Определение и анализ структур агглютинина из Ricinus communis и вискумина (ML-1) из viscum album-белков, инактивирующих рибосому тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.02, кандидат физико-математических наук Габдулхаков, Азат Габдрахманович

• Габдулхаков, Азат Габдрахманович
• кандидат физико-математических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат физико-математических наук Габдулхаков, Азат Габдрахманович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И ОБОЗНАЧЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Каталитические А-субъединицы белков, инактивирующих рибосому.

1.1.1 Структура и ферментативная активность А-субъединицы рицина

1.1.2 Моделирование ингибирования каталитической активности А-субъединицы

1.1.3 Структура и ферментативная активность А-субъединицы абрина

1.1.4 Структура и ферментативная активность А-субъединицы эбулина

1.1.5 Рибосом-инактивирующие белки первого типа

1.1.5.1. Антивирусный белок лаконоса (РАР).

1.1.5.2. Трихосантин

1.1.5.3 Бриодин

1.1.5.4 Сапорин

1.2. Траспортная В-субъединица рибосом-инактивирующиех белков второго типа

1.2.1. Структура и углевод-связывающая активность В-субъединицы рицина

1.2.2. Структура и углевод-связывающая активность В-субъединицы абрина 41 1.2.3 Структура и углевод-связывающая активность В-субьединицы эбулина

1.3. Особенности внутриклеточного транспорта рибосом- инактивирующих белков второго типа. Роль структурных особенностей данных белков при транспорте внутри клетки 43 1.3.1 Интернетизация токсина

1.3.2. Транспорт в эндосомальном компартменте

1.3.3. Транспорт в аппарат Гольджи

1.3.4. Ретроградный транспорт в эндоплазматический ретикулум.

1.3.5. Транслокация токсина

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Выделение и очистка агглютинина

2.2. Кристаллизация агглютинина в комплексе с jS-D-галактозой

2.3. Сбор дифракционных данных с кристаллов агглютинина

2.4 Выделение вискумина из Viscum album

2.5 Кристаллизация вискумина и его комплексов

2.6 Сбор дифракционных данных с кристаллов вискумина и его комплексов

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Решение проблемы фаз для агглютинина

3.2 Определение и уточнение структуры агглютинина

3.3. Укладка полипептидной цепи агглютинина

3.4. Структура А-субъединицы агглютинина 58 3.5 Активный центр А-субъединицы агглютинина 60 3.6. Структура В-субъединицы агглютинина

3.7 Первый галактозо-связывающий центр агглютинина

3.8 Второй галактозо-связывающий центр агглютинина 65 3.9. Межсубъединичные контакты агглютинина

3.10 Решение проблемы фаз для вискумина

3.11 Определение и уточнение структуры вискумина и его комплексов

3.12. Структура А-субъединицы вискумина

3.13. Активный центр А-субъединицы вискумина

3.14. Структура В-субъединицы вискумина

3.15. Первый галактозо - связывающий центр вискумина

3.16. Второй галактозо - связывающий центр вискумина

3.17 Взаимодействие рибосом-инактивирующих белков с сарцин-рициновой петлей рибосомы

3.18 Четвертичная структура агглютинина и вискумина. 84 ВЫВОДЫ 87 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И ОБОЗНАЧЕНИЙ

АО. - аминокислотный остаток

АГ - аппарат Гольджи

ЛД50 - молярная концентрация ферментативной субъединицы в составе цитотоксического агента, при которой наблюдается гибель 50% клеток

КИ50 - молярная концентрация цитотоксического агента, при которой наблюдается 50% ингибирование включения в клетки [ Н] тимидина или [,4С]лейцина «• РИБ - рибосом-инактивирующие белки

РИБ-1 - рибосом-инактивирующие-белки первого типа, содержащие одну субъединицу

РИБ-П - рибосом-инактивирующие белки второго типа, содержащие две субъединицы

ЭПР - эндоплазматический ретикулум

MLI - вискумин - mistletoe lectin I токсин из омелы I

MLII - mistletoe lectin II, токсин из омелы II

MLIII - mistletoe lectin III, токсин из омелы III MLA - А-субъединица вискумина MLB - В-субъединица вискумина t RTA - А-субъединица рицина

RTB - В-субъединица рицина

S06 -сапорин

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Определение и анализ структур агглютинина из Ricinus communis и вискумина (ML-1) из viscum album-белков, инактивирующих рибосому»

Одним из наиболее важных направлений развития новых биотехнологий является создание фармакологических препаратов, обладающих высокой специфичностью действия на клетки или молекулы-мишени в организме. В настоящее время именно белки или их конъюгаты привлекают особый интерес исследователей при конструировании высокоселективных лекарств. Активно изучаются с этой точки зрения растительные токсины, которые полностью останавливают синтез белка в клетке, переводя рибосомы в неактивное состояние. Эти токсины носят общее название рибосом-инактивирующих белков (РИБ).

