Микробиота кишечника коренного жителя Центрального федерального округа Российской Федерации как основа для создания региональных пробиотических препаратов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.03, кандидат наук Беляева, Екатерина Андреевна

• Беляева, Екатерина Андреевна
• кандидат наук
• 2014

Оглавление диссертации кандидат наук Беляева, Екатерина Андреевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

стр.

ВВЕДЕНИЕ

ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Микробиоценоз желудочно-кишечного тракта здоровых людей

1.2. Дисбиоз

1.3. Пути коррекции дисбиоза. Пробиотики

1.4. Лактобациллы как пробиотики

1.4.1.Влияние лактобацилл на организм человека

1.4.2. Продукция кислот лактобациллами

1.4.3. Продукция бактериоцинов лактобациллами

1.5. Бифидобактерии как пробиотики

1.5.1. Взаимоотношение бифидобактерий с макроорганизмом

1.5.2. Противовирусная активность бифидобактерий

1.5.3. Биосинтетические возможности бифидобактерий

1.6. Изучение антагонистической активности лактобацилл, бифидобактерий

1.7. Адгезивные свойства лактобацилл и бифидобактерий

1.8. Современные подходы в поиске новых пробиотиков

ГЛАВА 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Выделение и идентификация представителей микробиоценоза кишечника здоровых людей

2.2. Отбор антагонистически активных штаммов

лактобацилл и бифидобактерий

2.3. Биохимическая идентификация антагонистически активных

штаммов лактобацилл и бифидобактерий

2.4. Генетическая идентификация антагонистически активных

штаммов лактобацилл и бифидобактерий

2.5. Характеристика пробиотического потенциала лактобацилл и бифидобактерий

2.5.1. Определение антагонистической активности лактобацилл и

бифидобактерий методом агаровых слоев

2. 5.2. Факторы патогенности лактобацилл и бифидобактерий

2.5.3. Чувствительность лактобацилл и бифидобактерий к желчи

2.5.4. Чувствительность лактобацилл и бифидобактерий

к антимикробным препаратам

2.5.5. Способность бактерий сквашивать молоко

2.6. Адгезивная активность лактобацилл и бифидобактерий

2.7. Симбиоз лактобацилл и бифидобактерий

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Выводы

Практические рекомендации

Перспективные направления дальнейшей разработки темы

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Микробиота кишечника коренного жителя Центрального федерального округа Российской Федерации как основа для создания региональных пробиотических препаратов»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы

Микробиота кишечника человека представлена более 1014 микроорганизмов, активно участвующих в жизнедеятельности человека (пищеварительном процессе, обмене веществ, поддержании иммунного статуса и др.). Последние научные данные указывают на специфичность в составе кишечной микрофлоры, как у каждого индивидуума, так и у национальных и региональных групп населения (наличие различных энтеротипов) [82]. Огромное число микроорганизмов в кишечнике пока не позволяет провести их полный анализ. Существуют различные подходы, позволяющие охарактеризовать отдельные элементы микробиоты. Предлагаемый в данной работе анализ свойств бактерий рода Lactobacillus и Bifidobacterium из кишечной микробиоты здоровых жителей Центрального федерального округа России позволит разработать новые подходы и оценить региональную специфичность состава этих компонентов микробиоты. Данные могут быть использованы для разработки научной основы создания пробиотических препаратов, базирующихся на принципах персонализированной медицины.

Симбиотическая микрофлора людей, проживающих в регионах с разными климатическими условиями, бытовыми традициями населения, рационами питания, не одинакова, поскольку биоценозы имеют выраженный индивидуальный характер и заметно отличаются даже у индивидуумов одного региона. Еще более значительные различия отмечаются в микробной экологии окружающей среды, особенности которой в значительной степени отражаются на составе транзитор-ного компонента эндогенных микробных систем населения. Поэтому следует принимать во внимание тесную взаимосвязь между индигенной микрофлорой человека и экзогенным микробным миром, поскольку собственная микробиота человека является частицей биосферного микробного звена, а одной из очень важных функций эндогенной микроэкологической системы является поддержание гармоничных взаимоотношений человека с микробным сообществом окружаю-

щей среды. Между аутофлорой людей и экзогенным микроценозом региона эво-люционно сформировались определенные компромиссные отношения, которые позволяют предупредить агрессивное воздействие на организм человека экзогенных потенциальных патогенов [76].

Адаптация организма человека к экзогенному микроценозу региона прослеживается в онтогенезе. Так, у новорожденных начинает активно развиваться эффективный иммунный ответ в отношении экзогенной микрофлоры, специфичной для конкретного региона. Поэтому наиболее высокую эффективность обычно проявляют пробиотики, основу которых составляют «местные» штаммы микроорганизмов.

Повышенное внимание к пробиотическим препаратам в настоящее время вызвано ростом контингента лиц, имеющих микроэкологические нарушения и требующих коррекции собственной микрофлоры [3]. Наиболее эффективными и физиологичными средствами коррекционного воздействия на микрофлору при дисбактериозах являются биопрепараты с живыми культурами лактобацилл и би-фидобактерий. Создание и широкое внедрение в медицину высококачественных пробиотиков на основе региональных биовариантов нормальной микрофлоры является в настоящее время актуальной и важной задачей [78].

Степень разработанности темы исследования

Глобальные национальные и международные проекты сегодня активно занимаются изучением нормального микробиоценоза и его изменений при различных заболеваниях. Микробиота человека изучается в рамках программы Human Microbiome Project (http://nihroadmap.nih.gov/hmp/), где определена полная нук-леотидная последовательность и аннотированы геномы 20 штаммов 14 видов лактобацилл [70]. По проекту «Русский метагеном» осуществлено глубокое секвени-рование свыше 150 образцов ДНК, выделенных из кала здоровых людей, проживающих на территории Российской Федерации. В географию выборки входили города из различных федеральных округов - Центрального (Москва), Северо-

Западного (Санкт-Петербург), Приволжского (Казань, Самара, Саратов), Южного (Ростов-на-Дону), Западной Сибири (Омск, Новосибирск). В рамках проекта были выявлены территориальные различия микробиоты у людей, проживающих в России, но был показан общий схожий метаболизм микрофлоры у людей, проживающих в разных городах.

В 2003 году региональная оценка микробиоты кишечника проводилась у населения Западной Сибири. Установлено, что характер дисбиотических нарушений зависит от уровня загрязненности атмосферного воздуха. Распространенность дисбактериоза у жителей Западной Сибири составила 762±0,05 случаев на 1000 населения [40]. Исследования показывают, что качественные и количественные нарушения состава собственной микрофлоры кишечника связаны с увеличением численности E.coli со сниженной лактазной активностью, стафилококков и грибов рода Candida на фоне угнетения роста и снижения колонизирующей способности лактобацилл и бифидобактерий [4].

История создания пробиотических препаратов в России связана с именем Г.И. Гончаровой, которая в 1966 году впервые разработала технологию изготовления «Бифидумбактерина сухого». Среди представителей бифидофлоры от детей и взрослых был отобран ряд штаммов, перспективных как по технологическим, так и медико-биологическим характеристикам.

В настоящее время современные пробиотики получены в Германии, Бельгии, Дании. В России широкое применение находят отечественные пробиотики IV поколения, представляя собой живые B.bifiduml (Бифидумбактерин форте, Про-бифор) либо B.bifiduml+L.plantarum8RA-3 (Флорин форте), сорбированные (иммобилизованные на частицах измельченного активированного угля).

Проведены работы по выделению от здоровых детей производственно-перспективных штаммов бифидобактерий, обладающих определенными физиоло-го-биохимическими свойствами и высокой антагонистической активностью [30]. При генетической идентификации лактобацилл и бифидобактерий в настоящее

время используют секвенирование гена 168 рРНК [20], двухлокусное секвениро-вание [61] и секвенирование нескольких фрагментов генома [38].

В связи с тем, что эффективность пробиотических препаратов определяется совокупностью биологических свойств штаммов, входящих в их состав, большое внимание уделяется созданию поликомпонентных пробиотиков [3,5].

Однако ни один из отечественных или зарубежных пробиотических препаратов не создан на основе микроорганизмов, отвечающих этно-региональным критериям. Наиболее эффективным может быть использование штаммов, характерных для данного региона, которые могут адаптироваться к конкретному макроорганизму. Поэтому создание пробиотических препаратов, основанных на принципах персонализированной медицины и ориентированных на конкретные региональные группы населения страны, является инновационным направлением по улучшению здоровья населения.

Цель и задачи исследования

Цель исследования:

Охарактеризовать микробиоту кишечника коренных жителей Центрального федерального округа Российской Федерации и селекционировать новые штаммы лактобацилл и бифидобактерий, перспективные для создания на их основе региональных пробиотических препаратов.

Задачи исследования:

1. Выделить и идентифицировать микрофлору кишечника от практически здоровых людей в возрасте от 18 до 21 года, постоянно проживающих на территории Центрального федерального округа Российской Федерации.

2. Селекционировать лактобациллы и бифидобактерии, обладающие высокой антагонистической активностью по отношению к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам, перспективные для конструирования новых пробиотических препаратов для жителей Центрального федерального округа Российской Федерации.

3. Провести генетическую идентификацию антагонистически активных штаммов лактобацилл и бифидобактерий с помощью ПЦР-генотипирования и прямого секвенирования.

4. Определить адаптационный и пробиотический потенциал антагонистически активных штаммов лактобацилл и бифидобактерий.

5. Определить симбиотические взаимоотношения антагонистически активных штаммов лактобацилл и бифидобактерий.

Научная новизна исследования

Впервые охарактеризована микробиота кишечника практически здоровых людей в возрасте от 18 до 21 года, коренных жителей Центрального федерального округа Российской Федерации, проживающих в Тверской, Ярославской, Московской, Костромской, Брянской, Тульской, Воронежской, Калужской, Тамбовской, Смоленской и Владимирской областях. Установлено, что у 75% обследованных лиц выявлены нарушения микроэкологии кишечника с преобладанием дисбиоза I степени.

Получены новые данные о видовом разнообразии состава микробиоты при дисбиотических нарушениях кишечника у практически здоровых людей с доминированием представителей рода Bacillus среди условно-патогенной микрофлоры, что может служить основой для разработки персонифицированного подхода при коррекции дисбактериоза кишечника у населения Центрального федерального округа Российской Федерации.

