Метакрилатредуктаза Geobacter sulferreducens АМ-1: Роль и свойства тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Микулинская, Оксана Викторовна

• Микулинская, Оксана Викторовна
• кандидат биологических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Микулинская, Оксана Викторовна

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. НЕНАСЫЩЕННЫЕ ОРГАНИЧЕСКИЕ КИСЛОТЫ -

ТЕРМИНАЛЬНЫЕ АКЦЕПТОРЫ ЭЛЕКТРОН-ТРАНСПОРТНЫХ

ЦЕПЕЙ АНАЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ

1.1 Фумарат - наиболее изученный акцептор электронов

1.1.1 Организация электрон-транспортных цепей, терминальным акцептором которых является фумарат

1.1.2 Синтез АТР в ходе "фумаратного дыхания"

1.1.3 Транспорт фумарата в клетку

1.2 Ключевой фермент "фумаратного дыхания" - фумаратредуктаза

1.2.1 Фумаратредуктаза бактерии Wolinella succinogenes

1.2.2 Фумаратредуктаза бактерии Escherichia coli

1.2.3 Фумаратредуктаза Shewanellaputrefaciens

1.3 Насыщение двойной связи в боковой цепи фенилпропеноата бактерией Acetobacterium woodii 21 Глава 2. ОКИСЛЕНИЕ АЦЕТАТА АНАЭРОБНЫМИ

ХЕМОТРОФНЫМИ БАКТЕРИЯМИ

2.1 Способы активирования ацетата для вовлечения

его в метаболизм анаэробных бактерий

2.2 Окисление ацетата через цикл трикарбоновых кислот

2.2.1 Ферменты и особенности ЦТК

2.2.2 Транспорт восстановительных эквивалентов от ЦТК

к терминальным акцепторам электронов

2.2.3 Анаплеротические реакции ЦТК

2.3 Окисление ацетата через СО-дегидрогеназный путь

2.3.1 СО-дегидрогеназный путь

2.3.2 Перенос восстановительных эквивалентов

от СО-дегидрогеназного пути к терминальным акцепторам

ЗАКЛЮЧЕНИЕ ПО ОБЗОРУ ЛИТЕРАТУРЫ 3

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 3. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Работа с чистой культурой СеоЬаЫег яМ/иггейисет АМ-1

3.1.1 Культивирование бактерии 3

3.1.2 Контроль чистоты культуры

3.1.3 Определение параметров роста штамма АМ-1

3.2 Определение ферментативных активностей

3.2.1 Измерение активности метакрилатредуктазы

3.2.2 Определение активностей ключевых ферментов СО-дегидрогеназного пути окисления ацетата

3.2.3 Измерение активностей ферментов ЦТК

3.2.4 Определение активностей ферментов, участвующих в переносе восстановительных эквивалентов от ЦТК

к метакрилату

3.3 Препаративные процедуры

3.3.1 Подготовка суспензии клеток 4

3.3.2 Получение грубого экстракта

3.3.3 Получение фракции периплазматических белков

3.3.4 Фракционирование сульфатом аммония

3.3.5 Хроматография на гидроксиапатите

3.4 Аналитические процедуры

3.4.1 Определение концентрации и типа флавина.

Разрушение флавинов

3.4.2 Определение содержания цитохромов с в различных препаратах и количества гемов цитохрома с (30 кДа)

3.4.3 Определение количества Бе

3.4.4 Экстракция и определение типа хинонов

3.4.5 Электрофорез в денатурирующих условиях

3.4.6 Обнаружение цитохрома с в полиакриламидных гелях

после ОЗ-Иа-электорофореза

3.4.7 Определение аминокислотной последовательности К-конца

3.4.8 Определение количества белка 5

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Метакрилатредуктаза Geobacter sulferreducens АМ-1: Роль и свойства»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Ацетат является одним из наиболее

распространенных компонентов в трофической цепи анаэробных

консорциумов микроорганизмов. Он образуется в виде конечного метаболита

в результате жизнедеятельности ацетогенной микрофлоры, включающей

обширный спектр бактериальных микроорганизмов. Образованный ацетат

потребляется многими аэробными и анаэробными микроорганизмами,

способными использовать его в качестве единственного источника углерода и

энергии. С точки зрения донорно-акцепторных свойств процесса, утилизация

ацетата строго анаэробными бактериями осуществляется при сопряженном

i

восстановлении либо неорганических акцепторов, таких как СО2, SO4 S03 S2032", S3062_, S°, N03", MY, Se042", Se032', Fe3+, Co3+, Mn4+, U4+, Ass+, либо органических акцепторов, таких как фумарат (Lovley etal., 1988, 1993; Масу et al., 1989, 1993, 1996; Thauer et al., 1989). При этом, если окисление ацетата, сопряженное с восстановлением неорганических акцепторов электронов, достаточно широко представлено среди бактериальных организмов, то использование органических акцепторов электронов при сопряжённом окислении ацетата показано только для Desulfuromonas acetoxidans и Geobacter sulfurreducens {Pfennig and Biebl, 1976; Caccavo et al., 1994), которые восстанавливают фумарат до сукцината. Однако D. acetoxidans и G.sulfurreducens, восстанавливая органические вещества, окисляют ацетат неполностью, так как фумарат в данном случае является одновременно и промежуточным продуктом дегидрирования ацетата, и терминальным акцептором электронов.

Единственным организмом, способным использовать органическое соединение в качестве конечного акцептора восстановительных эквивалентов с одновременным полным окислением органического вещества, является А-

протеобактерия ОеоЪа^ег яЫ/иггесклсет АМ-1 (Галушко и др., 1994; Галушко, неопубликованные данные). Она растет за счет окисления ацетата до С02 при сопряженном восстановлении такого неприродного соединения как метакрилат (2-метилпропеноат) до изобутирата. Многие бактерии способны в анаэробных условиях использовать ненасыщеннае органические кислоты в качестве акцептора электронов. Ферменты, участвующие в процессе восстановления фумарата, и их локализация детально изучены. Данные о ферментных системах, восстанавливающих ненасыщенные монокарбоновые кислоты, фрагментарны или полностью отсутствуют. Исследование новой редокс системы, вовлеченной в катаболизм ацетата С.8и1/иггес1исет АМ-1, представляет существенный интерес.

