Морфофункциональные характеристики плацентарных макрофагов при различных исходах беременности тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат биологических наук Селютин, Александр Васильевич

• Селютин, Александр Васильевич
• кандидат биологических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Селютин, Александр Васильевич

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Плацентарные макрофаги.

1.2. Методы исследования иммунных процессов в 20 фетоплацентарном комплексе.

1.2.1. Исследование биологических жидкостей, функционально 21 связанных с фетоплацентарным комплексом.

1.2.1.1. Амниотическая жидкость.

1.2.1.2. Цервиковагинальный секрет.

1.2.1.3. Пуповинная кровь.

1.2.2. Экстракты плацентарной ткани.

1.2.3. Исследование плацентарной ткани in situ и клеточного 28 состава плаценты.

1.2.4. Культивирование эксплантов плацентарной ткани

1.3.2. Культуры клеток плаценты

1.3. Методы получения культур плацентарных макрофагов

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Получение культуры плацентарных макрофагов

2.1.1. Предварительная подготовка образцов ткани.

2.1.2. Получение клеточной суспензии из ткани плаценты при 42 помощи ультразвуковой дезинтеграции.

2.1.3. Получение клеточной суспензии из ткани плаценты 43 посредством трипсинолиза.

2.1.4. Получение клеточной суспензии из ткани плаценты 44 посредством ферментативного гидролиза коллагеназой I типа.

2.1.5. Диссоциация плацентарной ткани с использованием 45 диспазы в сочетании с коллагенолитическим комплексом «Коллагеназа».

2.1.6. Очистка плацентарных макрофагов при помощи 46 центрифугирования в градиенте плотности.

2.1.7. Обогащение диссоциированной культуры плацентарных 47 макрофагов за счет клеточной адгезии.

2.2. Оценка эффективности используемых экспериментальных 49 методов получения диссоциированных культур плацентарных макрофагов

2.3. Методы оценки функциональной активности плацентарных макрофагов.

2.3.1 Гистохимическое определение ферментативной активности неспецифической эстеразы.

2.3.2. Определение фагоцитарной активности плацентарных 53 макрофагов.

2.3.3. Иммуноцитохимические методы.

2.3.4. Определение цитокинов, продуцируемых плацентарными 56 макрофагами.

2.3.5. Статистическая обработка полученных результатов.

3. ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ.

3.1. Получение культуры плацентарных макрофагов.

3.1.1. Опыт выделения плацентарных макрофагов без 59 использования гидролитических ферментов.

3.1.2. Опыт выделения плацентарных макрофагов с 61 использованием протеолитических ферментов

3.1.2.1. Использование трипсина для выделения плацентарных 61 макрофагов.

3.1.2.2. Использование коллагеназы I типа для выделения 63 плацентарных макрофагов.

3.1.2.3. Использование диспазы в сочетании с 65 коллагенолитическим комплексом «Коллагеназа» для выделения плацентарных макрофагов.

3.2. Использование культур плацентарных макрофагов для 71 изучения из особенностей при беременности и родах

З.2.1. Исследование экспрессии поверхностных антигенов 71 культивируемыми плацентарными макрофагами.

3.2.2. Исследование фагоцитоза в культуре плацентарных 765 макрофагов.

3.2.3 Исследование секреции провоспалительных цитокинов 78 плацентарными макрофагами.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Морфофункциональные характеристики плацентарных макрофагов при различных исходах беременности»

Актуальность проблемы.

Репродуктивная система, отвечающая за сохранение человека как биологического вида, является объектом интенсивных исследований, центральное место в которых занимает изучение ее функциональных взаимодействий с другими системами организма.

Несмотря на многочисленные исследования в области иммунологии репродукции, участие элементов иммунной системы в репродуктивных процессах недостаточно изучено. Иммунология репродукции и, в частности, иммунология гестационных процессов, требует совершенствования экспериментальных методов и их соответствия современному уровню развития биологической науки.

Несмотря на несомненную важность изучения системных механизмов регуляции репродуктивных процессов, течение беременности определяется, в первую очередь, состоянием компонентов иммунной системы фетоплацентарного комплекса. Физиологические процессы, протекающие в фетоплацентарном комплексе, охватывают различные типы клеток и обладают сложным многоуровневым характером регулирования межклеточных коммуникаций. Все это затрудняет понимание роли каждого из элементов исследуемого комплекса, механизмов воздействия факторов макро- и микроокружения.

Фетоплацентарный комплекс представляет собой динамично развивающуюся структуру и во многих процессах, сопровождающих ее возникновение, рост, развитие и функционирование принимают участие резидентные макрофаги.

Макрофаги являются высокодифференцированными представителями системы мононуклеарных фагоцитов и осуществляют многочисленные эффекторные и регуляторные функции во всех органах и тканях человеческого организма. Согласно современным представлениям, этот тип клеток играет центральную роль в инициации и развитии иммунных процессов. Способность резидентных макрофагов продуцировать широкий спектр биологически активных молекул позволяет рассматривать их как один из основных факторов формирования гуморального микроокружения в населяемых ими тканях и органах.

Выделение и культивирование плацентарных макрофагов позволяет подробно исследовать эту специализированную популяцию эффекторных и регуляторных клеток, с наибольшей полнотой выявляя их морфофункциональные особенности и потенциальные механизмы участия как в нормально протекающих гестационных процессах, так и в возникновении и развитии патологий.

Цель исследования.

Разработка стандартного метода получения культуры плацентарных макрофагов и изучение их морфофункциональных особенностей в зависимости от срока гестации при нормально и патологически протекающих беременности и родовой деятельности.

Задачи исследования.

1. Разработать стандартную процедуру выделения, очистки и культивирования плацентарных макрофагов человека, позволяющую использовать в качестве источника клеток ткани плаценты различной степени зрелости.

