Механизмы гипосенсибилизирующего действия пептидов, полученных протеолизом мажорного аллергена Asp f 2 из грибов Aspergillus fumigatus тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат биологических наук Шевченко, Марина Александровна

• Шевченко, Марина Александровна
• кандидат биологических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Шевченко, Марина Александровна

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Механизмы аллергических реакций.

Роль врожденного иммунитета в ответе на аллерген.

Адаптивная иммунная система и аллергические реакции.

Факторы, влияющие на дифференцировку СБ4+-клеток.

Особенности гуморального иммунного ответа при аллергии.

Механизмы формирования ответа памяти.

Факторы генетической предрасположенности к атопическим реакциям.

Контроль иммунного ответа на периферии.

Патогенетические фазы аллергических заболеваний.

Иммунологическая стадия.

Патохимическая стадия.

Патофизиологическая стадия.

Аллергическая реакция на условнопатогенный гриб Aspergillus fumigatus.

Экзогенный аллергический альвеолит.

Аллергический бронхолегочный аспергиллез.

Лечение аллергического бронхолегочного аспергиллеза.

Аллергенные свойства белков гриба Aspergillus fumigatus.

Аллерген-специфическая иммунотерапия.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Животные.

Антигены.

Получение пептидных фрагментов белков Asp f 2 и Asp f 3.

Обращенно-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография.

Электрофорез в ПААГ.

Схемы иммунизации.

Получение клеточных суспензий и культивирование лимфоцитов.

Колориметрический метод оценки пролиферации.

Твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА).

Пептидный иммуноферментный анализ.

Метод конкурентного ингибирования.

Гистологическое исследование легких мышей.

Статистическая обработка результатов.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

Получение и первичная характеристика протеолизных пептидов белков

Asp f 2 и Asp f 3.

Получение пула протеолизных пептидов Asp f 2 и Asp f3.

Анализ аминокислотной последовательности пепитдов.

Оценка иммуногенности пула пептидов, полученных в результате протеолиза белков Asp f 2 и Asp f 3.

Метод иммунизации мышей пептидами.

Динамика продукции антител к пептидам.

Анализ дозовой зависимости продукции антител.

Эффект сверхнизких доз антигена на продукцию IgG- и IgE-антител 65 Специфичность иммунного ответа, вызванного пептидами белков Asp f и Asp f 3.

Способность пептидных пулов белков Asp f 2 и Asp f 3 связывать IgEантитела из сывороток крови больных АБЛА.

Анализ уровня перекрестного связывания IgG-антителами полноразмерных белков и их протеолизных фрагментов.

Анализ B-клеточных эпитопов белков Asp f 2, Asp f 3 и их пептидных фрагментов.

Анализ распознавания Т-клетками белков Asp f 2, Asp f 3 и их фрагментов, полученных в результате протеолиза.

Аллерген-специфическая иммунотерапия с использованием рекомбинантных белков и их фрагментов.

Модель аллергии на грибы Aspergillus fumigatus на мышах.

Продукция IgE в модели аллергии на мышах.

Модуляция иммунного ответа на Aspergillus fumigatus с помощью

АСИТ рекомбинантными белками.

Модификация аллергенов для АСИТ с помощью протеолитической обработки.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Механизмы гипосенсибилизирующего действия пептидов, полученных протеолизом мажорного аллергена Asp f 2 из грибов Aspergillus fumigatus»

Актуальность проблемы. Аллергическими заболеваниями страдает по разным данным от 10 до 30% населения развитых стран. Аллергия проявляется спектром заболеваний от легких форм, таких как сезонные риниты, синуситы, конъюнктивиты и локальные проявления на коже, до тяжелых форм, таких как астма и атопический дерматит. Тяжелые формы аллергии требуют пожизненного применения антигистаминных и кортикостероидных препаратов, что значительно ухудшает качество жизни больного и в ряде случаев вызывает обострения, угрожающие жизни, такие как анафилактический шок. Аллергенами могут являться многие безвредные белки и гаптены, попадающие в организм из окружающей среды через естественные барьеры кожи, желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) и бронхолегочной системы. Особенностью аллергенов является низкая концентрация белков, попадающих в контакт с иммунной системой, в норме не вызывающих патологических реакций. Неадекватная реактивность организма, приводящая к запуску аллергического ответа, определяется генетическими факторами, предрасполагающими к развитию заболевания. В семьях родителей, страдающих аллергией, дети также будут склонны к формированию того или иного типа аллергии. Генетическая предрасположенность связана, в первую очередь, с повышенной продукцией цитокинов, оркестрирующих весь каскад событий в иммунном ответе.

Аллергия на условно-патогенные грибы Aspergillus fumigatus практически никогда не является первичной. Этим видом аллергии страдают больные, уже имеющие гиперреактивность к другим, более распространенным аллергенам, например, к пищевым белкам и пыльце растений. Кроме того, в группу риска попадают больные с идиопатическим фиброзом легких. Опасность повышения чувствительности к грибам A. fumigatus связана с тем, что формы этого заболевания могут быть очень тяжелыми. Так, аллергический бронхолегочный аспергиллез (АБЛА) является неизлечимым заболеванием, требующим по жизненным показаниям постоянного приема кортикостероидов. Кроме того, диагностика АБЛА крайне затруднена. Постановка диагноза АБЛА занимаетобычно несколько лет, что значительно увеличивает летальность. Аллергией на A.fumigatus страдают до 15% больных с астмой разного генеза.

