Культивирование клеток кожи, предназначенных для заместительной терапии, на полимерных плёнках тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.25, кандидат биологических наук Швед, Юлия Александровна

• Швед, Юлия Александровна
• кандидат биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Швед, Юлия Александровна

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1 Биоматериаловедение — междисциплинарный подход к изучению полимеров.

1.2 Полимеры медико-биологического назначения.

1. 3 Тканевая инженерия.

1.3.1 Принципы и методы тканевой инженерии.

1.3.2 Основные требования к полимерам в тканевой инженерии.

1. 3. 3 Синтетические биодеградируемые полимеры.

1. 4 Строение кожи и способы лечения повреждений кожного покрова.

1.4.1 Строение кожного покрова.

1. 4. 2 Строение коллагена и его свойства.

1. 4. 3 Подготовка клеточного продукта для трансплантаций.

1.4.4 Формирование полимерных матриц для культивирования клеток.

1. 5 Взаимодействие клеток с полимерной поверхностью скаффолда.

1. 6 Модификация полимерного субстрата.

1.6.1 Физические способы модификации.

1.6.2 Химические способы модификации полимерной поверхности.

Глава 2. Объекты и методы исследования.

2.1. Приготовление материалов и реагентов.

2.1.1 Синтез поли( В,Ь-лактида).

2.1.2 Формирование плёнок методом полива из раствора.

2.1.3 Получение тонких полимерных плёнок.

2.1.4 Гидрофобизация покровных стёкол.

2.1.5 Получение пористых плёнок из смеси полилактида (ПЛ) и полиэтиленгликоля (ПЭГ).

2.1.6 Получение коллагена.

2.2 Модификация поверхности полилактидных пленок.

2.2.1 Нанесение коллагена на полимерный субстрат.

2.2.2 Модификация полилактидных плёнок лизином.

2.3 Методы исследования.

2.3.1 Измерение гидрофильно-гидрофобных характеристик поверхности полимерной плёнки методом пластинок Вильгельми.

2.3.2 Оценка количества растворённого ПЭГ по потере массы.

2.3.3 Определение концентрации полиэтиленгликоля в водных растворах.

2.3.4 Определение оксипролина в коллагене.

2.3.5 Определение концентрации коллагена.

2.3.6 Выявление структуры коллагена.

2. 3.7 Нингидриновый метод анализа.

2. 3. 8 Ядерный магнитный резонанс.

2. 3. 9 Сканирующая электронная микроскопия.

2. 4 Выделение клеток кожи и анализ их поведения на исследуемых субстратах

2.4.1 Выделение и культивирование первичных фибробластов.

2.4.2 Выделение и культивирование первичных кератиноцитов.

2.4.3. Оценка состояния клеток на полимерных плёнках.

2.4.4 Адгезия фибробластов.

2.4.5 Анализ структуры актинового цитоскелета.

Глава 3. Результаты.

3.1. Синтез поли(Б,Ь-лактида).

3.2. Получение полимерных плёнок из полилактида разными способами.

3.2.1 Плёнки, полученные методом полива из раствора.

3.2.2. Полимерные плёнки, полученные на покровном стекле.

3.3. Влияние условий получения полимерных плёнок на взаимодействие фибробластов с полимерной поверхностью полилактидной плёнки.

3.4. Исследование деградации полилактидных плёнок in vitro.

3.5. Исследование деградации полилактидных плёнок in vivo.

3.6. Модификация полилактидной плёнки.

3.6. 1. Нанесение коллагена на полилактидную матрицу.

3.6.2 Влияние покрытия полимерных пленок коллагеном на поведение культивируемых кератиноцитов.

3.7. Формирование пористых плёнок на основе смеси полилактида и полиэтил енгликоля.

3.7.1 Исследование скорости растворения ПЭГ.

3.7.2 Культивирование кератиноцитов на плёнках, приготовленных на основе смеси ПЛ и ПЭГ.

3.7.3 Модификация коллагеном пористых плёнок и культивирование на них кератиноцитов.

3.8. Модификация полилактидных плёнок раствором лизина.

Глава 4. Обсуждение результатов.

Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Культивирование клеток кожи, предназначенных для заместительной терапии, на полимерных плёнках»

Разработка технологий лечения повреждённых органов и тканей методами заместительной клеточной терапии является перспективным направлением современной регенеративной медицины. В основе этого метода лечения лежит введение в организм пациента стволовых или дифференцированных клеток, которые замещают утраченные. Для этой цели используют культивируемые клетки, которые выделяют из костного мозга и тканей самого пациента или здоровых доноров.

Актуальность работы. Восстановление целостности повреждённой ткани требует создания нормального микроокружения для трансплантируемых клеток, способствующего их размножению, дифференцировке и созданию нормальных структур тканей. В организме создание такого микроокружения обеспечивают белки внеклеточного матрикса. Эти белки и в частности коллаген, используют, поэтому, при культивировании клеток и при создании клеточных композиций для дальнейшей трансплантации в поврежденные ткани пациента. При переносе клеток из культуральных сосудов в раны возникают, однако, проблемы сохранения их пространственной организации и функциональных свойств. Они связаны, прежде всего, с недостаточной механической прочностью клеточных ассоциаций и с неизбежным повреждением клеток в результате ферментативной обработки при отделении клеточных пластов от поверхности сосудов, в которых их культивируют.