Из кишечника здоровых людей с нормобиоценозом, коренных жителей Центрального федерального округа России, селекционированы новые штаммы лактобацилл и бифидобактерий, обладающие высокой степенью антагонизма по отношению к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам, чувствительностью к антимикробным препаратам, широким спектром пробиотического и адаптационного потенциала, что соответствует современным

требованиям общих фармакопейных статей (ОФС) 2013 года к штаммам микроорганизмов, перспективным для конструирования пробиотиков.

Теоретическая и практическая значимость исследования

Характеристика бактерий родов Lactobacillus и Bifidobacterium как потенциальных пробиотических штаммов, выделенных из кишечника практически здоровых жителей конкретного округа России, позволит установить региональную специфичность микробиоты и теоретически обосновать перспективы создания пробиотических препаратов, базирующихся на принципах персонализированной медицины и ориентированных на конкретные региональные группы населения страны.

Охарактеризованные 6 штаммов лактобацилл и 5 штаммов бифидобактерий с наиболее выраженными антагонистическими свойствами по отношению к условно-патогенной и патогенной бактериальной, а также грибковой микрофлоре желудочно-кишечного тракта могут быть использованы как штаммы-кандидаты для конструирования новых перспективных пробиотических препаратов.

Определенные в ходе проведения работы нуклеотидные последовательности гена 16S рРНК Lactobacillus rhamnosus 32 к. аннотированы и зарегистрированы в базе данных GenBank (№ SUB 168082).

Выделенные штаммы лактобацилл и бифидобактерий депонированы в музейной коллекции лаборатории генетики микроорганизмов Института общей генетики им. Н.И. Вавилова Российской академии наук и могут быть использованы в дальнейших исследованиях ключевых генов, отвечающих за пробиотические свойства штаммов.

Материалы диссертации включены в электронный учебно-методический комплекс, использующийся в учебном процессе, на кафедре микробиологии и вирусологии с курсом иммунологии Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Тверская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Фе-

дерации. Методологическая база внедрена в работу бактериологической лаборатории научно-исследовательского центра Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Тверская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации при изучении микробиоценозов различных биотопов организма человека.

Методология и методы исследования

Работа проводилась на базе бактериологической лаборатории научно-исследовательского центра Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Тверская государственная медицинская академия» Минздрава России (г. Тверь).

Материалом для исследования служили фекалии 156 здоровых студентов-добровольцев медицинской академии в возрасте от 18 до 21 года (120 девушек и 36 юношей), коренных жителей, проживающих в третьем поколении в Тверской, Ярославской, Московской, Костромской, Брянской, Тульской, Воронежской, Калужской, Тамбовской, Смоленской и Владимирской областях ЦФО РФ. У всех студентов материал брали в зимний период. На момент обследования никаких жалоб на нарушение функций пищеварительного тракта добровольцы не предъявляли.

Исследования проводились с разрешения этического комитета Тверской государственной медицинской академии. Все лица давали добровольное информированное согласие на бактериологическое исследование их материла. Проводилось анкетирование (Приложение), включающее в себя данные об отсутствии хронических заболеваний ЖКТ, острых кишечных инфекций за полгода до взятия материала, наличии аппендикса (с удаленным аппендиксом труднее восстанавливать микрофлору кишечника после инфекционного заболевания), смешанном питании, переносимости лактозы (т.к. непереносимость лактозы характеризуется избыточным ростом и усилением жизнедеятельности

микрофлоры кишечника, усваивающей лактозу). В течение семи дней студенты не должны были принимать антимикробные препараты.

Таким образом, критериями включения студентов в исследование являлись отсутствие хронических заболеваний ЖКТ, острых кишечных инфекций за полгода до взятия материала, наличие аппендикса, смешанное питание, переносимость лактозы и проживание каждого в третьем поколении в одной из областей ЦФО. Выделение микроорганизмов

Для бактериологического исследования 1 г фекалий вносили в 9 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия (0,9% р-ра NaCl) и тщательно суспендировали путем встряхивания в течение 20-30 мин. Затем отстаивали и через 1 час из надосадочной жидкости делали разведения с

2 9

изотоническим раствором хлорида натрия с 10 до 10 . Из разведений делали посев на питательные среды с последующей инкубацией.

Для выделения аэробной и анаэробной микрофлоры посевы производили на отечественные и зарубежные питательные среды: желточно-солевой агар, среда Эндо (г. Оболенск), Эритрит агар (ФГУП НПО «Микроген», Москва), Sabouraud Dextrose Agar, MRS Agar, Schaedler Agar с кровью, Muller-Hinton II агар (BBL®). Микроаэрофилы выращивали в эксикаторах со свечой, а анаэробы - в микроанаэростатах (BBL®) с газогенераторными пакетами Gas Pack Plus (BBL®) в течение 24-48 часов при температуре 37° С.

Из изолированных колоний, выросших на соответствующих питательных средах, готовили мазки и окрашивали по методу Грама. Морфологические и тинкториальные свойства микроорганизмов изучали, пользуясь программно-аппаратным комплексом Диаморф Цито (увеличение 1:1000 с использованием бинокулярного микроскопа «Биолам»). Количество бактерий определяли путём подсчёта колониеобразующих единиц на 1 г фекалий (lg КОЕ/г). Методы идентификации выделенных микроорганизмов

Биохимическая активность определялась с помощью тест систем API® (bio Mérieux) и программного обеспечения API® WEB для ПК.

1) Идентификация микроорганизмов рода Lactobacillus, Bacillus Грамположительные палочки, располагающиеся одиночно, или небольшими

скоплениями, выросшие на MRS среде и кровяном МПА в микроаэрофильных и аэробных условиях, определяли, используя тест-систсму API® 50 СН (bioMerieux Vitek, Inc.).

2) Идентификация микроорганизмов рода Clostridium, Bifidobacterium, Actinomyces, Bacteroides, Peptostreptococcus, Leptotrichia

Микроорганизмы, выросшие на средах Schaedler-agar в анаэробных условиях, идентифицировали, используя тест-систему API® 20 A (bioMerieux Vitek, Inc.).

3) Идентификация микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae

Грам- и оксидазоотрицательные палочки (энтеробактерии) изучали с помощью тест-системы BBL®Enterotube™ II (Becton Dickinson GmbH).

4) Идентификация микроорганизмов рода Enterococcus

Грамположительные каталазоотрицательные кокки, расположенные преимущественно цепочками или парами исследовали по биохимическим свойствам, используя тест-систему API® 20 STREP (bioMerieux Vitek, Inc.).

5) Идентификация микроорганизмов рода Staphylococcus Грамположительные кокки, расположенные гроздьями, выросшие на ЖСА в

аэробных условиях определяли, используя тест-систему API® Staph (bioMerieux Vitek, Inc.) [39, 70].

6) Идентификация микроорганизмов рода Candida

Дрожжевые грибы рода Candida определяли, используя тест-систему API® 20 С AUX (bioMerieux Vitek, Inc.).

Каждой реакции присваивался свой цифровой код, благодаря которому программа API® WEB для ПК выдавала окончательные результаты по биохимической идентификации микроорганизмов.

Генетическая идентификация лактобацилл и бифидобактерий

1) Видовую идентификацию лактобацилл проводили с помощью молеку-лярно-генетических методов на основе амплификации и секвенирования фрагментов гена 168 рРНК на базе Института общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН (г. Москва).

Реакционная смесь для ПЦР на 100 мкл включала: 10-кратный буфер (10 мкл), смесь дезоксинуклеотидфосфатов (10 мкл), диметилсульфоксид (5 мкл), МёС12 из р-ра 50 шМ (6 мкл), Тац-полимераза 5 ед/мкл (0,8 мкл), ДНК хромосомная (0,3 мкг), ДНК плазмидная (0,05 мкг), ПЦР-фрагмент (0,02 мкг), дистилиро-ванная вода (до 100 мкл), праймеры прямой и обратный (по 20 пкмоль). 8 мкл из 25 мкл смешивали с краской и наносится на форез.

Для подбора нужной концентрации MgCl2 делали реакционную смесь в объеме 100 мкл, разливали на 4 пробирки по 25 мкл и добавляли в них 0,5мкл -1,0 мкл - 1,5 мкл - 2 мкл М§С1г из р-ра 50 шМ. По результатам фореза выбрали нужную концентрацию MgCl2, при которой образуется минимальное число и максимальное количество продуктов полимеразноцепной реакции (ПЦР).

Для амплификации использовались олигонуклеотидные праймеры фирмы «Синтол». ПЦР проходила в стандартных условиях (94°С - 5 мин.; 40 циклов 94°С - 30 сек., 54°С -40 сек., 72°С - 1 мин.; 72°С - 5 мин). В реакции использовали отцентрифугированную и промытую буфером ТюЕ0,1 (ЮмМ Трис-НС1 и 0.1 мМ ЭДТА, рН 8.0) биомассу штаммов в объеме 0,5 мкл. В четырехканальных термоциклерах "Терцик» ("ДНК-Технология") проводилась амплификация. Разделение продуктов реакции проводили в 1% агарозном геле с помощью трис-боратного буфера.

Электрофорез проводили в агарозном геле в горизонтальной камере. Был сделан 1% раствор агарозы в 0,5-кратном форезном буфере, раствор нагрели в кипящей водяной бане до полного растворения агарозы, добавили этидиум бромид до концентрации 0,5 мкг/мл.

Чуть остывший раствор агарозы с этидиум бромидом выливали в форезную камеру слоем 5-6 мм. Форезиый буфер добавили в форезную камеру так, чтобы он на несколько миллиметров был выше агарозного геля. Подсоединили электроды (ДНК движется от - к +), включили напряжение.

Далее выключили напряжение, нанесли пробы (водные растворы ДНК с буфером для нанесения на гель объемом 10-25 мкл). Снова включили напряжение. Длительность разгонки ДНК определялась величиной фрагментов ДНК, составив 0,5 - 1,5 час.

Гель сфотографировали на хемископе в ультрафиолетовом свете через оранжевый светофильтр.

5-кратный Трис-боратный форезный буфер, на 0,5 л Трис основной (м.м. 121) 26,95 г

ЭДТА, 2-Na соль (м.м. 372,3) 2,33 г

Борная кислота (м.м. 61,81) 13,75 г

Буфер для нанесения проб на 5 мл содержал 2 г сахарозы и 0,5 мл 2,5% р-ра бромфенолового синего.