2. Изучить характер экспрессии культивируемыми макрофагами антигенов главного комплекса гистосовместимости II класса, рецепторов к C3bi компоненту комплемента и Fc фрагменту иммуноглобулина, являющихся маркёрами активации, в зависимости от срока гестации при наличии и в отсутствии родовой деятельности.

3. Оценить особенности проявления фагоцитарной активности культивируемых макрофагов, полученных из плацент различного срока гестации, при срочных и преждевременных родах.

4. Определить характер продукции провоспалительных цитокинов интерлейкина (ИЛ)-1а, ИЛ-1(3 и фактора некроза опухолей (ФНО)-а макрофагами, полученными из плацент II и III триместров беременности при развитии родовой деятельности и в её отсутствии.

Научная новизна работы.

Разработан оригинальный метод выделения и очистки макрофагов из плацентарной ткани человека, который может быть использован для получения клеток из плацент различных сроков гестации и их долговременного культивирования.

Определён характер экспрессии мембранных маркёров активации культивируемыми плацентарными макрофагами в зависимости от сроков гестации и развития родовой деятельности

Проведена оценка изменений фагоцитарной активности мононуклеарных фагоцитов плаценты на различных сроках беременности, при наличии или отсутствии родовой деятельности.

Изучены особенности секреции плацентарными макрофагами провоспалительных цитокинов - ИЛ-1а, ИЛ-1(3 и ФНО-а - в культурах клеток, полученных из плацент II и III триместров беременности при родовой деятельности и в её отсутствии.

Впервые проведено сравнительное изучение продукции а- и p-форм ИЛ-1 плацентарными макрофагами человека в зависимости от сроков гестации.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Разработанный в ходе исследования метод выделения, очистки и культивирования плацентарных макрофагов может быть использован для моделирования in vitro участия клеток этого типа в нормальном и патологическом развитии беременности.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Использование сочетания диспазы и препарата «Коллагеназа» для протеолиза механически измельченной плацентарной ткани с последующим центрифугированием в градиенте плотности и очищением культуры клеток на основании её способности к адгезии позволяет получать жизнеспособные резидентные макрофаги плаценты.

2. Экспрессия маркёров активации, фагоцитарная активность и продукция ИЛ-1(3 и ФНО-а культивируемыми макрофагами возрастают по мере созревания плаценты.

3. Макрофаги, полученные из плацент при преждевременных родах, характеризуются повышенной продукцией ИЛ-1а, ИЛ-1р и ФНО-а, по сравнению с клетками, полученными из плацент того же срока гестации при отсутствии родовой деятельности.

4. Макрофаги, полученные из плацент II триместра физиологически протекающей беременности, продуцируют преимущественно а-форму ИЛ-1, в то время, как клетки из плацент поздних сроков гестации (конец III триместра) продуцируют одинаковое количество а- и (3-форм этого цитокина.

Апробация работы.

Материалы диссертации были представлены на V Балтийской конференции по акушерству и гинекологии (Мальмо, Швеция, 1995), Международном симпозиуме «Иммунология репродукции» (Киев, 1996) и конференции с международным участием "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге" (Санкт-Петербург, 2001).

Диссертационная работа была представлена на расширенном заседании лаборатории иммунологии НИИАГ им. Д.О.Отга РАМН 17-го февраля 2003 г.

Диссертационная работа апробирована на совместном заседании научной конференции отдела иммунологии ГУ НИИЭМ РАМН и лаборатории иммунологии НИИАГ им. Д.О.Отга РАМН 21-го марта 2003 г.

Объём и структура диссертации.

Диссертация изложена на 113 страницах и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, их обсуждения и выводов. Работа содержит 12 рисунков и 5 таблиц. Список литературы включает 7 отечественных и 162 зарубежных источников.

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Селютин, Александр Васильевич

ВЫВОДЫ

1. Применение ультразвука для диссоциации плацентарной ткани характеризуется низким выходом клеток и их недостаточной жизнеспособностью. Использование трипсина для протеолитического расщепления ткани приводит к увеличению выхода, но полученные клетки характеризуются низкой выживаемостью (менее 50%). Протеолитическая диссоциация ткани при помощи коллагеназы I типа позволяет обеспечить выживание большинства клеток, однако их выход при этом снижается.

2. Сочетание механического измельчения плацентарной ткани с последующим многостадийным протеолизом диспазой и коллагенолитическим комплексом ферментов позволяет получить более 2,5 х 106 клеток из 1 г ткани, при этом их жизнеспособность составляет более 95%. Использование различий в способности клеток к адгезии дает возможность получать культуры, содержащие более 95% клеток, обладающих фенотипом макрофагов.

3. Полученные культуры плацентарных макрофагов предоставляют возможность изучать морфологические и функциональные особенности этого типа клеток в зависимости от срока гестации и развития родовой деятельности.

4. При нормальном течении беременности доля активированных макрофагов, экспрессирующих антигены HLA II класса и рецепторы к C3bi-компоненту комплемента, а также фагоцитирующих опсонизированные компонентами комплемента и антителами эритроциты барана, увеличивается по мере созревания ткани, служащей источником этих клеток.

5. В культурах макрофагов, полученных из плацент II триместра беременности, уровень секреции плацентарными макрофагами а-формы ИЛ-1 превосходит уровень секреции p-формы этого цитокина, в то время как секреция обеих форм ИЛ-1 в культурах клеток, выделенных из плацент III триместра, происходит на одном и том же уровне.

6. В культурах макрофагов, выделенных из плацент, полученных при преждевременных родах во II триместре беременности, наблюдается многократное усиление секреции ФНО-а, ИЛ-1(3 и ИЛ- 1а, по сравнению с секрецией этих цитокинов клетками, выделенными из плацент того же срока гестации при нормально протекавшей беременности.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Селютин, Александр Васильевич, 2003 год

1. Бодяжина В.И. О структуре и функциях амниона и гладкого хориона // Акуш. и гин. 1982,- №9.- С. 8-12.

