Комплексы полупроводниковых нанокристаллов и рекомбнантных антител для флуоресцентной визуализации опухолевых клеток тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.03, кандидат биологических наук Здобнова, Татьяна Александровна

• Здобнова, Татьяна Александровна
• кандидат биологических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Здобнова, Татьяна Александровна

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИИ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ

I.I¿ КТ как флуоресцентные визуализирующие агенты-для молекулярной5 диагностики опухоли

1.1.1. Строение и свойства КТ

I.I.2. Методы получения водорастворимых КТ

I.I.3. Метод присоединения биологических молекул

1.1.3.1. Присоединение непосредственно к полупроводниковой части нанокристалла

I.I.3.2. Присоединение к гидрофильному покрытию

I.I.4. Нацеливание КТ на опухолевые клетки

1.1.4.1. Направляющие агенты

I.I.4.2. Методы присоединения направляющих агентов к КТ

I.I.4.3. Проблема неспецифического связывания КТ

I.I.5. Диагностика in vitro

I.I.5.1. Внзуализаг/ия опухолевых клеток

1.1.5.2. Одновременная детещия нескольких онкомаркеров

I.I.5.3. Иммуногистохштческий анализ

I.I.5.4. Наблюдение в реальном времени за молекулярными процессами и клетками

I.I.6. Визуализация in vivo на модельных животных

1.1.6.1. Детещия опухолей с использованием КТ

1.1.6.2. Биораспределение и фармакокинетика КТ

I.I.7. Риск применения КТ в биомедицинских исследованиях '

I.1.7.1. Цитотоксичность КТ

I.1.7.2. Системная токсичность in vivo

1ЛТ. Антитела как направляющие модули в диагностике опухолей1

1.П.1. Форматы антител, используемых как направляющие модули в диагностике опухолей

I.II.2. Основные методы мультимеризации антител

1.П.З. Факторы, влияющие на выбор антител для доставки визуализирующих модулей in vivo

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ГЛАВА II МАТЕРИАЛЫ ИМЕТОДЫ

II.I. Материалы и оборудование

II.II. Методы исследования^

ГЛАВА UI РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

ГОЛ. Общаяхтратегия. Обоснование выбора компонентов для создания направленных флуоресцентных комплексов

111.1.1. Выбор визуализирующего модуля

Ш.1.2. Выбор направляющего модуля

1П.П. Разработка методов связывания КТ с антителами формата веру

Ш.П.1. Получение рекомбинантных антител 4D5scFv и 425scFv

ГО.П.2. Разработка метода прямой конъюгации КТ с направляющими антителами 4D5scFv

IH.II.2.1. Получение коиъюгатов 4D5scFv с КТ, модифицированных МУК

III.IL2.2. Получение коиъюгатов 4D5scFv с КТ, покрытыми полимером

Ш.П.З. Разработка подхода к связыванию КТ с направляющими антителами через систему BBS

III.IL3.1. Получение и характеристика белков BBS, а также направляющих модулей 425scFv-Bn и 4D5scFv-Bn-4DscFv

III.II.3.2. Получение визуализирующих модулей: конъюгация белков BBS с КТ

lll.ll.S3. Получение флуоресцентных комплексов водорастворимых КТ с рекомбинантными противоопухолевыми антителами

Ш.Ш. Изучение взаимодействия флуоресцентных конструкций на основе КТ с опухолевыми? клетками in ¡vitro

Ш.Ш. 1. Проблема неспецифического связывания КТ с клетками

П1.П1.2. Специфическое окрашивание опухолевых клеток комплексами на основе BBS

III.IV. Барназа-барстар как универсальная система для создания флуоресцентных комплексов направленного действия на основе КТ

III.IV. 1. Преимущества системы молекулярных адапторов барназа-барстар для создания комплексов на основе КТ

IH.IV.2. Примеры использования системы молекулярных адапторов барназа-барстар для включения КТ в состав сложных надмолекулярных структур

III.IV.2.1. Получение флуоресцентных конструкций с использованием полимерных микросфер, сенсибилизированных КТ

III.IV.2.2. Получение многофункциональных наноконструкций на основе BBS с использованием коиъюгатов КТ

III.V. Изучение цитотоксичности КТ и комплексов,* полученных на их основе

III;VI. Визуализация опухолей в организме in vivo с использованием КТ и их комплексов с рекомбинантными антителами' 101'

Ш. VI. 1. Прижизненная визуализация опухолей

III.VI.2. Изучение распределения КТ и их комплексов с рекомбинантными антителами в органах и тканях

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

а. о. - аминокислотный остаток;

АФК - активные формы кислорода;

БСА - бычий сывороточный альбумин;

ГД - гидродинамический диаметр;

ЕА - единица активности;

ИГХ - иммуногистохимический анализ;

ИК - инфракрасный;

ИФА - иммуноферментный анализ;

КТ - квантовые точки (флуоресцентные полупроводниковые нанокристаллы);

МУК - меркаптоуксусная кислота;

ОЕ - оптические единицы;

ОФД - о/^мо-ф енил ен диамин дигидрохлорид;

ПААГ - полиакриламидный гель;

ПЭГ - полиэтиленгликоль;

РЭС - ретикуло-эндотелиальная система;

у. е. - условная еденица;

УФ - ультрафиолетовый;

APS - персульфатаммония;

BBS - система молекулярных адапторов барназа-барстар (англ., barnase-barstar system); BCIP - 5-бромо-4-хлоро-3-индолил-фосфат; DMSO - диметилсульфоксид; DTT - дитиотриэтол;

ED AC - гидрохлорид 1 -этил-3-(3-диметиламинопропил)-карбодиимида; EDTA - динатриевая соль этилендиаминотетрауксусной кислоты; IPTG - изопро лил-1 -тио-в-О-галактозид;

МТТ - 3-(4,5-диметю1тиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолиумбромид; NBT - нитротеразолий синий;

NHSS - натриевая соль N-гидроксисульфосукцинимида; scFv - одноцепочечный вариабельный фрагмент антитела; SDS - додецилсульфат натрия; TEMED - М,М,]М,К-тетраметилэтилендиамин.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Комплексы полупроводниковых нанокристаллов и рекомбнантных антител для флуоресцентной визуализации опухолевых клеток»

ВВЕДЕНИЕ

В современной онкологии большое внимание уделяется поиску новых подходов к диагностике и терапии злокачественных новообразований, в том числе решению таких актуальных задач, как выявление конкретного молекулярного профиля опухоли для подбора индивидуального лечения, высокочувствительная детекция солидных опухолей в глубине тканей, определение точных границ опухоли при ее удалении и др. Создание современных приборов с высоким пространственным разрешением для- получения изображений органов и тканей, а также навигационных систем для контроля при хирургическом вмешательстве ставит задачи разработки новых соединений для высокоэффективной неинвазивной и специфичной визуализации новообразований с применением такой аппаратуры.

Среди современных методов визуализации маркеров и получения изображений биологических объектов, широкое распространение получила флуоресцентная диагностика, успешно использующая в качестве флуорофоров органические красители и флуоресцентные белки. Относительно новым и перспективным источником излучения являются флуоресцентные полупроводниковые нанокристаллы, так называемые квантовые точки. Их применяют как контрастирующие агенты для неспецифической визуализации биологических объектов, а также в виде* конъюгатов с направляющими молекулами для селективного мечения молекулярных мишеней. Разработка флуоресцентных соединений, специфичных к опухолевым клеткам, на основе этих наночастиц с уникальными физико-химическими и фотолюминесцентными свойствами-представляется актуальной задачей, позволяющей существенно расширить возможности традиционных методов флуоресцентной диагностики как in vitro, так и in vivo.