Рибосом-инактивирующие белки разделяются на два типа: РИБ-I, которые состоят только из одной каталитической (active, А), субъединицы и РИБ-П, которые содержат как каталитическую (А), так и связывающую (binding, В) субъединицы [Barbieri et al., 1993]. А-субъединица обеспечивает инактивацию рибосомы, связываясь со специфическим участком (сарцин-рициновой петлей) 28S рРНК рибосомы эукариот и выщепляя аденин. Поскольку модифицированная таким образом рибосома теряет сродство к фактору элонгации транскрипции, это приводит к остановке синтеза белка клеткой и в результате к гибели клетки [Lord et al., 1991]. В-субъединица, являясь лектином, связывается с гликозилированными рецепторами на поверхности клетки и обеспечивает проникновение токсина в клетку. Высокая цитотоксическая активность РИБ-П является основной причиной использования их для создания иммуннотоксинов - лекарств нового поколения, главным образом противоопухолевого действия.

Помимо цитотоксических свойств белки этой группы проявляют в различной степени способность агглютинировать клетки за счет своей лектиновой активности. Кроме того, некоторые из них обладают и иммуномодулирующими свойствами.

Аминокислотные остатки, входящие в каталитический центр А-субъединиц, являются консервативными среди данного семейства; во многом сходно и t строение углевод-связывающих центров В-субъединиц. Однако, эффективность цитотоксического действия различных белков этого класса существенно различается. Сравнительный анализ структурных и функциональных свойств родственных рибосом-инактивирующих белков - один из эффективных подходов к выяснению механизмов, определяющих различия в их биологической активности. Понимание структурных особенностей, влияющих на цитотоксическую активность данных белков, необходимо также для получения эффективных препаратов иммунотоксинов на их основе.

Целью данной работы является определение пространственных структур тетрамерных рибосом-инактивирующих белков второго типа - вискумина (ML-I) из Viscum Album и агглютинина из Ricinus communis - и выявление структурных особенностей, влияющих на биологическую активность данных белков.

Заключение диссертации по теме «Биофизика», Габдулхаков, Азат Габдрахманович

ВЫВОДЫ

1. Выделены, очищены и закристаллизованы тетрамерные рибосом-инактивирующие белки второго типа — агглютинин из Ricinus communis и вискумин (MLI) из Viscum album.

2. Определены и уточнены кристаллические структуры агглютинина из Ricinus communis с разрешением 2.63 А в комплексе с галактозой и вискумина из Viscum album с разрешением 2.05 А, в свободной форме и в комплексах с галактозой с разрешением 2.3 А и лактозой с разрешением 2.3 А.

3. Показано, что структура активных центров рицина, агглютинина и вискумина консервативна. Высказано предположение, что значительное различие в связывании этих белков с рибосомой может был» вызвано прилегающими к активному центру неконсервативными аминокислотными остатками.

4. Построены модели комплексов рицина, агглютинина и вискумина с сарцин-рициновой петлей рибосомы. Модели встроены в структуру 50S субчастицы рибосомы из Н. marismortui. Анализ моделей позволил предположить, что значительное различие в связывании белков, инактивирующих рибосому, с большой субчастицей и изолированной 28S РНК может был» вызвано контактом третьего домена каталитических субъединиц с рибосомным белком L6.

5. Показано, что замена аминокислоты Туг248 во втором галакгозо-связывающем кармане рицина на His248 в агглютинине приводит к утрате углевод-связывающей активности этого кармана.