Единственным относительно эффективным методом патогенетического лечения больных с гиперреактивностью на ограниченный спектр аллергенов является аллерген специфическая иммунотерапия (АСИТ). Лучшие результаты получают в том случае, если лечение начинают на ранней стадии заболевания, когда в крови больного выявляются 1§Е-антитела к ограниченному числу аллергенов. Однако, в ряде случаев, выявить и начать лечение больных на ранней стадии достаточно сложно. В первую очередь это касается детей младшего возраста. Известно, что до 70% детей, имеющих в детстве тяжелые диатезные проявления, впоследствии страдают разными формами аллергии вплоть до астмы и атопического дерматита. Лечение с помощью АСИТ разрешено применять только с 3-х лет. К этому времени у части детей уже формируется множественная чувствительность, в первую очередь к пищевым белкам, что провоцирует проявление гиперреакций и на другие аллергены. Второй проблемой выбора больных для АСИТ является существование форм аллергии, в патогенезе которых не принимает участие 1£Е. Известно, что существует ^в-опосредованная форма аллергической реакции, в основе патогенеза которой лежит болезнь иммунных комплексов, осаждающихся в барьерных тканях: легких, коже, эпителии ЖКТ, а также повреждающих сосуды и паренхиму почек. Кроме того, в некоторых случаях единственным патогенетическим проявлением аллергии является активация Т-клеток, мигрирующих в барьерные ткани и органы (легкие, кожу, ЖКТ), где они продуцируют цитокины, вызывающие зуд, гибель эпителиальных клеток, формирование бокаловидных клеток, продуцирующих слизь, вызывают фиброз ткани, усиливают созревание и хоминг в ткани эозинофилов. Однозначных методов диагностики этих типов аллергии на настоящий момент нет. Поэтому на лечение АСИТ попадают только больные, страдающие 1-м типом аллергических реакций, опосредованных ^Е-антителами. Часть больных из этой группы имеет множественную чувствительность, что снижает эффективность проведения АСИТ.

Приведенные данные свидетельствуют о том, что для разработки методов диагностики и лечения всех форм аллергии требуется дальнейшее изучение механизмов аллергических реакций и выявление наиболее значимых параметров, по которым можно следить за эффективностью лечения. На настоящий момент эффект АСИТ проявляется в улучшении состояния больного, снижении медикаментозного лечения, необходимого для контроля заболевания, и снижении числа обострений. По иммунологическим параметрам отмечается снижение уровня продукции цитокинов и увеличение уровня IgG-антител при практически неизменном уровне IgE-антител в сыворотке крови больных. В данной работе детально изучается эффект искусственной индукции IgG-антител к главным белкам аллергена из гриба A. fumigatus на проявления аллергической реакции, вызванной полным экстрактом грибов. Актуальность представленной работы заключается в том, что она содержит новые фундаментальные данные по патогенезу аллергических реакций, а также создает возможность улучшить вакцины, используемые для АСИТ.

Цели и задачи работы. Целью работы является изучение противоаллергенных свойств и анализ механизмов действия пептидов белков Aspf2 и Aspf3 гриба A. fumigatus, полученных протеолизом. В рамках данной работы нами были поставлены следующие задачи:1. Получить пул пептидов рекомбинантных белков Asp f 2 и Asp f 3 -главных белков аллергенов из гриба A. fumigatus, путем протеолитической деградации трипсином или дуоденазой.

2. Исследовать способность протеолизных пептидов связывать IgE-антитела из сывороток больных аллергическим бронхолегочным аспергиллезом.

3. Исследовать способность пептидов, полученных протеолизом, вызывать продукцию IgG-антител в мышиной модели.

4. Определить способность Т-клеток памяти, специфичных к белкам Asp f 2 и Asp f 3, распознавать Т-эпитопы, входящие в состав пептидов, полученных протеолизом.

5. Изучить перекрестное распознавание IgG-антителами из сывороток крови мышей, иммунизированных полноразмерными белками Aspf2, Aspf3 или их протеолизными пептидами, полноразмерных белков и их пептидов, полученных протеолизом.

6. Разработать экспериментальную модель аллергии на A. fumigatus у мышей.

7. Исследовать возможность модуляции иммунного ответа пулом пептидов белков-аллергенов в мышиной модели аллергии па. A. fumigatus.