Одним из методов »обеспечения, избирательности и эффективности соединений для

визуализации опухолевых клеток является нацеливание этих соединений на клетки-

мишени с помощью специфичных к опухолевым маркерам антител. Поверхностные

маркеры HERI и HER2/neu - белки хорошо изученного семейства рецепторов

эпидермального фактора роста человека - играют важную роль в нормальном развитии и

дифференцировке клеток, а гиперэкспрессия их генов характерна для целого ряда

распространенных опухолей молочной железы, простаты, легких, яичников и др. и, как

правило, ассоциирована со злокачественностью и плохим прогнозом для пациента.

Указанные рецепторы являются мишенями противоопухолевых антител, разрешенных к

терапевтическому применению, и их выявление в опухолевой ткани является важным

диагностическим и прогностическим признаком, позволяющим скорректировать лечение

и правильно подобрать терапевтические агенты. Кроме того, высокая изменчивость

5

раковых клеток, часто приводящая к неэффективности лечения анти-НЕШ и анти-НЕК2/пеи антителами, делает актуальными дальнейшие фундаментальные исследования молекулярных процессов, которые возникают в опухоли в ответ на действие терапевтических агентов, в том числе, с применением в качестве инструмента исследований полученных соединений на основе квантовых точек.

Разработка подходов к конструированию флуоресцентных соединений на основе квантовых точек и противоопухолевых антител является актуальной проблемой, решение которой позволит получить ряд новых соединений, перспективных для фундаментальных исследований и диагностики социально значимых опухолевых заболеваний, а также позволит создать методическую основу для конструирования аналогичных наночастиц с другими фотолюминесцентными и иммунологическими характеристиками.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Здобнова, Татьяна Александровна

выводы

1. Разработан универсальный подход к связыванию флуоресцентных полупроводниковых нанокристаллов (квантовых точек, КТ) с антителами формата scFv на основе системы молекулярных адаптеров барназа-барстар. Показано, что конъюгация КТ с барназой или барстаром не влияет на их физико-химические свойства, а в ряде случаев значительно повышает стабильность и квантовый выход.

2. На основе системы барназа-барстар созданы флуоресцентные комплексы водорастворимых КТ с рекомбинантными противоопухолевыми антителами 4D5scFv и 425scFv, специфичными к онкомаркерам HER2/neu и HERI, соответственно.

3. Показано эффективное и специфическое окрашивание полученными флуоресцентными комплексами клеток карциномы яичника человека SKOV-3 и аденокарциномы молочной железы человека SKBR-3 (гиперэкспрессирующих онкомаркер HER2/neu), а также клеток эпидермоидной карциномы человека А431 (гиперэкспрессирующих HERI). Установлено, что конъюгация-с барстаром позволяет значительно уменьшить неспецифическое связывание КТ с поверхностью клеток.

4. С помощью комплексов КТ с антителами 4D5scFv методом флуоресцентной проекционной визуализации получены прижизненные изображения аденокарциномы молочной железы человека, привитой иммунодефицитным мышам. Показано, что такое специфическое мечение опухоли позволяет получить более контрастное изображение, а также увеличить интенсивность и длительность сигнала в 1.5-2 раза по сравнению с использованием биоинертных КТ.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящей работе предложены методы создания направленных флуоресцентных агентов на основе КТ для биологических исследований in vivo и in vitro. Впервые было предложено использовать для связывания КТ с направляющими агентами адапторную систему модулей барназа-барстар.

На основе предложенных методов создан ряд флуоресцентных противоопухолевых конструкций на основе КТ и рекомбинантных мини-антител формата scFv, специфически узнающих определенные онкомаркеры, экспрессирующиеся на поверхности опухолевых клеток. Полученные конструкции показали отличную яркость, стабильность и специфичность в экспериментах по визуализации опухолевых клеток в культуре.

Использование адапторной системы барназа-барстар позволило значительно снизить неспецифическое связывание, характерное для КТ, а также производить окрашивание в одну или две стадии (с предварительным нацеливанием) по выбору экспериментатора. Метод связывания КТ с мини-анителами через систему барназа-барстар является универсальным и позволяет легко изменять тип или цвет используемых КТ, также как и антитело. Для доказательства универсальности метода были созданы и протестированы комплексы двух типов КТ (модифицированных МУК и покрытых полимерной оболочкой) различных цветов (с максимумом флуоресценции 565, 605 и 705 нм) с антителами разной специфичности. Кроме того, было показано, что данный метод может успешно использоваться для связывания с мини-антителами больших полимерных микросфер, наполненных КТ, а также для • получения сложных направленных мультимодальных самособирающихся конструкций на основе КТ и магнитных частиц.

Во второй части работы полученные флуоресцентные комплексы на основе КТ и aHTH-HER2/neu антител 4D5scFv были использованы для визуализации модельной опухоли человека, привитой мыши-опухоленосителю, с помощью диффузионной флуоресцентной томографии. Были изучены динамика накопления направленных и ненаправленных КТ в опухоли и их распределение по органам и тканям. Высокий уровень контраста, длительное нахождение в опухоли и возможность количественной обработки результатов позволяют предположить, что направленные комплексы КТ в сочетании с методом ДФТ являются перспективными флуорофорами для неинвазивной диагностики опухолей. Однако обнаруженное значительное накопление КТ в органах РЭС и проблемы с выведением этих наночастиц из организма свидетельствуют о необходимости дальнейших исследований в этой области и работ по оптимизации комплексов КТ для применения in vivo.

В заключение автор выражает искреннюю благодарность коллективу сотрудников лаборатории молекулярной иммунологии ИБХ РАН за обучение, советы, помощь и создание дружеской рабочей атмосферы, в особенности Олегу Стремовскому, Екатерине Николаевне Лебеденко, Максиму Никитину и заведующему лабораторией Сергею Михайловичу Дееву; сотрудникам лаборатории клеточных технологий и биофотоники Нижегородского государственного университета им. Н.И. Лобачевского и лично руководителю лаборатории Ирине Владимировне Балалаевой - за помощь в проведении исследований по визуализации ш vivo; а также Александру Михайловичу Сергееву за поддержку.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Здобнова, Татьяна Александровна, 2011 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Adams G.P., Schier R., McCall A.M., Simmons H.H., Horak E.M., Alpaugh R.K., Marks J.D., Weiner L.M. High affinity restricts the localization and tumor penetration of single-chain fV antibody molecules // Cancer Res. 2001. V. 61. P. 4750-4755.

2. Akerman M.E., Chan W.C., Laakkonen P., Bhatia S.N., Ruoslahti E. Nanocrystal targeting in vivo // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002. V. 99. P. 12617-12621.

3. Aldana J., Wang Y.A., Peng X. Photochemical instability of CdSenanocrystals coated by hydrophilic thiols // J. Am. Chem. Soc. 2001. V. 123. P. 8844-8850.

4. Alivisatos P. The use of nanocrystals in biological detection // Nature Biotechnol. 2004. V. 22. P. 47-52.

5. Bach H., Mazor Y., Shaky S., Shoham-Lev A., Berdichevsky Y., Gutnick D.L., Benhar I. Escherichia coli maltose-binding protein as a molecular chaperone for recombinant intracellular cytoplasmic single-chain antibodies // J. Mol. Biol. 2001. V. 312. P. 79-93.

6. Bagalkot V., Zhang L., Levy-Nissenbaum E., Jon S., Kantoff P.W., Langer R., Farokhzad O.C. Quantum dot-aptamer conjugates for synchronous cancer imaging,.therapy, and sensing of drug delivery based on bi-fluorescence resonance energy transfer // Nano Lett. 2007. V. 7. P. 3065-3070.

7. Balandin T.G., Edelweiss E., Andronova N.V., Treshalina E.M., Sapozhnikov A.M., Deyev S.M. Antitumor activity and toxicity of anti-HER2 immunoRNasescFv 4D5-dibarnase in mice bearing human breast cancer xenografts // Invest. New Drugs. 2009; V. 29. P. 22-32.