6. Прямым методом впервые показано, что агглютинин и вискумин представляют собой гетеротетрамеры. Установлено, что тетрамер агглютинина образован с использованием ковалентной связи между А-субъединицами двух гетеродимеров, а тетрамер вискумина образуется за счет нековалентных взаимодействий между В-субъединицами гетеродимеров. щ

88

Список литературы диссертационного исследования кандидат физико-математических наук Габдулхаков, Азат Габдрахманович, 2005 год

1. Агапов И.И.// Диссертация «Рибосом-инакгивирующие белки II типа: структура, биологическая активность, внутриклеточный транспорт, использование для синтеза иммунотоксинов» д-ра биологических наук, М: Государственный научный центр РФ ГОСНИИГЕНЕТИКА, 1997

2. Моргунова Е.Ю., Михайлов A.M., Некрасов Ю.В. и др.// Докл. АН СССР. 1988. Т. 299. С.1129.

3. Barbieri L., Battelli M.G., Stirpe F. //Ribosome-inactivating proteins from plants// Biochim. Biophys. Acta., v.l 154, pp. 237-282.1993

4. Bilge A., Howell-Clark J., Ramakrishman S., et al // Degradation of ricin A- chain by endosomal and lysosomal enzymes: the protective role of ricin B- chain// Ther. Immunol, V. 1,PP. 197-204,1994

5. Brodsky J.L, McCracken A.A.//Er-associated and proteasome-mediated protein degradation: how two topologically restricted events came together. //Trends Cell Biol, V. 7,PP 151-156,1997

6. Byers VS, Levin AS, Waites LA, Starrett BA, Mayer RA, Clegg JA, Price MR, Robins RA, Delaney M, Baldwin RW. // A phase I/П study of trichosanthin treatment of HTV disease.//AIDS.;4(12): 1189-96, Dec 1990

7. Chaddock JA, Monzingo AF, Robertus JD, Lord JM, Roberts LM //Major structural differences between pokeweed antiviral protein and ricin A-chain do not account for their differing ribosome specificity//. Eur J Biochem. Jan 15; 235(1-2): 159-66,1996

8. Chen, Y.-L, Chow, L.-P, Tsugita, A. & Lin, J.-Y.// The complete primary structure of abrin-a В chain//. FEBS Letters, 309,115-118. 1992t

9. Collaboratiove Computational Project, Number 4., Acta Cryst., D50, 760-763 (1994)

10. Crowter, RA. & Blow, D.M. //A method of positioning a known molecule in an unknown crystal structure. Acta Cryst., 23, 544-548.1967

11. D'Cruz OJ, Waurzyniakt B, Uckun FM. A 13-week subchronic intravaginal toxicity study of pokeweed antiviral protein in mice. Phytomedicine.; 11(4):342-51. 2004

12. Van Deurs В., Sandvig K., Petersen O.W. et all // Estimation the amount of internalizated ricin that reaches the trans-Golgi network// J.Cell Biol., V. 106, PP. 253-267,1988

13. Van Deurs В., Sandvig K., Petersen O.W. et all //The ways of endocytosis III, Int. Rev. Cytol, V. 117, PP. 131-177,1989

14. Drickamer, К // Making a fitting choice: common aspects of sugar-binding sites in plant and animal lectins.// Structure. 15; 5(4): 465-8. Review. Apr 1997

15. Eiklid K., Olsnes S., Phil AJ/Entry of lethal doses of abrin, ricin and modeccin into the cytosol of HeLa cells// Exp. Cell Res., V. 126, PP. 321- 326,1980

16. Ehrlich, P., Experimentelle Untersuchungen и'Ъег Immunita't I. Ueber Ricin. Dtsch. Med. Wochenschr. 17, 976-979,1891

17. Endo Y., Mitsui K., Motizuki M., et al //The mechanism of action of Ricin and related toxic lectins on eukaryotic ribosomes. // J. Biol. Chem., V. 262, PP. 59085912,1987

18. Endo Y., Tsurugi K., Franz H. //The site of action of the A-chain of mistletoe lectin I on eukaryotiic ribosomes. The RNA N-glycosidase L activity of the protein. // FEBS Letters., V.231, PP. 378-380, 1988

19. Forrester, J. A., Mcintosh, D. P., Cumber, A. J., Parnell, G. D. & Ross, W. C. // Delivery of ricin and abrin A-chains to human carcinoma cells in culture following covalent linkage to monoclonal antibody.// Cancer Drug Delivery, 4,283-292,1984

20. Frankel A, Welsh P, Richardson J, Robertus JD. //The role of arginine 180 and glutamic acid 177 of ricin toxin A chain in the enzymatic inactivation of ribosomes.// Mol Cell Biol; 10:6257-6263. 1990