Определение нуклеотидной последовательности фрагментов ДНК проводили в НИИ ФХМ ФМБА РФ на приборе 3730x1 DNA Analyzer (AppliedBiosystems,USA) с набором реактивов BigDye® Terminator v3.1 CycleSequencingKit (AppliedBiosystems, USA). Для определения вида по гену 16S рРНК использовали стандартные праймеры 27f (AGAGTTTGATCCTGGCTCAG) и 1492r (GGTTACCTTGTTACGACTT); ожидаемый размер ПЦР-фрагментов -1465 пн [51, 111].

Анализ нуклеотидной последовательности проводили с помощью алгоритма BLASTn и базы данных GenBank (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi). Видовую принадлежность устанавливали при сходстве 99-100%.

2) Родовое и видовое генетическое типирование бифидобактерий проверялось методом ПЦР на базе Института общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН (г. Москва) с использованием следующих праймеров:

Родовые праймеры для Bifidobacterium (16S RNA gene-targeted primers) представлены в таблице 1.

Таблица 1 - Родовые праймеры для Bifidobacterium

Название олигонуклеотида Структура олигонуклеотида Ожидаемый размер ПЦР-фрагмента

Bifl64-f GGGTGGTAATGCCGGATG 500

Bif662-r CCACCGTTACACCGGGAA

g-Bifíd-F CTCCTGGAAACGGGTGG 549-563

g-Bifid-R G GTGTTCTTCCCG AT ATCT AC A

bif-sec CATGCCCCTACGTCCAG

23S-bif CAAGGCATCCACCATACGC 1440

Видовые праймеры для рода Bifidobacterium представлены в таблице 2.

Таблица 2 - Видовые праймеры для рода Bifidobacterium

Название вида Название олигонуклеотида Структура олигонуклеотида Ожидаемый размер ПЦР-фрагмента

В. adolescentis group BiADOg-la CTCCAGTTGGATGCATGTC 279

BiADOg-lb TCCAGTTGACCGCATGGT

BiADO-2 CGAAGGCTTGCTCCCAGT

В. angulatum BiANG-1 CAGTCCATCGCATGGTGGT 275

BiANG-2 GAAGGCTTGCTCCCCAAC

В. bifidum BiBIF-1 CCACATGATCGCATGTGATTG 278

BiBIF-2 CCGAAGGCTTGCTCCCAAA

В. breve BiBRE-1 CCGGATGCTCCATCACAC 288

В1ВБШ-2 АСАААОТОССТТССТСССТ

В. сШепиШит §гоир В1САТё-1 СССАТССТССОАСТССТ 285

В1САТв-2 СОААСССТГССТСССОАТ

В. 1ощит В1ШЫ-1 ТТССАОТТОАТСОСАТООТС 831

В1ЬОК-2 ОСвААОСССТАТСТСТАСОА

В. т/апШ ВП№-1 ТТССАОТТОАТСССАТССТС 828

В1ШР-2 ООАААССССАТСТСТОООАТ

В. с1епИит АТСССОСОССТТССССТ 387

В1БЕК-2 ОААОООСГГССТСССОА

В. gallicum В1САЬ-1 ТААТАССООАТетТССаСТС 170-189

ВЮАЬ-2 АСАТССССОАААвСАСОС

В. аттаНя зиЬяр. \actis ВЫсХ-¥ СССПТССАССССТССС 194

Вкс^Я ААОООАААССОТСТСТССАС

Методика бактериологического исследования кала на дисбактериоз кишечника

В стерильную емкость отбирался 1 г кала, который доставляли в лабораторию не позднее, чем через 3 часа. В стерильный, предварительно взвешенный стеклянный сосуд вносили порцию кала, снова взвешивали и определяли массу биоматериала. В сосуд с калом добавляли стерильный 0,9%-й изотонический раствор хлорида натрия в разведении 1:10. Кал тщательно растирали о стенки лабораторного сосуда и встряхивали до образования гомогенного раствора.

После отстаивания 1 мл суспензии переносился в следующую пробирку с 9 мл изотонического раствора хлорида натрия с получением в ней разведения 10" . Из полученного разведения материала готовили еще семь разведений.

Далее производили посев на плотные питательные среды по секторам. Из соответствующих разведений на сектор наносился 0,1 мл суспензии.

На второй день исследования из термостата вынимали засеянные чашки, подсчитывали количество колоний микроорганизмов, готовили мазки с окраской по Граму и определяли морфологические и тинкториальные свойства. Колонии, выросшие на MRS агаре и Schaedler-agar, учитывали через двое суток. Дальнейшая идентификация проводилась с использованием биохимических тест-систем, описанных выше.

Для выявления степени дисбактериоза имело значение количество анаэробных микроорганизмов, определяли количество бифидобактерий и лакто-бацилл, учитывали количество лактозоположительных эшерихий, стафилококков, дрожжевых грибов рода Candida и др. Степень дисбактериоза определяли, пользуясь ОСТ [54].

Методы изучения иробиотического потенциала лактобацилл и бифидобактерий

Определение антагонистической способности лактобацилл и

бифидобактерий проводили методом прямого и отсроченного антагонизма.

С помощью метода прямого антагонизма, описанного Л.П. Блинковой, проводили первичное исследование антагонистической способности лактобацилл и бифидобактерий [11]. На поверхность плотной питательной среды (лактоагар (MRS) для лактобацилл и Шедлер агар для бифидобактерий) петлей засевали суточную культуру лактобацилл (концентрация 1-109по ОСО мутности ГИСК им. Л.А.Тарасевича) и бифидобактерий в виде прямой полосы от края до края через центр чашки.

Для определения антагонистической активности лактобацилл и бифидобактерий в отношении тестовых культур грамотрицательных, грамположительных микроорганизмов и дрожжевых грибов рода Candida свежевыделенные тестовые культуры подсевали штрихами перпендикулярно к исследуемой. Посев тест-штаммов проводили петлей диаметром 1 мм в

направлении от зоны роста штамма лактобацилл и бифидобактерий, не касаясь ее, и перпендикулярно ей. В качестве тестовых культур был использованы штаммы Staphylococcus aureus АТСС 25923, Candida albicans АТСС 885-653, Escherichia coli АТСС 25922.

Культивирование осуществляли в термостате при 37°С 24 - 48 часов. Показателем прямого антагонизма лактобацилл и бифидобактерий служили зоны отсутствия роста тест-культур. Степень антагонизма определяли по следующим критериям: 10 мм и менее - низкая, 10-20 мм - средняя, 21 мм и более - высокая.

После биохимической и генетической идентификации антагонистическую способность микроорганизмов выявляли методом агаровых слоев или методом отсроченного антагонизма [11]. На поверхность MRS агара для лактобацилл и бифидум агара для бифидобактерий наносили бляшками исследуемые микроорганизмы и культивировали в микроаэрофильных и анаэробных условиях соответственно. Затем убивали культуры лактобацилл и бифидобактерий парами хлороформа и равномерно распределяли слой тест-культуры, растворенной в полужидкой среде. Культивирование осуществляли в стандартных условиях. Показателем отсроченного антагонизма служили зоны отсутствия роста тест-культур вокруг исследуемых микроорганизмов.

В качестве тестовых культур были использованы следующие штаммы: Staphylococcus aureus АТСС 25923, Candida albicans АТСС 885-653, Pseudomonas aeruginosa АТСС 9027, Salmonella enterica Typhimurium 415, Shigella sonnei I фазы 941, Bacillus subtilis 534, Escherichia coli ATCC 25922.

Степень антагонизма определяли по критериям, описанным в методике прямого антагонизма.

Определение ферментов агрессии лактобацилл и бифидобактерий

У лактобацилл и бифидобактерий определяли наличие лецитиназной, казеинолитической, уреазной, желатиназной, нуклеазной, каталазной и гемолитической активности.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Беляева, Екатерина Андреевна, 2014 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Авдеев, В.Г. Применение пробиотиков и пребиотиков в гастроэнтерологии / В. Г. Авдеев // Врач. - 2008. - № 3. - С. 24 - 27.

2. Александрович, Н.Ж. Нарушение микробного пейзажа человека и пути их коррекции / Н.Ж. Александрович, З.И. Пирогова // Клиническое питание. -2005. - № 2. - С. 43 - 46.

3. Алешкин, A.B. Поликомпонентные пробиотические препараты - конструирование, производство и стратегия их продвижения на российском фармацевтическом рынке: автореф. дне. ... докт. биол. наук: 03.01.06; 03.02.03 / Алешкин Андрей Владимирович. - Москва, 2011. - С. 36 - 37.

4. Алешукина, A.B. Отношения микроб-хозяин в биотопах толстой кишки при дисбактериозах: автореф. дис. ... докт. мед. наук : 03.02.03 / Алешукина Анна Валентиновна. - Москва, 2012. - С. 20-30.

5. Амерханова, A.M. Научно-производственная разработка новых препаратов синбиотиков и клинико-лабораторная оценка их эффективности: автореф. дис. ... докт. мед. наук : 03.00.07 ; 03.00.23 / Амерханова Аделаида Михайловна. - Москва, 2009. - С. 40 - 41.

6. Андреева, И.В. Потенциальные возможности применения пробиотиков в клинической практике // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. - 2006. - № 8. - С. 151 - 172.

7. Анохин, В.А. Роль основных представителей анаэробной кишечной микрофлоры в норме и патологии /В.А. Анохин, Ю.А. Тюрин // Казанский медицинский журнал. - 2001. - Т. 82. - № 2. - С. 149 - 151.

8. Ардатская, М.Д. Микробиоценоз кишечника и его роль в развитии и поддержании заболеваний желудочно-кишечного тракта / М.Д. Ардатская // Газета «Новости медицины и фармации» Гастроэнтерология (тематический номер) / Научный обзор. - 2010. - № 313.

9. Аруин, JI. И. Helicobacter pylori: каким образом один возбудитель вызывает разные болезни / Л.И. Аруин // Эксперим. и клин, гастроэнтерол. - 2004. - № 1.-С. 36-41.

Ю.Бельмер, С.В. Микробиоценоз кишечника и иммунитет / С.В. Бельмер, А. И. Хавкин // Лекции по педиатрии. Гастроэнтерология. - М. , 2003. - Т.З. - С. 101 - 111.

П.Блинкова, Л.П. Бактериоцины: критерии, классификация, методы выявления / Л.П. Блинкова // Журн. микробиол. - 2003. - № 3. - С. 109 - 113.

12. Бойцов, А.Г. Методы определения количества бактерий и статистической обработки результатов: справочник / А.Г. Бойцов, О.Н. Ластовка, А.А. По-рин. - С-Петербург.: ООО «Ладога», 2003. - 51 с.

