Клиническая значимость ключевых маркеров ангиогенеза, апоптоза и системы активации плазминогена в сыворотке крови и опухоли больных колоректальным раком тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.46, доктор медицинских наук Головков, Дмитрий Анатольевичд-р

• Головков, Дмитрий Анатольевичд-р
• доктор медицинских наук
• 2009

Оглавление диссертации доктор медицинских наук Головков, Дмитрий Анатольевичд-р

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. Внеклеточные протеолитические системы и компоненты внеклеточного матрикса в опухолях человека. Клиническая значимость и перспективы использования при раке толстой кишки (обзор литературы).

1.1. Внеклеточный матрикс и матрикс-деградирующие ферменты в опухолях человека.

1.1.1. Роль металлопротеиназной системы в опухолевой прогрессии: ММР и TIMP при раке толстой кишки.

1.1.2. Роль плазминогенной системы в опухолевой прогрессии: иРА, tPA и PAI-I при раке толстой кишки.

1.2. Влияние активности внеклеточных протеолитических ферментов и их ингибиторов на процессы ангиогенеза и апоптоза в опухолях больных раком толстой кишки.

1.2.1. Взаимосвязь белков семейства VEGF и маркеров протеолиза при прогрессии опухоли.

1.2.2. Взаимосвязь системы Fas/FasL, маркеров ангиогенеза и протеолиза при прогрессии опухоли.

1.3. Внеклеточные протеолитические системы и метастатическая активность рака толстой кишки.

1.4. Компоненты базальных мембран при раке толстой кишки и их структурные нарушения под действием протеолитических ферментов.

1.5. Прогностическая и предсказательная значимость содержания ферментов внеклеточного матрикса и компонентов базальных мембран в раке толстой кишки.

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Характеристика больных раком толстой кишки.

2.2. Методы определения иммуногистохимических маркеров.

2.3. Методы определения биохимических маркеров.

2.4. Статистический анализ результатов исследования.

ГЛАВА III. Иммуногистохимические и биохимические маркеры в опухоли и сыворотке крови больных раком толстой кишки (результаты собственных исследований).

3.1. Содержание ММР-9 в опухоли больных раком толстой кишки.

3.2. Содержание коллагена IV типа в опухоли больных раком толстой кишки.

3.3. Содержание VEGF в сыворотке крови больных раком толстой кишки.

3.4. Содержание sFas в сыворотке крови больных раком толстой кишки.

ГЛАВА IV. Связь содержания компонентов системы активации плазминогена в опухолях больных раком толстой кишки с экспрессией иммуногистохимических и биохимических маркеров.

4.1. Содержание uPA, tPA и PAI-1 в ткани опухоли и неизмененной слизистой оболочке толстой кишки.

4.2. Содержание компонентов системы активации плазминогена в опухоли больных раком толстой кишки с учетом клинико-морфологических признаков заболевания.

4.3. Связь содержания компонентов системы активации плазминогена с экспрессией ММР-9 и коллагена IV типа в опухоли больных раком толстой кишки.

4.4. Связь содержания компонентов системы активации плазминогена в опухоли уровнями белков VEGF и sFas в сыворотке крови больных раком толстой кишки.

ГЛАВА 5. Связь отдаленных результатов лечения с содержанием иммуногистохимических и биохимических маркеров в опухоли и сыворотке крови больных раком толстой кишки.

ГЛАВА 6. Тканевые и сывороточные биохимические и иммуногистохимические маркеры у больных раком толстой кишки и риск развития метастазов в печени.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Клиническая значимость ключевых маркеров ангиогенеза, апоптоза и системы активации плазминогена в сыворотке крови и опухоли больных колоректальным раком»

Актуальность темы.

В последние годы в большинстве стран мира, в том числе и в нашей стране, наблюдается рост заболеваемости колоректальным раком (Н.Н.Трапезников и соавт., 2001; В.В.Маршак, 2004; Г.И.Воробьев и соавт., 2005; Hawk Е.Т. et al., 2002; Levin В. et al., 2005). Ежегодно в мире регистрируется около 1 млн. новых случаев рака прямой и ободочной кишки (3-й по частоте показатель заболеваемости среди онкологических болезней), а умирает почти 500 тыс. человек (4-е место по показателю смертности) (Engstrom P.F., 2000; Parkin D.M. et al., 1999; В.В.Мартынюк, 2004; Н.Н.Симонов и соавт., 2000,2004; Н.Н.Трапезников и соавт., 2000).

