fromm et al.,1986; O'Halluin et al.,1992], а полученных путем бомбардировки микрочастицами - не превышает 10 % [Wanters et al.,1992; Brettschneider et al.,1997], то после заражения эксплантов на газоне агробактерий частота Км-уетойчивых растений варьировала от 18 до 40 %. Новый метод значительно дешевле ранее используемых, Получены растения кукурузы, экспрессирующие маркерные гены npt II и aid А, а также ген rs дефензина редьки. Трансфекция чужеродных генов доказана ПЦР ■■ анализом и блот - гибридизацией по Саузерну. Показано наследование введенных генов.

92

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Данилова, Светлана Алексеевна, 2001 год

1. Бурьянов Я.И. Успехи и перспективы генно-инженерной биотехнологии растений. // Физиология растений 1999 - т. 46 - № 6 - с. 930-944.

2. Бурьянов Я.И., Кадо К.И. Стратегия создания трансгенных растений с устойчивостью к фитопатогенам и вредителям.//Биорганическая химия 1999 - т.25 - №12 - с.903-910.

3. Гамбург К.З., Рекославская Н.И., Швецов С.Г. Ауксины в культурах тканей и клеток растений. // Новосибирск: Наука 1990 - 241с.

4. Данилова С.А. Особенности методики генетической трансформации кукурузы с использованием A. tumefaciens. // Тезисы школы-конференции "Горизонты физико-химической биологии", Пущино, II часть 2000а - с. 157-158.

5. Данилова С.А. Оптимизация условий агробактериальной трансформации кукурузы. // Сб. научных трудов "РГАЗУ Агропромышленному комплексу" I часть, Москва -2000 - с. 64-65.

6. Диас С., Долгих Ю.И., Шамина З.Б., Шевелуха И.С. Значение физиологических и генетических факторов в индукции эмбриогенного каллуса у разных линий кукурузы. // Доклады РАСХН 1994 - № 2 - с. 6-8.

7. Долгих Ю.И., Ларина С.Н., Шамина З.Б., Жданова Н.Е., Пустовойтова Т.Н. Засухо устойчивость растений кукурузы, поллученных из устойчивых к осмотическому94действию полиэтиленгликоля клеточных линий. // Физиология Растений 1994 - т. 41-№6-с. 853-858.

8. Ю.Драйпер Дж., Скотт Р., Армитидж Ф., Уолден Р. (Ред.) Геннная инженерия растений.- Москва: Мир 1991 - 408 с.

9. Ивашута С.И., Агафодорова М.Н., Солодкая J1.A., Кирьян И.Г., Мазин В.В. Влияние реципиентных систем на эффективность генетической трансформации кормовых растений // Биотехнология 1995 - № 1-2 - с.6-10.

10. Кучук Н.В. Генетическая инженерия высших растений // Киев: Наукова думка 1997- 152 стр.

11. Левенко Б.А. Биотехнология растений: сегодня и завтра // Физиология и биохимия культурных растений 1999 - т.31 - №3 - с. 163 - 172.

12. Лихтенштейн К., Дрейпер Д. Генетическая инженерия растений. // Клонирование ДНК. Методы. М: Мир - 1988 - с. 315-380.95

13. Лутова JI.А., Павлова З.Б., Иванова М.М. Агробактериальная трансформация как способ изменения гормонального метаболизма у высших растений. // Генетика 1998 -т. 34-№2-с. 165 - 182.

14. МаниатисТ., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. Москва: Мир - 1984 - 480с.

15. Неумывакин JI.B., Пирузян Э.С. Использование методов генной инженерии для повышения осмоустойчивости растений. // Тезис доклада VIII конференции "Новые направления биотехнологии" 27 - 29 апреля 1998 - М. - с. 29.

16. Парашина Е.В., Шаденков А.А., Лаврова Н.В., Аветисов В.А. Использование гена защитного пептида (дефензина) из семян редьки для повышения устойчивости томатов к заболеваниям, вызываемым грибами. // Биотехнология 1999 - г.6 - с.35- 41.

17. Пирузян Э.С. Основы генетической инженерии растений // Москва: Наука 1988 -304 стр.

18. Пухальский В.А., Смирнов С.П., Коростылева Т.В., Билинская Е.Н., Елисеева А.А. Генетическая трансформация пшеницы (Triticum aestivum L.) с помощью Agrobacterium tumefaciens. // Генетика 1996 - т. 32 - № 11 - с. 1596 - 1600.

19. Ралдугина Г.Н., Горелова С.В., Кожемякин А.В. Стабильность и наследование трансгеннов в растениях рапса. // Физиология растений 2000 - т. 47 - № 3 - 437-445.

20. Чесноков Ю.В., Король А.Б. Перенос чужеродных генов в интактные растения кукурузы посредством процесса опыления оплодотворения. // Генетика - 1993 - т. 29 -N. 8 - с. 1345 - 1355.

21. Agrawal D.C., Baneijee А.К., Kedari Р.Н., Jacob S., Hazra S., Krishnamurthy K.V. Effect of cefotaxime on the growth of excised embryo-axes of 6 cultivars of cotton (Gossypium hirsutum L.) // J. Plant Physiology 1998 - v.152 - Iss.4-5 - p.580-582.

22. Akella V., Lurguin P.F. Expression in cowpea seedlings of chimeric transgenes after electroporation into seed derived embryos. // Plant Cell Repts. - 1993 - v. 12 - is. 2 -p. 110-117.

23. Aldemita R.R., Hodges Т.К. Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of japonica and indica rice varieties. // Planta 1996 - v. 199 - p. 612-617.

24. АНа, Hayaski H., Chen Т.Н., Murata N. Transformation with a gene for choline oxidase enhances the cold tolerance of Arabidopsis during germination and early growth. // Plant Cell and Environment. 1998 - v. 21 p. 232 - 239.

