Криптоспородиоз кур в Саратовской области: Диагностика, эпизоотология, патоморфология тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.19, кандидат ветеринарных наук Колосова, Дарья Михайловна

• Колосова, Дарья Михайловна
• кандидат ветеринарных наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат ветеринарных наук Колосова, Дарья Михайловна

ОГЛАВЛЕНИЕ

1. Введение

2. Обзор литературы

2.1. Определение болезни. Биология и морфология

возбудителя

2.2. Эпизоотология

2.3. Патогенез и патологоанатомические изменения

2.4. Диагностика

2.5 Лечение и профилактика

2.6. Заключение по обзору литературы

3. Собственные исследования

3.1. Объекты, методы и объем исследований

3.2. Результаты собственных исследований

3.2.1. Сравнительная оценка способов обогащения материала

для обнаружения ооцист Cryptosporidium

3.2.2. Усовершенствование метода обогащения материала

для диагностики криптоспоридиоза

3.2.3. Некоторые вопросы эпизоотологии криптоспоридиоза кур

3.2.4. Патоморфологические изменения в органах

и тканях при криптоспоридиозе

3.2.4.1. Патоморфологические изменения в отдельных органах и тканях при

спонтанном криптоспоридозе цыплят

3.2.4.2. Патоморфологические изменения в органах и тканях мышей при экспериментальном

заражении

3.2.5. Патоморфогенез при криптоспоридиозе цыплят

4. Обсуждение полученных результатов

5. Выводы

6. Предложения для практики

7. Список литературы

8. Приложения

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Криптоспородиоз кур в Саратовской области: Диагностика, эпизоотология, патоморфология»

1. ВВЕДЕНИЕ

Птицеводство в большинстве стран переживает мощный подъем вследствие ряда причин. Основные из них состоят в способности птицы к наивысшей конверсии корма при ее хорошей приспособляемости к промышленным условиям содержания, а также в высоких диетических качествах продуктов отрасли - большом содержании белка при низких калорийности и уровне холестерина.

Основное внимание уделяется производству мяса птицы, которое за последние тридцать лет увеличилось с 11,7 до 41,1 млн т., или на 250%. Рост производства яиц за эти годы составил 140%. Высокие темпы были характерны для развивающихся стран.

К сожалению, во всех без исключения суверенных государствах, входивших ранее в качестве союзных республик в СССР, наметилась негативная тенденция к снижению производства продукции птицеводства. Однако без сомнения, это явление временное, отрасль располагает всеми возможностями для наращивания выпуска продукции, нужна стабильная государственная поддержка (В.И. Фисинин, 1993).

В таких тяжелых условиях в целях экономии следует уделять особое внимание таким факторам как организация производства, соблюдение передовой технологии, использование достижений науки в селекции, кормлении, ветеринарной защите поголовья птицы от заболеваний.

Эпизоотическая обстановка в птицехозяйствах России продолжает оставаться сложной и неустойчивой. Так, по итогам 1994 г. сохранность взрослой птицы находилась на уровне 91%, молодняка - 84%. Экономический ущерб от падежа птицы составил 125 млрд. руб. Падение уровня кормления и ухудшение условий содержания привело к снижению резистентности и повышению заболеваемости птицы (Н.В. Кожемяка, 1995).

На этом фоне наблюдается повышение роли условно-патогенных возбудителей в возникновении заболеваний птицы. В частности, иммуно-депрессия является основным предрасполагающим фактором к крипто-споридиозу, который вызывает патоген оппортунистической природы.

В 1907 году Тиццер впервые на гистологических срезах желудочных желез мыши обнаружил паразита, который имел большое сходство с кокцидиями, хотя и оказался непатогенным. Паразит получил название Ciyptosporidium mûris. Позднее в тонкой кишке мыши был выявлен другой вид - С. parvum. Ооцисты, выделявшиеся во внешнюю среду с фекалиями, содержали только четыре голых спорозоита, не заключенных в спороцис1у. Именно отсутствие (-скрытость, от латинского слова crypto) спороцист (спор) в таких ооциетах и послужило основой родового названия паразита. Позднее Cryptosporidium был найден в слепых отростках кишечника и в тонкой кишке кролика (Т.В. Бейер, 1986).

Паразит имел не только ооцисту необычной структуры (4 спорозоита), но обладал уникальной локализацией на поверхности эпителиальных клеток. Он считался непатогенным, а потому почти на протяжении 70 лет не привлекал внимания исследователей (Т.В. Бейер, 1986).

Одна из неожиданных трудностей в изучении криптоспоридиоза состояла в том, что долгое время не удавалось выявить у возбудителя стадию ооцисты, то есть наиболее доступную стадию развития всех других кокцидий. Описанная Тиццером структура ооцисты Cryptosporidium не укладывалась в рамки обычных представлений, так как до того ооцисты с числом спорозоитов меньше восьми не были описаны. Исключительно мелкие размеры таких ооцист (3-5 мкм в диаметре) делали их доступными глазу исследователя только при использовании иммерсионной системы микроскопа. Вот почему вплоть до конца 70-х годов идентификация паразита осуществлялась только на основании обнаружения на поверхности

эпителиальных клеток возбудителя на эндогенных стадиях развития (Т.В. Бейер, 1986).

До 1975 г. в литературе было несколько сообщений по Cryptosporidium, в которых описывали заражение животных восьми видов. Исследователи считали, что они не вызывают клинических признаков. Даже в тех случаях, когда клинические симптомы болезни четко проявлялись, их словно не замечали (Т.В. Бейер, 1986).

В дальнейшем появилась целая серия публикаций, в которых клиническое проявление болезни, включая в первую очередь диарею, было описано у новорожденных 4-10-дневных телят. При этом регистрировали как чистую моноинфекцию, так и инвазию в комбинации с кишечными

В течение 1975-1998 годов появилось значительное количество работ, посвященных изучению криптоспоридий. За это время принципиально изменилось само представление о криптоспоридиозе: от понимания его как редкой и весьма бессимптомной инвазии до признания важной причиной энтеритов и диареи у многих видов животных (Бейер Т.В., 1986). Криптоспоридиоз кур приносит ощутимый экономический ущерб. Даже в хороших условиях содержания бройлеры за период болезни снижают прирост массы тела на 7-20 %, хуже используют питательные вещества корма. Убойная масса цыплят снижается на 100-150 г (Никитин В., Павласек И., 1989). Смертность составляет 4,8% (Т.В. Бейер с соавт., 1987).

В натоящее время, несмотря на наличие большого количества публикаций в отечественной и зарубежной литературе вопросы диагностики, эпизоотологии и борьбы с криптоспоридиозом изучены недостаточно.

Цель и задачи исследований

Целью нашей работы явилось изучение распространения и эпизоотологии криптоспоридиоза кур, а также патоморфологическихизмене-ний, вызванных криптоспоридиями.

В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. Изучить эффективность методов диагностики криптоспоридиоза и дать им сравнительную оценку.

2. Изучить распространенность криптоспоридиоза в птицеводческих хозяйствах Саратовской области.

3. Определить значение величин интенсивности, экстенсивности, пика инвазии в зависимости от условий содержания, возраста птицы и сезона года.

4. Изучить патоморфологию изменений в органах и тканях, а также патоморфогенез поражений кишечника спонтанно зараженных цыплят.

Научная новизна исследований

Впервые проведено диагностическое обследование птицеводческих хозяйств Саратовской области на наличие криптоепоридий и выявлен возбудитель - Сгур1озрог1с11шп ше1еа§псНз.

Определены интенсивность, экстенсивность, пик инвазии в зависимости от возраста птицы, сезона года и условий содержания.

Усовершенствован метод обогащения проб помета для диагностики криптоспоридиоза.

Показана восприимчивость беспородных белых мышей к Сгур1о-эрондшт теЬа^п&Б. Изучены патоморфологические изменения в кишечнике и других органах мышей. Расшифровка патоморфологических изменений в динамике болезни позволила расширить существующие представления о патоморфогенезе криптоспоридиоза у цыплят.

Практическая целость работы

Оценка методов лабораторной диагностики криптоспоридиоза дала возможность сравнивать результаты, полученные различными исследователями. Предложенный нами усовершенствованный метод лабораторной диагностики позволяет с большой достоверностью ставить диагноз на криптоспоридиоз.

Материалы исследования опубликованы в информационном листке Саратовского ЦНТИ (1998 г., № 220). Получено решение о выдаче патента на изобретение "Способ исследования проб фекалий для диагностики криптоспоридиоза" (№ 97101102 от 31 января 1997 г).

Данные, полученные в результате исследований позволяют оценить эпизоотическую ситуацию по криптоспоридиозу птиц в птицеводческих хозяйствах Саратовской области. Определена роль яичной скорлупы в первичном заражении цыплят.

Установлено, что белые мыши могут быть использованы в качестве экспериментальной модели для изучения криптоспоридиоза кур.

Результаты исследования патоморфологических изменений в организме цыплят при криптоспоридиозе, а также сформированное на их основе представление о патогенезе криптоспоридиоза рекомендуется использовать в лекциях по курсу «паразитология» в вузах и техникумах и в переиздаваемых учебниках по паразитологии и патологической анатомии животных.

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены и обсуждены:

• на Международном координационном совещании "Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии животных" 19-23 мая 1997 г. Воронеж;

• на Международной научной конференции, посвященной 125-летию Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. НЭ. Баумана 28-30 мая 1998 г.;

• на научной конференции "Молодежь и наука на пороге XXI века" 4-5 апреля 1998, СГУ, Саратов;

•на научной конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов СГАУ им. Н.И. Вавилова по итогам научно-исследовательской и учебно-методической работы за 1998 г. 1-6 февраля 1999 г.

• на межкафедральном совещании института ветеринарной медицины и биотехнологии Саратовского государственного аграрного университета (г. Саратов, май 1999 г.).

Публикация результатов исследования

По материалам диссертации опубликовано 10 работ, в которых изложено основное ее содержание.

Объем и структура диссертации

Работа состоит из введения, глав, в которых дан обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, представлены выводы и практические предложения. Диссертация изложена на 140 с. машинописного текста, проиллюстрирована 11 таблицами и 32 рисунками. Список литературы включает 145 источников, в том числе 82 иностранных.

Основные положения выносимые на защиту:

- данные об эффективности методов диагностики криптоспоридиоза и и х сравнительная оценка.

- данные о распространенности криптоспоридиоза в птицеводческих хозяйствах Саратовской области.

- значения величин интенсивности, экстенсивности, пика инвазии в зависимости от условий содержания, возраста птицы и сезона года.

- данные о патоморфологических изменениях в органах и тканях, а также патоморфогенез поражений кишечника спонтанно зараженных цыплят.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1. Определение болезни.

Биология и морфология возбудителя

Криптоспоридиоз - паразитарное заболевание позвоночных животных и человека. Болезнь обычно протекает в форме гастроэнтерита, при котором нарушается всасывательная функция кишечника и нередко происходит значительное обезвоживание организма больного. Иногда возможно и бессимптомное течение инвазии. Возбудители криптоспоридио-за - паразитические простейшие (кокцидии) рода Cryptosporidium (Т.В. Бейер с соавт.,1987; Т.В. Бейер, 1986; Т.В. Бейер, Н.В. Сидоренко, 1988; РА. Романюк,1995; В. Никитин, И. Павласек, 1989; M.-L. Penrith, W.P. Burger, 1993; В.Ф. Крылов, А.В. Лизоркин,1989; R. Chermette, Boufassa-Ouzrout S., 1988; Т.В. Бейер с соавт.,1990). Криптоспоридиоз поражает животных различных половозрастных групп, однако молодняк бывает заражен значительно чаще (Т.В. Бейер с соавт.,1987). Течение болезни усугубляется при любом нарушении иммунного статуса организма (Т.В. Бейер с соавт., 1987). Криптоспоридии относятся к типу Apicomplexa, классу Sporozoa, подклассу Coccidia, отряду Eucoeeidiidae, подотряду Eimerina, семейству Cryptosporidiidae, роду Cryptosporidium (Т.В. Бейер с соавт., 1987А). Их развитие протекает по схеме гомоксенного жизненного цикла кокцидий, то есть полное развитие паразита происходит в организме одного хозяина (животного или человека) и завершается выделением с фекалиями ооцист, устойчивых к действию неблагоприятных факторов и способных длительно сохраняться во внешней среде, не теряя инвазионных свойств (Т.В. Бейер с соавт.,1987). Ооцисты теряют инвази-рующую способность при температурах выше 72,4°С или при выдерживании при температуре 64,2°С в течение 2 мин и более (R. Fayer, 1994).

У птиц описано два вида Cryptosporidium - Cr. baileyi и Сг. meleagridis. Ооцисты Cryptosporidium meleagridis овальные, тонкостенные, 4,5 х 4 мкм (Т.В. Бейер с соавт.,1987; I.-C, Petithoiy et al.,1994; Я.П. Лит-винский, 1992; Г.О. Гаибова с соавт., 1996). Спороцисты отсутствуют, 4 спорозоита лежат в ооцисте. Эндогенные стадии локализуются в тонкой кишке, иногда в респираторных органах (М.В. Крылов, 1996). Неспору-лированные ооцисты Cr. baileyi 7,2-6,0 х 5,4-4,8 (6,3 х 5,2) мкм. Ооцисты в свежевыделенных feces полностью спорулировавшие, овоидные 6,3-5,6 х 4,8-4,5 (6,2 х 4,6) мкм, индекс формы (длина/ширина) 1,2-1,4 (1,4). Стенка ооцист гладкая, бесцветная, состоит из одного слоя около 0,5 мкм толщиной. Еле заметный продольный шов тянется от одного из полюсов ооцисты по каждой стороне на одну треть длины ооцисты. Микропиле и светопреломляющие гранулы отсутствуют. Остаточное тело в ооцисте большое 4,5-3 х 3,6-2,7 (3,6 х 3,3) мкм, рядом с центром в остаточном теле имеется овоидная светопреломляющая гранула 2,5-1,2 х 2,0-1,2 (1,8 х 1,5) мкм.

В ооцисте четыре спорозоита червеобразной формы 6,3-5,4 х 1,2-1 (5,8 х 1,1) мкм каждый. У естественно инвазированных цыплят все стадии развития паразита обнаруживаются главным образом в области микроворсинок энтероцитов, фабрициевой сумки и клоаки. Временами этот вид инвазирует область микроворсинок эпителиальных клеток синуса и трахеи, а также эпителиальных клеток конъюнктивы (М.В. Крылов, 1996). Заражение происходит при заглатывании ооцист животными с пищей и водой.

