Морфофункциональная характеристика клеток врожденного иммунитета при их взаимодействии с хантавирусом тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.03.04, кандидат наук Ляпун, Ирина Николаевна

• Ляпун, Ирина Николаевна
• кандидат наук
• 2015

Оглавление диссертации кандидат наук Ляпун, Ирина Николаевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Взаимодействие вирусов с клетками врожденного иммунитета

1.2. Клеточные механизмы иммунитета в патогенезе геморрагической 33 лихорадки с почечным синдромом

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

2.1. Инфекционные агенты и экспериментальные животные

2.2. Методы выделения клеток врожденного иммунитета и условия их 38 заражения

2.3. Иммуногистохимические методы

2.4. Методы оценки морфофункциональной активности фагоцитирующих 45 клеток

2.5. Методы статистической обработки 48 ГЛАВА 3. ХАРАКТЕРИСТИКА НЕЙТРОФИЛОВ, ЗАРАЖЕННЫХ 50 ХАНТАВИРУСОМ

ГЛАВА 4. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ СУБПОПУЛЯЦИЙ КЛЕТОК 60 МОНОЦИТ АРНОГО РЯДА С ХАНТАВИРУСОМ

4.1. Морфология субпопуляций моноцитов/макрофагов при их 60 взаимодействии с хантавирусом

4.2. Активность ферментных систем субпопуляций 69 моноцитов/макрофагов, зараженных хантавирусом

ГЛАВА 5. ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ МАКРОФАГОВ, 77 ЗАРАЖЕННЫХ ХАНТАВИРУСОМ, ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ НА НИХ 1ЫК-КЛЕТОК

ГЛАВА 6. ХАРАКТЕРИСТИКА ДЕНДРИТНЫХ КЛЕТОК, 83 ЗАРАЖЕННЫХ ХАНТАВИРУСОМ

6.1. Морфологическая характеристика дендритных клеток, зараженных 86 хантавирусом

6.2. Функциональная активность дендритных клеток при их 89 взаимодействии с хантавирусом

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Морфофункциональная характеристика клеток врожденного иммунитета при их взаимодействии с хантавирусом»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы. Одной из центральных задач вирусной цитопатологии является изучение закономерностей патогенного и пролиферативного действия вирусов на клетки, что в последующем может оказывать влияние на развитие острой, хронической или латентной форм инфекции в организме. Использование современных методов микроскопии позволяет проводить оценку морфологических изменений в инфицированных вирусом клетках с возможностью анализа процесса развития специфических и неспецифических защитных клеточных реакций в ответ на внедрение патогена. Подобные цитологические изменения тесно связаны с метаболизмом клеток и высокочувствительные методы определения ферментативной активности зараженных клеток являются важным способом индикации вирусной репродукции, дифференцировки цитопатогенного действия, а также характера и формы протекающего в клетках инфекционного процесса.

Основным компонентом первого барьера защиты организма при вирусных инфекциях являются клетки врожденного иммунитета. К ним относятся фагоциты (нейтрофилы, базофилы, эозинофилы, моноциты, макрофаги, дендритные клетки), субпопуляция лимфоцитов - Т-клетки, натуральные киллеры (ЫК-клетки), лимфокин-активированные киллерные клетки (ЛАК-клетки) и так называемые Рк-клетки - субпопуляция МК-клеток с фенотипом С056+/СЭ16- (Литвицкий П.Ф., Синельникова Т.Г. 2009). При изучении состояния клеток врожденного иммунитета при вирусных инфекциях было показано, что вирус иммунодефицита человека, цитомегаловирус, вирус гриппа и Эпштейна-Барр оказывают воздействие на нейтрофилы и индуцируют их апоптоз (Е1Ыт С. е1 а1., 2009). В частности, под воздействием вируса иммунодефицита человека в нейтрофилах наблюдается нарастание количества свободных кислородных радикалов и цитокинов, а также повышается активность бактерицидных протеиназ, что в последующем оказывает влияние на регуляцию иммунного ответа организма (8а1теп Б. е1 а1., 2007). Действие дефенсинов, низкомолекулярных лизосомальных

катионных белков нейтрофилов, выражается в повышенной способности клеток поглощать вирус гриппа и ингибирования процесса его репликации и синтеза белков (Tecle Т. et al., 2007). Однако остаются неясными точные механизмы, посредством которых нейтрофилы становятся посредниками защитных реакций при вирусных патологиях.

Бактерицидные свойства клеток моноцитарного происхождения относятся к важным элементам устойчивости организма при инфекционных заболеваниях (Marcotic A. et al., 2007; Daigneault М. et al., 2010). С одной стороны, зараженные вирусом моноциты крови, при их преобразовании в резидентные макрофаги, могут служить источником этого возбудителя в различных органах организма. С другой стороны, для инактивируемых вирусов макрофаги являются биологическим барьером, препятствующим распространению возбудителя из первичного очага инфекции в высокочувствительные клетки различных органов. Рядом исследователей доказано участие клеток моноцитарного происхождения в развитии защитного ответа организма при вирусном инфицировании (Marcotic А. et al., 2007; Плехова Н.Г., 2010). Но при этом известны единичные работы, где приводятся сравнительные данные по исследованию взаимодействия вирусов с различными популяциями моноцитов/макрофагов. Так, определено, что моноциты являются основными хозяевами для вируса геморрагической болезни кроликов (Ramiro-Ibanez F. et al., 1999), а вирус Денге (сем. Флавивирусы) способен заражать моноциты/макрофаги вне зависимости от стадии их дифференцировки (Chen Y.C. et al., 2002). Но при этом известны единичные работы, где в зависимости от степени созревания клеток моноцитарного ряда приводятся сравнительные данные по изучению их реакции в ответ на заражение вирусами (Ramiro-Ibanez F. et al., 1999; Chen Y.C. et al., 2002). Актуальность указанных работ усиливается существующим мнением исследователей о роли указанных клеток в персистенции вирусов и их участии в развертывании защитной реакции организма, особенно в первые часы и сутки после заражения (Helmy K.Y. et al., 2006; Chen D. et al., 2008; Vo T.S, 2010). Наряду с этим необходимо учитывать, что конкретные механизмы активации этих клеток при различных вирусных

инфекциях не идентичны и на данный момент находятся в стадии интенсивного изучения.

Дендритные клетки в процессе миграции преобразуются в профессиональные антигенпрезентирующие клетки иммунной системы с характерным рецепторным фенотипом (Steinman R.M. et al., 2006; O'Brain M. et al., 2013). Показано, что при острых вирусных инфекциях эти клетки продуцируют цитокины, которые являются важнейшим компонентом, индуцирующим механизмы противовирусной защиты организма, приводящей к элиминации патогенов (Hubo М. et al., 2013; Макаренкова И.Д., 2013). Именно продукция IFN-y дендритными клетками является одним из ключевых активационных факторов и важнейшим компонентом, индуцирующим механизмы противовирусной защиты организма, приводящих к элиминации вирусов (Ахматова Н.К., Киселевский М.В., 2008; Hubo М. et al., 2013).

При недостаточном количестве вирусспецифических лимфоцитов и антител в организме решающая роль в ограничении распространения вируса в начальный период заболевания принадлежит NK-клеткам. Исследования уникальных свойств этих клеток на модели in vitro показали, что они способны предотвращать заражение флавивирусом Западного Нила клеток культуры Vero (Zhang М. et al., 2010), ограничивать инфекцию в гепатоцитах, вызванную вирусом гепатита С (Yuan J.P. et al., 2003), а также принимать опосредованное участие при заражении клеток вирусом герпеса и онковирусом альфа (Baraz L. et al., 1999).

Вирусы рода Hantavirus относятся к семейству Bunyaviridae и передаются в основном воздушно-пылевым путем (Слонова Р.А. и др., 2006). Эти вирусы являются этиологическими агентами двух тяжелых заболеваний человека геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС) и хантавирусного легочного синдрома. Хантавирусы содержат РНК-отрицательный геном, включающий три сегмента - Б, С и М, кодирующие вирусную транскриптазу, гликопротеины и белки нуклеокапсида соответственно. Показано, что ГЛПС относится к иммуноопосредовательным инфекционным заболеваниям, так как

клшшко-патогенетические синдромы, которые проявляются в организме, в значительной мере обусловлены реакциями иммунного воспаления. Так при тяжелой степени течения ГЛПС у больных выявляется иммуносупрессия, которая характеризуется Т-клеточной недостаточностью на фоне активации NK-клеток, В-клеток, фагоцитарных механизмов защиты и нарастания уровня ЦИК (Иванис, 2003; Kraus et al., 2004; Markotic et al., 2007). Несмотря на интенсивное изучение вопроса иммунопатогенеза при ГЛПС, в основном, эти работы посвящены оценке состояния системы защиты организма при Пуумала-инфекции (Мухетдинова Г.А. и др., 2012; Settergren В.. 2000; Rasmuson J., 2010). Так, показано, что вирус Пуумала способствует активации NK-клеток и оказывает влияние на поляризацию их лизирующих гранул в направлении клеток-мишеней (Bjorkstrom N.K. et al., 2010). В свою очередь, хантавирус вызывает более высокую иммунореактивность у моноцитов, чем у резидентных макрофагов, а также определено, что дендритные клетки принимают участие в защите организма, но в результатах исследования не приведены морфологические или ферментативные изменения клеток (Schönrich G., 2008). Наряду с этим, необходимо отметить, что комплексных исследований механизма развития клеточной реакции врожденной системы иммунитета при патогенезе ранних фаз Хантаан инфекций не проводилось.

Таким образом, недостаточная изученность патогенеза геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС), одним из возбудителей которой является вирус Хантаан, определяет необходимость исследования взаимодействия указанного вируса с клетками врожденного иммунитета, а именно, с нейтрофилами, моноцитами/макрофагами, дендритными и NK-клетками. Особенно, это касается оценки функциональных свойств и метаболизма клеток, зараженных вирусом, которое, как правило, сопровождается изменением их морфологического состояния.

Цель работы: дать комплексную морфологическую и цитохимическую характеристику клеток врожденного иммунитета (нейтрофилов,

моноцитов/макрофагов, дендритных и ИК-клеток) при их взаимодействии с хантавирусом.

Задачи исследования:

1. Дать оценку морфофункционального состояния нейтрофилов, зараженных хантавирусом.

