Гуморальный иммунный ответ на токсины из омелы белой (Viscum album) тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Солопова, Ольга Николаевна

• Солопова, Ольга Николаевна
• кандидат биологических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Солопова, Ольга Николаевна

СОДЕРЖАНИЕ

Стр.

Список сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы. Иммунный ответ на белковые токсины различного происхождения

1.1.Введени е

1.2.Иммунный ответ на токсины бактерий

1.2.1.Воздействие Шига-токсина на организм млекопитающих

1.2.1.1 .Строение и характеристика Шига-токсина

1.2.1.2.Гуморальный иммунный ответ на Shigella dysenteriae

1.2.1.3.Клеточный иммунитет к Shigella dysenteriae

1.2.2.Иммунологические характеристики коклюшного токсина и его искусственных

аналогов, полученных при производстве противококлюшных вакцин

1.2.2.1 .Строение и действие коклюшного токсина

1.2.2.2.Влияние коклюшного токсина на продукцию антител в организме

1.2.2.3.Клеточный иммунитет на коклюшный токсин

1.2.3.Температуро-лабильный энтеротоксин Escherichia coli и холерный токсин: строение, биологическая активность и воздействие на иммунную систему

1.2.3.1.Сравнительные характеристики эндотоксина E.coli и холерного токсина

1.2.3.2.Гуморальный иммунный ответ на эндотоксин E.coli

1.2.3.3.Гуморальный иммунный ответ на холерный токсин

1.2.3.4.Клеточный иммунитет к эндотоксину E.coli и холерному токсину

1.2.4.Ботулиновые нейротоксины, иммуногенные свойства

1.2.4.1.Происхождение, строение и биологическое действие ботулиновыхтоксинов22

1.2.4.2.Гуморальный иммунный ответ на ботулиновые токсины

1.2.5.Общие черты воздействия бактериальных токсинов на иммунную систему

млекопитающих

1.3.Растительные токсины. Воздействие растительных токсинов на организм

млекопитающих

*

1.3.1.1.Рицин- белковый токсин из семян Ricinus communis. Строение и биологические свойства

1.3.1.2.Гуморальный иммунный ответ на рицин

1.3.1.3.Клеточный иммунный ответ на рицин

1.3.2.Влияние гелонина на клеточный иммунитет

1.3.3.Токсические белки из листьев и побегов омелы белой (Viscum Album L.)

1.3.3.1.Характеристики и биологическое действие

1.3.3.2.Гуморальный иммунный ответ на белки водного экстракта омелы

1.3.3.3.Воздействие антител против MLI на иммунокомпетентные клетки в экспериментах in vitro

1.3.3.4.Анализ антигенных детерминант молекул ML

1.3.3.5.Модуляция антителообразования компонентами экстракта омелы

1.3.3.6.Воздействие токсинов омелы на клетки иммунной системы млекопитающих. Изменение уровня пролиферации мононуклеарных клеток периферической крови

1.3.3.7.Изменение секреции лимфокинов^под воздействием экстракта омелы

1.3.3.8.Изменение концентрации и цитотоксической активности естественных киллеров под воздействием экстракта омелы

1.3.3.9.Изменение количества макрофагов и их фагоцитирующей активности под воздействием экстракта омелы

1.3.3.10.Корреляция между гуморальным и клеточным иммунными ответами на

ML

1.3.4.0бщие черты взаимодействия растительных токсинов на иммунную систему

млекопитающих

1 АЗаключение

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Культивирование клеточных линий

2.2.Выделение токсинов и их субъединиц из растения Viscum alburn

2.3.Иммунизация крыс и мышей нативным токсином MLIII или изолированными субъединицами токсина MLI