8. Ballou B., Lagerholm B.C., Ernst L.A., Bruchez M.P., Waggoner A.S. Noninvasive imaging of quantum dots in mice// Bioconjug. Chem. 2004. V. 15. P: 79-86.

9. Batra S.K., Jain M., Wittel U.A., Chauhan S.C., Colcher D. Pharmacokinetics- and biodistribution of genetically engineered antibodies// Curr. Opin. Biotechnol. 2002. V. 13. P. 603-608.

10. Bennett M.J., Schlunegger M.P., Eisenberg D. 3D domain swapping: a mechanism for oligomers assembly // Prot. Sci. 1995. V. 4. P. 2455-2468>

11. Bentzen E.L., Tomlinson I.D., Mason J., Gresch P., Warnement M.R., Wright D., Sanders-Bush E., Blakely R:, Rosenthal S.J. Surface modification to reduce nonspecific binding of quantum dots in live cell assays // Bioconjug. Chem. 2005. V. 16. P. 1488-1494.

12. Bharali D.J., Lucey D.W., Jayakumar H., Pudavar H.E., Prasad P.N. Folate-receptor-mediated delivery of InP quantum dots for bioimaging using confocal and two-photon microscopy // J. Am. Chem. Soc 2005. V. 127. P. 11364-11371.

13. Bird R.E., Hardman K.D., Jacobson J.W., Johnson S., Kaufman B. M., Lee S., M., Lee T., Pope S. H., Riordan G. Si, Whitlow M. Single-chain antigen-binding proteins // Science. 1988. V. 242. P. 423—426.

14. Borsi L., Balza E., Bestagno M., Castellani P., Carnemolla B., Biro A., Leprini A., Sepulveda J., Burrone O., Neri D., Zardi L. Selective targeting of tumoral vasculature: comparison of different formats of an antibody (LI9) to the ED-B domain of fibronectin // Int. J. Cancer. 2002. V. 102. P. 75-85.

15. Bouzigues C., Levi S., Triller A., Dahan M. Single quantum dot tracking of membrane receptors // Methods Mol. Biol. 2007. V. 374. P. 81-91.

16. Bruchez M.Jr., Moronne M., Gin P., Weiss S., Alivisatos A.P. Semiconductor nanocrystals as fluorescent biological labels // Science. 1998. V. 281. P. 2013-2016.

17. Bullen C., Mulvaney P. The effects of chemisorption on the luminescence of CdSe quantum dots // Langmuir. 2006. Y.22. P. 3007-3013.

18. Cai W., Shin D.W., Chen K., Gheysens O., Cao Q., Wang S.X., Gambhir S.S., Chen X. Peptide-labeled near-infrared quantum dots for imaging tumor vasculature in living subjects // Nano Lett. 2006. V. 6. P. 669-676.

19. Campbell R.B., Fukumura D., Brown E.B., Mazzola L.M., Izumi Y., Jain R.K., Torchilin V.P., Munn L.L. Cationic charge determines the distribution of liposomes between the vascular and extravascular compartments of tumors // Cancer Res.2002. V. 62. P. 6831-6836.

20. Carter P., Presta L., Gorman C.M., Ridgway J.B., Henner D., Wong W.L., Rowland A.M., Kotls C., Carter M.E., Shepard H.M. Humanization of an anti-pl85HER2 antibody for human cancer therapy // Proc. Natl. Acad: Sci. USA. 1992. V. 89.- P. 4285-4289.

21. Chan W.C., Maxwell D.J., Gao X., Bailey R.E., Han M., Nie S. Luminescent quantum dots for multiplexed biological detection and imaging // Curr. Opin. Biotechnol. 2002. V. 13. P. 40-46.

\

22. Chan W.C., Nie S. Quantum dot bioconjugates for ultrasensitive nonisotopic detection // Science. 1998. V. 281. P. 2016-2018.

23. Chen C., Peng J., Xia H., Yang G., Wu Q., Chen L., Zeng L., Zhang Z., Pang D., Li Y. Quantum* dots-based immunofluorescence technology for the quantitative determination of HER2 expression in breast cancer // Biomaterials. 2009. V. 30. P.'2912-2918:

24. Chen L.D., Liu J., Yu X.F., He M., Pei X.F., Tang Z.Y., Wang Q.Q., Pang DiW., Li Y. The biocompatibility of quantum dot probes used for the targeted imaging of hepatocellular carcinoma metastasis // Biomaterials. 2008. V. 29.- P. 4170-4176.

25. Cho S.J., Maysinger D., Jain M., Roder B., Hackbarth S., Winnik F.M. Long-term exposure to CdTe quantum dots causes functional impairments in live cells // Langmuir. 2007. V. 23. P. 1974-1980.

26. Choi H.S., Liu W., Liu F., Nasr K., Misra P., Bawendi M.G., Frangioni J.V. Design considerations for tumour-targeted nanoparticles // Nat. Nanotechnol. 2010. V. 5. P. 42-47.

27. Choi H.S., Liu W., Misra P., Tanaka, E., Zimmer J.P., Itty Ipe B., Bawendi M.G., Frangioni J.V. Renal clearance of quantum dots //Nat. Biotechnol. 2007. V. 25. P. 1165-1170.

28. Chu T.C., Shieh F., Lavery L.A., Levy M., Kortum R.R., Korgel B.A, Ellington A.D. Labeling tumor cells with fluorescent nanocrystal-aptamerbioconjugates // Biosens. Bioelectron. 2006. V.21.P. 1859-1866.

29. Chudakov D.M., Lukyanov S., Lukyanov K.A. Fluorescent proteins as a toolkit for in vivo imaging // Trends Biotechnol. 2005. V. 23. P. 605-613.

30. Corlu A., Choe R., Durduran T., Rosen M.A., Schweiger M., Arridge S.R., Schnall M.D., Yodh A.G. Three-dimensional in vivo fluorescence diffuse optical tomography of breast cancer in humans // Optics Express. 2007. V. 15. P. 6696-6716.

31. Dabbousi B.O., Rodríguez-Viejo J., Mikulec F.V., Heine J.R., Mattoussi H., Ober R., Jensen K.F., Bawendi M.G. (CdSe)ZnS core-shell quantum dots: synthesis and optical and structural characterization of a size series of highly luminescent materials // J. Phys. Chem. B. 1997. V. 101. P. 9463-9475.

32. Dahan M. From analog to digital: exploring cell dynamics with single quantum dots // Histochem. Cell Biol. 2006.Y. 125. P. 451-456.

33. Dahan M., Levi S., Luccardini C., Rostaing P., Riveau B., Triller A. Diffusion dynamics of glycine receptors revealed by single-quantum dot tracking // Science. 2003; V. 302. P. 442445.

34. Davis C.G., Gallo MIL., Corvalan J.R. Transgenic mice as a source of fully human antibodies for the treatment of cancer //Cancer Metastasis Rev. 1999. V. 18: P.421-425.

35. Dean G.S., Pusztai L.,-Xu F.J., O'Briant K., DeSombre K., Conaway M., Boyer C.M., Mendelsohn J., Bast R.C.Jr. Cell surface density of pl85(c-erbB-2) determines susceptibility to anti-pl85(c-erbB-2)-ricin A chain (RTA) immunotoxin therapy alone and in combination with anti-p 170(EGFR)-RTA in ovarian cancer cells // Clin. Cancer Res. 1998. V. 4. P. 2545-2550.

36. Deyev S.M., Lebedenko E.N. Multivalency: the hallmark of antibodies used' for optimization of tumor targeting by design // Bioessays. 2008. V. 30. P. 904-918:

37. Deyev S.M., Waibel R., Lebedenko E.N., Schubiger A.P., Pluckthun A.- Design of multivalent complexes using the barnase-barstar module // Nat. Biotechnol. 2003. V. 21. P. 1486-1492.