Научная новизна и практическая значимость работы. В настоящей работе предложено использовать для проведения аллерген-специфической иммунотерапии не экстракты аллергенов, а основные белки аллергена, полученные рекомбинантно. В этом случае эффективность терапии значительно повышается за счет селективной индукции высокоаффинных антител IgG-класса к основным белкам аллергенного комплекса. Впервые предложен метод модификации основных белков-аллергенов за счет гидролиза этих белков протеолитическими ферментами. В результате протеолиза происходит разрушение конформационных IgE-связывающих эпитопов, что позволяет в значительной степени снизить аллергенность препарата. Впервые показано, что пептиды, полученные протеолизом белков, являются не только иммуногенными, но и сохраняют «тонкую» специфичность иммунного ответа. Это выражается в том, что не только Т-, но и В-клетки распознают основные доминантные эпитопы полноразмерных белков в составе протеолизных пептидов. Более того, при иммунизации пептидами формируются IgG-антитела, распознающие доминантные В-клеточные эпитопы полноразмерных белков, что было показано с помощью синтетических пептидов, перекрывающих на 68 и 80%% аминокислотную последовательность белков Asp f 2 и Aspf3, соответственно. Все эксперименты по анализу иммуногенности пептидов проведены для двух белков, двух ферментов и трех линий мышей, что позволяет с уверенностью судить об универсальности полученных результатов. В процессе работы создана экспериментальная модель аллергической реакции на грибы A. fumigatus, что позволило провестиисследование протективного действия мажорного белка Asp f 2 и его протеолизных пептидов в экспериментах in vivo на мышах двух линий BALB/c и C57BL6. В процессе работы было впервые показано, что только мажорные белки аллергена могут оказывать полноценное протективное действие при лечении аллергии. Так, иммунизация мышей белком Asp f 3 или его протеолизными пептидами, защищала только часть мышей, тогда как протекция, вызванная иммунизацией Asp f2 или его пептидами, обеспечивала 100% защиту. На основе полученных данных разработаны критерии отбора мажорных белков для использования в АСИТ. Таким образом, создан прототип противоаллергенной вакцины, защищающей от прогрессирования аллергической реакции, вызванной грибами A.fumigatus. На основе разработанной методологии в дальнейшем возможно создание вакцин против аллергии, вызванной другими аллергенами белковой природы.

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Шевченко, Марина Александровна

выводы

1. Протеолитическая обработка белков Aspf2 и Aspf3 трипсином или дуоденазой приводит к образованию пулов пептидов, молекулярные массы которых не превышают 14 кДа.

2. Протеолиз белков Aspf2 и Aspf3 приводит к потере конформационных эпитопов и снижению связывания IgE на 50-70% по сравнению с полноразмерными белками.

3. Иммунизация мышей протеолизными пептидами белков Asp f2 и Asp f 3 в фосфатном буфере приводит к образованию специфических IgG, способных распознавать полноразмерные белки.

4. Т-лимфоциты, специфические к полноразмерным белкам Asp f 2 и Asp f 3, распознают протеолизные пептиды этих белков.

5. Антитела, образующиеся при иммунизации мышей полноразмерными белками Asp f 2 и Asp f 3 или их протеолизными пептидами способны к перекрестному распознаванию на уровне 60-90% белков Asp f 2, Asp f 3 и их протеолизных пептидов.

6. Доминантные IgG-связывающие В-клеточные эпитопы белков Asp f 2 и Asp f 3 сохраняются в результате протеолиза. Для белка Asp f 2 они локализованы в пептидах 92-106(Н-2ь), 172-186 (Н-2Ь), 254-268 (H-2d, H-2b), для белка Asp f 3 в пептидах 97-111 (H-2d, H-2b) и 115-126 (H-2b).

7. Иммунизация мышей мажорным белком-аллергеном A. fumigatus - Asp f 2, но не Asp f 3, эффективно защищает от формирования аллергии, вызванной экстрактом A. fumigatus.

8. Иммунизация мышей пептидами, полученными протеолизом белка Asp f 2 как трипсином, так и дуоденазой, эффективно защищает от формирования аллергии в легких.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Шевченко, Марина Александровна, 2004 год

1. Вискова Н.Ю., Свирщевская Е.В., Шевченко М.А. Особенности экспериментальной модели аллергии на гриб Aspergillus fumigatus. Аллергия, астма и клиническая иммунология, 2003, т. 7, № 7, с. 16-22.

2. Кулешов A.B., Чучалин А.Г.Ж Аллергический бронхолегочный аспергиллез. Р.М.Ж., спец. выпуск: Пульмонология, 1997, т. 5, № 17, с. 1131-1135.

3. Митрофанов B.C. Аллергический бронхолегочный аспергиллез. Проблемы медицинской микологии, 2000, № 1, с. 31-40.

4. Свирщевская Е.В. Клинические и экспериментальные аспекты патогенеза аллергических реакций на условно патогенный гриб Aspergillus fumigatus. Иммунология, 2003, т. 24, № 3, с. 188-202.

5. Фрадкин В.А., Рошаль Н.И., Горячкина Л.А., Никонорова М.В., Астафьева Н.Г., Лусс Л.В., Райкис В.Н. Применение Российских аллергоидов для специфической иммунотерапии полинозов. Ж. микробиол., эпидемиол., иммунобиол., 1993, №. 9, с. 311-313.

6. Ярилин A.A. Основы иммунологии. М., «Медицина», 1999.