Размножение и рост клеток на полимерных матрицах, обладающих достаточной механической прочностью и имеющих определённую пространственную архитектуру, может способствовать формированию структурной основы дифференцирующихся тканей. Поэтому в последнее время при создании клеточных продуктов, необходимо использовать полимеры, для обеспечения сохранения исходного состояния межклеточных контактов и поверхностных рецепторов клеток. В зависимости от практических задач к таким полимерам предъявляется ряд требований, в том числе, биосовместимость и способность рассасываться в процессе восстановлении структуры ткани. Таким образом, в настоящее время сформировалась новая междисциплинарная область науки — тканевая инженерия, которая включает в себя принципы и методы инженерии, химии, физики и клеточной биологии. В основе тканевой инженерии лежит культивирование клеток на искусственных полимерных матрицах.

Одним из приоритетных направлений тканевой инженерии является восстановление структурной целостности повреждённых кожных покровов, возникающих в результате ожогов, трофических язв и другого рода повреждений. Культивирование кератиноцитов на полимерных матрицах и последующая трансплантация сформировавшегося клеточного пласта вместе с такой матрицей в организм позволяет исключить процедуру обработки клеток протеолитическими ферментами. Перенесённая в организм биодеградируемая полимерная матрица со временем рассасывается, а клетки способствуют восстановлению кожных покровов.

Целью работы являлся поиск оптимальных условий для культивирования клеток кожи на биодеградируемых полимерных плёнках, сформированных на основе поли(0,Ь-лактида) для заместительной клеточной терапии.

В процессе исследования были решены следующие задачи:

1. Подобраны оптимальные условия для культивирования клеток кожи на полил актидных плёнках.

2. Разработаны условия нанесения коллагена на поверхность полимерных плёнок и исследовано взаимодействие клеток с различными его структурными формами (молекулярной и фибриллярной).

3. Проведена модификация поверхности полимерных плёнок введением аминогрупп и оценка их влияния на степень распластанности клеток.

4. Отработаны условия формирования пористых плёнок для свободного доступа к клеткам питательных веществ и отвода продуктов метаболизма.

5. Определена скорость деградации плёнок в условиях культивирования клеток и после имплантации их в организм лабораторных животных.

Заключение диссертации по теме «Гистология, цитология, клеточная биология», Швед, Юлия Александровна

Выводы

1. Разработанные нами биодеградируемые полимерные плёнки на основе полилактида позволяют культивировать на них кератиноциты человека и получать многослойные пласты клеток для последующей трансплантации без предварительной ферментативной обработки.

2. Биосовместимость полученных пленок, способствующая прикреплению и росту клеток, достигается путем модификации их поверхности коллагеном I типа или лизином.

3. .Структура и распределение коллагена на поверхности пленок зависит от условий его нанесения и влияет на поведение взаимодействующих с ним клеток. Наилучшие распределение кератиноцитов по поверхности пленки, их рост, морфология и пространственная организация цитоскелета достигаются при нанесении коллагена в фибриллярной форме.

4 Путём смешивания полилактида с полиэтиленгликолем 6000 (ПЭГ), и удалением последнего из готовой матрицы можно получить пористые плёнки, которые улучшают взаимодействие клеток с окружающей средой при их культивировании и после переноса пласта на рану.

5. Разработанные полилактидные пленки в условиях культуры и при внесении в экспериментальные раны лабораторных животных являются не токсичными и обладают удовлетворительной скоростью резорбции, и, следовательно, могут быть использованы в технологиях клеточной заместительной терапии.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Швед, Юлия Александровна, 2008 год

1. Абаев Ю.К. Абаев, В.Е. Капуцкий, Адарченко А.А. Новый перевязочный материал для лечения гнойных ран // Здравоохранение. 1995. №11.

2. Алъбертис Б. и др. "Молекулярная биология клетки". Т. 1, 2. Мир, 1994 г.

3. Барабанов В. П., Осипов О. П., Санников С. Г., Торсуев Д. М. Исследование смачивания фторополимеров И Химия и компьютерное моделирование. Бутлеровские сообщения. 2002. № 6, с/ 47-50

4. Билибин А.Ю., Зорин И.М. Деструкция полимеров, ее роль в природе и современных медицинских технологиях // Успехи химии. 2006. № 75. стр. 151165.

5. Вагнер Е.А. Углеродный материал нового поколения в эндопротезировании костей и суставов. Пермь: Изд-во Пермс. ун-та. 1993. 64 с.

6. Искаков Р. М., Батырбеков Е. О., Сулейменов И. Э., Бектуров Е. А., Жубанов Б. А. Полимерные биоматериалы Алматы. 2005

7. Жеребцов Н.А., Попова Т.Н., Артюхов В.Г. Биохимия: Учебник / Воронеж: Изд. Вор. гос. ун. 2002. 696 с.

8. Живетин В. В., Осипов Б. П., Осипова Н. Н. Льняное сырье в изделиях медицинского и санитарно-гигиенического назначения // Рос. хим. ж. (Ж. Рос. хим. об-ва им. Д. И.Менделеева). 2002, т. XLVI, №2

9. Капуцкий В.Е., Адарченко А.А., Собенчук О.П., Красшьников И.П. Изучение антимикробных свойств целлюлозы и других полимерных материалов, модифицированных хлоргексидином // Антибиотики и химиотерапия. 1991. №3.

10. Макаров К.А., Штейнгард М.З. Сополимеры в стоматологии // М.: Медицина. 1982. 247 с.

11. Михаилов И.Н. Структура и функции эпидермиса// М.: Медицина. 1979.

12. Никитин В. И., Перский Е. Э.б Утевская Л. А. Возрастная и эволюционная биохимия коллагеновыз структур. Киев: Наукова думка. 1977. 279 стр.

13. Привес М. Г., Лысенков Н. К. Анатомия человека С-Пб: «Гиппократ», 1999. 704 с.