2. Иммунологические методы / Под ред. Г.Фримеля, Пер. с нем.- М.: Медицина, 1987.- 472 с.

3. Тотолян А.А., Фрейдлин И.С. Клетки иммунной системы. СПб.: Наука, 2000.- 231с.-Т.1;Т.2.

4. Трунова Л.А. Иммунология репродукции. Новосибирск.: Наука, 1984-157с.

5. Федорова М.В., Быкова Г.Ф. Роль околоплодных вод поддержании гомеостаза плода // Акуш. и гин.- 1981.- №11. С. 9-12.

6. Хаитов P.M., Вербицкий М.Ш. Онтогенез иммунной системы // Итоги науки и техники ВИНИТИ. Сер. Иммунология.- 1986.- Т. 14 165с.

7. Ширшев С.В. Механизмы иммунного контроля репродукции. 1999, Екатерининбург.: НИСО УрО РАН.- 1999.- 435с.

8. Adeleye Т.A., Elder M.G., Sullivan М.Н. Preparation of a population of macrophages from human third trimester deciduas // Hum. Reprod.- 1996-V.11.-P.451-456.

9. Al-Zuhair AG, Ibrahim ME, Mughal S et al. Scanning electron microscopy of maternal blood cells and their surface relationship with the placenta // Acta Obstet. Gynecol. Scand.- 1983.- V. 62.- P.493-498.

10. Ammala M., Nyman Т., Salmi A. et al. The interleukin-1 system in gestational tissues at term: effect of labour // Placenta- 1997.- V. 18. № 8- P. 717-723.

11. Athayde N., Romero R., Maymon E., et al. Interleukin-16 in pregnancy, parturition, rupture of fetal membranes, and microbial invasion of the amniotic cavity// Am. J. Obstet. Gynecol.-2000.-V. 182.-P. 135-141.

12. Austgulen R., Espevik Т., Mecsei R. et al. Expression of receptors for tumor necrosis factor in human placenta at term // Acta Obstet. Gynecol. Scand.- 1992-V. 71. №6.-P. 417-524.

13. Bacrgen R., Benirschke K., Ulich T.R. Cytokine expression in the placenta. The role of interleukin 1 and interleukin 1 receptor antagonist expression in chorioamnionitis and parturition // Arch. Pathol. Lab. Med 1994- V. 118- P. 52-55.

14. Bellingard-Dubouchaud V., Hedon В., Maudelonde T. Cellular specificity of fibroblastic proMMP-3 downregulation by normal or cancer trophoblastic cells // Placenta.- 1998,- V. 19. №4.- P. 279-287.

15. Benyo D.F., Miles T.M., Conrad K.P. Hypoxia stimulates cytokine production by villous explants from the human placenta // J. Clin. Endocrinol. Metab.- 1997.- V. 82. № 5.- 1582-1588.

16. Benyo D.F., Smarason A., Redman C.W. et al. Expression of inflammatory cytokines in placentas from women with preeclampsia // J. Clin. Endocrinol. Metab.- 2001.- V. 86. № 6.- P. 2505-2512.

17. Bergamaschi G., Bergamaschi P., Carlevati S. et al. Transferrin receptor expression in the human placenta // Haematologica. 1990. - V. 75. № 3 - P. 220223.

18. Berkowitz R.S., Hill J. A., Kurtz C.B., Anderson D.L. Effectd of products of activated leukocytes (lymphokines and monokines) on the growth of malignant trophoblast cells in vitro // Am. J. Obstet. Gynecol. 1998.- V.158. P. 199-203.

19. Bevilacqua M.P., Pober J.S., Wheeler M.E. et al. Interleukin-1 activation of vascular endothelium. Effects on procoagulant activity and leukocyte adhesion // Am. J. Pathol.- 1985.- V. 121. № 3.- P. 394-403.

20. Blanco-Quiros A., Gonzalez H., Arranz E., et al. Decreased interleukin-12 levels in umbilicial cord blood in children who developed acute bronchiolitis // Pediatr. Pulmonol.- 1999.-V. 28. № 3.-P. 175- 180.

21. Bloxam D.L., Bax B.E., Bax C.M. Culture of syncytiotrophoblast for the study of human placental transfer. Part II: Production, culture and use of syncytiotrophoblast // Placenta.- 1997,- V. 18. № 2-3.- P. 99-108.

22. Blumenstein M., Keelan J.A., Mitchell M.D. Hypoxia attenuates PGE(2)but increases prostacyclin and thromboxane production in human term villous trophoblast // Placenta.- 2001.- V. 22. № 6.- P. 519-525.

23. Bohn H., Winckler W. Isolation and characterization of membrane-associated placental proteins // Arch. Gynecol. Obstet- 1991- V. 248. № 4 P. 191-198.

24. Bonet В., Hauge-Gillenwater H., Zhu X.D. et al. LDL oxidation and human placental trophoblast and macrophage cytotoxicity // Proc. Soc. Exp. Biol. Med-1998.- V. 217. № 2.- P. 203-211.

25. Bry K., Hallman M., Teramo K. et al. Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor in amniotic fluid and in airway specimens of newborn infants // Pediatr. Res.- 1997.- V. 41.- P. 105-109.

26. Burk M.R., Troeger C., Brinkhaus R. et al. Severely reduced presence of tissue macrophages in the basal plate of pre-eclamptic placentae // Placenta-2001.-V. 22. №4.-P. 309-316.

27. Burton G.J. Scanning electron microscopy of intervillous connections in the mature human placenta // J. Anat.- 1986.- V. 147.- P. 245-254.

28. Calhoun D.A., Chegini N., Polliotti B.M., et al. Granulocyte colony stimulating factor in preterm and term pregnancy, parturition, and intra-amniotic infection // Obstet. Gynecol.- 2001.- V. 97. № 2,- P. 229-234.