2.4.1.Получение гибридом, продуцирующих моноклональные антитела против вискумина

2.4.2.Клонирование гибридом методом лимитирующих разведений

2.4.3. Криоконсервирование клеток

2.5.Наработка и очистка антител

2.5.1.Очистка антител ионнообменной хроматографией

2.5.2.0чистка антител хроматографией на протеин А-сефарозе

2.6.Радиоактивное мечение белков

2.7.Иммуноферментный анализ

2.7.1.Иммуноферментный анализ с антигеном, сорбированным на планшете

2.7.2.Иммунноферментный анализ с антигеном в растворе

2.8. Изучение диссоциации и реассоциации тетрамерных токсинов и их

изолированных субъединиц

2.9.Оценка галактозосвязывающей активности токсинов

2.10.По лучение иммунотоксинов

2.11. Определение цитотоксической активности токсинов и иммунотоксинов

2.12.Связывание токсинов с клетками

2.13.0чистка и ренатурация рекомбинантной А-субъединицы MLI

2.15 .Характеристики антител

2.15.1.Определение констант ассоциации

2.15.2.0пределение класса и подкласса антител

2.16. Определение гликозилированности токсинов

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1.Изучение иммунного ответа на изоформы ML

3.1.1 .Иммунизация крыс токсином MLIII

3.1.2. Иммунизация мышей токсином MLIII

3.1.3. Получение моноклональных антител мыши против MLIII

3.1.4.Получение моноклональных антител против MLII

ГЛАВА 4. ИММУННЫЙ ОТВЕТ НА ИЗОЛИРОВАННЫЕ СУБЪЕДИНИЦЫ MLI

4.1.Иммунизация животных А-субъединицей

4.1.1 .Образование антител к А-субъединице у крыс

4.1.2.Иммунизация мышей А-субъединицей MLI

4.2.Иммунный ответ на В-субъединицу MLI

4.2.1.Результаты иммунизации крыс MLB

4.2.2.Иммунизация мышей В-субъединицей токсина MLB

4.2.3.Получение моноклональных антител против В-субъединицы MLI

4.2.4. Взаимодействие полученных монАТ с целой молекулой токсина MLI

4.2.5.Устойчивость гибридом, продуцирующих монАТ против MLB, к цитотоксическому действию MLI

4.3.Предсказание антигенных детерминант В-субъединицы MLI

ГЛАВА 5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЛЕКТИНОВ В ПРЕПАРАТАХ ИЗ ОМЕЛЫ, АНАЛИЗ СЫВОРОТОК ПАЦИЕНТОВ

5.1.Разработка тест- систем для количественного определения МЬ в препаратах из омелы

5.2. Анализ сывороток больных, получавших инъекции экстракта омелы

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ БСА - бычий сывороточный альбумин ДДС-Ыа - додецилсульфат натрия

ИТ -иммунотоксин

МонАТ - моноклональные антитела

НАФ - неполный адъювант Фрейнда

ПААГ - полиакриламидный гель

ПАФ - полный адъювант Фрейнда

РИБ - рибосом-инактивирующие белки

ФСБ - фосфатно-солевой буфер

ЭР - эндоплазматический ретикулум

БТ - дифтерийный токсин

МЬ - токсины из омелы

МЫ - вискумин, токсин из омелы I

МП1 - токсин из омелы II

мил - токсин из омелы III

МЬА -А-субъединица вискумина

МЬВ - В-субъединица вискумина

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Гуморальный иммунный ответ на токсины из омелы белой (Viscum album)»

ВВЕДЕНИЕ

Белковые токсины растительного и бактериального происхождения оказывают и угнетающее, и стимулирующее действие на иммунную систему млекопитающих. До сих пор нет полного понимания всех процессов, происходящих в организме при попадании токсинов. Известно, что они могут влиять на секрецию лимфокинов, на численность и активность макрофагов, естественных киллеров, лимфоцитов периферической крови.

Растительные токсины широко используются для производства фармакологических препаратов. Экстракт из листьев и побегов омелы (Viscum Album) с давних времен используется как дополнительное средство при лечении онкологических заболеваний, компоненты экстракта применяют для разработки иммунотоксинов- химерных белков, состоящих из токсина и антитела к определенному клеточному маркеру.

Основными активными компонентами экстракта являются токсические лектины, составляющие целое семейство гомологичных белков. Эти лектины представляют собой рибосом-инактивирующие белки 2 типа и состоят из двух субъединиц. А-субъединица токсина (29кДа) является высокоспецифической N-гликозидазой и избирательно выщепляет одну молекулу аденина в 28S рРНК рибосомы эукариотической клетки. В-субъединица (34кДа)- лектин, имеет два центра связывания с поверхностными рецепторами клетки и обеспечивает проникновение А-субъединицы в цитозоль.