2. При воздействии указанного вируса исследовать функциональную активность и морфологию клеток моноцитарного ряда различной степени дифференцировки.

3. Изучить характер влияния ЫК-клеток, преинкубированных с хантавирусом, на функциональную активность макрофагов.

4. Исследовать влияние хантавируса на морфофункционалыюе состояние дендритных клеток.

5. Определить морфологические и цитохимические маркеры вирусной инфекции в клетках врожденного иммунитета (нейтрофилах, моноцитах/макрофагах и дендритных клетках).

Научная новизна:

С помощью современных методов микроскопии (лазерная конфокальная и сканирующая электронная микроскопия) получены приоритетные данные об архитектонике поверхности нейтрофилов, макрофагов и дендритных клеток в процессе их взаимодействия с хантавирусом.

Впервые установлено, что под воздействием хантавируса активируется кислороднезависимая бактерицидная система нейтрофилов с экскрецией биологического компонента во внеклеточное пространство, что свидетельствует об эффекторной функции этих клеток.

Выявлено, что хантавирус не оказывает стимулирующего эффекта на моноциты периферической крови, тогда как в отношении резидентных макрофагов проявляется его выраженное действие. Так, в альвеолярных макрофагах под воздействием хантавируса на фоне выраженной активации компонентов нитроксидобразующей системы снижается активность ферментов кислородобразующей системы.

Впервые показано, что ЫК-клетки, контактировавшие с хантавирусом, в отличие от клеток, которые не подвергались его воздействию, оказывали более выраженное цитотоксическое действие на макрофаги им инфицированные.

Впервые установлено индуцирующее воздействие хантавируса на созревание дендритных клеток, полученных из костного мозга морских свинок. В зависимости от вида индуктора, под влиянием которого происходило созревание дендритных клеток, установлена их дифференцированная морфофункциональная реакция в ответ на заражение вирусом. Наиболее выраженное изменение морфологии и функциональных свойств наблюдалось в дендритных клетках, созревание которых происходило под влиянием хантавируса.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Полученное в результате исследования доказательство воздействия хантавируса на функциональную активность клеток врожденного иммунитета расширяет представление об эффекторной и модулирующей роли этих клеток в системе противовирусной защиты организма.

С позиции решения общебиологической проблемы избирательности вирусов к различным типам клеток, поддерживающих их первичное размножение, новые данные о морфофункциональном состоянии дендритных клеток и моноцитов/макрофагов, инфицированных хантавирусом, вносят существенное дополнение в понимание молекулярно-клеточных механизмов развития патогенеза ГЛПС.

Комплексная оценка ферментативной активности клеток врожденного иммунитета, зараженных хантавирусом, в совокупности с результатами вирусологических исследований, может являться одним из тестов определения репродуктивной активности вирусов в цитоплазме клетки с идентификации их цитопатогенного действия.

Разработанная модель взаимодействия вирусов с клетками врожденного иммунитета и способ оценки их морфофункционального состояния могут быть использованы в исследованиях вирулицидных свойств биологически активных соединений.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Клетки врожденного иммунитета (нейтрофилы, моноциты/макрофаги, NK и дендритные клетки) подвергаются воздействию хантавируса. В ответ на внедрение вируса происходит выраженное изменение архитектоники поверхности клеток, активируются компоненты их бактерицидных систем и реализуются эффекторные свойства.

2. Хантавирус оказывает стимулирующий эффект на функциональную активность моноцитов/макрофагов в зависимости от степени их дифференцировки. Выраженное действие вируса обнаруживается в моноцитах, предварительно инкубированных в течение 18 ч, и макрофагах. В этих клетках определяется повышение активности сукцинатоксидазной кислородзависимой и нитроксидобразующей систем. В альвеолярных макрофагах, зараженных хантавирусом, на фоне выделения во внеклеточное пространство нитритов отмечается снижение активности ферментов кислородобразующей системы, что указывает на проявление эффекторной функции этих клеток.

3. NK-клетки, контактировавшие с хантавирусом, оказывают цитотоксическое действие на макрофаги, предварительно им инфицированные.

4. Хантавирус индуцирует созревание дендритных клеток, полученных из костного мозга морских свинок. В ответ на повторное заражение вирусом в данных клетках наблюдается выраженное изменение морфологии и функциональных свойств.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на: V Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов» (Новосибирск, 2011); X региональной конференции по актуальным проблемам экологии, морской биологии и биотехнологии студентов, аспирантов ВУЗов и научных организаций Дальнего Востока России (г. Владивосток, 2011); XIV Международной молодежной школе-конференции по актуальным проблемам химии и биологии (МЭС, ТИБОХ, 2012); XXIV Российской конференции по

электронной микроскопии (Черноголовка, 2012); XV Международном конгрессе по инфекционным болезням (Бангкок, Таиланд, 2012); Первых научных чтениях, посвященных памяти академика РАМН Г. П. Сомова «Будущее науки - за молодыми учеными» (Владивосток, 2012); IX международной конференции ГЛПС, ХЛС и Хантавирусы на базе Национального института контроля за вирусами и вакцин (Пекин, Китай, 2013); XXV Российской конференции по электронной микроскопии (Черноголовка, 2014).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 25 работ, включая 8 статей в журналах, входящих в список, рекомендованный ВАК «Перечень ведущих рецензируемых научных журналов и изданий, в которых должны быть опубликованы основные научные результаты диссертации на соискание ученой степени доктора и кандидата наук».

Личный вклад соискателя заключается в планировании, подготовке и проведении экспериментов, статистической обработке и анализе полученных результатов. Автором в полном объеме выполнена экспериментальная часть исследования: получение первичных культур клеток, постановка и реализация цитологических, иммуногистохимических, электронномикроскопических и спектрофотометрические методов исследования.

Финансовая поддержка работы. Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства образования и науки Российской Федерации (государственный контракт № 16.740.11.0182).

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 5 глав собственных исследований, заключения, списка литературы. Работа изложена на 126 страницах машинописи, иллюстрирована 31 рисунками. Список литературы содержит 145 источников, из них 37 отечественных и 108 зарубежных авторов.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Взаимодействие вирусов с клетками врожденного иммунитета

Взаимоотношения между вирусом и клеткой разнообразны и определяются вирулентными свойствами, как инфекционного агента, так и защитными реакциями клетки-мишени. Следствием цитопатического действия вируса является его ускользание от фагоцитоза, нарушение процессинга белков в эндосомах, подавление синтеза клеточных макромолекул, ведущих к трансформации клеток и переходу инфекционного процесса в персистирующую форму (Болдырев М.Н., Алексеев Л.П., 2006; Макаренкова И.Д., 2013; Blander, 2004; Vo, 2010). В качестве длительного источника персистенции и диссеминации вирусов в организме могут служить клетки, имеющие на своей поверхности специфические гликопротеиновые рецепторы - интегрины. Особую роль играют интегрины LFA-1, Мас-1 и 02 группы VLA, распознающие белки внеклеточного матрикса (Плехова Н.Г., 2009). Так, для проникновения в клетки-мишени полиовирус использует рецептор CD 155 (Плехова Н.Г., 2007; Плехова Н.Г., Сомова Л.М., 2009), хантавирус и вирусы семейства Picornaviridae - ECHO 1, Коксаки А21, А9 и ВЗ - интегрины, состоящие из комбинаций а- и Р-цепей, энтеровирусы 70, ECHO 7, Coxsackie В1, ВЗ и В5 используют рецептор CD55 (Decay-Accelerating Factor - DAF) (Плехова Н.Г., Сомова Л.М., 2010; Helmy K.Y. et al., 2006). Причем Коксаки ВЗ вирус прикрепляется к клеточной поверхности через молекулы семейства нуклеолинов и общий для него и аденовирусов рецептор - CAR, а флавивирусы могут связываться с гепарансульфатным рецептором (Chen D. et al., 2008; Плехова Н.Г., 2007; Плехова Н.Г., Сомова Л.М., 2009). Ряд вирусов ингибируют активацию каспаз, выделяя белки-гомологи с антиапоптозными свойствами (vBcl-2).

Многие вирусы, проникая в иммунные клетки, вызывают состояние иммуносупрессии в организме, нарушая процесс созревания клеток и их функциональную активность (Болдырев М.Н., Алексеев Л.П., 2006; Макаренкова

И.Д., 2013). Вирус иммунодефицита человека повреждает CD4+ Т-лимфоциты, вирус клещевого энцефалита подавляет функциональную активность моноцитов, вирус кори ингибирует продукцию IL-12 мононуклеарными фагоцитами, аденовирусы ингибируют образование комплекса пептида с МНС I класса, а цитомегаловирус подавляет экспрессию молекул МНС I и II класса, что минимизирует способность инфицированных антигенпрезентирующих клеток (АПК) представлять вирусные пептиды Т-лимфоцитам (Макаренкова И.Д., 2013; O'Brain М., 2013; Lanier L.L., 2008).

Вирус папилломы человека (ВПЧ) для ускользания от иммунной системы использует несколько механизмов. К одному из них относится ограничение цитолитического эффекта. Так, этот вирус не обладает способностью к репликации в антигенпрезентирующих клетках иммунной системы, в результате чего не происходит их активации (Кизей И.Н. и др., 2010). Уменьшение или прекращение экспрессии рецепторов МНС I класса на мембране антигенпрезентирующеЙ клетки происходит за счет их связи с белком Е5 вируса, который удерживает этот комплекс в эндоплазматическом ретикулуме (Forslund О. et al., 2003). Вирусные белки Е6 и Е7 оказывают супрессорное влияние на механизмы интерфероновой защиты, также наблюдается экспрессия белков, инактивирующих апоптоз цитотоксических Т-лимфоцитов. В результате этого нарушается Т-клеточное распознавание за счет супрессии клеточно-поверхностных молекул, таким образом, ВПЧ не индуцирует выраженного антительного ответа. Отсроченная выработка поздних капсидных белков LI и L2 вирусов в базальных слоях эпителия приводит к медленному антительному ответу через 3-12 месяцев от начала инфекционного процесса, к 18-му месяцу только у 50% пациентов определяются антитела в низких титрах. Антитела иммуноглобулина G LI, L2 ВПЧ связывают с существующей инфекцией, а иммуноглобулина G Е6, Е7 - с излеченной инфекцией (Кизей И.Н. и др., 2010).