29. Chang M.D., Pollard J.W., Khalili H. et al. Mouse placental macrophages have a decreased ability to present antigen // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1993 -V. 90. №2.-P. 462-466.

30. Chen H.L., Yang Y.P., Hu X.L. et al. Tumor necrosis factor alpha mRNA and protein are present in human placental and uterine cells at early and late stages of gestation // Am. J. Pathol.- 1991,- V. 139. № 2.- P. 327-335.

31. Conrad K.P., Benyo D.F. Placental cytokines and the pathogenesis of preeclampsia.//Am J Reprod Immunol 1997.- V. 37. № 3.- P. 240-249.

32. Das C, Kumar VS, Gupta S et al. Network of cytokines, integrins and hormones in human trophoblast cells.//J Reprod Immunol.- 2002.- V. 53. №1-2.-P. 257-268.

33. De Jongh R.F., Puylaert M., Bosmans E. et al. The fetomaternal dependency of cord blood interleukin-6 // Am. J. Perinatol.- 1999.- V. 16. № 3.- P. 121-128.

34. Dealtry G.B., Clark D.E., Sharkey A. et al. Expression and localization of The Th2-type cytokine interleukin-13 and its receptor in the placenta during human pregnancy //Am. J. Reprod. Immunol 1998.- V. 40.- P. 283-290.

35. Degenne D., Сапера S., Horowitz R. et al. Effect of human syncytiotrophoblast extract on in vitro proliferative responses // Am. J. Reprod. Immunol. Microbiol.- 1985.- V. 8. № 1.- P. 20-26.

36. Diczfaluzy E. Endocrine function of the human fetus and placenta // Am. J. Obstet. Gynecol.- 1974.- V. 119. № 3.- P. 419-433.

37. Dodeur M., Malassine A., Bellet D. et al. Characterization and differentiation of human first trimester placenta trophoblastic cells in culture // Reprod. Nutr. Dev.- 1990.- V. 30. № 2.- P. 183-192.

38. Dudley D.J., Collmer D., Mitchell M.D. et al. Inflammatory cytokine mRNA in human gestational tissues: implications for term and preterm labor // J. Soc. Gynecol. Investig.- 1996.- V. 3. № 6.- P. 328 -335.

39. Edlovv J.В., Ota Т., Relacion J.R. et al. Enzymes of normal and malignant trophoblast: phosphoglucose isomerase, phosphoglucomutase, hexokinase, lactate dehydrogenase, and alkaline phosphatase // Am. J. Obstet. Gynecol 1975 - V. 121. №5.-P. 674-678.

40. El Maradny E., Kanayama N., Maehara K. et al. Expression of interleukin-8 receptors in the gestational tissues before and after initiation of labor: immunohistochemical study // Acta. Obstet. Gynecol. Scand- 1996 V. 75. № 9.-P. 790-796.

41. El-Bastawissi A.J., Williams M.A., Riley D.E., et al. Amniotic fluid interleukin-6 and preterm delivery: a review // Obstet. Gynecol 2000.- V. 95.-P.1056-1064.

42. Elias J.A., Gustilo K., Baeder W. et al. Synergistic stimulation of fibroblast prostaglandin production by recombinant interleukin 1 and tumor necrosis factor // J. Immunol.- 1997.- V. 138.- P.3812-3816.

43. Elliott C.L., Kelly R.W., Critchley H.O. et al. Regulation of interleukin 8 production in the term human placenta during labor and by antigestagens // Am. J. Obstet. Gynecol.- 1998.-V. 179. № l.-P. 215-220.

44. Fox H. The incidence and significance of Hofbauer cells in the mature placenta // J. Pathol. Bacteriol.- 1967.- V. 93.- P. 710-716.

45. Furth van R., Raeburn J.A., Zwet van T.L. Characteristics of human mononuclear phagocytes // Blood.- 1979.- V. 54. № 2.- P. 485-500.

46. Gallery E.D., Campbell S., Ilkovski B. et al. A novel in vitro co-culture system for the study of maternal decidual endothelial cell-trophoblast interactions in human pregnancy // Br. J. Obstet. Gynecol.- 2001.- V. 108. № 6.- P. 651-653.

47. Gardella C., Hitti J., Martin T.R., et al. Amniotic fluid lipopolisaccharide-binding protein and soluble CD 14 as mediators of the inflammatory response in preterm labor // Am. J. Obstet. Gynecol.- 2000.- V. 186. № 6,- P. 1241-1248.

48. Goldenberg R.L., Andrews W.W., Mercer B.M., et al. The preterm prediction study: granulocyte colony-stimulating factor and spontaneous preterm birth // Am. J. Obstet. Gynecol.- 2000.- V. 182. № 3.- P. 625-630.

49. Goldstein J., Braverman M., Salafia C. et al. The phenotype of human placental macrophages and its variation with gestational age // Am. J. Pathol.-1988.- V. 133. № 3.- P. 648-659.

50. Gotlieb W.H. Immunologic de la prossesse Fetal Tolerance // Rev. Med. Bruxelles.- 1992.- V. 13.- P. 97-101.

51. Greco C.R., Koncurat M.A. Different responses of lymphocyte to human placenta conditioned medium in vitro // J. Investig. Allergol. Clin. Immunol. -1998.-V. 8. № l.-P. 42-45.

52. Gruenberg B.H., Schoenemeyer A., Weiss B.et al. A novel, soluble homologue of the human IL-10 receptor with preferential expression in placenta // Genes. Immun.- 2001.- V. 2. № 6.- P. 329-334.

53. Gunn L., Hardiman P., Tharmaratnam S. et al. Measurement of interleukin-1 alpha and interleukin-6 in pregnancy-associated tissues // Reprod. Fertil. Dev.-1996.- V. 8. № 7.- P. 1069 -1073.