Гуморальный иммунитет на компоненты экстракта омелы остается практически неизученным. Антитела, образующиеся в ответ на введение этих токсинов, имеют нейтрализующее действие и способны уменьшать цитотоксичность компонентов препарата, влияя на их стимулирующие свойства. Настоящая работа

посвящена изучению процесса образования антител против токсинов омелы, специфичности относительно их изоформ, направленности либо к А- либо к В-субъединицам токсина, а также изучению структуры основных антигенных эпитопов.

Целью данной работы является изучение гуморального иммунного ответа на токсические белки из омелы и их отдельные субъединицы. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи: 1) испытать разные способы иммунизации лабораторных животных, в ходе иммунизации провести тестирование сывороток на содержание антител против токсина и его отдельных субъединиц; 2) получить и охарактеризовать моноклональные антитела против изоформ токсина и изолированной В-субъединицы; 3) изучить с помощью моноклональных антител механизм взаимодействия токсина с рецепторами внутри клетки; 4) разработать усовершенствованные тест системы для определения токсинов в фармакологических препаратах из омелы.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Солопова, Ольга Николаевна

ВЫВОДЫ.

1. Выявлены закономерности гуморального иммунного ответа на токсины омелы и их изолированные субъединицы. Показано, что при иммунизации токсином в концентрации до 20 мкг/кг образуются антитела преимущественно к В-субъединице, от 20 мкг/кг до 50 мкг/кг - детектируются антитела и к А- и к В-субъединице, а свыше 50 мкг/кг - преимущественно к А-субъединице токсина.

2. Дан сравнительный анализ иммуногенности изолированных субъединиц МЫ. Показано, что уровень антител против А-субъединицы возрастает с увеличением дозы вводимого МЬА в широком диапазоне концентраций (от 0 до 1500мкг/мг), тогда как для В-субъединицы существует оптимальная доза вводимого антигена (примерно 15 мкг/кг для мышей), при превышении которой уровень антителообразования резко падает.

3. Получены панели моноклональных антител против МЫП, МЫ1 и В-субъединицы МЫ. Разработана тест-система для определения количественного содержания токсинов в препаратах на основе экстракта омелы.

4. Из семи полученных гибридом, синтезирующих антитела к различным эпитопам В-субъединицы МЫ, только гибрид ома ТВ 12 обладает повышенной устойчивостью к действию токсина (более, чем в 130 раз по сравнению с контрольными клетками). Показано, что антитела ТВ 12 вытесняют токсин из комплекса с рецептором, что объясняет устойчивость данной гибридомы.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Солопова, Ольга Николаевна, 1999 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.

1.Lang J., Ushkaryov Yu., Grasso A. and Wollheim C. (1998). Ca 2+-independent insulin exocytosis induced by alfa-latrotoxin requires latrophilin, a G protein- coupled receptor. The EMBO Journal, 17:3, pp.648-657.

2. Eiklid,K & Olsnes, S. (1983). Animal toxicity of Shigella dysenteriae cytotoxin: Evidence that the neurotoxic, enterotoxic, and cytotoxic activities are due to one toxin. J. Immunology, 130, 380-384.

3. Schmitt, е., McKee, M., and O'Brien, A. (1991). Two copies of Shiga-like toxin II-related genes common in enterogemorrhagic Escherichia coli strains are responsible for the antigenic heterogeneity of the 0157:H strain E32511. Infect. Immunology, 59,1065-1073.

4. Lingwood, C. (1993). Verotoxins and their glycolipid receptors. Adv. Lipid Res., 25, 189-211.

5. O'Brien, A.D. and Holmes, R.K. (1987). Shiga and Shiga-like toxins. Microbiol. Rev., 51,206-220.

6. Николаева Т.Н. и др., (1997). Роль токсинообразования Sigella.dysenteriae на различных этапах формирования клеточного иммунного ответа экспериментальных животных. Ж. Микробиол., Эпидем. И Иммунобиол., 2, 6-10.

7. Islam D., Wretlind В., Hammarshtram L., Christensson В., Lindberg A.A. (1996). Semiquantitative estimation of Shigella antigen-specific antibodies: correlation with disease everity during shigellosis. APMIS, Jul, !04:7-8, pp.563-574.