Рецептор NKG2D, который экспрессируется на всех NK клетках мышей, распознает белки комплекса гистосовместимости (МНС I), а именно: ранний транскрипт 1 ретиноевой кислоты (RAE1), мышиный ЦЫб-связывающий белок

(иЬВР)-подобный транскрипт 1 (MULT1) и Н60 (Lanier L.L., 2008). Примечательно, что мышиный цитомегаловирус затрачивает значительные ресурсы на блокирование экспрессии этих NKG2D лигандов на поверхности инфицированных клеток: так вирусный M152 белок ингибирует экспрессию рецептора RAE1 (Lodoen M. et al., 2003); тогда как белки М155 и М138 подавляют экспрессию Н60 (Lodoen M. et al., 2004; Lenac T. et al., 2006), a MULT1 является мишенью для вирусных белков M145 и M138 (Krmpotic A. et al., 2005; Lenac T. et al., 2006). В инфицированных мышиным цитомегаловирусом NK-клетках гены, кодирующие лиганды NKG2D, транскрибируются, но вирусные белки взаимодействуют и вызывают деградацию NKG2D лиганд протеинов, тем самым обходя обнаружение NKG2D по NK-клеткам.

Лизис инфицированных вирусом коровьей оспы клеток NK-клетками может быть частично блокирован антителами, специфичными к NKp30, NKp44 и NKp46. Эти клетки вызывают снижение экспрессии лейкоцитарного антигена Е человека (HLA-E), но не других белков МНС I класса, которые преимущественно и вызывают лизис этих клеток-мишеней NK-клетками, экспрессирующих ингибирующий CD94-NKG2A рецептор, который распознает HLA-E (Brooks C.R. et al., 2006). Помимо этого, вирусы натуральной и коровьей оспы способны синтезировать растворимые белки, которые функционируют как антагонисты рецепторов NKG2D. В то время как цитомегаловирусы развивали стратегию сохранения и деградации NKG2D лигандов внутри инфицированных клеток, вирусы натуральной и коровьей оспы разработали другой механизм уклонения от NKG2D-0n0cpefl0BaHH0r0 иммунитета хозяина: они маскируют рецептор NKG2D на NK-клетках и Т-клетках, прежде чем у них появится возможность взаимодействовать с зараженными клетками (Lanier L.L., 2008).

Вирус Эпштейна-Барр трансформирует B-клетки, в результате чего они становятся относительно устойчивы к NK-клеточной атаке за счет экспрессии МНС I типа. Тем не менее, недавнее исследование показало, что когда латентный вирус Эпштейна-Барр восстанавливает трансформированные B-клетки, они становятся восприимчивыми к NK-клеточному лизису, что ранее частично

подавлялось путем блокирования активации NKG2D и DNAM1 рецепторов на NK-клетках (Pappworth I.Y. et al., 2007). Вирус гриппа А блокирует активацию NK-клеток с помощью нейтрализующих антител, специфичных к NKG2D и NKp46 (Lanier L.L., 2008).

Обнаружено, что способность организма избавляться от вируса гепатита С связана с наличием киллинг ингибирующих белков, которые экспрессируются на NK-клетках (KIR2DL3) и лейкоцитарный антиген С1 человека (HLA-C1) аллелями (Khakoo, 2004, Vilches, 2002). Это позволило исследователям высказать предположение, что низкая выраженность экспрессии указанных белков KIR2DL3 и HLA-C 1 аллелей определяет более сильное воздействие против вируса (Lanier, 2008).

Таким образом, одной из главных стратегий вируса в инфицированной клетке является искажение и ослабление сигналов, идущих с TLRs, блокирование ключевых компонентов иммунного ответа, а именно, влияние на процесс созревания клеток, ограничение их функциональной активности и цитолитического эффекта.

В защите организма от патогенов участвуют все компоненты иммунной системь1, однако, противовирусный иммунитет имеет существенные особенности, которые определяются антигенной структурой, биохимическим составом и тропизмом вирусов, что приводит к появлению сложного комплекса специфических цитофизиологических и морфологических изменений в молекулярных и субклеточных структурах инфицированной клетки (Плехова Н.Г., 2010, 2012).

Нейтрофилы. При инфекционных заболеваниях иммунная функция нейтрофилов, главным образом, ассоциируется с фагоцитозом и продукцией цитотоксических компонентов, в том числе нитроксидных и кислородных радикальных соединений (Bataki E.L. et al., 2005; Borregaard N., 2010). После стимуляции инфекционными агентами эти клетки способны выделять во внеклеточную среду иммунорегуляторные цитокины, что играет определенную роль в реализации адаптивной защиты организма через привлечение к месту

заражения нейтрофилов, моноцитов/макрофагов, дендритных клеток и Т-клеток (Yang D. et al., 2000; Shigeo Y. et al., 2001, Silva M.T., 2010).

Функциональная активность нейтрофилов зависит от наличия в них цитоплазматических гранул и секреторных везикул, где содержатся не только антимикробные белки, протеазы, система, обеспечивающая формирование активных форм кислорода, но и растворимые медиаторы воспаления. Контролируемая мобилизация этих органелл позволяет нейтрофилам выпускать свои белковые гранулы на определенную мишень, предотвращая чрезмерное повреждение ткани хозяина (Lin M, 2007). На данный момент выделяются следующие основные типы гранул: азурофильные (первичные, вторичные), специфические, желатиназные и секреторные везикулы, которые образуются последовательно (в порядке перечисления) в течение созревания нейтрофила в костном мозге (Borregaard N, 2010). Тогда как дегрануляция обычно происходит в обратном порядке, в котором были сформированы гранулы: секреторные, желатиназные, специфические, а затем азурофильные. Азурофильные гранулы содержат различные типы кислых гидролаз и антимикробных белков, таких как миелопероксидазы, серинпротеазы - катепсин G, эластазы и белок, повышающий проницаемость клеточных мембран бактерий (bactericidal/permeability-increasing protein - BPI), который обладает бактерицидными свойствами. Специфические и желатиназные гранулы содержат антибиотические вещества, ферменты, разрушающие мембрану. Оба типа гранул содержат матричные металлопротеиназы, лейколизин, в дополнение к коллагеназе (специфические гранулы) и желатиназе (желатиназные гранулы). Секреторные везикулы также содержат множество ассоциированных с мембранами рецепторов, необходимых на ранних этапах реакции нейтрофилов на воздействие - кластеры дифференцировки - CDllb/CD18, CD14, формил-метиониновый рецептор (fMLP) и лейколизин (Witko-Sarsat V., Rieu P., 2000; Faurschou M. et al., 2003; Borregaard N, 2010).

Известно (Borregaard N, 2010), что процесс выхода лейкоцитов из циркуляторного русла в ткань происходит в течение первых минут после

заражения за несколько этапов: этап первичной адгезии и роллинг; активация и остановка клеток на определенном участке эндотелия; прочная адгезия к поверхности и диапедез вместе с передвижением клеток в области воспаления. Роллинг и адгезия - необходимые этапы трансформации нейтрофилов в более дифференцированные клетки, которые происходят с участием поверхностных рецепторов селектинов (Е, L, Р) и интегринов (ICAMs, VCAMs, ß2 интегрины LAF-1 (aLß2) и Mac-1 (aMß2)) (Buscher К. et al., 2010; Borregaard N, 2010). Как и в случае хемотаксиса, снижение адгезивных свойств нейтрофилов наблюдается при многих хронических инфекциях вирусной этиологии. В частности, установлено наличие резкого снижения адгезии лейкоцитов к пластику под воздействием вируса иммунодефицита.

Заключение диссертации по теме «Клеточная биология, цитология, гистология», Ляпун, Ирина Николаевна

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Иммунная функция нейтрофилов при инфекционных заболеваниях, главным образом, ассоциируется с фагоцитозом и продукцией цитотоксических компонентов, в том числе нитроксидных и кислородных радикалов (Воп^аагс! К., 2010). В настоящей работе проводились исследования по влиянию хантавируса на морфологическую и ферментативную активность нейтрофилов. Нами обнаружено, что вирусные частицы обнаруживались в фагосомах нейтрофилов через 15 мин, а через 2 ч после заражения происходила экскреция гранул нейтрофила во внеклеточное пространство. В последующем, в цитоплазме нейтрофилов отмечалось повышение количества свободнолежащих рибосом, что, вероятно, было связано с активным синтезом белкового компонента. Через 24 ч после заражения фагосомы нейтрофилов, содержащие вирусные частицы, увеличивались в размерах и, в них наблюдалось формирование многослойных мембран. Исследования архитектоники поверхности нейтрофилов показали, что при воздействии вируса в течение 15 мин обнаруживаются признаки специфической стимуляции клеток, а уже через 1 ч выявляются фагоциты с наличием на поверхности экзоцитированных компонентов.

Таким образом, нами установлено, что хантавирус способен адгезировать к наружной мембране нейтрофилов и изменять архитектонику их поверхности. Поглощение вируса этими клетками происходило, преимущественно, с помощью фагоцитоза, после чего в фагосомах обнаруживался лизис его оболочек. В последующем морфология таких клеток изменялась, увеличивался их размер, в околоядерном пространстве отмечался активный синтез белкового компонента, а в периферической части цитоплазмы, напротив, снижалось количество гранул и наблюдался ее отек, что указывало на цитолитическое действие хантавируса.

Для комплексной оценки активности кислородзависимой и кислороднезависимой бактерицидных систем нейтрофилов нами были проведены цитохимические исследования активности ферментов миелопероксидазы, лактатдегидрогеназы, цитохромоксидазы и внутриклеточного содержания

катионных белков. Также исследовали нитроксидобразующую систему иейтрофилов, зараженных хантавирусом, с помощью Гриесс-реакции для вычисления уровня конечных продуктов оксида азота - нитритов.

Известно, что 5'-нуклеатидаза катализирует гидролиз преимущественно аденозинмонофосфатов и инозинмонофосфатов и может также катализировать гидролиз дезоксирибонуклеозидмонофосфатов. Нами установлено, что на фоне увеличения числа антигенположительных клеток в нейтрофилах регистрировалось повышение активности этого фермента. Помимо этого, определено, что динамика активности 5'-нуклеатидазы совпадала с изменением активности АТФазы. Наименьшая активность ферментов отмечалась через 15 мин после заражения. Данные показатели указывали на выраженную стимуляцию нейтрофилов при их заражении хантавирусом, что нашло отражение в изменении архитектоники их поверхности. На наш взгляд, обнаруженное нами в поздние сроки инкубации повышение внутриклеточного содержания 5'-нуклеатидазы в нейтрофилах, зараженных хантавирусом, можно связать с началом активации нуклеозид трифосфатаз и нуклеотидаз, которые, в свою очередь, принимают участие в синтезе белкового компонента, выделяемого клетками во внеклеточное пространство.

