Генетическая трансформация капусты белокачанной (Brassica oleracea var. capitata L.) в селекции на устойчивость к фитопатогенам (Plasmodiophora brassicae Wor., Fusarium ssp.) тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.01.05, кандидат сельскохозяйственных наук Зонтикова, Светлана Анатольевна
- Специальность ВАК РФ06.01.05
- Количество страниц 148
Оглавление диссертации кандидат сельскохозяйственных наук Зонтикова, Светлана Анатольевна
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Генетическая трансформация растений
1.1.1. Успехи в генетической трансформации сельскохозяйственных растении
1.1.2. Теоретические основы генетической трансформации расте
1.1.3. Методы генетической трансформации растений
1.1.4. Экспрессия трансгена в растительном организме
1.2. Изучение регенерационной активности растений в культуре in vitro
1.2.1. Морфогенетический ответ растений при регенерации в культуре in vitro
1.2.2. Зависимость морфогенеза от генотипа
1.2.3. Зависимость морфогенеза от типа экспланта
1.2.4. Зависимость морфогенеза от питательной среды
1.3. Систематическое положение и особенности биологии капусты белокочанной {Brassica oleracea var. capitata L.)
1.4. Болезни капусты белокочанной, вызываемые Plasmodiophora brassicae Wor. и фитопатогенными грибами рода Fusarium
2. УСЛОВИЯ ПРОВЕДЕНИЯ, ИСХОДНЫЙ МАТЕРИАЛ, СХЕМЫ И МЕТОДИКИ ОПЫТОВ
2.1. Цель, задачи и схема исследований
2.2. Условия проведения исследований
2.3. Материал и методы проведения исследований
2.3.1. Исходный материал
2.3.2. Методика опытов
2.3.3. Математическая обработка экспериментальных данных
3. ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ТРАНСФОРМАЦИЯ КАПУСТЫ БЕЛОКОЧАННОЙ (Brassica oleracea var. capitata L.) НА УСТОЙЧИВОСТЬ К ФИТОПАТОГЕНАМ {Plasmodiophora brassicae ^ Wor., Fusarium ssp.)
3.1. Сравнение регенерационной активности семядольных и гипо-котильных сегментов капусты белокочанной на питательных средах с различных сочетанием и концентрацией регуляторов роста
3.2. Агробактериальная трансформация капусты белокочанной
3.2.1. Определение оптимальной плотности суспензии агробакте-рий для эффективной трансформации капусты белокочанной
3.2.2. Определение наиболее эффективного способа поранения экс-плантов при агробактериальной трансформации капусты белокочанной
3.2.3. Определение оптимальной длительности инокулирования и сокультивирования эксплантов с агробактерией
3.2.4. Изучение влияния возраста экспланта и длительности пре-культивирования на эффективность генетической трансформации
3.2.5. Изучение эффективности агробактериальной трансформации капусты белокочанной в зависимости от генотипа и типа экспланта
3.2.6. Изучение действия кананмицина на регенерацию растений капусты белокочанной при подборе селективных сред
3.3. Молекулярно-биологический анализ растений-регенерантов капусты белокочанной, полученных в результате агробакте-риальной трансформации
4. СКРИНИНГ ТРАНСГЕННЫХ РАСТЕНИЙ КАПУСТЫ БЕЛОКОЧАННОЙ ПОКОЛЕНИЯ Т,
4.1. Экспресс-оценка при проращивании семян капусты белокочанной на селективных фонах
4.1.1. Экспресс-оценка при проращивании семян Ti на фоне кана-мицина
4.1.2. Экспресс-оценка при проращивании семян Т] капусты белокочанной сорта Малайка на фоне фузариевой кислоты
4.1.3. Экспресс-оценка капусты белокочанной сорта Малайка поколения Ti на устойчивость к киле {Plasmodiophora brassicae Wor.)
4.1.4. Молекулярно-биологический анализ трансгенных растений капусты белокочанной поколения Ть выделившихся при экспресс-оценке на селективных фонах (фузариевая кислота, Plasmodiophora brassicae Wor.)
4.2. Характеристика трансгенных растений капусты белокочанной по морфологическим признакам ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В СЕЛЕКЦИОННОЙ ПРАКТИКЕ
Рекомендованный список диссертаций по специальности «Селекция и семеноводство», 06.01.05 шифр ВАК
Применение агробактериальной трансформации в селекции белокочанной капусты на устойчивость к болезням2002 год, кандидат биологических наук Попадьин, Павел Владимирович
Усовершенствование элементов технологии получения удвоенных гаплоидов капусты белокочанной в культуре микроспор2009 год, кандидат сельскохозяйственных наук Зонтиков, Дмитрий Николаевич
Изучение регенерации и создание векторной конструкции для генетической трансформации рапса (Brassica napus L.)2006 год, кандидат биологических наук Гхасеми Безди Камал
Разработка эффективной системы генетической трансформации льна-долгунца (Linum usitatissimum L. ) и дикорастущих видов рода Linum2001 год, кандидат биологических наук Каляева, Марина Александровна
Получение растений сахарной свеклы и капусты белокочанной с устойчивостью к микробным патогенам2012 год, кандидат биологических наук Пиголева, Светлана Васильевна
Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Генетическая трансформация капусты белокачанной (Brassica oleracea var. capitata L.) в селекции на устойчивость к фитопатогенам (Plasmodiophora brassicae Wor., Fusarium ssp.)»
•Актуальность темы. Капуста белокочанная (Brassica oleracea var. capi-tata L.) — одна из самых распространенных овощных культур во всем мире. В настоящее время в нашей стране капусту белокочанную выращивают на площади 161,7 тыс. га, что составляет 21,6% от всех площадей, занятых под овощами. Не менее востребована эта овощная культура и в других странах мира. Так, в США, по официальным данным (http://www.usda.gov/nass/pubs/ vegetablecruci-ferstatusup-date2004.pdf), за период 1996-1999 гг. суммарный доходы от продажи капусты белокочанной на мировом и внутреннем рынке страны вырос с 228 млн. до 312 млн. долларов и продолжает оставаться на этом уровне.
Капуста является ценным пищевым и диетическим продуктом питания. Она обладает богатым химическим составом. В кочанах содержится в среднем 8,5% сухого вещества, в состав которого входят: углеводы (сахара) — в среднем 4,2%; азотистые вещества (в т.ч. аминокислоты}; минеральные вещества, такие как соли кальция, магния, железа и др.; витамины группы В, РР, К, U, много витамина С и провитамина А (каратиноидов). Не менее ценны и имеющиеся в капусте горчичные масла, нормализующие работу кишечника. Кроме того, белокочанная капуста широко признанна как ценный источник пищевых волокон. Клетчатка капусты способствует выведению из организма жироподобных веществ, и, в частности, холестерина (Петруш-ко Ю.Н., 2003). Немаловажное значение капуста имеет и в качестве кормового растения.