В организме хозяина Cryptosporidium sp. локализуются необычно -внутри клетки, но вне цитоплазмы (в экстрацитоплазматической парази-тофорной вакуоли). Наблюдаемая локализация Cryptosporidium sp. принципиально отличает криптоспоридий от других кишечных кокцидий,

в том числе и от Epieimeria, эндогенные стадии развития которых визуально также возвышаются над уровнем щеточно-каемного компартмента энтероцитов. В отличии от Epieimeria, Eimeria, Isospora и других кишечных эймериидных кокцидий, растущие трофозоиты Cryptosporidium sp. осуществляют процесс питания с помощью мультимембранной питающей органеллы, а не микропоры (Н.В. Сидоренко, 1996; Н.В. Свежова, 1996). Выход спорозоитов из ооцист происходит в разных отделах кишечника уже через 2-4 часа после заражения и через 6 ч в кишечнике уже не обнаруживаются. Трофозоиты размером 3,16 мкм появляются в области микроворсинок энтероцитов тонкого кишечника через 6 часов после заражения, зрелые мерозоиты (4,61 X 3,96 мкм) с восьмью мерозоитами начинают выявляться в области микроворсинок тонкого кишечника через 12 ч после заражения. В прямой кишке в области микроворсинок трофозоиты и зрелые меронты появляются через 48 ч. Через 54 ч после заражения в области микроворсинок тонкого кишечника и прямой кишки появляются микрогамонты (3,41 X 3,30 мкм) с 16-ю микрогаметами. Выделившиеся микрогаметы (0,872 X 0,452 мкм) проникают в макрогаметы (4,61 X 4,35 мкм), образуя зиготы. Неепорулированные ооцисты с толстыми стенками впервые отмечают через 72 ч после заражения (Zha Hongho, Jiang Jiang Jinshu, 1994). В спорулированных ооцистах Cryptosporidium выявлено по 4 спорозоита и по одному остаточному телу (Zhao Ja-Rong et al., 1993).

Процесс проникновения эксциетированных спорозоитов можно условно разделить на два этапа. На первом этапе паразит оказывает ферментативное воздействие на мембрану клетки хозяина, на втором активно внедряется через мембрану внутрь клетки. Важным условием проникновения является , по-видимому, секретирование роптриями и микронемами вещества, которое каким-то образом наносит химическое повреждающее действие на мембрану клетки хозяина. Успешному проникновению пара-

зита в клетку хозяина способствует коноид, который, как известно, может выпячиваться, образуя стреловидный выступ - протуберанец, и механически повреждать им мембрану клетки хозяина. В момент внедрения зоита в клетку хозяина тело паразита сильно сжимается и как бы сплющивается (Т.В. Бейер с соавт., 1978).

Процесс развития от попадания ооциеты в организм хозяина до выделения ооцист нового поколения у Cryptosporidium занимает 3-7 дней (Т.А. Шибалова, И.И. Бочкарев, 1996; В. Никитин, И. Павласек, 1989; Т.В. Бейер с соавт., 1987; Т.В. Бейер с соавт., 1987Б; Н.В. Сидоренко, 1996). Инкубационный период составляет 3 дня, а длительность острого заболевания от 4 до 18 дней (Zha Hongho, Jiang Jiang Jinsku,1994). Выделение ооцист продолжается 10-25 дней и более (В. Никитин, И. Павласек, 1989).

У патогенов оппортунистической природы решающее значение имеет феномен персистирования, то есть способность проживать в течение долгого времени в организме хозяина (не теряя инвазионности) внутри крупных структурных формирований (цист). У Cryptosporidium parvum персистирование связано со способностью бесполых генераций к рециклированию. В отличие от неоппортунистических агентов персиети-рующие (спящие) стадии возбудителей оппортунистических инфекций обладают потенциями бесполых (недифференцированных) клеток, готовых начать бурную пролиферацию в условиях иммунодефицита хозяина (Т.В.Бейер, 1996).

Не все сформировавшиеся ооциеты выделяются во внешнюю среду - часть ооцист с тонкими оболочками могут вызывать аутоинвазию макроорганизма, обусловливая тем самым хроническое течение крипто-споридиоза(Т.В. Бейер, 1996). Однако при исследовании (Zha Hongho, Jiang Jiang Jinshu, 1994) тонкостенных ооцист не удалось обнаружить. В

настоящее время проводятся разносторонние исследования электронно-микроскопического строения, белкового, ферментного и антигенного состава, генетических свойств эндо- и экзогенных стадий Ciyptosporidium sp. (И.В. Касаткина с соавт.,1996; C.B. Свежова, 1996; Н.В. Сидоренко, 1992; Gut Jiri et al., 1992; Kim Kami et al., 1992; Borrnin et al., 1991; M. Tilley, S.J. Upton, 1990; J.M. Bjomeby et al., 1990; Zhao Ya-Rong et al., 1993; Zha Hongho, Jiang Jiang Jinsku, 1994). Эти исследования позволяют более полно расшифровать отношения между паразитом и хозяином и, таким образом, являются основой для разработки эффективной борьбы с инвазией.

2.2. Эпизоотология

Изучение криптоспоридиоза животных и человека проводилось во многих странах мира. Спонтанный криптоспоридиоз был обнаружен в Азербайджане (Гаибова Г.Д. с соавт.,1996), Греции (Minas A. et al., 1993; Papadopouíou С. et al., 1988), Польше (Kozakiewiez В. et al., 1988), России (Никитин В., Павласек И., 1989; Романюк Р.А., 1991; Романюк Р.А., 1995; Бочкарев И.И., 1989; Марышева C.B., 1990; Пашкин П.И. с соавт., 1988; Лаковникова Е.В., 1989; Лоскот В.И. с соавт., 1989; Небайкина Л.А., 1995; Шибалова Т.А. с соавт, 1992; Романова Т.В. с соавт, 1992), США (Muirhead S., 1986; Coleman S.U. et al., 1989), Чехословакии (Korinek I., Chroust К., 1988), ЮАР (Pentith M.-L., Burger W.P., 1993).

В США в шт. Алабама еженедельно гибнет от криптоспоридиоза 25 тысяч бройлеров (Muirhead S., 1986).

В России криптоспоридиоз был обнаружен в Ленинградской (Романюк Р.А., 1995; Пашкин П.И. с соавт., 1988; Лаковникова Е.В.,1989; Воронов А.Н., Лоскот В.И., 1996; Лоскот В.И. с соавт., 1989; Шибалова Т.А. с соавт., 1992), Московской (Романюк Р.А.,1995), Нижегородской (Романова Т.В. с соавт., 1992), Свердловской (Марышева C.B., 1990) об-

ластях, Якутии (Бочкарев И.И.,1989; Бочкарев И.PL, Шибалова ТА., 1996), Мордовии (Небайкина Л.А.,1995) и Башкирии (Тайчинов У.Г.,1996А). Имеются также сообщения об обследованиях хозяйств, в которых паразиты обнаружены не были (Крылов В.Ф., Лизоркин А.В.,1989).

В последнее время в мире отмечаются вспышки криптоепоридиоза среди людей (Levy M.G. et al., 1988; Бейер Т.В. с соавт.,1990; Дельфин М. с еоавт.,1989; Романова Т.В., Шкарин В.В.,1991; Joseph С. et al.,1991; Richardson A.J. et al.,1991; Joce R.E. et al.,1991; Chen J.-G. et al.,1992; Garsia P., Gastano M.,1991). Наибольшее их количество, по данным литературы, было зарегистрировано в Великобритании (Jeffeiy J., 1991; Richardson A.J. et al., 1991). В связи с этим актуальное значение имеют вопросы механизма передачи и, в частности, возможной передачи возбудителя от животных человеку.

Описано 20 видов Cryptosporidium (Бейер Т.В.,1986). Случаи заражения ооцистами от телят других животных - ягнят, свиней и крыс, позволяют предположить наличие у криптоспоридий широкой специфичности (Бейер Т.В.,1986; Дубровский Ю.А. с соавт., 1994; Zosson В., 1989). Так, Ю.В. Дубровский с соавт. (1994) считают, что криптоспоридии не имеют специфических связей с какой-нибудь одной таксономической или экологической группой животных. Пораженность самых разнообразных видов диких млекопитающих лесной зоны, а также всех "домашних" видов криптоспоридиями свидетельствует о высокой надежности механизмов передачи ооцист, об их высокой выживаемости во внешней среде. Со стороны природных очагов криптоепоридиоза происходит постоянная поддержка очагов на сельскохозяйственных и домашних животных, от которых идет основной путь заражения людей в сельской местности.

Роль сельскохозяйственных животных в инвазировании людей и продуктов животноводства (молока) подтверждается случаями крипто-споридиоза у рабочих, имеющих профессиональные контакты с животными и у лиц, употребляющих сырое молоко (Романова Т.В. с соавт., 1992; Романова Т.В., Шкарин В.В., 1991). Пораженность этой категории населения составляет 2,7%. Однако, возможные контакты с животными установлены лишь у 7 из 59 больных, при этом при обследовании животных ооциеты не найдены (Романова Т.В. с соавт., 1992).

Изучение морфологии (Бейер Т.В., Сидоренко Н.В.,1993; Литвин-ский Я.П.,1992), ферментов Сщ^овропёшт (Awad ЕХ. е1 а1., 1995) и поведения изолятов от одних животных в других показало, что роль перекрестного заражения в возникновении клинически выраженного крипто-споридиоза незначительна (Роио Е. е1 а1.,1992). То есть у человека и животных существуют различные циклы передачи СзурЮзропёшт зр.

Зоонозный цикл передачи включает в себя источник инвазии, механизм передачи возбудителя и восприимчивых животных. Источником инвазии являются зараженные животные, клинически больные и без признаков криптоспоридиоза, выделяющие ооциеты. Ооциеты спорулируют в организме животных, то есть еще до выделения во внешнюю среду. В связи с этим заражение новых животных может происходить сразу после заглатывания ооцист (например, как и при заражении саркоспоридиями), то есть минуя период споруляции во внешней среде, что характерно для других кокцидий (Бейер Т.В. с соавт., 1987). Взрослые иммунокомпетент-ные животные, как правило, не болеют (Бейер Т.В. с соавт., 1987А; Бейер Т.В. с соавт., 1987Б). У взрослой птицы болезнь протекает бессимптомно, она является паразитоносителем (Крылов В.Ф., Лизоркин А.В.,1989).

Препатентный период продолжается 5 дней, период максимального выделения ооцист отмечали с 9-го по 16-й день после заражения, длитель-

ность патентного периода составила 31 день (Салтанова Н.П. с соавт., 1991).

Выделение ооцист у кур наблюдалось в 33-45-дневном возрасте при напольном и в 41-52 дня при клеточном содержании (Романкж РА., 1991; Романюк РА., 1995).

Паразиты очень устойчивы и сохраняют жизнеспособность в течение 18 часов в 3% растворе крезиловой кислоты, 5% растворе гипохлори-та кальция, 0,02М растворе натрия хлорида, 4% растворе йодоформа, но погибают после воздействия на них в течение 18 часов 10% формалина и 5% аммиака. В пробах фекалий ооцисты сохраняют жизнеспособность в течение 4-16 мес. (Бейер Т.В. с соавт., 1987).

Обнаружение ооцист криптоепоридий в соскобах из клеток, смывах с дезковриков и обуви обслуживающего персонала (Лоскот В.Н. с соавт., 1989), в воде из поилок, корме, подстилке (Шибалова ГА. с соавт., 1992) свидетельствует, что передача возбудителя может осуществляться через предметы ухода за животными и животноводческие помещения.

Возбудитель был также обнаружен в пробах фекалий из различных участков навозохранилища (Лоскот В.Н. с соавт., 1989), что представляет угрозу заражения окружающей среды ооцистами Cryptosporidium.

Среди путей передачи возбудителя в последнее время наибольшее значение придается водному пути передачи (Microbiologists meet do defeat waterbome parasite, 1989; Naciri M.,1992). Ооцисты были обнаружены в поверхностных и грунтовых водах (Martin A.M. et al.,1992; Gornik V., Exnor M.,1991; Gomik V., Exnor M., 1991 А). Установлена связь некоторых вспышек криптоспоридиоза среди людей с местной питьевой водой (Martin A.M. et al.,1992; Jeffery J.,1991; Joseph C. et al.,1991; Richardson A.I. et al.,1991; Joce R.E. et al.,1991). Разрабатываются методы выявления, идентификации и определения жизнеспособности ооцист криптоепоридий

в воде, так как существующие в настоящее время недостаточно эффективны (Martin A.M. et al.,1992; Jeffeiy J.,1991; Gornik V., Exnor M.,1991; Gornik V., Exnor M.,1991 A).

Современные системы очистки воды не обеспечивают надежной защиты водопотребителей от заражения криптоспориднями. В Великобритании в неочищенной воде ооцисты обнаруживались в 10% проб, а после глубокой очистки фильтрацией в 7% (Humphreys S.W., Smith H.V.,1994).

Установлено, что молодняк всех видов сельскохозяйственных животных заражен криптоспоридиями в различной степени (Якубовский М.В. с соавт., 1992). Криптоспоридиоз птиц чаще регистрируют у кур, индеек и перепелов (Никитин В., Павласек И., 1989; Крылов В.Ф., Лизоркин A.B., 1989; Романюк P.A., 1995; Muirhtard S., 1986; Zha Hongho, Jiang Jiang Jinsku, 1994). Более восприимчивы животные с ослабленной иммунной системой, что подтверждается экспериментами на иммунодепреесивных животных (McDonald V., Bancroft G.I., 1994; Kuhls T.L. et al., 1994; Jang Shiguang, Healey Malk, 1994;Darban Hamid et al., 1993) и преимущественным возникновением спонтанного криптоспоридиоза у животных раннего возраста, иммунная система которых еще не достаточно сформирована (P.A. Романюк, 1995; P.A. Романюк, 1991; Т.В. Бейер с соавт., 1990; Дельфин М. с соавт., 1989; Якубовский М.В. с соавт., 1991; Т.В. Бейер с соавт., 1987А; Т.В. Бейер, 1986; Т.В. Бейер, Н.В. Сидоренко, 1988; M.-L. Penrith, W.P. Burger, 1993; R. Chermette, 1988; H.V. Smith, 1993; A. Adamezewska, 1992 ). С возрастом хозяина происходит созревание и его иммунной системы, и это служит защитой против криптоспоридий (Т.В. Бейер, Н.В. Сидоренко, 1988).

Интенсивнее и чаще (до 100% обследованных) заражен молодняк с 43-44-дневного возраста в птичниках с напольным содержанием, нередко

встречаются больные особи и в клетках (до 67% обследованных) (В. Никитин, И. Павласек, 1989). Ооцисты находили в смывах с клоаки с 27 по 45, а в смьюах с глотки с 36 по 47 сутки откорма. Максимальная пора-женноеть у цыплят наблюдалась в 39-суточном возрасте и составляла 51,3% (клоакально-бурсальная форма) и 33,3% (респираторная форма). При клеточном содержании ооцисты криптоспоридий были обнаружены у 38-52-еуточных цыплят. Экстенсивность инвазии составляла от 5 до 67,5%. Наиболее высокую степень зараженности наблюдали у 41-еуточных цыплят с респираторной формой (6 ооцист в поле зрения микроскопа). Максимальное их выделение отмечается на 44 сутки, экстенсивность инвазии составила 81,2% (РА. Романюк, 1995).