38. Diagaradjane P., Orenstein-Cardona J.M., Colón-Casasnovas N.E., Deorukhkar A., Shentu S., Kuno N.. Schwartz D:L., Gelovani J.G., Krishnan S. // Clin. Cancer Res. 2008. V. 14. P. 731-741.

39. Dobrovolskaia M.A., McNeil S.E. Immunological properties of engineered nanomaterials //Nat. Nanotechnol. 2007. V. 2. P. 469-478.

40. Duan H., Nie S. Cell-penetrating quantum dots based on multivalent and endosome-disrupting surface coatings // J. Am. Chem. Soc. 2007. V. 129. P. 3333-3338.

41. Edelweiss E., Balandin T.G., Ivanova J.L., Lutsenko G.V., Leonova O.G., Popenko V.I., Sapozhnikov A.M., Deyev S.M. Barnase as a new therapeutic agent triggering apoptosis in human cancer cells // PLoS ONE. 2008. V. 3. P. e2434.

42. Eigenbrot C., RandalM., PrestaL., CarterP., KossiakoffA.A. X-ray structures of the antigen-binding domains from three variants of humanized anti-p 185HER2 antibody 4D5 and comparison with molecular modeling // J. Mol. Biol. 1993. V. 229. P. 969-995.

43. Estrada C.R., Salanga M., Bielenberg D.R., Harrell W.B., Zurakowski D., Zhu X., Palmer M.R., Freeman M.R., Adam R.M. Behavioral profiling of human transitional cell carcinoma ex vivo // Cancer Res. 2006. V. 66. P. 3078-3086.

44. Fischer H., Liu L., Pang K.S., Chan W. Pharmacokinetics of nanoscale quantum dots: in vivo distribution, sequestration, and clearance in the rat // Adv. Funct. Mater. 2006. V. 16. P. 1299-1305.

45. Fountaine T.J., Wincovitch S.M., Geho D.H., Gargield S.H., Pittaluga S. Multispectral imaging of clinically relevant cellular targets in tonsil and lymphoid tissue using semiconductor quantum dots // Mod. Pathol. 2006. V. 19. P. 1181-1191.

46; Frangioni J.V. In vivo near-infrared fluorescence imaging // Curr. Opin. Chem. Biol. 2003. V. 7. P. 626-634.

47. Freund C, Ross A, Guth B, Plückthun A, Holak TA. Characterization of the linker: peptide of the single-chain Fv fragment of an antibody by NMR spectroscopy // FEBS Lett. 1993. V. 320. P. 97-100;

48; Gao X., Cui Y;, Levenson? R.M., Chung L.W., Nie S. In vivo cancer targeting andr imaging withsemiconductor, quantum dots // Nat. Biotechnol. 2004. V. 22. P. 969-976.

49; Gaponik N., Talapin D:V., Rogach;A.L., Hoppe K., Shevchenko E.V., Kornowski A., Eychmüller A., Weller H. Thiol-capping of CdTe nanocrystals: an alternative to organometallic synthetic routes// J. Phys. Chem. B: 2002. V. 106. P. 7177-7185. •

50; Ge L., Knappik A., Pack P.', Freundr C., Plückthun A. Expressing , antibodies in Escherichia coli H Antibody Engeneering.. C.A:.K'. Borrebeack, Edi Oxford University Press. Inc New York. 1995. P. 229-266; ' '

51. Giepmans B:N., Adams. S.RC, Ellisman :M;H;, Tsien R;Y. The fluorescent toolbox for assessing^^protein location and function // Science: 2006. V.,312. P. 217-224. :

52: Goldman: E.R., Clapp A.R.,, Anderson- G.P., Uyeda ' H.T., Mauro J.M., Medintz IiL., MattoussiH; Multiplexed.toxin analysis using1 four^^ colors of quantum:dot=fluororeagents// Anal; Chem. 2004. V. 76. P. 684-688. : >

53. GreenN.M: Avidin and streptavidin // Methods Enzymol. 1990: V. 184. P. 51-67.

54- Greenberg A.Si, Avilia D.s, Hughes M.' Hughes A', McKinney EC, Flajnik MF A new antigen receptor gene family that undergoes rearrangement and extensive somatic diversification in sharks.//Nature. 1995. V. 374. P. 168-173.

55; Grzelczak MC,.. Vermant Ji, Fürst -E.M., Liz-Marzäni L.M. Directed! self-assembly of nanoparticles// ACS Nano: 2010: V. 4. P. 359T-3605.

56. Hainfeld J.F., Liu W., Halsey C.M.R.., Freimuth P., Powell R.D. Ni-NTAgold clusters target His-tagged proteins // J. Stuct. Biol; 1999: V. 127. P.' 185-198;:

57. Hamers-Casterman C. Atarhouch T., Muyldermans S; Robinson G, Hamers C, Songa EB, BendahmanN, Hamers R. Naturally occurring antibodies devoid of light chains. //Nature. 1993. V. 363. P.446-448. . .'

58; Haram S.K., Quinn B.M., Bard A.J; Electrochemistry of CdS nanoparticles: a correlation between optical and electrochemical band gaps //J. Am. Chem. Soc. 2001. V. 123. P. 88608861.

59. Hardman R. A toxicologic review of quantum dots: toxicity depends on physicochemical and environmental factors // Environ. Health Perspect. 2006. V. 114. P. 165-172.

60. Hartley R.W., Rogerson D.L. Production and purification of the extracellular ribonuclease of Bacillus amyloliquefaciens (barnase) and its intracellular inhibitor (barstar). I. Barnase // Prep.Biochem. 1972. V. 2. P. 229-242.

61. Hauck T.S., Anderson R.E., Fischer H.C., Newbigging S., Chan W.C. In vivo quantum-dot toxicity assessment// Small. 2010. V. 6. P. 138-144.

62. Hermanson G.T. Bioconjugate techniques // Academic Press. 1996. 785 pp.

63. Hoshino A., Fujioka K., Oku T., Suga M., Sasaki Y., Ohta T.S., Yasuhara M., Suzuki K., Yamamoto K. Physicochemical properties and cellular toxicity of nanocrystal quantum dots depend on their surface modification // Nano Lett. 2004. V. 4. P: 2163-2169.

64. Hoshino A., Hanada S., Manabe N., Nakayama T., Yamamoto K. Immune response induced by fluorescent nanocrystal quantum dots in vitro and in vivo // IEEE Trans. Nanobioscience. 2009. V. 8. P. 51-57.

65. Huston J.S., Levinson D., Mudgett-Hunter M., Tai M.S., Novotny J., Margolies M.N. Ridge R.J., Bruccoleri R.E., Haber E., Crea R., Oppermann H. Protein engineering of antibody binding sites: recovery of specific activity in an anti-digoxin single-chain Fv analogue produced in Echerichia coli // Proc. Natl. acad. Sci. USA. 1988. V. 85. P. 5879-5883.

66. Hynes N.E., Gerber H.A., Saurer S., Roner B. Overexpression of the c-erbB-2 protein in human breast tumor cell lines // J. Cell. Biochem. 1989. V. 39. P. 167-173.

67. Jain R.K. Delivery of molecular medicine to solid tumors: lessons from in vivo imaging of gene expression and function // J. Control. Release. 2001. V. 74. P. 7-25.

68. Jaiswal J.K., Mattoussi H., Mauro J.M., Simon S.M. Long-term multiple color-imaging of live cells using quantum dot bioconjugates // Nat. Biotechnol. 2003. V. 21. P.* 47-51.

69. Jinno H., Ueda M., Ozawa S. Kikuchi K, Ikeda T, Enomoto K, Kitajima M. Epidermal growth factor receptor-dependent cytotoxic effect by an EGF-ribonuclease conjugate on human cancer cell lines—a trial for less immunogenic chimeric toxin // Cancer Chemother. Pharmacol. 1996. V. 38. P. 303-308.