25. Altenbach S.B., Pearson K.W., Leung F.W., Sun S.S.M. Cloning and sequence analysis of cDNA encoding a Brazil nut protein exceptionally rich in methionine. // Plant Mol. Biol. -1987-v. 8-p. 239-250.

26. Ап G., Costa M.A., Ha S.B. Nopaline synthase promoter is wound inducible and auxin inducible. // Plant Cell 1990 - v. 2 - p. 225 - 333.

27. Anderson J.M., Palukaitis P., Zaitlin M. A defective replicase gene induces resistance to cucumber mosaic virus in transgenic tobacco plants. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA 1992 - v. 89-is. 18-p. 8759-8763.

28. Anderson N., Kirihara J. Selection of stable transformants from Black Mexican sweet maize suspension cultures. // The Maize Handbook, Eds. Freeling M., Walbot V. New York: Springer - 1994 - p. 690 - 694.

29. Аппе C.F., Graves I.S.L., Goldman. The transformation of Zea mays seedlings with Agrobacterium tumefaciens. // Plant Moiecular Biology 1986 - v. 7 - p. 43-50.

30. Arakawa Т., Langridge W. et al. Efficacy of a food plant based oral cholera toxin P. subunit vaccine. // Nature Biotechnol. 1998 - v. 16 - p. 292 - 297.

31. Atabekov J.G.,Dorokhov Y.L. Plant virys specific transport function and resistance of plants to viruses. //Adv. Virus Res. 1984 - v. 29 - p. 313 - 364.

32. Barcelo P., Hagel C., Becker D. et al. // Transgenic cereal (tritordeum) plants obtained at high efficiency by microprojectile bombardment of inflorescence tissue. // Plant J. 1994 -v. 5 - is. 4 - p. 583 - 592.

33. Bates G.W. Electroporation of plant protoplasts and tissues. // Methods in Cell Biology v. 50 / Eds. D.W. Galbraith, D.P. Bourque, H.J. Bohnert - New York: Acad. Press - 1995 -p 363 - 373.

34. Bayley C., Trolinder N., Ray C. et al. Engineering 2,4 D resistance into cotton. // Ibid. -1992 v. 83 - p. 645 - 649.

35. Becker D., Brettschneider R., Lorz H. Fertile transgenic wheat from microprojectile bombardment of scutellar tissue. // Plant J. 1994 - v. 5 - is. 2 - p. 299 - 307.

36. Benfey P.N., Chua N.H. The cauliflower mosaic virus 35S promoter: combinatorial regulation of transcription in plants. // Science 1990 - v. 250 - p. 959-966.

37. Bharathi M., Foissac X., Du J. et. al. Enhancing the resistance of rice to brown planthopper. //Abstr. IX Intern Congr. Plant Tissue Cell Culture 1998 - Jerusalem -14-19 June - p. 130.

38. Birch R. G., Franks T. Development and optimization of microprojectile systems for plant genetic transformation. // Aust. J. Plant Physiol. -1991 v. 18 - p.453 - 469.

39. Borrelli G.M., Difonzo N., Lupotto E. Effect of cefotaxime on callus culture and plant regeneration in durum wheat // J. Plant Physiology 1992 - v. 140 - Iss.3 - p.372-374.

40. Brettschneider R., Becker D., Lorz H. Efficient transformation of scutellar tissue of maize embryos. // Theor Appl Genet -1997 v. 94 - p. 737 - 748.98

41. Breusegem E., Slooten L., Stassart J.M. et al. Overprooduction of Arabidopsis thaliana FeSOD confers oxidative stress tolerance to transgenic maize. // Plant & Cell Physiology -1999-v. 40-is. 5-p. 515-523.

42. Callis J., Fromm M.E., Walbot V. Introns increase gene expression in cultured maize cells. // Genes Devel. 1987 - v. 1 - p. 1183 - 1200.

43. Cassas A.M., Kononowicz A.K., Zehr U.B., Tomes D.T., Axtell J.D., Butler L.G., Bressan R.A., Hasegawa P.M. Transgenic sorghum plants via microprojectile bombardment. // Proc. Natl. Acad. Sci.USA 1993 - v. 90 - p. 11212 -11216.

44. Castillo A.M., Vasil V., Vasil I.K. Rapid production of fertile transgenic plants of rye (Secale cereale L.). // Biotechnology 1994 - v. 12 - is. 12 - p. 1366-1371.

45. Cheng M., Joyce E. Fry, Shengzhi Pang., Huaping Zhou, Catherine M. Hironaka, DDuncan D.R., Conner T.W., Wan Y. Genetic transformation of wheat Mediated by Agrobacterium tumefaciens. // Plant Physiology 1997 v. 115 - p. 971-980.

46. Comail L., Facciotti D., Hiatt W. et al. Expression in plants of a mutant Salmonella gene from Salmonella typhimurium confers tolerance to glyphosate. // Nature 1985 - v. 317 - p. 741 - 744.

47. Cuozzo M., O'Connel K.M., Kaniewski W. et al. Viral protection in transgenic tobacco plants expressing the cucumber mosaic virus coat protein or its antisence RNA. // Biotechnology 1988 - v. 6 - p. 549 - 557.

48. Dai Z., An G. Induction of nopaline synthase promoter activity by H202 has no direct correlation with salicylic acid. // Plant Physiol. 1995 - v. 109 - p. 1191 -1197.

49. Datta S.K., Peterhans A., Datta K., Potrykus I. // Genetically engineered fertile Indica rice recovered from protoplast. // Biotechnology - 1990 - v. 8 - p. 736 - 740.

50. De Block M., Botterman J., Vandewiele M. et al. Engineering herbicide resistance in plants by expression of a detoxifying enzyme. // Ibid. 1987 - v. 6 - p. 2513 - 2518.

51. Dekeyser R.A., Claes В., De Rycke R.M.U. et al. Transient gene expression in intact and organized rice tissues. // Plant and Cell 1990 - v. 2 - is. 7 - p. 591 - 602.