7. Aderem A., Underhill D.M. Mechanisms of phagocitosis in macrophages. Annu. Rev. Immunol., 1999, no. 17, p. 593-623.

8. Akdis C.A., K. Blaser K. Regulation of specific immune responses by chemical and structural modifications of allergens. Int. Arch. Allergy Immunol., 2000, no. 121, p. 261-269.

9. Akkoc T., Tolunay S., Barlau I., Basaran M. Airway remodeling and serum total immunoglobulin E (IgE) levels in a murine model of asthma. J. Asthma, 2001, v. 38, no. 7, p. 585-591.

10. Allen M.J., Laederach A., Reilly P.J. Polysaccharide recognition by surfactant protein D: novel interactions of a C-type lectin with nonterminal glucosyl residues. Biochemistry, 2001, v. 40, no. 26, p. 7789-7798.

11. Alexopoulou L., Holt A.C., Medzhitov R., Flovell R.A. Recognition of double-stranded RNA and activation of NF-kappaB by Toll-like receptor 3. Nature, 2001, v. 413, no. 6857, p. 732-738.

12. Arruda L.K., Mann B.J., Chapman M.D. Selective expression of a major allergen and cytotoxin, Asp f 1, in Aspergillus fumigatus/ Implication for immunopathogenesis of Aspergillus related diseases. J. Immunol., 1992, v. 149, no. 10, p. 3354-3359.

13. Backhed F., Meijer L., Normark S., Richter-Dahlfors A. TLR4-dependent recognition of lipopolysaccharide by epithelial cells requires sCD14. Cell Microbiol., 2002, v. 4, no. 8, p. 493-501.

14. Banchereau J., Steinman R.M. Dendritic cells and the control of immunity. Nature, 1998, v. 392, no. 6673, p.245-252.

15. Banerjee B., Kurup V.P., Greenberger P., Kelly K., Fink J. C-Terminal cysteine residues determine the IgE binding of Aspergillus fumigatus allergen Asp f 2. J. Immunology, v. 169, no. 9, p. 5137-5144.

16. Banerjee B., Greenberger P.A., Fink J.N., Kurup V.P. Immunological characterization of Asp f 2, a major allergen from Aspergillus fumigatus associated with allergic bronchopulmonary aspergillosis. Infect. Immun., 1998, v. 66, no. 11, p. 5175-5182.

17. Baur X. Hypersensitivity pneumonitis (extrinsic allergic alveolitis) induced by isocyanates. J. Allergy Clin. Immunol., 1995, v. 95, no. 5, pt. 1, p. 1004-1010.

18. Berek C., Jarvis J.M., Milstein C. Activation of mamory and virgin B cells clones in hiperimmune animals. Eur. J. Immunol., 1987, v. 17, no. 8, p.1121-1129.

19. Bernard M, Mouyna I, Dubreucq G, Debeaupuis JP, Fontaine T, Vorgias C, Fuglsang C, Latge JP. Characterization of a cell-wall acid phosphatase (PhoAp) in Aspergillus fumigatus. Microbiology, 2002, v. 148, no. 9, p. 2819-2829.

20. Blanas E., Davey G.M., Carbone F.R., Heath W.R. A bone marrow-derived APC in the gut associated lymphoid tissue captures oral antigens and presen them to both CD4+ and CD8+ T cells. J. Immunol., 2000, v. 164, no. 6, p.2890-2896.

21. Blease K., Mehrad B., Standiford T.J. Lukacs N.W., Gosling J., Boring L., Charo I.F., Kunkel S.L., Hogaboam C.M. Enhanced pulmonary allergic responses to Aspergillus in CCR2-/- mice. J. Immunol., 2000, v. 165, no. 5. p. 2603-2611.

22. Blease K., Jakubzick C., Westwick J., Lukacs N., Kunkel S.L., Hogaboam C.M. Therapeutic effect of IL-13 immunoneutralization during chronic experimental fungal asthma. J. Immunol., 2001, v. 166, no. 8, p. 5219-5224.

23. Bodtger U., Poulsen L.K., Jucobi H.H., Mailing H.J. The safety and efficacy of subcutaneouse birch pollen immunotherapy a one-year, randomized, doubleblind, placebo-controlled study. Allergy, 2002, v. 57, no. 4, p. 297-305.

24. Bourke E., Bosisio D., Golay J., Polentarutti N., Mantovani A. The Toll-like receptor repertoire of human B lymphocytes: inducible and selective expression of TLR9 and TLR10 in normal and transformed cells. Blood, 2003, v. 102, no. 3, p. 956-963.

25. Bradley L.M., Atkins G.G., Swain S.L. Long term CD4+ memory T cells from the spleen lack MEL-14, the lymph node homming receptor. J. Immunol., 1992, v. 148, p. 324-332.

26. Chauhan B. Evidence for the involvement of two different MHC class II regions in susceptibility or protection in allergic bronchopulmonary aspergillosis. J Allergy Clin. Immunol., 2000, v. 106, no. 4, p. 723-729.

27. Christin L., Wysong D.R., Meshulam T. Wang S., Diamond R.D. Mechanisms and target sites of damage in killing of Candida albicans hyphae by human polymorphonuclear neutrophils. J. Infect. Dis., 1997, v. 176, p. 1567-1578.