Цель и задачи работы. Цель работы состояла в выяснении механизма восстановления метакрилата строго анаэробной бактерией ОеоЬаМег яи1/иггес1исет АМ-1. Для достижения этой цели необходимо было решить следующие задачи:

- проверить, не является ли восстановление метакрилата неспецифической функцией фумаратредуктазы;

- определить локализацию фермента с метакрилат-восстанавливающей активностью;

- выделить, очистить и охарактеризовать метакрилатредуктазу;

- установить путь окисления ацетата и предложить схему переноса восстановительных эквивалентов от ацетата к метакрилату.

Научная новизна. В работе исследован механизм восстановления метакриловой кислоты - синтетического соединения, которое О.ягй/иггесЬлсет АМ-1 использует в качестве терминального акцептора электронов. Показано, что процесс восстановления метакрилата осуществляется в периплазматическом пространстве бактериальных клеток. Установлено, что метакрилатредуктазная активность не связана с неспецифичностью

фумаратредуктазы, локализованной внутри клетки. Выделен и очищен флавинсодержащий фермент, осуществляющий восстановление метакрилата -метакрилатредуктаза. Обнаружена строгая зависимость метакрилат-редуктазной активности от периплазматического цитохрома с (30 кДа) и уточнено название фермента - цитохром ометакрилат-оксидоредуктаза. Определены молекулярные и каталитические свойства цитохром с-метакрилат-оксидоредуктазы.

В бесклеточных экстрактах G.sulfurreducens АМ-1 найдены активности всех ферментов ЦТК - пути окисления ацетата. Предлагается схема переноса восстановительных эквивалентов от ацетата к метакрилату у G.sulfurreducens АМ-1. Впервые изучена минерализация ацетата, сопряженная с восстановлением органического соединения.

Практическая значимость. Разработана эффективная схема очистки метакрилатредуктазы, которая может использоваться для наработки фермента для исследовательских целей.

Полученные данные расширяют существующие знания о редокс системах анаэробных микроорганизмов и семействе флавоцитохромов с и могут быть использованы в микробиологических и биохимических курсах ВУЗов как пример необычной редокс системы, вовлеченной в окисление ацетата до С02.

Работа может быть принята во внимание при усовершенствовании микробиологических методов очистки сточных вод метакрилатных производств.

Апробация работы. Материалы диссертации были доложены на Городской научной конференции молодых ученых (Пущино, 1996), на международных конференциях: посвященной памяти акад. А.А.Баева (Москва, 1996) и "Methanogenesis for sustainable environmental protection" (Санкт-Петербург, 1996).

Публикации. Основные материалы диссертации изложены в 6 печатных работах.

Структура и объём работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы (2 главы), описания объекта и методов исследований (1 глава), результатов и их обсуждения (4 главы), выводов и списка литературы. Материалы диссертации изложены на 116 страницах машинописного текста и включают 9 таблиц и 21 рисунок. Список литературы содержит 152 наименования работ.

Место проведения работы. Работа выполнена в Лаборатории анаэробного метаболизма микроорганизмов (зав. лабораторией - профессор В.К.Акименко) Института биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К.Скрябина РАН и Отделе биохимии (зав. лабораторией профессор R.K.Thauer) Института почвенной микробиологии {Institut für terrestrische Mikrobiologie, Marburg, Germany).

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Микулинская, Оксана Викторовна

ВЫВОДЫ

1. Обнаружена новая редокс система, восстанавливающая неприродное соединение метакрилат и вовлеченная в анаэробное окисление ацетата до С02 G. sulfurreducens АМ-1. Показано, что эта редокс система включает два терминальных компонента - цитохром с (30 кДа) и метакрилатредуктазу (50 кДа) - и локализуется в периплазме G. sulfurreducens АМ-1.

2. Разработана процедура очистки метакрилатредуктазы из G. sulfurreducens АМ-1. Она включает три стадии - получение экстракта периплазматических белков, фракционирование сульфатом аммония (4080%) и хроматографию на гидроксиапатите - и позволяет получить практически гомогенный препарат фермента с удельной активностью 56 U/мг белка и выходом 41.5%. Показано, что фермент содержит нековалентно связанный FAD (1 моль FAD/ 1 моль белка с молекулярной массой 50 кДа). Обнаружено высокое сходство аминокислотной последовательности N-конца метакрилатредуктазы с периплазматическимим белками: полипептидом Fee А неизвестной функции W.succinogenes и фумаратредуктазой S.putrefaciens, что позволило отнести метакрилатредуктазу к ферментам, акцептирующим восстановительные эквиваленты от цитохромов с.

3. Выделен периплазматический тетрагемовый цитохром с (30 кДа) G. sulfurreducens АМ-1. Обнаружена строгая зависимость активности восстановления метакрилата метакрилатредуктазой от присутствия цитохрома с (кажущаяся Км= 0.12 |лМ). Максимальная редуктазная активность наблюдалась при соотношении редуктаза/цитохром с, равном 1:1. Сделано заключение, что фермент является цитохром с-метакрилат-оксидоредуктазой.

4. Выделенная из (7. 8и1/иггес1исет АМ-1 оксидоредуктаза катализировала восстановление только метакрилата, акрилата, кротоната и пентеноата. Фермент не проявлял фумаратредуктазной активности и активности в отношении производных циннамовой кислоты. Наименьшей Км и наивысшей удельной активностью фермент обладал, когда субстратом реакции был метакрилат.

5. Показано, что при выращивании (7. Бъй/иггесИисет АМ-1 на ацетате и метакрилате внутриклеточным источником восстановительных эквивалентов для периплазматической метакрилатредуктазы является ЦТК. Обнаружение субстратных специфичностей дегидрогеназ, участвующих в окислении ацетата, менахинона МС>-8 и МАЕ)РН-менахинон-оксидоредуктазной активности позволило представить предположительный путь переноса восстановительных эквивалентов от ацетата к метакрилату.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Микулинская, Оксана Викторовна, 1999 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Галушко А.С., Образцова А.Я., Штаркман Н.Б., Лауринавичюс К.С., Акименко В.К. Анаэробная ацетатокисляющая бактерия, трансформирующая метакриловую кислоту. Доклады Академии наук, 1994, Т.335, N3, стр.382-384.

2. Штаркман Н.Б., Лауринавичюс К.С., Акименко В.К. Пути деградации органических компонентов сточных вод (мет)-акрилатных производств до метана сообществом микроорганизмов адаптированного и неадаптированного ила. Микробиология, 1992, Т.61, вып.4, стр.709-716.