52. Delannay X., Vallee B.J. la, Proksch R.K. et al. Field performance of transgenic tomato plants expressing the Bacillus thuringiensis var. kurstaki insect control protein. // Biotechnology 1989 - v. 7 - p. 1265 - 1269.

53. Dennebey B.K., Petersen W.L., Ford Santino C. et al. Comparison of selectiwe agents for use with the selectable marker gene bar in maize transformation. // Plant Cell Tis. and Org. Cult. - 1994-v. 36-is. 1-p. 1-7.

54. Dennehey B.K., Petersen W.L., Fordsantino C., Pajeau M., Armstrong C.L. Comparison of selective a gents for use with the selectable markers gene bar in maize transformation. // Plant Cell Tissue and Organ Culture 1994 - v. 36 - is. 1 - p. 1-7.

55. DeWet J.R., Wood K.V., DeLuca M., Helinski D.R. Firefly luciferase gene: structure and expression in mammalian cells. // Mol. Cell Biol. 1987 - v. 7 - p. 725 - 737.

56. Dillen W., Engler G., Van Montagu M. et al. Electroporation mediated DNA delivery to seedling tissues of Phaseolus vulgaris L. (common bean). // Plant Cell Repts. - 1995 - v. 15 -is. 1/2- p. 119-124.

57. Dolgykh Y.I. High level of variability among the plants regenerated from callus of inbred A188. // Maize Genetics Cooperation Newsletter 73 1999 - april 15 - p. 70.

58. Ding X., Gopalakrishnan В., Johnson L.B. et al. Insect resistance of transgenic tobacco expressing an insect chitinase gene. // Transgenic Res. 1998 - v. 7 - N 2 - p. 77-84.

59. Duan X., Li X., Xue Q., Aboo et - Saad M., Xu D., Wu R. Transgenic rice plants harboring an introduced potato proteinase inhibitor II gene are insect resistant. // Nature Biotechnol. - 1996 - v. 14 - p. 494 - 498.

60. Dunder E., Dawson J., Suttie J., Page G. Maiz transformation by microprojectile bombardment of immature embryos. // In: Potrykus I., Spangenberg G. (eds) Gene transfer to plants. Springer, Berlin Heidelberg New York 1995 - p. 127 - 138.

61. Dupuis J., Pace G.M. Gene transfer to maize male reproductive structure by particle bombardment of tassel primordia. // Plant cell Reports - 1993 - v. 12 - is. 11 - p. 607-611.

62. Ellis J.G., Llewellyn D.L., Dennis E.S., Peacock W.J. Maize adh-I promoter sequences control anaerobic regulation: addition of upstream promoter elements from constitutive genes is necessary for expression in tabacco. // Embo J. 1987 - v. 6 - p. 11-16.

63. Ellis J.R., Shirsat A.H., Hepher A. et al. Tissue specific expression of a pea legumin gene in seeds of Nicotiana plumbaginifolia. // Plant Mol. Biol. 1988 - v. 10 - p. 203 - 214.

64. Elmayan Т., Tepfer M. Synthesis of a bifunctional metallothionein (3 glucuronidase fusion protein in transgenic tobacco plants as a means of reducing leaf cadmium levels. // Plant J. -1994 - v. 6 - is. 3 - p. 433 - 440.

65. Faranda S., Genga A., Viotti A., Manzocchi L.A. Stably transformed cell lines from protoplasts of maize endosperm suspension - cultures. // Plant Cell Tissue and Organ Culture - 1994 - v. 37 - is. 1 - p. 39 - 46.

66. Fischoff D.A., Bowdish K.S., Perlak F.J. et al. Insect tolerant transgenic tomato plants. // Ibid. 1987-v. 8-p. 807-813.

67. Fromm M.E., Morrish F., Armstrong C. et al. Inheritance and expression of chimeric genes in the progeny of transgenic maize plants. // Biotechnology 1990 - v. 8 - p. 833 - 844.

68. Fromm M.E., Taylor L.P., Walbot V. Expression of genes transferred into monocot and dicot plant cells by electroporation. // Proc. Nat.Acad.Sci. USA. 1985 - v.82 - p.5824-5825.

69. Fromm M.E., Taylor L.P., Walbot V. Stable transformation of maize after gene transfer by electroporation. // Nature 1986 - v. 319 - p. 791 - 793.

70. Fujimoto H., Itoh K.,Yamamoto M. et al. Insect resistant rice generated by introduction of a modified delta toxin of Bacillus thuringiensis. // Ibid. - 1993 - v. 11 - p. 1151 -1155.

71. Gioppa della G., Bacur S.C., Taylor M.L. et al. Targeting herbicide - resistant enzyme from Escherichia coli to chlroplasts of higher plants. // Biotechnology - 1987 - v.5 - p.579 -584.

72. Godwin I., Ford-Lloyd В., Newbury H. In vitro approaches to extending the host-range of Agrobacterium for plant transformation. // Aust. J. Bot. 1992 - v. 40 - p. 751-763.102

73. Golovkin M.V., Abraham M., Morocz S., Bottka S., Feher a., Dudits D. Productiin of transgenic maize plants by direct DNA uptake into embryogenic protoplasts. // Planta Science 1993 - v. 90 - is. 1 - p. 41 - 52.

74. Gordon Kamm W. J., Spencer T.M., Mangano M.L. et al. Transformation of maize cells and regeneration of fertile transgenic plants. // Plant Cell. - 1990 - v. 2 - p. 603 - 618.

75. Gould J., Devey M., Hasegawa O., Eugenio C.U., Peterson G., Smith R.H. Transformation of Zea mays L. using Agrobacterium tumefaciens and the shoot apex. // Plant Physiology -1991 v. 95 - p. 426-434.

76. Graves A.S.F., Goldman S.L. The transformation of Zea mays seedlings with Agrobacterium tumefaciens: detection of T-DNA specific enzyme activities. // Plant Mol. Biology 1986 - v. 7 - p. 43-50.

