Митогеноактивные метаболиты стафилококков тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат биологических наук Илюшин, Вячеслав Александрович

• Илюшин, Вячеслав Александрович
• кандидат биологических наук
• 1984

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Илюшин, Вячеслав Александрович

ВВЕДЕНИЕ

1. Обзор литературы

1.1. Митогены лимфоцитов бактериальной природы

1.2. Поликлональные митогены стафилококка 19 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 3?

2. Материалы и методы исследований

3. Результаты исследований и их обсуждение

3.1. Митогенные свойства различных препаратов, 55 полученных из золотистого стафилококка

3.2. Митогенная активность и характеристика про- 57 дуктовк метаболизма различных штаммов золотистого и эпидермального стафилококков

3.3. Выделение и характеристика митогена золо- 70 тистого стафилококка

3.3.1. Стабильность очищенного митогена в раз- 85 ных режимах хранения и возможность консервации

3.4. Природа стимулирующего эффекта митогена зо- 87 лотистого стафилококка

3.4.1. Обоснование поликлональности реакции 87 лимфоцитов

3.4.2. Отношение к Т- и В-лимфоцитам

3.4.3. Особенности индивидуальной реактивности 94 человека к митогену золотистого стафилококка

3.5. Опыт клинической апробации митогена золотис- 96 того стафилококка

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Митогеноактивные метаболиты стафилококков»

Одним из главных направлений современной иммунологии является поиск препаратов и методов, при помощи которых можно было бы надежно дифференцировать различные функциональные варианты лимфоцитов, изучать их нормальную реактивность, диагностировать нарушения и, в конечном счете, выбирать адекватную тактику лечения (Н.А.Краскина, 1976; А.Е.Вершигора, 1980; Р.Н.Степанен-ко, В.И.Новиков, 1981; Р.В.Петров, 1982; Chess, Schlossman, 1977; Haynes и соавт., 1980). Именно это определяет повышенный интерес к агентам, которые способны с большей или меньшей избирательностью реагировать с субпопуляциями лимфоцитов, выявляя их функциональный потенциал. Наиболее известную группу таких веществ составляют митогены, которые вызывают пролиферативную реакцию лимфоцитов, известную как феномен бласттрансформации (А.Е. Вершигора, 1980; Noweli I960, 1976; Ling и соавт., 1965; Cunningham 1976; Rynnel-Dagöö И соавт., 1978; Rosanen и соавт., 1980). В широком смысле, к ним относят все антигены, которые активируют строго определенные клоны лимфоцитов, а потому могут быть обозначены как моноклональные митогены. Однако особый интерес вызывает феномен неспецифической или поликлональной стимуляции лимфоцитов. Вещества, которые его вызывают, получили название неспецифических или поликлональных митогенов ( Howell, 1976). Полагают, что явления, подобные поликлональной активации, наблюдаются в ходе любого иммунологического процесса, а потому занимают ключевую позицию в рамках проблем общей и прикладной иммунологии (Н.В.Медуницин, 1979, 1980; Н.А.Прилепин, Б.Ф.Семенов, 1980; Р.Н.Степаненко, В.И.Новиков, 1981; В.А.Ляшенко, А.А.Воробьев, 1982; Howell 1976; Pernandes Möller 1977; Ranek, Forsgren 1978; Wojskowicz 1978; Rosanen и соавт., 1980).

С момента открытия митогенного эффекта фитогемагглютинина ( Howell I960) обнаружен ряд субстанций, действующих по типу поликлоналъных стимуляторов (Cunningham и еоавт., 1976). Их число постоянно растет, отражая стремление к аналитическим разработкам на уровне субпопулявдюнной структуры лимфоцитов и к познанию тех механизмов, которые лежат в основе физиологии и патологии иммунной системы. Расширение исследований в этом направлении позволит разработать новые диагностические препараты, которые окажут несомненную пользу фундаментальной и прикладной иммунологии.

Одним из самых интересных и разнообразных источников мито-генов служат бактерии (А.Н.Маянский, 1980; Banck, Forsgren 1978; Wojskowicz 1978; Rasanen и соавт., 1980). Известно множество примеров, которые"позволяют думать, что поликлональ -ная активация лимфоцитов в том или ином масштабе всегда сопутствует реакциям в системах "хозяин-микроб", что она выступает как один из общих факторов противоинфекционной резистентности и, подобно другим иммунологическим механизмам, иногда "срабатывает против хозяина", участвуя в развитии иммунопатологического про -цесса (Т.Н.Александрова, 1976; Н.В.Медуницин, 1979; Н.А.Прилепин, Б.Ф.Семенов, 1980; В.К.Позур и соавт., 1981; Fumarolla 1970; Taranta 1974; Dean и соавт., 1975; Schell, Lawrence 1977; Banck, Forsgren 1978; Monier 1979; Yo Kochi и соавт.,1981; Nakahima и соавт., 1981; Dziarski 1980, 1982; Rasanen, Ar-vilomi 1982; Cavaillon и соавт., 1983). В известном смысле по-ликлональные митогены бактерий можно уподобить аллергенам, но с более мощным и универсальным потенциалом. Полагают, что они могут выступать как факторы, инициирующие один из важнейших неиммунологических механизмов инфекционной аллергии (А.Н. Маянский,1979, 1980; Sedwick и соавт., 1981; Ezimusie, Assem 1983). Это определяет еще один аспект проблемы, связанной с изучением реактивности лимфоцитов к поликлональным митогенам на уровне общей системы структурного гомеостаза, клеточных и тканевых мишеней.

Несмотря на исключительный интерес, проявляемый к поликлональным митогенам, многие из них изучены пока с феноменологи -ческих позиций. Большинство бактериальных препаратов с митоген-ными свойствами известны как сложные субстраты и до сих пор не охарактеризованы в чистом виде. Ни один из них (за исключением липополисахаридов энтеробактерий и белка А золотистого стафилококка) не внедрен в производство и не включен в стандартный ассортимент поликлональных стимуляторов, используемых клинической и экспериментальной иммунологией.

Стафилококки явились одним из первых видов бактерий, у которых была обнаружена митогенная активность ( Ling и соавт. 1965). Анализ литературы показывает, что среди различных микроорганизмов, обладающих митогенными свойствами, золотистый стафилококк является наиболее активным продуцентом лимфоцитарных ми-тогенов (А.Н.Маянский, 1980; Taranta 1974; Wojskowicz 1978; Banck, Forsgren 1978; Rasanen И соавт., 1980; Banck 1982). Это пример сложного, в митогенном отношении, субстрата, который включает комплекс поликлональных стимуляторов лимфоцитов человека и животных. Некоторые из них хорошо проанализированы (белок А), либо внимательно исследуются (энтеротоксин, пептидогликан). Однако они не исчерпывают всей проблемы. Представляется вероятным, что у золотистого стафилококка или его отдельных штаммов имеется "специализированный" митогеноактивный субстрат, который до сих пор изучен слабо. Это, в частности, относится к митогенам,содержащимся в продуктах метаболизма стафилококков (Kreiger и соавт., 1972; Taranta 1974).

Целью наших исследований была характеристика митогеноак -тивных метаболитов золотистого стафилококка и получение на их основе очищенного поликлонального митогена лимфоцитов человека.

В работе были поставлены следующие основные задачи:1. Разработать способ получения продуктов метаболизма золотистого стафилококка с высокой митогенной активностью.

2. Изучить митогенную активность разных штаммов золотистого и эпидермального стафилококков, отобрать штаммы для выделения митогеноактивных метаболитов.

3. Определить отношение митогенных метаболитов к другим биологически активным продуктам стафилококков.

4. Разработать способ очистки митогенов стафилококка на основе молекулярных параметров.

5. Дать характеристику митогеноактивных метаболитов по физико-химическим, иммунохимическим, биохимическим и иммунобиологическим свойствам.

6. Изучить особенности реакций лимфоцитов здоровых людей и больных инфекционно-аллергическими заболеваниями к митогену золотистого стафилококка.

Научная новизна работы. Впервые дана подробная характеристика стафилококков по новому биологическому признаку - содержанию митогеноактивных метаболитов, вызывающих феномен поликло -нальной стимуляции лимфоцитов человека. Показана фенотипическая стабильность признака и его независимость от других проявлений биологической активности стафилококков. Из продуктов метаболизма золотистого стафилококка выделена фракция со свойствами по-ликлональных митогенов, доказана ее обособленность от антигенного комплекса стафилококков, коагулазы, гемолизина, протеазы, белка А, нейтрофилстимулирующих факторов, отсутствие связи с фаготипом штаммов. Определена термостабильность препарата, чувствительность к протеолитическим ферментам, возможность консервации. Установлено, что иммунохимически инертный материал, полученный при помощи специфической иммуносорбции, полностью сохраняет митогенные свойства. Показано взаимодействие стафилококкового митогена с фракциями, обогащенными Т- и В-лимфоцитами, обнаружено своеобразие ответа лимфоцитов человека на митоген стафилококка и фитогемагглютинин. Установлено значительное снижение реактивности к митогеноактивным метаболитам стафилококка у лимфоцитов, вццеленных от больных с инфекционно-аллергической патологией.