По прогнозу ожидается, что в XXI веке в России рак данной локализации займет первое место в структуре онкологической заболеваемости (Н.Н.Симонов и соавт., 2000; В.И.Чиссов и соавт., 2000; Н.А. Яицкий и соавт., 2004; М.И.Давыдов и соавт., 2004). В России ежегодно колоректальным раком заболевают 50 тыс. человек (3-е место у мужчин после рака легких и желудка и 2-е место у женщин после рака молочной железы) при ежегодной смертности, равной 35 тыс. В ' Москве колоректальный рак вышел на 1-е место среди причин смерти от онкологических заболеваний. При этом в России рак ободочной кишки выявляется в 1,2 раза чаще, чем прямой (Н.Н.Трапезников и соавт., 2001). Соотношение рака ободочной кишки к' раку прямой кишки в развитых странах составляет примерно 2:1 (Ю.М.Тимофеев, 2004). Колоректальный рак в экономически развитых странах занимает 3-е место по частоте заболеваемости и второе место среди причин смерти у онкологических больных.

Отдаленные результаты лечения больных колоректальным раком напрямую зависят от ряда факторов, включающих стадию заболевания, степень дифференцировки опухоли, ее метастатический потенциал, а также от квалификации врача и на сегодняшний день их нельзя считать удовлетворительными, так как показатели 5-летней выживаемости после радикальных операций по поводу колоректального рака не превышают 5060% (В.И. Кныш и соавт., 1994; Nordlinder В. et al., 1994; Ю.А. Барсуков и соавт., 2006). Так, например, общая 5-летняя выживаемость в Европе составляет 40%, а среди больных с запущенной формой заболевания - не превышает 5%. Все это можно объяснить тем, что только у 20,5% больных раком ободочной кишки и у 31,1% — прямой кишки при первом обращении выявляют I-II стадии заболевания (Н.А.Яицкий и соавт., 2004; Г.И.Воробьев и соавт., 2005). У остальных выявляются III-IV стадии (Fujita S. et al., 2000; Verwaal V.J. et al., 2005). В России около 70% больных имеют III—IV стадию заболевания на этапе первичной диагностики (М.И.Давыдов и соавт., 2002; В.В.Пророков и соавт., 2004). При этом около 25% больных уже имеют метастазы в момент установления первичного диагноза рака толстой кишки (Н.И.Переводчикова, 2004; Ю.И.Патютко и соавт., 2006). Следовательно, приходится констатировать, что эти факторы не обеспечивают пока необходимого уровня ранней диагностики и должных результатов лечения (А.М.Ганичкин, 1975; Б.А.Бердов и соавт., 1986; В.Ф.Левшин и соавт., 1990; В.Л.Ривкин и соавт., 2001; Ragazzi R. et al., 2001).

Метастазы являются основным фактором, отягощающим прогноз колоректального рака. Несмотря на быстрое развитие методов диагностики, хирургического и комбинированного лечения заболевания, процент метастазов и рецидивов колоректального рака остается высоким (Н.Н.Трапезников и соавт., 2001; Е.Н.Имянитов, 2005). По данным отечественных и зарубежных авторов к моменту постановки диагноза около 25% больных уже имеют метастазы, а примерно у 50% метастазы разовьются в дальнейшем (М.И.Давыдов и соавт., 2005; Ю.А.Барсуков и соавт., 2006; Greenlee R.T. et al., 2000; Engstrom P.F., 2000). Метастазы в печени выявляются у 55% больных, подвергшихся радикальному удалению первичной опухоли (Ю.И.Патютко и соавт., 2001). В этой связи, поиск дополнительных критериев, позволяющих оценить вероятность развития метастазов и выделить группу больных с повышенным риском их развития, остается актуальной задачей (К.П.Хансон, 2005).

В настоящее время проводится активный поиск дополнительных маркеров, которые предсказывают высокий риск опухолевой прогрессии (А.С.Белохвостов и соавт., 2003; А А.Иванов и соавт., 2005; В.И.Киселев и соавт., 2005; Gershtein E.S. et al., 2008; Suwa Т. et al., 2008). Для улучшения отдаленных результатов лечения необходима разработка дополнительных методов оценки метастатического потенциала раковых клеток и выявление среди больных раком толстой кишки групп риска, требующих адъювантной терапии после радикального хирургического вмешательства (А.П.Колесник и соавт., 2006). Правильная оценка биологических факторов, коррелирующих с прогнозом заболевания и продолжительностью жизни пациентов, важна не только при локализованных формах колоректального рака, но и после выявления отдаленных метастазов опухоли (Aldrighetti L. et al., 2005; Ambiru S. et al., 1999).