Интенсивность инвазии наиболее точно можно определить посмертно по окрашенным гистопрепаратам. Оценивают интенсивность инвазии по следующей шкале (F. Sterba, Y.K. Suleova, 1988): + (слабая, наличие отдельных криптоспоридий); ++ (умеренная, наличие многочисленных криптоспоридий

и их скоплений); +++ (сильная, поверхности ворсинок покрыты сплошным слоем простейших).

Прижизненно интенсивность инвазии оценивают по количеству ооцист в поле зрения микроскопа (P.A. Романюк, 1995): + (слабая, одна ооциста); ++ (средняя, две ооцисты); +++ (сильная, три и более ооцист в поле зрения). В Ленинградской области наибольшую интенсивность инвазии (+++) наблюдали у 31-40-дневных цыплят при напольном содержании.

2.3. Патогенез и патологоанатомические изменения

Иммунодепрессия является основным предрасполагающим к крип-тоспоридиозу фактором. У животных с нормальной деятельностью иммунной системы наблюдается самоизлечение (Zu S.-X. et al., 1992).

Предполагают, что криптоспоридии попадают в незащищенные гликокалексом клетки кишечника (48 часов после рождения)(Минеева Т.И., 1975; Костенко П.А., 1992; Лаковникова Е.В., Кондратьева М.А., 1988).

Серьезную роль в иммунитете играют Т-лимфоциты с фенотипом CD84, особенно с фенотипом CD84+ (Rose Е., 1992; McDonald V. et al., 1992; McDonald V., Bancroft G.I., 1994; Zu S.-X. et al., 1992; Ungar Beth L.P. et al., 1991). Эти клетки играют ведущую роль на ранней стадии развития инвазии и/или в ранние сроки после иммунизации (Rose Е.,1992). In vitro в ответ на антиген криптоспоридий наблюдается пролиферация клеток CD4+ и продукция ими у-интерферона (Harp J. A. et aL, 1994). Совместное введение моноклональных антител к CD4+ и у-интерферону зараженным криптоспоридиозом иммунодепрессивным мышам приводило к развитию хронической инвазии и усилению экскреции ооцист. Антиин-терфероновые моноклональные антитела при введении бестимусным мышам вызывали увеличение экскреции ооцист в 75 раз (Ungar Beth L.P. et al., 1991).

Антитела эффективны против внеклеточных паразитов и могут играть сопутствующую, но необязательную роль в иммунитете (Rose Е., 1992; Zu S.-X. et al., 1992). Отмечается постепенное повышение титров антител за период с 1 до 3-го мес. жизни экспериментально зараженных телят (Mosier Derek A. et al., 1992).

Переболевание криптоспоридиозом, в свою очередь, способствует снижению иммунного статуса животных (Салганова Н.П. с соавт., 1991).

Это особенно четко прослеживается у птиц, так как у них криптоспори-диозом поражается фабрициева сумка - главный орган иммунной защиты (Бейер Т.В. с соавт., 1987А; Крылов В.Ф., Лизоркин A.B., 1989; Никитин В., Павласек И., 1989; Шибалова Т.А. с соавт., 1992;Goodwin М.А., Brown J., 1989; Tarano H. et al., 1992). Угнетение гуморального и клеточного иммунного ответа коррелирует с дозой инвазионного материала (Салтанова Н.П. с соавт., 1991). Отмечается повышение восприимчивости птиц к другим болезням (Muirhead S., 1986). При спонтанном криптоспо-ридиозе в некоторых случаях от больных животных удавалось выделить возбудителей других болезней или измененную условно-патогенную микрофлору (Никитин В., Павласек И., 1989; Лаковникова Е.В., Кондратьева М.А., 1988; Stephan Н.,1989; Levy M.G. et al., 1988; Goodwin M.A., 1988).

Н.П. Салтановой с соавт. (1991) установлено, что паразитирование криптоспоридий в организме птицы вызывает нарушение иммунологического гомеостаза цыплят, которое выражалось сдвигами в Т- и В-системах лимфоцитов при развитии патологического процесса.

Количество лейкоцитов в периферической крови увеличивалось у незараженных цыплят до 14-дневного возраста, а затем относительно стабилизировалось, что свидетельствует о возрастных особенностях картины крови птиц (Салтанова Н.П. с соавт., 1991).

В процессе переболевания цыплят криптоспоридиозом у них происходит иммунологическая перестройка организма, которая выражается в увеличении общего количества лейкоцитов, абсолютного содержания лимфоцитов (Салтанова Н.П. с соавт., 1991).

Введение животным, в опытах на мышах иммуномодулирующих веществ (тимозина, тимомодулина, гидрокортизона, аминогуанидина) не оказывало какого-либо влияния на течение инвазии (Kuhls T.L. et al., 1994; Koudela В., Hermanek I., 1993; Darban H. et al., 1993).

Имеется сообщение о нейтрализации спорозоитов криптоспоридий молозивом гипериммунизированных коров и предотвращении заражения мышей ооцистами паразита (Fayer R. et ah, 1989). У детей, вскормленных материнским молоком, отмечается более низкая интенсивность инвазии, чем у искусственно вскормленных (9% и 28% соответственно) (Бейер Т.В. с соавт., 1987). В условиях хозяйств разницы в интенсивности инвазии между подсосными телятами и телятами, не получавшими молозива, не наблюдали (Бейер Т.В. с соавт., 1987А; Марышева C.B., 1990).

У большинства животных криптоспоридии поражают преимущественно кишечник (Марышева C.B. 1990; Пашкин П.И. с соавт., 1988; Лаковникова Е.В., 1989; Небайкина Л.А., 1995; Бейер Т.В. с соавт., 1987А; Бейер Т.В., Сидоренко Н.В., 1988; Minas A. et al., 1993; Coleman S.U. et al., 1989; Thamsborg S.M., 1990; Korinek I., Chroust К., 1988; Kozakiewiez В. et al., 1988). Наиболее часто криптоспоридии локализуются в микроворсинках тонкого отдела кишечника. У животных первых дней жизни поражается весь кишечник, включая верхние отделы, при заражении в более старшем возрасте поражается только нижний отдел тонкого кишечника. Изменения в подвздошной кишке заключаются в укорочении ворсинок и их слипании, а также в процессах инфильтрации поли-морфонуклеарными нейтрофилами, мононуклеарными клетками, в том числе и лимфоцитами, а также небольшим количеством эозинофилов (Бейер Т.В. с соавт., 1987А; Никитин В., Павласек И., 1989; Романюк Р.А., 1995; Kim C.W. et al., 1988; Tarano Hirochi et al., 1992). Инвазированные различными стадиями развития паразита эпителиальные клетки кишечника подвергаются дегенерации и цитолизу (Kim C.W. et al., 1988).

Отмечается ослабление активности ферментов на границе щетинча-того слоя. Патогенез и механизмы, лежащие в основе диареи, до конца не выяснены (Zu S.-X. et al., 1992). Мало известно и о характере воздействия

на макроорганизм метаболитов и токсинов, вырабатываемых паразитами (Бейер Т.В. с еоавт., 1987). Способность продуцировать токсические вещества у криптоепоридий пока не обнаружена (Бейер Т.В. с соавт., 1987).

Более многообразны поражения внутренних органов и тканей при криптоспоридиозе птиц. У них кроме эпителия тонкого отдела кишечника поражаются слизистые оболочки фабрициевой сумки, слепых отростков кишок, ободочной кишки, клоаки и очень часто дыхательные пути, а также конъюнктива глаз, носовая полость, слюнные железы, почки (Бейер Т.В. с соавт., 1987; Tarano Hirochi et al., 1992; Goodwin M.A., Brown I., 1988; Muirhead S., 1989). Встречается одновременное поражение этих органов (Романюк P.A., 1995), либо преимущественное поражение дыхательных путей или кишечника с преобладанием соответствующих симптомов (Крылов В.Ф., Лизоркин A.B., 1989; Никитин В., Павласек И., 1989; Романюк P.A., 1991; Романюк P.A., 1995; Tarano Hirochi et al., 1992; Muirhead S., 1986; Penrith M.-L., Burger W.P., 1993; Smith H.V. et al., 1993).

У павшей птицы тусклое оперение, бледные слизистые оболочки, запавшие глаза. Она истощена. При вскрытии обнаруживают воспаление различной степени (преимущественно катаральное) в местах паразитиро-вания возбудителя, прежде всего в кишечнике, и серозное воспаление легких (Никитин В., Павласек И., 1989).

Криптоспоридии у птиц паразитируют в нижнем отделе кишечника, клоаке, фабрициевой сумке, в респираторных органах и возможна генерализованная форма болезни. Фабрициева сумка у птиц служит источником разнообразных клонов B-клеток и снабжает ими весь организм в первые месяцы жизни. Развитие криптоепоридий в этом лимфоидном органе нарушает его структуру и функцию, что, безусловно, влияет на иммунный ответ (Салтанова Н.П. с соавт., 1991).

Макроскопически во внутренних органах павших цыплят обнаруживают серозный (слизистый) экссудат в носовых проходах, синусах, гортани, трахеи, бронхах, пищеводе; гиперимию и набухание синусов; помутнение воздухоносных мешков, мезентериума, перикарда, наличие в них фибринозно-казеозной массы. При исследовании нативных мазков, смьюов из этих органов в них находили криптоепоридии (Салтанова Н.П. с соавт., 1991).

Результаты исследований мазков-отпечатков из внутренних органов показали, что местом первоначальной локализации криптоспоридий являются бурса и клоака. На 5-й день после заражения единичные стадии их развития регистрировали в слепых и толстых кишках. К 10-му дню после заражения ооцисты и развивающиеся стадии обнаруживали в синусах гортани, трахее, пищеводе, бронхах, легких, сердце, печени,почках. На 15-й и 20-й день после заражения эти органы по-прежнему были инвази-рованы развивающимися стадиями и ооцистами криптоспоридий, к 30-му дню в мазках-отпечатках из них паразитов не обнаруживали (Салтанова Н.П. с соавт., 1991).

В фабрициевой сумке эпителиальные клетки претерпевают фокальную или диффузную гиперплазию, хотя при этом клинические признаки болезни у птиц Moiyr быть и не выражены (Бейер Т.В. с соавт., 1987А). При поражении дыхательных путей эпителиальные клетки слизистой теряют ресничную выстилку, набухают и претерпевают гиперплазию. При этом наблюдается увеличение объема слизистых желез, а также воспалительная инфильтрация клеток в lamina propria (Бейер Т.В. с соавт., 1987А).

В легких у птицы обнаруживают очаги пневмонии желтовато-белого цвета. В легких и воздухоносных мешках отмечают скопление ка-зеозного экссудата. При патогистологическом исследовании обнаруживают гиперплазию эпителия воздухоносных путей, предсердий, па-

рабронхов, вторичных бронхов и трахеи. В интерстициальной ткани легких установлено наличие клеточной инфильтрации и гиперплазии эпителиальных клеток, которые обнаруживают также и в органах мочевой системы. Криптоспоридии локализуются на поверхности эпителиальных клеток, в просветах нижнего отдела воздухоносных и мочевых путей, а также в макрофагах (Nakamura К., Abe F., 1988). Гипертрофия и гиперплазия эпителия установлена также и при паразитировании криптоспори-дий в клоаке, слюнных железах, желудке, пищеводе. Однако в отличие от того, что имеет место при криптоспоридиозе кишечника млекопитающих, паразитирование криптоспоридий в слепых отростках кишечника цыплят не вызывает слияния и атрофии пораженных ворсинок (Бейер Т.В. с со-авт., Í987A). По другим источникам (Романюк P.A., 1995) атрофию наблюдали наряду с гипертрофией крипт и инфильтрацией базальной мембраны тонкого кишечника.

2.4. Диагностика

В числе симптомов криптоспоридиоза, проявляющихся у бройлеров на 3-5 день после заражения, наблюдается снижение аппетита, вялость, сонливость. Угнетенное состояние выражалось в снижении активности и в отдельных случаях коматозном состоянии (Салтанова Н.П. с соавт., 1991). Оперение у больной птицы взъерошенное, крылья опущены. На 810 день отмечается учащенное и затрудненное дыхание, чихание, выделения из клюва и носовых отверстий (Никитин В., Павласек И., 1989; MuirheadS., 1986).

Затрудненное дыхание, как правило, сопровождалось кашлем, хрипами и крепитацией. Аппетит снижался до полного отказа от корма, наблюдали и гибель птиц (Салтанова Н.П. с соавт., 1991).

Цыплята издают низкие гудящие звуки, при прослушивании у них отмечаются крепитирующие хрипы с потрескиванием. Хрипы нередко

слышны и на расстоянии. Наиболее выражены они были с 12 по 16 день после заражения, что совпадает с пиком выделения ооцист из носоглотки. У некоторых особей симптомы болезни проявляются более 10 дней (Никитин В., Павласек И., 1989).

Водянистая диарея - важный симптом криптоспоридиоза (Бейер Т.В. с соавт., 1987). Фекалии больных имеют зеленый цвет и водянистую консистенцию (Goodwin М.А., 1988). Вследствие диареи развивается обезвоживание организма птицы (Бейер Т.В. с соавт., 1987А; Бейер Т.В. с соавт.,

1987). Птицы испачканы фекалиями (Бейер Т.В. с соавт., 1987А; Никитин В., Павласек И., 1989). Болезнь нередко имеет летальный исход (Никитин В., Павласек И., 1989). В среднем смертность составляет 4,8% поголовья (Бейер Т.В. с соавт., 1987).

Точный диагноз на криптоспоридиоз можно поставить только лабораторными методами. Лабораторную диагностику осуществляют гистологически (срезы стенки кишечника) и копрологически (Lukesova D.,

1988).

Гиетосрезы окрашивают гематоксилин-эозином и азур-эозином (Небайкина Л.А., 1995; Lukesova D., 1988; Sterba F., Suleova I.K., 1988), толуидиновым синим, методом Циля-Нильсена (Sterba F., Suleova I.K., 1988). В ворсинках кишечника обнаруживают эндогенные стадии крипто-споридий.

В настоящее время предложено несколько десятков методов выявления криптоспоридий в пробах фекалий, однако до сих пор нет универсального метода, который бы всегда давал однозначные результаты (Бейер Т.В. с соавт., 1987).