Практическая значимость. Создана коллекция штаммов золотистого стафилококка с известными митогенными свойствами. Отобран штамм золотистого стафилококка, продукты метаболизма которого обладали высокой митогенностью и отсутствием или низким содержанием других биологически активных компонентов. Штамм продуцент (И-78) принят в коллекцию культур микроорганизмов в Государственный институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им.Л.А.Тарасевича. Разработан эффективный способ получения очищенных митогеноактивных метаболитов золо -тистого стафилококка ("Инструкция по изготовлению и контролю по-ликлонального лимфоцитарного митогена золотистого стафилококка", утвержденная Казанским НИИЭМ МЗ РСФСР", протокол Ш от 16.07. 1982 г.). Митоген золотистого стафилококка апробирован в ряде научно-практических учреждений и рекомендован для изучения функционального состояния лимфоцитов in vitro. Результаты исследований вошли в регламент производства (JS 6а-81) и ТУ 42 КВС (JS IIa-81) "Аллерген золотистого стафилококка". В процессе работыоформлено и внедрено 8 рационализаторских предложений.

На защиту выносятся следующие основные положения диссертации:1. Продукты метаболизма золотистого стафилококка содержат митогенные факторы, которые обособлены от других биологически активных компонентов бактериальной клетки.

2. Митогеноактивные метаболиты золотистого стафилококка обладают свойствами поликлональных митогенов и могут быть включены в ассортимент препаратов, используемых для оценки функционального состояния лимфоцитов человека.

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Илюшин, Вячеслав Александрович

109 ВЫВОДЫ

1. Из продуктов метаболизма золотистого стафилококка выделена фракция с мол.массой 16000-24000, которая неспецифически стимулирует пролиферацию лимфоцитов человека. Поликлональ-ная природа митогена доказана в опытах по изучению уровня стимуляции, кинетики реакции, данными о высокой чувствительности лимфоцитов крови новорожденных, универсальной чувствительности к препарату лимфоцитов здоровых доноров.

2. Мит о ге ноактивные метаболиты обнаружены в культурах более 80$ штаммов золотистого стафилококка и отсутствовали у 34 изученных штаммов эпидермального стафилококка.

3. Штаммы золотистого стафилококка неоднородны по митоген-ным свойствам. Признак фенотипически стабилен и хорошо сохраняется в музейных культурах.

4. Степень митогенности продуктов метаболизма стафилококков не была связана с коагулазной, альфа-гемолитической, энте-ротоксической, дермонекротической, протеазной активностью, содержанием белка А, нейтрофилстимулирующими свойствами, фаготи-пом штаммов. Обособленность митогенных факторов от других им-мунохимических и биологически активных продуктов метаболизма стафилококка подтверждена иммунохимическим анализом фракций, полученных при фракционировании препаратов с помощью гель-хроматографии и специфической иммуносорбции.

5. Митогеноактивные метаболиты золотистого стафилококка устойчивы к прогреванию (П0°С - 10 мин), частично инактивиру-ются проназой и трипсином, выдерживают длительное хранение при -20°С. После лиофилизации активность препарата полностью сохраняется в течение 3-х лет.

6. Реактивность лимфоцитов к митогену стафилококка не коррелировала с ответом на фитогемагглютинин (ФГА). Препарат оказывал стимулирущее воздействие на фракции, обогащенные Т- и В-лшлфоцитами. Реакция Т-лимфоцитов проявлялась сильнее, однако специфичность ответа была выражена слабее, чем у ФГА.

7. Установлено значительное снижение реактивности к мито-гену стафилококка лимфоцитов у большинства (83$) больных с ин-фекционно-аллергическими заболеваниями (бронхиальная астма, астматический бронхит). Тестирование с митогеном стафилококка позволило вскрыть такие нарушения в системе клеточного иммунитета, которые не диагностировались по реакциям с ФГА.

8. Препарат "Поликлональный лимфоцитарный митоген золотистого стафилококка (ПШО)" может быть рекомендован для включения в ассортимент реагентов, предназначенных для изучения функционального состояния лимфоцитов ин витро.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Возрастающий интерес к поликлональныгл митогенам отражает многогранность и весомость феномена стимуляции лимфоцитов в рамках проблем общей и прикладной иммунологии, штогены вызывают функциональную трансформацию лимфоцитов с появлением клеток, обладающих новыми эффекторными возможностями в реакциях иммунитета, аллергии и в общей системе гуморально-клеточной кооперации. Расширение исследований в этом направлении позволит разработать новые препараты, которые смогут быть широко использованы в клинической и экспериментальной иммунологии.

Одним из важнейших источников поликлональных митогенов являются бактерии, которые содержат компоненты,- воздействующие на различные субпопуляции и функциональные варианты лимфоцитов (А.Н.Маянский, 1980; Wojskowier , 1978; Hasanen и соавт., 1980). По-видимому, элементы поликлональной активации лимфоцитов в том или ином масштабе всегда сопутствуют реакциям в системе хозяин-микроб. Есть мнение, что в этом проявляется один из общих механизмов противоинфекционной резистентности, который иногда "срабатывает против хозяина", участвуя в развитии иммунопатологического процесса ( Petit, Uvanue , 1974; Waldman и соавт., 1976; Birg и соавт., 1981; Sedwick и соавт., 1981; Ezimusic, Assem, 1983). Это определяет еще один аспект проблемы, связанный с изучением эффекторных функций лимфоцитов на уровне клеточных и тканевых мишеней.

Стафилококки явились одним из первых бактериальных объектов, у которых была обнаружена высокая митогенная активность ( Ling и соавт., 1965). Однако до сих пор многие аспекты данной проблемы изучены слабо. Это прежде всего касается принципиального вопроса: существует ли у стафилококка "специализированный" митогенный субстрат, обособленный от других биологически активных компонентов, каковы его функциональные и физико-химические параметры, каким образом он распределен среди штаммов стафилококка. За последние годы появились сообщения о митогенных свойствах некоторых шорошо очищенных компонентов золотистого стафилококка (белок А, энтеротоксины, пептидогликан). Однако вряд ли ими исчерпывается митогенная функция стафилококка. Б продуктах его метаболизма содержатся, по-видимому, другие вещества со свойствами поликлональных митогенов (А.Н.Маянский, 1978, 1980; "Кхеццет и соавт., 1972).

Целью наших исследований была характеристика митогеноак-тивных метаболитов различных штаммов стафилококка, изучение степени их обособленности в комплексе биологически активных веществ бактериальной клетки и продуктов ее.метаболизма, отбор штамма-продуцента и разработка метода получения очищенного препарата со свойствами поликлональных митогенов для лимфоцитов человека .

Нашей первой задачей было сопоставление митогенных свойств различных субстратов, приготовленных из золотистого стафилококка. Для изучения был отобран штамм $ 78, фильтрат которого, по предварительным данным, обладал выраженной митогенной активностью. Сравнивали следующие препараты: фильтраты 5-суточных культур, выращенных на бульоне Мартена-Хоттингера и среде 199 (метод Линга), фильтрат 5-суточной культуры, полученной на диализате бульона Мартена-Хоттингера (выращивание в диализном мешке), механический и ультразвуковой дезинтеграт бактериальных клеток, клеточные стенки, фракции мембрай, цитоплазма.

Наибольшей активностью обладал препарат, полученный на диализате бульона Мартена-Хоттингера; митогенность клеточных фракций была выражена слабо. Это говорит о том, что большинство компонентов со свойствами лимфоцитарных митогенов является продуктами метаболизма стафилококков и практически не накапливается в клетках. На этом основании способ выращивания культур в диализных мешках был принят как основной метод в наших исследованиях. Таким путем удавалось получить препараты, которые были значительно активнее, чем митогены, изготовленные по известному методу Ling и соавт. (1965).

Дальнейшие исследования предусматривали характеристику ми-тогеноактивных свойств различных видов стафилококка и особенностей штаммов внутри вида, отбор стафилококковых культур для коллекции с известными митогенными свойствами, анализ фенотипи-ческой стабильности этого признака и его отношение к другим проявлениям биологической активности стафилококков. Митогенные свойства изучены у 85 штаммов золотистого и 34 штаммов эпидер-мального стафилококка. Одновременно в продуктах метаболизма определяли содержание других структурных и биологически активных продуктов стафилококка: содержание общего белка, белковый и антигенный профиль, коагулазу, протеазу, альфа-токсин, дермонек-ротоксин, энтеротоксин (типы А, Б, Cj, Cg, Д, Е), белок А, ней-трофилстимулирущие свойства.