В настоящее время бурно развивается направление молекулярной диагностики и оценки прогноза злокачественных опухолей, а исследование особенностей биологического поведения опухоли является сегодня одной из наиболее актуальных областей онкологии (К.М.Пожарисский и соавт., 2000,

2004; В.В.Делекторская и соавт., 2003; А.А.Новик и соавт., 2004; Г.А.Франк и соавт., 2005; Von Kleist S., 2008). Эти методы делают диагностику колоректального рака более ранней и точной, и, что самое главное, позволяют назначить дифференцированное лечение (В.А.Исаков и соавт., 2002; Baldus S.E., 2003; Bendardaf R. et al., 2004; Ahmed F.E., 2005). Интенсивно разрабатываются и внедряются в клиническую практику дополнительные биохимические, иммуногистохимические и молекулярно-биологические методы исследования, которые характеризуют степень агрессивности опухолевого процесса и, кроме того, позволяют индивидуализировать прогноз клинического течения и чувствительность опухоли к проводимой терапии (О.В.Голубченко, 2003; А.Б.Моисеенко, 2003;

А.А.Новик и соавт., 2004; К.М.Пожарисский и соавт., 2004; Spano J.P. et al., 2005; Issa J.-P., 2008). Вместе с тем остается окончательно не решенной проблема прогнозирования течения заболевания у больных колоректальным раком после радикального лечения.

Основой для выделения клинически значимых молекулярных факторов послужило открытие наблюдаемых в процессе развития и прогрессии опухоли структурных и функциональных изменений онкогенов и генов-супрессоров (Б.П.Копнин, 2000; Vogelstein В. et al.,1988; Pasche В. et al., 2003). Особенности экспрессии кодируемых этими генами белков могут выявляться с помощью биохимического иммуноферментного определения данных показателей в сыворотке крови и в ткани опухоли больных колоректальным раком (Kahlenberg M.S. et al., 2003; Davies R.J. et al., 2005). Кроме того, расширяются возможности иммуногистохимического выявления в клетках колоректального рака и в структурах внеклеточного матрикса особенностей экспрессии молекулярных маркеров, отражающих специфику биологической активности опухоли (В.В.Делекторская и соавт., 2008; Ahmed F.E. et al., 2007; Muller W. et al., 1998; Sarris M., Lee C.S., 2001).

На сегодняшний день, несмотря на многообразие клинических и молекулярных маркеров, свидетельствующих о прогрессировании опухолевого процесса, представляется целесообразным дальнейшее изучение клинической значимости существующих и поиск новых маркеров, имеющих прогностическое значение при колоректальном раке (Р.И.Якубовская, 2000; Н.А.Корсакова и соавт., 2003; Yamada Н. et al., 2001; Д.В.Залетаев и соавт., 2004; Ф.Л.Киселев, 2005).

В этом плане актуальным является изучение процессов перестройки внеклеточного матрикса в опухоли, которое осуществляется факторами роста и системой протеаз (Forte A. et al., 2002; Neal С.Р. et al., 2006; Gershtein E.S. et al., 2008). Среди опухолеассоциированных протеолитических ферментов ведущую роль играет система активаторов плазминогена, представленная двумя протеазами - тканевым и урокиназным активаторами плазминогена uPA и tPA), а также металлопротеиназная система, состоящая из 25 представителей (Н.Е.Кушлинский и соавт., 2008; Berney C.R. et al., 1998,1999). Ключевую роль в семействе металлопротеиназ играют ММР-2 и ММР-9, функция которых связана с гидролизом коллагена базальных мембран (Е.С.Герштейн и соавт., 2008; Brabletz Т. et al., 2000; Boedefeld W.M. et al., 2003; Chen J.Q. et al., 2004; Duan G.J. et al., 2004). uPA и tPA превращают неактивный зимоген плазминоген в плазмин, расщепляющий фибрин и белки внеклеточного матрикса, а также активирующий ММР-2 и ММР-9. Эти процессы способствуют разрушению базальных мембран и облегчают инвазию опухолевых клеток. Следует отметить, что все указанные протеазы расщепляют компоненты внеклеточного матрикса, но при этом важную роль в опухолевой прогрессии играют и их эндогенные ингибиторы (TIMP и PAI), причем отдельные из них могут способствовать протеолитическому действию ферментов (М.А.Пальцев и соавт., 2003; Gershtein Е. et al., 2007). ММР, сериновые протеазы (uPA, tPA) не только облегчают опухолевый рост, раковую инвазию и метастазирование, но и могут являться мишенью для противоопухолевой терапии и лечения метастазов (Е.С.Герштейн и соавт., 2007; Mysliwill A.G., Ornstein D.L., 2002; Waas Е.Т. et al., 2002; Gontero P. et al., 2004; Rosen L.S., 2005; Wadler S. et al., 2007).