Для синтеза собственных нуклеиновых кислот и белковых компонентов вирусы могут использовать ферментные системы самой клетки без их модификации, либо индуцировать синтез новых, не свойственных ей ферментов. Одномоментно, активность собственных клеточных энзимов резко угнетается. Нарушение передачи электронов по электроннотранспортной цепи митохондрий и клеточных мембран при стимуляции нейтрофила приводит к появлению активных метаболитов кислорода, которые нестабильны и реактивны (Tecle Т. et al., 2007). Их действие улавливается теми мишенями, которые находятся в непосредственной близости. К таким мишеням относят различные соли тетразолия, используемые в качестве субстратов для определения активности ферментов. В экспериментах in vitro нами установлено, что в нейтрофилах, зараженных хантавирусом, в образовании активных метаболитов кислорода была

задействована лактатдегидрогеназа, а также комплекс IV дыхательной цепи с участием цитохромоксидазы, активность которой отражает образование основного аниона кислорода, на что указывало повышение индекса стимуляции ЛДГ и ЦХО к 4 ч инкубации.

Нейтрофилы относятся к клеткам с преимущественно аэробным типом обмена, тем не менее повышение в них активности ЛДГ связывают с изменениями интенсивности гликолиза (Охотина C.B., 2007). Так, образование богатых энергией фосфорных соединений путем анаэробного гликолиза свидетельствует об интенсификации энергообеспечения нейтрофилов. Этот путь окисления может быть расценен как компенсаторный механизм адаптивной реакции этих клеток на воздействие стимула. Обнаруженную в начальные сроки после заражения хантавирусом сниженную активность ЛДГ в нейтрофилах, на наш взгляд, следует расценивать как снижение энергетического потенциала клетки, связанного с ее адаптивной реакцией на внедрение возбудителя. Относительная стабильность в энергетическом гомеостазе нейтрофилов, зараженных хантавирусом, отмечалась только в поздние сроки наблюдения, когда индекс стимуляции повышался.

Эти данные были подтверждены результатами исследования активности миелопероксидазы. Известно, что до 90 % потребленного нейтрофилами кислорода идет на образование супероксидного радикала, а затем перекиси водорода (Witko-Sarsat V. et al., 2000). Для ликвидации превышающего количества вредных окислителей клеточных компонентов, к которым относят активные метаболиты кислорода, в фагоцитах существует ряд ферментных систем-антиокислителей. К числу таковых принадлежит МПО, субстратом для которой является перекись водорода. Выявленная в поздние сроки контакта повышенная активность МПО в зараженных хантавирусом нейтрофилах отражала их защитную реакцию на внедрение данного инфекта.

Нами показано, что в начальный период заражения хантавирусом в нейтрофилах активируются преимущественно компоненты кислороднезависимой системы, на что указывало повышение внутриклеточного содержания катионных

белков. В последующем наблюдалась экскреция этого биологического компонента, которая была подтверждена с помощью сканирующей электронной микроскопии. Эти данные указывают на первоначальную стимуляцию синтеза катионных белков нейтрофилами в ответ на внедрение хантавируса с последующим их расходованием.

Таким образом, установлено, что под влиянием хантавируса в нейтрофилах резко угнетается активность собственных клеточных энзимов, что снижает их способность к реализации защитных механизмов в ответ на внедрение инфекционного агента. Синтеза вирусных компонентов в этих фагоцитах нами не обнаружено, и, в этом случае, можно говорить только о цитотоксическом действии этого вируса на нейтрофилы.

Известно, что клетки миелоидного происхождения - моноциты/макрофаги действуют как стражи в периферических тканях и их присутствие в эпителии и интерстиции легких, являющихся местом проникновения хантавируса, обусловливают возможность воздействия на них этого инфекционного агента (Lambrecht B.N. et al., 2001; Nicod L.P., Cochand L., 2001; Peebles R.S. et al., 2001). Следует отметить, что при размножении некоторых вирусов в макрофагах их цитопатическое воздействие морфологически не выражено (Плехова Н.Г., Сомова JI.M., 2008). В нашей работе с помощью сканирующей микроскопии впервые показано, что архитектоника поверхности макрофагов уже через 5 минут после заражения хантавирусом изменяется. Так, наблюдаются многочисленные складки на поверхности клеток и увеличение их адгезивной активности. Через 2 ч обнаруживалась секреция макрофагов, что проявлялось появлением обильного межклеточного вещества на их поверхности. В это же время, наблюдалось уменьшение количества складок на поверхности клеток, увеличение выямок в плазмалемме и округление. Через 24 ч после заражения хантавирусом отмечалась выраженная вакуолизация клеток и признаки деградации.

Указывается, что многие вирусы (Puumala, Хунин, Хантавирус и вирус клещевого энцефалита) используют в качестве клеток-мишеней для размножения моноциты/макрофаги (Temonen М. et al., 1993, 1994; Плехова Н.Г., Сомова JI.M.,

2008). При этом вирус Денге способен заражать популяции моноцитов/макрофагов вне зависимости от стадии их дифференцировки (Chen Y.C. et al., 2002), тогда как скорость размножения вируса иммунодефицита человека в клетках коррелирует со степенью зрелости фагоцитов (Le DouceV. et al., 2010). Причем, вирус Западного Нила и полиовирус способен к репродукции только в зрелых макрофагах (Rios М. et al., 2006). Т. Narasaraju с соавторами (2011) установили, что у модифированных мышей с выключенным геном дифференцировки клеток миелоидного происхождения в макрофаги, после заражения хантавирусом, определялось затруднённое дыхание, потеря веса и увеличивался процент смертности (40 %). Тогда как, у нормальных мышей при этой инфекции респираторный дистресс и смертность не выявлялись. В наших исследованиях показано, что количество антигенсодержащих фагоцитов повышалось с увеличением степени дифференцировки моноцитарных клеток. Максимальные значения наблюдались в популяции резидентных макрофагов -альвеолярных и перитонеальных.

Подобные результаты были выявлены при исследовании активности 5'-нуклеотидазы и АТФазы в клетках моноцитарного ряда, зараженных хантавирусом. При этом в моноцитах, без предварительной инкубации, активность данных ферментов не изменялась, оставаясь в пределах контрольных значений, тогда как в моноцитах, предварительно инкубированных в течение 18 ч, она обнаруживалась через 3 и 8 ч, а в макрофагах - через 5-6 ч после заражения. В тоже время в альвеолярных макрофагах, зараженных хантавирусом, активность ферментов выявлялась на протяжении всего срока наблюдения.

Клетки моноцитарного ряда, подобно нейтрофилам, способны под влиянием различных факторов мгновенно генерировать кислородные радикалы. В ответ на заражение хантавирусом в моноцитах/макрофагах определялось повышение активности кислородзависимых ферментных систем, к которым относятся митохондриальные ферменты третьего порядка - сукцинатдегидрогеназа (СДГ), лактатдегидрогеназа (ЛДГ) и цитохромоксидаза (ЦХО). Наибольшая активность указанных ферментов отмечалась в моноцитах, предварительно инкубированных

в течение 18 ч, что свидетельствует о стимулирующем действии хантавируса на моноциты/макрофаги. В то же время, в альвеолярных макрофагах наблюдалась несостоятельность кислородобразующей системы, которая, на наш взгляд, является последствием цитотоксического действия вируса.

В последнее время клеткам моноцитарной линии при вирусном инфицировании придается важное значение, определяемое их способностью в активном состоянии продуцировать оксид азота, который оказывает влияние на синтез интерферона у и фактора некроза опухоли а. Была установлена несостоятельность нитроксидобразующей активности как в незрелых, так и в дифференцированных моноцитах, зараженных хантавирусом. Тогда как, в резидентных макрофагах было обнаружено образование нитритов при максимальных значениях через 48 ч после заражения, что можно расценивать как проявление этими клетками эффекторных функций.

Известно, что при вирусных заболеваниях NK-клетки принимают участие в ранней фазе защиты организма с последующей индукцией каскада реакций адаптивного иммунитета (Lanier L.L., 2008). Они обладают широким набором рецепторов, позволяющих им распознавать клетки-мишени и отличать здоровые клетки от пораженных вирусами. Исследования уникальных свойств этих клеток начаты относительно недавно и изучение их вирулицидности проводилось в основном на организменном уровне. Тогда как на модели in vitro выявлено, что NK-клетки способны предотвращать заражение флавивирусом Западного Нила клеток культуры Vero (Zhang М. et al., 2010), ограничивать инфекцию в гепатоцитах, вызванную вирусом гепатита С (Yuan J.P.. et al., 2003), а также принимать опосредованное участие при заражении клеток вирусом герпеса и онковирусом альфа (Baraz L. et al., 1999). В нашей работе мы использовали NK-клетки, полученные из селезенки морских свинок, и оценивали их влияние на функциональную активность макрофагов, зараженных хантавирусом. При сравнении активности зараженных и незараженных NK-клеток в отношении макрофагов установлено, что активность ферментов кислород- и нитроксидобразующей систем были выше в интактных клетках, чем в

предварительно зараженной вирусами популяции макрофагов. Эти данные указывают на выраженную цитотоксическую активность NK-клеток в отношении популяции макрофагов, инфицированных вирусом.

Для формирования полноценного иммунного ответа, в том числе и противоинфекционного, необходимо наличие антигенпредставляющих клеток, среди которых наиболее важными являются дендритные клетки. Их морфология, фенотип и функции претерпевают значительные изменения в процессе дифференцировки из гематопоэтических CD34+ клеток, предшественников из костного мозга. На первом этапе незрелые ДК циркулируют в крови, где приобретают способность к захвату и процессингу антигенов. В дальнейшем ДК мигрируют в органы, где впоследствии индуцируется их антигенпредставляющая функция, что определяет ключевую роль ДК в развитии иммунных реакций организма (Прокопович С.К., Винницин В.Б., 2001; Алексеенко О.И. и др., 2006).