Митогенной активностью обладали 75 из 85 штаммов золотистого стафилококка, препараты эпидермального стафилококка были неактивны. Штаммы золотистого стафилококка были неоднородны по митогенным свойствам: число бластов 72-часовых культур лимфоцитов, стимулированных препаратами из разных штаммов, колебалось от 0,0 до 36,0$. Митогенная функция характеризовалась стабильностью: препараты, которые готовили на протяжении двух и более лет из одних и тех же штаммов, были близки по митогенной активности или во всех случаях лишены ее.

Степень митогенности фильтратов не коррелировала с коагу-лазной, протеазной, альфа-токсической, энтеротоксической и дермонекротической активностью, содержанием общего белка и белка А. Митогенность не выявлялась как признак, характерный для определенных фаготипов или фагогрупп:штаммы в пределах одного фаго-типа обладали разным уровнем митогенной активности. Низкие показатели стимуляции лимфоцитов не были связаны с токсичностью препаратов. Культуры с разным уровнем митогенного эффекта существенно не различались по жизнеспособности.Не установлено зависимости между митогенностыо препаратов и количественным содержанием белковых и антигенных компонентов-.белковый профиль включал 21-32 фракции, антигенный -23-32 компонента;все они были одинаково распределены в препаратах с разным уровнем митогенной активности.Не удалось выявить соответствия между показателями стимуляции и ней-трофилов человека:способностью активировать кислородзависимый метаболизм нейтрофилов в равной мере обладали фильтраты золотистого стафилококка с различной митогенной активностью и неактивные по этому признаку препараты эпидермального стафилококка.

Для изучения возможности очистки митогеноактивных метаболитов золотистого стафилококка от инертного балласта нами проведен анализ фракций, полученных при помощи гель-фильтрации на сефадексе Г-50. Изучено 19 серий препаратов из штаммов $78, "Сахаров", Б-59. Митогеноактивные метаболиты выходили в составе фракций с мол. массой 14000-24000, в виде двух основных пиков -мол.м. 17000-23000. Для дальнейших исследований объединенная фракция элюата с мол.массой 16000-24000 была использована в качестве очищенного митогена ( штамм № 78). Она содержала 90 -92$ белка, 6-8$ углеводов, 1-2$ нуклеиновых кислот. Расчет выхода белка, митогенной активности и степени очистки митогеноактивных метаболитов по удельной активности показали, что выход белка, относительно наносимого на колонку в среднем соответствовал 2,1$, выход митогенности - 140$, степень очистки достигала 66,6 раз.

Увеличение выхода митогенной активности в выделенной фракции по сравнению с неочищенным субстратом может быть обусловлено наличием ингибиторов реакции бласттрансформации в продуктах метаболизма золотистого стафилококка.

Из 32 антигенов, обнаруженных в цельном препарате, очищенная фракция включала 2-3 компонента, которые выявлялись в виде слабых линий преципитации. Для дополнительного изучения антигенных свойств проведена иммунизация кроликов очищенной митогенной фракцией. Несмотря на интенсивную схему иммунизации, полученная сыворотка выявляла 2-3 антигена. Эта реакция практически не отличалась от опытов с сывороткой против цельного препарата; столько же антигенов проявлялось и в исходном субстрате. Поскольку иммунизация служит одним из чувствительных способов выявления антигенных примесей, эти опыты свидетельствуют о достаточной очистке митогенной фракции от большинства антигенов, входящих в состав продуктов микробного метаболизма. Для окончательного решения вопроса об отношении выявленных антигенов к митогенной функции, очищенную фракцию сорбировали на сефарозе, связанной с глобулиновой фракцией, которую выделяли из специфической сыворотки против цельного препарата. Иммунохимически неактивный препа -рат, полученный после такой обработки, полностью сохранял мито-генные свойства. К этому следует добавить, что фракция с мол.м. более 14000, содержавшая все антигены цельного препарата, была лишена или обладала незначительной митогенной активностью. Следует отметить, что Ling и соавт. (1965) также наблвда-ли торможения митогенного эффекта при добавлении в культуру лимфоцитов в качестве стимулирующего препарата фильтрат золотистого стафилококка и сыворотку (кроликов) против этого препарата. Полученные результаты вызывают значительный интерес и дают перспективу дальнейшего получения из продуктов метаболизма золотистого стафилококка более очищенного митогена от антигенных примесей.

Из 28 электрофоретически дискретных белков, обнаруженных в цельном препарате, очищенная гель-фильтрацией фракция включала 5-6 компонентов. Отношение белков к стимуляции лимфоцитов косвенно подтверждено при обработке препаратов протеолитически-ми ферментами: инкубация с трипсином и проназой, иммобилизованной на сефарозе, снижала митогенность соответственно на 73,7 и 84,2$. Прогревание при Ю0°С в течение 10 мин не влияло на активность препарата.

Очищенная фракция митогенов не обладала коагулазной, дер-монекротической, гемолитической, энтеротоксической активностью, не содержала белка А. Препарат отличался слабой цитотоксичнос-тью и даже при тестировании больших концентраций (150-200 мкг/ /мл) количество нежизнеспособных клеток в 72-часовых культурах было не выше, чем в опытах с ФГА (соответственно 27,8+2,1$ и 29+1,03$). Препарат был безвреден при внутрибрюшинном введении мышам весом 18-20 г в концентрации 200-250 мкг. При внутрикож-ном введении нормальным кроликам и морским свинкам (5-50 мкг) мы не наблюдали видимых изменений на протяжении 10 дней.

Полученные результаты показывают, что в продуктах метаболизма золотистого стафилококка содержатся термостабильные мито-гены лимфоцитов с относительно небольшой молекулярной массой белковой или пептидной природы, которые вероятно лишены или обладают слабой антигенностью. Они обособлены от основного комплекса иммунохимических и биологически активных веществ стафилококка, в том числе от компонентов, которые уже известны как ми-тогены (белок А, энтеротоксины).

При комнатной температуре активность препарата сохранялась на постоянном уровне на протяжении 7 дней, при 4°С - 15 дней, при -20°С - 360 дней (срок наблвдений). Препарат хорошо выдерживал лиофилизацию и в таком виде полностью сохранял активность в течение 3,0 лет (срок наблюдений). То есть очищенный ми-тоген стафилококка обладает хорошей стабильностью в обычных условиях и хорошо поддается консервации разными способами.

Одним из доказательств иммунологической неспецифичности митогенного эффекта принято считать реакцию лимфоцитов, не имевших ранее контакта со стимулирующим агентом. С этой целью у человека обычно используют пуповинную кровь новорожденных (А.Е.Вершигора, 1980; 1уапо1, ЬсЬиег, 1978). Мы провели сопоставление показателей реактивности лимфоцитов пуповинной крови к митогену стафилококка и стандартному митогену растительной природы ФГА. В 72-часовых культурах индекс стимуляции (по включению ^4С-тимидана) были соответственно 47,0+5,2 и 46,0+5,1, у взрослых доноров 99,6+15,2 и 134,0+20,5. Более высокие показатели у взрослых доноров были связаны с относительно низким включением меченого тимидина в контрольных (нестимулированных) культурах лимфоцитов. Абсолютные показатели включения тимидина в контрольных и опытных культурах с ФГА и митогеном стафилококка были значительно выше (Р^005) у новорожденных.

Наиболее общим свойством неспецифических (поликлональных) митогенов является высокий уровень митогенного эффекта, который значительно превосходит реакции лимфоцитов на специфические антигены (моноклональные митогенн). Исходя из этого, в серии опытов активность митогена стафилококка была сопоставлена с реакциями лимфоцитов на аллергены золотистого стафилококка и пио-генного стрептококка (предприятие бакпрепаратов производства Казанского НИИЭМ МЗ РСФСР). Концентрации аллергенов были подобраны в специальных исследованиях и составляли 30 мкг/мл. Результаты оценивали в 72- и 120-часовых культурах. В обоих случаях интенсивность реакций на митоген была в 70-140 раз (в зависимости от времени культивирования) выше, чем на аллергены. У большинства доноров (96$) число бласттрансформированных лимфоцитов в 72-часовых культурах при стимуляции митогеном превышало 20$ и в среднем составляло 31,8+3,0$. Напротив, реакции на аллерген во многих случаях отсутствовали. Для аллергена стафилококка это наблвдалось у 55,7$ доноров, для аллергена стрептококка - у 25,5$. В 120-часовых культурах средние показатели были 0,43+0,1$ (аллерген стафилококка) и 1,5+0,1$ (аллерген стрептококка). Увеличение или снижение концентрации от I до 150 мкг/мл существенно не меняло показателей.

Суммируя эти и другие данные наших исследований, можно привести следующие факты, характеризующие, полученный препарат как поликлональный митоген лимфоцитов: I) высокий уровень мито-генного эффекта, 2) реактивность лимфоцитов всех здоровых людей, 3) характерная кинетика ответа лимфоцитов (быстрое нарастание реакции к 48-72 часам культивирования), 4) высокая реактивность лимфоцитов новорожденных.