Для увеличения концентрации ооцист в исследуемом материале используют различные методы обогащения, чаще всего флотацию и седиментацию, так как нередко количество ооцист в фекалиях больного бы-

вает настолько незначительным, что их выявление с помощью микроскопии окрашенных мазков представляет трудную задачу. В качестве флотационных жидкостей используют насыщенные растворы хлорида натрия, сахарозы, сульфата цинка, среду Бреза, смесь Павласека (Бейер Т.В. с ео-авт., 1987; Небайкина Л.А., 1995). Для седиментации применяют эфир (Бейер Т.В. с соавт., 1987) бензин (Осипенко Р.В., Максина Т.П., 1994); этилацетат (Weber Rainer et al., 1992). Вспомогательным средством является центрифугирование, которое ускоряет процесс флотации ооцист и позволяет отмывать фекалии, сводя до минимума загрязнение препарата жиром или детритом (Бейер Т.В. с соавт., 1987).

В последнее время предложен способ концентрации ооцист крипто-споридий методом тангенциальной проточной фильтрации (Parker I.F.W, et al., 1994) и новый метод выделения ооцист центрифугированием в прерывистом ангиографиновом градиенте мелыуминамидотреозат натрия (радиоселектан) (Lyagoubi М. et al., 1992) и перколла (Бейер с соавт., 1995), позволяющие выявить ооцисты криптоепоридий в том случае, если их содержится около 20 в 1 мл суспензии фекалий (Lyagoubi М. et al., 1992).

Для окрашивания нативных или приготовленных из обогащенного материала препаратов применяют следующие методы: метод Хайне (Халачева М., Витанов И., 1988; Sterba F., Suleova I.K., 1988); метод Гим-за, метод Циля-Нильсена в различных модификациях, метод Кроса (Халачева М., Витанов И.6 1988), метод Киньона (Weber Rainer et al., 1991), метод Кестера, метод Романовского-Гимзы (Бейер Т.В. с соавт., 1987; Iseki Motohiro, 1992; Lukesova D., 1988) и негативного окрашивания нигрозином. Методы окрашивания эффективны только при наличии 500 ООО ооцист в 1г фекалий. При сочетании методов концентрирования и

окрашивания ооцисты криптоспоридий обнаруживают в концентрации 10 ООО - 50 ООО ооцист в 1 г фекалий (Weber Rainer et al., 1991).

Предложен способ ускоренной цитологической диагностики респираторного криптоспоридиоза цыплят, по которому мазки из экссудата верхних дыхательных путей окрашивают по видоизмененной методике Райта. Трехэтапная окраска достигается за 15-30 с (Latimer K.S. et al., 1988).

Кроме этого применяются методы флуоресцентного окрашивания аурамином (Gnanosoorian S., 1992; Ungureanu Е.М., Dontu G.E., 1992; Бейер T.B. с соавт., 1987) и мепакрином (Ungureanu Е.М., Dontu G.E., 1992). Положительный результат при этих методах окрашивания достигается при наличии 3000 ооцист в 1 мл суспензии фекалий.

При микроскопии мазков, окрашенных вышеперечисленными методами, ооцисты криптоспоридий могут быть спутаны с ооцистами Cyclospora - новой паразитической кокцидии (Petithoiy J.C. et al., 1994). Дифференциальная диагностика основана на размерах ооцист (9-10 мкм у Cyclospora и 3-8 мкм у Cryptosporidium) и на наличии в ооцистах Cyclospora двоякопреломляющих гранул с диаметром около 2 мкм (Petithoiy J.C. et al., 1994; Soave Rosemaiy, Johnson W.D., 1995).

Для обнаружения ооцист Cryptosporidium в фекалиях наряду с микроскопией используют и иммунологические реакции (Бейер Т.В. с соавт., 1987; Tee G.H. et al., 1993; Robert В. et al., 1990; Ungar Beth L.P., 1990; Weber Rainer et al., 1991; Gnanosoorian S., 1992; Bonnin Ä. et al., 1991A). Методы флуоресцирующих антител (прямой и непрямой иммунофлуорес-ценции), отличающиеся высокой чувствительностью и специфичностью, при выявлении криптоспоридий редко дают ложноположительные результаты (Weber Rainer et al., 1991; Бейер T.B. с соавт., 1987). В последние годы для выявления возбудителя криптоспоридиоза в исследуемом мате-

риале стали использовать и реакцию агглютинации латекса (Бейер Т.В. с соавт., 1987; Tee G.H. et а1., 1993).

Для выявления антител к криптоспоридиям разработан и апробирован иммуноферментный метод, отличающийся высокой чувствительностью (чувствительность ELISA 82%, специфичность 96,7%) (Бейер Т.В. с соавт., 1987; Robert В. et al., 1990; Ungar Beth L.P., 1990; Gnanosoorian S., 1992). Метод позволяет дифференцировать антитела по классам иммуноглобулинов и, таким образом, отличать острую инвазию от хронической или состояния носительетва. В качестве антигена для иммунофер-ментного анализа используют ооцисты криптоспоридий (Robert В. et al., 1990; Ungar Beth L.P., 1990), возможно применение и растворимых антигенов (Бейер Т.В. с соавт., 1987; Tee G.H. et al., 1993). Для массовой диагностики криптоспоридиоза в практике выпускают наборы реактивов для ELISA, в частности набор для определения антигена выпускается фирмой Boehringer Mannheim.

Иммуноферментный анализ эффективен при содержании не менее 5 ооциств 1 мл исследуемого материала (Ungar Beth L.P., 1990).

Наиболее чувствительными среди неспецифических методов окрашивания считают методы окрашивания аурамином и карболовым фуксином (Gnanosoorian S., 1992). Иммунологические методы более чувствительны, а их специфичность достигает 100% (Petithoiy J.C. et al., 1994; Ungar Beth L.P., 1990; Weber Rainer et al., 1991).

Разработан новый метод выявления растворимого антигена Cryptosporidium с использованием технологии агглютинации частиц, позитивный результат достигается при наличии менее 1 ооцисты в 1 мл фекалий (Tee G.H. et al., 1993).

В ветеринарной практике наиболее целесообразно использовать метод окрашивания мазков по Циль-Нильсену в сочетании с флотационны-

ми или седиментационными методами концентрирования ооцист. Такой способ достаточно чувствителен, не дает ложноположительных результатов, доступен и дешев.

2.5. Лечение и профилактика

Терапия протозойных заболеваний заключается в применении специфических, патогенетических и симптоматических средств лечения, которые подавляют размножение и жизнедеятельность возбудителя, активизируют иммуногенные механизмы и нормализуют нарушенные функции инвазированного организма. Так как криптоспоридиоз возникает на фоне иммунодепресии и способствует ослаблению иммунной реакции организма, применение неспецифических стимулирующих средств при нем можно считать методом патогенетической терапии. Для мобилизации иммунной системы организма В.И. Петренко (1989) предлагает использовать препарат, по составу компонентов близкий биологическим жидкостям организма. Лечебную смесь готовят из сбалансированных солевых растворов, в нее входят нуклеиновые кислоты, витамины, ферменты, минеральные соли, углеводы, аминокислоты, АТФ и другие компоненты. Дача этой смеси ускоряет регенерацию десквамированного эпителия слизистой оболочки кишечника и восполняет потерю жизненно важных биохимических компонентов организма, так как при пероральной даче готовых к всасыванию питательных веществ нормализуется ферментативная деятельность энтероцитов, нарушенная в процессе развития криптоспори-диозной инвазии (Петренко В.И., 1989).

Дополнительное средство патогенетической терапии - применение иммуномодулятора тимогена, синтетического пептид глютамил-триптофана. Применение тимогена в дозе 5 мкг/кг массы животного с лечебной целью с 6-дневного возраста в течение 3-5 дней подряд способствует быстрому выздоровлению телят (Лоскот В.И. с соавт., 1996).

Криптоспоридиоз является заболеванием не каких-либо отдельных органов, а всего организма птицы (Романюк P.A., 1995). Поэтому для его лечения необходимо применять симптоматическую терапию. Она должна быть направлена прежде всего на восполнение потерь жидкости при длительной диарее. Для регидратации применяют различные глюкозо-солевые растворы, вводимые перорально (Бейер Т.В. с соавт., 1987; Лит-винскийЯ-П., Густый В.И., 1989).

В настоящее время испытано более 50 веществ и их комбинаций в качестве специфического средства для лечения криптоспоридиоза (Бейер Т.В. с соавт., 1987А; Arrowood M.I. et al., 1994; Soave R., Johnson W.D., 1995).

Положительный результат получен при использовании ласалоцида (Pongs Р., 1989), кокцикола (Шибалова Т.А., Бочкарев И.И., 1996; Касаткина И.В. с соавт., 1996), паромомицина в дозе 1-2 г на 1 кг массы 1 раз в день (Heaiey М.С. et а!., 1995) химкокцида в дозе 1 г теленку (Небайкина Л.А., 1995; Литвинский Я.П., Густый В.И., 1989), полимиксина в дозе 0,004 г на 1 кг массы тела три раза в день (Литвинский Я.П., Густый В.И., 1989), цигро в дозе 30 мг на 1 кг массы (Васильева В.А., Небайкина Л.А., 1995). Установлено, что эффективным этиотропным препаратом при криптоепоридиозе телят является кокцидиовит - водорастворимый препарат, содержащий действующего вещества ампролиум гидрохлорида (120 мг/г), 2 мг витамина К и 10 000 ИЕ витамина А. Выпаивание препарата телятам с признаками диареи, начиная с 5-дневного возраста в течение 6 дней в дозе 1,5 г/л воды или 0,05 г/кг массы тела, способствует быстрому их выздоровлению (Лоскот В.И. с соавт., 1996). Явно выраженная анти-криптоспоридиозная активность обнаружена у пяти сульфаниламидных препаратов. Интенсэффективность сульфадимезина в дозе 0,1 г на 1 кг, а также в сочетании с фумаровой кислотой в дозе 0,1 г на 1 кг; химкокцида-

7 в дозе 0,04 г на 1 кг, норсульфазола в дозе 0,05 г на I кг составляет 82,35-95,58% (Якубовский М.В. с еоавт., 1992). Однако, использование эффективных антикокцидиозных препаратов при криптоспоридиозе не приводит к полному ингибированию развивающихся клеток паразита (Касаткина И.В. с соавт., 1996). Достоверно эффективного специфического средства лечения криптоспоридиоза птиц не разработано (Бейер Т.В. с соавт., 1987; Бейер Т.В. с соавт., 1987А; MuirheadS., 1986; Petithoiy J.C. et al., 1994).

Общими профилактическими мероприятиями при криптоспоридиозе являются полноценное кормление молодняка птицы и соблюдение всех зоогигиенических требований к его содержанию. Кормление должно быть сбалансированным по витаминам и минеральным веществам и, таким образом, поддерживать все защитные механизмы организма на должном уровне (Лоскот В.И. с соавт., 1991).

Внутримышечное введение тимогена телятам с 3-дневного возраста в течение 3-5 дней подряд 1 раз в сутки в дозе 3 мкг/кг массы тела животного предотвращает возникновение криптоспоридиоза (Лоскот В.И. с соавт., 1996).

Установлено, что применение лучистой энергии с профилактической целью в значительной степени снижает расстройства деятельности желудочно-кишечного тракта и повышает устойчивость животных к заболеванию криптоспоридиозом (Лоскот В.И. с соавт., 1991).

Имеются данные, что способ содержания влияет на пораженность птиц данной инвазией. Так, интенсивность и экстенсивность инвазии при напольном содержании значительно больше, чем при клеточном (Романюк P.A., 1995; Никитин В., Павласек И., 1989).

Ооцисты криптоспоридий длительно сохраняются в помете и не обезвреживаются обычными дезинфектантами (Бейер Т.В. с соавт.,

1987А). Значительно больший обеззараживающий эффект имеет тщательная уборка помещения, включающая механическое удаление засохшего помета с полов и стен (Бейер Т.В. с соавт., 1987А).

В последнее время большое внимание уделяется водному пути заражения криптоспоридиозом. Так как, ооцисты Cryptosporidium очень малы, и даже глубокая очистка фильтрацией не обеспечивает достаточного снижения количества ооцист в воде (Humphreys S.W., Smith H.V., 1994), актуальное значение имеют поиски эффективных способов удаления возбудителя из сточных и природных вод (Martin A.M. et al., 1992; Villacorta-Martinez de Maturana У. et al., 1992). Обнаружено, что обработка активным илом снижает количество ооцист в воде на 83-84%, а у оставшихся значительно ослабевает инвазионность (Villacorta-Martinez de Maturana Y. et al., 1992).

Средства специфической профилактики кригггоепоридиоза в настоящее время не найдены. Установлено, что предупреждение желудочно-кишечных заболеваний (колибактериоза, сальмонеллеза и др.) способствует более легкому субклиническому течению криптоспоридиоза (Бейер Т.В. с соавт., 1987А; Лоскот В.И. с соавт., 1991). Сульфадиметоксин и сульфаметазин проявляют активность в качестве профилактического средства (Rehg J.E., 1991). Применение препарата кокцидиовит внутрь с профилактической целью (1г/л воды или 0,03 г/кг массы тела животного, начиная с 3-дневного возраста в течение 8 дней) предотвращает возникновение криптоспоридиоза у телят (Лоскот В.И. с соавт., 1996). При применении химиопрофилактики необходимо обращать внимание на взаимодействие лекарственных веществ с веществами корма, особенно минеральными добавками комбикормов (Разбицкий В., Илюшечкин Ю., 1992). РА. Романюк (1995) сообщает об отсутствии ингибирующего действия на криптоспоридий птиц сульфадимезина, ампролиума, химкокци-

да, фармкокцида, статила и степорола в профилактических дозах. При оценке профилактического действия кокцидиостатиков следует учитывать ряд параметров: прирост массы тела, усвоение корма, уровень смертности (Turkson Р.К., Osato-Adu А., 1991).

Наиболее эффективным специфическим средством профилактики заразных болезней является вакцина. Против большинства видов простейших возникает иммунитет нестерильный - премуниция. Это состояние можно вызвать скармливанием животным небольших доз ооцист некоторых кокцидий (Hess I.B., Wilson J.I., 1993; Pariy S. et al., 1992; Wroclawiu A.R., 1991; Jenkins M.C. et al., 1991). В частности, вакцинация путем скармливания ооцист Eimeria tenella в эксперименте дает положительные результаты (Parry S., et al., 1992). Ооцисты перед скармливанием обрабатывали рентгеном (Jenkins M.C. et al., 1991) или ультразвуком (Wroclawiu A.R., 1991). Разработаны наполнители для приготовления пероральной композиции для профилактики кокцидиоза птицы.

Всесторонее изучение морфологии, биологии возбудителя крипто-споридиоза, особенностей его взаимоотношений с макроорганизмом позволит разработать эффективные средства борьбы с этим паразитом.