3. Штаркман Н.Б., Образцова А.Я., Лауринавичюс К.С., Галушко А.С., Акименко В.К. Инициирование процесса деградации (мет)-акриловых кислот специфической анаэробной микрофлорой с образованием метана гранулированным илом. Микробиология, 1995, Т.64, N2, стр.270-274.

4. Ackrell В.А.С., Johnson М.К., Gunsalus R.P., Cecchini G. Structure and function of succinate dehydrogenase and fumarate reductase. Chemistry and biochemistry of flavoenzymes (ed Muller F.), CRC Press, Boca Raton, Florida, 1992, V.3, pp.229-297.

5. Albracht S.P.J., Kroger A., van der Zwaan J.W., Unden G., Bocher R., Mell H., Fontijn R.D. Direct evidence for sulphur as a ligand to nickel in hydrogenase: an EPR study of the enzyme from Wolinella succinogenes enriched in 33S. Biochim. Biophys. Acta, 1986, V.874, pp.116-127.

6. Albracht S.P.J., Unden G., Kroger A. Iron-sulphur clusters in fumarate reductase from Vibrio succinogenes. Biochim. Biophys. Acta, 1981, V.661, N2, pp.295-302.

7. Anfrinsen C.B. Aconitase from pig heart muscle. Methods in enzymology (eds Colowick S.P., Kaplan N.O.), Academic Press, New York, 1955, V.l, pp.695-

8. Bâche R. and Pfennig N. Selective isolation of Acetobacterium woodii on methoxylated aromatic acids and determination of growth yieids. Arch. Microbiol., 1981, V.130, N3, pp.255-261.

9. Badziong W. and Thauer R.K. Vectorial electron transport in Desulfovibrio vulgaris (Marburg) growing on hydrogen plus sulfate as sole energy source. Arch. Microbil., 1980, V.125, N1/2, pp.167-174.

10. Balch W.E., Fox G.E., Magrum L.J., Woese C.R., Wolfe R.S. Methanogens: réévaluation of a unique biological group. Microbiol. Rev. 1979. V. 43. N 2. P. 260-296.

11. Beacham J.R. Periplasmic enzymes in gram negative bacteria. Int. J. Biochem., 1979, V.10, pp.877-883.

12. Beh M., Strauss G., Huber R., Stetter K.O., Fuchs G. Enzymes of the reductive citric acid cycle in the autotrophic eubacterium Aquifex pyrophilus and in the archaebacterium Thermoproteus neutrophilus. Arch. Microbiol., 1993, V.160, pp.306-311.

13. Berks B.C., Richardson D.J., Reilly A., Willis A.C., Ferguson S.J. The napEDABC gene-cluster encoding the periplasmic nitrate reductase system of Thiosphaerapantotropha. Biochem. J., 1995, V.309, pp.983-992.

14. Berks B.C., Richardson D.J., Robinson C., Reilly A., Aplin R.T., Ferguson S.J. Purification and characterization of the periplasmic nitrate reductase from Thiosphaera pantotropha. Eur. J. Biochem., 1994, V.220, pp.117-124.

15. Blaut M., Whittaker K., Valdovinos A., Ackrell B.A.C., Gunsalus R.P., Cecchini G. Fumarate reductase mutants of Escherichia coli that lack covalently bound flavin. J.Biol. Chem., 1989, V.264, N23, pp.13599-13604.

16. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Analyt. Biochem. 1976. V. 72. N 1/2. P. 248-254.

17. Brandis-Heep A., Gebhardt N.A., Thauer R.K., Widdel F., Pfennig N. Anaerobic acetate oxidation to CO2 by Desulfobacter postgatei. 1. Demonstration of all enzymes required for the operation of the citric acid cycle. Arch. Microbiol., 1983, V. 136, N3, pp.222-229.

18. Caccavo F.J.R., Lonergan D.J., Lovley D.R., Davis M., Stolz J.F., Mclnerney M.J. Geobacter sulfurreducens sp. nov., a hydrogen- and acetate-oxidizing dissimilatory metal-reducing microorganism. Appl. Environ. Microbiol., 1994, V.60, N10, pp.3752-3759.

19. Cechini G., Ackrell B.A.C., Deshler J.O., Gunsalus R.P. Reconstitution of quinone reduction and characterization of Escherichia coli fiimarate reductase activity. J.Biol. Chem., 1986,V.261,N4,pp.1808-1814.

20. Cechini G., Sices H., Schröder I., Gunsalus R.P. Aerobic inactivation of fumarate reductase from Escherichia coli by mutation of the [3Fe-4S]-quinone binding domain. J. Bacteriol., 1995, V.177, N16, pp.4587-4592.

21. Champine J.E. and Goodwin S. Acetate catabolism in the dissimilatory iron-reducing isolate GS-15. J. Bacteriol., 1991, V.173, N8, pp.2704-2706.

22. Cole S.T., Condon C., Lemire B.D., Weiner J.H. Molecular biology, biochemistry and bioenergetics of fumarate reductase, a complex membrane-bound iron-sulfur flavoenzyme of Esherichia coli. Biochem. Biophys. Acta, 1985, V.811, N4, pp.381-403.

23. Collins M.D. Analysis of isoprenoid quinones. Methods in Microbiology. 1985. V. 18. P. 329-366.

24. Collins M.D., Pirouz T., Goodfellow M., Minnikin D.E. Distribution of menaquinones in actinomycetes and corynebacteria. J. Gen. Microbiol. 1977. V. 100. P. 221-230.

25. Cusanovich M.A., Meyer T.E., Bartsch R.G. Flavocytochrome c . Chemistry and biochemistry of flavoenzymes (ed Muller F.), CRC Press, Boca Raton, Florida, 1992, V.3, pp.377-393.

26. Dong X., Cheng G., Stams A.J. Butyrate oxidation by Syntrophospora bryantii in co-culture with different methanogens and in pure culture with pentenoate as electron acceptor. Appl. Microbiol. Biotechnol., 1994, V.42, N4, pp.647-652.

27. Dorn M., Andreesen J.R., Gottschalk G. Fumarate reductase of Clostridium formicoaceticum. A peripheral membrane protein. Arch. Microbiol., 1978, V.119, N1, pp.7-11.