77. Green C.E. Somatic embryogenesis and plant regeneration from friable callus of Zea mais. // In plant tissue culture, maruzen со., Tokyo, Japan 1982 - Ed. Fujiwara A. - p. 107-108.

78. Greenwood J.S., Chrispefls M.J. Correct targeting of the bean storage protein phaseolin in the seeds of transformed tobacco. //Plant Physiol. 1985 - v. 79 - p. 65 - 71.

79. Grimsley N., Hohn Т., Davis J.W., Hohn B. Agrobacterium mediated delivery of infectious maize streak virus into maize plants. // Nature 1987 - v. 325 - p. 177-179.

80. Grimsley N., Hohn Т., Ramos C., Kado C., Rogowsky R. DNA transfer from agrobacterium to Zea mays or Brassica by agroinfection is dependent on bacterial virulence functions. // Mol. Gen Genet. 1989 - v. 217 - p. 309-316.

81. Gritz L., Davies J. Plasmid encoded hygromycin В resistance: the sequence of hygromycin В phosphotransferase gene and its expression in Esherichia coli and Saccharomyces cerevisiae. // Gene - 1983 - v. 25 - p. 179 - 188.

82. Hafte H., Whiteley H.R. Insecticidal crystal protein of Bacillus thuringiensis. // Microbiology Rev. 1989 - v. 53 - p. 242-255.103

83. Hain R., Reif H. J., Krause E. et. al. Disease resistance results from foreign phytoalexin expression in novel plant. // Nature 1993 - v. 361 - p. 153 - 156.

84. Hansen G., Chilton M.D. "Agrolistic transformation of plant cell: integration of T strans generated in planta. // Proc Nat. Acad. Sci. USA - 1996 - v. 93 - p. 14978 - 14983.

85. Hauptmann R.M., Ashraf M., Vasil V., Hannah L.C., Vasil I.K., Ferl R. Promoter strength comparisons of maize Shrunken 1 and Alcohol dehydrogenase 1 and 2 promoters in mono-and dicotyledonous species. // Plant Physiol. 1988 - v. 88 - p. 1063 - 1066.

86. Hauptmann R.M., Ozias Akins P., Vasil V., Tabaeizadeh Z., Rogers S.G., Horsch R.B., Vasil I.K., Fraley R.T. Transient expression of electroporated DNA in monocotyledonous and dicotyledonous species. // Plant Cell Rep. - 1987 - v. 6 - p. 265 - 270.

87. He D.G., Mouradov A., Yang Y.M. et al. Transformation of wheat (Triticum aestivum L.) through electroporation of protoplasts. // Plant Cell Rep. -1994 v. 14 - p. 192 - 196.

88. He G.Y., Lazzeri P.A. Analysis and optimization of DNA delivery into wheat scutellum and tritordeum inflorescence explants by tissue electroporation. // Plant Cell Rep. 1998 -v.18- is. 1/2 - p. 64 - 70.

89. Hess D., Dressier K., Nimmrichter R. Transformation experiments by pipetting Agrobacterium into spikelets of wheat (Triticum aestivum L.). // Plant Sci. 1991 - v. 72 -p.233 - 244.

90. Hilder V.A., Gatehouse A.M.R., Sheerman S., Barker R., Boulter D. A novel mechanism of insect resistance engineered into tobacco. // Nature 1987 - v. 330 - p. 160 - 167.

91. Hoekema A., Roelvink P.W., Hooykaas P.J.J., Schilperoort R.A. Delivery of T-DNA from the A. tumefaciens chromosome into plant cells. // Embo J. 1984 - v. 3 - p. 2485-2490.

92. Hoffman L.M., Donaldson D.D., Bookland R. et al. Synthesis and protein body deposition of maize 15-kd zein in transgenic tobacco seeds. // EMBO J. 1987 - v. 6 -p. 3113 - 3221.

93. Ishizaki-Nishizawa O., Fujii Т., Azuma M. et al. Low-temperature resistance of higher plants is significantly enhanced by a nonspecific cyanobacterial desaturase. // Ibid 1996 -v.14 - p, 1003-1006.

94. Jefferson R.A., Kavanagh T.A., Bevan M.W. GUS fusion: p glucuronidase as a sensitive and versatile gene fusion marker in plants. // EMBO J. - 1987 - v. 6 - p. 3901 - 3907.

95. Kaeppler H.F., Menon G.K., Skadsen R.W., Nuutila A.M., Carlson A.R. Transgenic Oat plants via visual selection of cells expressing green fluorescent protein. // Plant Cell Reports -2000-v. 19-is. 7-p. 661 -666.

96. Kaeppler H.F., Somers D.A., Rines H.W., Cockburn A.F. Silicon carbide fiber -mediated stable transformation of plant - cells. // Theor. and Appl. Genet. - 1992 - v. 84 -p.560 - 566.

97. Пб.Като K.K., Becwar M.R., Hodges Т.К. Regeneration Zea mays L. from embryogenic callus. // Bot. Gas. 1985 - v. 146 - is. 3 - p. 327-334.105

98. Kar S., Basu D., Das S. et al. Expression of cryA(c) gene of Bacillus thuringiensis in transgenic chickpea plants inhibits development of pod borer (Heliothis armigera) larvae. // Transgenic Res. - 1997 - v. 6 - p. 177 - 185.

99. Keil M., Sanchers Serrano J.J., Willmitzer L. Both wound - inducible and tuber - specific expression are mediated by the promoter of a single member of the potato proteinase inhibitor II gene family. // EMBO J - 1989 - v. 8 - p. 1323 - 1330.

100. Kim S.R., Kim Y., An G. Identification of methyl iasmonate and salicylic acid response elements from nopaline synthase (nos) promoter. // Plant Physiol. 1993 - v. 103 - p.97-103.