8. Suckow, M.A., Keren, D.F., Brown, J.E. and Keusch, G.T., (1994), Stimulation of gastrointestinal antibody to Shiga toxin by orogastric immunization. Immunology and Cell Biology., 74, pp.69-74.

9.Rappuoli, R. and Pizza, M. (1991). Structure and evolutionary aspects of ADF-ribosilating toxins. In Sourcebook of bacterial protein toxins (ed.J.Alouf and J.Freer), pp.l-20, Academic Press, London and San Diego.

lO.Sekura, R.D. and Zhang, Y. (1985). Pertussis toxin: Structural elements involved in the interaction with cells. In Pertussis toxin (ed. R.D.Sekura, J.Moss, and M.Vaughan), pp.4564. Academic Press, Orlando, Florida.

11.Pittman, M. (1984) The concept of pertussis as a toxin- mediated disease. Ped. Infect. Dis., 3, pp.467-486.

12. Munoz, J.J. (1988). Action of pertussigen (pertussis toxin) on the host immune system in pathogenesis and immunity in pertussis, (eds Wardlaw, A.C. and Parton, R.). Wiley and Sons, pp. 173-192.

13. Morse,S.I. and Morse, J.H. (1976). Isolation and properties of the leucocytosis and lymphocytosis- promoting factors of Bordetella pertussis. J. Exp. Med., 143, pp.1483-1502.

14. Morse, S.I. and Barron, B.A. (1970). Studies on the leucocytosis and lynphocytosis induced by Bordetella pertussis- III. The distribution of transfused lymphocytes in pertussis- treated and normal mice. J. Exp. Med., 132, pp.663-672.

15.Sprangrude, G.J., Sacchi, F., Hill, H.R., Van Epps, D.E. and Daynes R.A. (1985). Inhibition of lymphocyte and neutrophil chemotaxis by pertussis toxin. J. Immunol., 135, pp. 4135-4143.

16.Meade, B.D., Kind, P.D., Ewell, J.B., McGrath, P.P. and Manclard, C.R. (1984). In vitro inhibition of murine macrophage migration by Bordetella pertussis lymphocytosis-promoting factor. Infect. Immun., 45, pp. 718-725.

17. Tamura, M., Nogimori, K., Yajima, M., Ase, K. and Ui, M.A. (1983). A role of the B-oligomer moiety of islet- activating protein, pertussis toxin, in development of the biological effects on intact cells. J. Biol. Chem., 258, 6756-6761.

18. Nencioni, L., Pizza, M., Volpini, G., De Magistris, M.T., Giovannoni, F. and Rappuoli, R. (1991). Properties of the B- oligomer of pertussis toxin. Infect. Immun., 59, pp. 47324734.

19. Samore M.H. and Siber, G.R. (1996). Pertussis toxin enhanced IgGl and IgE responses to primary tetanus immunization are mediated by interleukin-4 and persist during secondary responses to tetanus alone., Vaccine, 14, pp.290-297.

20. Чупринина Р.П., Быченко Б.Д., Смирнов В.Д., Максютов Р.В. и Эглит Ю.Х., (1990). Разработка коклюшной вакцины нового поколения. Ж.Микробиол. Эпидемиол. и Иммунобиол., 10, стр.89-94.

21. De Magistris, М.Т., Romano, М., Bartoloni, A., Rappuoli, R. and Tagliabue, A. (1989). Human T cell clones define SI subunit as the most immunogenic moiety of pertussis toxin and determine its epitope map. J.Exp.Med., 5, pp.1519-1532.

22. Mu, H.H. and Sewell, W.A. (1993). Enhancement of interleukin-4 production by pertussis toxin. Infect. Immun., 61, pp.2834-2840.

23. Ausiello, C.M., Lande, R., la Sala, A., Urbani F., Cassone, A. (1998). Cell-mediated immune response of healthy adults to Bordetella pertussis vaccine antigens., J. Infect. Dis., 178, pp.466-470.

24. Zepp,F., Knuf, M., Habermehl, P., Schmitt, H.J., Meyer, C., Clemens, R., Slaoui, M. (1997). Cell- mediated immunity after pertussis vaccination and after natural infection., Dev. Biol. Stand., 89, pp. 307-314.