В связи с этим, получение стабильного урожая капусты белокочанной является одной из важнейших задач отечественного растениеводства. Однако многочисленные заболевания, которым подвержена капуста, приводят к потерям значительной части урожая и сильно снижают качество продукции.
Гриб Plasmodiophora brassicae Wor. — один из самых распространенных патогенов капусты. Вызываемое им заболевание, получившее название «кила», является одним из наиболее вредоносных для представителей семейства крестоцветных. В России это заболевание встречается в большинстве областей страны. Болезнь приводит к снижению урожая на 10-60% и более. В годы сильного проявления болезни недобор урожая капусты на зараженных килой участках составляет 400-500 центнеров с гектара (Мазин В.В., Проценко Е.П., 1976).
Фузариоз (или фузариозное увядание), вызываемое грибами рода Fusarium — еще одно не менее серьезное заболевание капусты, поражающее корневую и сосудистую систему растений. После проникновения патогена в ткани молодые растения быстро отмирают, взрослые вначале желтеют, сбрасывают листья и в последствии также отмирают. Гибель растений от фуза-риоза в некоторые годы может достигать 20-25% (Ахатов А.К. и др., 2006). Болезнь наиболее вредоносна в районах с высокой температурой почвы.
Высокая подверженность капусты белокочанной болезням вызывает необходимость получения устойчивых форм, тем более что в последние годы в производстве особое внимание стали уделять технологиям, сортам и гибридам, приводящим к получению высокой выровненности, товарности и урожайности (Литвинов С.С., 2008). При использовании традиционных методов селекции создание устойчивых форм является длительным и трудоёмким процессом. Однако решение этой задачи может быть ускорено благодаря новым прогрессивным методам биотехнологии, и в частности, генной инженерии растений (Шевелуха B.C., 2005). Генетическая инженерия обладает широкими возможностями в защите растений, поскольку её методы позволяют включать чужеродные гены в геном растений. Введение чужеродных генов в растительные клетки называют «генетической трансформацией».
Методом генетической трансформации уже получены растения, устойчивые к вирусным заболеваниям (одними из первых были трансформированы табак, папайя, картофель, рис, томат, огурец, люцерна); бактериальным (картофель); грибам (рис, табак, рапс); насекомым-вредителям (хлебные злаки, табак, хлопок, томат, картофель); окислительному стрессу (табак) и др. Ведутся работы по агробактериальной трансформации растений с целью регуляции времени созревания плодов; улучшения внешнего вида плодов; изменения пищевой ценности (белкового и липидного состава); улучшения вкуса; получения новых окрасок цветков декоративных культур и т.д. (Глик Б., Пастернак Дж., 2002).
Трансформацию растений осуществляют различными способами, однако наиболее распространенным, эффективным и апробированным на разнообразных видах растений является метод агробактериальной трансформации с помощью модифицированных штаммов Agrobacterium tumefaciens и А. rhizogenes.
Целью наших исследований являлось получение трансгенных растений капусты белокочанной, устойчивых к фитопатогенам {Plasmodiophora brassicae Wor., Fusarium ssp.).
Объект исследований — технология получения трансгенных растений капусты белокочанной со встроенным геном т/3, придающим устойчивость к фитопатогенам {Plasmodiophora brassicae Wor.,Fusarium ssp.).
Предмет исследований — семядоли и гипокотильные сегменты проростков 2 линии (33, 34) и 4 сортов (Подарок, Касатка, Малайка, Горлица), растения-регенеранты и трансформанты капусты белокочанной.
Научная новизна работы. Дана характеристика морфогенетического потенциала 6 селекционных образцов среднепоздней капусты белокочанной и подобрано оптимальное сочетание и концентрация регуляторов роста для их регенерации в культуре in vitro. Впервые с помощью векторной конструкции с геном mf3 проведена агробактериальная трансформация капусты белокочанной и получены трансгенные формы, которые характеризуются повышенной устойчивостью к киле {PL brassicae Wor.) и фузариозу {Fusarium ssp.) и могут быть использованы как исходный материал в дальнейшей селекционной работе. Определен характер наследования трансгена в поколении Ть а также устойчивость трансгенных растений капусты белокочанной к киле {PL brassicae Wor.) и фузариозу {Fusarium ssp.).
Практическая ценность. Оптимизированы условия регенерации и агробактериальной трансформации капусты белокочанной (сочетание и концентрация регуляторов роста, плотность суспензии агробактерий, способ поранения эксплантов, длительность инокулирования и сокультивирования эксплантов с агробактерией, оптимальный возраст экспланта и длительность его прекультивирования), которые могут быть использованы при размножении этой культуры в условиях in vitro и для создания генетически модифицированных растений капусты белокочанной с определенными хозяйственно-ценными признаками. Получено 12. трансгенных форм сорта Малайка со встроенным геном т/3, которые характеризуются повышенной на 23-44% устойчивостью к киле (PL brassicae JVor.) и на 9-23% — к фузариозу (Fusarium ssp.) по сравнению с исходным (нетрансгенным) образцом, которые могут быть использованы в селекции капусты белокочанной.
Обоснование и достоверность научных положений. Исследования выполнены по методикам, рекомендованным научными учреждениями страны. Все выводы и предложения подтверждены экспериментальными исследованиями, статистической обработкой полученных данных.
Апробация работы. Основные результаты экспериментальной работы по диссертации, выводы и предложения были доложены и представлены на II Всероссийском симпозиуме «Физиология трансгенного растения и проблемы биобезопасности» (Москва, 2007), IX Международной научной конференции «Биология клеток растений in vitro и биотехнология» (Звенигород, 2008); Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы биоэкологи» (Москва, 2008), IX Молодежной научной конференции, посвященной памяти Г.С. Муромцева (Москва, 2009); на Международной научно-практической конференции, посвящённой памяти Б.В. Кваснико-ва (Верея, 2009), V Российской научно-практической конференции «Актуальные проблемы нанобиотехнологии и инноваций с нетрадиционными природными ресурсами и создания функциональных продуктов» (Москва, 2009).
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
• оптимизированные условия регенерации капусты белокочанной в условиях in vitro на основе гипокотильных сегментов и семядолей;
• оптимизированные условия генетической трансформации капусты белокочанной с использованием Agrobacterium tumefaciens штамма AGLO с бинарным вектором pBiN 19+13К, несущим маркерный, (npt II) и целевой (т/3) ген, кодирующий MF3-белок;
• трансгенные растения капусты белокочанной поколений Т0 и Ть несущие целевой ген т/3 и маркерный ген npt II и отличающиеся повышенной устойчивостью к киле (PL brassicae Wor.) и фузариозу (Fusarium ssp.).