13.Бондаренко, В.М. Дисбактериоз кишечника как клинико-лабораторный синдром: современное состояние проблемы / В.М. Бондаренко, Т.В. Мацу-левич. - М.: ГЭОТАР-Медиа, - 2007. - С. 8 - 35.

14.Бондаренко, В.М. Дисбактериозы кишечника у взрослых / В.М. Бондаренко, Н.М. Грачева, Т.В. Мацулевич. - М., 2003. - 224 с.

15.Бондаренко, В.М. Механизм действия пробиотических препаратов / В.М. Бондаренко, Р.П. Чуприна, М.А. Воробьева // Биопрепараты. - 2003. - № 3. -С. 2-5.

16.Бондаренко, В.М. Микроэкологические изменения кишечника и их коррекция с помощью лечебно-профилактических препаратов / В.М. Бондаренко, Н.М. Грачева, Т.В. Мацулевич, А.А. Воробьев // Российский журнал гастроэнтерология, гепатология, колопроктология. - 2003. - № 4. - С. 66- 75.

17.Бондаренко, В.М. Поликомпонентные пробиотики: механизм действия и терапевтический эффект при дисбиозах кишечника / В.М. Бондаренко // Фарматека. - 2005. - Т. 20. .-№115.- С. 46 - 54.

18.Бондаренко, В.М. Экспресс-метод диагностики дисбактериоза кишечника / В.М. Бондаренко, В.М. Виноградов, Ю.В. Червипец // Гастроэнтерология Санкт-Петербурга. - 2004. - № 2. - Ml63 с.

19.Ботина, С.Г. Генетическое разнообразие бактерий рода Lactobacillus из га-строинтестинальной микробиомы людей / С.Г. Ботина, Н.В. Коробан, К.М. Климина, А.А. Глазова, Н.В. Захаревич, В.В. Зинченко, В.Н. Даниленко // Генетика. - 2010. - № 12.

20.Ботина, С.Г. Молекулярно-биологические подходы к отбору бактериальных культур при создании заквасок для биотехнологии: автореф. дис. ... докт. биол. наук: 03.02.03; 03.01.06 / Ботина Светлана Геннадиевна. - Москва, 2011.-С.4-5.

21.Брилис, В.И. Методика изучения адгезивного процесса / В.И. Брилис, Т.А. Брилене, Х.П. Ленцнер, А.А. Ленцнер // Лаб. дело. - 1986. - № 4. - С. 210 -212.

22.Брудастов, Ю.А. Выживание бактерий при взаимодействии с эффекторны-ми механизмами защиты хозяина: автореф. дис. ... докт. мед. наук: 03.00.07 / Брудастов Юрий Авенирович. - Оренбург. - 2004. - С. 37 - 40.

23.Вахитов, Т.Я. Перспективы создания пробиотических препаратов на основе «чувства кворума» у бактерий / Т.Я. Вахитов, Л.Н. Петров, В.М. Бондарен-ко // Журнал, микробиол. - 2006. - № 3. - С. 105 - 113.

24.Воробьев, А.А. Исследование пристеночной микрофлоры желудочно-кишечного тракта у человека в норме и при патологии / А.А. Воробьев, Ю.В. Несвижский, Е.А. Богданова // Вестник Российской Академии Медицинских наук. - 2004. - № 2. - С. 43 - 47.

25.Глушанова, Н.А. Взаимоотношения пробиотических и индигенных лакто-бацилл в условиях совместного культивирования in vitro / Н.А. Глушанова, Б.А. Шендеров // Журнал микроб, эпидемиол. и иммунобиол. - 2005. - № 2. -С. 56-61.

26.Глушанова, Н.А. Экспериментальное обоснование новых подходов к коррекции микробиоценоза кишечника: дисс. ... докт. мед. наук: 03.00.07 / Глушанова Нина Алексеевна. - Москва. - 2006. - 260 с.

27.Давыдкин, В.Ю. Технология и конструирование сухих биопрепаратов на основе микрокапельных порошков: автореф. дис. ... докт. биол. наук: 03.01.06 / Давыдкин Валерий Юрьевич. - М., 2011. - С. 44 - 45.

28.Диц, Е.В. Микробиологические аспекты дисбактериоза кишечника у детей первого года жизни и взрослых / Е.В. Диц, П.Н. Соколов // Материалы российской научно-практической конференции «Актуальные проблемы инфекционной патологии», посвященной 85-летию кафедры инфекционных болезней и эпидемиологии Сибирского государственного медицинского университета (Томск, ноябрь 2009). - Томск, 2009. - С. 45 - 47.

29.Доронин, А.Ф. Функциональное питание / А.Ф. Доронин, Б.А. Шендеров. -М., Грант, 2002. - 296 с.

30.Жиленкова, О.Г. Селекция производственно-перспективных штаммов би-фидобактерий, выделенных от детей: автореф. дис. ... канд. биол. наук: 03.02.03, 03.01.06 / Жиленкова Ольга Геннадьевна. - Москва, 2011. - 3 с.

31.Конев, Ю.В. Дисбиозы и их коррекция /10.В. Конев // Consilium medicum. -2005. - Т. 7. - № 6. - С. 432 - 437.

32.Конев, Ю.В. Нарушение микробиоценоза кишечника и его лечение / Ю.В. Конев // Справочник поликлинического врача. - 2007. - № 7. - С. 34 - 38.

33.Корниенко, Е.А. Современные принципы выбора пробиотиков / Е.А. Корниенко // Детские инфекции. - 2007. - Т. 6. - № 3. - С. 63 - 68.

34.Коршунов, В.М. Качественный состав нормальной микрофлоры кишечника у лиц различных возрастных групп / В.М. Коршунов, JI.В.Поташник // Микробиология. - 2001. - № 2. - С. 57 - 62.

35.Коршунов, В.М. Характеристика биологических препаратов и пищевых добавок для функционального питания и коррекции микрофлоры кишечника / В.М. Коршунов, Б.А. Ефимов, А.П. Пикина // Журн. микробиол. - 2000. -№3. - С. 86-91.

36.Куваева, И.Б. Микроэкологические и иммунные нарушения у детей / И.Б. Куваева, К.С. Ладодо. - М.: Медицина, 1991. - 240 с.

37.Кузнецова, Г.Г. Об оценке состояния микробиоценоза толстой кишки /Г.Г. Кузнецова, С.А. Шевелева // Пробиотические микроорганизмы - современное состояние вопроса и перспективы использования: Материалы международной научно-практической конференции с междунар участием. - М. , 2002.-С. 30-31.

38.Кунда, М.С. Генотипирование штаммов бактерий рода Bifidobacterium и рода Legionella на основе секвенирования нескольких фрагментов генома: автореф. дис. ... канд. биол. наук: 03.00.07, 03.00.03 / Кунда Марина Сергеевна. - Москва, 2009. - С. 3-5.

39.Лебедев, Д.В. Микробиоценозы полости рта у больных генерализованным пародонтитом, способ диагностики и коррекции: дисс... канд. мед. наук : 03.02.03 / Лебедев Денис Викторович. - Москва, 2011. - 120 с.

40.Леванова, Л.А. Микроэкология кишечника жителей Западной Сибири. Коррекция дисбиотических состояний: автореф. дис. ... докт. мед. наук : 03.00.07 / Леванова Людмила Александровна. - М., 2003. - С. 40 - 45.

41.Лыкова, Е.А. Дисбактериоз и здоровье / Е.А. Лыкова // Российские аптеки. -М., 2001. -№4. - 13 с.

42.Малов, В.А. Антибиотик-ассоциированные диареи // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. - 2002. - Т. 4. - № 1.

43.Малов, В.А. Микробиоценоз желудочно-кишечного тракта: современное состояние проблемы / В.А. Малов, Н.М. Гюлазян // Лечащий Врач . - 2007. -№2.-С. 16- 18.

44.Михайлова, Е.С. Микробиоценозы эзофагогастродуоденальной зоны у больных с патологией желчевыводящих путей: дисс... канд. мед. наук : 03.00.07 / Михайлова Елена Сергеевна. - Москва, 2009. - 146 с.

45.Младзиевская, Ю.А. Совершенствование биотехнологического производства и методов контроля качества пробиотиков на основе бифидобактерий и лактобацилл: дис. ... канд. биол. наук : 03.00.23 / Младзиевская Юлия Артуровна. - СПб., 2005. - 208 с.

46.Несвижский, Ю.В. Изучение изменчивости кишечного микробиоценоза человека в норме и патологии / Ю.В. Несвижский // Вестник Российской АМН. - 2003. - № 1. - С. 49 - 53.

47. Никитин, В.М. Справочник методов биохимической экспресс-индикации микробов / В.М. Никитин. - Кишинев, 1986. - 294 с.

48.Нилова, Л.Ю. К вопросу о применении пробиотиков для коррекции дисбак-териоза толстого кишечника / Л.Ю. Нилова, А.Г. Бойцов, Е.А. Оришак // Вестник СПбГМА им. И.И. Мечникова. - 2008. - № 3. - С. 154 - 157.

49.Новик, Г.И. Биологическая активность микроорганизмов-пробиотиков / Г.И. Новик, A.A. Самарцев, Н.И. Астапович // Прикладная биохимия и микробиология. - 2006. - Т. 42. - № 2. - С. 187 - 194.

50.Новик, Г.И. Продукция гидролаз и антибиотикорезистентность молочнокислых и бифидобактерий / Г.И. Новик, Н.И. Астапович, Н.Е. Рябая // Прикладная биохимия и микробиология. - 2007. - Т. 43. - № 2. - С. 184 - 192.

51.Новикова, H.A. Разработка метода индикации лакто- и бифидобактерий на основе мультиплексной полимеразной цепной реакции / H.A. Новикова, А.Г.Мочалова, К.Я. Соколова // Материалы международной конференции Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы. - М., 2004. - С. 59 - 60.

52.Общая фармакопейная статья. Требования к штаммам микрорганизмов, используемым для производства пробиотиков для медицинского применения. -2013.-С.4-5.

53.0нищенко, Г.Г. Иммунобиологические препараты и перспективы их применения в инфектологии / Г.Г. Онищенко, В.А. Алёшкин, С.С. Афанасьев // М.: ГОУ ВУНМЦ МЗ РФ, 2002. - 608 с.