Основные белки базальных мембран (коллаген IV типа и ламинин) являются не только структурным барьером для метастатического распространения раковых клеток, но и важной функциональной единицей, участвующей в опухолевой прогрессии (Galbavy S. et al., 2002).

Процесс опухолевой прогрессии требует взаимодействия многочисленных молекулярных факторов, при этом деградирующие матрикс протеиназы не только ремоделируют архитектуру внеклеточного матрикса, но и воздействуют на различные пути передачи сигнала в клетке, усиливают ангиогенез и способствует уклонению от программы апоптоза в опухоли

М.А.Пальцев и соавт., 2003; В.И.Киселев и соавт., 2005; Г.И.Абелев и соавт., 2008; Mignatti P. et al., 1996).

Так, известно, что ключевым проангиогенным фактором является VEGF — гликопротеин, стимулирующий пролиферацию эндотелиальных клеток. Этот фактор усиленно продуцируется клетками ряда новообразований, способствуя неоваскуляризации опухоли, усилению проницаемости сосудов, и активации лимфогенного метастазирования (С.В.Луценко и соавт., 2004; М. А.Пальцев, 2004; Не Y. et al., 2005; Gershtein Е. S. et al., 2006; Shin J. E. et al., 2007).

Апоптоз или его отдельные элементы выполняют важные физиологические функции, при этом преодоление апоптоза является необходимым условием успешного развития опухоли (А.Ю.Барышников и соавт., 1996, 2002; А.А.Фильченков, 1998,2003; Н.Н.Белушкина, 2003, 2004; С.Г.Аббасова и соавт., 2007; Е.Ф.Лушников и соавт., 2001; Grell V. et al., 1994). Один из механизмов, регулирующих эти процессы в опухоли, связан с активностью апоптоз-специфических белков системы Fas/FasL (Н.Н.Белушкина и соавт., 2004; Bennett M.W. et al., 2001; O'Connell J. et al. 2000; Zhu Q. et al., 2005; Song E. et al., 2001).

Относительно недавно получены первые клинические исследования по неоангиогенезу и Fas-зависимому апоптозу при солидных опухолях, в том числе и колоректальном раке (Н.Е.Кушлинский и соавт., 2001; С.Г.Аббасова и соавт., 2007). Показано, что повышенный уровень продукции ключевого активатора ангиогенеза - VEGF (С.В.Луценко и соавт., 2004; Е.В.Черноглазова, -2004; Folkman J., 1992) и ингибитора апоптоза -растворимого Fas-антигена (sFas) у больных некоторыми злокачественными новообразованиями может свидетельствовать о высоком «метастатическом потенциале» опухоли, что является неблагоприятным прогностическим фактором (В.С.Новиков, 1996; С.Р.Уманский, 1996; А.А.Фильченков и соавт., 1999; С.М.Киселев и соавт., 2005). Однако эти данные основаны пока на незначительном числе наблюдений. Кроме того, не изучали одновременно факторы ангиогенеза и апоптоза с использованием малоинвазивных биохимических методов исследования в сыворотке крови, что также затрудняет обсуждение представленных в литературе результатов.

Таким образом, к формированию метастатического фенотипа клеток рака толстой кишки приводит изменение активности таких молекулярных факторов как ММР (ММР-2 и ММР-9), ключевых компонентов системы активации плазминогена (uPA, tPA, PAI-1), основных компонентов базальных мембран (коллаген IV типа, ламинин), проангиогенных факторов (VEGF), маркеров апоптоза (sFas).

Влияние молекулярных факторов при раке толстой кишки на клиническое течение и прогноз заболевания изучено недостаточно, несмотря на то, что накапливается все больше данных о нарушениях их нормальной экспрессии и функционирования. Многие вопросы, касающиеся корреляции клинико-морфологических характеристик опухоли и изменений биологических показателей, происходящих в процессе прогрессирования рака толстой кишки, нуждаются в уточнении. Этим- определяется актуальность изучения молекулярных критериев, прогнозирующих агрессивность течения колоректального рака.

Цель работы.

Изучение особенностей экспрессии молекулярно-биологических маркеров внеклеточного матрикса, ангиогенеза, апоптоза в опухоли, сыворотке крови больных раком толстой кишки и роли комплекса этих факторов в оценке прогноза заболевания.

Задачи исследования.