Публикации результатов исследований
По результатам исследований по теме диссертации опубликовано 8 работ, в том числе одна в журнале «Картофель и овощи», рекомендованном ВАК РФ.
1. Зонтикова, С.А. Трансгенные растения овощных культур: способы получения и перспективы использования /А.В. Поляков, О.Ф. Чикризова, С.А. Зонтикова //2-й Всероссийский симпозиум «Физиология трансгенного растения и проблемы биобезопасности» Москва, 22 — 23 октября 2007 г.- М.: Отделение биологических наук РАН, 2007.- С. 73
2. Зонтикова, С.А. Эмбриоидогенез капусты белокочанной (Brassica ol-eracea L.) в культуре микроспор /А.В. Поляков, Д.Н. Зонтиков, С.А. Зонтикова //Тезисы IX Международной конференции «Биология клеток растений in vitro и биотехнология» (Звенигород, 8-12 сентября 2008 г.). — М.: ИД ФБК-ПРЕСС, 2008. — С. 306-307.
3. Зонтикова, С.А. Регенерационная способность капусты белокочанной (Brassica oleracea L.) /С.А. Зонтикова, А.В. Поляков, О.Ф. Чикризова, Д.Н. Зонтиков, Т.Н. Ралдугина //Тезисы IX Международной конференции
Биология клеток растений in vitro и биотехнология» (Звенигород, 8-12 сентября 2008 г.). — М.: ИД ФБК-ПРЕСС, 2008. — С. 136-137.
4. Зонтикова, С.А. Наночастицы серебра in vivo и in vitro технологиях /А.В. Поляков, О.Ф. Чикризова, О.И. Ситникова, А.А. Егорова, Н.Н. Лебедева, С.А. Зонтикова, М.И. Иванова, Ж.В. Куршева, О.В. Бакланова, К.Л. Алексеева, М.А. Демидкина, А.А. Ревина // Актуальные проблемы биоэкологи. Сб. материалов Международной научно-практической конференции, 21-24 октября 2008 г. — М.: Диона, 2008. — с.180-181.
5. Зонтикова, С.А. Влияние регуляторов роста на морфо- и каллусоген-ную активность капусты белокочанной (Brassica oleracea L.) /С.А. Зонтикова, А.В. Поляков, О.Ф. Чикризова, Д.Н. Зонтиков //Сб. науч. трудов по овощеводству и бахчеводству к 110-летию со дня рождения Б.В. Квасникова. — Верея, 2009. — С. 194-197.
6. Зонтикова, С.А. Генетический и морфофизиологический полиморфизм овощных культур и использование его в селекции на устойчивость к стрессам /А.В.Поляков, О.Ф. Чикризова, Д.Н. Зонтиков, С.А. Зонтикова, Н.Н. Давыдова, К. Рабей //Сб. науч. трудов V Московского международного конгресса «Биотехнология: состояние и перспективы развития», часть 1 (Москва, 16-20 марта 2009 г.). — М.: ЗАО «Экспо-биохим-технологии», РХТУ им. Д.И. Менделеева, 2009. — С. 258-259.
7. Зонтикова, С.А. Генетическая трансформация капусты для повышения устойчивости к фитопатогенам /С.А. Зонтикова, О.Ф. Шарафова, А.В. Поляков //Картофель и овощи — 2009. — №7. — С.24-25.
8. Зонтикова, С.А. Получение трансгенных растений капусты белокочанной /С.А. Зонтикова, О.Ф. Шарафова, А.В. Поляков // Актуальные проблемы нанобиотехнологии и инноваций с нетрадиционными природными ресурсами и создания функциональных продуктов: Материалы V Российской научно-практической конференции. — М.: РАЕН, 2009. — 250 с. — С. 50-57.
Объем и структура диссертации.
Диссертационная работа состоит из введения, 4 глав, выводов, предложений для использования в селекционной практике, списка использованной литературы, содержащего 135 наименований, в том числе 55 иностранных авторов, приложений.
Похожие диссертационные работы по специальности «Селекция и семеноводство», 06.01.05 шифр ВАК
Получение трансгенных растений сахарной свеклы и их молекулярно-биологический анализ2001 год, кандидат биологических наук Захарченко, Наталья Сергеевна
Изучение химерных растений Brassica napus L. при генетической трансформации2012 год, кандидат биологических наук Хоанг Тхи Жанг
Оптимизация агробактериального метода трансформации кукурузы2001 год, кандидат биологических наук Данилова, Светлана Алексеевна
Создание и оценка трансгенных растений картофеля устойчивых к грибным болезням2004 год, кандидат сельскохозяйственных наук Крупенин, Роман Вячеславович
Влияние типа экспланта и селективного агента на морфогенез и эффективность агробактериальной трансформации гвоздики ремонтантной (Dianthus caryophyllus L. )2000 год, кандидат биологических наук Мирошниченко, Дмитрий Николаевич
Заключение диссертации по теме «Селекция и семеноводство», Зонтикова, Светлана Анатольевна
выводы
1. Оптимизированы условия регенерации капусты белокочанной при использовании семядолей и гипокотильных сегментов. Установлено, что:
• для повышения регенерационной активности капусты белокочанной (сорт Подарок, Касатка, Малайка и линия 34) лучшей является питательная среда MS, содержащая БАП в концентрации 2,0 мг/л и НУК в концентрации 0,1 мг/л, которая позволяет получить в течение 7-9 недель в среднем по
10-19 адвентивных почек на один гипокотильный сегмент и по 1-6 почек из каллуса, образовавшегося на срезе черешка семядоли;
• для индукции каллусогенеза капусты-белокочанной наиболее эффективно использование среды MS, содержащей 3,0 мг/л БАП и 4,0 мг/л> НУК или 1,0 мг/л БАП и 1,0 мг/л НУК;
• поддержание в культуре in vitro и клональное размножение микропобегов капусты белокочанной необходимо осуществлять на среде MS, содержащей БАП в концентрации 1,0 мг/л и НУК в концентрации 0,1 мг/л.