28. Christin L., Wysong D.R., Meshulam T., Hastey R., Simons E.R., Diamond R.D. Human platelets damage Aspergillus fumigatus hyphae and may supplement killing by neutrophils. Infect. Immun. 1998, v. 66, no. 3, p. 11811189.

29. Cody D.T., McCaffrey T.V., Roberts G. Kern E.B. Effects of Aspergillus fumigatus and Alternaría alternata on human ciliated epithelium in vitro. Laryngoscope, 1997, v. 107, p.1511-1514.

30. Coligan J.E., Kruisbeek A.M., Margulies D.H., Shevach E.M., StroberW. Current protocols in Immunology. Current Protocols., 1994.

31. Cookson W. The alliance of genes and environment in asthma and allergy. Nature, 1999, v. 25, no. 402, s. 6760, p. 5-11.

32. Corry D.B., Grunig G., Hadeiba H., Kurup V.P., Warnock M.L., Sheppard D., Rennick D.M., Locksley R.M. Requirements for allergen-induced airway hyperreactivity in T and B cell-deficient mice. Mol. Med., 1998, v. 4, no. 5, p. 344-355.

33. Crameri R., Hemmann S., Ismail C., Menz G., Blaser K. Disease-specific recombinant allergens for the diagnosis of allergic bronchopulmonary aspergillosis. Int. Immunol., 1998, v. 10, no. 8, p. 1211-1216.

34. Cross S. Mould spores: the unusual suspects in hay fever. Community Nurse, 1997, v. 3, no. 4, p. 25-26.

35. Dhiwakar M. Preoperative diagnosis of allergic fungal sinusitis. Laryngoscope, 2003, v. 113, no. 4, p. 688-694.

36. Drachenberg K.J., Proll S., Urban E., Woroniecki S.R. Single-course specific immunotherapy with mixed pollen allergoids: results of a multi-centre study. Allergol. Immunopathol., 2003, v. 31, no. 2, p. 77-82.

37. Durham S.R. Allergic inflammation: cellular aspects. Allergy, 1999; v. 54, s. 56, p. 18-20.

38. Emson C.L., Bell S.E., Jones A., Wisden W., McKenzie A.N.J. Interleukin (IL)-4-independent induction of immunoglobulin (Ig)E, and perturbation of T cellwdevelopment in transgenic mice expressing IL-13. J. Exp. Med., 1998, v. 188, no. 2, p. 399-404.

39. Fallon P.G. Primitive Toll signalling: bugs, flies, worms and man. Trends Immunol., 2001, v. 22, no. 2, p. 63-66.

40. Fontaine T., Magnin T., Melhert A., Lamont D., Latge J.P., Ferguson M.A. Structures of the glycosylphosphatidylinositol membrane anchors from Aspergillus fumigatus membrane proteins. Glycobiology, 2003, v. 13, no. 3, p. 169-77.

41. Fromtling R.A., Shadomy H.J. An overview of macrophage-fungal interactions. Mycopathologia, 1986, v. 93, no. 2, p. 77-93.

42. Gaglani B., Borish L., Bartelson B.L., Buchmeier A., Keller L., Nelson H.S. Nasal immunotheraphy in weed-induced allergic rhinitis. Ann. Allergy Asthma Immunol. 1997, v. 79, no. 3, p. 259-265.

43. Greenberger P.A. Clinical aspects of allergic bronchopulmonary aspergillosis. Front. Biosci., 2003, v. 1, no. 8, p.l 19-127.

44. Hemmann,S., Blaser,K. and Crameri,R. Allergens of Aspergillus fumigatus and Candida boidinii share IgE-binding epitopes. Am. J. Respir. Crit. Care Med., 1997, v.156, no. 6, p. 1956-1962.

45. Henry J. Miller M.M., Pontarotti P. Structure and evolution of the extended B7 family. Immunol. Today, 1999, v. 20, p. 285-288.

46. Heusser C.H., Bews J., Brinkmann V., Delespesse G., Kilchherr E., Ledermann F., Le Gros G., Wagner K.: New concepts of IgE regulation. Int. Arch. Allergy Appl. Immunol., 1991, v.94, no. 1-4, p. 87-90.

47. Honey G.F., Dallman M.J. Lamb J.R. Linked suppression in peripheral T cell tolerance to the house dust mite derived allergen Der p 1. Int. Arch. Allergy Immunol., 1999, v.118, no. 2-4, p. 122-124.

48. Honey G.F., Dallman M.J. Lamb J.R. T-cell regulation of peripheral tolerance and immunity: the potential role for Notch signalling. Immunology, 2000, v. 100, no. 3, p. 281-288.

49. Hogaboam C.M., Gallinat C.S., Taub D.D. Strieter R.M., Kunkel S.L., Lukacs N.W. Immunomodulatory role of C10 chemokine in a murine model of allergic bronchopulmonary aspergillosis. J. Immunol., 1999, v. 162, p. 60716079.

50. Hogaboam C.M., Blease K., Schuh J.M. Cytokines and chemokines in allergic bronchopulmonary aspergillosis (ABPA) and experimental Aspergillus-induced allergic airway or asthmatic disease. Front. Biosci., 2003, v.l, no. 8, p. 147-156.