70. Jurado P., de Lorenzo V., Fernandez L.A. Thioredoxin fusions increase folding of single chain F,v antibodies in the cytoplasm of Escherichia coli: evidence that chaperone activity is the prime effect of thioredoxin //J. Mol. Biol.2006. V. 357. P. 49-61.

71. Kairdolf B.A., Mancini M.C., Smith A.M., Nie S. Minimizing nonspecific cellular binding of quantum dots with hydroxyl-derivatized surface coatings // Anal. Chem. 2008. V. 80. P. 3029-3034.

72. Kawashima N., Nakayama K., Itoh K., Itoh T., Ishikawa M., Biju V. Reversible dimerization of EGFR revealed by single-molecule fluorescence imaging using quantum dots // Chemistry. 2010. V. 16. P. 1186-1192.

73. Keif T.A., Sreenivasan V.K., Sun J., Kim E.J., Goldys E.M., Zvyagin A.V. Non-specific cellular uptake of surface-functionalized quantum dots //Nanotechnology. 2010. V. 21. e285105.

74. Kenanova V., Olafsen T., Crow D:M., Sundaresan G., Subbarayan M., Carter N.H., Ikle D.N., Yazaki P.J., Chatziioannou A.F., Gambhir S.S., Williams L.E., Shively J.E., Colcher D., Raubitschek A.A., Wu A.M. Tailoring the pharmacokinetics and positron emission tomography imaging properties of anti-carcinoembryonic antigen single-chain Fv-Fc antibody fragments // Cancer Res. 2005. V. 15. V. 65. P. 622-631.

75. Kim S., Lim Y.T., Soltesz E.G., De Grand A.M., Lee J., Nakayama A., Parker J.A., Mihaljevic T., Laurence R.G., Dor D.M., Cohn L.H., Bawendi M.G., Frangioni J.V. Nearinfrared fluorescent type II quantum dots for sentinel lymph node mapping // Nat. Biotechnol. 2004. V. 22. P: 93-97.

76. King D.J., Turner A., Farnsworth A.P., Adair J.R., Owens- R.J., et al. Improved tumor targeting with chemically cross-linked recombinant antibody fragments // Cancer Res. 1994. V. 54. P. 6176-6185.

77. Kipriyanov S.M., Moldenhauer G., Schuhmacher J., Cochlovius B., Yon der Lieth C.W., et al. Bispecific tandem diabody for tumor therapy with improved antigen binding and pharmacokinetics //J. Mol. Biol. 1999. V. 293. P. 41-56;

78. Kirchner C., Liedl T., Kudera S., Pellegrino T., Javier A.M., Gaub H.E., Stolzle S., Fertig N., Parak W.J. Cytotoxicity of colloidal1 CdSe and CdSe/ZnS nanoparticles // Nano Lett. 2005. V.5.P. 331-338.

79. Ko M.H., Kim< S;, Kang WJ., Lee J.H., Kang H., Moon S.H., Hwang D.W., Ko H.Y., Lee D.S. In vitro derby imaging of cancer biomarkers using quantum dots // Small. 2009; V. 5. P.1207-1212.

80: Kobayashi H., Hama Y., Koyama Y., Barrett T., Regino C.A., Urano Y., Choyke P.L. Simultaneous multicolor imaging of five different- lymphatic basins using quantum dots // Nano Lett. 2007. V. 7. P. 1711-1716.

81. Laemmli U.K., Beguin F., Gujer-Kellenberger, G. A factor preventing the major head, protein of bacteriophage T4 from random aggregation // J. Mol. Biol. .1970. V." 47. P: 69-85.

82. Larson D.R., Zipfel W.R., Williams R.M1, Clark S.W., Bruchez M.P., Wise F.W., Webb W.W. Water-soluble quantum-dots for multiphoton fluorescence imaging in vivo // Science. 2003. V. 300. P: 1434-1436.

83. Larson S.M., El-Shirbiny A.M., Divgi C.R., Sgouros G., Finn R.D., Tschmelitsch J., Picon A., Whitlow M., Schlom J., Zhang J., Cohen A.M. Single chain antigen-binding protein (sFv CC49): first human studies in colorectal carcinoma metastatic to liver // Cancer. 1997. V.

80. P. 2458-68.

84. Lebedenko E.N., Balandin T.G., Edelweiss E.F., Georgiev O., Moiseeva E.S.,Deyev S.M. Visualization of cancer cells by means of the fluorescent EGFP-barnase protein // Dokl. Biochem. Biophys. 2007. V. 414. P. 120-123.

85. Li Z., Wang K., Tan W., Li J., Fu Z., Ma C., Li H., He X, Liu J. Immunofluorescent labeling of cancer cells with quantum dots synthesized in aqueous solution // Anal. Biochem. 2006. V. 354. P. 169-174.

86. Lidke D.S., Nagy P., Heintzmann R., Arndt-Jovin D.J., Post J.N., Grecco H.E., Jares-Erijman E.A., Jovin T.M. Quantum dot ligands provide new insights into erbB/HER receptor-mediated signal transduction //Nat. Biotechnol. 2004. V. 22. P. 198-203.

87. Lidke D.S., Nagy P., Jovin T.M., Arndt-Jovin D.J. Biotin-ligand complexes with streptavidin quantum dots for in vivo cell labeling of membrane receptors // Methods Mol. Biol. 2004. P. 69-79.

88. Lin X., Xie J., Chen X. Protein-based'tumor molecular imaging probes // Amino Acids. 2010. DOI: 10.1007/s00726-010-0545-z

89. Lovric J., Cho S.J., Winnik F.M., Maysinger D. Unmodified cadmium telluride quantum dots induce reactive oxygen species formation leading to multiple organelle damage and cell death// Chem. Biol. 2005. V. 12. P. 1227-1234.

90. Luciani A., Itti E., Rahmouni A., Meignan M., Clement O. Lymph'node imaging: basic principles.//Eur. J. Radiol. 2006. V.58. P. 338-344.

91. Maeda H., Wu J., Sawa T., Matsumura Y., Hori K. Tumor vascular permeability and the EPR effect in macromolecular therapeutics: a review // J. Control. Release. 2000. V. 65. P. 271284.

92. Mahmoud W., Sukhanova A., Oleinikov V., Rakovich Y.P., Donegan J.F.,,Pluot M., Cohen J.H., Volkov Y., Nabiev I. Emerging applications of fluorescent nanocrystals quantum dots for micrometastases detection // Proteomics. 2010. V. 10. P. 700-716.

93. Makrides S.C., Gasbarro C., Bello J.M. Bioconjugation of quantum dot luminescent probes for Western blot analysis // Biotechniques. 2005. V. 39. 501-506.

94. Mancini M.C., Kairdolf B.A., Smith AM., Nie S. Oxidative quenching and degradation of polymer-encapsulated quantum* dots: new insights into the long-term fate and, toxicity of nanocrystals in vivo II J. Am. Chem. Soc. 2008. V. 130. P: 10836-10837.

95. Martsev S.P., Tsybovsky Y.I., Stremovskiy O.A., Odintsov S.G., Balandin T.G., Arosio P., Kravchuk Z.I., Deyev S.M. Fusion of the antiferritin antibody VL domain to barnase results in enhanced solubility and altered pH-stability // Protein Eng. Des. Sel. 2004. V. 17. P. 85-93.

96. Mattoussi H., Mauro J.M., Goldman E.R., Anderson G.P., Sundar V.C., Mikulec F.V., BawendiM.G.Self-assemly of CdSe-ZnS quantum dots bioconjugates using an engineered recombinant protein//J. Am. Chem. Soc. 2000.V.122. P. 12142-12150.