2. Оптимизированы условия получения, трансгенных растений с помощью A. tumefaciens, применительно к сортам капусты белокочанной Подарок, Малайка, Касатка и Горлица и штамму AGLO с бинарным вектором pBiN19+13K, несущим маркерный (npt II) и целевой (т/3) гены: определены оптимальная плотность суспензии агробактерий, эффективный способ поранения, эксплантов, длительность инокулирования и сокультивирования эксплантов с агробактерией, оптимальный возраст экспланта и длительность его прекультивирования. Установлено, что:
• эффективным способом поранения эксплантов является удаление около 50% эпидермиса (в виде тонких полос) с гипокотильных сегментов и свежий срез черешка семядоли, что обеспечивает частоту морфогенеза на уровне 66,0-61,7%;
• инокулирование эксплантов капусты белокочанной в течение 30 минут в суспензии агробактерий с плотностью 105 клеток/мл с последующим сокультивированием на агаризованной среде в течение 2-3 суток является оптимальным, при этом выход канамициноустойчивых трансплантов составляет 4,3-4,5%;
• оптимальный возраст эксплантов капусты белокочанной для трансформации A. tumefaciens штамма AGLO с бинарным вектором pBiN 19+13К, несущим целевой (т/3) и маркерный (npt II) гены, составляет 7-9 суток; оптимальное время прекультивирования на регенерационной питательной среде MS — 7 суток.
3. Получены трансгенные растения капусты белокочанной, отличающиеся повышенной устойчивостью к PL brassicae Wor. и Fusarium ssp. , на основе генетической трансформации капусты белокочанной с помощью A. tumefaciens штамма AGLO с бинарным вектором pBiN19+13K, несущим целевой ген т/3, кодирующий синтез MF3-белка, гомологичного пептидил-пролил-г/мс/транс-изомеразам FKBP-типа, и маркерный ген npt II, придающий устойчивость к канамицину. Наличие введенных генов доказано с помощью ПЦР-анализа. Установлено, что:
• в семенном поколении Ti капусты белокочанной сорта Малайка при проращивании семян на фоне канамицина, устойчивость к этому антибиотику, обеспеченная наличием маркерного гена npt II, наследуется как доминантный менделевский признак;
• устойчивость семенного поколения Ti к фузариозу (Fusarium ssp.) на 9-23%, а к киле крестоцветных (PL brassicae Wor.) на 21-44% выше по сравнению с исходным (нетрансгенным) образцом при экспресс-оценке на селективном фоне;
• имеется высокая степень соответствия между устойчивостью растений Ti капусты белокочанной к фитопатогенам и наличием в их геноме гена mf3, доказанная с помощью ПЦР-анализа;
• трансгенные растения капусты белокочанной поколений Т0-Т] по морфологическим признакам не отличались от растений исходного (нетранс-генного) селекционного образца.
ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В СЕЛЕКЦИОННОЙ
ПРАКТИКЕ
С целью получения трансгенных растений капусты белокочанной устойчивых к PL brassicae Wor. и Fusarium ssp. с помощью A. tumefaciens штамма AGLO с бинарным вектором pBiN19+13K, несущим целевой ген mf3, кодирующий синтез MF3-белка (гомолог пептидил-пролил-цис/транс-изомераз FKBP-типа) и маркерный ген npt II, придающий устойчивость1 к канамицину, рекомендуется:
1) для повышения регенерационной активности семядолей и гипоко-тильных сегментов капусты белокочанной использовать питательную среду MS, дополненную 6-бензиламинопурином в концентрации 2,0 мг/л и а— нафтилуксусной кислотой в концентрации 0,1 мг/л;
2) поддержание в культуре in vitro и клональное размножение микропобегов капусты белокочанной необходимо осуществлять на среде MS, содержащей БАП в концентрации 1,0 мг/л и НУК в концентрации 0,1 мг/л;
3) для агробактериальной трансформации капусты белокочанной рекомендуется:
• в качестве эксплантов использовать семядоли и гипокотильные сегменты 7-9-суточных асептических проростков;
• прекультивировать экспланты на питательной среде MS, содержащей 2,0 мг/л БАП, 0,1 мг/л НУК, в течение 7 суток;
• перед инкулированием эксплантов проводить удаление около 50% эпидермиса (в виде тонких полос) с гипокотильных сегментов и делать свежий срез черешка семядоли;
• использовать суспензию агробактерий с концентрацией 105 клеток/мл;
• инокулировать экспланты в суспензии агробактерий в течение 30 минут; последующее сокультивирование проводить на агаризованной среде в течение 2-3 суток;
• селекцию трансформантов проводить на среде MS, содержащей 2,0 мг/л БАП, 0,1 мг/л НУК и 50 мг/л канамицина;
• подтверждение трансгенной природы проводить с помощью ПЦР-реакции на наличие mf3 и npt II генов;
• оценку на устойчивость к фузариозу и киле проводить с использованием методов экспресс-оценки на селективных фонах (фузариевая кислота, PL brassicae Wor.);
4) полученные трансгенные формы капусты белокочанной с геном mf3 могут быть использованы для селекции на устойчивость к киле и фузариозу.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Генетически модифицированные растения в промышленных масштабах выращиваются уже более 15 лет. За это время методами генной инженерии и биотехнологии созданы сорта, устойчивые к вирусам, грибным и бактериальным фитопатогенам, насекомым-вредителям, гербицидам, засухе, засолению, характеризущиеся измененными сроками созревания и хранения, вкусовыми качествами и др. Создание отечественных сортов трансгенных растений с новыми хозяйственно-ценными свойствами является приоритетной задачей.
Методом агробактериальной трансформации с использованием A. tumefaciens штамма AGLO с бинарным вектором pBiN19+13K, несущим целевой ген mf3, кодирующий синтез MF3-белка (гомолог пептидил-пролил-цис/транс-изомераз FKBP-типа) нами были получены трансгенные растения капусты белокочанной, отличающиеся' повышенной? устойчивостью к PL brassicae Wor. и Fusarium 'ssp.
В результате проведенных исследований подобрано- оптимальное сочетание и концентрация регуляторов роста для повышения регенерационной активности семядолей и гипокотильных сегментов проростков; оптимизированы условия' агробактериальной. трансформации применительно к используемому штамму агробактерий и исходным селекционным образцам, что позволило получать трансгенные растения капусты белокочанной с эффективность трансформации 4,0-5,6%. Трансгенная природа растений-регенерантов поколений То и Ti была подтверждена методом ПЦР-анализа.
Анализ семенного поколения Т\ показал, что гены npt II и mf3 наследуются! как доминантный менделевский признак. Экспресс-оценка растений поколения Ti выявила повышение их устойчивости к фитопатогенам (PL brassicae Wor. и Fusarium ssp.) по сравнению с исходными (нетрансгенными) образцами. Проведенный ПЦР-анализ показал высокую-степень соответствия между устойчивостью растений Tj капусты белокочанной к фитопатогенам и наличием в их геноме гена т/3. При этом между трансгенными и исходными нетрансгенными) растениями капусты белокочанной не было обнаружено достоверных различий по морфологическим признакам.
Список литературы диссертационного исследования кандидат сельскохозяйственных наук Зонтикова, Светлана Анатольевна, 2009 год
1. Агротехника выращивания белокочанной капусты. Рекомендации. /Л. Д. Бондаренко, В.Е. Болахоненко, Н.А. Карецкая, В.К. Чирков. — Краснодар, 1984. —55 с.