2.5. Заключение по обзору литературы Таким образом, несмотря на наличие большого количества публикаций в отечественной и зарубежной литературе по криптоспоридиям, многие вопросы остаются недостаточно изученными.

Так, до сих пор отсутствует универсальный способ выявления ооцист Ciyptosporidium в материале. Наличие большого количества различных методов диагностики затрудняет сравнение результатов, полученных разными исследователями. Не разработаны способы исследования объектов окружающей среды на ооцисты Cryptosporidium, необходимые для выявления путей передачи возбудителя и понимания эпизоотологии

криптоспоридиоза. Потребность в них особенно велика, так как в нашей стране изучение данной инвазии находится на стадии выявления и описания очагов криптоспоридиоза в различных регионах. В частности, в Саратовской области эпизоотологическая обстановка по криптоспоридиозу птиц неизвестна.

В связи с отсутствием надежных и эффективных способов исследования недостаточно изучен механизм передачи возбудителя и другие особенности эпизоотологии.

Недостаточная изученность биологии возбудителя криптоспоридиоза, его взаимоотношений с макроорганизмами, а также межхозяинных отношений в настоящее время не позволяют разработать научно-обоснованные эффективные методы борьбы с паразитом.

С целью освещения этих вопросов мы поставили перед собой следующие задачи:

1. Изучить эффективность методов диагностики криптоспоридиоза и дать им сравнительную оценку;

2. Изучить распространенность криптоспоридиоза в птицеводческих хозяйствах Саратовской области;

3. Определить значение величин интенсивности, экстенсивности, пика инвазии в зависимости от условий содержания, возраста птицы и сезона года;

4. Изучить патоморфологию изменений в органах и тканях и пато-морфогенез при криптоспоридиозе у спонтанно зараженных цыплят.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 3.1. Объекты, методы и объем исследований

Работа по теме диссертации выполнена в течение 1995-1998 гг. На кафедре паразитологии и эпизоотологии, кафедре патологической анатомии и патологической физиологии института ветеринарной медицины и биотехнологии Саратовского государственного аграрного университета им. Н.И. Вавилова, а также в птицеводческих хозяйствах Саратовской области.

Для решения поставленных задач использовали следующие методы: методы натурного обследования объектов, в частности, птицефабрик; различные методы диагностики криптоспоридиоза, патологоанатомиче-ские методы.

С целью эпизоотологической оценки по криптоспоридиозу было обследовано поголовье кур птицефабрик Саратовской области и объекты окружающей среды (твердый инвентарь в цехах птицефабрик и пробы кормов, воды, почвы с территории птицефабрик. Все обследованные птицефабрики находились в черте населенных пунктов.

Объектами исследований служили следующие птицефабрики: Ел-шанская, Гусельская (Саратовский район), Красноармейская (Красноармейский район), ГППЗ им. К.Маркса (Энгельсский район), Симоновская (Калининский район), Михайловская (Татищевекий район), Отроговская (Советский район);

Натурное обследование птицефабрик включало их осмотр с целью выявления соответствия проектным данным и изучение принятой на них технологии производства, а также определение времени и места отбора проб для исследования. Пробы почвы и биогумуса на исследование отбирали в соответствии с ГОСТ 17.4.4.02-84.

Детальное изучение особенностей течения криптоспоридиоза проводилось на Красноармейской птицефабрике, где птица содержится в типовых птичниках для клеточного содержания кур промышленного и родительского стада, ремонтного молодняка. Вместимость птичников 30 ООО голов. Во всех птичниках имеются бункера для хранения кормов, приспособления и оборудование для раздачи кормов, поения, уборки помета, приточно-вытяжная вентиляционная система с механическим побуждением.

Для содержания кур несушек промышленного стада используют групповые клеточные батареи КБН-4. Четырехярусная батарея КБН-4 имеет вместимость 7 кур. Батарея рассчитана на размещение 35-40 тыс. кур, что обеспечивает плотность посадки не менее 20-24 голов на 1 м2.

В батарее раздача корма, поение, сбор яиц, уборка помета механизированы. Для раздачи кормов служит подвесной кормораздатчик, вода подается в желобковые поилки, помет убирается движением скребка по пометному настилу в торец батареи, а затем в поперечный пометосбор-ник.

Птицу родительского стада содержат в клеточной батарее КБР-2. Клетка рассчитана на 30 кур и 3 петухов. Плотность посадки 6,5-7,6 головы на 1 м2.

Основа батареи - металлический каркас, разделенный по высоте на два яруса. В каждом ярусе предусмотрен пометный настил, на котором под углом 7° крепятся сетчатые полы с односторонним скатом яиц. Размер ячеек решетки пола 25 X 50 мм. Помет удаляют скребковым транспортером ТСН в промежуточную пометную (в центре батареи) и концевую траншеи. Корма раздают с помощью цепного кормораздатчика; загружают в кормораздатчик с помощью шнекового транспортера и бункера

БСК-10. Скорость движения цепи кормораздатчика 5,5 м/мин. Фронт кормления 8 см. Вода подается в поилки через уравнительный бачок.

Молодняк птицы содержится в клеточных батареях двух марок: двухзальной БКМ-3 (вместимость 36 тыс. голов) и однозальной КБМ-3 (вместимость 36 тыс. голов).

Клеточная батарея КБМ-3 металлическая трехярусная. Состоит из 240 клеток. Вместимость клеток среднего яруса 30-36 суточных цыплят. В возрасте 20-25 дней цыплят по 10-12 голов рассаживают в клетки верхнего и нижнего ярусов. На каркасе батареи смонтирован кормораздатчик с навесной тележкой, бункером-дозатором и цепным раздатчиком корма, положенным в кормовой желоб. Под каждым ярусом клеток имеется пометный настил, по которому проходит скреперный скребок, собирающий помет.

Клеточная батарея БКМ-3 трехярусная, каскадная. Оборудована бункером для хранения кормов, цепным кормораздатчиком, установкой и транспортером для уборки помета, под третьим и вторым ярусами клеток расположены наклонные пометные настилы из оцинкованной стали со скребками. При каскадном расположении клеток обеспечивается равномерное освещение и хороший воздухообмен для выращиваемого молодняка.

Завезенные яйца дезинфицируют в инкубаторе или в машинах при 37°С и относительной влажности воздуха 68-70%. На 1 м3 внутреннего объема инкубатора расходуют 30 мл формалина (36-40%-ный раствор формальдегида), 20 г калия перманганата и 15 мл воды. Экспозиция 20 мин.

Инкубация осуществляется в инкубаторе "Универсал-50". Закладку яиц в инкубаторы производят не позднее 18-20 ч. Режим инкубации соблюдается.

При переносе яиц на вывод их перекладывают в выводные лотки. Выбирают цыплят из инкубатора после полного окончания вывода всей партии. Выбранный молодняк размещается небольшими партиями (по 100 голов) в специальные пластмассовые ящики.

Выводной шкаф после выемки молодняка и удаления отходов инкубации моют горячей водой и дезинфицируют 1% раствором формалина. Отходы инкубации вместе с боенскими отходами и павшей птицей используют для приготовления кормовой муки.

Прежде чем принять партию цыплят в птичнике проводят влажную и аэрозольную дезинфекцию помещения и оборудования формалином. Дератизацию, очистку и дезинфекцию прилегающих к птичнику подсобных помещений, кормовых бункеров, отстойников, дорог, территории проводят не регулярно. При входе в птичники установлены дезинфекционные коврики, ежедневно орошаемые раствором хлорной извести с содержанием 3% активного хлора.

На выращивание принимают суточных цыплят не позднее 12 ч после выборки из инкубатора, отсортированных по состоянию здоровья и привитых против болезни Марека. Вакцинацию осуществляют внутримышечно в дозе 0,2 мл с помощью инъектора полуавтоматического ИП-1 вакциной против болезни Марека изготовленной в Голландии.

В первые дни цыплятам раздают корм не менее 4 раз в сутки, постепенно переводят на двухразовое кормление. Первые 7 суток цыплятам скармливают нифулин 100 г на 100 кг корма и фуразолидон 3 мг на голову с целью профилактики пуллороза-тифа. В возрасте 9 суток вакцинируют против болезни Гамборо выпаиванием, а в возрасте 25 суток подвергают аэрозольной вакцинации против болезни Ньюкасла.

Молодняк беспересадочно выращивают до 120-дневного возраста. В возрасте 5 мес. молодняк переводят во взрослое стадо. Затем его пере-

водят в помещение для кур-несушек. Температуру в помещениях и клетках измеряют с помощью термометров, размещенных в разных местах помещения на уровне среднего яруса.

Допустимые отклонения в температурном режиме в 0,5 -1,0°С нарушаются. Влажность воздуха поддерживается на уровне 65%. Воздухообмен в помещениях для цыплят устанавливают с помощью вентиляционных систем. Их работа обеспечивает равномерное поступление наружного воздуха и удаление излишней влаги, вредных газов, пыли, микроорганизмов. Скорость движения воздуха в птичнике составляет 0,5 м/с при оптимальной температуре, а при повышенной до 1,5 м/с.

Кормление птицы осуществляется 2 раза в день, в одно и то же время. Рацион птицы недостаточен по обменной энергии, протеину, аминокислотам, натрию, витаминам А, Б, Е и другим. Корма периодически (2 раза в месяц) подвергают токсико-микологическому и химико-токсикологическому анализу. Поение птицы автоматизировано. Вода для поения птицы подается из артезианских скважин. Воду анализирует Центр санэпиднадзора 3 раза в год. Вода соответствует ГОСТу "Вода питьевая". Для производства яиц используют двухлинейный яичный кросс П-46.

Объем исследований представлен в табл. 1. Так как, по данным литературы клинически выраженный криптоспоридиоз чаще всего регистрируется у молодых животных, наибольшее внимание было уделено распространенности заболевания среди молодняка кур. Возрастная структура обследованного поголовья молодняка отображена на рис. 1. Обследована птица в возрасте от 1 до 120 дней, а также поголовье родительского и промышленного стада для определения их зараженности криптоспоридиями. Всего обследовано 1530 гол. птицы.

^ российсяш^

'^йЛйОТЖЯ.'

Для изучения особенностей эпизоотологии и патоморфологических изменений при криптоспоридиозе у птицы Красноармейской птицефаб-

Таблица 1

Характеристика объема исследований

Вид исследования Объект Количество исследований

Натурное обследование Птицефабрика 7

Диагностические исследо-

вания:

копрологические молодняк 1 -120 сут 1300

несушка 120

патологоанатоми- эмбрионы 20

ческие молодняк 1 -120 сут 40

несушка 10

гистологические молодняк 1 -120 сут 40

мыши лабораторные 5

Обследование объектов грызуны (мыши) 10

окружающей среды смывы с:

инкубационных лотков 10

стенок шкафов 10

скорлупы яиц 10

клеток 20

пола 30

кормушек 20

поилок 20

корм 20

вода 20

Всего 1712

рики было сформировано 4 группы по 100 голов в каждой по принципу аналогов. Опытные группы содержались в отдельных клетках в цехах вместе с птицей основного стада. Подопытную птицу ежедневно подвергали клиническому, а раз в 5 дней - копрологичеекому обследованию. Павшую птицу вскрывали, составляли протокол вскрытия, отбирали материал для гистологических исследований (железистый желудок, тонкий и толстый отделы кишечника, клоаку, фабрициеву бурсу, сердце, почки, селезенку, печень, легкие, трахею). Содержимое кишечника исследовали ко-прологически. Контролем при патоморфологических исследованиях служила павшая птица (в основном от расклева), при копрологическом исследовании которой криптоспоридии обнаружены не были.

Рис.1. Возрастная структура обследованного молодняка.

Диагностику криптоспоридиоза осуществляли прижизненными и посмертными методами. Для прижизненной копрологической диагностики отбирали пробы фекалий от птиц различного возраста: от каждой партии - не менее 10 проб. Отбор проб при эпизоотологическом обследовании хозяйств осуществлялся обезличенно с помощью скребка с пометного настила каждого яруса клеточной батареи, а при определении возрастной динамики инвазии - индивидуально из клоаки с помощью одноразового шприца без иглы.

Для обогащения материала использовали методы, описанные в методических рекомендациях (Бейер Т.В. с еоавт., 1987). Для сравнения эффективности методов обогащения пробу исследовали методом нативного мазка и восемью методами обогащения с применением фильтрации, флотации и седиментации в различных комбинациях. В качестве флотационной жидкости использовали насыщенный раствор поваренной соли с удельным весом 1,14, в качестве седиментационной - бензин. Плотность флотационного раствора проверяли показаниями ареометра. Вспомогательным средством являлось центрифугирование, которое ускоряет процесс флотации и осаждения ооцист и позволяет отмывать фекалии, сводя до минимума загрязнение препарата жиром и детритом. Для центрифугирования применяли центрифугу ОПн-8. Для выявления ооцист крипто-споридий обогащение проб помета, кормов, смывы с оборудования проводили по разработанному нами методу, который описан в главе "Собственные исследования".

Из обогащенного материала готовили тонкие равномерные мазки, фиксировали по Никифорову. Для дифференциации ооцист криптоспори-дий от других простейших, дрожжей и дрожжеподобных грибов, а также сходных с ними по морфологии частиц, содержащихся в помете, применяли методы выявления кислотоустойчивых организмов. Наиболее демон-

стративным и надежным является окрашивание мазков карбол-фуксином по Цилю-Нильсену с последующим изучением препаратов с помощью иммерсионной системы микроскопа (Т.В. Бейер с соавт., 1987Б). Окрашенные мазки просматривали под иммерсионной системой микроскопа МБИ- (увеличение 90X7). Размеры объектов определяли с помощью окулярного микрометра. До вида криптоспоридий определяли по "Определителю паразитических простейших" (М.В. Крылов, 1996). При постановке диагноза учитывали клинические признаки. Для этого поголовье подвергали ежедневному групповому осмотру.

Для посмертной диагностики осуществляли вскрытие павшей птицы. Готовили мазки-отпечатки из органов, поражаемых криптоспоридио-зом (гортань, трахея, двенадцатиперстная, слепые кишки, клоака, фабри-циева сумка). Мазки фиксировали, окрашивали по Цилю-Нильсену и микроскопировали. Для гистологического исследования отбирали небольшие кусочки пораженных органов и фиксировали в 10%-м нейтральном формалине, с последующей заливкой в парафин по общепринятым методикам (Меркулов Г.А., 1969). С парафиновых блоков на кафедре патологической анатомии института ветеринарной медицины и биотехнологии СГАУ им. Н.И. Вавилова на санном микротоме модели Reichert № 2712 готовили гистосрезы толщиной 10-15 мкм. Для изучения патоморфо-логической картины срезы окрашивали гематоксилином Бемера и эозином, с последующей заливкой в канадский бальзам.