M.J. Raftery с соавторами (2002) обнаружили, что хантавирус способен проникать и размножаться в ДК, полученных из моноцитарных дериватов пуповинной и периферической крови человека. Причем эти ДК обладали способностью стимулировать пролиферацию Т-лимфоцитов в той же степени, что и ДК после TNF-a-опосредованного созревания (Lui G. et al., 2009). Сообщалось, что антиген хантавируса может локализоваться в фолликулярных ДК селезенки и лимфатических узлов (Zaki C.R. et al., 1995).

В рамках настоящей работы установлены особенности влияния хантавируса in vitro на процесс дифференцировки ДК, полученных из костного мозга морских свинок. Исследование функциональной активности ДК показало, что под влиянием хантавируса клетки достигали конечной стадии дифференцировки быстрее, чем клетки, индуцированные TNF-a. На это указывали сниженные показатели стимуляции АТФазы и повышенные - ЛДГ.

Нами обнаружено, что при заражении хантавирусом незрелых ДК, количество антигенсодержащих клеток было небольшим. В популяции клеток, где в качестве индуктора созревания использовался TNF-a, количество антигенсодержащих клеток составило около 25 %. Наибольший процент таких

клеток наблюдался в популяции ДК, индуцированных хантавирусом. При этом в этих ДК через 3 суток после заражения вирусом, специфический антиген выявлялся как на поверхности, так и в дендритных отростках.

При изучении ферментативной активности клеток, было установлено, что хантавирус в большей степени стимулирует популяцию ДК дифференцированных под его влиянием, тогда как активация незрелых ДК не выявлена. В то же время, под влиянием хантавируса в ДК обнаруживается активация сукцинатдегидрогеназной кислородобразующей системы в незрелых и индуцированных TNF-a, а в популяции клеток, индуцированной хантавирусом, выявляется активность лактатдегидрогеназы.

Из литературы известно, что неспецифические эстеразы экспрессируются только в незрелых предшественниках ДК (Прокопович С.К., Винницкий В.Б., 2001). Тем не менее, нами определено повышение активности неспецифической эстеразы в ДК в ответ на внесение хантавируса. Так, в популяции клеток, индуцированной хантавирусом, активация данного фермента наблюдалась через 24 ч, тогда как в незрелых ДК - через 48 ч после заражения. В то же время в популяции, индуцированной TNF-a, активация фермента не выявлялась.

Результатов исследований, связанных с нитроксидобразующей активностью ДК, инфицированных вирусом, в литературных источниках нами не обнаружено. Нами установлена на начальных сроках после заражения хантавирусом в популяции недифференцированных и индуцированных вирусом ДК внутриклеточная продукция нитритов, с последующим выбросом во внеклеточное пространство. Тогда как в ДК, индуцированных TNF-a, внутриклеточная продукция нитритов не выявлялась, что объясняется деградацией культуры вследствие цитотоксического действия хантавируса.

Итак, успехи последних лет в изучении факторов врожденного иммунитета показали их существенную значимость в гомеостазе организма, при формировании его ответа на воздействие патогенов. Основой врожденного иммунитета являются процессы воспаления и фагоцитоза и его факторы обладают генетическими неклональными механизмами распознавания и элиминации

патогенов. Эти свойства определяют важнейшую инициирующую и регулирующую роль клеточных факторов врожденной защиты организма в развитии специфических иммунных реакций при вирусных инфекциях. Наряду с вышеизложенным, необходимо отметить, что на настоящий момент неоправданно мало внимания уделяется исследователями проблеме изучения процессов, связанных с функциональными изменениями, происходящими в инфицированных вирусами клетках. Таким образом, в свете совокупности полученных в последние десятилетия данных необходимо расширить исследования, связанные с оценкой функционального состояния инфицированных вирусом клеток.

ВЫВОДЫ

1. Обнаружено изменение архитектоники поверхности нейтрофилов в ответ на внедрение хантавируса. Поглощение вируса клетками преимущественно происходило путем фагоцитоза. В динамике инфекции в цитоплазме клеток отмечалось снижение количества гранул и обнаруживалось выделение белкового компонента во внеклеточное пространство.

2. Установлено цитотоксическое действие хантавируса на нейтрофилы, которое проявлялось в снижении активности ферментов кислородзависимой системы лактатдегидрогеназы, цитохромоксидазы и миелопероксидазы.

3. Определено, что хантавирус не оказывает активирующего эффекта на моноциты периферической крови, тогда как в отношении моноцитов, предварительно, до заражения инкубированных в течение 18 ч, обнаруживалось его выраженное действие, которое проявлялось в повышении активности их сукцинатоксидазной кислородзависимой системы.

4. Установлено, что при воздействии хантавируса реализуется защитная реакция перитонеальных макрофагов при активации компонентов кислородзависимой и нитроксидобразующей систем. В альвеолярных макрофагах, зараженных хантавирусом, на фоне повышения уровня нитритов и их выделения во внеклеточное пространство, отмечалось снижение активности ферментов кислородобразующей системы, что указывало на проявление эффекторной функции этих клеток.

5. Определено, что ИК-клетки стимулируют активность макрофагов, инфицированных хантавирусом. При этом МК-клетки, контактировавшие с вирусом, по сравнению с интактными, оказывали более выраженное цитотоксическое действие на инфицированные им макрофаги.

6. Установлено, что морфологические изменения и выраженность функционального состояния дендритных клеток на 9-е сутки инкубирования зависят от вносимого индуктора созревания. Под влиянием хантавируса клетки увеличивались в размерах и находились в активированном состоянии,

о чем свидетельствовали показатели активности АТФазы и ферментов кислородзависимой системы.

7. Определено, что хантавирус не оказывал активирующего эффекта на незрелые дендритные клетки, тогда как в отношении индуцированных проявлялось его выраженное действие. В зараженных хантавирусом дендритных клетках, предварительно им индуцированных, происходили выраженные морфологические изменения, которые сопровождались стимуляцией активности их кислородзависимой и нитроксидобразующей систем.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Ляпун, Ирина Николаевна, 2015 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Адаме, Р. Методы культуры клеток для биохимиков / Р. Адаме. - М. : Мир, 1983.-264 с.

2. Апоптоз фагоцитов как один из возможных механизмов патогенетического действия «мышиного» токсина возбудителя чумы / Г.И. Васильева, А.К. Киселева, М.Б. Мишанькин, В.Н. Козловский, Б.Н. Мишанькин // Микробиология. - 2005. - No 2. - С. 49-52.

3. Ахматова, Н.К. Врожденный иммунитет противоопухолевый и противоинфекционный / Н.К. Ахматова, М.В. Киселевский - М. : Практическая медицина, 2008. - 255 с.

4. Болдырев, М.Н. HLA и естественный отбор. Гипотеза «преимущества функциональной гетерозиготности» / М.Н. Болдырев, Л.П. Алексеев // Иммунология. - 2006. - Т. 27, No 3. - С. 172-176.

5. Бутаков, A.A. Разработка комплекса экспресс-методов оценки фагоцитарного звена иммунитета для иммуноэпидемиологических исследований : дне. ... канд. мед. наук : 14.00.36 / Бутаков Александр Анатольевич; [Институт иммунологии МЗ РФ]. - М., 1991. - 131 с.

6. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом / P.A. Слонова, Е.А. Ткаченко, В.А. Иванис, Г.Г. Компанец, Т.К. Дзагурова. - Владивосток, 2006. -248 с.

7. Гончарук, Ю.Н. Кислородзависимая и нитроксидзависимая ферментные системы макрофагов при стафилококковой и листериозной инфекциях: дис. ... канд. мед. наук: 03.00.25 / Гончарук Юлия Николаевна. - Владивосток, 2005.- 169 с.

8. Иванис В. А. Современные представления о патогенезе хантавирусной инфекции / В.А. Ивинис // Тихоакеан. Мед. журн. - 2003. - No 2. - С. 15-19.

9. Индукция апоптоза нейтрофилов вирусом клещевого энцефалита / Н.Г. Плехова, Л.М. Сомова, И.Н. Ляпун [и др.] // Бюллютень эксперементалыюй биологии и медицины.-2012.-Т. 153., No 1.-С. 118-122.

10. Инфицирование макрофагов вирусом клещевого энцефалита / Н.Г. Плехова, [и др.] // Вопр. вирусол. - 2008. - No 2. - С. 32-37.

11. Исследование in vitro макрофагальной барьерной функции у мышей, вакцинированных от клещевого энцефалита и зараженных флавивирусами различной вирулентности / П.С. Карасева, Л.И. Котлубей [и др.] // Журн. эпидемиол. и иммунобиол. - 1983. - Т. 12. - С. 57-60.

12. Кармышева, В.Я. Применение метода флюоресцирующих антител в вирусологии / В.Я. Кармышева. - М.: Медицина, 1979. - 142 с.

13. Кириличева, Г.Б. Поведение активности ферментов цитоплазматической мембраны макрофагов под действием бактериальных полисахаридов / Г.Б. Кириличева, A.A. Кирилличева, М.А. Туманян // Иммуномодуляторы в инфекционной патологии. - М., 1988. - С. 55-56.

14. Кремер, Е.Э. Клеточные механизмы модификации иммунного ответа при бронхиальной астме под влиянием экстракта Opisthorchis felineus : автореф. дис. ... канд. мед. наук : 03.00.25 : 14.03.09 / Кремер Елена Эдуардовна; [СибГМУ]. - Томск, 2012. - 24 с.

15. Литвитский, П.Ф. Врожденный иммунитет: механизмы реализации и патологические синдромы / П.Ф. Литвитский, Т.Г. Синельникова // Вопр. соврем, педиатрии. - 2009. - Т. 8. - С. 95-101.

16. Лойда, 3. Гистохимия ферментов лабораторные методы / 3. Лойда, Р. Госсрау, Т. Шиблер. - М. : Мир, 1982. - 272 с.

17. Макаренкова, И.Д. Молекулярно-клеточные механизмы активации врожденного иммунитета сульфатированными полисахаридами бурых водорослей : дис. ... докт. биол. наук : 14.00.36. / Макаренкова Илона Дамировна; [НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН] -Владивосток, 2013. - 287 с.

18. Морфофункциональные особенности натуральных киллеров-Т-клеток больных с опухолевыми поражениями печени / О.В. Лебединская, Ю.И. Патютко [и др.] // Сиб. онкол. журн. - 2005. - Т. 3., No 15. - С. 24-31.

19. Муругин, В.В. Комплекс методов исследования NK-клеток в норме и патологии : дис. ... канд. мед. наук : 03.03.03 / Муругин Владимир Владимирович; [ФГБУ ГНЦ РФ Институт Иммунологии ФМБА]. - М., 2012.-134 с.