54. Habashi S., Burton G.J., Steven D.H. Morphological study of the fetal vasculature of the human term placenta: scanning electron microscopy of corrosion casts // Placenta 1983. - V. 4. № 1.- P. 41-56.

55. Hanna N., Hanna I., Hleb M. et al. Gestational age-dependent expression of IL-10 and its receptor in human placental tissues and isolated cytotrophoblasts // J. Immunol.-2000.-V. 164. № 11.-P. 5721-5728.

56. Harty J.R., Kauma S.W. Interleukin-1 beta stimulates colony-stimulating factor-1 production in placental villous core mesenchymal cells // J. Clin. Endocrinol. Metab.- 1992.- V. 75. № 3 p. 947-950.

57. Haynes M.K., Flanagan M.T., Perussia B. et al. Isolation of decidual lymphocytes from chorionic villus samples: phenotypic analisis and growth in vitro // Am. J. Reprod. Immunol.- 1995.- V. 33.- P. 809-814.

58. Haynes M.K., Jackson L.G., Tuan R.S. et al. Cytokine production in first trimester chorionic villi: detection of mRNAs and protein products in situ // Cell Immunol.- 1993.-V. 151. №2.- P. 300-308.

59. Heblish G., Grauaug A.A., Neumaier-Wagner P.M. et al. The relationship between cervical dilatation, interleukin-6 and interleukin-8 during term labor // Acta Obstet. Gynecol. Scand.- 2001.- V. 80. № 9.- P. 840-848.

60. Heikkinen J., Mottonen M., Pulkki K., et al. Cytokine levels in midtrimester amniotic fluid in normal pregnancy and in the prediction of pre-eclampsia // Scand. J. Immunol.-2001.- V. 53. № 3. P. 310-314.

61. Henriques C.U., Rice G.E., Wong M.H. et al. Immunolocalisation of interleukin-4 and interleukin-4 receptor in placenta and fetal membranes in association with pre-term labour and pre-eclampsia // Gynecol. Obstet. Invest-1998.-V. 46. №3.-P. 172-177.

62. Hoffbauer J. Grundzuge einer Biologie der menschlichen Placenta mit besonderer Beruckssichtigund der Fragen der fatalen Ernahrung. Wien,- 1902.-104s.

63. Hoffbauer J. Uber das Konstante Vorkommen bisher ubekannter zelliger Formelemente in der Chorionzotte der Menschichen Placenta und uber Embryothrophe \ll Wien. Klin. Wochenschr.- 1903.- Bd. 16.- S. 871-873.

64. Hohn H.P., Linke M., Denker H.W. Adhesion of trophoblast to uterine epithelium as related to the state of trophoblast differentiation: in vitro studies using cell lines // Mol. Reprod. Dev.- 2000.- V. 57. № 2.- P. 135-145.

65. Hsu C.D., Meadolough E., Aversa K., et al. Elevated amniotic fluid levels of leukemia inhibitory factor, interleukin-6, and interleukin-8 in intraamnionic infection. // Am. J. Obstet. Gynecol. 1998.- V. 179. № 5.- P. 1267-1270.

66. Hunt J.S. Cytokine networks in the uteroplacental unit: Macrophages as pivotal regulatory cells // J. Reprod. Immunol.- 1989.- V. 16.- P. 1-17.

67. Hunt J.S., Manning L.S., Wood G.W. Macrophages in murine uterus are immunosupressive // Cell Immunol.- 1984.- V. 85.- P. 499-510.

68. Jinga V.V., Gafencu A., Antohe F. et al. Establishment of a pure vascular endothelial cell line from human placenta // Placenta.- 2000.- V. 21. № 4 P. 325336.

69. Joseph P., Murthy K.R., Nelson J.L.et al.Peroxidase: a novel pathway for chemical oxidation in human term placenta // Placenta 1992.- V. 13. № 6.- P. 545-554.

70. Kammerer U., Schoppet M., McLellan A.D. et al. Human decidua contains potent immunostimulatory CD83(+) dendritic cells // Am. J. Pathol 2000.- V. 157. № l.-P. 159-169.

71. Kastschenko N. Das menschliche Chorionepithel und dessen Rolle bei der Histogenese der Placenta // Arch. Anat. Physiol.: Anat. Abteilung, I-II Heffe.-1885.- S. 451-480.

72. Kauma S.W., Wang Y., Walsh S.W. Preeclampsia is associated with decreased placental interleukin-6 production // J. Soc. Gynecol. Investig.- 1995 -V. 2. №4.-P. 614-617.

73. Kawano Y., Narahara H., Johnston J.M. Inhibitory effect of interleukin-8 on the secretion of platelet-activating factor acetylhydrolase by human decidual macrophages // J. Soc. Gynecol. Investig.- 1999.- V. 6. № 6 P. 328-332.

74. Keelan J.A, Sato Т., Mitchell M.D. Interleukin (IL)-6 and IL-8 production by human amnion: regulation by cytokines, growth factors, glucocorticoids, phorbol esters, and bacterial lipopolysaccharide // Biol. Reprod.- 1997.- V. 57.- P. 1438.1444.

75. Kellan J.A., Marvin K.W, Sato T.A. et al. Cytokine abundance in placental tissues: evedence of inflammatory activation in gestational membranes with term and preterm parturition // Am. J. Obstet. Gynecol 1999. - V. 181. № 6.- P. 15301536.

76. Knofler M., Stenzel M., Husslein P. Shedding of tumour necrosis factor receptors from purified villous term trophoblasts and cytotrophoblastic BeWo cells //Hum. Reprod.- 1998.-V. 13. № 8.-P. 2308-2316.

77. Kol S., Kehat I., Adashi E.Y. Ovarian interleukin-1-induced gene expression: privileged genes threshold theory //Med. Hypotheses. 2002. - V. 58. № l.-P. 6-8.