28. Easter M.C., Gibson D.M., Ward F.B. The induction and location of trimethylamine-N-oxide reductase in Alteromonas sp. NCIMB 400. J. Gen. Microbiol., 1983, V.129, pp.3689-3696.

29. Eng L.H. and Neujahr H.Y. Purification and characterisation of periplasmic c-type cytochromes from Desulfovibrio desulfuricans (NCIMB 8372). Arch. Microbiol., 1989, V.153, pp.60-63.

30. Engel P., Krämer R., Unden G. Anaerobic fiimarate transport in Escherichia coli by an fhr-dependent dicarboxylate uptake system which is different from the aerobic dicarboxylate uptake system. J. Bacteriol., 1992, V.174, N17, pp.5533-5539.

31. Finster K., Bäk F., Pfennig N. Desulfuromonas acetexigens sp. nov., a dissimilatory sulfur-reducing eubacterium from anoxic freshwater sediments. Arch. Microbiol., 1994, V.161, pp.328-332.

32. Frazer A.C. O-demethylation and other transformations of aromatic compounds by acetogenic bacteria. Acetogenesis (ed Drake H.L.), Chapman & Hall One Penn Plaza, New York, 1994, pp.445-483.

33. Friedrich M. and Schink B. Hydrogen formation from glycolate driven by reversed electron transport in membrane vesicles of a syntrophic glycolate-oxidazing bacterium. Eur. J. Biochem. 1993. V. 217. P. 233-240.

34. Fuchs G. CO2 fixation in acetogenic bacteria: variations on a theme. FEMS Microbiol. Rev., 1986, V.39, N3, pp.181-213.

35. Fukumori Y. and Yamanaka T. Flavocytochrome c of Chromatium vinosum. Some enzymatic properties and subunit structure. J. Biochem., 1979, V.85, pp.1405-1414.

36. Gaspard S., Vazques F., Holliger C. Localization and solubilization of the iron(III) reductase of Geobacter sulfurreducens. Appl. Environ. Microbiol., 1998, V.64, N9, pp.3188-3194.

37. Gebhardt N.A., Linder D., Thauer R.R. Anaerobic acetate oxidation of CO2 by Desulfobacter postgatei. 2. Evidence from 14C-labelling studies for the operation of the citric acid cycle. Arch. Microbiol., 1983, V.136, N3, pp.230233.

38. Gebhardt N.A., Thauer R.K., Linder D., Kaulfers P.-M., Pfennig N. Mechanism of acetate oxidation to CO2 with elemental sulfur in Desulfuromonas acetoxidans. Arch. Microbiol., 1985, V.141, N4, pp.392-398.

39. Geisler V., Ullmann R., Kroger A. The direction of the proton exchange associated with the redox reactions of menaquinone during electron transport in Wolinella succinogenes. Biochim. Biophys. Acta, 1994, V.1184, N2,3, pp.219226.

40. Gordon E.H.J., Pealing S.L., Chpman S.K., Ward F.B., Reid G.A. Physiological function and regulation of flavocytochrome c3> the soluble fumarate reductase from Shewanella putrefaciens NCIMB 400. Microbiology, 1998, V.144, pp.937-945.

41. GrafM., Bokranz M., Bocher R., Friedl P., Kroger A. Electron transport driven phosphorylation catalyzed by proteoliposomes containing hydrogenase, fumarate reductase and ATP synthase. FEBS Lett., 1985, V.184, N1, pp.100-103.

42. Guest J.R. Anaerobic growth of Escherichia coli K12 with fumarate as terminal electron acceptor. Genetic studies with menaquinone and fluoroacetate-resistant mutants. J. Gen. Microbiol., 1979, V.l 15, pp.259-271.

43. Gutowski S.J. and Rosenberg H. Effects of dicyclohexylcarbodiimide on proton translocation coupled to fumarate reduction in anaerobically grown cells of Escherichia coli K12. Biochem. J., 1976, V.160, N3, pp.813-816.

44. Guynn R.W. and Veech R.L. The equilibrium constants of the adenosine triohosphate hydrolysis and adenosine triphosphate-citrate lyase reactions. J. Biol. Chem., 1973, V.248, N20, pp.6966-6972.

45. Hagerhall C. Succinate:quinone oxidoreductases. Variation on a conserved theme. Biochim. Biophys. Acta, 1997, V.1320, pp.107-141.

46. Hansen B., Bokranz M., Schonheit P., Kroger A. ATP formation coupled to caffeate reduction by H2 in Acetobacterium woodii NZva 16. Arch. Microbiol., 1988, V.150, N5, pp.447-451.

47. He S.H., der Vertanian D.V., LeGall J. Isolation of fumarate reductase from Desulfovibrio multispirans, a sulfate reducing bacterium. J. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1986, V.135, N3, pp.1000-1007.

48. Hederstedt L. and Ohnishi T. Progress in succinate:quinone oxidoreductase research. Molecular Mechanisms in Bioenergetics (ed. Ernster L.), Elsevier, Amsterdam, 1992, V.23, pp.163-198.

49. Helenius A. and Simons K. Solubilization of membranes by detergents. Biochim. Biophys. Acta, 1975, V.415, N1, pp.29-79.

50. Hellingwerf K.J., Bolscher J.G.M., Konings W.N. The electrochemical proton gradient generated by the fumarate reductase system in Escherichia coli and its bioenergetic implications. Eur. J. Biochem., 1981, V.113, N2, pp.369374.

51. Hirsch C.A., Rasminsky M., Davis B.D., Lin E.C.C. A fumarate reductase in Escherichia coli distinct from succinate dehydrogenase. J. Biol. Chem., 1963, V.238, N11, pp.3770-3774.

52. Ingledew W.J. and Poole R.K. The respiratory chains of Escherichia coli. Microbiol. Rev., 1984, Y.48, N3, pp.222-271.

53. Jansen K., Fuchs G., Thauer R.K. Autotrophic CO2 fixation by Desulfovibrio baarsii: demonstration of enzyme activities characteristic for the acetyl-CoA pathway. FEMSMicrobiol. Lett, 1985, V.28, N3, pp.311-315.

54. Jansen K., Thauer R.K., Widdel F., Fuchs G. Carbon assimilation pathways in sulfate reducing bacteria. Formate, carbon dioxide, carbon monoxide, and acetate assimilation by Desulfovibrio baarsii. Arch. Microbiol., 1984, Y.138, N3, pp. 257-262.