54.Отраслевой Стандарт «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника» (ОСТ 91500.11.0004-2003, утверждён Приказом Министерства здравоохранения РФ № 231 от 09.06.2003).

55.Перунова, Н.Б. Характеристика биологических свойств микроорганизмов в бактериально-грибковых ассоциациях кишечника: автореф. дис. ... канд. мед. наук: 03.00.07 / Перунова Наталья Борисовна. - Оренбург, 2003. - С. 20-22.

56.Попкова, С.М. Микробная экология человека в условиях техногенного прессинга промышленных городов Восточной Сибири: автореф. дис. ... докт. биол. наук: 03.00.16, 14.00.07 / Попкова София Марковна. - Иркутск. -2004.-С. 40-45.

57. Савицкая, К.И. Современные представления о роли и составе кишечной микрофлоры у здоровых взрослых людей / К.И. Савицкая, A.A. Воробьев, Е.Ф. Швецова // Вестник Российской АМН. - 2002. - № 2. - С. 50 - 53.

58. Савченко, Т.Н. Микроэкология новорожденных: автореферат дис. ... докт. мед. наук: 03.02.03 / Савченко Татьяна Николаевна. - Волгоград, 2011. - 37 с.

59. Самоукина, A.M. Перспективные штаммы энтерококков и лактококков для создания новых пробиотических препаратов: дисс... канд. мед. наук: 03.00.07 / Самоукина Анна Михайловна. - Москва, 2006. - 118 с.

60.Семенов, A.B. Характеристика антагонистической активности бактерий при межмикробных взаимодействиях: автореф. дис. ... канд. биол. наук: 03.00.07 / Семенов Александр Васильевич. - Оренбург, 2009. - С. 19-20.

61.Субботина, М.Е. Разработка методики генотипирования бифидобактерий на основе двухлокусного секвенирования с целью видовой идентификации штаммов: автореф. дис. ... канд. биол. наук: 03.00.23 / Субботина Марина Евгеньевна. - Москва, 2009. - С. 2-3.

62.Ткаченко, Е.И. Питание, микробиоценоз и интеллект человека / Е.И. Тка-ченко, Ю.П. Успенский. - СПб.: СпецЛит, 2006. - 590 с.

63.Точилина, А.Г. Биохимическая и молекулярно-генетическая идентификация бактерий рода Lactobacillus: автореф. дис. ... канд. биол. наук: 03.00.04, 03.00.07 / Точилина Анна Георгиевна. - Нижний Новгород, 2009. - 25 с.

64.Урсова, Н.И. Современные технологии в коррекции дисбактериозов кишечника у детей / II. И. Уреова // Фарматека. - 2008. - № 2. - С. 19 - 24.

65.Ушкалова, Е.А. Роль пробиотиков в гастроэнтерологии / Е. А. Ушкалова // Фарматека. - 2007. - № 6. - С. 16 - 23.

66.Хавкин, А.И. Микробиоценоз кишечника и иммунитет / А.И. Хавкин // Русский медицинский журнал. - 2003. - № 3. - С. 17-21.

67.Червинец, В.М. Дисбактериоз кишечника: современные аспекты изучения проблемы, принципы диагностики и лечения / В. М. Червинец, В.Ф. Виноградов, JI.E. Смирнова, Ю.В. Червинец, В.М. Бондаренко - Тверь, 2004. -124 с.

68. Червинец, В.М. Изменение микробиоценоза при воспалительных и эрозив-но-язвенных поражениях пищевода, желудка и двенадцатиперстной кишки и пути ее коррекции: автореф. дис. ... докт. мед. наук : 03.00.07 / Червинец Вячеслав Михайлович. - М., 2002. - С. 34 - 36.

69.Червинец, Ю.В. Высокоантагонистические штаммы лактобацилл, перспективные для конструирования новых пробиотических препаратов: дисс. ... канд. мед. наук: 03.00.07 / Червинец Юлия Вячеславовна. - М., 2006. - 104 с.

70.Червинец, Ю.В. Симбиотические взаимоотношения лактобацилл и микроорганизмов желудочно-кишечного тракта: дисс. ... докт. мед. наук: 03.02.03 / Червинец Юлия Вячеславовна. - М., 2012. - 366 с.

71.Черкасов, C.B. Ассоциативный симбиоз как биологическая основа колонизационной резистентности хозяина (на модели женского репродуктивного тракта): автореф. дис. ... докт. мед. наук : 03.00.07 / Черкасов Сергей Викторович. - Оренбург, 2011.

72.Чернин, В.В. Симбионтное пищеварение человека. Физиология. Клиника, диагностика и лечение его нарушений /В.В. Чернин, А.И. Парфенов, В.М. Бондаренко, О.В. Рыбальченко, В.М. Червинец. - Тверь: ООО «Издательство «Триада», 2013. - С. 82 - 83.

73.Шевелева, С.А. Функциональная эффективность различных кисломолочных и пробиотических продуктов / С.А. Шевелева, Г.Г. Кузнецова, С.Ю. Бати-щева, Н.Р. Ефимочкина // Сборник материалов международной конференции: пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы. - М., 2004. - С. 11 - 12.

74.Шендеров, Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Том 3: Пробиотики и функциональное питание / Б.А. Шендеров. -М.: Грант, 2001. - С. 151 - 159.

75.Шендеров, Б.А. Современное состояние и перспективы развития концепции пробиотики, пребиотики и синбиотики / Б.А. Шендеров // Пищевые ингредиенты. - 2005. - № 2. - С. 23 - 26.

76.Широбоков, В.П. Мшробна еколопя людини з кольоровим атласом / В.П. Широбоков, Д.С. Янковський, Г.С. Димент. - К.: ТОВ «Червона Рута-Туре», 2008.-312 с.

77.Щербаков, П.Л. Микроэкология кишечника у детей и ее нарушения // Фар-матека. - 2007. - № 14. - С. 28 - 34.

78.Янковский, Д.С. Микрофлора и здоровье человека / Д.С. Янковский, Г.С. Дымент. - К. : ТОВ «Червона Рут-Турс», 2008. - 552 с.

79. Ammor, M.S. Analysis of tetracycline resistance tet(W) genes and their flanking sequences in intestinal Bifidobacterium species /M.S. Ammor, A.B Flôrez, P. Alvarez-Martin, A. Margolles, B. Mayo // J Antimicrob Chemother. - 2008. - № 62. - P. 688 -93.

80.Anas, M. Screening of autochthonous Lactobacillus species from Algerian raw goats' milk for the production of bacteriocin-like compounds against Staphylococcus aureus / M. Anas, B.A. Zinedine, H.A. Rizk, H.J. Eddine // African Journal of Biotechnology. - 2012. - Vol. 11 (20). - P. 4595 - 4607.

81.Andrzejewska, E. Evaluation of the antagonistic effect of Lactobacillus acidophilus on clinical strains of Helicobacter pylori / E. Andrzejewska, A. Szkaradkie-wicz // Med Dosw Mikrobiol. - 2007. - № 59 (1). - P. 59 - 64.

82.Arumugam, M. Enterotypes of the human gut microbiome / M. Arumugam, E.D. Harrington, K.U. Foerstner, J. Raes // Nature. - 2011. - № 473. - P. 174 - 180.

83.Bai, A.P. Probiotics inhibit TNFa-indueed interleukin-8 secretion of HT29 cells / A.P. Bai, Q. Ouyang, W. Zhang, C.I I. Wang // World J Gastroenterol. - 2004. -№ 10. - P. 455 -457.

84.Bai, A.P. Probiotics modulate inflammatory cytokine secretion from inflamed mucosa in active ulcerative colitis / A.P. Bai, Q. Ouyang, W. Zhang, C.H. Wang // Int J Clin Pract. - 2006. - № 60. - P. 284 - 288.

85.Besselink, M.G.H. Probiotic prophylaxis in acute pancreatitis: prudence required / M.G.H. Besselink, H.C. van Santvoort, M.A. Boermeester, E. Buskens, L.M. Akkermans, H.G. Gooszen // Nat Clin Pract Gastroenterol Hepatol. - 2009. - № 6. -P. E3-6.

86.Bibiloni, R. Surface characterization and adhesive properties of Bifidobacteria / R. Bibiloni, P.F. Perez, G.L Garrote, E.A Disalvo, G.L. De Antoni // Methods Enzymol. - 2001. - № 336. - P. 411 - 427.

87.Blandino, G. Probiotics: overview of microbiological and immunological characteristics / G. Blandino, D. Fazio, R. Marco II Expert Rev. Anti Infect. Ther. -2008. - V.6. - № 4. - P. 497 - 508.

88.Blomberg, L. Inhibition of adhesion of Escherichia coli K88 to piglet ileal mucus by Lactobacillus spp. / L. Blomberg, A. Henriksson, P. L. Conway // Appl. Environ. Microbiol. - 1992. - № 59. - P. 34 - 39.

89.Boirivant, M. The mechanism of action of probiotics / M. Boirivant, W. Strober // Curr. Opin. Gastroenterol. - 2007. - № 23. - P. 679 - 692.

90.Boyle, R. J. The role of probiotics in the management of allergic disease / R.J. Boyle, M.L.K. Tang // Clin. Exp. Allergy. - 2006. - № 36. - P. 568 - 576.

91 .Bron, P.A. Emerging molecular insights into the interactions between probiotics and the host intestinal mucosa / P.A. Bron, P. van Baarlen, M. Kleerebezem // Nature reviews. Microbiology. - 2011.

92.Cadieux, P. Evaluation of rcuterin production in urogenital probiotic Lactobacillus reuteri RC-14 / P. Cadicux, A. Wind, P. Sommer, L. Schaefer, K. Crowley, R.A. Britton, G. Reid // Appl Environ Microbiol. - 2008. -№ 74. - P. 4645 - 9.

93.Callanan, M. Genome sequence of Lactobacillus helveticus, an organism distinguished by selective gene loss and insertion sequence element expansion / M. Callanan, P. Kaleta, J. O'Callaghan, O. O'Sullivan, K. Jordan, O. McAuliffe, A. Sangrador-Vegas, L. Slattery, G.F. Fitzgerald // J. Bacteriol. - 2008. - № 190. - P. 727-735.

94.Camilleri, M. Probiotics and irritable bowel syndrome: rationale, putative mechanisms, and evidence of clinical efficacy/ M.Camilleri // J. Clin. Gastroenterol. - 2006. - № 40. - P. 264 - 269.