51. Hsu C.H., Chua K.Y., Tao M.H., Huang S.K., Hsieh K.H. Inhibition of specific IgE response in vivo by allergen-gene transfer. Int. Immunol., 1996, v. 8, no. 9, p. 1405-1411.

52. Huang S., Zwollo P., March D.J. Class II major hystocompartibility complex restriction of human T-cells responses to short ragweed allergen Amb a V. Eur. J. Immunol., 1991, v. 21, no. 6, p. 1469-1473.

53. Ibrahim-Granet O., Philippe B., Boleti H., Boisvieux-Ulrich E., Grenet D., Stern M., Latge J.P. Phagocytosis and intracellular fate of Aspergillus fumigatus conidia in alveolar macrophages. Infect. Immun., 2003, v. 71, no. 2, p. 891-903.

54. Janeway C.A., Travers P., Walport M., Shlomchik M. Immunobiology. The immune system in Health and Disease 5th ed. Current Biology Limited, Garland Publishing Inc., 2001.

55. Judson M.A., Stevens D.A.: The treatment of pulmonary aspergilloma. Expert. Opin. Pharmacother., 2001, v. 2, no. 7, p. 1065-1071.

56. Kauffman H.F.: Immunopathogenesis of allergic bronchopulmonary aspergillosis and airway remodeling. Front. Biosci., 2003, v.l, no. 8, p. 190196.

57. Khlgatian S.V., Perova N.A., Berzhets V.M. The mite allergen and allergoid stimulation of histamine secretion by mast cells. Biull Eksp. Biol. Med., 1993, v.l 16, no. 9, p. 311-313.

58. Kirshning C.J., Bauer S. Toll-like receptors: cellular signal transducers for exogenous molecular patterns causing immune responses. Int. J. Med. Microbiol. 2001, v. 291, no. 4, p. 251-260.

59. Kishor U., Madan T., Sarma P.U., Singh M., Urban B.C., Reid KB. Protective roles of pulmonary surfactant proteins, SP-A and SP-D, against lung allergy and infection caused by Aspergillus fumigatus. Immunobiology, 2002, v. 205, no. 45, p. 610-618.

60. Knutsen, A.P., Mueller, K.R., Levine, A.D., Chauhan, B., Hutcheson, P.S., Slavin, R.G. Asp f I CD4+ TH2-like T-cell lines in allergic bronchopulmonary aspergillosis. J. Allergy Clin. Immunol., 1994, v. 94, no. 2, pt. 1, p. 215-221.

61. Kumar A., Reddy L.V., Sochanik A., Kurup V.P, Isolation and characterization of a recombinant heat shok protein of Aspergillus fumigatus. J. Allergy Clin. Immunol., 1993, v. 91, no. 5, p. 1024-1030.

62. Kurup V.P., Banerjee B., Hemmann S., Greenberger P.A., Blaser K., Crameri R. Selected recombinant Aspergillus fumigatus allergens bind specifically to IgE in ABPA. Clin. Exp. Allergy, 2000, v. 30, no. 7, p. 988-993.

63. Kurup, V.P., Grunig, G., Knutsen, A.P., and Murali, P.S. Cytokines in allergic bronchopulmonary aspergillosis. Res. Immunol., 1998, v. 149, no. 4-5, p. 466477.

64. Lai Y.H., Mosmann R.T, Li L, Xia Y, Nguyen A, Feng L, Lo D. Effects of Th2 cytokines on chemokine expression in the lung: IL-13 potently induces eotaxin expression by airway epithelial cells. J. Immunol., 1999, v.l, no. 62, pt. 5, p. 2477-2487.

65. Lamy B., Moutaouakil M., Latge J.P., Davies J.: Secretion of a potential virulence factor a fungal ribonucleotoxin during human aspergillosis infection. Mol. Microbiol., 1991, v.5, no. 7, p. 1811-1815.

66. Latge J.P. The pathobiology of Aspergillus fumigatus. Trends Microbiol., 2001, v. 9, no. 8, p. 382-389.

67. Levitz S.M. Diamond R.D. Mechanisms of resistance of Aspergillus fumigatus Conidia to killing by neutrophils in vitro. J. Infect. Dis., 1985, v. 152,' no. 1, p. 33-42.

68. Lukacs N.W., Hogaboam C., Chensue S.W., Blease K., Kunkel S.L. Type 1/type 2 cytokine paradigm and the progression of pulmonary fibrosis. Chest., 2001, v. 120, s. l,p. 5-8.

69. Luster A.D. Antichemokine immunotherapy for allergic diseases. Curr. Opin. Allergy Clin. Immunol., 2001, v. 1, no. 6, p. 561-567.

70. Madan T., Arora N., Sarma P.U. Ribonuclease activity dependent cytotoxicity of Asp fl, a major allergen of A. fumigatus. Mol. Cell. Biochem., 1997, v. 167, no. 1-2, p. 89-97.

71. Mason D, Powrie F. Control of immune pathology by regulatory T cells. Curr. Opin. Immunol., 1998, v. 10, no. 6, p. 649-655.