21. Fryxell DK, Gawlak SL, Dodge RW, Siegall CB //Identification of a specific tyrosine residue in Bryodin 1 distinct from the active site but required for full catalytic and cytotoxic activity//. Protein Sci. Feb;7(2):318-24. 1998

22. Garred O, van Deurs B, Sandvig K. //Furin-induced cleavage and activation of Shiga toxin.//J Biol Chem. 1995 May 5;270(18): 10817-21,1995a

23. Girbe's T, Citores L, Iglesias R, Ferreras JM, МшГ oz R, Rojo MA, Arias FJ, Garci'a JR, Me'ndez E, Calonge M. //Ebulin 1, a non-toxic novel type 2 ribosome-inactivating protein from Sambucus ebulus L. leaves//. J Biol Chem;268:18195-18199. 1993

24. Gluck A, Endo Y, Wool IG. //Ribosomal RNA identity elements for ricin A-chain recognition and catalysis—analysis with tetraloop mutants//. J Biol Chem; 226: 411-424. 1992

25. Gluck A., Endo Y., Wool I. //The ribosomal RNA identity elements for Ricin and for alpha-sarcin: mutations in the putative CG pair that close a GAGA tetraloop. //Nucleic Acids Res., v. 22, pp. 321-324.1994

26. Gu Y.-J. and Zong-Xiang Xia //Crystal Structures of the Complexes of Trichosanthin With Four Substrate Analogs and Catalytic Mechanism of RNA N-Glycosidase// PROTEINS: Structure, Function, and Genetics 39:37-46,2000

27. Hatakeyama T, Yamasaki N, Funatsu G. //Identification of the tryptophan residue located at the low-affinity saccharide binding site of ricin D.// J Biochem; 100:781788,1986

28. Hazes В., Read RJ. //Accumulating evidence suggests that several AB- toxins subvert the endoplasmic reticulum-associated protein degradation pathway to enter target cells//Biochem., V. 36, PP 11051-11054,1997

29. Huang Q, Liu S, Tang Y, Jin S, Wang Y. //Studies on crystal structures, active-center geometry and depurinating mechanism of two ribosome-inactivating proteins//. Biochem J;309 :285-298,1995

30. Hudav, K., Dinman, J.D. and Turner, N.E. J. Biol. Chem. 274,3859-3864. 1999

31. Husain J, Tickle IJ, Wood SP. //Crystal structure of momordin, a type I ribosome inactivating protein from the seeds of Momordica charantia.// FEBS Lett. Apr 4; 342(2): 154-8. 1994

32. Ippoliti, R., Lendaro, E., Bellelli, A. and Brunori, M. FEBS Lett. 342, 154-158. 1992

33. Johannes L., Tenza D., Antony C. // Retrograde transport of KDEL-bearing B-fragment of Shiga-toxin//J.Biol.Chem., V. 272, PP 19554-10561,1997

34. Jones,T.A., Zou.J.Y., Cowan,S.W., Kjeldgaard,M. //Improved methods for building protein models in electron density maps and the location of errors in these models//. Acta Ciyst., A47,110-119,1991

35. Kabsch, W. //Integration, scaling, space-group assignment and post refinement. XDS. In International Tables for Crystallography//, eds. Rossmann M.G. & Arnold E.F. Dordrecht: Kluwer Academic Publishers; 2001

36. Koradi, R, Billeter, M., Wu'thrich, K., //MOLMOL: a programfor display and analysis of macromolecular structures//. J. Mol.Graphics 14, 51-55,1996

37. Katzin BJ, Collins EJ, Robertus JD //Structure of ricin A-chain at 2.5 A.// Proteins; 10(3):251-9,1991

38. Kirn Y., Robertas J.D., //Analysis of several key active site residues of Ricin A-chain by mutagenesis and X-ray crystallography. // Protein Eng., v.5, pp.775-779, 1992.