25. Hirst, T.R. (1995). Biogenesis of cholera toxin and related oligomeric enterotoxins. In Bacterial toxin and virulence factors in disease (ed. J. Moss, B. Iglewski, M. Vaughan, and A.T.Tu), pp.123-184, Marcel Dekker, New York.

26. Gill, D.M. (1982). Bacterial toxins: a table of lethal amounts., Microbiol. Rev., 46, pp.86-94.

27. Shoham, M., Sherf, t., Anglister, J., Levitt, M., Merritt, E.A. and Hol, W.G.J. (1995). Structural diversity in a conserved cholera toxin epitope involved in ganglioside binding., Protein Sei., 4, pp.841-848.

28. De Haan, L., Holtrop, M., Verweij, W.R., Agsteribbe, E. and Wilschut, J. (1996)., Mucosal immunogenicity of the Escherichia coli heat- labile enterotoxin: role of A subunit., Vaccine, 14, pp.260-266.

29. Douce, G., Turcotte, C., Cropley L., (1995)., Mutants of Escherichia coli heat- labile toxin lacking ADF-ribosyltransferase activity act as nontoxic, mucosal adjuvants., Proc. Nat. Acad. Sei. USA, 92, pp. 1644-1648.

30. Bost, K.L., Holton, R.H., Cain, T.K. and Clements, J.D. (1996). In vivo treatment with anti-interleukin-13 antibodies significantly reduces the humoral response against an oral immunogen in mice., Immunology, 87, pp.633-641.

31. Ruedl, c., Rieser, C., Kofler, N., Wick, G. and Wolf, H. (1996)., Humoral and cellular immune responses in the murine respiratory tract following oral immunization with cholera toxin or Escherichia coli heat- labile enterotoxin., Vaccine, 14, pp.792-798.

32. Beagley, K.W., Eldridge, J.H., Lee, F. (1989). Interleukins and IgA synthesis. Human murine interleukin 6 induce high rate IgA secretion in IgA- committed B cells., J. Exp. Med., 169, pp.2133-2148.

33. Williams, N.A., Stasiuk,L.M., Nashar,T.O., Richards,C.M., Lang, A.K., Day,M.J. and Hirst,T.R. (1997).Prevention of autoimmune disease due to lymphocyte modulation by the B-subunit of Escherichia coli heat-labile enterotoxin. Proc.Natl.Acad.Sci.USA., 94, pp.5290-5295.

34. DasGupta,B.R. (1994)., Structures of botulinum neurotoxin, its functional domains, and perspectives on the cristalline type A toxin., In: Therapy with botulinum toxin, (ed. J. Jancovic and M.Hallett), pp. 15-39.

35.Montecucco,C. and Schiavo, G. (1995)., Structure and function of tetanus and botulinum neurotoxins., Curr. Top. Microbiol. Immunol., 195, pp.257-274.

36. Griffin, P.M., Hatheway, C.L., Rosenbaum, R.B., Sokolow, R. (1997). Endogenous antibody production to botulinum toxin in an adult with intestinal colonization botulism and underlying Crohn's disease., J. Infect., Dis., 175:3, pp. 633-637.

37. Kiyatkin, N., Maksymowych, A.B., Simpson, L.L. (1997)., Induction of an immune response by oral administration of recombinant botulinum toxin., Infect. Immun., Nov, 65:11, pp.4586-4591.

38. Profet, M. (1991). The function of allergy: immunological defense against toxins. Q. Rev. Biol., 66 (1), pp.23-62.

39. Chanh, T.C. and Hewetson, J.F. (1995). Protection against ricin intoxication in vivo by anti- idiotype vaccination. Vaccine, 13:5, pp.479-485.

40. Yan, C., Rill, W.L., Malli, R., Hewetson, J., Naseem, H., Tammariello, R. and Kende, M. (1996). Intranasal stimulation of long- lasting immunity against aerosol ricin challenge with ricin toxoid vaccine encapsulated in polymeric microspheres. Vaccine., 14:11, pp.1031-1038.