101. Klein T.M., Fromm M., Weissinger A. et al. Transfer of foreing genes into intact maize cells with high velocity microinjection. // Proc. Nat. acad. Sci. USA - 1988 - v. 85 -p. 4305 - 4309.

102. Klein T.M., Roth B.A., Fromm M.E. Regulation of anthocyanin biosynthetic genes introduced into intact maize tissues by microprojectiles. // Ibid. 1989 - v. 86p.6681 -6685.

103. Kloti A., Iglesias V.A„ Wunn J. et al. Gene transfer by electroporation into intact scutellum cells of wheat embryos. // Plant Cell Repts. 1993 - v. 12 - is. 12 - p. 671 - 675.106

104. Konez С., Kreuzaler F., Kahnan Z., Schell J.A. Simple method to transfer, integrate and study expression of foreign genes, such as chicken ovalbumin and a-actin in plant tumors. // Embo J. 1984 - v. 3 - p. 1029-1037.

105. Kramer C., DiMaio J., Carswell G.K., Shillito R.D. Selection of transformed protoplast-derived Zea mays colonies with phosphinothricin and a novel assay using the pH indicator chlorophenol red. // Planta 1993 - v. 190 - p. 454-458.

106. Kuboi Т., Noguchi A., Yazaki J. Family dependent cadmium accumulation characteristics in higher plants. // Plant Soil. 1986 - v. 92 - p. 405 - 415.

107. Laursen C.M., Krzyzek R.A., Flick C.E., Anderson P.C., Spencer T.M. Production of fertile transgenic maize by electroporation of suspension culture cells. // Plant Molecular Biology - 1994 - v. 24 - is. 1 - p. 51-56.

108. Lazzeri P.A., Brettschneider R., Luhrs R., Lorz H. Stable transformation of barley via PEG induced direct DNA uptake into protoplasts. // Theor. and Appl. Genet. -1991 - v. 81 -p. 434 - 437.

109. Leedel P.J., Zhany G., Cass D.D. Transient GFP expression in sperm cells and zygotes of Zea mays L. // Plant Physiology 1997 - v. 114 - is.l - p. 297-298.

110. Lefebvre D.D., Miki B.L., Laliberte J.F. Mammalian metallothionnein functions in plants. // Biotechnology 1987 - v. 16 - p. 4743 - 4751.107

111. Levesque H., Delepelaire P., Rauze P. et al. Common evolutionary origin of the central portions of the RiTL-DNA of the A. rhizogenes and the Ti-DNAs of A. tumefaciens. // Plant

112. Molecular Biology 1988 - v. 11 - p. 731-744.

113. Li L., Qu R., De Kochko A. et al. An improved rice transformation system using the biolistic method. // Plant Cell Reports 1993 - v. 12 - is. 5 - p. 250-255.

114. Li Z., Hayashimoto A., Murai N. A sulfonylurea herbicide resistance gene from Arabidopsis thaliana as a new selectable marker for production of fertile transgenic plants. // Plant Phisiol. 1992 - v. 100 - p. 662 - 668.

115. Lin W., Anuratha C.S., Datta K. et al. Genetic engineering of rice for resistance to sheath blight. //Ibid. 1995 - v. 13 - is. 7 - p. 686 - 691.

116. Ludwig S., Bowen В., Beach L., Wessler S. A regulatory gene as a novel visible marker for maize transformation. // Science 1990 - v. 247 - p. 449 - 450.

117. Luo Z.K., Wu R. A simple method for transformation of rice via the pollen tube pathway. // Plant Mol. Biol. Rep. - 1988 - v. 6 - p. 165 - 174.

118. Lupotto E., Reali A., Passera S., Chan M.T. Maize elite inbred lines are susceptible to Agrobacterium tumefaciens - mediated transformation. // Maydica - 1999 - v. 44 - is. 3 -p. 211 -218.

119. Ma S.W., Zhao D.L., Yin Z.O. et al. Transgenic plants expressing autoantigens fed to mice to induce oral immune tolerance. //Nature Medicine 1997 - v. 3 - is. 7 - p. 793 - 795.

120. Maiti T.B., Wagner G.J., Hunt A.G. Light inducible and tissue specific expression of a chimeric mouse metallothionein cDNA in tobacco. // Plant Sci. -1991 v. 76 - p. 99 - 107.

121. Marcotte W.R.J., Russell S.H., Quatrano R.S. Abscisic acid-responsive sequence from EM gene of wheat. // Plant Cell 1989 - v. 1 - p. 969-976.

122. Mason H.S., Ball J.M., Shi J.J. et al. Expression of norwalk virus capsid protein in transgenic tobacco and potato and its oral immunogenecity in mice. // Proc. Nat. Acad. Sci.USA. 1996 - v. 93 - p. 5335 - 5340.

123. Misra S., Gedamu L. Heavy metal tolerant transgenic Brassica napus L. and Nicotiana tabacum L. plants. // Theor. and Appl. Genet. 1989 - v. 78 - p. 161 -168.

124. Moller E.M., Bahnurg G., Sandermann H., Jeiger H.H. A simple and efficient protocol for isolation of high molecular weight DNA from filamentos fungi fruit bodies and infected plant tosscus. // Nucl. Acid. Res. 1992 - v. 20 -is. 22 - p. 6115-6116.

125. Murashige Т., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tabacco tissue cultures. // Physiol. Plant -1962 v. 15 - is. 4 - p. 473-497.

126. Nagata Т., Okada K., Kawazu Т., Takebe I. Cauliflower mosaic virus 35S promoter directs S phase specific expressiom in plant cells. // Mol. Gen. Genet. 1987 - v. 207 -p.242-244.

127. Nayak P., Basu D., Das S. et al. Transgenic elit indica rice plants expressing CrylAc 8 -endotoxin of Bacillus thuringiensis are resistant against yellow stem borer. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1997 - v. 94 - p. 2111 - 2116.