39. Kurinov IV, Rajamohan F, Venkatachalam TK, Uckun FM //X-ray crystallographic analysis of the structural basis for the interaction of pokeweed antiviral protein with guanine residues of ribosomal RNA// Protein Sci. Nov;8(l 1): 2399-405,1999b

40. Kurinov I.V, Fatih M. Uckun // High resolution X-ray structure of potent anti-HTV pokeweed antiviral protein-III// Biochemical Pharmacology Volume 65, Issue 10 , 15, Pages 1709-1717, May 2003

41. Li HG, Xu SZ, Wu S, Yan L, Li JH, Wong RN, Shi QL, Dong YC //Role of Argl63 in the N-glycosidase activity of neo-trichosanthin// Protein Eng. Nov; 12(11):999-1004. 1999

42. London E. //How bactreial protein toxins enter cells: the role of partial infolding in membrane translocation// Mol. Microbiol., V.6, PP. 3277-3282,1992

43. Lord J.M., Hartley M.R. and Roberts L.M.// Ribosome-inactivating proteins of plants. // Sem. Cell. Biol., V. 2, PP. 15-22,1991

44. Lord J.M., Roberts L.M. //Retrograde transport: going against the flow// Curr. Biol., V. 8, PPR56-R58,1998

45. Ma QJ, Li JH, Li HG, Wu S, Dong YC.// Crystal structure of beta-luffin, a ribosome-inactivating protein, at 2.0 A resolution.// Acta Crystallogr D Biol Crystallogr. Aug;59(Pt 8):1366-70,2003

46. Matthews B.W. //Solvent content of protein crystals//. J. Mol. Biol., V.33, P. 491 -497, 1968

47. McGrath MS, Hwang KM, Caldwell SE, Gaston I, Luk КС, Wu P, Ng VL, Crowe S, Daniels J, Marsh J, //GLQ223: an inhibitor of human immunodeficiency virus4

48. Miller DJ, Ravikumar K, Shen H, Suh JK, Kerwin SM, Robertus JD. //Structure-based design and characterization of novel platforms for ricin and shiga toxin inhibition.// J. Med Chem 3;45(l):90-8 Jan 2002

49. Montfort, W., Villafranca, J. E., Monzingo, A. F., Ernst, S. R., Katzin, В., Rutenber, E., Xoung, N. H., Hamlin, R. & Robertus, J. D // The three-dimensional structure of ricin at 2.8 A.//J Biol Chem. Apr 15;262(11):5398-403. 1987

50. Monzingo A.F. and Robertus J.D.// X-ray analysis of substrate analogs in the ricin A-chain active site // J.Mol.biol., v.227, pp. 1136-1145,1992

51. Monzingo AF, Collins EJ, Ernst SR, Irvin JD, Robertus JD. //The 2.5 A structure of pokeweed antiviral protein.//J Mol Biol. Oct 20;233(4):705-15,1993

52. Navaza J.// AmoRe: an automated package for molecular replacement //Acta cryst, v.50, pp 157-163,1994

53. Navaza J. (1987), Acta Cryst., A43, 645

54. Navaza J. (1993), Acta Cryst., D49, 588

55. Navaza J. & Saludjian P. //AMoRe: An Automated Molecular Replacement Program Package//, in Methods in Enzymology, 276, 581-594, Academic Press, 1997

56. Parikh В A, Turner NE. //Antiviral activity of ribosome inactivating proteins in medicine// Mini Rev Med Chem. Jun;4(5):523-43. 2004

57. Rajamohan F, Venkatachalam TK, Irvin JD, Uckun FM. //Pokeweed antiviral protein isoforms PAP-I, PAP-II, and PAP-III depurinate RNA of human immunodeficiency virus (HIV)-1//. Biochem Biophys Res Commun;260:453-8, 1999

58. Rajamohan F, Matthew J. Pugmire, Igor V. Kurinov, and Fatih M. Uckun //Modeling and Alanine Scanning Mutagenesis Studies of Recombinant Pokeweed Antiviral Protein// J Biol Chem, Vol. 275, Issue 5, 3382-3390, February 4, 2000

59. Ramachandran,G.N, Ramakrishnan.C, Sasisekharan,V. J.Mol. Biol, 7, 95-99, 1963

60. Rapak A, Falnes P, Olsnes S. //Retrograde transport of mutant ricin to the endoplasmic reticulum with subsequent translocation to cytosol.//Proc.Natl.Acad.Sci.USA, V. 94, PP. 3783-3788,1997

61. Ren J, Wang Y, Dong Y, Stuart D. //The N-glycosidase mechanism of ribosome-inactivating proteins implied by crystal structure of a-momorcharin//. Structure;2:7— 16. 1994