2. Артамонов, В.И. Растения и чистота природной среды / В.И.Артамонов. — М.: Наука, 1986. — 113 с.
3. Атанасов, А. Биотехнология в растениеводстве /А. Атанасов Новосибирск: Институт цитологии и генетики СО РАН, 1993.- 241с.
4. Ахатов, А.К. Защита овощных культур и картофеля от болезней
5. А.К.Ахатов, Ф.С.Джалилов, О.О.Белошапкина и др.; /под ред. А.К.Ахатова и Ф.С.Джалилова. Москва, 2006. 352.с.
6. Белоногова, М.А. Генетическая трансформация льна-долгунца с использованием семядольных эксплантов: Автореферат дис.к.б.н. /ИФР РАН — М., 2006. —24 с.
7. Биотехнология. Принципы и применение: Пер. с англ. /Под ред. И.Хиггинса, Д.Беста, Дж. Джонса. М.:Мир, 1988. - 480 с.
8. Егоров, Н.С. Биотехнология: Проблемы и перспективы /Н.С.Егоров, А.В.Олескин, В.Д.Самуилов Учеб.пособие для вузов. В 8 кн. /под ред Н.С.Егорова, В.Д.Самуилова. М.: Высшая школа, 1987- 142 с.
9. Бутенко, Р.Г. Биотехнология: Клеточная инженерия Учеб. пособие для вузов. В 8 кн. /под ред Н.С.Егорова, В.Д.Самуилова. /Р.Г. Бутенко, М.В. Гусев, А.Ф. Киркин, Т.Г. Корженевская, Е.Н.Маркарова М.: Высшая школа, 1987- 128 с.
10. Быков, В.А. Биотехнология: Производство белковых веществ. Учеб.пособие для вузов. В 8 кн. /под ред Н.С.Егорова, В.Д.Самуилова. /В.А.Быков, М.Н.Манаков, В.И.Панфилов и др. М.: Высшая школа, 1987142 с.
11. Бунин, М.С. Методы репродуктивной биологии в селекции овощных культур рода Brassica L. /М.С. Бунин, Н.А. Шмыкова, В.А. Степанов, В.И.
12. Старцев, JI.JI. Бондарева //Методические указания и рекомендации по селекции и семеноводству капустных культур. — М.: ВНИИССОК, 2007. — 280 С. —с. 199-237.
13. Богомолов, М.А. Пыльцевые трубки — биологический вектор в генной инженерии сахарной свеклы / М.А. Богомолов //IV Московский Международный Конгресс. Биотехнология: состояние и перспективы развития. 4.1. — М.,2007. —с.258.
14. Будынков, Н.И. Фузариозное увядание огурца в защищенном грунте / Н.И. Будынков, Е.Ф. Никифорова, В.Н. Юваров // М.: Гавриш, 1999. N 6.-С.16.
15. Булычева, Н.В. Изучение влияния различных типов со-культивации на эффективность трансформации тополя / Н.В. Булычева, М.С. Иноземцева,
16. A.M. Камионская //Материалы I (IX) Международной конференции молодых ботаников в Санкт-Петербурге. — СПб., 2006. — с.136-137.
17. Бунин, М.С. Использование биотехнологических методов для получения исходного селекционного материала капусты / М.С. Бунин, Н.А. Шмыко-ва. — М.: ФГНУ «Росинформагротех», 2004. — 44 с.
18. Бутенко, Р.Г. Культура изолированных растительных тканей и физиология морфогенеза растений / Р.Г. Бутенко. — М.: Наука, 1964.
19. Вехов, В.Н. Практикум по анатомии и морфологии высших растений /
20. B.Н. Вехов, Л.И. Лотова, В.Р. Филин. — М.: Изд-во Моск. ун-та, 1980. — 196 с.
21. Вдовитченко, М.Ю. Культивируемые in vitro корни копеечника чайного и образование в них фенольных соединений / М.Ю. Вдовитченко, И.Н. Ку-зовкина, X. Пэтц, Б. Шнайдер //Физиология растений, 2007, Т.54, №4. — с.604-613.
22. Гапоненко, А.К. Эффективность трансформации незрелых зародышей подсолнечника / А.К. Гапоненко, И.П. Воронина, Ю.Д. Белецкий //Новые методы биотехнологии растений. Материалы симпозиума. — Пущино, 1991. —223 е. —с.13-14.
23. Глазко, В.И. ДНК-технологии в генетике и селекции / В.И. Глазко, Т.Т. Глазко— Краснодар: ВНИИ риса, 2006. — 399 с.
24. Глазко В.И. Кризис аграрной цивилизации и генетически модифицированные организмы (ГМО) //Интернет-журнал "Коммерческая биотехнология", 2007. — http://www.cbio.ru/
25. Глик, Б. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. / Б. Глик, Дж. Пастернак. Пер. с англ. — М.: Мир, 2002. — 589 с.
26. Головешкина, Е.Н. Получение трансгенных линий овощных культур с измененными сроками цветения / Е.Н. Головешкина, A.M. Камионская /ЯV Московский Международный Конгресс. Биотехнология: состояние и перспективы развития. 4.1. — М., 2007. — с.270.
27. Грибова, Т.Н. Создание трансгенных линий белокочанной капусты с новыми агротехническими свойствами: Автореферат дис.к.б.н. /РГАУ-МГСХАим. К.А. Тимирязева — М., 2006—17 с.
28. Даскалов, X. Гетерозис и его'использование в-овощеводстве /X. Даскалов. -М.: Колос, 1978.-310 с.
29. Дрейпер, Дж. Генная инженерия растений. Лабораторное руководство:
30. Пер с англ. / Дж. Дрейпер, Р. Скотт, Ф.Армитидж, Г.Дьюри, Л. Джекоб, Р. Уолден, А. Кумар, Р. Джефферсон, Дж. Хэмил— М.: Мир, 1991. — 408 с.
31. Заяц, Л.И. Создание экспрессирующихся конструкций с геном bar длятрансформации растений / Л.И. Заяц, И.Н.Стехин, Н.В.Путилина, Б.Л.Левенко //Биополимеры и клетка. Т. 10. №3-4. — 1994. — с.89-92.
32. Еленевский, А.Г. Ботаника высших, или наземных растений. /А.Г. Еленевский — М.: «Академия», 2000. — 432 с.
33. Закревский, В.В. Генетически модифицированные источники пищи растительного происхождения. Руководство по санитарно-эпидемиологическому надзору. /В.В. Закревский — СПб.: «Издательство «Диалект», 2006. — 152 с.