128. Negrutiu I., Mouras L., Horth M., Jacobs M. Direct gene transfer to plants: Present development and some future prospectives. // Plant Physiol. Biochem. 1987 - v. 25 -p. 493 - 503.

129. Nehra N.S., Chibbar R.N., Leung N. et al. Self fertile transgenic wheat plants regenerated from isolated scutellar tissues following microprojectile bombardment with two distinct gene constructs. // Plant J. - 1994 - v. 5 - is. 2 - p. 285 - 297.

130. Nelson R.S., McCormic S.W., Delannay X. et al. Virus tolerance plant growth, and field performance of transgenic tomato plants, expressing coat protein from tomato mosaic virus. // Biotechnology 1988 - v. 6 - p. 403 - 409.

131. Nguyen L., Lucas W.J., Ding В., Zaitlin M. Viral RNA trafficking is inhibited in replicase mediated resistant transgenic tobacco plants. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996 - v. 93 -p. 12643 - 12647.

132. Pareddy D„ Petolino J., Skokut Т., Hopkins N., Miller M., Welter M., Smith K., Clayton D., Pescitelli S., Gould A. Maize transformation via helium blasting. // Maydica 1997 -v.42 - is. 2 - p. 143-154.

133. Pena A., Lorz H., Schell J. Transgenic rye plants obtained by injecting DNA into young floral tillers. // Nature 1987 - v. 325 - p. 274 - 276.1.l

134. Perlak F.G., Deaton R.W., Armstrong T.A. et al. Insect resistant cotton plants. // Biotechnology 1990 - v. 8 - p. 939 - 943.

135. Pescitelli S.M., Sukhapinda K. Stable transformation via electroporation into maize type-II callus and regeneration of fertile transgenic plants. // Plant Cell Reports 1995 - v. 14 -is.ll - p. 712-716.

136. Petersen S., Stummann В., Olesen P., Henningsen K. Structure and function of root-inducing (Ri) plasmids and their relation to tumour inducing (Ti) plasmids. // Physiol. Plantrum. - 1989 - v. 77 - p. 427-435.

137. Petolino J.E., Young S., Hopkins N., Sukhapinda K., Woosley A., Hayes C., Pelcher L. // Expression of murine adenosine deaminase (ADA) in transgenic maize. // Transgenic Research - 2000a - v. 9 - is.l - p. 1 - 9.

138. Petolino J.F., Hopkins N.L., Kosegi B.D., Skokut M. Whisker mediated transformation of embryogenic callus of maize. // Plant Cell Reports - 2000 - v. 19 - is. 8 - p. 781 - 786.

139. Petolino J.F., Hopkins N.L., Kosegi B.D., Skokut M. Whisker mediated transformation of embryogenic callus of maize. // Plant Cell Reports - 2000 - v. 19 - is. 8 - p. 781-786.

140. Potrikus I., Saul M.W., Petruska J. et al. Direct gene transfer to cells of a graminaceous monocot. // Ibid. 1985 - v. 199 - p. 183 - 188.

141. Potrykus I., Shillito R.D., Saul M.W., Paszkowski J. Direct gene transfer. State of the art and future potential. // Plant Mol. Biol. Rep. 1985a - v. 3 - p. 117 - 128.

142. Powell P.A., Stark D.M., Sanders P.R., Beachy R.N. Protection against tobacco mosaic virus in transgenicplants that express tobacoo mosaic virus antisense RNA. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1989 - v. 86 - p. 6949 - 6952.

143. Rao K.V., Rathore K.S., Hodges Т.К. Physical, chemical and physiological parameters for electroporation- mediated gene delivery into rice. // Transgenic Res.- 1995 v.4 - p.361-368.112

144. Rao A.M., Sree K.P., Kishor P.B.K. Enhanced plant regeneration in grain and sweet sorghum by asparagine, proline and cefotaxime // Plant Cell Rep. 1995 - v.15 - N 1-2 -p.72-75.

145. Rasmussen J.L., Kikkert J.R., Roy M.K., Sanford J.C. Biolistic transformation of tabacco and maize suspension cells using bacterial cells as microprojectiles. // Plant Cell Reports -1994-v. 13-is. 3-4-p. 212-217.

146. Rhodes C.A., Pierce D., Mettler I.J. et al. Genetically transformed maize plants from protoplasts. // Science 1988 - v. 240 - p. 204 - 207.

147. Roberts W.K., Selitrennikoff C.P. Isolation and portial characterizatiom of two antifungal proteins from barley. // Biochim. et biophys acta. 1986 - v. 880 - p. 161 -170.

148. Rooke L., Byrne D., Salgueiro S. Marker Gene expressio driven by the maize ubiquitin promoter in transgenic wheat.// Annals of Applied Biology. - 2000 - v. 136 - is.2 - p. 167-172.

149. Rosahl S., Schmidt R., Schell J., Willmitzer L. Isolation and characterisation of a gene from Solanum tuberosum encoding patatin the major storage protein of potato tubers. // Mol. and Gen. Genet. 1986 - v. 203 - p. 214 - 220.

150. Ryan C.A. Proteinase inhibitor gene families: Strategies for transformation to improve plant defenses against Herbivores. // BioEssays. 1989 - v. 10 - p. 20 - 24.

151. Saalbach I., Waddell D., Pickardt T. et al. Stable expression of the sulphur rich 2S albumin gene in transgenic Vicia narborensis increases the methionine content in seeds. // J. Plant Physiol. - 1995 - v. 145 - p. 674 - 681.113

152. Shen W.H., Escudero J., Schlappi M., Ramos C., Hohn В., Koukolikova Z.N. T-DNA transfer to maize cells: histochemical inves tigation of ^-glucuronidase activiti in maize tissues. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1993 - v. 90 - p. 1488-1492.

153. Shimamoto K., Teda R., Izawa Т., Fujimoto H. Fertile transgenic rice plants regenerated from transformed protoplasts. // Nature 1989 - v. 338 - p. 274 - 277.