20. Особенности фагоцитарной активности лейкоцитов в периферической крови у больных клещевым энцефалитом / Н.П. Пирогова, О.В. Михайлова, М.Р. Карпова [и др.] // Бюл. эксп. биол. и мед. - 2002. - No 1. - С. 82-85.

21. Охотина, C.B. Сравнительная характеристика бактерицидных систем нейтрофилов при псевдотуберкулезной и листериозной инфекциях : дис. ... канд. биол. наук : 03.00.25 / Охотина Софья Владимировна; [НИИ эпидемиологии и микробиологии СО РАМН]. - Владивосток, 2007. - 165 с.

22. Пащенков, М.В. Физиология клеток врожденной иммунной системы: дендритные клетки / М.В. Пащенков, Б.В. Пинегин // Иммунология. - 2006. -No 6.-С. 368-378.

23. Плехова, Н.Г. Значение клеток моноцитарно-макрофагальной системы в патогенезе флавивирусных инфекций / Н.Г. Плехова // Бюл. сиб. мед. -2007.-No 4.-С. 71-77.

24. Плехова, Н.Г. Роль клеток моноцитарного происхождения в патогенезе хантавирусных инфекций / Н.Г. Плехова, J1.M. Сомова // Тихоокеан. мед. журн. - 2008. - No 2. - С. 32-36.

25. Плехова, Н.Г. Роль моноцитов/макрофагов в патогенезе вирусных инфекций / Н.Г. Плехова, JI.M. Сомова // Тихоокеан. мед. журн. - 2010. - No 3. - С. 59.

26. Плехова, Н.Г. Современное представление о роли клеток врожденного иммунитета при инфекционных болезнях / Н.Г. Плехова, JT.M. Сомова // Бюллетень СО РАМН. - 2011. - Т. 31., No 4. - С. 2-12.

27. Плехова, Н.Г. Современные представления о механизмах входа вирусов в клетку / Н.Г. Плехова, Сомова JI.M. // Успехи соврем, биологии. - 2009. -Т. 129,No 1.-С. 39-51.

28. Плехова, Н.Г. Ультраструктурная и цитохимическая характеристика макрофагов, инфицированных РНК-содержащими вирусами : дисс. .. .докт. биол. наук : 03.00.25 / Плехова Наталья Геннадиевна; [НИИ эпидемиологии и микробиологии СО РАМН]. - Владивосток, 2009. - 330 с.

29. Поражение легких при геморрагической лихорадки с почечным синдромом

- случайность или закономерность / Г.А. Мухетдинова, P.M. Фазыева, Ш.З. Загидуллин, Д.Х. Хунафина. - Современные проблемы науки и образования, 2012. - 33 с.

30. Прокопович, С.К. Дендритные клетки и перспективы их использования в иммунотерапии злокачественных новообразований / С.К. Прокопович, В.Б. Виницкий // Онкология. - 2001. - Т. 3., No 2-3. - С. 126-131.

31. Ровенский, Ю.А. Растровая электронная микроскопия нормальных и опухолевых клеток / Ю.А. Ровенский. - М.: Медицина, 1979. - 151 с.

32. Современные представления об этиопатогенезе папилломавирусной инфекции / И.Н. Кизей, Г.А. Наумчик, Н.Б. Середа // Тихоокеан. мед. журн. -2010.-No3.-C. 10-15.

33. Старикова, Э. А. Особенности адгезии к эндотелиальным клеткам субпопуляций моноцитов CD14++CD16- и CD14+CD16+ человека / Э. А. Старикова, А. М. Лебедева, И. С. Фрейдлин И Цитология. - 2010. - Т 2., No 5.-С. 380-383.

34. Уикли, Б. Электронная микроскопия для начинающих / Б. Уикли. - М. : Мир, 1975.-320 с.

35. Хейхоу, Ф.Г. Гематологическая цитохимия / Ф.Г. Хейхоу, Дж. Д. Кваглино.

- М.: Медицина, 1983. - 320 с.

36. Цитоморфологические особенности дендритных клеток / О.И. Алексеенко, H.H. Храновская, Л.С. Болгова, Ю.А. Гриневич // Цитология и генетика. -2006. - Т. 40., No 1. - С. 66-69.

37. Электронно-микроскопические особенности дендритных клеток, генерированных из стволовых клеток печени эмбрионов и клеток-предшественников костного мозга взрослых мышей / О.В. Лебединская,

C.B. Мелехин, E.A. Лебединская, M.B. Киселевский // Успехи соврем, естествознания. - 2006. - No 10. - С. 84-85.

38. 7th International Conference on Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome, Hantavirus Pulmonary Syndrome and Hantaviruses / A.A. Borges, G.M. Campos, M.Z. Moreli [et al.] // Buenos Aires, Argentina. - 2007. - P. 189.

39. Accelerated neutrophil apoptosis in the acquired immunodeficiency syndrome /

D.L. Pitrak, H.C. Tsai, K.M. Mullane, S.H. Sutton, P. Stevens // J. Clin. Invest. -1996. - V. 98, No 12. - P. 2714-2719.

40. Alterations in the protein composition of maturing phagosomes / A. Pitt, L.S. Mayorga, P.D. Stahl, A.L. Schwartz // J. Clin. Invest. - 1992. - V. 90. - P. 19781983.

41. Amano, F. Improved detection of nitric oxide radical (NO') production in an activated macrophage culture with a radical scavenger, carboxy PTIO, and Griess reagent / F. Amano, T. Nöda // FEBS Lett. - 1995. - V. 368, No 3. - P. 425-428.

42. An advanced culture method for generating large quantities of highly pure dendritic cells from mouse bone marrow / M.B. Lutz [et al.] // J. Immunol. Methods. - 1999. - V. 223. - P. 77-92.

43. Antibody-dependent enhancement of hantavirus infection in macrophage cell lines / J.S. Yao, H. Kariwa, I. Takashima [et al.] // Arch. Virol. - 1992. - V. 122, No 1-2.-P. 107-18.

44. Anti-West Nile virus activity of in vitro expanded human primary natural killer cells / M. Zhang, S. Daniel, Y. Huang [et al.] // BMC Immunology. - 2010. - V. 11,No 3.-P. 1471-2172.

45. Banchereau, J. Dendritic cells and the control of immunity / J. Banchereau, R.M. Steinman // Nature. - 1998. - V. 392. - P. 245-252.

46. Barber, GN. Host defense, viruses and apoptosis / GN. Barber // Cell Death Differ. - 2001. - V. 8, No 2. - P. 113-126.

47. Baskin, H.S. Herpes simplex virus type 2 synergizes with interferon-ß in the induction of nitric oxide production in mouse macrophages through autocrin

secretion of tumour necrosis factor a / H.S. Baskin // Gen. Virol. - 1997. - V. 78. -P. 195-203.

48. Bataki, E.L. Respiratory syncytial virus and neutrophil activation / E.L. Bataki, G.S. Evans, M.L. Everard // Clin. Exp. Immunol. - 2005. - V. 140. - P. 470-477.

49. Blander, J.M. R. Regulation of fagosome maturation by signals from toll-receptors / J.M. Blander, R. Meddzhitov // Science. - 2004. - V.304. - P. 10141018.

50. Borregaard, N. Neutrophils, from Marrow to Microbes / N. Borregaard // Immunity Review. - 2010. - V. 33. - P. 657-670.

51. Brinkmann, V. Beneficial suicide: Why neutrophils die to make NETs / V. Brinkmann, A. Zychlinsky // Nat. Rev. Microbiol. - 2007. - V. 5. - P. 577-582.

52. Buchanan, J. Role of immune function in human papillomavirus infection / J. Buchanan, N.S. Nieland-Fisher // J. Amer. Med. Assoc. - 2001. - V. 286, No 10. -P. 1173-1174.

53. CD4+ T-cell deficiency in HIV patients responding to antiretroviral therapy is associated with increased expression of interferon-stimulated genes in CD4+ T cells / S. Fernandez, S. Tanaskovic, K. Helbig [et al.] // J Infect Dis. - 2011. - V. 204, No 12.-P. 1927-1935.

54. Characterization of Natural Killer Cell Phenotype and Function during Recurrent Human HSV-2 Infection / N.K. Bjorkstrom, A. Svensson, K.-J. Malmberg [et al.] // PLoS ONE. - 2011. - V. 6. - e27664. Режим доступа: [Электронный ресурс]: doi:10.1371/journal.pone.0027664.

55. Chaturvedi, U.C. Macrophage & dengue virus: Friend or foe / U.C. Chaturvedi, R. Nagar, R. Shrivastava // Indian J. Med. Res. - 2006. - V. 124. - P. 23-40.

56. Chen, D. Sulfated polysaccharides and immune response: promotor or inhibitor? / D». Chen, X.Z. Wu, Z.Y. Wen // Panminerva Med. - 2008. - V. 50, No 2. - P. 177-183.

57. Chen, Y.-C. Activation of terminally differentiated human monocytes/macrophages by Dengue virus: productive infection, hierarchical production of innate cytokines and chemokines, and the synergistic effect of

lipopolysaccharide / Y.-C. Chen, S.-Y. Wang // J. Virol. - 2002. - V. 76. - P. 9877-9887.

58. CLEC5A Regulates Japanese Encephalitis Virus-Induced Neuroinflammation and Lethality / S.-T. Chen, R.-S. Liu, M.-F. Wul [et al.] // PLoS Pathogens. - 2012. -V. 8. - el002655. Режим доступа: [Электронный ресурс]: doi: 10.1371/journal.ppat. 1002655

59. Costimulatory molecules on immunogenic versus tolerogenic human dendritic cells / M. Hubo [et al.] // Front Immunol. - 2013. - V. 4, No 82. . Режим доступа: [Электронный ресурс]: doi:10.3389/fimmu.2013.00082/. PMCID: PMC3615188.

60. Coxsackievirus B3-indused apoptosis and caspase-3 / J.P. Yuan, W. Zhao, H.T. Wang [et al.] // Cell. Research. - 2003. - V. 13, No 3. - P. 203-209.

61. CRIg: a macrophage complement receptor required for phagocytosis of circulating pathogens / K.Y. Helmy [et al.] // Cell. - 2006. - V. 124. - P. 915927.