14. Пхакадзе Г.А. Биодеструктируемые полимеры. Киев: Наукова Думка. 1990. 160 с.

15. Смирнова Т.А., Юркштович Т.Л., Герасимович Г.Н., Капуцкий Ф.Н. Современные препараты на основе производных целлюлозы в клинической практике//Медицина. 1996. V. 5. С. 39-43.

16. Спичкина О. Г., Калмыкова Н. В., Кухарева Л. В., Воронкина И. В., Блинова М. И., Пинаев Г. П. Выделение популяции базальных кератиноцитов человека путём их селективной адгезии к белкам внеклеточного матрикса // Цитология 2006. т. 48. №10. стр. 841-847

17. Фаллер Дж.М., Шилдс Д. Молекулярная биология клетки. М.:Изд-во Бином, 2003.

18. Физическая химия: Учебник для вузов. М.: Химия. 2000. 320с.

19. ХэмА., КормакД. Гистология. М.: Мир. 1983.С. 191.

20. Шапиро М.С. Цианакрилатные клеи в травмотологии и ортопедии // М.: Медицина. 1976. 102 с.

21. Швед Ю.А., Кухарева Л.В., Зорин И.М., Соловьев А.Ю. , Блинова М.И., Билибин А.Ю., Пинаев Г.П. Культивирование фибробластов кожи человека на полимерной полилактидной подложке // Цитология. 2006. т.48. № 2. с.161-168.

22. Швед Ю.А., Кухарева Л.В., Зорин И.М., Блинова М.И., Билибин А.Ю., Пинаев Г.П. Взаимодействие культивируемых клеток кожи с разными структурными формами коллагена, нанесённого на полилактидную матрицу // Цитология, 2007, т.49, № 1, с.32-39.

23. Штилъман М. И. Полимеры медико-биологического назначения // М.: Академкнига. 2006. 400 с.

24. Aldwinckle T.J., Ahkong Q.F., Bangham A.D., Fisher D., Lucy J.A. Effects of poly(ethylene glycol) on liposomes and erythrocytes. Permeability changes and membrane fusion //Biochim. Biophys. Acta. 1982. V. 689. P. 548-560.

25. Amiji, M; Park, K. Prevention of protein adsorption and platelet adhesion on surfaces by PEO/PPO/PEO triblock copolymers. Biomaterials. 1992;13(10):682-692.

26. Amulya K. Saxena A. K., Benvenuto M., Marler J., Joseph P. Vacanti J. P. Skeletal Muscle Tissue Engineering Using Isolated Myoblasts on Synthetic Biodegradable Polymers: Preliminary Studies // Tissue Engineering 1999. V. 5. №6. P.525 531.

27. Andrade J.D., Hlady V. Protein adsorption and materials biocom-patibility: a tutorial review and suggested hypotheses // Adv. Polym. Sci. 1986. V. 79. P. 1-63.

28. Ashammakhi N., Rokkanen P. Absorbable polyglycolide devices in trauma and bone surgery//Biomaterials. 1997. V. 18. P. 3-9.

29. Barrera D., Zylstra E., Lansbury P., Langer R. Copolymerization and degradation of poly(lactide acid) // Macromolecules. 1995. V. 28. P. 425 -432

30. Behravesh E., Yasko A.W., Engle P.S., Mikos A.G. Synthetic biodegradable polymers for orthopaedic applications // Clin Orthop. 1999 V. 36. P. 118-185.

31. Bell E., Ehrlich H. P., Buttle D. Nakatsuji T. Living tissue formed in vitro and accepted as a skin equivalent tissue of full thickness // Science. 1981. V. 211. P. 1052-1054

32. Belkas J.S., Munro C.A., Shoichet M.S., Johnston M., Midha R. Long-term in vivo biomechanical properties and biocompatibility of poly(2- hydroxyethyl methacrylate-co-methyl methacrylate) nerve conduits // Biomaterials. 2005. V. 26. P. 1741-1749.

33. Bero M., JKasperczyk, ZJJedlinski. Coordination polymerization of lactides// Makromol Chem. 1990. V. 191. P. P. 2287- 2296.

34. Bertrand P., Jonas, A., Laschewsky, Legras R. XJltrathin polymer coatings by complexation // Macromol. Rapid Commun. 2000,. V. 21. P. 319-348.

35. Brady J.M., Outright D.E., Miller R.A. Resorption rate, route, route of elimination, and ultrastructure of the implant site of polylactic acid in the abdominal wall of the rat//J. Biomed. Mater. Res. 1973. V. 7. P. 155-166.

36. Brach del Prever E.M., Costa L., Crova M., Dallera A., Gallinaro P., Camino G. Luda M.P. Unacceptable biodegradation of UHMWPE in vivo // Biomaterials. 1996. V.17. P.873-878.

37. Branham G.H., Thomas J.R. Skin grafts // Otolaryngol. Clin. North. Am. 1990. V. V. 23. P. 889-897.

38. Briesewitz R., Epstein M. R., Marcantonio E. E. Expression of native and truncated forms of the human integrin alpha 1 subunit // J. Biol. Chem. 1993. V. 268. P. 2989-2996.

39. Buck, C., Horwitz A.F. Cell surface receptors for extracellular matrix molecules //Annu. Rev. Cell Biol. 1987. V. 3. P. 179-205.

40. Analysis of the Integrin Subunit 10, a 1-associated Collagen Binding Integrin Expressed on Chondrocytes // J. Biol. Chem. 1998 V. 273. P. 20383-20389.