34. Ивашута, С.И. Генетическая трансформация культуры клевера лугового / С.И. Ивашута, В.В.Мазин, Л.А.Солодкая //Новые методы биотехнологии растений. Материалы симпозиума. — Пущино, 1991. — 223 с. — с. 18-19.
35. Использование биотехнологических методов для получения исходного селекционного материала капусты. — М.: ФГНУ «Росинформагротех», 2004. — 44 с.
36. Калашникава, Е.А. Практикум по сельскохозяйственной биотехнологии. / Е.А.Калашникава, Е.З.Кочиева, О.Ю.Миронова — М.: КолосС, 2006. — 143 с.36. " Калашникова, Е.А. Практикум по сельскохозяйственной биотехнологии.
37. Е.А. Калашникова, Е.З. Кочиева— М.: КолосС, 2000. — 149 с.
38. Картель, Н.А. Трансгенные растения картофеля, полученные кокульти-вацией листовых дисков с агробактериями. / Н.А.Картель, С.Д.Курочкина, К.И. Забенькова //Новые методы биотехнологии расте ний. Материалы симпозиума. — Пущино, 1991. — 223 с. — с.20.
39. Кочетов, А.В. Проблемы трансгенеза. Феномен "замолкания" трансгенов и устойчивость растений к вирусным инфекциям /А.В. Кочетов // Вестник ЦС ВОГиС, — №5 — 1998; электронное издание (www.bionet.nsc.ru/vogis/vestnik.php?f=19988p=52).
40. Крючков, А.В. Методические рекомендации по размножению самонесовместимых инбредных линий поздней кочанной капусты. / А.В.Крючков, Г.Ф. Монахос, Д.В.Пацурия, Н.Н. Воробьева, А.А Лежнина, Д.М. Харламов, В.Г. Судденко — М., 2002. — 22 с.
41. Литвинов, С.С. Научные основы овощеводства /С.С. Литвинов — М.: Россельхозакадемия, ВНИИО, 2008. — 776 с.
42. Лудилов, В.А. Семеноведение овощных и бахчевых культур. /В.А. Луди-лов — М.: ФГНУ «Росинформагротех», 2005. — 392 с.
43. Лукин, А.Л. Трансформация семян арабидопсиса с целью получения коллекции инсертантов / А.Л.Лукин, М.М.Сартбаев, Ю.В. Денисенко //Новые методы биотехнологии растений. Материалы симпозиума. — Пущино, 1991. — 223 с. — с.26-27.
44. Мазин, В.В. Возбудитель килы крестоцветных. / В.В.Мазин, Е.П.Проценко — М.: Наука, 1976. — 192 с.
45. Марьяхина, И.Я. Характер морфогенеза и размножения кочанной капустыв культуре ткани при использовании различных стимуляторов роста /И.Я. Марьяхина //С.-Х. биология. — 1981. — №2. — с.246-252.
46. Методика обнаружения генетически модифицированной ДНК в пищевыхпродуктах и полуфабрикатах. Часть 1. Пробоподготовка (Инструкция по применению наборов реагентов Silica М). — М.: ООО «Компания Био-ком», 2004.
47. Методика обнаружения генетически модифицированной ДНК в пищевыхпродуктах и полуфабрикатах. Часть 2. Проведение полимеразной цепной реакции (Инструкция по применению наборов серии «ПЦР-ядро»). — М.: ООО «Компания Биоком», 2004.
48. Мишуткина, Я.В. Создание трансгенных растений сахарной свеклы, устойчивых к гербицидам на основе фосфинотрицина /Я.В. Мишуткина // Тезисы IX Международной конференции «Биология клеток растений in vitro и биотехнология». Звенигород, 2008. - с. 262-263
49. Мухамедшин, Э.К. Агробактериальная трансформация незрелых эмбрионов арабидопсиса. / Э.К. Мухамедшин, Т.З. Дидишвили //Новые методыбиотехнологии растений. Материалы симпозиума. — Пущино, 1991. — 223 с. — с.31.
50. Нетрусов, А.И. Микробиология: учебник для высш. учеб.заведений
51. А.И. Нетрусов, И.Б. Котова. М.:Издательский центр "Академия", 2006. -352 с.
52. Новое в клонировании ДНК. Методы: Пер. с англ. /Под ред Д.Гловера.1. М.:Мир, 1989. -368 с.
53. Омельянчук, Н.А. Трансформация пшеницы методом пыльцевых трубок /
54. Н.А.Омельянчук, Г.И.Филиппова, М.И.Ривкин, В.В.Гулевич //Новые методы биотехнологии растений. Материалы симпозиума. — Пущино, 1991. —223 е. —с.33-34.
55. Пастернак, Е.Ю. Введение гена устойчивости к глифосату в пшеницу /
56. Е.Ю. Пастернак, Б.А. Левенко, И.Н. Стехин //Новые методы биотехнологии растений. Материалы симпозиума. — Пущино, 1991. — 223 с. — с.34-35.
57. Петрушко, Ю.Н. Белокочанная капуста. Современная ресурсосберегающая технология выращивания в условиях Приморского края. / Ю.Н. Петрушко, В.И.Потемкина, В.П.Федяй — Уссурийск, 2003. — 76 с.
58. Пивоваров, В.Ф. Капуста, её виды и разновидности. / В.Ф.Пивоваров, В.И.
59. Старцев— М., 2006. — 192 с.
60. Пирузян, Э.С. Основы генетической инженерии растений. / Э.С. Пирузян1. М.: Наука, 1999. — 303 с.
61. Поляков, А.В. Биотехнология в селекции льна. / А.В. Поляков — Тверь,2000. — 179 с.
62. Поляков, А.В. Получение регенерантов овощных культур и их размножение in vitro. Методические рекомендации. / А.В. Поляков — М.: ГНУ ВНИИО Россельхозакадемии, 2005. — 36 с.
63. Поляков, А.В. Температурный стресс повышает выход эмбриоидов капусты в культуре микроспор / А.В.Поляков, Д.Н.Зонтиков //Картофель и овощи. — №7 — 2009. — С. 25.
64. Поляков, А.В. Получение растений огурца с повышенной устойчивостьюк фузариозному увяданию методами in vitro. Методические рекомендации. / А.В.Поляков, А.А.Ткачева, И.И.Тарасенков, Н.К.Бирюкова — М.: ГНУ ВНИИО Россельхозакадемии, 2006. — 28 с.
65. Поляков, А.В. Методические рекомендации по получению трансгенныхрастений льна-долгунца (на примере введения генов NPTII и ALS). / А.В.Поляков, О.Ф.Чикризова — М.; 2001. — 40 с.