62. Defensin-rich granules of human neutrophils: Characterization of secretory properties / M. Faurschou, O.E. Sorensen, A.H. Johnsen [et al.] // Biochim. Biophys. Acta. - 2002. - V. 1591. - P. 29-35.

63. Deoxyribonuclease is a potential counter regulator of aberrant neutrophil extracellular traps formation after major trauma / W. Meng [et al.]. - Mediators of Inflammation. - 2012. - Article ID 149560. - 8 p. Режим доступа: [Электронный ресурс]: doi: 10.1155/2012/149560.

64. Differential antiviral response of endothelial cells after infection with pathogenic and nonpathogenic hantaviruses / A.A. Krause, M.J. Raftery, T. Giese [et al.] // J. Virol. - 2004. - V. 78, No 12. - P. 6143-6150.

65. Distinct roles of IL-12 and IL-15 in human natural killer cell activation by dendritic cells from secondary lymphoid organs / G. Ferlazzo [et al.] // Proc. Natl. Acad. Sei. U. S. A.-2004. - V. 101.-P. 16606-16611.

66. Early Divergence in Neutrophil Apoptosis between Pathogenic and Nonpathogenic Simian Immunodeficiency Virus Infections of Nonhuman

Primates / С. Elbim, V. Monceaux, Y.M. Mueller [et al.] // J. Immunol. - 2008. -V. 181.-P. 8613-8623.

67. Elbim, C. Neutrophil Apoptosis During Viral Infections / C. Elbim, P.D. Katsikis, J. Estaquier // J. Open Virology. - 2009. - V. 3. - P. 52-59.

68. Enrichment of NK by Negative-Selection with the Lectin from Erythrina cristagalli / D.T. Harris, J.L. Iglesias, S. Argov [et al.] // J. of Leukocyte Biology. - 1987. -V. 42.-P. 163-170.

69. Epstein-Barr Virus Infects and Induces Apoptosis in Human Neutrophils / B. Larochelle, L. Flamand, P. Gourde, D. Beauchamp, J. Gosselin // J. Blood. -1998.-V. 92.-P. 291-299.

70. Excessive Neutrophils and Neutrophil Extracellular Traps Contribute to Acute Lung Injury of Influenza Pneumonitis / T. Narasaraju, E. Yang, R.P. Samy [et al.] //J. Pathology.-201 l.-V. 179,No. l.-P. 199-210.

71. Expression of CCR5 increases during monocyte differentiation and directly mediates macrophage susceptibility to infection by human immunodeficiency virus type 1 / D.L. Tuttle, J. K. Harrison [et al.] // J. Virol. - 1998. - V. 72. - P. 4962-4969.

72. Fang, F.C. Vazquez-Torres A. Nitric oxide production by human macrophages: there's NO doubt about it // Am. J. Physiol. Lung Cell. Mol. Physiol. - 2002. -V.282, No 5. -P.941-943.

73. Fang, M. A role for NKG2D in NK cell-mediated resistance to poxvirus disease / M. Fang, L.L. Lanier, L.J. Sigal // PLoS Pathogen. - 2008. - V. 8. - еЗО. Режим доступа: [Электронный ресурс]: doi: 10.1371/journal.ppat.0040030.

74. Flt3-Ligand, IL-4, GM-CSF, and Adherence-Mediated Isolation of Murine Lung Dendritic Cells: Assessment of Isolation Technique on Phenotype and Function / K.A. Swanson, Y. Zheng, K.M. Heidler [et al.] // J. Immunol. - 2004. - V. 173. -P. 4875-4881.

75. Forslund, O. A broad spectrum of human papillomavirus types is present in the skin of Australian patients with non-melanoma skin cancers and solar keratosis /

О. Forslund, Н. Ly, С. Reid 11 Brit. J. Dermatol. - 2003. - V. 149, No. 1. - P. 6473.

76. Gao, B. Liver natural killer and natural killer T cells: immunobiology and emerging roles in liver diseases / B. Gao, S. Radaeva, O. Park // J. of Leukocyte Biology. - 2009. - V. 86. Режим доступа: [Электронный ресурс]: doi:10.1189/jlb.0309135.

77. Gordon, S. The macrophage: past, present and future / S. Gordon // Eur. J. Immunol. - 2007.-V. 37, No 1 - P. 9-17.

78. Greenberg, S. Phagocytosis and innate immunity / S. Greenberg, S. Grinstein // Curr. Opin. Immunol. - 2002. - V. 14. - P. 136-145.

79. Hantaan virus infection of human endothelial cells / M.N. Pensiero, J.B. Sharefkin, C.W. Dieffenbach, J. Hay // J. Virol. - 1992. - V. 66. - P. 5929-5936.

80. Hantavirus Pulmonary syndrome caused by European Puumala Hantavirus / J. Rasmuson, Ch. Andersson, E. Norrman [et al.] // VIII International conference on HFRS, HPS & Hantaviruses. - Athens, Greece, 2010. - P. 158.

81. Hantavirus pulmonary syndrome. Pathogenesis of an emerging infectious disease / S.R. Zaki, P.W. Greer, L.M. Coffield [et al.] // Am. J. Pathol. - 1995. - V. 146. -P.552-579.

82. Hantavirus-induced immunity in rodent reservoirs and humans / G. Schonrich, A. Rang, N. Lutteke [et al.] // Immunol. Rev. - 2008. - V. 225, No 1. - P. 163-189.

83. HIV-1-infected monocyte-derived dendritic cells do not undergo maturation but can elicit IL-10 production and T cell regulation / A. Granelli-Piperno, A. Golebiowska, C. Trumpfheller [et al.] // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. - 2004. -V. 101,No 20.-P. 7669-7674.

84. HIV-activated human plasmacytoid DCs induce Tregs through an indoleamine 2,3-dioxygenase-dependent mechanism / O. Manches, D. Munn, A. Fallahi [et al.] // J. Clin. Invest. - 2008. - V. 118, No 10. - P. 3431-3439.

85. Holland, S.M. Chronic granulomatous disease / S.M. Holland // Clin. Rev. Allergy Immunol. - 2010. - V. 38. - P. 3-10.

86. Human neutrophil defensins increase neutrophil uptake of Influenza A virus and bacteria and modify virus-induced respiratory burst responses / T. Tecle, M.R. White, D. Gantz [et al.] // J. Immunol. - 2007. - V. 178. - P. 8046-8052.

87. Human neutrophil defensins selectively chemoattract naive T and immature dendritic cells / D. Yang, Q. Chen, O. Chertov, J.J. Oppenheim // J. Leukoc. Biol. -2000. - V. 68, No 9.-P. 14.

88. IL-22 Signaling Contributes to West Nile Encephalitis Pathogenesis / P. Wang, F. Bai, L.A. Zenewicz [et al.] // PLoS ONE. - 2012. - V. 7, No 8. e44153. Режим доступа: [Электронный ресурс: doi:10.1371/journal.pone.0044153

89. Impact of neutrophils on antiviral activity of human bronchoalveolar lavage fluid / M.R. White, T. Tecle, E.C. Crouch, K.L. Hartshorn // Am. J. Physiol. Lung. Cell. Mol. Physiol. - 2007. - V. 293. - P. 1293-1299. Режим доступа: [Электронный ресурс]: doi: 10.1152/ajplung.00266.2007.

90. Innate immunity against vaccinia virus is mediated by TLR2 and requires TLR-independent production of IFN-p / J. Zhu, J. Martinez, X. Huang, Y. Yang // J. Blood. - 2007. - V. 109. - P. 619-625.

91. Kim, M. Bidirectional transmembrane signaling by cytoplasmic domain separation in integrins / M. Kim, C.V. Carma, T.A. Springer // Science. - 2003. -V.301.-P. 1720-1725.

92. Lanier, L.L. Evolutionary struggles between NK cells and viruses / L.L. Lanier // Nat. Rev. Immunol. - 2008. - V. 8. - P. 259-268.

93. Lanier, L.L. NK cell recognition / L.L. Lanier // Annu. Rev. Immunol. - 2005. -V. 23.-P. 225-74.

94. Lin, M. Facilitation of neutrophil migration through the corneal stroma during keratitis-MMP-8 and chemokines: dissertation of candidate for the Ph.D. degree / Lin Michelle; [Case Western Reserve University]. - 2008. -127 p.

95. Low CD4+ T cell count is a risk factor for cardiovascular disease events in the HIV outpatient study / K.A. Lichtenstein, C. Armon, K. Buchacz [et al.] // Clin. Infect. Dis. - 2010. - V. 51, No 4. - P. 435-447.

96. Lunemann, A. Regulatory NK-Cell Functions in Inflammation and Autoimmunity / A. Lunemann, J.D. Lunemann, C. Munz // Mol. Med. - 2009. - V. 15, No 9-10. -P. 352-358.

97. Macrophage tropism of rabbit hemorrhagic disease virus is associated with vascular pathology / F. Ramiro-Ibänez, J.M. Martin-Alonsob, P.G. Palenciaa [et al.] // Virus Research. - 1999. - V. 60. - P. 21-28.

98. Martinez, J. Direct TLR2 Signaling Is Critical for NK Cell Activation and Function in Response to Vaccinia Viral Infection / J. Martinez, X. Huang, Y. Yang // PLoS Pathogens. - 2010. - V. 6, No 3. - el000811. Режим доступа: [Электронный ресурс]: doi: 10.1371/journal.ppat. 1000811.

99. Mechanisms of neutrophil death in human immuno deficiency virus infected patients: role of reactive oxygen species, caspases and map kinase pathways / S. Salmen, H. Montes, A. Soyano [et al.] // Clin. Exp. Immunol. - 2007. - V. 150. -P. 539-545.

100. Modlin, R.L. Mammalian toll-like receptors / R.L. Modlin //Ann. Allrgy Asthma Immunol. - 2002. - V. 88. - P. 543-547.

101. Molecular mechanisms of HIV-1 persistence in the monocyte-macrophage lineage / V. Le Douce, G. Herbein, O. Rohr, С. Schwartz // Retrovirology. -2010. - V. 7, No 32. Режим доступа: [Электронный ресурс]: http://www.retrovirology.eom/content/7/l/32.

102. Monocytes-macrophages are a potential target in human infection with West Nile virus through blood transfusion Transfusion / M. Rios, M. J. Zhang, A. Grinev [et al.] // Trunsfusion. - 2006. - V. 46. - P. 659-662.