78. Kolben M., Lopens A., Blaser J. et al. Proteases and their inhibitors are indicative in gestational disease // Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol.- 1996-V. 68. № 1-2.-P. 59-65.

79. Kupferminc M.J., Peaceman A.M., Dollberg S. et al. Tumor necrosis factor-alpha is decreased in the umbilical cord plasma of patients with severe preeclampsia // Am. J. Perinatol 1999.- V. 16. № 5.- P. 203-208.

80. Laham N, Bennecke S, Bendtzen K. et al. tumor necrosis factor alpha during human pregnancy and labor: maternal plasma and amniotic fluid concentration and release from intrauterine tissues // Eur. J. Endocrinol 1994.- V. 131.- P. 607-614.

81. Laham N, Rice GE, Bishop GJ et al. Interleukin-8 concentrations in amniotic fluid and peripheral venous plasma during human pregnancy and parturition // Acta Endocrinol.- 1993.- V. 129.- P. 220-224.

82. Laham N., Brennecke S.P., Bendtzen K. et al. Labour-associated increase in interleukin-1 alpha release in vitro by human gestational tissues // J. Endocrinol.-1996.- V. 150. № 3.- P. 515-522.

83. Laham N., Brennecke S.P., Rice G.E. Interleukin-8 release from human gestational tissue explants: the effects of lipopolysaccharide and cytokines // Biol. Reprod.- 1997.- V. 57. № 3.- P. 616-620.

84. Laherty R.F., Budd J.M., Srebnik HH. Inhibition of prolactin secretion of rat placental extract // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1983. - V. 172. № 1. - P. 29 - 33.

85. Lee G.K., Park H.J., Macleod M. et al. Tryptophan deprivation sensitizes activated T cells to apoptosis prior to cell division // Immunology.- 2002.- V. 107. № 4.- P. 452-460.

86. Lenschow D.J., Walunas T.L., Bluestone J.A. CD28/B7 system of T cell costimulation // Annu. Rev. Immunol.- 1996 V. 14.- P. 233-258.

87. Lessin D.L., Hunt J.S., King C.R. et al. Antigen expression by cells near maternal-fetal interface // Am. J. Reprod. Immunol. Microbiol.- 1988.- V. 16.- P. 1-7.

88. Liu K.X., Kato Y., Kaku Т., et al. Human placental extract stimulates liver regeneration in rats // Biol. Pharm. Bull.- 1998.- V. 21. № 1- P. 44-49.

89. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L. et al. Protein measurement with the Folin phenol reagent // J. Biol. Chem. 1951.- V. 193.- P. 265-275.

90. Main E.K., Strizki J, Schochet P. Placental production of immunoregulatory factors: Trophoblast is a sourse of interleukin-1 / Eds. Miller R.K., Thiede H.A. // Trophoblast research.- N.Y.,- V. 2.- P.149-160.

91. Malek A., Sager R., Schneider H. Effect of hypoxia, oxidative stress and lipopolysaccharides on the release of prostaglandins and cytokines from human term placental explants // Placenta 2001 - V. 22. Suppl. A - S. 45-50.

92. Maruyama Т., Makino Т., Sugi T. et al. Flow-cytometric analysis of immune cell populations in human decidua from various types of first-trimester pregnancy // Hum. Immunol.- 1992.- V. 34. № 3.- P. 212-218.

93. Maymon E., Ghezzi F., Edwin S.S., et al. The tumor necrosis factor alfa and its soluble receptor profile in term and preterm parturition // Am. J. Obstet. Gynecol.- 1999.- V. 181.- P. 1142-1148.

94. Melendez JA, Vinci JM, Jeffrey JJ et al. Localization and regulation of IL-1 alpha in rat myometrium during late pregnancy and the postpartum period // Am. J. Physiol. Regul. Integr. Сотр. Physiol.- 2001.- V. 280. № 3.- R879-R888.

95. Montes M.J., Tortosa C.G., Borja C. et al. Constitutive secretion of interleukin-6 by human decidual stromal cells in culture. Regulatory effect of progesterone // Am. J. Reprod. Immunol.- 1995.- V. 34. № 3.- P. 188-194.

96. Montrucchio G, Lupia E, Battaglia E, et al. Tumor necrosis factor alpha-induced angiogenesis depends on in situ platelet-activating factor biosynthesis // J. Exp. Med.- 1994.- V. 180. № 1P. 377-382.

97. Morrish D.W., Shaw A.R., Seehafer J. et al. Preparation of fibroblast-free cytotrophoblast cultures utilizing differential expression of the CD9 antigen // In Vitro Cell. Dev. Biol.- 1991.- V. 27A. № 4,- P. 303-306.

98. Naccasha N., Hinson R.,Montag A., et al. Association between funisitis and elevated interleukin-6 in cord blood // Obstet. Gynecol.- 2001. V. 97. № 2.- P. 220-224.

99. Nathan C.F. Secretory products of macrophages // J. Clin. Invest.- 1987.- V. 19.- P. 319- 326.

100. Norwitz E.R., Starkey P.M., Lopez Bernal A. et al. Identification by flow cytometry of the prostaglandin-producing cell populations of term human deciduas //J. Endocrinol.- 1991.-V. 131. №2.-P. 327-334.

101. Norwitz E.R., Starkey P.M., Lopez Bernal A. Prostaglandin D2 production by term human decidua: cellular origins defined using flow cytometry // Obstet. Gynecol.- 1992.-V. 80. №3.Pt. 1.- P. 440-445.

102. Odegard R.A., Vatten L.J., Nilsen S.T., et al. Umbilical cord plasma interleukin-6 and fetal growth restriction in preeclampsia: a prospective study in Norway // Obstet. Gynecol.- 2001.- V. 98. № 2.- P. 289-294.