41. Underwood, S.L., Kemeny, D.M., Lee, T.H., Raeburn, D. and Karlsson, J.-A. (1995). Ricin increases IgE levels and airwey inflammation but not hyperresponsiveness in the rat. Int. Arch. Allergy Immunol., 107, pp. 119-121.

42. Lemley P.V. and Wright D.C. (1992). Mice are actively immunized after passive monoclonal antibody prophylaxis and ricin toxin challenge. Immunology, 76, pp.511 -513.

43. Lemley P.V., Amanatides P. and Wright D.C. (1994). Identification and characterization of monoclonal antibody that neutralizes ricin toxicity in vitro and in vivo. Hybridoma, 13:5, pp.417-421.

44. Diaz-Sanchez, D., Noble A., Staynov, D.Z., Lee, T.H. and Kemeny, D.M. (1993). Elimination of IgE regulatory rat CD8+ T cells in vivo differentially modulates interleukin-4 and interferon-gamma but not inyerleukin-2 production by splenic T cells. Immunology, 78, pp.513-519.

45.Goldmacher, V.S., Anderson, J., Blattler, W.A., Lambert, J.M. and Senter, P.D. (1985). Antibody- complement- mediated cytotoxicity is enhanced by ribosome- inactivating proteins. J. Immunol., 136:6, pp.3648-3651.

46. Peumans, W.J., Verhaert, P., Pfuller, U. and Van Damme, J.M. (1996). Isolation and partial characterization of a small chitin- binding lectin from mistletoe (Viscum Album)., FEBS Letters, 396, pp.261-265.

47. Hamprecht, K., Handgretinger, R., Voetsch, W. and Anderer, F.A. (1987). Mediation of human NK-activity by components in extracts of Viscum Album., Int. J. Immunopharmacology, 9 (2), pp. 199-209.

48. Ribereau-Gayon, G., Jung, M.L., Frantz, M. and Anton, R. (1997). Modulation of cytotoxicity and enhancement of cytokine release induced by Viscum album L. Extracts or mistletoe lectins. Anti-Cancer Drugs, 8, supp.l, pp.3-8.

49. Hajto,T., Hostanska,K., Fischer,J. and Sailer,R. (1997). Immunomodulatory effects of Viscum album agglutinin-1 on natural immunity. Anti-Cancer Drugs., 8, suppl.l, pp.43-46.

50. Stein, G.M. and Berg, P. (1998). Modulation of cellular and humoral immune response during exposure of healthy individuals to an aqueous mistletoe extract. Eur. J. Med. Res., 3, pp.307-314.

51. Stein,G.M., Stettin,A., Schultze,J and Berg,P.A. (1997). Induction of antiOmistletoe lectin antibodies in relation to different mistletoe extracts. Anti-Cancer Drugs., 8, suppl.l, pp.57-59.

52.Stettin,A., Schultze,J.L., Stechemesser,E. and Berg,P.A. (1990). Anti-mistletoe antibodies are produced in patients during therapy with an aqueous mistletoe extract derived from Viscum album L. and neutralize lectin-induced cytotoxicity in vitro. Klin. Wochenschr., 68, pp.896-900.

53.Stein G. (1995). Investigations of the interaction of mistletoe antigens with the immune systems. Analyses on healthy controls and mistletoe treated patients. University of Tubingen: Thesis.

54. Schultze, J.L., Stettin, A. and Berg, P.A. (1991). Demonstration of specifically sensitized lymphocytes in patients treated with an aqueous mistletoe. Klinische Wochenschrift., 69, pp.397-403.

55. Stein, G., Henn W., von Laue H. and Berg. P. (1998). Modulation of the cellular and humoral immune response of tumor patients by mistletoe therapy. Eur. J. Med. Res., 3:4, pp. 194-202.

56. Тоневицкий А.Г., Шамшиев A.T., Прокофьев C.A., Агапов И.И., Темяков Д.Е., Рыжавская А.С. и Пфюллер К. (1996). Устойчивость клеток гибридом, продуцирующих антитела против связывающей субъединицы растительного токсина ML1, к цитотоксическому действию этого токсина. Молекулярная биология, 30, вып. 2, стр.416-425.