41. Carver N., Leigh I.M. Keratinocyte grafts and skin equivalents // Int. J. Dermatol. 1991. V. 30. P.540-551.

42. Chabot F., Vert M., ChapeUe S. Configuration structures of lactic acid stereocopolymers as determined by 13C-1 H-NMRJ. // Polymer. 1983. V. 24. P. 5359.

43. Chujo. K., Kobayashi. H., Suzuki. J., Tokuhara S. Physical and chemical characteristics of polyglycolide//Makromol. Chem. 1967. V. 100

44. Cima L.G., Vacanti, J.P., Vacanti, C., Tissue engineering by cell transplantation using degradable polymer substrates // J. Biomech. Eng. 1991. V. 113. P. 143.

45. Clyde G., Hardwick C. Extracellular Matrix Contraction by Choroidal Fibroblasts:Inhibition by Staurosporine // Investigative Ophthalmology & Visual Science. 1994. V. 35. №2.

46. Dai N.T., Williamson M.R., Khammo N., Adams E,F., Coombes A,G., Composite cell support membranes based on collagen and polycaprolactone for tissue engineering of skin // Biomaterials. 2004. V. 25. P. 4263-4271

47. Decher G., Hong, J.-D. //Ber. Bunsen-Ges. 1991. V. 95. P. 1430. Decher G. Fuzzy Nanoassemblies: Toward Layered Polymeric Multicomposites Science. 1997. V. 227. P. 1232-1237

48. Deschler D.G., Hayden R.E. Head and neck reconstruction // Neuroimag Clin N Am. 1996. V. 6. P. 505-514.

49. Dubois Ph., Jacobs C., Jerome R., Teyssie Ph. Macromolecular engineering of polylactones and polylactides. 4. Mechanism and kinetics of lactide homopolymerization by aluminum isopropoxide // Macromolecules. 1991. V. 24. P. 2266-2270.

50. Duvernoy V. A., Malm Т., Ramstrom J. A biodegradable patch used as a pericardial substitute after cardiac surgey: 6- and 24-month evaluation with CT // Thorac. Cardiovasc. Surg. 1995. Y.43. №5. P. 271-274

51. Ellis D.L., Yannas I. V. Recent advances in tissue synthesis in vivo by use of collagen-glycosaminoglycan copolymers // Biomaterials. 1996. V. 17. P. 291—299.

52. Evans G.R.D., Brandt K, Widmer S. In vivo evaluation of poly(L-lactic acid) porous conduits for peripheral nerve regeneration I I Biomaterials 1999. V. 20. P. 1109-1115.

53. Finley J. IV., Friedman M. Chemical methods for available lysine // Cereal Sci. 1973. V. 50. P. 101-105.

54. Freedlander E. New forms of skin grafting: from the laboratory to the clinic I I HospMed. 1998. V.59. P. 484-487.

55. Gan D., Lu S., Cao W. W. Formation of nanoporous poly(aryl amide ether) (PAAE) films by selective removal of poly(ethylene glycol) (PEG) from PEG/PAAE composite films // European Polymer Journal. 2004. V. 40.№11.P.2481-2486.

56. Garric X., Molus J.-P., Garreau H., Guilhou J.-J. Vert M. Human skin cell cultures onto PLA50 (PDLLA) bioresorbable polymers : Influence of chemical and morphological surface modifications // J. Biomed. Mat. Res. 2005. V. 72. P. 180-189.

57. Gogolewski S., Pennings A.J. An artificial skin based on biodegradable mixtures of polylactides and polyurethanes for full-thickness skin wound covering // Makromol. Chern. Rapid. Commun. 1983. V. 4. P. 675-680

58. Gonsalves К. E., Jin S., Baraton M. Synthesis and surface characterization offunctionalized polylactide copolymer microparticles // Biomaterials. 1998. V. 19. P. 1501-1505.

59. Gopferich A. Mechanisms of polymer degradation and erosion // Biomaterials. 1996. V. 17. P. 103-114

60. Groth Т., Altankov G., Kolsz K. Adhesion ofhuman peripheral blood lymphocytes is dependent on surface of wettabilty and protein preadsorption // Biomaterials. 1994. V. 15. P. 423-^28.

61. Gugala Z., Gogolewski S. Protein adsorption, attachment, growth and activity of primary rat osteoblasts on polylactide membranes with defined surface characteristics //Biomaterials. 2004 V. 25. P. 2341-51.

62. Halpem B. D., Tong Y.-C. In: Encycl. of Polymer Sci. and Eng // Willey: New-York. 1986. V.9. P.486-508.

63. Han D. K., Hubbell J. A. Lactide-based poly(ethylene glycol) polymer networks for scaffolds in tissue engineering //Macromolecules. 1996. V. 29. P. 5233— 5235.

64. Hansbrough J.F., Morgan J., Greenleaf G., Parikh M, Nolte C., Wilkins L. Evaluation of Transplanted Tissue-Engineered Oral Mucosa Equivalents in Severe Combined Immunodeficient Mice I I J. Burn. Care Rehabil. 1994. V. 4. P. 15-20.

65. Hentze H.-P., Antonietti M. New polymers for molecular biotechnology // Reviews in Molecular Biotechnology. 2002. V. 90. P. 27-35.

66. Herold D.A., Keil K., Brims D.E. Oxidation of polyethylene glycols by alcohol dehydrogenase //Biochem. Pharmacol. 1989. V. 38. P. 73-76.

67. Hoffmann A.S. Biologically functional materials. In: Ratner BD, Hoffman AS, Schoen FJ, Lemons JE, editors // Biomaterials science: an introduction to materials in Medicine 1996. New York: Academic Press. 1996. p. 124-30.