95.Canducci, F. A lyophilized and inactivated culture of Lactobacillus acidophilus increases Helicobacter pylori eradication rates / F. Canducci, A. Armuzzi, F. Cremonini, G. Cammarota, F. Bartolozzi, P. Pola, G. Gasbarrini, A. Gasbarrini // Aliment Pharmacol Ther. - 2000. - № 14. - P. 1625-9.

96.Chauviere, G.J. Adhesion of human Lactobacillus acidophilus strain LB to human enterocyte-like Caeo-2 cells / G.J. Chauviere, M. Coconnier, S. Kerneis, J. Fourniat, A.L. Servin // Gen. Microbiol. - 1992. - № 138. - P. 1689 - 1696.

97.Chen, C.C. Probiotics and prebiotics: role in clinical disease states / C. C. Chen, W.A. Walker // Adv. Pediatr. - 2005. - № 52. - P. 77 - 113.

98.Coconnier, M.-H. Inhibition of adhesion of enteroinvasive pathogens to human intestinal Caco-2 cells by Lactobacillus acidophilus strain LB decreases bacterial invasion / M.-H. Coconnier, M.F. Bernet, S. Kerneis, G. Chauviere, J. Fourniat, A.L. Servin // FEMS Microbiol. Lett. - 1993. - № 110. - P. 299 - 306.

99.Cremonini, F. Effect of different probiotic preparations on anti-Helicobacter pylori therapy-related side effects: a parallel group, triple blind, placebo-controlled study / F. Cremonini, S. Di Caro, M. Covino, A. Armuzzi, M. Gabrielli, L. Santa-relli, E.C. Nista // Am. J. Gastroenterol. - 2002. - № 97. - P. 2744 - 2749.

100.Crociani, J. Adhesion of different bifidobacteria strains to human enterocyte-like Caco-2 cells and comparison with in vivo study / J.Crociani, J.P. Grill, M. Huppert, J. Ballongue / Lett. Appl. Microbiol. - 1995. - № 21. - P. 146 - 148.

101.Cross, M.L. Patterns of cytokine induction by gram-positive and gram-negative probiotic bacteria / M.L. Cross, A. Ganner, D. Teilab, L.M. Fray // FEMS Immunol Med Microbiol. - 2004. - № 42. - P. 173 - 180.

102.D'Aimmo, M.R. Antibiotic resistance of lactic acid bacteria and Bifidobacterium spp. isolated from dairy and pharmaceutical products / M. R. D'Aimmo, M. Modesto, B. Biavati // Int J Food Microbiol. - 2006. - 12 p.

103.Del Re, B. Adhesion, autoaggregation and hydrophobicity of 13 strains of Bifidobacterium longum / B.Del Re, A. Busetto, G.Vignola, B.Sgorbati, D. Pa-lenzona // Lett. Appl. Microbiol. - 2000. - № 31 - P. 438 - 442.

104.De Gregorio, P.R. In vitro and in vivo effects of beneficial vaginal lactobacilli on pathogens responsible for urogenital tract infections / P.R. De Gregorio, M.S. Tomás, M.C. Terraf, M.E. Nader-Macias // J Med. Microbiol. - 2014. - № 63. - P. 685 -96.

105.Deraz, S. Mode of action of acidocin D20079, a bacteriocin produced by the potential probiotic strain, Lactobacillus acidophilus DSM 20079 / S. Deraz, E. N. Karlsson, A. A. Khalil, B. Mattiasson // J. Ind. Microbiol. Biotechnol. - 2007. -№ 34.. p. 373 . 379.

106.Deshpande, G. Probiotics for prevention of necrotising enterocolitis in preterm neonates with very low birthweight: a systematic review of randomised controlled trials / G. Deshpande, S. Rao, S. Patole // Lancet. - 2007. - № 369. - P. 1614- 1620.

107.Dunne, C. In vitro selection criteria for probiotic bacteria of human origin: correlation with in vivo findings / C. Dunne, L. O'Mahony, L. Murphy, G. Thornton, D. Morrissey, S. O'Halloran, M. Feeney, S. Flynn, G. Fitzgerald, C. Daly, B. Kiely, G.C. O'Sullivan, F. Shanahan, J.K. Collins // Am J Clin Nutr. -2001. - № 73. - P. 386S-392S.

108.Durant, J.A. Expression of the hilA Salmonella typhimurium gene in a poultry Salm. enteritidis isolate in response to lactate and nutrients / J. A. Durant, D. E. Corrier, L.H. Stanker, S. C. Ricke // J. Appl Microbiol. - 2000. - № 89. - P. 63 -9.

109.Eijsink, V.G.H. Production of class II bacteriocins by lactic acid bacteria; an example of biological warfare and communication / V.G.H. Eijsink, L. Axelsson,

D.B. Diep, L.S. Havarstein, H. Holo, I.F. Nes // Antonie van Leeuwenhoek. -2002.-№81.-P. 639- 654.

1 lO.Ennahar, S. Class Ha bacteriocins: biosynthesis, structure and activity / S. Enna-har, T. Sashihara, K. Sonomoto, A. Ishizaki // FEMS Microbiol. Rev. - 2000. -№24. -P.85 - 106.

111.Ennahar, S. Phylogenetic diversity of lactic acid bacteria associated with paddy rice silage as determined by 16S ribosomal DNA analysis / S. Ennahar, Y. Cai, Y. Fujita 11 Appl. Environ. Microbiol. - 2003. - № 69. - P. 444 - 451.

112.Essid, I. Technological and safety properties of Lactobacillus plantarum strains isolated from a Tunisian traditional salted meat / I. Essid, M. Medin, M. Has-souna // Meat Sci. - 2009. - № 81. - P. 203-208.

113.Ewaschuk, J.B. Secreted bioactive factors from Bifidobacterium infantis enhance epithelial cell barrier function / J.B. Ewaschuk, H. Diaz, L. Meddings, B. Diederichs, A. Dmytrash, J. Backer, M. Looijer-van Langen, K.L.Madsen / Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. - 2008. - № 295. - P. 1025 - 1034.

114. Falagas, M.E. Probiotics for prevention of recurrent urinary tract infections in women: a review of the evidence from microbiological and clinical studies / M.

E. Falagas, G. I. Betsi, T. Tokas, S. Athanasiou // Drugs. - 2006. - № 66. - P. 1253 -61.

115. FAO/WHO. Evaluation of health and nutritional properties of powder milk and live lactic acid bacteria/ FAO/WHO // Food and Agriculture Organization of the United Nations and World Health Organization expert consultation report. -Rome, FAO. -2001.

116. Fedorak, R.N. Probiotics in the treatment of human inflammatory bowel diseases: update 2008 / R.N. Fedorak, L.A. Dieleman // J Clin Gastroenterol. -2008.-№42.-P. 97- 103.

117.Ferreira, C.L. In vitro evaluation of Lactobacillus gasseri strains of infant origin on adhesion and aggregation of specific pathogens / C.L. Ferreira, L. Grzeskowiak, M.C. Collado, S. Salminen // J Food Prot. - 2011. - № 74 (9). - P. 1482 - 7.

118.Forestier, C. Probiotic activities of Lactobacillus casei rhamnosus: in vitro adherence to intestinal cells and antimicrobial properties / C. Forestier, C. De Champs, C. Vatoux, B. Joly // Res. Microbiol. - 2001. - № 152. - P. 167 -173.

119.Geng-Feng, F. Bifidobacterium longum as an oral delivery system of endostatin for gene therapy on solid liver cancer / F. Geng-Feng, L. Xi, H. Ya-Yi, F. Yan-Rong // Cancer Gene Therapy. - 2005. - № 12. - P. 133 - 140.

120.Graver, M.A. The role of acidification in the inhibition of Neisseria gonorrhoeae by vaginal lactobacilli during anaerobic growth / M.A. Graver, J.J. Wade // Ann Clin Microbiol Antimicrob. - 2011. - № 10. - P. 8.

121.Gueimond, M. New methods for selecting and evaluating probiotics / M. Guei-mond, S. Salminen // Dig Liver Dis. - 2006. - № 38 (suppl 2). - P. 242 - 247.

122.Gusils, C. Preliminary studies to design a probiotic for use in swine feed / C. Gusils, M. Bujazha, S. González // Interciencia. - 2002. - № 27. - P. 409 - 413.

123.Haiping, L. Fermentation characteristics of six probiotic strains in soymilk / L. Haiping, L. Yan, J. Wang, Q. Zhang // Annals Of Microbiology. - 2012.

124. Haney, E.F. Peptide design for antimicrobial and immunomodulatory applications / E.F. Haney, R.E. Hancock // Biopolymers. - 2013. - № 100. - P. 572- 83.

125. Hedin, C. Probiotic and prebiotic use in patients with inflammatory bowel disease: a case-control study / C. Hedin, M. Mullard, E. Sharratt, C. Jansen,

J.D. Sanderson, P. Shirlaw, L.C. Howe, S. Djemal, A.J. Stagg, J.O. Lindsay, K.

Whelan // Inflamm Bowel Dis. - 2010. - № 16. - P. 2099 - 108.

126.Henriksson, A. Isolation of human faecal bifidobacteria which reduce signs of Salmonella infection when orogastrically dosed to mice / A. Henriksson, P.L. Conway / J. Appl. Microbiol. - 2001. - № 90. - P. 223 - 228.

127.Hoarau, C. Supernatant from bifidobacterium differentially modulates transduction signaling pathways for biological functions of human dendritic cells / C. Hoarau, L. Martin, D. Faugaret, C. Baron, A. Dauba // PLoS One. - 2008. - №3. -2753 p.

128.Hoarau, C. Supernatant of Bifidobacterium breve induces dendritic cell maturation, activation and survival through a Toll-like receptor 2 pathway / C. Hoarau, L. Martin, D. Faugaret, C. Baron, A. Dauba //J Allergy Clin Immunol. - 2006. -№ 117.-P. 696- 702.

129.Hudault, S. Antagonistic activity exerted in vitro and in vivo by Lactobacillus ca-sei (strain GG) against Salmonella typhimurium C5 infection / S. Hudault, V. Liévin, M.F. Bernet-Camard, A.L. Servin // Appl. Environ. Microbiol. - 1997. -№63. - P. 513-518.

130. Hugo, A.A. Lactobacilli antagonize biological effects of enterohaemorrhagic Escherichia coli in vitro / A.A. Hugo, E. Kakisu, G.L. De Antoni, P.F. Pérez // Lett Appl Microbiol. - 2008. - № 46. - P. 613 - 9.