55. Johnson M.K., Kowal A.T., Morningstar J.E., Oliver M.E., Whittaker K., Gunsalus R.P., Ackrell B.A.C., Cechini G. Subunit location of the iron-sulfur clusters in fumarate reductase from Escherichia coli. J. Biol. Chem., 1988, V.263, N29, pp.14732-14738.

56. Kay W.W., Kornberg H.L. The uptake of C4-dicarboxilic acids by Escherichia coli. Eur. J. Biochem., 1971, V. 18, N2, pp.274-281.

57. Koerber S.G., Mclntire W., Bohmont C., Singer T.P. Resolution of the flavocytochrome c p-cresol methylhydroxylase into subunits and reconstitution of the enzyme. Biochemistry, 1985, V.24, pp.5276-5280.

58. Körtner C., Lauterbach F., Tripier D., Unden G., Kröger A. Wolinella succinogenes fumarate reductase contains a diheme cytochrome b. Mol. Microbiol., 1990, N4, pp.855-860.

59. Kröger A. Bacterial electron transport to fumarate. Diversity of bacterial respiratory systems (ed. Knowles C.J.), CRC Press, Boca Raton, Florida, 1980, pp.1-17.

60. Kröger A. Fumarate as terminal electron acceptor of phosphorilative electron trasport. Biochim. Biophys. Acta, 1978, V.505, pp.129-145.

61. Kröger A. and Dadak V. On the role of quinones in bacterial electron transport. The respiratory system of Bacillus megaterium. Eur. J. Biochem., 1969, V. 11, N2, pp.328-340.

62. Kröger A., Dadak V., Kligenberg M., Diemer F. On the role quinones in

bacterial electron transport. Differential roles of ubiquinone and menaquinone in Proteus rettgeri. Eur. J. Biochem., 1971, V.21, N3, pp.322-333.

63. Kröger A., Dorrer E., Winkler E. The orientation of the substrate sites of formate dehydrogenase and fumarate reductase in the membrane of Vibrio succinogenes. Biochim. Biophys. Acta, 1980, V.589, pp.118-136.

64. Kröger A., Geisler V., Lemma E., Theis F., Lenger R. Bacterial fumarate respiration. Arch. Microbiol., 1992a, Y.158, pp.311-314.

65. Kröger A. and Innerhofer A. The function of the b cytochromes in the electron transport from formate to fumarate of Vibrio succinogenes. Eur. J. Biochem,., 1976, V.69, N2, pp.497-506.

66. Kröger A. and Innerhofer A. The function of menaquinone, covalently bound FAD and iron-sulfur protein in the electron transport from formate to fumarate of Vibrio succinogenes. Eur. J. Biochem., 1976, V.69, N2, pp.487-495.

67. Kröger A., Körtner C., Lauterbach F., Droß F., Bokranz M., Klimmek O., Krafft T., Gutmann M. Electron transfer in anaerobic microorganisms. Electron and proton transfer in chemistry and biology (ed. Muller et al.). Studies in physical and theoretical chemistry, Elsevier, Amsterdam, 1992b, V.78, pp. 167175.

68. Kröger A., Schröder I., Paulsen J. Direct and reversed electron transport in anaerobic bacteria. Biology of anaerobic bacteria (edited by Dubourguier H.C. et al.), Amsterdam, 1986, pp.93-103.

69. Kröger A., Winkler E., Innerhofer A., Hackenberg H., Schägger H. The formate dehydrogenase involved in electron transport from formate to fumarate in Vibrio succinogenes. Eur. J. Biochem., 1979, V.94, N2, pp.465-475.

70. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature, V.227, pp.680-685.

71. Lambden P.R. and Guest J.R. Mutants of Esherichia coli K12 unable to use fumarate as an anaerobic electron acceptor. J. Gen. Microbiol., 1976, V.97,

pp.145-160.

72. Länge S., Scholtz R., Fuchs G. Oxidative and reductive acetyl Co A/carbon monoxide dehydrogenase pathway in Desulfobacterium autotrophicum. 1. Characterization and metabolic function of the cellular tetrahydropterin. Arch. Microbiol., 1989, V.151, N1, pp.77-83.

73. Lauterbach F., Körtner C., Albracht S.P.J., Unden G., Kröger A. The fumarate reductase operon of Wolinella succinogenes. Sequence and expression of the frdA and frdB genes. Arch. Microbiol., 1990, V.154, N4, pp.386-393.

74. Lemire B.D., Robinson J.J., Weiner J.H. Identification of membrane anchor polypeptides of Escherichia coli fumarate reductase. J. Bacteriol., 1982, V.152, N3, pp.1126-1131.

75. Ljungdahl L.C. The autotrophic pathway of acetate synthesis in acetogenic bacteria. Annu. Rev. Microbiol., 1986, V.40, pp.415-450.

76. Lovley D.R., Giovannovi S.J., White D.C., Champine J.E., Phillips E.J.P., Gorby Y.A., Goodwin S. Geobacter metallireducens gen. nov. sp. nov., a microorganism capable of coupling the complete oxidation of organic compounds to the reduction of iron and other metals. Arch. Microbiol., 1993, V.159, pp. 336-344.

77. Lovley D.R. and Phillips E.J.P. Novel mode of microbial energy metabolism: organic carbon oxidation coupled to dissimilatory reduction of iron or manganese. Appl. Environ. Microbiol., 1988, V.54, N6, pp. 1472-1480.

78. Macy J., Kulla H., Gottschalk G. H2-dependent anaerobic growth of Escherichia coli on L-malate: succinate formation. J. Bacteriol., 1976, V.125, N2, pp.423-428.

79. Macy J.M., Nunan K., Hagen K.D., Dixon D.R., Harbour P.J., Cahill M., Sly L.I. Chrysiogenes arsenatis gen.nov., sp. nov., a new arsenate-reducing bacterium isolated from gold mine wastewater. Int. J. Syst. Bacteriol., 1996, V.46, N4, pp.1153-1157.

80. Macy J.M., Rech S., Auling G., Dorsch M., Stackebrandt E., Sly L.I. Thauera selenatis gen. nov., sp. nov., a member of the beta subclass of Proteobacteria with a novel type of anaerobic respiration. Int. J. Syst. Bacteriol., 1993, V.43, N1, pp.135-142.