66. Поляков, А.В. Трангенные растения овощных культур: способы получения и перспективы использования. / А.В.Поляков, О.Ф.Чикризова, С.А.Зонтикова //Физиология трансгенного растения и проблемы биобезопасности. — М., 2007. — 92 с. — с.73
67. Попадьин, П.В. Применение агробактериальной трансформции в селекциибелокочанной капусты на устойчивость к • болезням: Автореферат дис.к.б.н. / РГАУ-МГСХА — М., 2002. — 20 с.
68. Ралдугина, Г.Н. Факторы, влияющие на органогенез у семядольных эксплантов рапса / Г.Н.Ралдугина, Г.И.Соболькова // Физиология растений. 1995. — Т.42. — С.916-922.
69. Ралдугина, Г.Н. Получение и' исследование трансгенных растений рапса (Brassica napus L.): Дисс. на соиск. ученой степени канд. биолог. Наук. / ИФР РФН — М:ИФР, 1997. — 155с.
70. Рис, Э. Введение в молекулярную биологию: От клеток к атомам: Пер. с англ. / Э.Рис, М.Стернберг — М.: Мир, 2002. — 142 с.
71. Рубин,'Б.А. Биохимия и физиология иммунитета растений / Б.А. Рубин, Е.В. Арциховская, В.А. Аксенова// М.: Высшая школа, 1975.
72. Рыбчин, В.Н. Основы генетической инженерии. / В.Н. Рыбчин— СПб.: из-во СПбГТУ, 1999: — 522 с.
73. Рымарь, G.E. Трансформация незрелых зародышей; пшеницы / С.Е.Рымарь, Г.Н-Юркова, Г.М:Билека //Новые методы биотехнологии растений. Материалы симпозиума: — Пущино, 1991. — 223 с. — с.З9.
74. Шевелуха, B.C.; Проблемы трансгенных технологий в XXI веке. / B.C. Шевелуха //III Московский Международный Конгресс. Биотехнология: состояние и перспективы развития. 4:1. — М;, 2005. — с.206-207.
75. Шевелуха, B.C. Сельскохозяйственная биотехнология. / В.С.Шевелуха, Е.А.Калашникова.—М.: Высшая школа,' 2003. — 469 с.
76. Шумилина, Д.В. Изучение структуры и свойств пептидил-пролил-цис/транс-изомеразы MF3, индуцирующей устойчивость. растений к болезням: Автореферат дис. .к.б.н. / ВНИИФ — М;, 2007. —126 с.
77. Шумилина, Д.В. Микробный факторЗ-база для создания новых биопестицидов. / Д.В. Шумилина, Т.М.Воинова, В.Г.Джавахия //Защита и карантин растений- №10.- 2006 С. 20-21
78. Юрина, О.В. Селекция огурца на устойчивость к болезням / О.В. Юрина //Плодоовощное хозяйство, 1986. Т - 3. - С. 36 - 37.
79. Юркова, Г.Н. Трансформация сахарной свёклы. / Г.Н. Юркова, С.Е. Ры-марь, Г.Р. Галецкая, Т.В. Чугункова //Новые методы биотехнологии растений. Материалы симпозиума. — Пущино, 1991. — 223 с. — с.47.
80. Bajaj, Y.P.S. In vitro propogation of red cabbage (Brassica oleracea L. var. capitata). / Y.P.S.Bajaj, P. Nietsh // J.Exp.Bot., 1975, v.26, p.883-890.
81. Baroncelli, S.M. Genetics of growth and differentiation in vitro of Brassica oleracea var. botrytis. I. Differences between 6 inbred Lines. / S.M. Baroncelli, M. Buiatti, A.Bennici // Z. Pflanzenzucht. 1973, v.70, p.99-107.
82. Beaty, J.S. Tzs, a nopaline Ti plasmid gene from Agrobacterium tumefaciens associated with trans-zeatin biosynthesis. / J.S. Beaty, G.K.Powell, L.Lica, D.A. Regier, E.M.S. MacDonald, N.G. Hommes, R.O. Morris //Mol. Gen. Genet., 1986, V.203,274p. pp.80.
83. Bieber, N.E. Influence of media, genotype, explant source, and serial subculture on shoot regeneration of in vitro broccoli, Brassica oleracea. / N.E. Bieber, J.F.Reynolds // In Vitro, 1983, v. 19, p.248.
84. Chi, G.-L. Effect of AgNC>3 and aminoethoxyvinylglycine on in vitro or-ganegenesis from seedling explants of recalcitrant Brassica genotypes. / G.L.Chi, D.C.Barfield, G.E.Sim, E.C. Pua // Plant Cell Rep, 1990, v.9, p. 195198.
85. Chi, G.-L. Ethylene inhibitors en hanced de novo shoot regeneration from cotyledons of Brassica campestris ssp. chinensis (chines cabbage) in vitro. / G.-L. Chi, E.C. Pua // Plant Sci., 1989, v.64, p.243-250
86. Christey, M.C. Regeneration on Brassica oleracea from peduncle explants. / M.C. Christey, E.D. Earle // Hortscience, 1991, v.26, p.1069-1072.
87. Damiano, C. In vitro fruit trees rooting by Agrobacterium rhizogenes wild type infection. / C. Damiano, S. Monticelli //EJE Electronic Journal of Biotechnology, Vol.1 #2, 1998.
88. Douglas, C.J. Identification and genetic analysis of an Agrobacterium tumefa-ciens chromosomal virulence region. / C.J. Douglas, R.J. Staneloni, R.A. Rubin, E.W. Nester //J. Bact., 1985, 161, 850 60.
89. Deng, S.Y. In vitro vegetative propogation of Chierse cabbage. / S.Y. Deng, J.M. Heap, T.A. Klein // Plant Cell Org.Cult., 1991, v.26, p.135-139.
90. Dunemann, F. In vitro Massenvemehrung von B.oleracea — Verietaten. / F. Dunemann, J. Grunewaldt//Gartenbauwissenschaf, 1987, V.52, S.249-254.
91. Dunwell, J.M. In vitro regeneration from excised leaf discs of three Brassica species. / J.M. Dunwell // J.Exp.Bot., 1981, v.32, p.789-799.
92. Fazekas, G.A. Genetic and environmental effects of in vitro shoot regeneration from cotyledon explants of Brassica juncea L. / G.A. Fazekas, P.A. Sed-mach // Plant Cell, Tissue and Organ Cult., 1986, v.6, p.177-180.
93. Flavell, R.B. Cell-Autonomous Behavior of the rolC Gene of A. rhizogenes. / R.B. Flavell //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. V. 91. P. 3490-3496
94. George, L. In vitro regeneration of mustard plants (Brassica juncea var.Rai-S) on cotyledon explants from non-irradiated, irradiated and mutagen-treated seeds. / L.George, P.S. Rao // Ann.Bot., 1980. v.46. p.107-112.