97. Medintz I.L., Uyeda H.T., Goldman E.R., Mattoussi H. Quantum dot bioconjugates for imaging, labelling and sensing //Nat. Mater. 2005 V. 4. P. 435-446.

98. Melkko S., Halin C., Borsi L. Zardi L, Neri D. An antibody-calmodulin fusion protein reveals a functional dependence between macromolecular isoelectric point and tumor targeting performance // Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 2002. V. 46. P. 726-733.

99. Miller K., Meng G., Liu J., Hurst A., Hsei V., Wong W.L., Ekert R., Lawrence D., Sherwood S., DeForge L., Gaudreault J., Keller G., Sliwkowski M., Ashkenazi A., Presta L. Design, construction, and in vitro analyses of multivalent antibodies // J. Immunol. 2003. V. 170. P. 4854-4861.

100. Mossakowska D.E., Nyberg K.,Fersh A.R. Kinetic characterization of the recombinant: ribonuclease from Bacillus amyloliquefaciens (barnase) and investigation of key residues in catalysis by site-directed mutagenesis // Biochemistry. 1989. V.28. P. 3843-3850.

101. Miiller K.M., Arndt K.M.,Strittmatter W., Pluckthun A. The first constant domain (C(H)1 and C(L)) of an antibody used as heterodimerization domain for bispecificminiantibodies // FEBS Lett. 1998. Y. 422. P. 259-264.

102. Murray C.B., Norris D.J., Bawendi M.G. Synthesis and characerization of nearly monodisperse CdE (E=S, Se, Te) semiconductor nanocrystallites // J. Am. Ghem. Soc. 1993. Y. 115; P; 8706.

103; Natarajan A, Xiong CY, Gruettner C, DeNardo GL, DeNardo SJ. Development of multivalent radioimmunonanoparticles for cancer imaging and therapy // Cancer Biother. Radiopharm: 2008; V. 23. R 82-91.

104. Newton J.R., Miao Y., Deutscher S.L., Quinn T.P. Melanoma imaging with pretargeted, bivalent bacteriophage // J. Nucl. Med. 2007. Y. 48. P. 429-436.

105; Nobs L., Buchegger F., Gurny R., Alleman E.' J Biodegradable nanoparticles -for direct or. two-step tumor immunotargeting // Bioconjugate Chem. 2006. V. 17. P: 139-145.

106; Ntziachristos V., Turner G., Dunham J., Windsor S:, Soubret A.,. RipollJ:,.Shih H.A. Planar fluorescence imaging using normalized data// J. Biomed. Opt. 2005. V. 10. 064007.

107. Olafsen T., Kenanova Y.E., Sundaresan G., Anderson A.L., Crow D., Yazaki P.J., Li L., Press M.F., -Gambhir S.S., Williams L.E., Wong J.Y., Raubitschek A.A., Shively J.E., Wu A.M. Optimizing radiolabeled engineered anti-p 185HER2 antibody fragments ^ for in; vivo imaging // Cancer Res. 2005. V. 65: P. 5907-5916.

108i Ozcelik C., Erdmann B., Pilz B., Wettschureck N., Britsch; S., Hiibner N., Chien K.R., Birchmeier :C., Garratt A.N. Conditional mutation of the ErbB2 (HER2) receptor in cardiomyocytes leads to dilated cardiomyopathy // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S; A. 2002. V. 99. P: 8880-8885.

109: Pack P., Pluckthun A. Miniantibodies: use of amphipathic helices to produce functional,. flexibly linked; dimeric FV fragments with high avidity in Escherichia coll II Biochemistry. 1992. V. 31. P. 1579-1584.

110. Parak W.J., Boudreau R., Gros MX., Gerion D., Zanchet D., Micheel C.M., Williams S.C., Alivisatos A.P., LarabellC.A.Cell motility and metastatic potential studies based on quantum dot imaging of phagokinetic tracks // Adv. Mater .2002. V. 14. P. 882-885.

111. Parak W.J;, Gerion D;, Pellegrino T., Zanchet D;, Micheel C., Williams S.C., Alivisatos A.P., Boudreau R., Le Gros M.A., Larabell C.A. Biological; applications of colloidal nanocrystals//Nanotech: 2003. V. 14; P. 15-27.

112. Pathak S., Davidson M.C., Silva G.A. Characterization of the functional binding properties of antibody conjugated quantum dots //Nano Lett. 2007. V. 7. P. 1839-1845.

113. Pearce L.A., Oddie G.W., Coia G., Kortt A.A., Hudson P.J. et al. Linear gene fusions of antibody fragments with streptavidin can be linked to biotin labelled secondary molecules to form bispecific reagents // Biochem. Mol. Biol. Int. 1997. V. 42. P. 1179-1188.

114. Pellegrino T., Manna L., Kudera S. Hydrophobic nanocrystals coated with an amphiphilic polymer shell: a general route to water soluble nanocrystals // Nano Lett. 2004. V. 4. P. 703-707.

115. Pelley J.L., Daar A.S., Saner M.A. State of academic knowledge on toxicity and biological fate of quantum dots // Toxicol. Sci. 2009. V. 112. P. 276-296.

116. Pinaud F., King D:, Moore H.-P., Weiss S. Bioactivation and cell targeting of semiconductor CdSe/ZnS nanocrystals with phytochelatin-related peptides. // J. Am. Chem. Soc. 2004. V. 126. P. 6115-6123.

117. Prior T.I., Helman L.J., Fitz Gerald D.J., Pastan I. Barnase toxin: a new chimeric toxin composed of pseudomonas exotoxin A and barnase // Cancer Res. 1991.V. 51. P. 174-180.

118. Protasevich I.I., Schulga A.A., Vasilieva L.I., Polyakov K.M., Lobachov V.M., Hartley R.W., Kirpichnikov M.P., Makarov A.A. Key role of barstar Cys-40 residue in the mechanism of heat denaturation of bacterial ribonuclease complexes with barstar // FEBS Lett 1999. V. 445. P: 384-388:

119. Ramachandran S., Udgaonkar J.B. Stabilization of barstar by chemical modification-of the buried cysteines // Biochemistry. 1996:V. 35. P. 8776-8785.

120. Ravizzini G., Turkbey B., Barrett T., Kobayashi II., Choyke P.L. Nanoparticles in sentinel lymph node mapping // Wiley Interdiscip. Rev. Nanomed. Nanobiotechnol. 2009. V. 1. P. 610-23.

121. Resh-Genger U., Grabollel M., Cavaliere-Jaricot S., Nitschke R., Nann T. Quantum dots versus organic dyes as fluorescent labels nature methods // Nat. methods. 2008. V. 5. P. 763-775.

122. Riechmann L, Clark M, Waldmann H, Winter G. Reshaping human antibodies for therapy//Nature. 1988: V. 332. P! 323-327.

123. Rodrigues M.L., Snedecor B:, Chen C., Wong W.L., Garg S. et al. Engineering Fab fragments for efficient F(ab)2 formation in Escherichia coli and for improved in vivo stability // J.Immunol. 1993. V. 151. P. 6954-6961.

124. Rogach A.L., Katsikas L., Kornowski A., Su D., Eychmiiller A., Weller H.Synthesis and Characterization of Thiol-Stabilized CdTeNanocrystals // Ber. Bunsenges Phys. Chem. 1996. V. 100. P. 1772-1778.

125. Ross J.S., Gray K., Gray G.S., Worland P.J., Rolfe M. Anticancer antibodies // Am. J. Clin. Pathol. 2003. V. 119. P. 472-485.

126. Rossi E.A., Goldenberg D.M., Cardillo T.M., McBride W.J., Sharkey R.M. et al. Stably tethered multifunctional structures of defined composition made by the dock and lock method for use in cancer targeting // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 2006. V. 103. P.16841-6846.