81. Macy J.M., Thomas A.M., Kirsch D.G. Selenate reduction by a Pseudomonas species: a new mode of anaerobic respiration, FEMS Microbiol. Lett., 1989, V.l, N1-2, pp.195-198.

82. Manodori A., Cechini G., Schröder I., Gunsalus R.P., Werth M.T., Jonson M.K. [3Fe-4S] to [4Fe-4S] cluster conversion in Escherichia coli fumarate reductase by site-directed mutagenesis. Biochemistry, 1992, V.31, N10, pp.2703-2712.

83. Massey V., Müller F., Feldberg R, Schuman M., Sullivan P.A., Howell L.G., Mayhew S.G., Matthews R.G., Foust G.P. The reactivity of flavoproteins with sulfite. Possible relevances to the problem of oxygen reactivity. J. Biol. Chem., 1969, V.244, pp.3999-4006.

84. Methods for Chemical Analysis of Water and Wastes. EPA-600/4-82-055. December 1982. Method 236.1.

85. Meyer T.E., Bartsch R.G., Cusanovich M.A. Adduct formation between sulfite and the flavin of phototrophic bacterial flavocytochromes c. Kinetics of sequential bleach, recolor and rebleach of flavin as a function of pH. Biochemistry, 1991, V.30, pp.8840-8845.

86. Mitchell P. Coupling of phosphorylation to electron and hydrogen transfer by a chemi-osmotic type of mechanism. Nature, 1961, V.191, N4784, pp.144-148.

87. Mitchell P. Vectorial chemiosmotic processes. Ann. Rev. Biochem., 1977, V.46, pp.996-1005.

88. Möller D., Schauder R, Fuchs G., Thauer R.K. Acetate oxidation to C02 via a citric acid cycle involving an ATP-citrate lyase: a mechanism for the synthesis of ATP via substrate level phosphorylation in Desulfobacter postgatei growing

on acetate and sulfate. Arch. Microbiol., 1987, V.148, N3, pp.202-207.

89. Moller-Zinkhan D., Thauer R.K. Membrane-bound NADPH-dehydrogenase and ferredoxin:NADP oxidoreductase activity involved in electron transport during acetate oxidation to C02 in Desulfobacter postgatei. Arch. Microbiol., 1988, Y.150, N2, pp. 145-154.

90. Morris C.J., Black A.S., Pealing S.L., Manson F.D.C., Chapman S.K., Reid G.A., Gibson D.M., Ward F.B. Purification and properties of a novel cytochrome: flavocytochrome c from Shewanella putrefaciens. Biochem. J., 1994, V.302, pp.587-593.

91. Morris C.J., Gibson D.M., Ward F.B. Influence of respiratory substrate on the cytochrome content of Shewanella putrefaciens. FEMS Microbiol. Lett., 1990, V.69/3, pp.259-262.

92. Myers C.R. and Myers J.M. Cloning and sequence of cymA, a gene encoding a tetraheme cytochrome c required for reduction of iron(III), fumarate and nitrate by Shewanella putrefaciens MR-1. J. Bacteriol., 1997, V.179, pp.1143-1152.

93. Myers C.R. and Myers J.M. Fumarate reductase is a soluble enzyme in anaerobically grown Shewanella putrefaciens mR-1. FEMS Microbiol. Lett., 1992, V.98, pp.13-20.

94. Myers C.R. and Myers J.M. Localization of cytochromes to the outer membrane of anaerobically grown Shewanella putrefaciens MR-1. J. Bacteriol., 1992, V 174, N11, pp.3429-3438.

95. Niviere V., Bernadac A., Forget N., Fernandez V.M., Hatchikian C.E. Localization of hydrogenase in Desulfovibrio gigas. Arch. Microbiol., 1991, V.155, N6, pp.579-586.

96. Ochoa S. Crystalline condensing enzyme from pig heart. Methods in enzymology (eds Colowick S.P. and Kaplan N.O), Academic Press, New York, 1955, V.l, pp.685-694.

97. Ohnishi T. Structure of the succinate-ubiquinone oxidoreductase (complex II).

Curr. Top. Bioenerg., 1987, V.15, pp.37-65.

98. Paulsen J., Kroger A., Thauer R.K. ATP-driven succinate oxidation in the catabolism of Desulfuromonas acetoxidans. Arch. Microbiol., 1986, V.144, N1, pp.78-83.

99. Pealing S.L., Black A.S., Manson F.D.C., Ward F.B., Chapman S.K., Reid G.A. Sequence of the gene encoding flavocytochrome c from a Shewanella putrefaciens: a tetraheme flavoenzyme that is a soluble fumarate reductase related to the membrane-bound enzymes from other bacteria. Biochemistry, 1992, V.32, N48, pp.12132-12140.

100. Pealing S.L., Myles C.R., Reid G.A., Thomson A.J., Ward F.B., Chapman S.K. Spectroscopic and kinetic studies of the tetraheme flavocytochrome c from Shewanella putrefaciens NCIMB 400. Biochemistry, 1995, V.34, N18, pp.61536158.

101. Peterson J.A. Cytochrome content of two pseudomonads containing mixed-function oxidase system. J. Bacteriol., Y.103, N3, pp.714-721.

102. Pfennig N. and Biebl H. Desulfuromonas acetoxidans gen. nov. and sp. nov., a new anaerobic, sulfur-reducing, acetate-oxidizing bacterium. Arch. Microbiol, 1976, V.110, N1, pp.3-12.

103. Ragsdal S.W. and Ljungdahl L.G. Hydrogenase from Acetabacterium woodii. Arch. Microbiol, 1984, V.139, N4, pp.361-365.

104. Reid G.A. and Ingledew W.J. Characterization and phenotypic control of the cytochrome content of Escherichia coli. Biochem. J., 1979, V. 182, N2, pp.465-472.

105. Rieske J.S. The quantitative determination of mitochondrial hemoproteins. Metods in Enzymology (eds Estabrook R.W. and Pullman M.E.), Academic Press, New York, San Francisco, London, 1967, V.10, pp.488-493.

106. Roldan M.D., Sears H.J., Cheesman M.R., Ferguson S.J., Thomson A.J., Berks B.C., Richardson D.J. Spectroscopic characterization of a novel

multiheme otype cytochrome widely implicated in bacterial electron transport. J. Biol. Chem., 1998, V.273, pp.28785-28790.