При гистохимических исследованиях применяли окраску Суданом черным В для выявления жиров и реакцию с ферроцианидом по Перлсу для выявлениния гемосидерина.

Фотографирование микрообъектов осуществляли с помощью мик-рофотонасадки МФН-10.

Для изучения механизма передачи возбудителя были обследованы обитающие на фабриках грызуны (мыши) и объекты окружающей птицу среды. Пробы корма отбирали из различных мест кормового бункера и склада кормов. Смывы с оборудования брали в каждом зале птичников ватным тампоном, прикрепленным к квачу, который помещали в пробирку с 2%-ным раствором питьевой соды. В лаборатории смывы с тампонов центрифугировали, из осадка готовили мазки, которые изучали под иммерсионной системой микроскопа после дифференциальной окраски.

Суспензия ооцист Сгур1оБропс1шт те1еа§п&8 была получена методом флотации из пометных масс от больных криптоспоридиозом цыплят. В качестве флотационного раствора использовали раствор сахарозы (плотность раствора 1,25-1,30 мг/см3).

Применение указанного флотационного раствора позволяет получить изолят ооцист возбудителя. В последующем собранный материал методом центрифугирования с добавлением дистиллированной воды в десятикратном объеме отмывали от флотационного раствора (1,5 тыс. об./мин в течение 15 минут).

Полученную биомассу возбудителя сохраняли в 2,5%-м растворе бихромата калия с добавлением антибиотика гентамицина в бытовом холодильнике (10=+4+8°С), затем использовали для заражения подопытных мышей.

Для лабораторных экспериментов составляли группы белых беспородных мышей (подопытные и контрольные) по принципу аналогов. При составлении групп различия в массе мышей допускали ±2 грамма. Моделью для воспроизведения и изучения криптоспоридиозной инвазии служили мыши в возрасте 20 и 60 дней, доза заражения для них была постоянной в течение всех опытов и составляла 100 ооцист на животное.

Перед заражением кулыуру криптоспоридий тщательно размешивали и проводили трехкратный подсчет ооцист методом Столла (Крылов М.В., 1996).

Готовили гистологические препараты и соскобы из различных органов (желудок, тонкий кишечник, слепая кишка, печень, селезенка) и окрашивали карбол-фуксином по Цилю-Нильсену и гематоксилин-эозином.

Первичные цифровые данные обрабатывали методами вариационной статистики и оценивали по параметрическим критериям Стьюдента и непараметрическим критериям Вилкоксона (Лакин Г.Ф., 1990). Построение таблиц, графиков и диаграмм осуществлялось с помощью табличного процессора Quattro Pro 2.0 to 4.0, редактирование и печать текста - текстового редактора WORD 6.0 (Фигурнов В.Э., 1995; Кэмпбелл М., 1996).

3.2. Результаты собственных исследований 3.2.1, Сравнительная оценка способов обогащения материала для обнаружения ооцист СгурЬвропсИит

Из всего многообразия способов диагностики криптоспоридиоза наиболее употребительны, доступны и достаточно эффективны способы обнаружения ооцист С1ур1;оБропс1шт в биологическом материале (фекалиях, смывах с гортани и клоаки) и объектах внешней среды (почве, воде, кормах, смывах с оборудования) посредством микроскопии окрашенных по Цшпо-Ыильсену мазков, приготовленных из обогащенного материала. Они наиболее приемлемы, особенно для научных исследований, так как не дают ложноположительных реакций и демонстративны. Кроме того, эти методы позволяют оценивать интенсивность инвазии, что невозможно при использовании иммунологических методов.

Обогащение материала включает в себя флотацию, седиментацию и фильтрацию по отдельности и в различных комбинациях. Степень обогащения и качество получаемых препаратов этих методов различна. Анализ литературы показал необходимость сравнения их эффективности.

На степень чувствительности исследовались 9 способов обогащения материала (табл. 2). Исследования проводили по схеме (рис. 2). Материалом исследования служила суспензия ооцист Сгур^зропсИит meleagridis, приготовленная из помета спонтанно инвазированных цыплят Симоновской птицефабрики, с концентрацией 50 тыс. ооцист в 1 мл. Эффективность метода оценивали отношением положительных результатов к количеству исследованных проб стандартной суспензии, в процентах. Кроме того, оценивали загрязненность мазков крупными частицами, мешающими микроскопии, и жиром или детритом, которые также как и оо-цисты криптоспоридий окрашиваются в розовый цвет, что затрудняет дифференциальную диагностик}7.

Таблица 2

Методы обогащения материала для диагностики криптоспоридиоза

№п/п Название Описание

1 2 3

1. Нативный мазок На предметное стекло поместить 1 -2 капли изотонического (0,9%) раствора хлорида натрия. На это же стекло поместить небольшой комочек свежих фекалий, смешать с изотоническим раствором до получения гомогенной массы, сделать тонкий мазок и тщательно высушить его на воздухе (не менее 30 мин). Мазок зафиксировать смесью Никифорова (смесь равных частей эфира и 96° этилового спирта) 10-15 мин и тщательно высушить на воздухе.

2. Седиментация в ди- 0,5-1 г фекалий смешать с 10-12 мл дистиллиро-

стиллированной ванной воды. Тщательно перемешанную сус-

воде после двукрат- пензию дважды процедить через два слоя мар-

ной фильтрации ли в центрифужную пробирку объемом 10 мл. Суспензию центрифугировать в течение 2 мин при 1 тыс. об/мин. Надосадочную жидкость слить, из осадка приготовить мазки.

3. Фильтрация через 5-10 г фекалий смешать с 100 мл, полученную

бумажный фильтр суспензию дважды профильтровать через двойной слой марли. Фильтрат повторно профильтровать через бумажный фильтр. Приготовить мазок из соскоба с фильтра.

Таблица 2 (Продолжение)

3

Седиментация в дистиллированной воде

Флотация с предварительным отмыванием материала

0,5-1 г фекалий смешать с 10-12 мл дистиллированной воды, тщательно перемешать и поместить в центрифужную пробирку объемом 10 мл. Суспензию центрифугировать в течение 2 мин при 1 тыс. об/мин. Надосадочную жидкость слить, из осадка приготовить мазки. Фекалии разбавить водой, процедить в центрифужную пробирку объемом 10 мл. Исследуемый материал центрифугировать в течение 1-2 мин при 2-3 тыс, об/мин. После первого (отмывочного) центрифугирования надосадочную жидкость удалить, при этом объем оставшегося осадка не должен превышать 1 мл. Добавить в пробирку флотационную жидкость на половину ее объема и ресуспензировать в ней осадок с помощью пипетки с резиновым баллоном или стеклянной палочки. Затем долить флотационную жидкость до верхнего края пробирки и центрифугировать повторно при том же режиме; в результате ооцисты сконцентрируются в поверхностной пленке жидкости. Материал с этой пленки собрать металлической петлей или стеклянным капилляром, нанести на предметное стекло и приготовить равномерный мазок.

Таблица 2 (Продолжение)

1 2 3

1. Флотация е предва- Материал, собранный с поверхностной пленки

рительным и за- после второго центрифугирования (объем этого

ключительным от- материала не должен превышать 1-2 мл), сме-

мыванием материа- шать с 8 мл воды, после чего центрифугировать

ла 2-5 мин с большой скоростью (2,5-3,5 об/мин).

2. Флотация Фекалии разбавить флотационной жидкостью, процедить в центрифужную пробирку объемом 10 мл. Исследуемый материал центрифугировать в течение 1-2 мин при 2-3 тыс. об/мин. Материал с поверхностной пленки собрать металлической петлей или стеклянным капиляром, нанести на предметное стекло и приготовить равномерный мазок.

3. Флотация с заклю- Фекалии разбавить флотационной жидкостью,

чительным отмыва- процедить в центрифужную пробирку объемом

нием материала 10 мл. Исследуемый материал центрифугировать в течение 1 -2 мин при 2-3 тыс. об/мин. Материал, собранный с поверхностной пленки второго центрифугирования (объем этого материала не должен превышать 1 -2 мл), смешать с 8 мл воды, после чего центрифугировать 2-5 мин с большой скоростью (2,5-3,5 об/мин).

4. Седиментация в 0,5-1 г фекалий смешать с 10-12 мл бензина,

бензине тщательно перемешать и поместить в центрифужную пробирку объемом 10 мл. Суспензию центрифугировать в течение 2 мин при 1 тыс. об/мин. Надосадочную жидкость слить, из осадка приготовить мазки.

пятикратное разбавление

2-кратная фильтрация

Ресуспензирование осадка флотационной жидкостью

Сбор верхних слоев жидкости

Ю-иргтуое разделение диет. годом

Центрифугирование

|1|||||1||| N п/л метода

51

проба фекалий

3

1=(

физ. раствором

Флотационной седимент.

жидкость» \ жидкость» \

..................................1............\......................................г

Заключение диссертации по теме «Паразитология», Колосова, Дарья Михайловна

5. ВЫВОДЫ

1. Впервые в Саратовской области обнаружен возбудитель криптоспоридиоза кур. Установлен вид возбудителя - Сг. meleagridis. Криптоспоридиоз широко распространен на птицефабриках Саратовской области среди цыплят в возрасте 0-120 сут. Экстенсивность инвазии в среднем по Саратовской области составила 41,00+0,70% (Р<0,001). Пик инвазии наблюдается в 60-дневном возрасте. Сезон года не влияет на заражение птицы.

2. Первичное заражение цыплят происходит в первые часы после вылупления в выводном шкафу. Источник инвазии - куры-несушки, у которых наблюдается явление носительства. Фактором передачи служит скорлупа яйца.

3. Наиболее приемлемым методом прижизненной диагностики криптоспоридиоза кур является микроскопия окрашенных по Цилю-Нильеену мазков, приготовленных из материала, обогащенного флотацией с предварительным и заключительным отмыванием дистиллированной водой.

4. Метод обогащения материала для исследования на криптоспоридиоз, включающий в себя фильтрацию через мембранный фильтр №5, способствует повышению чувствительности метода диагностики.

5. Гистологически в пораженном криптоспоридиями кишечнике отмечается катарально-десквамативное воспаление с некрозом слизистой оболочки.

6. В органах иммунной системы обнаруживаются гипопластиче-ские изменения, выражающиеся в разряжении клеток Т- и В-лимфоцитов, сглаживании границ лимфофолликулов фабрициевой бурсы, селезенки и других органов.

7. В паренхиматозных органах выявляются дистрофические, некробиотические изменения, нарушения кровообращения и воспалительные процессы, связанные с токсическим влиянием возбудителя крип-тоспоридиоза.

8. Развитие инвазии протекает в три стадии в соответствии с изменениями иммунного статуса растущих цыплят.

9. Беспородные белые мыши могут служить лабораторной моделью для изучения криптоепоридиоза кур. Криптоспоридии выявлены на разных стадиях развития экспериментально зараженных мышей в желудке, толстом и тонком отделах кишечника и фекалиях.

6. ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ

1.В птицеводческих хозяйствах проводить прижизненную диагностику на криптоспоридиоз.

2. В практику ветеринарных лабораторий необходимо внедрить методы диагностики криптоепоридиоза, включающие в себя предварительное обогащение и окраску по Цилю-Нильсену.

Обогащение материала для исследования на криптоспоридиоз проводить предложенным нами фильтрационным методом. Пробу фекалий залить кипяченой водой в соотношении 1:1. Тщательно перемешать полученную суспензию в течение не менее 30 мин на электровстряхивате-ле. По окончании пробу профильтровать через металлическое сито. Полученную мелкодисперсную суспензию осадить центрифугированием в течение 1-1,5 мин при частоте вращения центрифуги 3 тыс. об/мин. На-досадочную жидкость удалить с помощью пипетки. Осадок тщательно ресуспензировать в флотационной жидкости (насыщенный раствор хлорида натрия с удельным весом 1,14) и центрифугировать 1,5 мин при той же частоте вращения. После этого верхний слой жидкости с поверхностной пленкой перенести в пробирку с 10 мл кипяченой воды. Жидкость профильтровать через мембранный фильтр № 5. Предварительно фильтр нужно проверить на отсутствие механических повреждений (стерилизовать его нет необходимости). По окончании фильтрации осадок с фильтра соскоблить покровным стеклом и перенести на предметное стекло. Приготовить тонкий равномерный мазок.

3. Данные о патологоанатомической картине спонтанного криптоепоридиоза кур использовать для диагностики криптоепоридиоза кур в хозяйствах.

4. Использовать белых мышей как лабораторную модель для изучения криптоепоридиоза птиц.

5. Научные и практические разработки по криптоспоридиозу птиц использовать при написании учебных пособий по паразитологии, а также в лекциях и на практических занятиях в ветеринарных учебных заведениях.

Список литературы диссертационного исследования кандидат ветеринарных наук Колосова, Дарья Михайловна, 1999 год

7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1.Бейер Т.В. Биологические особенности протозойных оппортунистических патогенов - кокцидий (Sporosoa, Coccidia) // Паразитологические проблемы больших городов.- С-П., 1996. - С. 12-13.

2. Бейер Т.В. Криптоспоридиоз животных (биология возбудителя) // Ветеринария.-1986.-№10. - С.42.

3. Бейер Т.В., Антыкова Л.А., Гербина Т.Н., Саргаева В.Г., Сидоренко Н.В. Обнаружение криптоспоридиоза человека в Ленинграде // Мед. пар. и пар. болезни.-1990.-№ 2-С .45-47.

4. Бейер Т.В., Пашкин ПЛ., Рахманова А.Г., Сафонова Н.В,, Хазенсон Л.Б., Чайка H.A. Диагностика, клиника, лечение и профилактика криптоспоридиоза. Методические рекомендации. Ленинград, 1987. - С. 6-12.

5. Бейер Т.В., Сафонова Н.В., Хазенсон Л.Б., Чайка H.A. Лабораторная диагностика криптоспоридиоза у детей. Методические рекомендации. - Ленинград, 1987А. - С. 8-14.

6. Бейер Т.В., Сидоренко Н.В. Криптоспоридиоз малоизученный кокцидиоз животных и человека // Инвазионные болезни сельскохозяйственных животных. - Л., 1988. - С.З.

7. Бейер Т.В., Сидоренко Н.В., Григорьев М.В. Cryptosporidium parvum (Apicomplexa: Sporosoa, Coccidia) - оптимизация техники получения большой массы ооцист// Паразитология. - 1995. - Т. 29, №3. -С. 198-207.

8.Бейер Т.В., Сидоренко Н.В., Пашкин П.И., Понизовекий А.К. Криптоспоридиоз животных (Распространение, клинические признаки, профилактика и лечение)//Ветеринария.-1987А.-№3. -С .52.