127. Rousserie G., Sukhanova A., Even-Desrumeaux K., Fleury F., Chames P., Baty D., Oleinikov V., Pluot M., Cohen-J.H., Nabiev I.Semiconductor quantum dots for multiplexed bio-detection on solid-state microarrays // Crit. Rev. Oncol. Hematol. 2010. V. 74. P. 1-15.

128. Rushizky G.W., Greco A.E., Hartley R.W., Sober H.A. Studies on B.subtilisribonuclease I. Characterization of enzymatic specifity // Biochemistry. 1963. Y.2. P. 787-793.

129. Rzigalinski B.A., Strobl J.S. Cadmium-containing nanoparticles: perspectives on pharmacology and toxicology of quantum dots // Toxicol. Appl. Pharmacol. 2009. V. 238. P. 280-288.

130. Saga T., Weinstein J.N., Jeong J.M., Heya T., Lee J.T. et al. Two-step targeting of experimental lung metastases with biotinylated antibody and radiolabeled streptavidin // Cancer Res. 1994. V. 54. P. 2160-2165.

131. Santimaria M., Moscatelli G., Viale G.L., Giovannoni L., Neri G., Viti F., Leprini A., Borsi L., Castellani P., Zardi L., Neri D., Riva P. Immunoscintigraphic detection of the ED-B domain of fibronectin, a marker of angiogenesis, in patients with cancer // Clin. Cancer Res. 2003. V. 9. V. 571-579.

132. Schipper M.L., Iyer G., Koh A.L.,. Cheng Z., Ebenstein Y., Aharoni A., Keren S., Bentolila L.A., Li J., Rao J., Chen X., Banin U., Wu A.M., Sinclair R., Weiss S., Gambhir S.S. Particle size, surface coating, and PEGylation influence the biodistribution of quantum dots in living mice // Small. 2009. V. 5. P. 126-134.

133. Schulga A., Kurbanov F., Kirpichnikov M., Protasevich I., Lobachov V., Ranjbar B., Chekhov V., Polyakov K., Engelborghs Y., Makarov A. Comparative study of binase and barnase: experience in chimeric ribonucleases // Protein Eng. 1998: V.l 1. P. 775-782.

134. Semenyuk E.G., Stremovskiy O.A., Edelweiss E.F., Shirshikova O.V., Balandin T.G., et al. Expression of single-chain antibody-barstar fusion in plants // Biochimie. 2007. V. 89. P.31— 38.

135. Serebrovskaya E.O., Edelweiss E.F., Stremovskiy O.A., Lukyanov K.A., Chudakov D.M., Deyev S.M. Targeting cancer cells by using an antireceptor antibody-photosensitizer fusion protein //Natl. Acad. Sci. U S A. 2009. V. 106. P. 9221-9225.

136. Sergina N.V., Moasser M.M. The HER family and cancer: emerging molecular mechanisms and therapeutic targets // Trends Mol. Med. 2007. V. 13. P. 527-534.

137. Shcherbo D., Murphy C.S., Ermakova G.V., Solovieva E.A., Chepurnykh T.V., Shcheglov A.S., Verkhusha V.V., Pletnev V.Z., Hazelwood K.L., Roche P.M., Lukyanov S., Zaraisky A.G., Davidson M.W., Chudakov D.M. Far-red fluorescent tags for protein imaging in living tissues // Biochem. J. 2009: V. 418. P. 567-754.

138. Shi C., Zhu Y., Xie Z., Qian W., Hsieh C.L., Nie S., Su Y., Zhau H.E,. Chung L.W. Visualizing human prostate cancer cells in mouse skeleton using bioconjugated near-infrared fluorescent quantum dots // Urology. 2009. V. 74. P. 446-451.

139. Simmons D.P., Abregu F.A., Krishnan U.V., Proll D.F., Streltsov V.A. Dimerisation strategies for shark IgNAR single domain antibody fragments // J. Immunol. Methods. 2006. V. 315. P: 171-184.

140. Slocik J. M., Moore J. T.s Wright D.W. Monoclonal antibody recognition of histidine-rich peptide encapsulated nanoclusters //Nano Lett. 2002. V. 2. P. 169-173.

141. Smith A.M., Dave S., Nie S. True L., Gao X. A systematic examination of surface coatings on the optical and chemical properties of semiconductor quantum dots // Expert Rev. Mol. Diagn. 2006. V. 6. P. 231-244.

142. Stroh M., Zimmer J.P., Duda D.G., Levchenko T.S., Cohen K.S., Brown E.B., Scadden D.T., Torchilin V.P., Bawendi M.G., Fukumura D., Jain R.K. Quantum dots spectrally distinguish multiple species within the tumor milieu in vivo II Nat. Med. 2005. V. 11. P. 678682.

143. Su Y., He Y., Lu H., Sai L., Li Q., Li W., Wang L., Shen P., Huang Q., Fan C. The cytotoxicity of cadmium based, aqueous phase-synthesized, quantum dots and its modulation by surface coating // Biomaterials. 2009. V. 30. P. 19-25.

144. Zhao J., Zhang L.H., Jia L.T., Zhang L., Xu Y.M., Wang Z., Yu C.J., Peng W.D., Wen W.H., Wang C.J., Chen S.Y., Yang A.G. Secreted antibody/granzyme B fusion protein stimulates selective killing of HER2-overexpressing tumor cells IIJ Biol Chem. 2004. V. 279 P. 21343-21348.

145. Sukhanova A., Devy J., Venteo L., Kaplan H., Artemyev M., Oleinikov V., Klinov D., Pluot M., Cohen J.H., Nabiev I. Biocompatible fluorescent nanocrystals for immunolabeling of membrane proteins and cells // Anal. Biochem. 2004. Y. 324. P. 60-67.

146. Tada H., Higuchi T.M., Wanatabe N., Ohuchi N. In vivo real-time tracking of single quantum dots conjugated with monoclonal anti-HER2 antibody in tumors of mice // Cancer Res. 2007. V. 67. P. 1138-1144.

147. Tholouli E., Hoyland J.A., Di Yizio D., O'Connell F., Macdermott S.A., Twomey D., Levenson R., Yin J.A., Golub T.R., Loda M., Byers R. Imaging of multiple mRNA targets using quantum dot based in situ hybridization and spectral deconvolution in clinical biopsies // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2006. V. 348. P. 628-636.

148. Turchin I.V., Plehanov V.I., Orlova A.G., Kamenskiy V.A., Kleshnin M.S., Shirmanova M.V., Shakhova N.M., Balalaeva I.V., Savitskiy A.P. Fluorescence diffuse tomography of small animals with DsRed2 fluorescent protein II Laser Physics. 2006. Y. 16. P. 741-746.

149. Turchin I.V., Balalaeva I.V., Vasil'ev R.B., Zlomanov V.P., Plehanov V.I., Orlova A.G., Zagaynova E.V., Kamensky V.A., Kleshnin M.S., Shirmanova M.V., Dorofeev S.G.,Dirin D.N. Imaging of QDs-labeled tumors in small animals byfluorescence diffuse tomography // Laser Phys. Lett. 2006. V. 3. P. 208-211.

150. Turchin I.V., Kamensky V.A., Plehanov V.I., Orlova A.G., Kleshnin M.S., Fiks I.I., Shirmanova M.V., Meerovich I.G., Arslanbaeva L.R., Jerdeva V.V., Savitsky A.P. Fluorescence diffuse tomography for detection of red fluorescent protein expressed tumors in small animals // J. Biomed. Opt. 2008. V. 13. 041310.

151. Wang C., Gao X., Su X. In vitro and in vivo imaging with quantum dots // Anal. Bioanal. Chem. 2010. V. 397. P. 1397-415.