В серии опытов проведено изучение активности очищенного митогена стафилококка в культурах лимфоцитов, обогащенных по Т- и В-фракциям. Применявшиеся в настоящей работе методы разделения и очистки лимфоцитов имели следующую разрешающую способность: чистота Т- и В-лимфоцитов, выраженная в содержании Е-розеткообразующих клеток (Т-лимфоциты), составила 89,0+2,2$ в суспензиях Т-лимфоцитов и 8,0+2,6$ в суспензиях В-лимфоцитов. Препарат стимулировал синтез ДНК в культурах как нефракциони-рованных, так и в разделенных на Т- и В-фракции лимфоцитов. Т--фракция реагировала в 1,3 раза сильнее, чем фракция, обогащенная В-лимфоцитами. Аналогичные показатель для классического Т--митогена (ФГА) составил 1,7.

В связи с представлениями о функциональной мозаичности лимфоцитов большой интерес вызывают особенности их реактивности к различным митогенам. Полнота изучения иммунологического потенциала во многом зависит от ассортимента лимфоцитарных митогенов с различным диапазоном стимулирующего эффекта. Набор подобных препаратов, которые можно назвать своеобразными инструментами клеточной иммунологии, весьма ограничен. Очевидно, что диагностическая ценность каждого нового митогена зависит от особенностей его взаимодействия с лимфоцитами и будет тем выше, чем больше этот эффект отличается от уже известных препаратов. В наших опытах i сравнительное изучение стимулирующей активности митогена стафилококка и ФГА в культурах лимфоцитов, полученных от одних и тех же доноров, показало,, что способность к ответу на митоген стафилококка колебалась независимо от чувствительности лимфоцитов к ФГА. Соотношения между стимуляцией на ФГА и митоген стафилококка в индивидуальных культурах были подвержены значительным колебаниям - от 0,6 до 2,7. Эти результаты указывают на то, что реактивность к ФГА и митогену стафилококка зависит от разных субпопуляций лимфоцитов. Своеобразие взаимодействия митогена с культурами лимфоцитов определяет перспективность его использования как дополнительного препарата для изучения вопросов клеточной иммунологии и аллергологии.

Клиническая апробация препарата проведена на лимфоцитах больных инфекционно-аллергическими заболеваниями - бронхиальной астмой и хроническим бронхитом с астмоидным компонентом. Одновременно с митогеном стафилококка проверяли реакцию на ФГА. Наблюдалось общее достоверное ослабление реактивности лимфоцитов к митогенам. Наиболее резко это было выражено для митогена золотистого стафилококка - процент бластов 12,1 + 2,6 против 31,8+3,0 у здоровых (Р<0,02), для ФГА 42,1+2,6 и соответственно 58,7+2,8$. Реакция на митоген стафилококка была резко снижена у 9 из 30 больных при нормальной чувствительности к ФГА; обратная картина отмечена в 7 случаях. Эти исследования показывают, что реактивность лимфоцитов к митогену стафилококка существенно меняется при патологических ситуациях. В наших опытах это отчетливо проявилось при обследовании больных с инфекционно-аллергическими заболеваниями, когда тестирование с митогеном стафилококка позволяло вскрыть такие нарушения в системе клеточного иммунитета, которые не диагностировались по реакциям с ФГА.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Илюшин, Вячеслав Александрович, 1984 год

1. Александрова■ Т.Н. Оценка безвредности вакцинных препаратов. В кн.: Современные методы экспериментальной иммунологии и различные аспекты их применения. Сборник науч.тр.МНИИЭМ. М, 1976, т.17, с.124-131.

2. Акатов А.К. Некоторые вопросы таксономии стафилококков. -2урн.микробиол., эпидемиол., иммунобиол., 1974, М2, с.79--83.

3. Акатов А.К., Хатеневер М.Л. Материалы по идентификации стафилококков госпитального происхождения. Сообщение I. Видовая идентификация стафилококков. Журн.микробиол.,эпидемиол. "и иммунобиол., 1976, И, с.96-99.

4. Стафилококки и стафилококковая инфекция. /Акатов А.К., Баро-ян О.В., Беляев В.Д. и др. Саратов, Саратовский университет, 1980, 320 с.

5. Распространенность энтеротоксигенных штаммов среди золотистых стафилококков, выделенных из разных источников. /Акатов А.К., МоЫипапп , Хатеневер М.Л. и др. Журн.микробиол. »эпидемиол. и иммунобиол., 1980, Ш1, с.56-59.

6. Ашмарин И.И. Практическая медицинская микробиология: Руко -водство. 2-е изд.,испр.и доп.»Ташкент, Медицина, 1966, 324 с.

7. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л, Медицинская литература,1962, 173 с.

8. Баширова Д.К. Тест трансформации лимфоцитов крови в патологии и клинике. Казан.мед.журн., 1974, Ж, с.68-72.

9. Вееке Б.Д. Перекрестный иммуноэлектрофорез. В кн.:Руководство по количественному иммуноэлектрофорезу (ред.Аксельсен Н., Крель И, Вееке Б.). М, Мир, 1977, с.58-67.

10. Ю.Беклемишев А.Е., Суходоева Г.С. Аллергия к микробам в клинике и эксперименте. М, Медицина, 1979, 264 с.

11. П.Вершигора А.Е. Основы иммунологии: Руководство. 2-е изд., испр. и доп., Киев, Вища школа, Головное изд-во, 1980, 504 с.

12. Виксман М.Е., Маянский Л.Н. Способ оценки функциональной активности нейтрофилов человека по реакции восстановления нитросинего тестразолия. Методические рекомендации. Казань, КНИИЭМ, 1979, 14 с.

13. Брондз Б.Д., Рохлин О.В. Молекулярные и клеточные основы иммунологического распознавания. М., Наука, 1978, 335 с.

14. Выгодчиков Г.В. Микробиология и иммунология стафилококковых инфекций. М., Медгиз, 1950, 168 с.

15. Голубева Э.В. Метод определения лимфовдтстимулирующей активности фитогемагглютинином. В кн.: Современные методы в биохимии (ред. Орехович В.Н.). М., Медицина, 1977, с. 257-262.

16. Горшевникова Э.В., Кондратцова Т.П. Бластогенная активность различных антигенов стафилококка в опытах ин вит-ро. В кн.: Стафилококки и внутрибольничная инфекция. Труды Всесоюзной конференции. М., 1975, с.124.

17. Гурвич А.Е. Колориметрическое определение содержания белка по методу Лоури. В кн.: Современные методы в биохимии. М., Наука, 1964, с.81-82.

18. Гусев А.И. Микрометод преципитации в агаре и его основные варианты. В кн.: Иммунохимический анализ (ред. Зильбер Л.А.). М., Медицина, 1968, с.99-119.

19. Детерман Г. Гельфильтрация. М., Мысль, 1970, 252 с.

20. Сравнительное изучение протеолитической активности стафилококков и обнаружение специфической протеазы. /Дегтева Г.К. Беляева Е.В., В.А.Энгельгардт и др. Прикладная биохимия и микробиология, М., 1980, т. 16, J£6, с.841-846.

21. Дегтева Г.К., Григорьева Г.И., Носова Т.В. Методы выделения субклеточных структур микроорганизмов. Электрофоре-тическое фракционирование их белковой части. Методические рекомендации. Горький, НИИЭМ, 1980, 21 с.

22. Диете 3. Цветные реакции углеводов. В кн.: Методы химии углеводов. М., Мир., 1967, с.21-22.

23. Каминский Л.С. Статистическая обработка лабораторных и клинических данных. Применение статистики в научной и практической работе. Изд. 2-в, Л., Медицина, 1964, 248 с.

24. Кочетов Г.А. Практическое руководство по энзимологии. Учебное пособие для студентов биологических специальностей университетов. 2-е изд.,перераб. и доп., М., Высшая школа, 1980, 272 с.

25. Краскина H.A. Современные представления о клеточных основах иммунологической реактивности. В кн.: Современные методы экспериментальной иммунологии и различные аспекты их применения. Сборник научных работ МНИНЭМ. - М., 1976, т.17, с.5-13.

26. Ляшенко В.А., Воробьев A.A. Молекулярные основы иммуноген-ности антигенов. М., Медицина, 1982, 272 с.

27. Маянский А.Н. Иммунологические и неиммунологические механизмы в проявлениях инфекционной аллергии. Журн. микробиол., эпидемиол., иммунобиол., 1979, $ 5, с.14--21.

28. Маянский А.Н. Поликлональные митогены лимфоцитов бактериальной природы. Иммунология, 1980, Ш, с.27-34.

29. Маянский А.Н., Илюшин В.А. Поликлональные митогены золотистого стафилококка. йурн. микробиол., эпидемиол. и иглмунобиол., 1978, HQ, с.87-89.

30. Изучение белка А у различных штаммов стафилококка. /Маянс-кий А.Н., Илюшин В.А., Маянская И.В. и др. Журн. микро-биол., эпидемиол. и иммунобиол., 1978, J£ 6, с.96-99.

31. Медуницин Н.В. Механизмы развития клеточного антибактериального иммунитета. Иммунология, 1980, JS2, с.20-26.