9. Бейер Т.В., Сидоренко Н.В. Об еще одной биологической особенности кокцидий рода СпрЮвропШиш (Зрогозоа: Арюотр1еха)//П аразитология.-1993.-27, №4.-С .309-319.

10. Бейер Т.В., Шибалова Т.А., Костенко Л А. Цитология кокцидий. - Л.: Наука, 1978. - 184 с.

11. Бессарабов Б.Ф., Урюпина Г.М. Динамика естественной резистентности кур-несушек // Повышение естественной резистентности сельскохозяйственной птицы. - М., 1983. - С. 6.

12. Бочкарев И.И. Распространение криптоспоридиоза телят в хозяйствах Якутии // Науч.-техн. бюл. - Якут. НИИСХ. - 1989.- 1:3-5. С. 520226.

13. Бочкарев И.И., Шибалова Т.А. Криптоспоридиоз крупного рогатого скота в республике Саха (Якутия)//Паразитологические проблемы больших городов. - С.-П., 1996.-С. 17.

14. Васильева В.А. Криптоспоридиоз и эзофагостомоз свиней при моноинвазиях и паразитоценозе II Автореф. дисс. док. вет. наук. -Москва, 1998.-34 с.

15. Васильева В.А., Небайкина Л А. Криптоспоридиоз животных//Ветеринария.-1995.-№10. - С.31-32.

16. Воронов А.Н., Лоскот В.И. Некоторые вопросы эпизоотологии криптоспоридиоза телят//Паразитологические проблемы больших городов. - С.-П., 1996. - С.25-26.

17. Гаибова Г.Д., Исмайлова Г.И., Искендерова Н.Г., Мусаев М.А. Зараженность криптоспоридиями птиц отряда куриных в Азербайджане//Паразитологические проблемы больших городов. - С.-П., 1996.- С.26-27.

18. Дельфин M., Санхурко Э., Финлей K.M., Гордеева Л.М. Criptosporidium sp. у детей, больных диареей на Кубе//Мед. пар. и пар. болезни.-1989.-№ 4.-С.36-39.

19. Дубровский Ю.А., Емельянова Л.П., Лисина C.B. Зараженность диких млекопитающих криптоспоридиями // Бюлл. Моск. о-ва испыт. природы. Отд. биол. - 1994. - 99, №5. - С. 27-32.

20. Карпуть И.М., Бабина М.П. Формирование иммунного статуса цыплят-бройлеров // Ветеринария. - 1996. - №6. - С. 28-30.

21. Касаткина И.В., Бочкарев И.И., Шибалова Т.А. Изучение механизмов действия кокцидиостатических и иммунорегуляторных средств в отношении Criptosporidium parvum в организме инвазированных мышей//Паразитологические проблемы больших городов. - С .-П., 1996.- С .28-29.

22. Кожемяка Н.В. Эпизоотическая обстановка в птицеводческих хозяйствах и перспективы ее улучшения// Ветеринария. - 1995. - № 12. - С. 3-7.

23. Колоусова Н.Г. Гистоморфологические критерии иммунодефицитных состояний фабрициевой сумки, тимуса и селезенки у бройлеров // Болезни птиц при интенсивных методах ведения отрасли: Межвузовский сборник науч. трудов. - Харьков, 1988.- С. 6-15.

24. Кораблева Т.Р., Барсуков Н.П. Иммунные структуры органов пищеварения (учебное пособие). - Симферополь, 1997. - 78 с.

25. Костенко П.А. Проникновение споровиков в клетки хозяина // Паразитология. - 1992. - Т.26, вып.З-С.216-225.

26. Крылов В.Ф., Лизоркин A.B. Криптоспоридиоз птиц// Ветеринария. - 1989.- № 3.- С. 45.

27. Крылов M.B. Определитель паразитических простейших (человека, домашних животных и сельскохозяйственных растений). - С.Петербург, 1996. - 516 с.

28. Кэмпбелл Мэри. Word.-M.: Бином, 1996. - 432с.

29. Лакин Г.Ф. Биометрия. - М.: Высш. шк., 1990. - 352 с.

30. Лаковникова Е.В. Сезонная и возрастная динамика криптоспоридиоза телят в животноводческих хозяйствах Ленинградской области // Инв. болезни с.-х. жив.- Л., 1989.- С.77.

31. Лаковникова C.B., Кондратьева М.А. Криптоспоридиоз и возбудители кишечных инфекций новорожденных телят// Инв. болезни с.-х.жив.-Л., 1988.-С. 42.

32. Литвинский Я.П. О специфичности криптоспоридий// Цитология. - 1992. - 34, № 4. - С. 87.

33.Литвинский Я.П., Густый В.И. Криптоспоридиоз телят // Ветеринария.- 1989.- № 8. - С. 46.

34. Лоскот В.И., Воронов Â.H., Гаврилова НА. Профилактика и лечение при криптоспоридиозе телят // Пар. проблемы больших городов.-С.-П., 1996.-С. 52-53.

35. Лоскот В.И., Лаковникова Е.В., Пашкин П.И., Семенков Л.Д. Распространение криптоспоридиоза телят в животноводческих хозяйствах Ленинградской области// Инв. болезни с.-х. жив.- Л., 1989.- С. 82.

36.Лоскот В.И., Пашкин П.И., Семенков Л.Д., Воронов А.Н. Влияние различных технологических факторов на возникновение и течение криптоспоридиоза у телят// Инв. болезни с.-х. жив.- Иваново, 1991.-С. 83.

37. Марышева C.B. Криптоспоридиоз телят // Ветеринария.-1990.-№ 3.-С.43.

38. Меркулов Г.А. Курс патогистологической техники. - Л.: Медгиз, 1961,-422 с.

39. Минеева Т.И. Электронномикроскопическая и гистохимическая характеристика энтероцитов тонкого отдела кишечника новорожденных телят в норме и при токсической диспепсии: Автореф. дисс. канд. вет. наук.- М., 1975.-16 с.

40. Небайкина Л.А. Клинико-эпизоотологические особенности криптоспоридиоза телят в условиях Мордовского региона (распространение, патогенез, терапия) : Автореф. канд. вет. наук. -Саранск, 1995. -16с.

41. Никитин В., Павласек И. Криптоспоридиоз кур // Птицеводство.- 1989.- № 1.- С. 35.

42. Осипенко Р.В., Максина Т.П. Новый способ очистки и выделения ооцист криптоспоридий и других видов кокцидий из биологических субстратов // Акту ал. пробл. вет. мед. / Ульяновский с.-х. ин-т. - Ульяновск, 1994. - С. 26-29.

43. Пашкин П.И., Лаковникова Е.В., Лоскот В.И., Новинский К.К., Сидоренко Н.В. Некоторые вопросы эпизоотологии криптоспоридиоза в животноводческих хозяйствах Ленинградской области// Инв. болезни с.-х. жив.- Л., 1988.- С. 60.

44. Петренко В.И. Биологический способ лечения и профилактики криптоспоридиоза у телят молочного периода// Инв. болезни с.-х. жив.- Л., 1989.- С. 142.

45. Разбицкий В., Илюшечкин Ю. Влияние металлокомплексов на антиэймерийную активность химкокцида // Птицеводство. - 1992. - № 11. - С. 22-23.

46. Романова Т.В., Шкарин В.В. Особенности эпидемиологии криптоспоридиоза у детей в условиях сельской местности II Нижегор. мед. ж. - 1991.-№2. -С. 6-7.

47. Романова Т.В., Шкарин В.В., Хазенсон Л.Б. Особенности распространения криптоспоридиоза в Нижегородской области II Мед. паразитол. и паразитар. болезни. - 1992. - № 4. - С. 5-7.

48.Романюк P.A. Криптоспоридиоз кур (эпизоотология и меры борьбы) : Автореф. дисс. канд. вет. наук. - С.-Петербург, 1995.-16с.

49. Романюк P.A. Эпизоотология криптоспоридиоза в специализированных птицехозяйствах// Инв. болезни с.-х. жив.-Иваново, 1991.-С. 92.

50.Салтанова Н.П., Головкина Л.П., Павласек И.Ф. Иммунный статус при криптоспоридиозе цыплят II Ветеринария. - 1991. - № 12. - С. 38-40.

51. Свежова Л.В. Значение ультраструктурных признаков и особенностей жизненных циклов в решении спорных вопросов систематики кокцидий (Apicomplexa, Sporozoa, Coccidia) II Пар. проблемы больших городов.- С.-П., 1996.- С. 85.

52. Сидоренко H.B. Ciyptosporidium parvum (Apicomplexa, Sporozoa): становление экстрацитоплазматической паразитофорной вакуоли при клеточном взаимодействии паразита и хозяина II Пар. проблемы больших городов.- С.-П., 1996.- С. 87.

53. Сидоренко Н.В. Электронно-микроскопическое изучение бесполых стадий Cryptosporidium parvum в кишечнике экспериментально зараженных крысят// Цитология. - 1992. - 34,№4. - С. 139-140.

54. Соколов В.И., Чукаловская Р.Н. Пролиферативные процессы и цитохимические особенности кишечного эпителия у цыплят // Морфология сельскохозяйственных животных.- Ленинград, 1980.- С. 7478.

55.Тайчинов У.Г. К вопросу о эпизоотическом процессе при криптоспоридиозе // Ветеринария.-1996. - № 10.- С. 30-32.

56. Тайчинов У .Г. Криптоспоридиоз телят // Ветеринария.-1996А- № 3.- С. 25.

57. Фигурнов В.Э. IBM PC для пользователя.- Изд. 6-е, перераб. и доп. - М.: ИНФРА., 1995.- 432 с.

58.Фисинин В.И. Тенденции развития мирового птицеводства // Птицеводство.- 1993.- № 4. - С. 29-33.

59. Халачева М., Витанов И. Микроскопски методи за доказване на ооцисти на криптоспоридии // Ветер. Ст. - 1988. - 86.7.- С.50-51.

60. Шибалова ТА., Бочкарев И.И. Развитие Cryptosporidium parvum в клетках культуры тканей и экспресс-оценка фармакологических средств in vitro // Пар проблемы больших городов.- С.-П., 1996.- С. 113.

61. Шибалова Т.А., Павласек И.Ф., Касаткина Н.В. Криптоспоридиоз птиц II Цитология. - 1992. - 34, № 4. - С. 167.

62. Якубовский М.В., Мясцова Т.Я., Лавор С.И. Криптоспоридиоз животных в Белоруссии // Вет. наука - производству. -1992. - № 30. - С. 114-119.

63. Якубовский М.В., Мясцова ТЛ., Лавор С.И. Распространение криптоспоридиоза животных в Белоруссии // Вет. наука - производству. - 1991. - № 29. - С. 106-109.

64. Adamezewska Agata Immunobiologia Сlyptosporidium sp. // Wiad. parazytol. - 1992. - 38, № 1-2. - P. 9-16.

65. Arrowood M. J., Xie Long-Ti, Hurd M. R. In vitro assaya of madyramicin activity against Cryptosporidium parvum // J. Eukaryot. Microbiol. - 1994.-41,№5.-P.23.

66. Awad- El.Kariem F.M., Robinson H.A., Dyson D.A., Evans D., Wright S., Fox M.T., McDonald Y. Differentiation between human and animal strains of Cryptosporidium parvum using isoenzyme tiping // Parasitology. - 1995. - 110. № 2. - P. 129-132.

67.Bjorneby John M., Riggs Michael W., Perriman Lance E. Ciyptosporidium parvum merozoites share neutralization-sensitive epitopes with sporozoites // J. Immunol. - 1990. - 145, № 1. - P. 298-304.

68. Bonnin A., Dubremetz J.F., Camerlynsk P. Characterization and immunolocalization of an oocysts wall antigen of Cryptosporidium parvum (Protozoa: Apicomplexa) // Parasitology. - 1991. - 103, № 2. - P. 171 -177.

69. Bonnin A., Harly G., Petrella Т., Cuisenier В., Camerlynck P. Diagnostic biologique de la ciyptosporidiose // Rev. fr. lab. - 1991. - 19, № 2234. - P. 64-72.

70. Chalmers R. M., Stusdee A. P., Casemore D. P., CuriyA., Miller A., Parker N. D., Richmond Т. M. Ciyptosporidium muris in wind house mice (Mus musculus) first repost in the UK // Eur. J. Protistol., - 1994. - 30.№2, - P 151-155.

71. Chen You-Gui, Yao Fu-Bao, Li Hai-Si, Shi Wen - Sheng, Dai Mei-Xin, Lu Ming Cryptosporidium infection and diarrhea in rural and urban areas of Jiangsi, People's Republic of China // J. Clin. Microbiol.- 1992. -30, №2.-P. 492-494.

72. Chermette R., Boufassa-Ouzrout S., Ciyptosporidiosis: a compolitan disease in animals and in man // Paris.- 1988.- 7.-P. 122P.

73. Coleman, S.U.; Klu, T.R.; French, D.D. (e.a.). Prevalence of Cryptosporidium sp. in equids in Luisiana// Am. J. vet. Res.-1989.- 50,№ 4.-P. 575-577.

74. Darbat Hamid, Wang Yujian, Shahba Lian Mazoud, Alak John, Crawford Gail, Watson ronald R. Thymosin modulation of the persistence of Cryptosporidium in mice with murine AIDS: Proc. 2hd Int. Conf. on Alcohol, Drugs of Aduse and Immunomod. (AIDS), Arizona USA, 9-13 Sept., 1992 // Adv. Biosciences. - 1993. - 86. - P.341-346.

75. Fayer R. Effect of high temperature on infectivity of Ciyptosporidium parvum oocysts in water II Appl. and Environ. Microbiol. -1994. - 60, № 8. - P. 2732-2735.

76. Fayer R., Periyman L. E.; Riggs M.W. Hyperimmune bovine colostrum neutralizes Cryptosporidium sporozoites and protects mice against oocyst challendge// J. Parasitol.- 1989.- 75, l.-P. 151-153

77. Garsia P., Gastano M.A. Importada de los manipuladores de alimentos en la transmisión de la ciyptosporidiosis II Enferm. infecc. y microbiol. clin. - 1991. - 9, № 9. - P. 583-584.

78. Gnanasoorian S. Defection of Ciyptosporidium oocysts in faeces: comparison of convential and immunofluorescence methods II Med. Lab. Sci. - 1992. - 49, № 3. - P. 211-212.

79. Goodwin MA. Small intestinal cryptosporidiosis in a chichen // Avian Dis.-1988 .-32,№4-P.844-848.

80. Goodwin M.A., Broun I. Light-microseopic lesions associated with naturally occuring bursal cryptosporidiosis in chichens // Avian Dis.-1989.-33,№l.-P.74-78.

81. Gornik V., Exner M. Naehweismethode und Vorkmmen Von Ciyptosporidium sp. in ausgew ählten Oberfläche nwässem // Zentralbl. Hyg. und Umweltmed. - 1991. - 192, № 2. - P. 124-133.