131.Hummel, A.S. Antibiotic resistances of starter and probiotic strains of lactic acid bacteria / A.S. Hummel, C. Hertel, W.H. Holzapfel, C.M.Franz // Appl. Environ. Microbiol. - 2007. - № 73. - P. 730 - 739.

132.Hütt, P. Antagonistic activity of probiotic lactobacilli and bifidobacteria against entero- and uropathogens / P. Hütt, J. Shchepetova, K. Loivukene, T. Kullisaar, M..Mikelsaar // J Appl Microbiol. - 2006. - № 100 (6). - P. 1324 - 32.

133.Hütt, P. Safety and persistence of orally administered human Lactobacillus sp. strains in healthy adults / P. Hütt, P. K511, J. Stsepetova, B. Alvarez, R. Mandar,

K. Krogh-Andersen, H. Marcotte // Benef Microbes. - 2011. -№ 2 (1). - P. 79 -90.

134.Imaoka, A. Anti-inflammatory activity of probiotic Bifidobacterium: enhancement of 1L-10 production in peripheral blood mononuclear cells from ulcerative colitis patients and inhibition of IL-8 secretion in HT-29 cells / A. Imaoka, T. Shima, K. Kato, S. Mizuno, T. Uehara , S. Matsumoto, H. Setoyama, T. Hara, Y. Umesaki // World J Gastroenterol. - 2008. - Apr 28. - № 14 (16). - P. 2511 -2516.

135. Isolauri, E. Probiotics, gut inflammation and barrier function / E. Isolauri, S. Salminen // Gastroenterol Clin North Am. - 2005. - № 34. - P. 437 - 50.

136.1vec, M. Interactions of macrophages with probiotic bacteria lead to increased antiviral response against vesicular stomatitis virus / M. Ivec, T. Botic, S. Koren, M. Jakobsen, H. Weingartl, A. Cencic // Antiviral Res. - 2007. - № 75. - P. 266 -274.

137.Jagtar, S. Classification, regulatory acts and applications of nutraceuticals for health / S. Jagtar, S. Shweta // Int J Pharm Biol Sci. - 2012. - № 2. - P. 177 -187.

138.Kaboosi, H. Antibacterial effects of probiotics isolated from yoghurts against some common bacterial pathogens / H. Kaboosi // African Journal of Microbiology Research. - 2011. - Vol. 5 (25). - P. 4363 - 4367.

139.Kaur, I.P. Probiotics: delineation of prophylactic and therapeutic benefits / I.P. Kaur, A. Kuhad, A. Garg, K. Chopra // J. Med. Food. - 2009. - V. 12. - № 2. - P. 219-235.

140.Keersmaecker, S.C.J. Strong antimicrobial activity of Lactobacillus rhamnosus GG against Salmonella typhimurium is due to accumulation of lactic acid / S.C.J. De Keersmaecker, L.A. Tine, J.D. Verhoeven, K. Marchal, J. Vanderley-den // FEMS Microbiol. Lett. - 2006. - № 259. - P. 89 - 96.

141.Kim, N. Oral feeding of Bifidobacterium bifidum (BGN4) prevents CD4(+) CD45RB (high) T cell-mediated inflammatory bowel disease by inhibition of

disordered T cell activation / N. Kim, J. Kunisawa, M.N. Kweon, G. Eog, H. Kiyono // Clin Immunol. - 2007. - Apr. - 123 (1). - P. 30 - 39.

142.Kim, T. S. Antagonism of Helicobacter pylori by bacteriocins of lactic acid bacteria / T. S. Kim, J.W. Hur, M.A. Yu, C.I. Cheigh, K.N. Kim , J.K. Hwang, Y.R. Pyun // J. Food Protect. - 2003. - № 66. - P. 3 - 12.

143.Kirchgatterer, A. Natural therapy instead of chemistry? Probiotics in gastroenterology / A. Kirchgatterer, P. Knoflach // Acta Med. Austriaca. - 2004. - № 31 (1). - P. 13 - 17.

144. Klaenhammer, T.R. Genomic features of lactic acid bacteria effecting biopro-cessing and health / T. R. Klaenhammer, R. Barrangou, B.L. Buck, M.A. Az-carate-Peril, E. Altermann // FEMS Microbiol. Rev. - 2005. - № 29. - P. 393 -409.

145. Koczulla, R. An angiogenic role for the human peptide antibiotic LL-37/hCAP-18 / R. Koczulla, G. von Degenfeld, C. Kupatt, F. Krotz, S. Zahler, T. Gloe, K. Issbrucker, P. Unterberger, M. Zaiou // J Clin Invest. - 2003. - № 111. - P. 1665 -72.

146.Kouame-Sina, S.M. Diversity, phylogenetic relationship and antibacterial potential of Bifidobacterium species isolated from raw milk production chain in Abidjan (Cote d'lvoire) / S.M. Kouame-Sina, A. Dadie, K. Makita, D. Grace, M. Dje // African Journal of Microbiology Research. - 2011. - V. 5. - № 21. - P. 3394 -3403.

147.Lane, D.J. 16S/23S rRNA sequencing. In: Nucleic Acid Techniques in Bacterial Systematics / D.J. Lane. - Chichester: Wiley. - 1991. - P. 115 - 175.

148.Lee, J. Evaluation of probiotic characteristics of newly isolated Lactobacillus spp.: immune modulation and longevity / J. Lee, H.S. Yun, K.W. Cho, S. Oh // Int J Food Microbiol. - 2011. - № 148 (2). - P. 80 - 6.

149.Lee, J. Inactivation of Salmonella Enteritidis strains by combination of high hydrostatic pressure and nisin / J. Lee, G.Kaletun? // Int J Food Microbiol. - 2010. - № 140(1).-P. 49-56.

150.LÍ, G.L. HPV E6 down-regulation and apoptosis induction of human cervical cancer cells by a novel lipid-soluble extract (PE) from Pinellia pedatisecta Schott in vitro/ G.L. Li, W. Jiang, Q. Xia, S.H. Chen, X.R. Ge, S.Q. Gui, C.J. Xu // J Ethnopharmacol. - 2010. - № 132. - P. 56 - 64.

151.Lievin, V. Bifidobacterium strains from resident infant human gastrointestinal microflora exert antimicrobial activity / V. Lievin, I. Peiffer, S. Hudault, F. Ro-chat, D. Brassart // Gut. - 2000. - № 47. - P. 646 - 652.

152.Liong, M.T. Safety of probiotics: translocation and infection / M.T. Liong // Nutr. Rev. - 2008. - № 66. - P. 192 - 202.

153. Lorea, G.L. Characterization of the protein synthesis dependent adaptive acid tolerance response in Lactobacillus acidophilus / G.L. Lorea, G.F. de Valdez, A. Ljungh // J. Mol. Microbiol. Biotechnol. - 2002. - № 4. - P. 525 - 532.

154. Marco, M.L. Convergence in probiotic Lactobacillus gut-adaptive responses in humans and mice / M.L. Marco, M.C. de Vries, M. Wels, D. Molenaar, P. Mangell, S. Ahrne, W.M. de Vos, E.E. Vaughan, M. Kleerebezem // ISME J. -2010. -№ 4. - P. 1481 -4.

155.Marroki, A. Characterization of Lactobacillus from Algerian goat's milk based on phenotypic, 16S rDNA sequencing and their technological properties / A. Marroki, M. Zúñiga, M. Kihal, G. Pérez-Martínez // Brazilian Journal of Microbiology. - 2011.-№ 42. - P. 158- 171.

156.Mayrhofer, S. Antibiotic susceptibility of members of the Lactobacillus acidophilus group using broth microdilution and molecular identification of their resistance determinants / S. Mayrhofer, A.H. van Hoek, C. Mair, G. Huys, H.J. Aarts, W. Kneifel, K.J. Domig // Int J Food Microbiol. - 2010. - № 144 (1). - P. 81 -7.

157.Medzhitov, R. Recognition of microorganisms and activation of the immune response / R. Medzhitov // Nature. - 2007. - № 449. - P. 819 - 826.

158.Menard, S. Lactic acid bacteria secrete metabolites retaining anti-inflammatory properties after intestinal transport / S. Menard, C. Candalh, J.C. Bambou, K. Terpend // Gut. - 2004. - № 53. - P. 821 - 828.

159.Min-Kyeong, C. Antiviral activity of Bifidobacterium adolescentis SPM1005-A on human papillomavirus type 16/ C. Min-Kyeong, L. Do-Kyung, A. Hyang-Mi, L. Si-Won // BMC Medicine. - 2012. - № 10. - 72 p.

160.Moreno Muñoz, J.A. Novel Probiotic Bifidobacterium longum subsp.infantis CECT 7210 Strain Active against Rotavirus Infections / J.A. Moreno Muñoz, E. Chenoll, B. Casinos, E. Bataller, D. Ramón, S. Genovés // Appl. Environ. Microbiol. - 2011. - V. 77. - № 24. - P. 8775 - 8783.

lól.Ogawa, M. Protective effect of Lactobacillus casei strain Shirota on Shiga toxin-producing Escherichia coli 0157:H7 infection in infant rabbits / M. Oga-wa, K. Shimizu, K. Nomoto, M. Takahashi, M. Watanuki, R. Tanaka, T. Tana-ka, T. Hamabata, S. Yamasaki, Y. Takeda // Infect Immun. - 2001. - № 69. - P. 1101 - 8.

162.0uwehand, A.C. Recent advances in probiotic research: a conference update / A.C. Ouwehand // Future Microbiol. - 2011. - № 6. - P. 981 - 4.

163.Pavia, K.E. Novel histone-derived antimicrobial peptides use different antimicrobial mechanisms / K.E. Pavia, S.A. Spinella, D.E. Elmore // Biochim Bio-phys Acta. - 2011.

164.Petrof, E.O. Probiotics inhibit nuclear factor-kappa B and induce heat shock proteins in colonic epithelial cells through proteasome inhibition / E.O. Petrof, K. Kojima, M.J. Ropeleski, M.W. Musch, Y. Tao, C. De Simone, E.B. Chang. // Gastroenterology. - 2004. - № 127. - P. 1474 - 1487.

165.Pohjavuori, E. Lactobacillus GG effect in increasing INF-gamma production in infants with cow's milk allergy / E. Pohjavuori, M. Viljanen, R. Korpela, M. Kuitunen, M. Tiittanen, O. Vaarala, E.Savilahti // J Allergy Clin Immunol. -2004. -№ 114. - P. 131 - 136.