103. Okada S, Okada H, Sanezumi M et al. Expression of interleukin-15 in human endometrium and decidua // Mol. Hum. Reprod,- 2000.- V. 6.- P. 75-80.

104. Oliveira L.H., Leandro S.V., Fonseca M.E. et al. A new technique for the isolation of placental phagocyte cells and a description of their macrophage properties after in vitro culture // Braz. J. Med. Biol. Res 1986 - V. 19. № 2 - P. 249-55.

105. Pacora P., Romero R., Maymon E., et al. Participation of of the novel cytokine interleukin-18 in the host response to intra-amniotic infection // Am. J. Obstet. Gynecol.-2000.- V. 183. №5.- P. 1138-1143.

106. Philippeaux MM, Piguet PF.Expression of tumor necrosis factor-alpha and its mRNA in the endometrial mucosa during the menstrual cycle // Am. J. Pathol.-1993.- V. 143. № 2.- P. 480-486.

107. Presta M., Mignatti P., Mullins D.E. et al. Human placental tissue stimulates bovine capillary endothelial cell growth, migration and protease production // Biosci. Rep.- 1985.- V. 5. № 9.- P. 783-790.

108. Raghupathy R. Pregnancy: success and failure within the Thl/Th2/Th3 paradigm // Semin. Immunol.- 2001.- V. 13. № 4.- P. 219-227.

109. Raghupathy R., Khan S.F., Syamasundar P.V. et al. A placenta-derived suppressor factor with a T-cell bias // Am. J. Reprod. Immunol 1999.- V. 42. № 4,-P. 205-218.

110. Rinehart B.K., Terrone D.A., Lagoo-Deenadayalan S. et al. Expression of the placental cytokines tumor necrosis factor alpha, interleukin lbeta, and interleukin 10 is increased in preeclampsia // Am. J. Obstet. Gynecol 1999 - V. 181. №4.-P. 915-920.

111. Robbins P.A., Maino V.C., Warner N.L. et al. Activated T-cell and monocytes have characteristic pattern of class II antigen expression // J. Immunol.-1988.- V. 141.-P. 1281-1287.

112. Roberts RM, Ealy AD, Alexenko AP et al. Trophoblast interferons // Placenta.- 1999.- V. 20. № 4.- P. 259-264.

113. Romero R., Mazor M., Sepulveda V.,et al.Tumor necrosis factor in preterm and term labor//Am. J. Obstet. Gynecol.- 1992.- V. 166.- P. 1576-1587.

114. Romero R., Mazor M., Wu Y., et al. Bacterial endotoxin and tumor necrosis factor stimulate prostaglandin production by human decidua // Prostaglandins. Leukot. Essent. Fatty. Acids.- 1989.-V. 37. № 3.-P. 183-186.

115. Romero R.L., Mazor M., Brandt F., et al. Interleukin-lalfa and interleukin-lbeta in preterm and term human parturition // Am. J. Reprod. Immunol.- 1992-V. 27.- P. 117-123.

116. Roussev R.G., Higgins N.G., Mclntyre J.A. Phenotypic characterization of normal human placental mononuclear cells // J. Reprod. Immunol.- 1993 V. 25. № l.-P. 15-29.

117. Sacks G.P., Clover L.M., Bainbridge D.R. et al. Flow cytometric measurement of intracellular Thl and Th2 cytokine production by human villous and extravillous cytotrophoblast // Placenta.- 2001 V. 22. № 6.- P. 550-559.

118. Saito S, Kasahara T, Kato Y et al. Evaluation of amniotic fluid intrleukin 6 (IL-6), IL-8 and granulocyte colonystimulating factor (G-CSF) in term and preterm parturition // Cytokine 1993.- V. 5.- P. 81-88.

119. Saito S, Nishikawa K, Morii T et al Cytokine production by CD 16-CD56bright natural killer cells in the human early pregnancy decidua // Int. Immunol.- 1993.- V. 5. № 5.- P. 559-563.

120. Saji F., Samejima Y., Kamiura S., et al. Cytokine production in chorioamnionites // J. Reprod. Immunol 2000.- V. 47. № 2.- P. 185-196.

121. Salem H.H., Maruyama I., Ishii H. et al. Isolation and characterization of thrombomodulin from human placenta // J. Biol. Chem 1984. - V. 259 № 19 - P. 12246-12251.

122. Salemon O.J., Vaquer S., Salemon I. et al. Pregnancy is associated with a reduction in the pattern of the cytotoxic activity displayed by lymphokine-activayed kiler cells // Am. J. Reprod. Immunol.- 1991.- V. 26.- P. 150-155.

123. Schroit A.J., Kedar E., Gallili R. A rapid and sensitive technique for the detection of Fc-receptors on macrophages // J. Immunol. Meth.- 1976.- V. 12.- P. 163-170.

124. Schutz M., Friedl P. Isolation and cultivation of endothelial cells derived from human placenta // Eur. J. Cell. Biol.- 1996,- V. 71. № 4.- P. 395-401.

125. Shaarawy M., Nagui A.R. Enhanced expression of cytokines may play a fundamental role in the mechanisms of immunologically mediated recurrent spontaneous abortion // Acta Obstet. Gynecol. Scand 1997.- V. 76. № 3.- P. 205-211.

126. Shimoya K., Matsuzaki N., Sawai K. et al. Regulation of placental monocyte chemotactic and activating factor during pregnancy and chorioamnioniyis // Mol. Hum. Reprod.- 1998.- V. 4.- P. 393-400.

127. Shimoya К., Matsuzaki N., Taniguchi T. et al. Human placenta constitutively produces interleukin-8 during pregnancy and enhances its production in intrauterine infection // Biol. Reprod.- 1992.- V. 47. № 2 P. 220226.