68. Hollahan J.R., Stafford B.B., Falb R.D., Payne S.T. Attachment of amino groups to polymers surfaces by radiofrequency plasmas // J. Appl. Polym. Sci. 1969. V. 13. P. 807-816.

69. Hong Y., Gao C.Y., Xie Y., Gong Y.H., Shen J.C. Collagen-coated polylactide microspheres as chondrocyte microcarriers // Biomaterials. 2005. V. 26. P. 63056313.

70. Hua Y., Hua Y.S., Topolkciraev V., Hiltnera A., Baera E. Aging of poly(lactide)/poly(ethylene glycol) blends // Polymer. 2003 V. 44. P. 5711-5720.

71. Huang J., Lisowski M.S., Runt J., HallE.S., KenR.T., BuehlerN., LinJ.S. Crystallization and Microstructure of Poly(L-lactide-co-meso-lactide) Copolymers // Macromolecules. 1998 V. 31. P. 2593-2599.

72. Ни Y., Rogunova M., Topolkaraev V., Hiltner A., Baer E. Poly(lactide) with low stereoregularity// Polymer. 2004. V. 44. P. 5701-5710.

73. Hutmacher D. W. Polymeric scaffolds in tissue engineering, bone and cartilage // Biomaterials. 2000. V. 21. P. 2529-2543.

74. Jacobson B.S, Branton D. Plasma membrane: rapid isolation and exposure of the cytoplasmic surface by use of positively charged beads // Science 1977. V. 195. P. 302-304.

75. J eon S.I., Andrade J.D. Protein-surface interactions in the presence of polyethylene oxide II. Effect of protein size // J. Colloid. Interface. Sci. 1991. V. 142. P. 159-166.

76. Jin S., Gonsalves K.E. Synthesis of functionalized polylactide and it graft copolymers with polyethylene glycol) // Polymer. 1998. V. 39. P. 5155-5162

77. Kadler К E., Holmes D. F., Trotter J. A., Chapman J. A. Collagen fibril formation // Biochem. J.l 996 V. 316. P. 1-1 1.

78. Karp J.M., Shoichet M.S., Davies J.E. Bone formation on two dimensional poly(D,L-lactide-co-glycolyde) (PLGA) films and three-dimensional PLGA tissue engineering scaffolds in vitro // J. Biomed Mater Res. 2003. V.64. №2. P. 388-396.

79. Kawai, K; Suzuki, S; Tabata, Y; Ikada, Y; Nishimura, Y. Accelerated tissue regeneration through incorporation of basic fibroblast growth factor-impregnated gelatin microspheres into artificial dermis // Biomaterials. 2000;21:489-499

80. Khang G., Choee J.-H., Rhee J.M., Lee H.B. Interaction of different types of cells on physicochemically treated poly(L-lactide-co-glycolide) surfaces // J. Appl. Polym. Sci. 2002. V. 85. P. 1253-1262.

81. KimS-S., GwakS-J., Cha Yong Choi, Kim B-S. Skin regeneration using keratinocytes and dermal fibroblasts cultured on biodegradable microspherical polymer scaffolds // Journal of biomedical materials research. 2005. V. 75B. №2. p. 369-377.

82. Kishida A., Iwata H., Tamada Y., Ikada Y. Cell behaviour on polymer surfaces grafted with non-ionic and ionic monomers //Biomaterials. 1991. V. 12. P. 786-792.

83. Kiss E.l, Vargha-Butler E.I. Novel method to characterize the hydrolytic decomposition of biopolymer surfaces // Colloids and Surfaces B. 1999. V. 15. №3. P. 181-193.

84. Kricheldorf H. R. Syntheses and application of polylactides // Chemosphere. 2001. V.43.P. 49-54.

85. Kricheldorf H.R., Krieiser-Saunders I., Boettcher C. Polylactones: 31. Sn(II)octoate-initiated polymerization of L-lactide: a mechanistic study // Polymer. 1995. V. 36. P. 1253- 1259.

86. J.T., Carlsson J., Lin J.N., Caldwell K.D. Chemical modification of surface active poly(ethylene oxide)-poly(propylene oxide) triblock copolymers // Bioconjugate. Chem. 1996. V. 7. P. 592-599.

87. S.M., Garreau II, Vert M. Structure-property relationships in the case of the degradation of massive aliphatic poly-(o-hydroxy acids) in aqueous media. Part 1: poly-(DL-lactic acid) //J. Mater. Sci. 1990. V. 1. P. 123-130.

88. S., Vert M. Biodegradation of aliphatic polyesters. In: Gilead GSD, editor. Biodegradable polymers, principles and application. London: Chapman and Hall. 2003. p 43-87

89. Ma Z.W., Gao C.Y., Ji J., Shen J.C. Protein immobilization on the surface of poly(l-lactic acid) films for improvement of cellular interactions // Eur Polym. J. 2002.V. 38. P. 2279.

90. Martin O., Averous L. Poly(lactic acid): plasticization and properties of biodegradable multiphase systems I I Polymer. 2001. V. 42. P. 6209 6215.

91. Maruguchi Т., Maruguchi Y., Suzuki S., Matsuda K., Toda K., Isshiki N. An experimental study of novel bioartificial materials applied to glycotechnology for tissue engineering //Plast. Reconstr. Surg. 1994. V. 3. P. 93-98.

92. Matsuzaka K., Walboomers F. Effect of microgrooved poly-l-lactic (PLA) surfaces on proliferation, cytoskeletal organization, and mineralized matrix formation of rat bone marrow cells // Clin. Oral Impl. Res. 2000. V. 11. P. 325-333.