154. Simpson J., Timko M.P., Cashmore A.R. et al. Light inducible and tissue - specific expression of a chimaeric gene under control of 5'flanking sequence of a pea chlorophyll a/b - binding protein gene. // EMBO J. - 1985 - v. 4 - p. 2723 - 2729.

155. Singh N., Chawla H.S. Use of silicon carbide fibers for agrobacterium - mediated transformation in Wheat. // Current Science - 1999 - v. 76 - is. 11 - p. 1483 - 1485.

156. Singsit C., Adang M.J., Lynch R.E. et al. Expression of a Bacillus thuringiensis cryAc gene in transgenic peanut plants and its efficacy against lesser cornstalk borer. // Transgen. Res. 1997 - v. 6 - p. 169- 176.

157. Smith H.A., Swaneu S.L., Parks T.D. et al. Transgenic plant virus resistance mediated by untranslatable sense RNAs: Expression, regulation, and fate of nonessential RNAs. // Plant Cell.- 1994-v. 6-p. 1441 1453.

158. Somers D.A., Rines H.W., Gu W., Kaeppler H.F., Bushnell W.R. Fertile, transgenic oat plants. // Bio/Technol. 1992 - v. 10 - p. 1589 - 1594.115

159. Songstad D.D., Armstrong C.L., Petersen W.L., Hairston В., Hinchee-Maw Production of transgenic maize plants and progeny by bombardment of Hi II immature embryos. // In Vitro Cellular & Developmental Biology Plant - 1996 - v. 32 - is. 3 - p. 179-183.

160. Songstad D.D., Halaka F. G., De Boer D.L. et al. Transient expression of GUS and anthocyanin constructs in intact maize immature embryos following electroporation. // Plant Cell Tissue and Organ Cult. 1993 - v. 33 - is. 2 - p. 195 - 201.

161. Sorokin A.P., Ke X.Y., Chen D.F., Elliott M.C. Production of fertile transgenic wheat plants via tissue electroporation. // Plant Science 2000 - v. 156 - is. 2 - p. 227 - 233.

162. Southgate E.M., Davey M.R., Power J.B., Westcott R.J. A Comparison of methods for direct gene-transfer into maize (Zea mays L.) In Vitro Cellular & Developmental Biology Plant - 1998 - v. 34 - is. 3 - p. 218-224.

163. Spena A., Hain R., Ziervogel U., Saedler H., Shell J. Construction of a heat-inducible gene for plants. Demonstration of heat-inducible activity of the Drosophila hsp 70 promoter in plants. // Embo J. 1985 - v. 4 - p. 2739-2743.

164. Spencer T.M., Gordon-Kamm W.J., Paines R.J., Start W.G., Lemaux P.G. Bialaphos selection of stable transformants from maize cell cultures. // Theor. Appl. Genet 1990 -v.79-p. 625-631.

165. Spenser T.M., O'Brien J.V., Start W.G., Adams T.R., Gordon-Kamm W.J., Lemaux P.G. Segregation of transgenes in maize. // Plant Mol. Biology 1992 - v. 18 -p. 201-210.

166. Stachel S.E., Messens E., Montagu M.Van, Zambiyski P. Identification of the signal molecules produced by wounded plant cells that activate T DNA transfer in Agrobacterium tumefaciens. // Nature - 1985 - v. 318 - p. 624 - 629.

167. Stewart C.N.J., Adang M.J., All J.N. et all. Genetic transformation,recovery, and characterization of fertile soybean transgenic for a synthetic Bacillus thuringiensis crylAc gene. // Ibid. 1996a - v. 112 - p. 121 -129.

168. Stewart C.N.J., Adang M.J., All J.N. et all. Insect control and dosage effects in transgenic canola containing a synthetic Bacillus thuringiensis crylAc gene. // Plant Physiol. 1996 -v. 112-p. 115-120.

169. Sukhapinda K., Kozuch M.E., Rubin-Wilson В., Ainley W.M., Merlo D.J. Transformation of maize (Zea mays L.) protoplasts and regeneration of haploid transgenic plants. // Plant Cell Reports 1993 - v. 13 - p. 63-68.

170. Tacke E., Salamini F., Rohde W. Genetic engineering of potato for broad spectrum protection agains virus infection. //Nature Biotechnol. - 1996 - v. 14 - p. 1597 - 1601.

171. Tada Y., Sakamoto M., Fujmura T. Efficient gene introduction into rice by electroporation and analysis of transgenic plants: use of electroporation buffer lacking chloride ions. // Theor. and Appl. Genet. 1990 - v. 80 - p. 475 - 480.

172. Tang K., Wu A., Yao J., Qi H., Lu X. Development mediated transformation and genetic analysis based selektion. // Acta Biotech. - 2000 - v. 20 - is. 2 - p. 175 - 183.

173. Tempe J., Goldman A. Occurence and biosynthesis opines. // Molec. Biol. Plant Tumours. -1982 New York: Acad. Press - p. 575 - 584.

174. Thompson J.A., Drayton P.R., Frame B.R., Wang K., Dunwell J.M. Maize transformation utilizing silicon carbide whiskers-a review. // Euphytica - 1995 - v. 85 - is. 1-3 - p. 75-80.

175. Toki S., Takamatsu S., Nojiri C., Ooba S., Anzai H., Iwata M., Christensen A.H., Quail P.H., Uchimiya H. Expression of a maize ubiquitin gene promoter bar chimeric gene in transgenic rice plants. // Plant Physiol. -1992 - v. 100 - p. 1503 - 1507.

176. Tomsett В., Salter M., Garoosi A. et al. A chemically inducible gene expression cassette for transgenic plants. // Abstr. 5th Intern. Congr. Plant Molecular Biology - 21 - 27 sept. -1997-Singapore-p. 318.

177. Topfer R., Prols M., Schell J., Steinbiss H.H. Transient gene expression in tobacco protoplasts: Comparison of the reporter gene systems for CAT, NPT II, and GUS. // Plant Cell Rep. 1988 - v.7 - p. 225 - 228.