72. Medzhitov R., Janeway C.A.Jr. Innate immunity: impact on the adaptive immune response. Curr. Opin. Immunol., 1997, v. 9, no. 1, p. 4-9.

73. Medzhitov R., Preston-Hurlburt P., Janeway C.A.Jr. A human homologue of the Drosophila Toll protein signals activation of adaptive immunity. Nature, 1997, v. 388, no. 6640, p. 394-397.

74. Mills F.C., Mitchell M.P., Harindranath N., Max E.E. Human Ig S gamma regions and their participation in sequential switching to IgE. J. Immunol., 1995, v. 155, no. 6, p. 3021-3036.

75. Mojtabavi N., Dekan G., Stingl G., Epstein M.M. Long-lived Th2 memory in experimental allergic asthma. J. Immunol., 2002, v. 169, no. 9, p. 4788-4796.

76. Mouyna I., Sarfati J., Recco P., Fontaine T., Henrissatz B., Latge J.P. Molecular characterization of a cell wall-associated beta(l-3)endoglucanase of Aspergillus fumigatus. Med. Mycol., 2002, v. 40, no. 5, p. 455-464.

77. Moverare R, Elfman L, Bjornsson E, Stalenheim G. Cytokine production by peripheral blood mononuclear cells following birch-pollen immunotherapy. Immunol. Lett., 2000, v. 73, no. 1, p. 51-56.

78. Oldfield W.L., Larache M., Kay A.B. Effect of T cell peptidee derived from Fel d 1 on allergic reaction and cytocine production in patien sensitive to cats: a randomized control trial. Lancet, 2002, v. 360, no. 9326, p. 47-53.

79. Oldfield W.L., Kay A.B., Larche M. Allergen-derived T cell peptide-induced late asthmatic reactions precede the induction of antigen-specific hyporesponsiveness in atopic allergic asthmatic subjects. J. Immunol., 2001, v. 167, no. 3, p. 1734-1739.

80. Prescott S.L. New concepts of cytokines in asthma: is the Th2/Thl paradigm out the window? J. Paediatr. Child Health, 2003, v. 39, no. 8, p. 575-579.

81. Ramachandran H., Jayaraman V., Banerjee B., Greenberger P.A., Kelly K.J., Fink J.N., Kurup V.P. IgE binding conformational epitopes of Asp f 3, a major allergen of Aspergillus fumigatus . Clin. Immunol., 2002, v. 103, no. 3, pt. 1, p.324-333.

82. Romagnani S. Cytokines and chemoattractants in allergic inflammation. Mol. Immunol., 2002, v. 38, no. 12-13, p. 881-885.

83. Rossenwasser L.J., Gelfand E.W. Immunotheraphy with antigens and eppitopes. Am. J. Resperat. Cell. Mol. Biol., 1999, v. 21, no. 1, p. 4-6.

84. Rothenfusser S., Tuma E., Endres S., Hartmann G. Plasmacytoid dendritic cells: the key to CpG. Blood, 2003, v. 101, no. 11, p. 4500-4504.

85. Sabroe I., Parker L.C., Wilson A.G., Whyte M.K.B., Dower S.K. Toll-like receptors: there role in allergy and non-allergic inflaminatore desease. Clin. Exp. Allergy, 2002, v. 32, no. 7, p. 984-989.

86. Saito H., Howie K., Wattie J., Denburg A., Ellis R., Inman M.D., Denburg J.A. Allergen-induced murine upper airway inflammation: local and systemic changes in murine experimental allergic rhinitis. Immunology, 2001, v. 104, no. 4, p. 226-234.

87. Sallusto F., Lenig D., Forster R., Lipp M., Lanzavecchia A. Two subsets of memory T lymphocytes with distinct homming potentials and effector functions. Nature, 1999, v. 401, no. 6754, p. 708-712.

88. Schreiber J., Struben C., Rosahl W., Amthor M. Hypersensitivity alveolitis induced by endogenous Candida species. Eur. J. Med. Res., 2000, v. 5, no. 3, p. 126-132.

89. Sen M., Kopper R., Pons L., Abraham E.C., Burks A.W., Bannon G.A. Protein structure plays a critical role in peanut allergen stability and may determine immunodominant IgE-binding epitopes. J. Immunol., 2002, v. 169, no. 2, p.882-887.

90. Sennekamp J. New knowledge about exogenous allergic alveolitis. Pneumologie, 1992, v. 46, no. 3, p. 92-100.

91. Skov M., Poulsen L.K., Koch C. Increased antigen-specific Th-2 response in allergic bronchopulmonary aspergillosis (ABPA) in patients with cystic fibrosis. Pediatr. Pulmonol., 1999, v. 27, no. 2, p. 74-79.

92. Sokolova E.A., Mirgorodskaya O.A., Roepstorff P., Savelyeva N.V., Zamolodchikova T.S. Comparative Study of Action of Bovine Duodenal Proteinases (Duodenases) on Polypeptide Substrates. Biochemistry, 2001, v. 66, no. 1, p. 62-67.