93. Mercier 1., Lechaire J.P., Desmouliere A., Gaill F., Aumailley M. Interactions of human skin fibroblasts with monomeric or fibrillar collagens induce different organization of cytoskeleton // Exp. Cell Res. 1996. V. 225. P. 245- 256.

94. Middleton J.C., Tipton A.J. Synthetic biodegradable polymers as medical devices // Med. Plastics Biomater. Mag. 1998. V. 3. P. 30-35

95. Middleton J.C., Tipton A.J. Synthetic Biodegradable Polymers as Orthopedic Devices // Biomaterials. 2000. V. 21. P. 2335-2346.

96. Moisted K. Treatment outcome in cleft lipand palate: issues and perspectives // Crit. Rev. Oral. Biol. Med. 1999. V. 10. P. 225-239.

97. Mooney D.J., Powell С., Piana J., Rutherford B. Engineering dental pulp-like tissue in vitro // Biotechnol. Prog. 1996. V. 12. P. 865-868.

98. Morrison G. Advances in the skin trade // Mechanical. Eng. 1999 V. 121. P. 40-43.

99. Nakane K., Hata Y, Morita K., Ogihara Т., Ogata N. Porous Poly(L-lactic acid)/Poly(ethylene glycol) Blend Films Journal of Applied Polymer // Science. 2004. V. 94. P. 965-970.

100. Neumann Т., Hauschka S.D., Sanders J.E. Tissue engineering of skeletal muscle using polymer fiber arrays // Tissue Eng. 2003. V. 9. P. 995-1003.

101. Nieuwenhuis J. Synthesis of Polylactides, Polyglycolides and their Copolymers // Clin. Mater. 1992. V. 10. P. 59-67.

102. Nimni M.E., Harkness R.D. Molecular structures and functions of collagens I I In: Nimni M.E. Collagen: V. I. Biochemistry. 1988. CRC Press. Boca Raton. P. 1-79.

103. Nijenhuis A.J., Grijpma D. W. , Pennings A.J. Lewis acid catalyzed polymerization of L-lactide. Kinetics and mechanism of the bulk polymerization // Macromolecules. 1992. V. 25. P. 6419-6424.

104. Nijenhuis A., Colstee E., Grijpma D.W., Pennings A.J. Synthesis of polylactides, polyglycolides and their copolymers // Polymer 1996. V. 37. P. 58495867.

105. Oakes B. W. Orthopaedic tissue engineering: from labora tory to the clinic // Med. J. Aust. 2004. V. 180. P. 35-38.

106. Okihara Т., Tsuji M., Kawaguchi A., Katayama K.-I., Tsuji H., Hyon S.-H., Ikada Y. Crystal structure of stereocomplex of poly(i--lactide) and poly(D-lactide) // J Macromol Sci Phys. 1991. V. B30. P. 119-140.

107. Ophof Ricardo, Maltha Jaap C., Kuijpers-Jagtman Anne-Marie, Von Den Hoff Johannes W. Evaluation of a Collagen-Glycosaminoglycan Dermal Substitute in the Dog Palate // Tissue Engineering. 2007, November 1, 13(11)

108. Otsuka H., Nagasaki Y., Kataoka K. Surface characterization of functionalizedpolylactid e through the coating with heterobifunctional poly(ethylene glycol)/polylactide block copolymers // Biomacromolecules. 2000. V. 1. P. 39-48.

109. Papadopoulos G.K., Ouzounis C., Eliopoulos E. RGD sequences in several receptor proteins: novel cell adhesion function of receptors? // Int. J. Biol. Macromol. 1998. V.22. P. 51-57.

110. Pashkuleva I., Marques A.P. Surface modification of starch based blends using potassium permanganate-nitric acid system and its effect on the adhesion and proliferation of osteoblast-like cells // J. Mater. Sci. Mater. Med. 2005 V. 16. P. 8192.

111. Penczec S., Duda A., Szymanski R., Biela T. What we have learned in general from cyclic esters polymerization // Macromol. Symp. 2000. V. 153. P. 1-15.

112. Peters M.C., Mooney D.J. Synthetic extracellular matrices for cell transplantation //Mater. Sci. 1997. V. 250. P. 43.

113. Phillips T.J. Biologic skin substitutes // J. Dermatol. Surg. Oncol. 1993. V. 19. P. 794-800.

114. Pomahac В., Svensjo Т., Yao F., Brown H., Eriksson E. Tissue engineering of skin//Crit. Rev. Oral. Biol. Med. 1998. V. 9. P. 333-344.

115. Prockop D.J., Kivirikko K.I. Collagens: molecular biology, diseases, and potentials for therapy//Annu. Rev. Biochem. 1995. V. 64. P. 403-434.

116. Quirk R. A., Chan W. C., Davies M.C., Tendler S. J.B., Shakesheff К. M. Poly(L-lysine)-GRGDS as a biomimetic surface modifier for poly(lactic acid) // Biomaterials. 2001 V. 22. P. 865-872.

117. Quirk R.A., Davies M.C., Tendler S.J.B., Shakeshen K.M. Surface engineering of poly(lactic acid) by entrapment of modifying species // Macromolecules. 2000 V. 33. P. 258-60.

118. Ramos-e-Silva M., Ribeiro de Castro M. New Dressings, Including Tissue-Engineered Living Skin // Clinics in Dermatology. 2002. V. 20. P. 715-723.

119. Ray J.A., Doddi N., Regula D., Williams J.A., Melveger A. Polydioxanone (PDS), a novel monofilament synthetic absorbable suture Surg. Gynecol. & Obstet. 1981. V. 153. P. 497-507.