107. Schauder R., Eikmanns B., Thauer R.K., Widdel F., Fuchs G. Acetate oxidation to C02 in anaerobic bacteria via a novel pathway not involving reactions of the citric acid cycle. Arch. Microbiol, 1986, V.145, N2, pp. 162172.

108. Schauder R, Preuß A., Jetten M., Fuchs G. Oxidative and reductive acetyl CoA/carbon monoxide dehydrogenase pathway in Desulfobacterium autotrophicum. 2.Demonstration of the enzymes of the pathway and comparison of CO dehydrogenase. Arch. Microbiol., 1989, V.151, N1, pp.8489.

109. Schauder R, Widdel F., Fuchs G. Carbon assimilation pathways in sulfate-reducing bacteria. II. Enzymes of a reductive citric acid cycle in the autotrophic Desulfobacter hydrogenophilus. Arch. Microbiol., 1987, V.148, N3, pp.218-225.

110. Schirawski J. and Unden G. Anaerobic respiration of Bacillus macerans with fumarate, TMAO, nitrate and nitrite and regulation of the pathways by oxygen and nitrate. Arch. Microbiol, 1995, V.163, pp. 148-154.

111. Schmitz R.A. Mechanismus der Acetatoxidation inDesulfurella acetivorans: Nachweis der Enzyme des Tricarbonsaurezyklus. Diploma Thesis, 1989, pp. 1017.

112. Schmitz R.A., Bonch-Osmolovskaya E.A., Thauer R.K. Different mechanisms of acetate activation in Desulfurella acetivorans and Desulfuromonas acetoxidans. Arch. Microbiol, 1990, V.154, pp.274-279.

113. Schröder I., Kröger A., Macy J.M. Isolation of the sulphur reductase and reconstitution of the sulphur respiration of Wolinella succinogenes. Arch. Microbiol, 1988, V.149, N6, pp.572-579.

114. Sebban C., Blanchard L., Bruschi M., Guerlesquin F. Purification and

characterization of the formate dehydrogenase from Desulfovibrio vulgaris Hildenborough. FEMS Microbiology Letters, 1995, V.133, N1-2, pp.143-149.

115. Seeliger S., Cord-Ruwisch R., Schink B. A periplasmic and extracellular c-type cytochrome of Geobacter sulfurreducens acts as a ferric iron reductase and as an electron carrier to other acceptors or to partner bacteria. J. Bacteriol., 1998, V.180, N14, pp.3686-3691.

116. Seitz H.-J. and Cypionka H. Chemolithotrophic growth of Desulfovibrio desulfuricans with hydrogen coupled to ammonification of nitrate or nitrite. Arch. Microbiol., 1986, V.146, N1, pp.63-67.

117. Simon E.J. and Shemin D. The preparation of S-succinyl coenzyme A. J. Am. Chem. Soc., 1953, V.75, p.2520.

118. Simon H. Enoate reductase. Chemistry and biochemistry of flavoenzymes (ed Muller F.), CRC Press, Boca Raton, Florida, 1992, V.2, pp.317-341.

119. Simon J., Gross R., Klimmek O., Ringel M., Kroger A. A periplasmic flavoprotein in Wolinella succinogenes that resembles the fumarate reductase of Shewanellaputrefaciens. Arch. Microbiol., 1998, V.169, pp.424-433.

120. Singh A.P. and Bragg P.D. Anaerobic transport of amino acids coupled to the glycerol-3-phosphate-fumarate oxidoreductase system in a cytochrome-deficient mutant of Escherichia coli. Biochem. Biophys. Acta, 1976, V.423, N3, pp.450-461.

121. Singh A.P., Bragg P.D. Reduced nicotinamide adenine dinucleotide dependent reduction of fumarate coupled to membrane energization in a cytochrome deficient mutant of Escherichia coli. Biochim. Biophys. Acta, 1975, V.396, N2, pp.229-241.

122. Smith P.K., Krohn R.I., Hermanson G.T., Mallia A.K., Gartner F.H., Provenzano M.D., Fujimoto E.K., Goeke N.M., Olson B.J., Klenk D.C. Measurement of protein using bicinchoninic acid. Anal. Biochem., 1985, V.150, pp.76-85.

123. Sone N., Yoshida M., Hirata H., Kagawa Y. Adenosine triphosphate synthesis by electrochemical proton gradient in vesicles reconstituted from purified adenosine triphosphatase and phospholipids of thermophilic bacterium. J. Biol. Chem., 1977, V.252, N9, pp.2956-2960.

124. Spormann A.M. and Thauer R.K. Anaerobic acetate oxidation to C02 by Desulfotomaculum acetoxidans. Demonstration of enzymes required for the operation of an oxidative acetyl-CoA/carbon monoxide dehydrogenase pathway. Arch. Microbiol., 1988, V.150, N4, pp.374-380.

125. Spormann A.M. and Thauer R.K. Anaerobic acetate oxidation to C02 by Desulfotomaculum acetoxidans. Isotopic exchange between C02 and the carbonyl group of acetyl-CoA and topology of enzymes involved. Arch. Microbiol., 1989, V.152, N2, pp. 189-195.

126. Sucheta A., Cammak R., Weiner J., Armstrong F.A. Reversible electrochemistry of fumarate reductase immobilized on an electrode surface. Direct voltammetric observations of redox centers and their participation in rapid catalytic electron transport. Biochemistry, 1993, V.32, N20, pp.5455-5465.

127. Szewzyk R. and Pfennig N. Complete oxidation of catechol by the strictly anaerobic sulfate-reducing Desulfobacterium catecholicum sp.nov. Arch. Microbiol., 1987, V.147, N2, pp.163-168.

128. Thauer R.K. Citric-acid cycle, 50 years on. Modifications and an alternative pathway in anaerobic bacteria. Eur. J. Biochem., 1988, V.176, N3, pp.497-508.

129. Thauer R.K., Jungermann K., Decker K. Energy conservation in chemotrophic anaerobic bacteria. Bacteriol. Rev., 1977, V.41, N1, pp. 100-180.

130. Thauer R.K., Moller-Zinkhan D., Spormann A.M. Biochemistry of acetate catabolism in anaerobic chemotrophic bacteria. Annu. Rev. Microbiol., 1989, V.43, pp.43-67.