128. Shiokawa H., Fujino Т., Yashiki S. et al. Characterization of macrophages isolated from the maternal surface of human term placenta by a new method of urokinase treatment // J. Obstet. Gynaecol. Res.- 1997.- V. 23. № 3.- P. 239-246.

129. Siman C.M., Sibley C.P., Jones C.J. et al. The functional regeneration of syncytiotrophoblast in cultured explants of term placenta // Am. J. Physiol. Regul. Integr. Сотр. Physiol.- 2001.-V. 280. № 4.-R1116-R1122.

130. Simon C., Moreno C., Remohi J. et al. Cytokines and embryo implantation // J. Reprod. Immunol.- 1998.-V. 39. № 1-2.-P. 117-131.

131. Sooranna S.R., Oteng-Ntim E., Meah R. et al. Characterization of human placental explants: morphological, biochemical and physiological studies using first and third trimester placenta // Hum. Reprod 1999.- V. 14. № 2 - P. 536541.

132. Steiman R., Swanson J. The endocytic activity of dendritic cells // J. Exp. Med.- 1995.- V. 182.- P. 283-288.

133. Steinborn A., Niederhut A., Solbach C. et al. Cytokine release from placental endothelial cells, a process associated with preterm labour in the absence of intrauterine infection // Cytokine 1999.- V. 11. № 1.- P. 66- 73.

134. Stenson W.F., Parker C.W. Prostaglandins and the immune responcse / Ed. Lee J.B. // Prostaglandins, N.Y.,- 1982.- P.39.

135. Sutton L.N., Mason D.Y., Redman C.W. Isolation and characterization of human fetal macrophages from placenta // Clin. Exp. Immunol.- 1989.- V. 78. № 3.- P. 437-443.

136. Szony В.J., Bata-Csorgo Z., Bartfai G. et al. Interleukin-10 receptors are expressed by basement membrane anchored, alpha(6) integrin(+) cytotrophoblast cells in early human placenta // Mol. Hum. Reprod 1999 - V. 5. № 11- P. 1059- 1065.

137. Tabibzadeh S., Satyaswaroop P.G., von Wolff M. et al. Regulation of TNF-alpha mRNA expression in endometrial cells by TNF-alpha and by oestrogen withdrawal//Mol. Hum. Reprod.- 1999.-V. 5. № 12.-P. 1141-1149.

138. Tachi C., Tachi S., Knyszunski A. et al. Possible involvment of macrophages in embryo-maternal relationships during ovum implantation in the rat//J. Exp. Zool.- 1981.- V. 217.- P. 81-92.

139. Tanaka Y., Narahara H., Takai N., et al. Interleukin-1 beta and interleukin-8 in cervicovaginal fluid durinh pregnancy // Am. J. Obstet. Gynecol 1998.- V. 179. №3. Pt. 1.- P. 644-649.

140. Tashjian A.H., Voelkel E.F. , Lazzaro M. et al alfa and beta human Transforming growth factoe stimulate prostaglandin production and bone resoption in cultured mouse calvaria // Рос. Natl. Acad. Sci. USA.- 1985.- V. 82.-P. 4535-4538.

141. Tawfik O.W., Hunt J.S., Wood G.W. Implication of prostaglandin E2 in soluble factor-mediated immune supression by murine decidual cells // Am. J. Reprod. Immunol. Microbiol.- 1986.- V. 12.- P. 111-117.

142. Tawfik O.W., Hunt J.S., Wood G.W. Partial characterization of uterine cells responsible for supression of murine maternal anti-foetal immune responses // J. Reprod. Immunol.- 1986.- V. 9,- P. 213-224.

143. Todt J.C., Yang Y., Lei J. et al. Effects of tumor necrosis factor-alpha on human trophoblast cell adhesion and motility // Am. J. Reprod. Immunol 1996-V. 36. №2.-P. 65-71.

144. Uren S., Boyle W. Isolation of macrophages from human placenta // J. Immunol. Methods.- 1985.-V. 78. № l.-P. 25-34.

145. Viola J.P., Rao A. Molecular regulation of cytokine gene expression during the immune response // J. Clin. Immunol.- 1999.-V. 19. № 2.- P. 98-108.

146. Wetzka В., Clark D.E., Charnock-Jones D.S. et al. Isolation of macrophages (Hofbauer cells) from human term placenta and their prostaglandin E2 and thromboxane production // Hum. Reprod.- 1997,- V. 12. № 4.- P. 847-852.

147. Williams M.A., Farrand A., Mittendorf R., et al. Maternal second trimester serun tumor necrosis factor-alfa-soluble receptor p55 (sTNFp55) and subsequent risk of preeclampsia // Am. J. Epidemiol.- 1999. V. 149. № 4.- P. 323-329.

148. Wilson C.B., Haas J.E., Weaver W.M. Isolation, purification and characteristics of mononuclear phagocytes from human placentas // J. Immunol. Methods.- 1983.- V. 56. № 3.- P. 305-317.

149. Winkler M, Rath W. Changes in the cervical extracellular matrix during pregnancy and parturition // J. Perinat. Med 1999.- V. 27. № 1.- P. 45-60.

150. Wood G., Reynard J., Krishnan E. et al. Immunobio;ogy of human placenta. II. Localization of macrophages in vivo bound IgG and C3 // Cell. Immunol.-1978.-V.3.- P. 205-216.

151. Wood M.L. Mononuclear phagocytes in the human placenta // Placenta.-1980.- V. 1.- P. 113-123.

152. Yam L.T., Li C.Y., Grosby W.H. Cytochemical identification of monocytes and granulocytes // Av. J. Clin. Pathol.- 1971.- V. 55.- P. 283.

153. Yong P.Y., Harlow C., Thong K.J. et al. Regulation of llbeta-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 gene expression in human ovarian surface epithelial cells by interleukin-1 // Hum. Reprod.- 2002.- V. 17. № 9- P. 23002306.