120. Reed A.M., Gilding D.K. Biodegradable polymers for use surgery-poly(glycolic)/polylactic acid) homeo and copolymers 2. In-vitro degradation // Polymer. 1981. V. 22. P. 494- 504

121. Rheinwald J.G. Serial cultivation of normal human epidermal keratinocytes // Methods in Cell Biology. 1980. V. 21. P. 229 -254.

122. Richter A. W., Akerblom E. Antibodies against polyethylene glycol produced in animals //Int. Arch. Allergy. Appl. Immunol. 1983. V. 70. P. 124.

123. Robert M., Dusser I., Muriel M.P., Noel-Hudson M.S., Aubery M., Wepierre J. Barrier function of reconstructed epidermis at the airliquid interface: influence of dermal cells and extracellular components // Skin Pharmacol. 1997.V. 10. P. 247-260.

124. SaadB., Hirt T.D., Welti M., Uhlschmid G.K., Neuenschwander P., Suter U.W. Development of degradable polyesterurethanes for medical application: in vitro and in vivo evaluations // J. Biomed. Mater. Res. 1997. V. 36. P. 65-74.

125. Salgado A.J., Figueiredo J.E., Coutinho O.P., Reis R.L. Biological response to pre-mineralized starch based scaffolds for bone tissue engineering // J Mater Sci Mater Med. 2005. V. 16. P. 267-275

126. Sato N. Phosphorelay-regulated degradation of the yeast Ssklp response regulator by the ubiquitin-proteasome system // Mol. Cell. Biol. 2003. V. 23. P. 66626671.

127. Schwach G., Coudane J., Engel R., Vert M. Ring opening polymerization of D,L-lactide in the presence of zinc metal and zinc lactate // Polymer international 1999. V. 46 P. 177-182

128. Schwach G., Coudane J., Engel R., Vert M. Influence of polymerization conditions on the hydrolytic degradation poly(D,L-lactide) polymerized in the presence of stannous octoate or zinc metal //Biomaterials. 2002. V. 23. P. 993-1002.

129. Scotchford C.A., CasconeM.G., Downes S., GiustiP. Osteoblast attachement to bioartificial polymers//Biomaterials. 1998. V. 19. P. 1.

130. Sefton M.V., Woodhouse K.A. Tissue engineering // J. Cutan. Med. Surg. 1998. V. 3. P. 1-23.

131. Sethi, K.K; Yannas, I. V; Mudera, V; Eastwood, M; McFarland, C; Brown, R.A. Evidence for sequential utilization of fibronectin, vitronectin, and collagen during fibroblast-mediated collagen contraction // Wound Repair Regen. 2002;10:397-408

132. Shelton R.M., Rasmussen A.C., Davies J.E. Protein adsorption at the interface between charged polymer substrate and migrating osteoblasts 11 Biomaterials. 1988. V. 9. P. 24-29.

133. Shin H.-N., Fang J.-F., Chen J.-H. Reduction in experimental peridural adhesion with adhesion with the use of crosslinked hyaluronate /collagen membrane // J. Biomed. Mater. Res. 2004. V.71B. №2. P. 421-428

134. Sims G. E., Snape Т. J. A method for the estimation of polyethylene glycol in plasma protein fractions I I Anal. Biochem. 1980. V. 107. P. 60-63.

135. Singer I.I., Kawka D. W., Scott S., Mumford R.A., Lark, M. W. The fibonectin cell attachment sequence Arg-Gly-Asp-Ser promotes folcal contact formation during early fibroblast attachment and spreading // J. Cell Biol. 1987. V. 104. P. 573-584.

136. Sittinger M., Lukanoff В., Burmester G.R., Dautzenberg H. Encapsulation of artificial tissues in polyelectrolyte complexes: preliminary studies // Biomaterials. 1996. V. 17. P. 1049-1051.

137. Sittinger M., Bujia J., Rotter N., Reitzel D., Minuth W.W., Burmester G.R. Tissue engineering and autologous transplant formation: practical approaches with resorbable biomaterials and new cell culture techniques // Biomaterials. 1996. V.17. P. 237-242.

138. Sodergard A., Stolt M. Properties of lactic acid based polymers and their, correlation with composition // Prog Polym Sci. 2002. V. 27. P. 1123-1163.

139. Spassky N. Ring-opening polymerization // Rapra Rev Rep. 1995. V. 8 1. P. 129

140. Strom C.S., Michalopoulos G. Collagen as a substrate for cell growth and differentiation //Methods Enzymology. 1982. V. 82. P. 544 555.

141. Sudesh K, Abe H., Doi Y. Synthesis, structure and properties of. polyhydroxyalkanoates: biological polyesters // Progr. Polymer Sci. 2000. V. 25. P. 1503 -1555.

142. Suh H., Hwang Y.S., Lee J.E., Han C.D., Park J. C. Behavior of osteoblasts on a type I atelocollagen grafted ozone oxidized poly(l-lactic acid) membrane // Biomaterials. 2001. V. 22. P. 219.

143. Szycher M. Biostability of polyurethane elastomers // J. Biomater. Appl., 1988, V. 3. № 2. P.297-402.

144. Takada Y., Heinler M. E. The primary structure of the VLA-2/collagen receptor alpha 2 subunit (platelet GPIa): homology to other integrins and the presence of a possible collagen-binding domain. // J. Cell Biol. 1989. V. 109. P. 397-407.

145. Tang Z. G., Black R. A., Curran J. M., Hunt J. A., Rhodes N. P. and Williams D. F. Surface properties and biocompatibility of solvent-cast polyi -caprolactone. films // Biomaterials V. 25, Issue 19, 2004, P. 4741-4748.