57. Темяков Д.Е., Агапов И.И., Мойсенович М.М., Прокофьев С.А., Малюченко Н.В., Егорова С.Г., Пфюллер У., Зинке X. и Тоневицкий А.Г. (1997). Изучение гетерогенности каталитических субъединиц лектинов омелы белой с помощью моноклональных антител. Молекулярная биология, 31, вып.З, стр.536-541.

58. Jurin, М., Zarcovic, N., Borovic, S. and Kissel, D. (1997). Viscum album L. Preparation Isorel modifies the immune response in normal and in tumour-bearing mice. Anti-Cancer Drugs, 8, suppl. 1, pp.27-31.

59. Fisher, S., Scheffler, A. and Kabelitz, D. (1997). Stimulation of the immune system by mistletoe extracts. Anti-cancer Drugs., 8; 1, pp,33-37.

60. Stein, G.M., Stettin, A., Schultze, J. and Berg, P.A. (1997). Mistletoe extract- induced effects on immunocompetent cells: in vitro studies. Anticancer drugs., 8;1, pp39-42.

61. Hajto, T., Holstanska, K. and Gabius, H.-J. (1989). Modulatory potency of the beta-galactoside- specific lectin from mistletoe extract (Iscador) on the host defense system in vivo in rabbits and patients., Cancer research., 49, pp.4803-4807.

62. Hulsen, H., Kron, R. and Mechelke.F. (1989). Influence of Viscum Album preparations on the natural killer cell- mediated cytotoxicity of peripheral blood. Naturwissenschaften., 76, pp.530-531.

63. Metzner, G., Franz, h., Kindt, A., Schumann, I. and Fahlbusch, B. (1987). Effects of lectin I from mistletoe (MLI) and its isolated A and B chains on human mononuclear cells: mitogenic activity and lymphokine release. Pharmazie., 42, pp.337-340.

64. Mueller, E.A., Hamprecht, K. and Anderer, F.A. (1989). Biochemical characterization of a component in extracts of Viscum Album enhancing human NK cytotoxicity. Immunopharmacology., 17, pp.11-18.

65. Joshi,S.S., Komanduri,K.C., Gabius,S. and Gabius,H.J. (1991). Immunotherapeutic effects of purified mistletoe lectin (ML-I) on murine large cell lymphoma. In: Lectins and Cancer. Ed. By Gabius H.J., Gabius S. Berlin: Springer-Verlag, pp.206-216.

66.Beuth,J., Stoffel,B., Ko,H.L., Buss,G., Tunggal,L. and Pulverer,G. (1995). Immunostimulating activity of different doses of mistletoe lectin-1 in patients with breast cancer. Arzneimittelforschnung, 45, pp.505-507.

67.Kuttan,G. and Kuttan,R. (1992). Immunomodulatory activity of a peptide isolated from Viscum album extract (NSC 635 089). Immunol. Invest., 21, pp.285-296.

68. Beuth, J., Ko, H.L., Gabius, H.-J., Burrichter, H., Oette, K. and Pulverer, G. (1992). Behavior of lymphocyte subsets and expression of activation markers in response to immunotherapy with galactoside- specific lectin from mistletoe in breast cancer patients.,

70. pp.658-661.

69.Kohler G. and Milshtein C. (1975). Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nature (London), 256, p.495.

70.Sweeney E.C., Palmer R.A., Pfuller U. (1993). Crystallization of the rybosome inactivating protein MLI from Viscum album (Mistletoe) complexed with b-D-galactose. J.Mol.Biol., 234, pp. 1279-1281.

71.Bussing A., Schietzel M. and Suzart K. (1998). Induction of apoptosis by the lectins from Viscum album L., in: COST 98 ed. by Bardocz S., Pfuller U. and Pusztai A., v.5, pp.87-93.

72. Mockel B., Eck J., Langer M., Zinke H. and Lentzen H. (1998). Induction of apoptosis in human blood cells by natural and recombinant mistletoe lectin., in: COST 98 ed. by Bardocz S., Pfuller U. and Pusztai A., v.5, pp.94-101.

73.Stein G.M., von Laue H.B., Henn W. and Berg P.A. (1998). Human anti- mistletoe lectin antibodies, in: COST 98 ed. by Bardocz S., Pfuller U. and Pusztai A., v.5, pp. 168175.