93. Sprent J. Turnover of memory-phenotype CD8+ T cells. Microbes Infect., 2003, v. 5, no. 3, p. 227-231.

94. Sudowe S., Arps V., Vogel T., Kölsch E. The role of interleukin-4 in the regulation of sequential isotype switch from immunoglobulin Gl to immunoglobulin E antibody production. Scand. J. Immunol., 2000, v. 51, no. 5, p. 461-471.

95. Sudowe S., Rademaekers A., Kölsch E. Antigen dose-dependent predominance of either direct or sequential switch in IgE antibody responses. Immunology, 1997, v. 91, no. 3, p. 464-472.

96. Suga M. Mechanisms accounting for granulomatous responses in hypersensitivity pneumonitis. Sarcoidosis Vase Diffuse Lung Dis., 1997, v. 14, no. 2, p. 131-138.

97. Supajatura V., Ushio H., Nakao A., Akira S., Okumura K., Ra C., Ogawa H. Differential responses of must cell Toll-like receptors 2 and 4 in allergy and innate immunity. J. Clin. Invest., 2002, v. 109, no. 10, p. 1351-1359.

98. Takai T., Mori A., Yuuki T., Okudaira H., Okumura Y. Non-anaphylactic combination of partially deleted fragments of the major house dust mite allergen Der f 2 for allergen-specific immunotherapy. Mol. Immunol., 1999, v. 36, p. 1055-1065.

99. Tang Q., Henriksen K.J., Boden E.K., Tooley A.J., Ye J., Subudhi S.K., Zheng X.X., Strom T.B., Bluestone J.A. Cutting edge: CD28 controls peripheral homeostasis of CD4+CD25+ regulatory T cells. J. Immunol., 2003, v. 171, no. 7, p. 3348-3352.

100. Taramelli D., Malabarba M.G., Sala G., Basilico N., Cocuzza G. Production of cytokines by alveolar and peritoneal macrophages stimulated by Aspergillus fumigatus conidia or hyphae. J. Med. Vet. Mycol., 1996, v. 34, no. 1, p. 49-56.

101. Testa B., Mesolella C., Testa D., Mesolella M., Testa F., D'Alessio O. Suppressor T cell subsets in allergic rhinitis patients. Acta Otolaryngol., 1996, v. 116, no. 6, p. 876-882.

102. Traynor T.R., Huffnagle G.B. Role of chemokines in fungal infections. Med. Mycol., 2001, v. 39, no. 1, p. 41-50.

103. Trifilieff A., El-Hashim A., Bertrand C. Time course of inflammatory and remodeling events in a murine model of asthma: effect of steroid treatment. Am. J. Physiol. Cell. Mol. Physiol., 2000, v. 279, no. 6, p. 1120-1128.

104. Trinchieri G. Interleukin-12 and the regulation of innate resistance and adaptive immunity. Nat. Rev. Immunol., 2003, v. 3, no. 2, p. 133-146.

105. Tumas D.B., Chan B., Werther W., Wrin T., Vennari J., Desjardin N., Shields R.L., Jardieu P. Anti-IgE efficacy in murine asthma models is dependent on the method of allergen sensitization. J. Clin. Immunol., 2001, v. 107, no. 6, p. 1025-1033.

106. Upham J.W. The role of dendritic cells in immune regulation and allergic airway inflammation. Respirology, 2003, v. 8, no. 2, p. 140-148.

107. Van der Stoep N., Korver W., Logtenberg T. In vivo and in vitro IgE isotype switching in human B lymphocytes: evidence for a predominantly direct IgM to IgE class switch program. Eur. J. Immunol., 1994, v. 24, no. 6, p. 1307-1311.

108. Varney V.A., Edwards J., Tabbah K., Brewster H., Mavroleon G., Frew A.J. Clinical efficacy of specific immunotherapy to cat dander: a double-blind placebo-controlled trial. Clin. Exp. Allergy, 1997, v. 27, no. 8, p. 860-867.

109. Washburn R.G., Gallin J.I., Bennet J.E. Oxidative killing of Aspergillus fumigatus proceeds by parallel myeloperoxidase-dependent and -independent pathways. Infect. Immun., 1987, v. 5, no. 9, p. 2088-2092.

110. Walker C., Zuany-Amorim C. New trends in immunotherapy to prevent atopic diseases. Trends Pharmacol. Sci., 2001, v. 22, no. 2, p. 84-90.

111. Wasylnka J.A., Moore M.M. Uptake of Aspergillus fumigatus Conidia by phagocytic and nonphagocytic cells in vitro: quantitation using strains expressing green fluorescent protein. Infect. Immun., 2002, v. 70, p. 3156-3163.

112. Yamasaki H. Polarized type 1 cytokine profile in bronchoalveolar lavage T cells of patients with hypersensitivity pneumonitis. J. Immunol., 1999, v. 163, no. 6, p. 3516-23.

113. Yamashita Y., Okano M., YoshinoT., Hattory H., Yamamoto T., Watanabe N., Akagi T., Nishizaki K. Carbohydrates expressed on Aspergillus fumigatus induce in vivo allergic Th2-type response. Clin. Exp. Allergy, 2002, v. 32, no. 5, p. 776-782.