146. Tetsuji Y., Yoshiyuki Т., Yoshiharu K. Surface modification of poly(l-lactic acid) film with bioactive materials by a novel direct alkaline treatment process // Jpn. J. Polym. Sci. Technol. 1998. V. 55. P. 328.

147. Tirrell M., Kokkoli E., Biesalski M. The role of surface science in bioengineered materials. // Surface Science. 2002. V. 500. P. 61 83.

148. Ueda M., Ebata K., Kaneda T. In vitro fabrication of bioartiflcial mucosa for reconstruction of oral mucosa: basic research and clinical application // Ann. Plast. Surg. 1991. V. 27. P. 540-549.

149. Ulbrich R., Golbik R., Schellenberger A. Protein, adsorption and leakage in carrier-enzyme systems //Biotechnol. Bioeng. 1991 V. 37. P. 280

150. Veis A., George A. Fundamentals of interstitial collagen self-assembly // Extracellular Matrix Assembly and Function. Academic Press: San Diego. 1994. P. 15-45.

151. Veiling Т., Risteli J., Wennerberg K., Mosher D. F., Johansson S. Polymerization of Type I and III Collagens Is Dependent On Fibronectin and Enhanced By Integrins alpha 11 beta 1 and alpha 2beta 1 // J. Biol. Chem. 2002. V. 277. P. 37377-37381.

152. Vert M., Li S. M., Garreau H. Attempts to map the structure and degradation characteristics of aliphatic polyesters derived from lactic and glycolic acids // J. Biomater. Sci. Polym. Ed. 1994. V. 6. P. 639 649.

153. Viola J., Lai В., Grad O. Abt. Report on The Emergence of Tissue Engineering as a Research Fields //4.0 Development of the Fields. 1987. 2002 -2003.

154. Wijdeveld M.G., Grupping E.M., Kuijpers-Jagtman A.M., Maltha J.C. Growth of the maxilla after soft tissue palatal surgery at different ages in beagle dogs: a longitudinal radiographic study // J. Oral. Maxillofac. Surg. 1988. V. 46. P. 204-20.

155. Wijdeveld M.G., Maltha J.C., Grupping E.M., De Jonge J., Kuijpers- Jagtman A.M. A histological study of tissue response to simulated cleft palate surgery at different ages in beagle dogs // Arch. Oral. Biol. 1991. V. 36. P. 837-843.

156. White D. J., Puranen S., Johnson M. S., Heino J. // Int. J. Biochem. Cell Biol. 2004. V. 36. P. 1405-1410.

157. Wong W. H., Mooney D. J. Synthesis and properties of biodegradable polymers used as synthetic matrices for tissue engineering // Synthetic Biodegradable Polymer Scaffolds. Boston. 1997. P. 51-84.

158. Wright К. A., Nadire К. В., Busto P., Tiibo R., McPherson J. M., Wentworth B. M. Collagen and its use in the treatment of full-thickness bum injury // Burns. 1998. V. 24. P. 7-17.

159. Yang J., Bei J.Z., Wang S.G. Improving cell affinity of poly(d,llactide) film modified by anhydrous ammonia plasma treatment // Polym. Adv. Technol. 2002. V. 13. P. 220-226.

160. Yang J.M, Chen HL, You J W, Hwang J C. Effect of P(/LA-co-SCL) on the compatibility and crystallization behavior of PCL/PLLA blends// Polym. J. 1997. V. 29. P. 657-668

161. Yang J., Bei J., Wang S. Design of high-speed data transmission system based on fiber channel // Polym. Adv. Technol. 2002. V. 13. P. 220-224.

162. Yang J., Bei J.Z., Wang S.G. Improving cell affinity of poly(d,llactide) film modified by anhydrous ammonia plasma treatment // Polym. Adv. Technol. 2002. V. 13. P. 220-226.

163. Ying P., Yu Y., Jin G., Tao Z. Competitive protein adsorption studied with atomic force microscopy and imaging ellipsometry // Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 2003. V. 32. №1. P. 1-10.

164. Younes. H., Cohn D. Phase Separation in Poly(ethylene glycol)/Poly(lactic acid) Blends//Eur. Polym. Mater. 1988. V. 24. P. 765-773.

165. Yui N., Dijkstra P. J., Feijen J. Stereo block copolymers of l- and D-lactides // Makromol Chem. 1990. V. 191. P. 481-488.

166. Zacchi V., Soranzo C., Cmrtivo R., Radice M., Brim P., Abatangelo G. In vitro engineering of human skin-like tissue // J. Biomed. Mater. Res. 1998. V. 40. P. 187194.

167. Zalipsky S. Functionalizedpoly(ethyle ne glycol) for preparation of biological relevant conjugates //Bioconjugate. Chem. 1995. V. 6. P. 150-165.

168. Zdrahala R.J., Zdrahala I.J. Biomedical applications of polyurethanes: a review of past promises, present realities, and a vibrant future // J Biomater. Appl. 1999. V. 14. P. 67-90.

169. Zhu H., Ji J., TanQ., Barbosa M. A., Shen J. Surface Engineering of Poly(DL-lactide) via Electrostatic Self-Assembly of Extracellular Matrix-like Molecules // Вiomacromolecules. 2003. V. 4. P. 378-38

170. Zinn M., Witholt B. Occurrence, synthesis and medical application of bacterial polyhydroxyalkanoate //Adv. Drug. Delivery Rev. 2001. V. 53. P. 5-21.

171. Zoppi R.A., Contant S., Duek E.A.R., Marques F.R., Wada M.L.F., Nunes S.P. Porous poly(L-lactide) films obtained by immersion precipitation process: morphology, phase separation and culture of VERO cells //Polymer. 1999. V. 40. P. 3275-3289.