131. Thomas P.E., Ryan D., Levin W. An improved staining procedure for the detection of the peroxidase activity of cytochrome P-450 an sodium dodecyl

sulfate Polyacrylamide gels. Anal. Biochem., 1976, Y.75, N1, pp.168-176.

132. Trumpower B.L. and Aspandiar K. Controlled digestion with trypsin as a structural probe for the N-terminal peptide of soluble and membranous cytochrome Cj. Biochemistry, 1975, Y.14, pp.3635-3641.

133. Unden G. Differential roles for menaquinone and demethylmenaquinone in anaerobic electron transport of E.coli and their /«r-independent expression. Arch Microbiol., 1988, V.150, N5, pp.499-503.

134. Unden G., Albracht S.P.J., Kröger A. Redox potentials and kinetic properties of fumarate reductase complex from Vibrio succinogenes. Biochim. Biophys. Acta, 1984, V.767, pp.460-469.

135. Unden G., Böcher R., Knecht J., Kröger A. Hydrogenase from Vibrio succinogenes, a nikel protein. FEBSLett., 1982, V.145, N2, pp.230-234.

136. Unden G., Hackenberg H., Kröger A. Isolation and functional aspects of the fumarate reductase involved in the phosphorylative electron transport of Vibrio succinogenes. Biochim. Biophys. Acta, 1980, V.591, pp.275-288.

137. Unden G. and Kröger A. Low-potential cytochrome b as an essential electron transport component of menaquinone reduction by formate in Vibrio succinogenes. Biochim. Biophys. Acta, 1983, V.725, pp.325-331.

138. Unden G. and Kröger A. Reconstitution in liposomes of the electron transport chain catalizing fumarate reduction by formate. Biochim. Biophys. Acta, 1982, V.682, N2, pp.258-263.

139. Unden G. and Kröger A. The function of the subunits of the fumarate reductase complex of Vibrio succinogenes. Eur. J. Biochem., 1981, V.120, pp.577-584.

140. Van der Maarel M.J.E.C., van Bergei J.K., van Wrkhoven A.F., Laverman A.M., Mejir W.G., Stam W.T., Hansen T.A. Cleavege of dimethylsulfoniopropionate and reduction of acrylate by Desulfovibrio acrylicus sp. nov. Arch. Microbiol., 1996, V.166, pp. 109-115.

141. Van der Westen H.M., Mayhew S.G., Veeger C. Separation of hydrogenase from intact ceels of Desulfovibrio vulgaris. FEBS Lett. 1978. V. 86. N. l.P. 122-126.

142. Van Hellemond J.J. and Tielens A.G.M. Expression and functional properties of fumarate reductase. Biochem. J., 1994, V.304, pp.321-331.

143. Watt S.R. and Clarke A.J. Role of autolysins in the EDTA-induced lysis of Pseudomonas aeruginiosa. FEMS Microbiology Letters, 1994, V.124, pp.113120

144. Weiner J. and Dickie P. Fumarate reductase of Escherichia coli. Elucidation of the covalent-flavin component. J. Biol. Chem., 1979, V.254, N17, pp.85908593.

145. Westenberg D.J., Gunsalus R.P., Ackrell B.A.Cc., Sices H., Cecchini G. Escherichia coli fumarate reductase frdC and frdD mutants. J. Biol. Chemistry, 1993, V.268, N2, pp.815-822.

146. Williamson J.R. and Corgey B.E. Assays of intermediates of the citric acid cycle and related compounds by fluorometric enzyme methods. Methods in enzymology (ed Lowenstein J.M.), Academic Press, New York London, 1969, V.13, pp.434-513.

147. Wissenbach U., Kroger A., Unden G. The specific functions of menaquinone and demethylmenaquinone in anaerobic respiration with fumarate, dimethylsulfoxide, trimethylamine N-oxide and nitrate by Escherichia coli. Arch. Microbiol., 1990, V. 154, Nl,pp.60-66.

148. Wolin M.J., Wolin E.A., Jacobs N.J. Cytochrome-producing anaerobic vibrio, Vibrio succinogenes, sp.n. J. Bacteriol., 1961, V.81, N6, pp.911-917.

149. Wood H.G., Ragsdale S.W., Pezacka E. The acetyl-CoA pathway: a newly discovered pathway of autotrophic growth. Trends Biochem. Sci., 1986, V.ll, N1, pp.14-18.

150. Wood H.G., Ragsdale S.W., Pezacka E. The acetyl-CoA pathway of

autotrophic growth. FEMS Microbiol. Rev., 1986, V.39, N4, pp.345-362.

151. Zeikus J.G., Fuchs G., Kenealy W., Thauer R.K. Oxidoreductases involved in cell carbon synthesis of Methanobacterium thermoautotrophicum. J. Bacteriol, 1977, V.132, N2, pp.604-613.

152. Zientz E., Six S., Unden G. Identification of a third secondary carrier (DcuC) for anaerobic C4-dicarboxylate transport in Escherichia coli: roles of the three Dcu carriers in uptake and exchange. J. Bacteriol., 1996, V.178, N24, pp.72417247.

Искренне благодарю руководителя заведующего Лабораторией анаэробного метаболизма микроорганизмов Василия Константиновича Акименко за целенаправленное руководство и ценные советы.

Бесконечно признательна старшим коллегам кандидатам биологических наук Александру Сергеевичу Галушко, Константину Сергеевичу Лауринавичюсу, Стелле Михайловне Трутко, доктору Reiner Hedderich и профессору Rolf К. Thauer за помощь в планировании экспериментов и обучение микробиологическим и биохимическим методам.

Сердечно благодарю старшего лаборанта Галину Анатольевну Солдатенкову, инженера Валентину Алексеевну Шнырову, кандидата химических наук Владимира Матвеевича Аданина, технических ассистентов Jürgen Koch и Jörg Kahnt за помощь в подготовке и проведении экспериментов.

Благодарю сотрудников Отдела метаболизма микроорганизмов и Лаборатории радиоактивных изотопов за внимание к работе и плодотворное обсуждение полученных результатов.

Особо признательна моим коллегам и друзьям за моральную поддержку и помощь при написании диссертации: Виктории Артуровне Щербаковой, Максиму Радиковичу Щербакову, Александру Александровичу Черкашину, Константину Сергеевичу Лауринавичюсу.