32. Медуницин Н.В. Повышенная чувствительность замедленного типа (клеточные и молекулярные основы). М., Медицина,1983, 160 с.

33. Медуницин Н.В., Литвинов В.И., Мороз A.M. Медиаторы клеточного иммунитета и межклеточные взаимодействия. М.,Медицина, 1980, 263 с.

34. Петров Р.В. Иммунология. (Учебная литература. Для студен -тов медицинских институтов). М., Медицина, 1982, 368 с.

35. Петров Р.В., Ковальчук JI.B., Соколова Е.В., Бурцева JI.B. Контроль и регуляция иммунного ответа. М., Медицина,1981, 311 с.

36. Позур В.К., Хоробрых В.В., Каулен Д.Р. Митогенное действие корпускулярного антигена и компонентов клеточной стенки золотистого стафилококка. Иммунология, 1981, № 2, с.И-14.

37. Позур В.К., Хоробрых В.В., Каулен Д.Р. Гиперчувствитель -ность замедленного типа к антигенам золотистого стафило -кокка. Иммунология, 1981, }& 5, с. 10-12.

38. Прилепин H.A., Семенов Б.Ф. Бактерии и бактериальные вакцины как неспецнфические модуляторы иммунологической реактивности. Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.,1980, MI, с.5-11.

39. Русакова Е.В. Изучение сенсибилизирующих свойств стафилококкового дельта-токсина. Журн.микробиол., эпидемиол.и иммунобиол., 1970, М, с.77-80.

40. Сквирская Э.Б., Чепинога О.П. Практикум по нуклеопротеидам и нуклеиновым кислотам. М., Высшая школа, 1964, 214 с.

41. Смирнова A.M., Трояшкин A.A., Падерина Е.М. Микробиология и профилактика стафилококковых инфекций. Ji., Медицина , 1977, 216 с.

42. Сепетлиев Д. Статистические методы в научных медицинских исследованиях. М., Медицина, 1968, 419 с.

43. Степаненко Р.Н., Новиков В.И. Антигенспецифическая и анти-геннеспецифическая регуляция Т-клетками иммунного ответа.- Успехи соврем.биологии, 1981, т.91, №2, с.210-227.

44. Туркова Я. Афинная хроматография. М., Мир, 1980, 441 с.

45. Фрадкин В.А. Аллергодиагностика ин витро. М., Медицина, 1975, 144 с.

46. Влияние антигенов стафилококка на первичный иммунный ответ. /Холодная Л.С., Хоробрых В.В., Голованова Т.А. и др. Иммунология, 1981, 166, с.34-37.

47. Методы постановки реакции бласттрансформации в микромодификации. /Хоробрых В.В., Пронин A.B., Киркин А.Ф., Санин A.B.- Иммунология, 1983, №3, с.76-79.

48. Цветков B.C. Иммуноэлектрофорез и препаративный иммуноэлек-трофорез. В кн.: Иммунохимический анализ (ред.Л.А.Зиль -бер). - М., Медицина, 1968, с.99-119.

49. In vitro stimulation of human lymphocytes by Bordetella pertussis. /Andersen V., Hertz J.B., Sorensen S.F. e.a. Acta path.microbiol.Scand., 1977, v.85c, p.65-72.

50. Mitogenic activity of the cell walls of mycobacteria, ITocar-dia, Corynebacteria and anaerobic Coryneforms. /Azuma J., Ta-niyama T., Sugimura K. e.a. Jap.J.Microbiol., 1976, v.20, p.263.

51. Adjuvant and Mitigenic properties of a Supernatant fraction of sonically treated Micobacterium bovis (BOG). /Baker L.A., Sharpton T.A., Minden P. e.a. Infect.and Immun., 1976, v. 14, 11, p.83-87.

52. Banck G. Polyclonal B-Lymphocyte activation by Bacteria.- Maltmö, 1982, 50 p.

53. Banck G., Forsgren A. Many bacterial species are Mitogenic for Human blood B-lymphocytes. Scand.J.Immunol., 1978, N8, p.347-354.

54. Barsumian E., Schlievert P.M., Watson D. Nonspecific and specific immunological mitogenicity by group A. Streptococcal pirogenic exotoxins. Infect,and Immun., 1978, v.22, N3, p. 681-688.

55. Begier Kunst A. Stimulation of lymphocyte proliferation by Killed mycobacteria and other bacterial species. Infect.and Immun., 1976, v.14, N1, p.28-32.

56. Biberfeld G., Nilsson E. Mitogenety of Mycoplasma ferraentans for human lymphocytes. Infect, and Immun., 1978, v.21, N1, p.48-54.

57. Polyclonal human T-lymphocyte activation results in the secondary functional activation of the human B-lymphocyte. / Bird A.G., Hacumarstrom L., Smith G. e.a. Clin, and exp. Immunol., 1981, v.43, N1, p.165-173.

58. Boyum A. Isolation of mononuclear cells and granulocytes from human blood. Scand.J.Clin.Lab.Invest., 1968, v.21, p.77-73.

59. Mitogenic effect of a water-soluble extract of Nocardia opaca: a comporative study with some bacterial adjuwants on spleen and peripheral lymphosytes of mammalions species./Bona C., Damais C., Dimitru A. e.a. J.Immunol., 1974, v. 112, N6, p.2028-2035.

60. Blast transformation of rabbit B-derived lymphocytes by a mitogen extracted from Nocardia. /Bona G., Checlid L., Damais C. e.a. J.Immunol., 1975, v.114, N1 (part 2), p.348-353.

61. Bresniham B., Lavalle C., Jasin H.E. Protein Synthesis and Secretion by Activated Human Ljnniphocytes. Int.Arch.Allergy and Appl., 1979, v.60, N1, p.1-8.

62. A human T-independent B-lymphocyte mitogen extracted from Nocardia opaca. /Brochier J., Bona C., Ciorbaru R. e.a. J.Immunol. , 1976, v.117, N5, p.1434-1439.

63. Mitogenec activity of Neisseria gonorrhoeae surface antigens in mouse splenic lymphocyte culture. /Brodeur B.R., Johnson W.M., Diena B.B. e.a. Canad.J.Microbiol., 1977, v.23, N9, p.1154-1160.

64. Brodeur B.R. Characterization of the mitogenic activity elicited by Neisseria gonorrhoeae ribosomal fractions. Canad. J.Microbiol., 1978, v.24, N5, p.579-585.

65. Burckhardt J.I., Guggenheim B., Heflti A. Are Actinomyces vi-scosus antigens B-cell mitogens. J.Immunol., 1977, v.118, N4, p.1460-1465.

66. Cathcart M.K., Krakaner R.S. Human splenic and peripheralblood lymphocyte response to lypopolysaccharide. Cell.Immunol. , 1981, v. 57, 12, p.400-407.

67. Cavaillon J.M., Leclere C., Alouf J. Polyclonal antibody-forming cell activation and immunomodulation of the in vitro immune response induced by Streptococcal extracellular products.- Cell.Immunol., 1983, v.76, N1, p.200-206.

68. Chess L., Schlossman S.P. Human lymphocyte subpopulations.- Adv.Immunol., 1977, v.25, p.213-218.

69. Isolation of mitogenic and adjwant active fractions from various species of ITocardial./Ciorbaru R., Adam A., Petit J.-P. e.a. Infect, and Immun., 1975, v.11, N2, p.257-265.

70. Isolement et caracterisation de mitogenes de ITocardia. /Ciorbaru R., Petit J.P., Lederer E. e.a. Ann.Immunol., 1977, v. 128 C, N1-2, p.41-45.

71. Clagett J., Engel D., Ghi E. In vitro Expression of Immunoglobulin M and G Subclasses by Murine B-lymphocytes in Response to a Policlonal Activator from Actinomices. Infect, and Immune, 1980, v.29, 111, p.234-243.

72. Listeria cell v/all fraction: A, B cell mitogen. /Cohen J., Rodriquez G.E., D-Kind Ph. e.a., J.Immunol., 1975, v. 114, N3, p.1132-1134.

73. Cohn M. In Summary Discussion of Directions of Immunobiology.- In: Mitogens in Immunobiology. New York, 1976, p.663-689.

74. Induction of Interferon in Ovine and Human Lymphocyte cultures by Mycoplasmas. /Cole B.C., Overall J.C., Lombard! P.S. e.a. Inf.Immun., 1976, v. 14, 117, p.88-94.

75. Cole B.C., Aldridge K.E., Waed J.R. Micoplasma-dependent activation of normal lymphocytes: mitogenic potential of micoplas-mas for mouse lymphocytes. Inf.Immun., 1977, v.18, H2, p. 393-399.

76. Colizzi V. Pseudomonas aeruginosa infection depresses contact sensitivity to oxazolone by enhancing Supressor cell activity. Med.Microbiol.»Immunol., 1979, v.167, N3, p.181-188.

77. Polyclonal B-cell activators (PBA). /Countinho H., Gronowicz E., Möller G. e.a. In: Mitogens in Immunobiology. Hew York, Acad.Press, 1976, p.173-190.