62. Ready MP, Kim Y, Robertus JD. //Site-directed mutagenesis of ricinA chain and implications for the mechanism of action//. Proteins; 10:270-278, 199171 .Riezman H. // The ins and out of protein translocation// Science, v. 278, PP. 1728-1729, 1997

63. Rini, J. M. Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 24,551-577.1995

64. Robertus, J. D. & Ready, M. P // Ricin В chain and discoidin I share a common primitive protein fold//J Biol Chem. 25; 259(22): 13953-6. Nov 1984

65. Rutenber and Robertas // Structure of ricin B-chain at 2,5 A resolution // Proteins, v. 10, pp.260-269,1991

66. Schlossman, D., Withers, D., Welsh, P., Alexander, A., Robertus, J., & Frankel, A.

67. Tahirov Т., Lu Т., Liaw Y., Chen Y., Lin J. //Crystal structure of abrin-a at 2.14 A. // J.Mol.Biol., v. 250, pp. 354-367,1995.

68. Valter, C.A., Bartle, L.M., Leszyk, J.D., Lambert, .M. and Goldmacher J. Biol. Chem. 270,12933-12940,19951

69. Watanabe K, Honjo E, Tsukamoto T, Funatsu G. //Fluorescence studies on the interaction of adenine with ricin A-chain.// FEBS Lett. Jun 15;304(2-3):249-51.1992

70. Wesche J., Rapak A., Olsnes S. //Dependence of ricin toxicity on translocation of the toxin A chain from the endoplasmic reticulum to the cytosol. // J.Biol. Chem., v, 274, pp. 34443-34449,1999.

71. Weston S., Tucker A., Thatcher D., Derbishire D., Pauptit R.// X-ray structure of recombinant ricin A-chain at 1,8A resolution // J.Mol.Biol., v.244, pp. 410-422,1994

72. Wu S, Lu X, Zhu Y, Yang J, Dong Y.// N-glycosidase mechanism of trichosanthin//. Science China; 41:174-180. 1998

73. Yamasaki N, Hatakeyama T, Funatsu G. Ricin D-saccharide interaction as studied by ultraviolet difference spectroscopy. J Biochem (Tokyo). 98(6): 1555-60., Dec 1985

74. Yan L, Wu S, Li HG, Li JH, Wong RN, Shi QL, Dong YC. //Role of TYR70 in the N-glycosidase activity of neo-trichosanthin//. Toxicon. Jul;37(7):961-72,1999

75. Xinjian Yan, Thomas Hollis, Maria Svinth, Philip Day Arthur F. Monzingo, George W. A. Milne and Jon D. Robertus //Structure-based Identification of a Ricin Inhibitor// J. Mol. Biol. 266,1043±1049,1997

76. Yuan Y-R, He Y-N, Xiong J-P, Xia Z-X. //Three-dimensional structure of b-momorcharin at 2.55 A resolution//. Acta Crystallogr; D55:1144-1151.1999

77. Xiong JP, Xia ZX, Zhang L, Ye GJ, Jin SW, Wang Y. // Crystallization and preliminary crystallographic study of beta-momorcharin.// J Mol Biol. Apr 29;238(2):284-5.1994

78. Zentz C, Frenoy JP, Bourrillon R //Binding of galactose and lactose to ricin. Equilibrium studies.// Biochim Biophys Acta. 26; 536(1): 18-26., Sep 1978

79. Zhan J., Stayton P., Press O. //Modificatication of ricin A chain, by addition of endoplasmic reticulum (KDEL) or Golgi (YQRL) retention sequences enhances its cytotoxicity and traslocation // Cancer Immunol., Immunother., V. 46, PP 55-60,1998

80. Zhu G., Huang Q., Qian M., Tang Y. // Crystal structure of K-momorcharin in acetonitrile water mixture// Biochimica et Biophysica Acta 1548 152-158,20011. БЛАГОДАРНОСТИ

81. Автор приносит глубокую благодарность:

82. С.В. Никонову и A.M. Михайлову за руководство работой, поддержку и помощь в анализе полученных результатов;

83. А.Д. Никулину, Н.А. Невской О.С. Никонову, за помощь и ценные советы; Всему коллективу группы структурных исследований рибосомных белков Института белка (РАН) за прекрасную атмосферу, способствовавшую выполнению данной работы;

84. Российскому Фонду Фундаментальных Исследований и Фонду Биомедицинских Исследований Ховарда Хьюза за финансовую поддержку данной работы.