95. Gurlitz, R.H.Z. Involvement of carrot cell surface proteins in attachment of Agrobacterium tumefaciens. / R.H.Z. Gurlitz, P.W. Lamb, A.G. Matthysse //Plant Physiol., 1987, 83, 546 68.
96. Hachey, J.E. Efficient shoot regeneration of Brassica campestris using cotyledon explants cultured in vitro. / J.E. Hachey, K.K. Sharma, M.M. Moloney //Plant Cell Rep., 1991, v.9, p.549-554.
97. Halperin, W. Attainment and Retention of Morphogenetic Capacity in vitro. / W. Halperin // Cell Culture and Somatic Cell Genetics of Plants, v.3. Plant Regeneration and Genetic Variability.(Ed. Vasil I.) 1986, Academic Press, N.Y. p.3-47.
98. Horak, J. Regeneration of diploid and polyploid plants from the stem pith explants of diploid marrow stem kale / J. Horak, J. Lustinec, J. Mesicek, M. Kamenek, D. Polackova // Ann.Bot., 1985, v.39, p.571-577
99. Horeau, N. A comparative study of in vitro shoot regeneration from'cotyledon and root explants of four varieties of B.oleracea L. / N.Horeau, R.Arora, S.S.
100. Bhojwani //Curr.Sci. — 1988. — V.58. —N.24. — P. 1349-1351.
101. Jain, R.R. Genotypic and media effects on plant regeneration from cotyledon explant cultures of some Brassica species. / R.R. Jain, J.B. Chowudhury, D.R. Sharma, W. Friedt//Plant Cell, Tiss. Organ Cult., 1988, v.14, p.197-206.
102. Klein, H. Agrobacterium-media.iOd plant transformation and its further application to plant biology. /Н. Klein, R. Horsch, S. Rogers //Ann.Rev.Plant Physiol. 1987. V.38. P.467-486.
103. Klimaszewska, K. High frequency plant regeneration from thin cell layer ex-plants of Brassica napus. / K.Klimaszewska, W.A.Keller //Plant Cell Tis. Organ Cult, 1985, v.4, p. 183-197.
104. Lazzeri, P. A. In vitro shoot regeneration from seedling root segmrnts of Brassica oleracea and B. napus cultivars. / P.A. Lazzeri, J.M. Dunwell //Ann.Bot.,1984, v.54, p.341-350.
105. Leike, H. In vitro Vermehrung bei Kopfkohl (B.oleracea L.). / H. Leike, G. Wieczorek //Arch. Zuchtungsforsch., 1982, V.12, N.6, pp.375-383.
106. Matzke, М.А. Transformation of Brassica napus L. using A. tumefaciens I M.A. Matzke, A.J. Matzke //Cell Mol. Life Sci. 1998. V. 54. P. 94-103
107. Meyer, P. Synchronized tobacco protoplasts are efficiently transformed by DNA. / P.Meyer, E.Walgenbach, K.Bussmann, G.Hombrecher, H.Saedler //Mol. Gen. Genet., 1985, Y.199, 269 76.
108. Moloney, M.M. High efficiency transformation of Brassica napus using Agrobacterium vectors. / M.M. Moloney, J. Walker, K.K. Sharma //Plant Cell Rep., 1989, v.8,p.23 8-242.
109. Murashige, T. Clonal propogation through tissue cultures. / T. Murashige //Annu. Rev. Plant Physiol., 1974, v.25, p.133-160.
110. Murashige, T. A revised medium for rapid growth and bioassys with tobacco tissue cultures. /T.Murashige, F.Skoog //Physiol. Plant., 1962. v.15. N.13. P. 473-497.
111. Narasimhulu, S.B. Species specific shoot regeneration response of cotyledon-are explants of Brassicas. / S.B. Narasimhulu, V.L. Chopra //Plant Cell Rep., 1988, v.7, p.104-106.
112. Nemeth, G. Lippai Janos emlekules es tud ulesszak eljadas. / G. Nemeth //Kot.I/Budapest. — 1982. — P.147-150.
113. Nielsen J. Metabolic engineering: techniques for analysis of targetic manipulations. / J. Nielsen // Biotechnol. Bioeng. 58: 125-132.
114. Pareek, L.K. Morphogenesis in organ, tissue and cell cultures of some species of Brassica. / L.K.Pareek, S.Singh, N.Chandra //Abstracts of V Intern. Congr. of Plant Tissue and Cell Culture. Tokyo, 1982, p.145
115. Pua, E.-C. Transgenic plants of Brassica napus L. / E.-C. Pua, A.Mehra-Palta, F.Nagy, N.-H.Chua //Bio/Technology, 1987, v.5, p.815-817.
116. Pua, E.-C. High frequency plant regeneration from stem explants of Brassica alboglabra Bailey in vitro. / E.-C.Pua, T.H.Trinh, N.-H.Chua //Plant Cell Tis. Organ Cult. 1989, v. 17, p. 143-152.
117. Radke, S.E. Transformation of Brassica napus L. using Agrobacterium tumefaciens: developmentally regulated expression of a reintroduced napin gene. /
118. S.E. Radke, B.M. Andrews, M.M. Moloney, M.L.Crouch, J.C.Kride, V.C. Knauf //Theor.Appl.Genet. 1988, v.75, p.685-694.
119. Sanford, J.C. Biolistic plant transformation. / J.C. Sanford //Physiol. Plant., 1990, v.79, p.206-209.
120. Schmulling, Th. Promoters of the rolA, B, and С Genes of Agrobacterium rhizogenes Are Differentially Regulated in Transgenic Plants. / Th. Schmulling, J. Schell, A. Spena //The Plant Cell, Vol.1, July 1989. — pp.665-670.
121. Shukla, S. In vitro multiple plantlet regeneration in knol khol (Brassica ol-eracea L.). / S.Shukla, S.K. Mishra // Curr.Sci, 1989, v.58, p.205-207.
122. Singh, S. Direct differentiation of shoot buds from internode explants of Brassica campestris cv. yellow sarson. / S.Singh, N.Chandra //Curr.Sci. (India), 1984, v.53, p.379-380.
123. Singh, S. Morphogenesis and plantlet formation in callus and suspension cultures of cauliflower (Brassica oleracea var. botrytis). / S.Singh, N.Chandra // Beitr.Biol.Pflanz, 1985, v.60, p.191-198.
124. Singh, S. Plant regeneration in callus and suspension cultures of B.campestris / S. Singh, N. Chandra // Plant Cell Rep., 1990, v.8, p.598-600.
125. Turgut, R. Agrobacterium mediated transformation of Brassica napus. / R.Turgut, M.Bargchi, J. Draper // In Vitro, 1991, v.21, р.150А.
126. Valpuesta V. Fruit and Vegetable Biotechnology. / V. Valpuesta— CRC Press; 2002; pp338
Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.