78. In vitro human reactivity to Staphylococcal pha^e lysate. / Dean J.H., Silva J.S., Mc Coy J.G. e.a. J.Immunol., 1975, v.115, 1H, p.1060-1064.

79. Wlasciwosci biologiczme skladnikow sciany komorkowej gron-kowcow i pacior Kowcow. /Dziarski R., Hrynicwicz W., Ludwic-ka A. e.a. Post.mikrobiol., 1976, v. 15, 2T2, p. 107-141.

80. Dziarski R., Dziarski A. Mitogenic activity of Staphylococcal peptidoglican. Infect.Immunity, 1979, v.23, 113,p.706--710.

81. Dziarski R. Mitogenic activity of Staphylococcal cell wall polysaccharides. Abstrs 79tn Annu.Meet.Amer.Soc.Microbiol. Los Angeles, Calif., 1979, Washington, D.C., 1979, p.57.

82. Dziarski R. Relationships between adjuvant, immunosuppressive and mitogenic activities of staphylococcal peptidogly-can. Infect.and Immun., 1979, v.26, 112, p. 508-514.

83. Dziarski R. Polyclonal activation of immunoglobulin secretion in B-lymphocytes induced by Staphylococcal peptidoglycan. J.Immunol., 1980, v.125, H6, p.2478-2483.

84. Dziarski R., Dziarski A., Levinson A.J. Mitogenic responsiveness of mause, rat and human lymphocytes to Staphylococcal aureus cell wall, teichoic acid, and peptidoglycan. Intern. Arch.All.and Appl.Immunol., 1980, v.63, M, p.383-395.

85. Dziarski R. Studies on the Mechanism of Peptidoglycan and Lipopolysaccharide - Induced Polyclonal Activation. - Infection and Immunity, Feb., 1982, v.35, N2, p.507-514.

86. Immunostimulatory and mitogenic effects of ribosomal and RITA extracts from bacteria. /Eisenstein T.K., O'Donnell S.,Specter S., Friedman H. RES.-J.Reticuloendothel.,Soc., 1977, v.22, 1T6, Suppl.,'a.

87. Mitogenic activity of Actinomyces viscosu3. 1.Effects on murine B and T lymphocites, and pertial characterization./En-gel D., Glagett I., Pege R. e.a. J.Immunol., 1977, v.118, N4, p.1466-1471.

88. Evans L., Lack C.H. Action of Staphylococcal delta lysin in lysosomes and lymphocytes. Life Sci., 1969, 1T8, p.677-679.

89. Ezeamuzie I.C., Assem E.S.K. A study of histamine realease from human basophils and lung mast cells by products of lymphocyte stimulation. Agents and Actions, 1983, v. 13, IT 2-3, p.223-230.

90. Fauci L., Pratt K.R. Activation of human B-lymphocytes. 1. Direct plaque forming cell assay for the measurement of polyclonal activation of human B lymphocytes. J.exp.Med., 1976, v.144, p.674-682.

91. Fauci A.S. Human B-cell function in a polyclonally induced plaque forming cell System. Cell triggering and immunoregulation. Immunol.,Rev., 1979, v.45, p.93-112.

92. Fernandez C., Holler G. The immune response against two epitopes on the same thimus-indeendent polysaccharide carrier.- Immunology, 1977, v.33, N3, p.331-337.

93. Ferrante A. and Thong Y.H. Optimal conditions for simultaneous purification of mononuclear and polymorphonuclear leucocytes from Human blood by the Hypage-ficoll method.- J.of Immunol.Methods, 1980, H36, p.109-117.

94. Forsgren A., Svedjelund A., Wigzell H. Lymphocyte Stimulation by protein A of Staphylococcal aureus. Eur.J.Immunol., 1976, v.6, H3, p.207-213.

95. Fumarola D. Studies on staphylococcal coagulase. III. Mito-genic activity in staphylocoagulase preparetions. Ann. Sclavo, 1969, 1111, p. 412-414.

96. Fumarola D. B lastoid transformation of lymphocytes by Staphylococcal aggressin. Ann.Selavo, 1969, v.11, N6, p.633--637.

97. Fumarola D. Blastoid Transformation of lymphocytes by Staphylococcal aggressin. Z.Immunitatsforsch., 1970, v.140, 113, p.313-316.

98. Gery J., Druger I., Spiesel S.Z. Stimulation of B-lymphocy-tes by endotoxin: reaction of thumus deprived mice and Ka-ryotipic analysis of dividing cells in mice bearing TgTg Thumus grafts. J.Immunol., 1972, H108, p.1088-1105.

99. Girard R., Choby R., Bordenave G. Mitogenic Response of C^H/HeJ Mouse Lymphocytes to Polyanionic Polysaccharides Obtained from Bordetella pertussis Endotoxin and from other Bacterial Species. Infection and Immunity, Jan., 1981, v.1 p.122-128.

100. Godal T., Klepp 0., Onsrud M. Mitogenic effect of Corynebac-terium parvum on T-lymphocytes of human peripheral blood.- Cancer Immunol and Immunother., 1977, v.3, N1, p.69-71«

101. Goodman G.W., Sultzer В.Ы. Endotoxin protein is a mitogen and polyclonal activator of human B-lymphocytes. J. Exp. Med., 1979, v. 149, Ю, p.713-723.

102. Greaves I.I.P., Janossy G. Transplant.Rev., 1972, JT11, p. 87-88. (Цитирую Waxdal e.a. - In: Mitogens in Immunobio-logy, 1976, p.161-171).

103. Greaves M., Janossy G., Doenhoff M. Selective triggering of human T and B-lymphocytes in vitro by polyclonal mitogens.- J.Exp.Med., 1974, v.140, 111, p. 1-18.

104. Gronowicz E., Countinho A. Heterogeneity of В cells. Direct evidence of selective triggering of distinct Subpopulations by polyclonal activators. Scand.I.Immunol., 1976, v.5, p. 55-69.

105. Gross W.L., Schlaak M. Human B-cell activation by group A Streptococcal cell components. Immunology, 1981, v. 159, N1-2, p.125.

106. Streptococcus mutans serotype G carbohydrate antigen is a B-cell mitogen. /Hamada S., Mc GHee J., ICiyoko H. e.a. Immunol. Lett., 1981, v.3, H3, p.129-132.

107. Limphoid cell responses to bacterial cell wall components mitogenic responses murine В cell to Streptococcus mutans carbohyarate autogens. /Hamada S., Mc Ghee J.R., Kiyonon H. e.a. J.Immunol., 1981, v.126, N6, p.2279-2283.

108. Heilman D.H. Mitogenic activity of bacterial fractions in lymphocyte cultures. Endotoxins and other derivatives of gram-negative bacteria. Inf.Arch.Allergy and Appl., 1970, v.39, N4, p.415-425.

109. The action of Streptolysin S on peripheral lymphocytes of normal subjects and patients with acute rheumatic fever. / Hirschhorn K., Schreibman R.R., Vebro S. e.a. Proc. Nat. Acad.Sci., USA, 1964, v.52, p.1151-1153.

110. Interferon production and lymphocyte stimulation in human leucocyte cultures stimulated by C.parvum. /Hirt H.M., Schwenteck M., Becker H. e.a. Clin.Exp.Immunol., 1978, v.32, 173, p.471 -476.

111. Ho M.-K., Kong Â.S., Morse S.J. The in vitro effects of Bordetella pertussis lymphocytosis-promoting factor on murine lymphocytes. III. B-cell dependence for T-cell proliferation. J.Exp.Med., 1979, v. 149., 115, p. 1001-1017.

112. Ho M.-K., Kong A.S., Morse S.J. The in vitro effects of Bordetella pertussis lymphocytosis promoting factor on murine Lymphocytes. Y. Modulation of T cell proliferation by Helper and Suppressor lymphocytes. J.Immunol., 1980, v. 124, 111, p.362-369.

113. Ho M.-K., Morse S.J., Kong A.S. Studies on a new lymphocyte mitogen from Bordetella pertussis. 1. Induction of proliferation and polyclonal antibody formation. J.Exp.Med.,1981, v.153, N1, p.75.

114. Hunderford D. The chrosome constitution of a human phenoty-pic intersex. Amer.J.Hum.Genet., 1959, v.11, N3, p.215--217.

115. Ivanyi L., Lehner T. Stimulation of human lymphocytes by B--cell mitogens. Clin.exp.Immunol., 1974, v.18, 13, p.347--356.

116. Ivanyi L. Modulation of antigen-induced Stimulation of human lymphocytes by L.P.S. Clin.exp.Immunol., 1976, v.23, p.385-388.

117. Ivanyi L. Stimulation of human B lymphocytes by Listeria cell wall fraction. Clin.exp.Immunol., 1978, v.34, N2, p. 193-198.