103. Mosser, D.M. Exploring the full spectrum of macrophage activation / D.M. Mosser, J.P. Edwards // Nat. Rev. Immunol. - 2008. - V. 8. - P. 958-969.

104. Munn, D.H. IDO and tolerance to tumors / D.H. Munn, A.L. Mellor // Trends. Mol. Med. -2004. - V. 10, No l.-P. 15-18.

105. Neutrophil extra-cellular traps contain calprotectin, a cytosolic protein complex involved in host defense against Candida albicans / C.F. Urban, D. Ermert, M.

Schmid [et al.] // PLoS Pathog. - 2009. - V. 5, No 10. - el000639. Режим доступа: [Электронный ресурс]: doi: 10.1371/journal.ppat. 1000639.

106. Nicod, L. P. Dendritic cells in the respiratory tract / L. P. Nicod, L. Cochand // Academic Press, Inc., San Diego, Calif. - 2001. - P. 315-323.

107. NK cell activation through the NKG2D ligand MULT-1 is selectively prevented by the glycoprotein encoded by mouse cytomegalovirus gene ml45 / A. Krmpotic [et al.] // J. Exp. Med. - 2005. - V. 201. - P. 211-220.

108. NKG2D-mediated natural killer cell protection against cytomegalovirus is impaired by viral gp40 modulation of retinoic acid early inducible 1 gene molecules / M. Lodoen [et al.] // J. Exp. Med. - 2003. - V. 197. V P. 1245-1253.

109. Nonpathogenic SIV infection of African green monkeys induces a strong but rapidly controlled type IIFN response / B. Jacquelin, V. Mayau, B. Targat [et al.] // J. Clin Invest. - 2009. - V. 119, No 12. - P. 3544-3555.

110. Novel cell death program leads to neutrophil extracellular traps / T.A. Fuchs, U. Abed, C. Goosmann [et al.] // J. Cell. Biol. - 2007. - V. 176, No. 2. - P. 231-241.

111. Novikoff, A.B. Visualisation of peroxisomes (microbodies) and mitochondria with diaminobenzidine / A.B. Novikoff, S. Goldfischer // J. Histochem. Cytochem. - 1969. - V. 17. - P.675-680.

112. O'Brien, M. Plasmacytoid Dendritic Cells in HIV Infection / M. O'Brien, O. Manches, N. Bhardwaj // Adv. Exp. Med. Biol. - 2013. -V. 762. P. 71-107.

113. Pappworth, I.Y. The switch from latent to productive infection in Epstein-Barr virus-infected В cells is associated with sensitization to NK cell killing/ I.Y. Pappworth, E.C. Wang, M. Rowe // J. Virol. - 2007. - V. 81. - P. 474-482.

114. Pathogenic hantaviruses elicit different immunoreactions in THP-1 cells and primary monocytes and induce differentiation of human monocytes to dendritic-like cells / A. Markotic, L. Hensley, K. Daddario [et al.] // Coll. Antropol. - 2007. -V. 31,No4.-P. 1159-1167.

115. Phenotypic and functional change of cytokine-activated neutrophils: inflammatory neutrophils are heterogeneous and enhance adaptive immune

responses / Y. Shigeo, К. Hidenobu, W. Ji-Ming [et al.] // J. Leukocyte Biology. -2001.-V. 69.-P. 168-704.

116. Plasmacytoid Dendritic Cells Capture and Cross-Present Viral Antigens from Influenza-Virus Exposed Cells / G. Lui, О. Manches, J/ Angel {et al.] // PLoS ONE. - 2009. - V. 4. - e7111. Режим доступа: [Электронный ресурс]: doi: doi: 10.1371 /journal.pone .0007111.

117. Rapid expansion and long-term persistence of elevated NK cell numbers in humans infected with hantavirus / N.K. Bjorkstrom, T. Lindgren, M. Stoltz [et al.]//J. Exp. Med. -2011.-V. 208, No l.-P. 13-21.

118. Regulation of phagosomal acidification. Differential targeting of Na+/H+ exchangers, Na+/K+-ATPases, and vacuolar-type H+-atpases / D.J. Hackam, O.D. Rotstein, W.J. Zhang [et al.] // J. Biol. Chem. - 1997. - V. 272. - P. 2981029820.

119. Regulatory T cell-like responses in deer mice persistently infected with Sin Nombre virus / T. Schountz, J. Prescott, A.C. Cogswell [et al.] // Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A.-2007.-V. 104.-P. 15496-15501.

120. Robinson, J.M. Phagocytic leukocytes and reactive oxygen species/ J.M. Robinson // Histochem. Cell. Biol. - 2009. - V. 131. - P. 465-469.

121. Robinson, J.M. Reactive oxygen species in phagocytic leukocytes / J.M. Robinson // Histochem. Cell. Biol. - 2008. - V. 130. - P. 281-297.

122. Role of macrophages in the pathogenesis of experimental tick-borne encephalitis in mice / V.V. Khozinsky, B.F. Semenov, M. Gresikova [et al.] //Acta. Virol. -1985.-V. 29.-P. 194-202.

123. Schulz, К. Réévaluation of the Griess method for determining N0/N02- in aqueous and protein-containing samples / K. Schulz, S. Kerber, M. Keim // Nitric. Oxide. - 1999. - V. 3, N 3. - P. 225-234.

124. Sensitization of resting T cells to autologous natural-killer-cell-mediated lysis by Phytohämagglutinin / L. Baraz, M. Kotler, R. Condiotti, A. Nagler // Cancer Immunology, Immunotherapy. - 1999. -V. 48, No 9. - P. 507-516.

125. Settergren, В. Clinical aspects of nephropathia epidemica (Puumala virus infection) in Europe: a review / B. Settergren // Scandinavian J. Infect. Diseases. - 2000. - V. 32, No 2. - P. 125-132.

126. Shortman, K. Steady-state and inflammatory dendritic-cell development / K. Shortman, S.H. Naik // Nat. Rev. Immunol. - 2007. - V. 7. - P. 19-30.

127. Silva, M.T. Neutrophils and macrophages work in concert as inducers and effectors of adaptive immunity against extracellular and intracellular microbial pathogens / M.T. Silva // J. Leukocyte Biology. - 2010. - V. 87. Режим доступа: [Электронный ресурс]: doi:10.1189/jlb.l 109767.

128. Simonet, M. Role of virulence-associated plasmid in the uptake and killing of Yersinia pseudotuberculosis by resident macrophages / M. Simonet, J.L. Fauchere, P. Berche // Ann. Inst. Pasteur/Microbiol. - 1985. - V. 136. - P. 283294.

129. Spatiotemporal regulation of MyD88-IRF-7 signalling for robust type-I interferon induction / K. Honda, Y. Ohba, H. Yanai [et al.] // Nature. - 2005. - V. 434, No 7036.-P. 1035-1040.

130. Steinman, R.M. Dendritic cells: translating innate to adaptive immunity / R.M. Steinman, H. Hemmi // Curr. Top. Microbiol. Immunol. - 2006. - V. 311. - P. 17-58.

131. Steinman, R.M. The dendritic cell system and its role in immunogenicity / R.M. Steinman // Annu. Rev. Immunol. - 1991. - V. 9. - P. 271 -296.

132. Susceptibility of human cells to Puumala virus infection / M. Temonen, O. Vapalahti, H. Holthofer [et al.] // J. General Virology. - 1993. - V. 74. - P. 515518.

133. Takeda, K. CAM and NK Cells / K. Takeda, K. Okumura // eCAM. - 2004. - V. 1,No l.-P. 17-27.

134. Targeting of mature dendritic cells by human cytomegalovirus: a multilayered viral defense strategy / M. J. Raftery, M. Schwab, S. Eibert [et al.] // Immunity. -2001.-V. 15.-P. 997-1009.

135. The cytomegalovirus m 155 gene product subverts NK cell antiviral protection by disruption of H60-NKG2D interactions / M. Lodoen [et al.] // J Exp Med. - 2004. -V. 200. - P. 1075-1081.

136. The herpesviral Fc receptor fcr-1 down-regulates the NKG2D ligands MULT-1 and H60 / T. Lenac [et al.] // J. Exp. Med. - 2006. - V. 203. - P. 1843-1850.

137. The identification of markers of macrophage differentiation in PMA-stimulated THP-1 cells and monocyte-derived macrophages / M. Daigneault, J.A. Preston, H.M. Marriott [et al.] // PLoS ONE. - 2010. - V. 5. - e8668. Режим доступа: [Электронный ресурс]: doi: 10.1371/journal.pone.0008668.

138. The inhibitory receptor NKG2A determines lysis of vaccinia virus-infected autologous targets by NK cells / C.R. Brooks, T. Elliott, P. Parham, S.I. Khakoo // J Immunol. -2006. - V. 176.-P. 1141-1147.

139. The transmembrane domains of L-selectin and CD44 regulate receptor cell surface positioning and leukocyte adhesion under flow / K. Buscher, S.B. Riese, M. Shakibaei [et al.] // J. Biol. Chem. - 2010. - V. 285. - P. 13490-13497.

140. Unique monocyte subset in patients with AIDS dementia / L. Pulliam, R. Gascon, M. Stubblebine [et al.] // Lancet. - 1997. - V. 349. - P. 692-695.

141. Vo, T.S. Potential anti-HIV agents from marine resources: an overview / T.S. Vo, S.K. Kim // Mar. Drugs. - 2010. - V. 8. - P. 2871-2892.

142. Witko-Sarsat, V. Neutrophils: molecules, functions and pathophysiological aspects / V. Witko-Sarsat, P. Rieu // Lab. Invest. - 2000. - V. 80, No 5. - P. 61753.

143. Yrlid. U. Relationships between distinct blood monocyte subsets and migrating intestinal lymph dendritic cells in vivo under steady-state conditions / U. Yrlid, C.D. Jenkins, G.G. MacPherson//J. Immunol. -2006. -V. 176. - P. 4155-4162.

144. Ziegler-Heitbrock, L. The CD 14+ CD 16+ blood monocytes: their role in infection and inflammation / L. Ziegler-Heitbrock // J. Blood. - 2007. - V. 81. - P. 584592.

145. (32 integrin mediates hantavirus-induced release of neutrophil extracellular traps / M.J. Raftery, P. Lalwani, E. Krautkramer [et al.] // The Rockefeller University

Press.

126

2014. Режим доступа: [Электронный ресурс]:

doi: 10.1084/jem.20131092.