166.Pridmore, R.D. Hydrogen peroxide production by Lactobacillus johnsonii NCC 533 and its role in anti-Salmonella activity / R.D. Pridmore, A.C. Pittet, F. Praplan, C.Cavadini // FEMS Microbiol. Lett. - 2008. - № 283. - P. 210 - 215.

167.Rafter, J. Dietary synbiotics reduce cancer risk factors in polypectomized and colon cancer patients/ J. Rafter, M. Bennett, G. Caderni, Y. Clune, R. Hughes // Am. J. Clin. Nutr. - 2007. - № 85. - P. 488 - 496.

168.Rambaud, J.-C. Gut Microflora / J.-C. Rambaud, R. Ducluzeau, M. Coopers-tock // John Libbey Eurotext. - Paris. - 2006. - 247 p.

169.Rauch, M. The potential for probiotic manipulation of the gastrointestinal mi-crobiome / M. Rauch, S.V. Lynch // Current Opinion in Biotechnology. - 2011.-№23. - P. 1-10.

170. Reid, G. The rationale for probiotics in female urogenital healthcare / G. Reid, J. Burton, E. Devillard // MedGenMed. - 2004. - № 6. - 49 p.

171.Risoen, P.A. Regulation of bacteriocin production in Lactobacillus plantarum depends on a conserved promoter arrangement with consensus binding sequence / P.A. Risoen, O. Johnsborg, D.B. Diep, L. Hamocn, G. Venema, I.F. Nes // Mol. Genet. Genomics. - 2001. - № 265. - P. 198 - 206.

172.Rojas, M. Colonization by lactobacilli of piglet small intestinal mucus / M. Rojas, P.L. Conway // J. Appl. Bact. - 1996. - № 81. - P. 474-480.

173. Ruby, J. Nature of Symbiosis in Oral Disease / J. Ruby, M. Goldner // Journal of Dental Research. - 2007. - Vol. 86. - № 1. - P. 8 - 11.

174.Saenz, Y. Genetic diversity of the pin locus among oenological Lactobacillus plantarum strains / Y. Saenz, B. Rojo-Bezares, L. Navarro, L. Diez, S. Somalo // Int.J.Food Microbiol. - 2009. - № 134. - P. 176 - 183.

175.Sallivan, A. Probiotics and gastrointestinal diseases / A. Sullivan, C.E. Nord // J. Intern Med. - 2005. - № 257. - P. 78 - 92.

176. Sallivan, A. Probiotics in human infections / A. Sullivan, C.E. Nord // Int. J. Antimicrob Chemother. - 2002. - № 50. - P. 625 - 7.

177. Sanders, M.E. Health claims substantiation for probiotic and prebiotic products / M.E. Sanders, J.T. Heimbach, B. Pot, D.J. Tancredi, I. Lenoir-Wijnkoop, A. Lähteenmäki-Uutela, M. Gueimonde, S. Bañares // Gut Microbes. - 2011. - №2. -P. 127-33

178.Savage, D.C. Microbial ecology of the gastrointestinal tract / D.C. Savage // Annu. Rev. Microbiol. - 1977. - 3 K. - P. 107 - 133.

179.Sazawal, S. Efficacy of probiotics in prevention of acute diarrhoea: a metaanalysis of masked, randomised, placebo-controlled trials / S. Sazawal, G. Hi-remath, U. Dhingra, P. Malik, S. Deb, R.E.Black // Lancet Infect. Dis. - 2006. -№ 6. - P. 374 - 382.

180.Sémiramoth, N. Escherichia coli type 1 pili trigger late IL-8 production by neu-trophil-like differentiated PLB-985 cells through a Src family kinase- and MAPK-dependent mechanism / N. Sémiramoth, A. Gleizes, I. Turbica, C. Sandré, R. Gorges, I. Kansau, A. Servin, S. Chollet-Martin // J Leukoc Biol. -2009.-№85 (2).-P. 310-21.

181.Sgouras, D. In Vitro and In Vivo Inhibition of Helicobacter pylori by Lactobacillus casei Strain Shirota / D. Sgouras, P. Maragkoudakis, K. Petraki, B. Martinez-Gonzalez, E. Eriotou // Applied and Environmental Microbiology, January. - 2004. - Vol. 70. - № 1. - P. 518 - 526.

182.Shai, Y. Mode of action of membrane active antimicrobial peptides / Y. Shai // Biopolyificrs. - 2002. - № 66. - P. 236-248.

183.Shaker, A. Intestinal stem cells and epithelial-mesenchymal interactions in the crypt and stem cell niche / A. Shaker, D.C. Rubin // Transí Res. - 2010. - № 156 (3).-P. 180-7.

184.Silva, A.M. Effect of Bifidobacterium longum ingestion on experimental in salmonellosis in mice / A.M. Silva, F.H. Barbosa, R. Duarte, L.Q. Vieira, R.M. Arantes, J.R. Nicoli // J Appl Microbiol. - 2004. - № 97. - P. 29 - 37.

185.Souza, A. Effects of probiotics, prebiotics, and synbiotics on messenger RNA expression of caveolin-1, NOS, and genes regulating oxidative stress in the ter-

minal ileum of formula-fed neonatal rats / A. Souza, L. Fordjour, A. Ahmad, C. Cai, D. Kumar, G. Valencia, J.V. Aranda, K.D. Beharry // Pediatr Res. -2010.-№67.-P. 526 - 31.

186. Stamatova, I.V. Probiotics: health benefits in the mouth / I.V. Stamatova, J.H. Meurman // Am J Dent. - 2009. - № 22. - P. 329 - 38.

187.Susan, R. Lactobacillus hordei sp. nov., a bacteriocinogenic strain isolated from malted barley / R. Susan, C. Canchaya, D. van Sinderen // International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology. - 2008. - Vol. 58. - № 9. - P. 2013 -2017.

188. Tang, W. A novel Bifidobacterium infantis-mediated TK/GCV suicide gene therapy system exhibits antitumor activity in a rat model of bladder cancer / W. Tang, Y. He, S. Zhou, Y. Ma, G. Liu // Journal of Experimental & Clinical Cancer Research. - 2009. -№ 28. - 155 p.

189.Tennyson, C.A. Microecology, obesity and probiotics / C.A. Tennyson, G. Friedman // Curr. Opin. Endocrinol. Diabetes Obes. - 2008. - V. 15. - № 5. - P. 422 - 427.

190. Tuomola, E.M. Adhesion of some probiotic and dairy Lactobacillus strains to Caco-2 cell cultures / E.M. Tuomola, S.J. Salminen // Int. J. Food Microbiol. -1998.-№41.-P.45-51.

191.Van Den Brink, G.R. H. pylori colocatises with MUC5AC in the human stomach / G.R. Van Den Brink, K. Tytgat, R.W.M. Van der Hulst, C.M. Van der Loos, A. Einerhand, H. Buller, J. Dekker // Gut. - 2000. - № 46. - P. 601 - 607.

192.Ventura, M. Genome-scale analyses of health-promoting bacteria: probiogenom-ics / M. Ventura, S. O'Flaherty, M.J. Claesson, F. Turroni, T.R. Klaenhammer // Nature Rev. Microbiol. - 2009. - Vol. 7. - P. 61 - 71.

193.Vítor, J.M. Alternative therapies for Helicobacter pylori: probiotics and phyto-medicine / J.M. Vítor, F.F. Vale I I FEMS Immunol Med Microbiol. - 2011. -№63 (2). - P. 153 - 64.

194.Wall, R. Genomic diversity of cultivable Lactobacillus populations residing in the neonatal and adult gastrointestinal tract / R. Wall, G. Fitzgerald, S. Hussey, T. Ryan, B. Murphy, P. Ross, C..Stanton // FEMS Microbiol. Ecol. - 2007. - № 59.-P. 127- 137.

195.Wang, K.Y. Effects of ingesting Lactobacillus- and Bifidobacterium containing yogurt in subjects with colonized Helicobacter pylori / K.Y. Wang, S.N. Li, C.S. Liu, D.S. Perng, Y.C. Su, D.C. Wu, C.M. Jan, C.H. Lai, T.N. Wang , W.M. Wang //Am J Clin Nutr. - 2004. - № 80. - P. 737 - 741.

196.Woodman, C.B. Natural history of cervical human papillomavirus infection in young women: a longitudinal cohort study / C.B. Woodman, S. Collins, H. Winter, A. Bailey, J. Ellis, P. Prior//Lancet. - 2001. - № 357. - P. 1831 - 1836.

197. Yin, Y.-N. Effects of four Bifidobacteria on obesity in high-fat diet induced rats / Y.-N. Yin, Q. Yu, N. Fu, X.-W. Liu, F.-G. Lu // World J Gastroenterol. - 2010. - July 21. - № 16 (27). - P. 3394 - 3401.

198.Zakostelska, Z. Lysate ofprobiotic Lactobacillus casei DN-114 001 ameliorates colitis by strengthening the gut barrier function and changing the gut microenvironment / Z. Zakostelska, M. Kverka, K. Klimesova, P. Rossmann, J. Mrazek, J. Kopecny, M. Hornova, D. Srutkova // PLoS One. - 2011. - № 6 (11).

199.Zamfir, M. Production kinetics of acidophilin 801, a baeteriocin produced by Lactobacillus acidophilus IBB 801 / M. Zamfir, R. Callewaert, P.C. Cornea, L. De Vuyst // FEMS Microbiol. Lett. - 2000. - № 190. - P. 305 - 308.

200.Zasloff, M. Antimicrobial peptides and suppression of apoptosis in human skin / M. Zasloff// J Invest Dermatol. - 2009. - № 129. - P. 824 - 6.

201.Zhang, D. Lactobacillus reuteri ATCC 55730 and L22 display probiotic potential in vitro and protect against Salmonella-induced pullorum disease in a chick model of infection / D. Zhang, R. Li, J. Li // Res Vet Sci. - 2011.

202.Zinedine, A. Isolation and Characterization of Strains of Bifidobacteria with Probiotic proprieties In vitro / A. Zinedine, M. Faid // World Journal of Dairy & Food Sciences. - 2007. - № 2 (1). - P. 28 - 34.

203.Zouhir, A. Partial purification and characterization of two bactcriocin-like inhibitory substances produced by bifidobacteria / A. Zouhir, E. Kheadr, I. Fliss, J. Ben Hamida // African Journal of Microbiology Research. - 2011. - V. 5 (4). -P. 411 - 418.