152. Weissleder R. A clearer vision for in vivo imaging // Nat.Biotechnol.2001. V. 19. P. 316317.

153. Weissleder R.,Pittet M.J. Imaging in the era of molecular oncology // Nature.2008. V. 452. P. 580-589.

154. Weng K.C., Noble C.O., Papahadjopoulos-Sternberg B., Chen F.F., Drummond D.C., Kirpotin D.B., Wang D., Horn Y.K., Hann B., Park J.W. Targeted tumor cell internalization and

imaging of multifunctional quantum dot-conjugated immunoliposomes in vitro and in vivo // Nano Lett. 2008. V. 8. P. 2851-2857.

155. Willmann J.K., van Bruggen N., Dinkelborg L.M., Gambhir S.S. Molecular imaging in drug development //Nat. Rev. Drug.Discov.2008. V. 7. P. 591-607.

156. Willuda J., Honegger A., Waibel R., Schubiger P.A., Stahel R., et al. High thermal stability is essential for tumor targeting of antibody fragments: engineering of a humanized anti-epithelial glycoprotein-2 (epithelial cell adhesion* molecule) single-chain Fv fragment // Cancer Res. 1999. V. 59. P: 5758-5767.

157. Willuda J., Kubetzko S., Waibel R., Schubiger P.A., Zangemeister-Wittke U. et al. Tumor targeting of mono-, di-, and tetravalent antipl85(HER-2) miniantibodiesmultimerized by self-associating peptides // J. Biol. Chem. 2001. V. 276. P. 14385-14392.

158: Winter J.O., Liu T.Y., Korgel B:A., Schmidt C.E. Recognition molecule directed interfacing between semiconductor quantum dots and nerve cells // Adv. Mater. 2001. V. 13. P. 1673-1677.

159. Wong J.Y., Chu D.Z., Williams-L.E., Yamauchi D.M., Ikle D.N., Kwok C.S., Liu A., Wilczynski Si, Colcher D., Yazaki P.J., Shively J.E., Wu A.M., Raubitschek A.A. Pilot trial evaluating an 1231-labeled 80-kilodalton engineered anticarcinoembryonic antigen antibody fragment (cT84.66 minibody) in patients with colorectal cancer // Clin. Cancer Res. 2004.V. 10. P. 5014-5021.

160. Wu A.M., Senter P:D. Arming antibody: prospects and challenges for immunoconjugates // Nat. Biotechnol. 2005. V. 23. P. 1137-1146.

161. Wu A.M., Yazaki. P.J. Designer genes: recombinant antibody fragments for biological imaging // Q. J. Nucl. Med. 2000. V. 44. P. 268-283.

162. Wu M.X., Liu H., Haley K.N., Treadway J.A., Larson J.P. Ge N., Peale F„ Bruchez M. Immunofluorescent labeling of cancer marker Her2 and other cellular targets with semiconductor quantum dots //Nat. Biotechnol. 2003. V. 21. P. 41^16.

163. Xing Y., Chaudry Q., Shen C., Kong K.Y., Zhau H.E., Chung L.W., Petros J.A., O'Regan R.M., Yezhelyev M.V., Simons J.W., Wang M.D., Nie S.M. Bioconjugated quantum dots for multiplexed and quantitative immunohistochemistry // Nat. Protoc. 2007. V. 2. P. 1152-1165.

164. Xue F. L., ChenJ. Y., GuoJ., WangC. C., YangW. L., WangP. N., LuD. R. Enhancement of intracellular delivery of CdTe quantum dots QDs to living cells by Tat conjugation // J. Fluoresc. 2007. 17. P. 149-154.

165. Yakovlev G.I., Moiseyev G.P., Protasevich I.I., Ranjbar B., Bocharov A.L., Kirpichnikov M.P., Gilli R.M., Briand C.M., Hartley R.W., Makarov A.A.Dissociation constants and thermal stability of complexes of Bacillus intermediusRNase and the protein inhibitor of Bacillus amyloliquefaciensRNase // FEBSLett. 1995. V. 366. P. 156-8

166. Yang L., Mao H., Wang Y.A., Cao Z., Peng X., Wang X., Duan H., Ni C., Yuan Q., Adams G., Smith M.Q., Wood W.C., Gao X., Nie S. Single chain epidermal growth factor receptor antibody conjugated nanoparticles for in vivo tumor targeting and imaging // Small. 2009. V. 5. P. 235-243.

167. Yang R.H., Chang L.W., Wu J.P. Persistent tissue kinetics and redistribution of nanoparticles, quantum dot 705, in mice: ICP-MS quantitative assessment // Environ. Health. Perspect. 2007. V. 115. P. 1339-1343.

168. Yezhelyev M.V., Al-Hajj A., Morris C., Marcus A J., Liu Т., Lewis M., Cohen C., Zrazhevskiy P., Simons J.W., Rogatko A., Nie S., Gao X., O'Regan R.M. In situ molecular profiling of breast cancer biomarkers with multicolor quantum dots // Adv. Mater. 2007. V. 19. P. 3146-3151.

169. Yong K.-T., Ding H., Roy I., Law W.-C., Bergey E.J., Maitra A., Prasad P.N. Imaging pancreatic cancer using bioconjugatedlnP quantum dots // ACS Nano. 2009. V. 3. P. 502-510.

170. Zhang H., Cui Z., Wang Y., Zhang K., Ji X., Lu C., Yang В., Gao M.Y. From water-soluble CdTenanocrystals to fluorescent nanocrystal-polymer transparent composites using polymerizable surfactants // Adv. Mater. 2003. V. 15. P. 777-780.

171. Zhang H., Sachdev D., Wang C., Hubel A., Gaillard-Kelly M., Yee D: Detection and downregulation of type I IGF receptor expression by antibody-conjugated quantum dots in breast cancer cells // Breast Cancer Res Treat. 2009. V. 114. P. 277-285.

172. Zhang J., Jia X., Lv X.J., Deng Y.L., Xie HY. Fluorescent quantum- dot-labeled aptamerbioprobes specifically targeting mouse liver cancer cells // Talanta. 2010. V. 81. P. 505509

173. Zhang Т., Stilwell J.L., Gerion D., Ding L., Elboudwarej O., Cooke P.A., Gray J.W., Alivisatos A.P., Chen F.F. Cellular effect of high doses of silica-coated quantum dot profiled with high throughput gene expression analysis and high content cellomics measurements // Nano Lett. 2006. V. 6. P. 800-808.

174. Zhou M., Ghosh I. Current trends in peptide science quantum dots and peptides: a bright future together // Biopolymers. 2007. V. 88. P. 325-339.

175. Беляева^ Т.Н., Салова A.B., Леонтьева E.A., Моженок Т.П., Корнилова Е.С., Кроленко С.А. Нецелевые квантовые точки в прижизненных конфокально-микроскопических исследованиях клеток // Цитология. 2009.' Т. 51. С. 830-836.

176. Деев С.М., Лебеденко Е.Н. Инженерия антител: молекулярный конструктор на1 основе барназа-барстар // Биоорган, химия. 2009. Т. 35. С. 761-778.

177. Деев С.М., ЛебеденкоЕ.Н. Современные технологии создания неприродных антител для клинического применения // Acta Naturae. 2009. Т. 1. С. 32-50.

178. Лебеденко- Е.Н., Баландин- Т.Г., Эдельвейс Э.Ф., Георгиев О., Моисеева Е.С., Петров Р.В., Деев С.М. // Докл. РАН. 2007. Т. 414. С. 408-411.

179. ОлейниковВ.А., СухановаА.В., НабиевИ.Р. Флуоресцентные полупроводниковые нанокристаллы в биологии и медицине // Российские нанотехнологии. 2007. Т. 2. С. 160173.

180. Патрушев Л.И. Искусственные генетические системы Т.1: Генная и белковая инженерия // М.: Наука. 2004. 526 стр. /