178. Toriyama K., Arimoto Y., Uchimiya H., Hinata K. Transgenic rice plants after direct gene transfer into protoplasts. // Biotechnology 1988 - v. 6 - p. 1072 - 1074.

179. Tumer N.E., O'Connel K.M., Nelson R.S., Sanders P.R., Beachy R.N., Fraley R.T., Shaw D.M. Expression of alfalfa mosaic virus coat protein confers cross protection in transgenic tobacco and tomato plants. // EMBO J 1987 - v. 6 - p. 1181 -1188.

180. Uknes S., Dincher S., Friedrich L. et al. Regulation of pathogenesisrelated protein la gene expression in tobacco. // Plant Cell - 1993 - v. 5 - p. 159- 169.

181. Vacek M., Reynaerts A., Hofte H., Jansens S., Beuckeller M., Dean C., Zabcan M., Montagu M. van, Leemans J. Transgenic plants protected from insect attack. // Nature -1987-v. 328- p. 33 -37.

182. Vain P., Keen N., Nurillo J. et al. Development of the particle inflow gun. // Plant Cell Tissue and Organ Cult. 1993 - v. 33 - is. 3 - p. 237 - 246.

183. Vain P., Mc Mullen M.D., Finer J.J. Osmotic treatment enhances particle bombardment-mediated transient and stable transformation of maize. // Plant Cell Reports 1993a - v. 12 -p. 84-88.118

184. Van Larebeke п., Engler G., Holsters M. et al. Large plasmid in A. tumefaciens essential for crown gall inducing ability. // Nature -1974 - v. 252 - p. 169-170.

185. Vasil I.K. Molecular improvement of cereals. // Plant Mol. Biology 1994 - v. 25 -p. 925 - 937.

186. Vasil V., Castillo A.M., Fromm M.E., Vasil I.K. Herbicide resistant fertile transgenic wheat plants obtained by microprojectile bombardment of regenerable embryogenic callus. // Bio/technology 1992 - v. 10 - p. 667 - 674.

187. Vasil V., Srivastava V., Castillo A.M., Fromm M.E., Vasil I.K. Rapid production of transgenic wheat plants by direct bombardment of cultured immature embryos. // Bio/ technology 1993 - v. 11 - p. 1553 - 1558.

188. Villemont E., Dubois F., Sangwan R.S. et al. Role of host cell cycle in the Agrobacterium mediated genetic transformation of Petunia: evidence of an S - phase control mechnism for T - DNA transfer. // Planta - 1997 - v. 201 - p. 160 - 172.

189. Wan Y., Widholm J.M., Lemaux P.G. Type I callus as a bombardment target for generating fertile transgenic maize (Zea mays L.). // Plant 1995 - v. 196 - p. 7-14.

190. Wang A.S., Evans R.A., Altendorf P.R., Hanten J.A., Doyle M.C., Rosichan J.L. A mannose selection system for production of fertile transgenic maize plants from protoplasts. // Plant Cell Reports 2000 - v. 19 - is. 7 - p. 654 - 660.

191. Wang G., Castiglione S., Chen Y. et al. Poplar (Populus nigra L.) plants transformed with a Bacillus thuringiensis toxin gene: incecticidal activity and genomic analysis. // Transgenic Res. 1996-v. 5-p. 289-301.

192. Wang Y.C., Klein T.M., Fromm M. et al. Transient expression of foreign genes in rice, wheat and soybean cells following particle bombardment. // Plant Mol. Biol. 1988 - v. 11 -p. 433 - 439.

193. Weeks I.T., Anderson O.D., Blechl A.E. Rapid prodyction of multiple independent lines of fertile transgenic wheat (Triticum aestivum). // Plant Physiol. 1993 - v. 102 -p. 1077-1084.

194. Werr W., Lorz H. Tranzient gene expression in Gramineae cell line. // Mol. and Gen. Genet. 1986 - v. 202 - p. 472 - 475.

195. Wiberg E., Banas A., Stymne S. Fatty acid distribution and lipid metabolismm in developing seeds of laurate producing rape (Brassica napus L.). // Planta - 1997 - v. 203 -p. 341 - 348.

196. Wordragen M.F. van, Honee G., Dons H.J.M. Insect resistance chrysanthemum calluses by introduction of a Bacillus thuringiensis crystal protein gene. // Transgenic Res. 1993 -v.2 - p. 170- 180.

197. Yepes L.M., Aldwinckle H.S. Factors that affectleaf regeneration efficiency in apple, and effect of antibiotics in morphogenesis // Plant Cell Tissue Organ Culture 1994 - v. 37 -N 3 - p.257-269.

198. Yun D.J., Hashimoto Т., Yamada Y. Metabolic engineering of medicinal plants: Transgenic Atropa belladonna with an improved alkaloid composition. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992 - v. 89 - p. 11799- 11803.120

199. Yusibov V., Steck Т., Gupta V. et al. Transfer of T-DNA from A. tumefaciens and targeting to the nucleus of tobacco cells. // Abstracts 4th Intern. Congress of Plant Molecular Biology Amsterdam, June 19-24 1994 - N 1669.

200. Zhang H.M., Yang H., Rech E.L. et al. Transgenic rice plants produced by electroporation mediated plasmid uptake into protoplasts. // Plant Cell Rep. 1988 - v. 7 - p. 379 - 383.

201. Zha Zhang W., Mc Elroy D., Wu R. Analysis of rice Actl 5' region activity in transgenic rice plants. // Plant Cell -1991 v. 3 - p. 1155 - 1165.

202. Zhou F.Y., Wang G.Y., Xie Y.J., Cui H.Z., Guo S.D., Dai J.R. Establishment of a genetic- transformation system for maize inbred P9 10. // Chinese Science Bulletin - 1999 - v. 44 is.7 p. 624 - 627!