82. Gornik V., Exner M. Occurtens of Ciyptosporidium sp. in selected surface waters // Zentralbl. Hyg. und Umweltnied. - 1991A - 192, № 2.-P. 160.

83. Gut J., Doyle P.S., Petersen C., Nelson R.G., Leech J.H. Ciyptosporidium parvum: indification of intracellular trophozoite and meront antigens // J. Cell. Biochem. - 1992. - Suppl. 16A. - P. 147.

84. Harp JA., Whitmire W.M.,Sacco R. In vitro proliferation and production of gamma interferon by murine CD4+ cells in respons to Ciyptosporidium parvum antigen // J. Parasitol. - 1994. - 80, № 1. - P. 6772.

85. Healey M. C., Jang S., Rasmussen K. R., Jackson M. K., Du C. Therapeutic effecacy of paromomycin in immimnosuppressed adult mice infected with Ciyptosporidium parvum // J. Parasitol. - 1995. - 81, №1. - P. 114-116.

86. Hess J.B., Wilson I.L. Broiler breeder pullet transport: Advantages and disadvantages of current methods // Poultry Sei. - 1993 - 72, Suppl. l.-P. 170.

87. Humphreys S.W., Smith H.V. Occurrense of Ciyptosporidium sp. oocysts in raw and final waters in England // Trans. Roy. Soc. Trop. Med. and Hyg. - 1994. - 88, № 5. - P. 501-502.

88. Iseki Motohiro . Modan media // Mod. Media. - 1992.- 38, № 11.

-P. 1-7.

89.Jeffeiy J. Cryptosporidiosis and water simply - a brief review with special reference to the report of the Badenoch Commette // Aqua. -1991. - 40, № 2. - P. 110-115.

90. Jenkins M.C., Augustine P.C., Barta J.R., Castle M.D., Danforth H.D. Development of resistence to coccidiosis in the absence of merogonic development using X-irradiated Eimeria acervulina oocysts // Exp. ParasitoL. - 1991. - 72, № 3. - P. 258-293.

91.Jiang Shiguang, Healey M.P. Patent gut infections in immunosupp resset adulf C57BL/6N mice Following intraperitoneal injection of Cryptosporidium parvum. oocysts // G. ParasitoL- 1994. - 80, № 2.- P. 338342.

92. Joce R.E., Bruce J., Kiely D., Noah N.D., Dempster W.B., Stalker K., Gumsley P., Chapman P.A., Norman P., Watkins I., Smith H.V., Price T.I., Watts D. An autbreak of ciyptosporidiosis associated with a swimming pool 11 Epidemiol, and Infec.. - 1991. - 107, Nq 3. - P. 497-568.

93. Johansen G. A., Sterling C. R. Defection of a prolonged Cryptosporidium parvum infection in immunocompetentadult C57BL/6 mice // J. Eukaryot. Microbiol. - 1994. - 41,№5. - P. 45.

94. Joseph C., Hamilton G., O'Connor M., Nicholas S., Marshall R., Stanwell-Smith R., Sims R., Ndawula E., Casemore D., Gallagher P., Harnett P. Cryptosporidiosis in the isle of Thanet; an out break associated with local drinking water // Epidemiol, and Infec. A. - 1991.- 107,№3.-P. 509-519.

95. Kim C.W., Joel D., Woodmansee D.m Luft B.J. Experimental cryptosporidiosis in fetal lambs // J. ParasitoL- 1988.- 74,№ 6.-P. 1064-1067.

96. Kim Kami, Gooze Lisa, Petersen Carolin, Gut Jiri, Nelson Richard G. Isolation, sequence and molecular kariotype analysis of the actin gene of Cryptosporidium parvum // Mol. and Biochem. Parasitol. - 1992. - 50, № l.-P. 105-113.

97. Koudella B., Hefmanek J. Nonspecific immunomodulation influences the course and location of Cryptosporidium parvum infection in neonatal BALB/c mice // Ann. parasitol. hum. et comp.. - 1993. - 68, № 1.- P. 3-10.

98. Kozakiewicz B., Maszewska J. Badania epizootiologiczne inwazji Cryptosporidium sp. u bydla w gospodarstwach wielkostadnych // Med. Weter.- 1988.- 44, №12.- P. 726-729.

99. Korinek I., Chroust K. Dinamies of the incidence of ciyptosporidia in calves // Acta Veter. Brno. - 1988.- 57, № 1 /2.-P. 39-51.

100. Kuhls T. L., Mosier D.A., Abrams V.L., Crawford D.L., Greenfield R.A. Inability of interferon - gamma and aminoguanidine to alter Cryptosporidium parvum infection in mice with severe combined immunodeficiency // G. Parasitol.. - 1994. - 80, № 3. - P. 480-485.

101. Latimer K.S., Goodwin M.A.. Davis M.K. Rapid cytologic diagnosis of respiratory ciyptosporidiosis in chichens // Avian Dis..- 1988.32 4.-P. 826-830.

102. Levy M.G., Ley D.H., Barnes H.I., (e.a.) Experimental ciyptosporidiosis and infectious bursal disease virus infection of specific pathogen free chichens //Avian. Dis.- 1988.- 30, Nq 4.- P. 803-811.

103. Lukesova D. Moznosti prakticke diagnostiky kryptosporidiozy // Veterinafstvi.- 1988.- 38, №3.- P. 113-115.

104. Lyagoubi M., Datiy A., Malet J., Danis M., Gentilini M. Rapid purification and concentration technique for Cryptosporidium parvum oocysts // Trans. Roy. Soc. Trop. Med. and Hyg.. - 1992. - 86, № 6. - P. 640.

105. Martin A.M., Rodriguez J., Ledesma M., Canut A., Montes J., De la Cuesta A. Estudio de Cryptosporidium spp. en aguas de la provincia de Salamanca // Enferm infece y microbiol. clin.. - 1992. - 10. Supl. № 2. - P. 137.

106. McDonald V., Bancroft G.J., Meehanisms of innate and acquired resistance to Cryptosporidium parvum infection in SCID mice // Parasite Immunol. - 1994. - 16, № 6. - P. 315-320.

107. McDonald V., Deer R.M.A.,Bancroft G.J., Murine models of Cryptosporidium infection to investigate immunity to cryptosporidiosis // Eur. J. Protistol. - 1992. - 28, № 3.- P. 350.

108. Microbiologist meet do defeat water-borne parasite // New Sei.. -1989.- 122? № 1658.-C. 22.

109. Minas A., Koutsoukou-Chartona E., Parasavvas M. Deltionte ellenikes pteniatrikes etaipeias // Bull. Hell. Vet. Med. Soc. - 1993.-44, № 2. -P. 112-114.

110. Mosier Derek A., Kukls T.L., Simons K.R., Oberst Richard D. Bovine Humoral immune response to Cryptosporidium parvum // J. Clin. Microbiol. - 1992. - 30, № 12. - P. 3277-3279.

111. Muirhead S. Cryptosporidiosis: A new disease that threatens the poultry industry // Feedstuffs. - 1986,- Vol. 58, № 51.- P. 10.

112.Naciri Muriel La cryptosporidiose. Importance de la contamination de l'eau // Prod. anim. - 1992. - 5, № 5. - P.319-327.

113. Nakamura KL., Abe F. Respiratory (especially pulmonary) and urinary infection of Cryptosporidium in layer chickens // Avian. Pathol. -1988.- 17,№3.-P. 703-711.

114. Papandopoulou C., Xylouri E., Zisides N. Cryptosporidial infection in broiler checkens in greece // Avian. Dis. - 1988. - 32, 4/ - P. 842843.

115. Parker J.F.W., Humphreys S.W., Smith H.V. Concentration of Cryptosporidium sp. oocysts by tangential flow filtration // Trans. Rog. Soc. Trop. Med. and Hyg. - 1994. - 88, № 5. - P. 503-504.

116. Parry S., Barratt M.E.I., Jones S., Mckee S., Murray I.D. Modelling cocidial infection in chickens: emphasis on vacci nation by in feed delyvery of oocysts //1. Theor. Biol. - 1992. - 157, № 4. - P. 407-425.

117. Penrith M.-L., Burger W.P. A Cryptosporidium sp. in an ostrich // I. S. Mr. Vet. Assoc. - 1993. - 64, № 2. - P. 60-61.

118. Petithory I.-C., Junod Ch., Ardon F., Jousserand P. Cyclospora sp.: Une nouvelle coccidie parasite de l'homme // Rev. fr. lab. - 1994. - 23, № 271.-P. 11-14.

119. Pongs P. Kryptosporidien - Infektion beim Kalb Behandlungsversuch mit Lasalicid-Na enter Praxisbedingungen // Tierarztl Umsch.- 1989.- 44,2.- P.100-101. (H30152.)

120. Pozio Edoardo, Morales Maria Angeles Gomez, Barbieri Francesca Mancini, La Rosa Giuseppe Ciyptosporidium different behiviorez in calves of isolates of human origin // Trans. Rog. Soc. Trop. Med. and Hyg. - 1992.-86,№6.-P.636-638.

121. Rehg J. E. Anticiyptosporidial activity is associated with specific sulfonamides in immunosuppressed rats // J. Parasitol. - 1991. - 77, № 2. - P. 238-240.

122. Richardson A.I., Frankenberg RA., Buck A.C., Selkon I.B.

Co

Ibourne I.S., Parsons I.W., Mayon-White R.T. An outbreak of waterbome cryptosporidiosis in Swindon and Oxfordshire // Epidemiol, and Infec. - 1991. - 107, №3.-P. 485-495.

I

123. Robert B., Ginter A., Antoine H., Collard A., Coppe P. Diagnosis of bovine cryptosporidiosis by an enzinu-Iinked immunosorbent assay Ii Vet. Parasitol. - 1990. - 37, № 1. - P. 1-8.

124. Rose Elaine Mechanizmy odpomosci przeciwko kokcydiozie // Lesz. nauk. AR Wroclawiu. Wet. - 1992. - № 52. - P. 149-157.

125. Smith H.V. Ciyptosporidium and water: a review Ii I. Inst. Water and Environ. Manag. - 1993. - 6, № 4. - P. 443-451.

126. Smith H.V., Brown I., Coulson I.C., Morris G.P., Girdwood R.W.A. Occurrence of oocysts of Cryptosporidium sp. in Lapus spp. gulls // Epidemiol, and Infec. - 1993.- 110,№ I.-P. 135-143.

127.Soave R., Johnson W.D. Cyclospora: Conquest of an emerging pathogen// Lancet. - 1995. - № 8951 - P.667-668.

128. Stephan H. Vergleichende methodische Untersuchungen zum Nachweis Von Kiyptosporidien im Kot von Brief-und Rassetauben miteinem Beitrag zum Vorkommen von anderen Darmparasiten bei Tauben // Guissen.-1989.- 123,161.- P. 110-112.

129. Sterba F., Sulcovä Y.K. Laboratoani diagnostice kriptosporidiozy telat Ii Veterinärstvi.- 1988.- 38, №3.-P. 110-112.

130.Takano Hiroshi, Inamoto Tamio, Ogimoto Keyi, Nakai Yutaka Development al process of Cryptosporidium in the intestine and bursa of

Fabricius of chickens //1. Vet. Med. Sei. - 1992. - 54, № 2. - P. 289-292.

i

131. Tee G.H., Moody A.H., Hunt-Cooke A., Chiodini P.L. A novel assay for detecting soluble antigen of Cryptosporidium parvum using particle

agglutination technology // Serodiagn. and Immunother. Infec. Disease. -1993.-5,№ l.-P. 49-52.

132. Thamsborg S.M. Cryptosporidiosis in kids of daiiy goats // Vet. Rec. - 1990. - 127, № 25-26. - P. 627.

Í33. Tíliey M., Upton S.I. Electrophoretic characterization of Cryptosporidium parvum (KSU-1) (Apicomplexa: Ciyptosporidiidae) // Can. I. Zool.-1990. - 68, Nq 7. - P. 1513-1519.

134.Turkson P.K., Osafo-Adu A. Evalution of perfomance in broilers kept on prophylactic medication with coccidiostats // Rev. elev. et med. vet. paus trop. - 1991. - 44, № 4.- P. 491-496.

135. Ungar Beth L.P. Enzyme-linked immunoassay for detection of Cryptosporidium antigens in fecal specimens // J. Clin Microbiol. - 1990. - 28, № 11.-P. 2495.

136. Ungar Beth L.P., Kao Tzu-Ched, Burris Jennifer A., Finkelman Fred D. Cryptosporidium infection in an adulf mouse model. Independent roles for IFN-y and CD4+ T-lymphocytes in protective immunity // J. Immunol. - 1991.- 147, №3.-P. 1014-1022.

137.Ungureanu Ernest M., Dontu Gabriela E. A new Staining Technique for the indentification of Ciyptosporidium oocysts in faecal smears // Traus. Roy. Soc. Trop. Med. and Hyg. - 1992. - 86, № 6. - P. 638.

138. Villacorta-Martinez de Maturana I., Ares-Mazas M.E., Duran-Oreiro D., Lorenzo-Lorenzo M.I. Efficacy of activated sludge in removing Ciyptosporidium parvum oocysts from sewage // Appl. and Environ Microbiol. - 1992. - 58, № 11. - P. 3514-3516.

139. Weber Rainer, Biyan Ralph T., Bishop H.S., Wahlquist S.P., Sullivan J.I., Juranek D.D. Threshold of detection of Ciyptosporidium

oocysts in human stool specimens: Evidence for low sensitivity of current diagnostic methods // J. Clin. Microbiol. - 1991. - 29, № 7. - P. 1323-1327.

140. Weber Rainer, Bryan Ralph T., Juranek D.D. Improved stool concentration procedure for detection of Cryptosporidium oocysts in fecal specimens // J. Clin. Microbiol. - 1992. - 30, № 11. - P. 2869-2873.

141. Wroclawiu Ar Proby uodparniania kurszat oocystami eimeria zko Ianina // Zesz. nauk. Wet. - 1991. - № 49. - P. 161 -166.

142.Zha Hongho, Jiang Jiang Jinshu Xiumu shauyi xuebao // Acta vet. et zootechn. sin. - 1994. - 25, № 3. - P. 273-278.

143. Zhao Ya-Rong, Jiang Jin-Shu, Wang Ming Dongwu xuebao // Acta Zool. Sin. - 1993. - 39, № 1.- P. 6-12.

144.Zosson B. La eiyptosporidiose 11 Ann. med. vet. - 1989. - 133, № 2.-P. 163-164.

145. Zu S.-X., Fang G.-D., Fayer R., Gnerrant R.L. Ciyptosporidiosis: pathogenesis and immunology II Parasitol. Today. - 1992. - 8,№ 1. - P.24-27.

í 40