118. Ianossy G. Heterogeneity of murine and human B lymphocytes responding to polyclonal mitogens. In: Mitogens in Immu-nobioligy. - Uew York, Acad.Press, li-y-L., 1976, p. 191-209.

119. Jeffries G.D., Holtman D.E., Guse D.C. Eapid method for determination the activity of microorganisme on nucleic acids. J.Bacterid., 1957, v.73, M, p.590.

120. Induction and suppression of immunoglobulin synthesis in cultures of human lymphocytes: effects of Pokeweed mitogenand Staphylococcus aureus Cowani. /Juliusz P., Joze M«,Robert M. e.a. J.of Immunology, 1980, v.124, N2, p. 657 -- 661.

121. Kaplan J. Staphylococcal enterotoxin B induced release of Macrophage migration inhibition factor from normal lymphocytes. Cell.Immunol., 1972, v.3, p.245-251.

122. Cellular cooperation in lymphocyte activation. IY. Requirement of cell-to-cell interaction for the activation of human T and B cells. /Kin K., Tadashi T., Stoh V. e.a. Immunol., 1980, v.49, N1, p.142-154.

123. Kearns R.J., Hinrichs D.J. Heat-Labile B-cell Mitogen abtai-ned from Listeria monocytogenes. Infect.Immunity, 1978,v. 22, N3, p.676-680.

124. Keiser A.II., Kushner I., Kaplan M.H. Nonspecific Stimulation of lymphocyte transformation by cellular fractions and acid extracts of group A streptococci. J.Immunol., 1971, v.106, N6, p. 1593-1601.

125. Knoll H., Kohler W. Lymphocyte transformation test with antigens 0- Str.pyogenes. Allergol., Immunopathol., 1977, v.5, N4, p.411-417.

126. Purification and characterization of erythrogenic toxin produced by Streptococcus pyogenes Strain NY-5. /Knoll H., Hri-balova V., Gerlach D. e.a. Zbl.Bacterial., 1981, Abt. 1A, v.251, N1, p.15-16.

127. Koch C. Influence of endotoxin and complex antigenes complex bacterial antigens in the presence of serum factors upon the function of human neutrophils in vitro. Acta path, microbiol.Scand., Sect.C., 1975, v.83, p.195-202.

128. Kreger A.S., Cuppari C., Tar ant a A. Isolation bjr Electrofo-cusing of Two Lymphocyte Mitogens Produced by Staphylococcus aureus. Infect.and Immunity, 1972, v.5, p.723-727.

129. Mitogenic activity of cell wall components from smooth and rough strains of Brucella abortus. /Kreutzer D.L., Scheffel J.W., Drafer G.R. e.a. Inf.Immun., 1977, v.15, N3, p.842-845.

130. Laemli N. Glevage of the structural protein during of head of bacteriophag. Nature, 1970, v.227, N 52-59, p.680-685.

131. Lamb J.R., Kontiainen S., Lehner Th. Generation of Specific T-cell Supressor function induced by Streptococcus mutans in molkeus and mice. Infection and Immunity, 1979, v.26, N3, p.903-909.

132. Lee Sh.-H., Haque R.-U. Characterization of Staphylococcal mitogens. In: American Society of Microbiology. Annual Meeting. Abstracts. New York, 1976, p.15.

133. Lee C.I., Malik P., Robbins I.B. Structure and blastogenic activity on capsular polysaccharide of Haemophilus influenzae type "B". In: American Society of Microbiology. Annual Meeting.Abstracts. New York, 1976, p.76.

134. Lee C.I., Robbins J. Characterization and mitogenic activity of Haemophilus influensae type "B" Capsular polysaccharide. Immunol.,Commun., 1978, v.7, N5, p.503-518.

135. Staphylococcal peptidoglican: T-cell-dependent mitogen and relatively T-cell-independent polyclonal B-cell activatoi" of human lymphocytes. /Levinson A.I., Dziarski A., Zweiman B. e.a. Infect, and Immun., 1983, v.39, N7, p.290-296.

136. Mitogen induced cellular cytotoxic activity as a monocyte function in human peripheral blood preparations. /Levy E.M., Silverman S.S., Shmid K. Cellul.Immunol., 1978, v.40, N7, p.222-229.

137. Librado 0.-0. B-lymphocyte activation with an extract of No-cardia brasiliensis. Infect.and Immun., 1979, v.25, N2, p. 629-634.

138. The Activation of Human Peripheral Lymphocytes by Productsof Staphylococci. /Ling U.R., Spicer E., James K. e.a. - Brit.J.Haemat•, 1965, v.11, p.421-431.

139. Lipsky P.E. Staphylococcal protein A, T-cell-regulated polyclonal activator of human B-cells. J.Immunol., 1980, v. 125, N1, p. 155,-162.

140. Marchol G., Fauve. Activité mitogene d'un extract bacterien phospholipidique (EBP) sur les lymphocytes de soiris. -Ann. d«Immunol., 1974, v.125c, N3, p.507-518.

141. Monier J.G. Adjuvants de e'immunité et immunostimulants.- Rev.franc.Allergol.et immunol.clin., 1979, v.19, N2, p. 89-94.

142. The mitogenic effect of the lymphocytosis promoting factor from Bordetella pertussis on human lymphocytes. /Morse I.H., Kong A.S., Lindenbaum J. e.a. J.Clin.Invest., 1977, v.60, N3, p.683-692.

143. Stimulation of human lymphocytes in vitro by bacterial hyd-rolysates. /Nagel E., Albrecht R., Nagel G. e.a, Experi-entia, 1974, v.30, N8, p.946-947.

144. Adjuvant Actions of Polyclonal Lymphocyte Activators. 1. Comparison and Characterization of their Actions in Antibody Response to Deaggregated Bovine Serum Albumin. /Nakashi-ma J., Na Gase P., Yokochi T. e.a. Cell.Immunology, 1979, v.46, p.69-76.

145. Adjuvant Actions of Polyclonal Lymphocyte Activators. /ITa-kashima J., Mafsuura A., ïïagase H. e.a. Cell.Immunology, 1981, v.57, N2, p.477-485.

146. Naot Y., Tully J., Ginsburg H. Lymphocyte Activation by various Mycoplasma Strains and species. Inf. and Immunity, 1977, v.18, N2, p.310-317.

147. Naot Y., Ginsburg H. Activation of B lymphocytes by Mycoplasma Mitogen (S). Immunology, 1978, v.34, N4, p.715-720.

148. Naot Y., Simon-Tov R., Ginsburg H. Mitogenic Activity of Mycoplasma pulmonis. I.Stimulation of rat B and T-lymphocytes.- Immunology, 1979, v.36, N3,. p.399-406.

149. Naot Y., Simon-Tov R., Ginsburg H. Mitogenic activity of Mycoplasma pulmonis. II. Studies on the biochemical nature of the Mitogenic factor. Europ.J.Immunol., 1979, v. 9, IT2, p. 149-154.

150. Hauciel C. Mitogenic activity of purified Streptococcal eritrogenic toxin on lymphocytes. Ann.Immunol., 1973, v. 124c, p.383-390.

151. Nowell P. Differentiation of human leucemic leucocytes in tissue culture. Exp.Cell.Res., 1960, v.19, N2, p.267-272.

152. Nowell P. Mitogens in immunobiology: Introduction. In: Mitogens in Immunobiology. ITew York, Acad.Press, 1976, p.3--9.

153. Papamichail M. A Human lymphocyte mitogen extracted from the extracellular slime layer of Ps.aeruginosa. J.Inf.Dis., 1980, v.141, 115, p.686-688.

154. Pearmain G., Lycette R., Pilzgerald P. Tuberculin-induced mitosis in peripheral blood leucocytes. Lancet, 1963, N1, p.637-639.

155. Peavy D.L., Adler W.H., Smith R.T. The mitogenic effects of endotoxin and Staphylococcal enterotoxin B on mouse spleen cells and Human peripheral lymphocytes. J.Immunol., 1970, v.105, p.1453-1458.

156. Peavy D.L. Motogenicity of bacterial endotoxines: characteri-xation of the mitogenic principle. J.Immunol., 1973, v.3, N2, p.352-355.

157. Peavy D.L., Baughn R.E., Musher D.M. Mitogenic activity of Bacterial Lipopolysaccharides in vitro: Morphological and Functional characterization of responding Cells. Inf.Immun. 1978, v.19, N1, p.71-78.

158. Petit J.—C., Unanue E.R. Effects of bacterial products on lymphocytes and macrophages: their possible role in naturalresistance to Listeria infection in mice. J.Immunol., 1974, v.113, N3, p.984-989.

159. Plate J.M., Amos B. Lymphocyte stimulation by a glicopepti-de isolated from Streptococcus pyogenes C 203 S. 1. Isolation and partial purification. Cell.Immunol., 1970, v.1, p.476-487.

160. Plate J.M., Amos B. Lymphocyte stimulation by a glycopepti-de isolated from Streptococcus pyogenes C 203 S. II. Kinetics of the response. Cell.Immunol., 1970, v.1, p. 488-499.

161. Induction and suppression of immunoglobulin sintesis in cultures of human lymphocytes: Effects of pokewed mitogen and Staphylococcus aureus Cowan 1. /Pryjma J., Munoz, Galbraith R.M. e.a. J.Immunol., 1980, N124, p.656.

162. Characterization of cell-reactive B cells by polyclonal B-cell activators. /Primi D., Smith E.C.J., Hammarstrom L. e. a. J.Exp.Med., 1977, v.145, N1, p.21-30.

163. Hasanen L., Karhumäki E., Krohn Ii. Elaboration. Elaboration of leukocyte migration inhibitory factor by human lymphocyte subpopulations stimulated with mitogens. Cell.Immunol., 1978, v.37, N1, p.221-228.

164. Räsänen L., Karhumäki E., Arvilommi H. Bacteria induce lym-phokine synthesis polyclonally in human B lymphocytes. J. Immunol., 1978, v.121, N2, p.418-426.

165. Rasänen L., Karhumäki K., Majuri R. Polyclonal activation of Human Lymphocytes by Bacteria. Infect.Immunity, 1980, v. 28, N2, p.368-372.

166. Different mitogenic activity of Soluble and insoluble Staphylococcal protein A (SPA). /Romagnani S., Amadori A.,Gin-dizi M.G. e.a. Immunology, 1978, v.35, N3, p.471-478.

167. Purification and biochemical characterization of human Lymphocyte mitogenic factor (LMF). /Rutenberg W.D., Khabidi U. Al., Rosen T.S. e.a. J.Immunology, 1979, v.122, N2, p.729--727.

168. Interaction of Soluble C^ fragments with B lymphocytes: lymphokine production and lymphocyte proliferation. /Sandberg A.L., Wahl Sh.M., Koopman W.J. e.a. In: Mitogens in Immu-nobiology. - New York; Acad.Press, 1976, p.337-354.

169. Sawada J., Osawa T. Cellular cytotoxity induced by various lectins and mitogens. Transplantation, 1978, v.26, N5, p. 319-324.

170. Purification and some chemical and physical properties of Staphylococcal enterotoxin A. Biochemistry, 1972, v,11, N 3, p.360-366.

171. Schlievert P.M., Sclioettle D.J., Watson D.W. Nonspecific T- lymphocyte mitogenesis by pyrogenic exotoxins from group A streptococci and Staphylococcus aureus. Infect, and Immun., 1979, v.25, N3, p.1075-1077.

172. Schlievert P.M. Activation of murine T-supressor lymphocytes by group A Streptococcal and Staphylococcal pyrogenic exotoxins. Infect.and Immun., 1980, v.28, 113, p.876-880.

173. Neurominidase effect on the lymphocyte blastigenesis. /Se-menzato G., Amadori G., Tosato P. e.a. G.ric. e diagn. lab., 1979, v.6, N1, p.47-49.

174. Sedgwick J.D., Holt P.G., Turner K.J. Production of a histamine -releasing lymphokine by antigen- or mitogen-stimula-ted human peripheral T-cells. Clin.and exp.Immunol.,1981, v.45, N2, p.409-418.

175. Serevalli E., Taranta A. Release of macrophage migration inhibitory factor(s) from lymphocytes stimulated by Streptococcal preparation. Cell.Immunol., 1973» v.8, p.40-54.

176. Shambaugh J.B., Blumenschein G.R. Combined effects of phy-tohemagglutinin and Staphylococcal enterotoxin B on deoxy-ribonucleae acid Synthesis during, blast transformation in human lymphocytes. Infect.and Immun., 1974, v.9, 112, p. 384-390.

177. Sharon li. Lectins as mitogens. In: Mitogens in Immunobio-logy. - Hew York: Acad,Press, 1976, p.31-41.

178. Sieber G., Schulze II., Hierhans K.H. Stimulationo of human periferal blood lymphocytes by procariotio ribosomal proteins isolated from E.coli. Immunol., 1980, v.17, N4, p. 606-616.

179. Protein A-positive Staphylococci serve as a selective B cell mitogen for lymphocytes from primary immunodeficiency patients. /Sirianni N.C., Pandolfi P., Aiuti P. e.a. -Clin, exp.Immunol., 1979, v.36, IT 1, p. 107-111.

180. Sirianni M.C., Pucillo L.P. Formalin-Treated Bacteria as selective B-cell mitogens Results - in Primary and aqui-red immunodeficiences. - Clin.and E.Immunol., 1981, v.45, 1T2, p.393-398.

181. Smith B.G., Johnsen H.M. The effect of Staphylococcal ente-rotoxins on the primary in vitro immune response. J.Immunol. , 1975, v.115, 172, p.575-578.

182. Mitogenicity of cell wall fractions of Micropolyspora Fae-ni. /Smith Sh.M., Hill J.O., Snyder J.S. e.a., Ann.Allergy, 1978, v.40, 1-11, p. 12-14.

183. Smith S.M., Snyder I.S., Burreil R. Mitogenic response to Micropolycpora faeni cell woll. J.Allergy and Clin-Immu-nol., 1980, v.65, 114, p.298-304.

184. Srivastava S.K., Barnum D.A. Lymphocyte stimulation response in horses against phytohaemagglutinin and M protein of Streptococcus equi using whole blood. Can.J.Comp.Med., 1982, v.46, 171, p.51-56.

185. Stanbridge E.J., Weiss R.L. Mycoplasma-host cell interacti-ns: their possible relevance to Mycoplasma pathogenesis. -- In: Microbiology, 1978, Washington, 1978, p.394-398.

186. Specifiety of in vitro Murine B-cell activation by protein and polysaccharide polymers. /Strong D.M., Ashmed A.A., Scher J. e.a. J.Immunol., 1974, v.113, N5, p.1029-1037.

187. Macrophage dependency of T-lymphocyte mitogenesis by locar-dia rubra cell-wall Skeletion. /Sugimura K., Uemiya M.,Azu-ma J. e.a. -Microbiol, and Immunol., 1977, v.21, 121, p. 525-530.

188. Sultzer B.M. Genetic analysis of lymphocyte activation by lypopolysaccharide endotoxin. Infect.Immun., 1976, 1T13, p.1579-1584.

189. Sultzer B.M. Endotoxine protein: a B-cell mitogen and polyclonal activator of C3H/HeJ limphocytes. J.Exp.Med.,1976, v. 144, 173, p.821-827.

190. Sultser B.M., Nilson B.S., Kirschenbaum D. Nonspecific Stimulation of Lymphocytes by Tuberculin. Inf.Immunity, 1977, v.15, N3, p.799-806.

191. Sultzer B.M., Nilsson B.S. PPD tuberculin a B-cell mitogen. - Nature (London), New Biol., 1972, v.240, p.198-200.

192. Taranta A., Guppari G., Quagliata P. Dissociation of hemolytic and lymphocyte-transforming activities of Streptolysin S preparations. J.Exp.Med., 1969, v.122, N4, p.605--622.

193. Taranta A. Lymphocyte Mitogens of Staphylococcal origin. -- Ann.N4. Acad.Sei., 1974, v.236, p.362-375.

194. Tribble J.L., Bolen J.B. Delayed hypersensitivity to Staphylococcus aureus in mice: in vitro responces to isolated Staphylococcal antigens. Immunology, 1979, v.38, IT819, p. 819-825.

195. Wahl S.M., Rosenstreich D.L., Oppenheim J. In: In vitro Methods in cell-mediated and Tumor Immunity. - N»Y: Ac. Press, 1976, 231 p.

196. Waksman B.H. Adjuvants and immunoregulation by lymphoid cells. Springer Semin.Immunopathol., 1979, v.2, N1, p.5--33.

197. T cell suppression of pokeweed mitogen induced immunoglobulin production. /Waldman T.A., Broder S., Durm M. e.a. -In: Mitogens in Immunobiology. Acad.Press, N-Y* -London, 1976, p.509-521.

198. Warren J.R., Leatherman D.L., Metzger J.P. Evidence for cell-receptor activity in lymphocyte stimulation by Staphylococcal enterotoxin. J.Immunol., 1975, v.115, v.1. p. 49-53.

199. Warren J.R. Mitogenic stimulation of murine spleen cells by brief exposure to Staphylococcal aureus enterotoxin B.- Inf.and Immun., 1977, v.18, N1, p.99-101.

200. Wojskowicz J. Mitogeny pochodzenia bakteryjnego. Post, hig i med.dosw., 1978, v.32, N4, p.443-466.

201. Wrigley D.M., Choi Y.S. Characterization of the Subpopulations of human peripheral blood В lymphocytes which react to Staphylococcus aureus Cowan 1 and T-cell help. Cell. Immunol., 1983, v.78, 111, p. 130-143.

202. Zimerman D.H., Gregory S., Kern M. Differentiation of lymphoid cells: the preferential binding of the lipid A moiety of lipopolysaccharide to B-lymphocyte populations. T. Immunol., 1977, v.119, Ю, p.1018-1023.