1. Изучить биохимические и иммуногистохимические особенности экспрессии ММР-9 в первичных опухолях больных раком толстой кишки и в прилежащей к опухоли непораженной слизистой оболочке.

2. Исследовать особенности экспрессии структурных компонентов базальных мембран (коллагена IV типа) в злокачественных опухолях толстой кишки.

3. Провести сравнительный анализ особенностей экспрессии ферментов внеклеточного матрикса и компонентов базальных мембран и выявить их взаимосвязь с основными клиническими и морфологическими параметрами заболевания.

4. Провести иммуноферментное определение молекулярно-биологических маркеров неоангиогенеза (V12GF) и апоптоза (sFas) в сыворотке крови больных раком толстой: кишки и изучить корреляцию биохимических показателей с основными клинико-морфологическими параметрами заболевания.

5. Провести;; иммуноферментное определение - содержания компонентов системы активации; плазминогена (uPA, tPA, PAI-1) в опухоли больных колоректальным,раком и изучить корреляцию биохимических показателей с основными клинико-морфологическими характеристиками заболевания.

6. Определить прогностическую значимость биохимических и иммуногистохимических особенностей экспрессии белковых маркеров у больных раком толстой кишки. 7. Провести; статистическую обработку данных и на основании многофакторного анализа результатов исследования выделить значимые и независимые прогностические показатели призраке толстой*кишки:

Научная новизна.

Проведен комплексный. клинический;. морфологический и биохимический анализ современных молекулярно-биологйческих маркеров у больных раком толстой кишки, таких как протелитические ферменты и компоненты внеклеточного матрикса, факторы неоангиогенеза и апоптоза.

Обнаружена повышенная экспрессия ММР-9 в ткани опухоли больных раком толстой кишки у 48,7% пациентов. При этом частота выявления высокой экспрессии белка достоверно повышалась до 80% у больных при IVb стадии, при низкой степени дифференцировки опухоли (80%) и при наличии инвазии опухоли в кровеносных сосудах (82,4%).

У 57,2% больных раком толстой кишки выявлена низкая экспрессия коллагена IV типа в опухоли, причем частота выявления низкой экспрессии белка достоверно повышалась у пациентов в IVb стадии (85%), при низкой степени дифференцировки опухоли (76%), при выраженной глубине инвазии в стенку кишки (75%), а также при наличии инвазии клеток рака в кровеносные сосуды (86,3%).

Обнаружено, что уровень ключевого активатора неоангиогенеза VEGF в сыворотке крови больных раком толстой кишки был достоверно выше по сравнению с контролем. Причем, достоверно более высокое содержание VEGF выявлено в сыворотке крови больных при IV стадии колоректального рака, тогда как концентрация VEGF у больных раком толстой кишки при I и На стадиях опухоли не отличалась от содержания маркера у практически здоровых людей. Содержание маркера достоверно повышалось при увеличении глубины инвазии опухоли и при наличии инвазии опухоли в кровеносных сосудах.

Содержание VEGF при низкой степени дифференцировки колоректального рака было достоверно выше, чем при высокой. Одновременно с увеличением концентрации VEGF в сыворотке крови больных раком толстой кишки обнаружено достоверное повышение в опухоли уровня неблагоприятно высокой экспрессии ММР-9 и низкая экспрессия коллагена IV типа.

Впервые обнаружено, что sFas выявлялся в 2 раза чаще (57,8%) у больных колоректальным раком по сравнению с контролем, а его содержание в группе практически здоровых людей было ниже, чем у больных. При этом уровни sFas в сыворотке крови больных раком толстой кишки зависели от стадии заболевания, хотя при I стадии не отличались от содержания маркера у практически здоровых людей. Достоверно выше было содержание sFas при значительной глубине инвазии, при наличии инвазии в кровеносные сосуды, при неблагоприятных уровнях экспрессии белков ММР-9 и коллагена IV типа.

Обнаружено, что содержание иРА и tPA в ткани опухоли больных раком толстой кишки было достоверно выше, чем в неизмененной слизистой. При этом уровни иРА и tPA в ткани первичной опухоли зависели от ряда клинико-морфологических характеристик опухоли.

Полученные данные свидетельствуют о том, что новый подход к прогнозированию клинического течения колоректального рака основан на использовании комплексного определения согласованных изменений экспрессии изученных молекулярно-биологических маркеров в опухоли и сыворотке крови больных для определения влияния данных показателей на инвазивный потенциал опухоли, ее метастатический потенциал и выживаемость пациентов. На основании исследования молекулярных характеристик колоректального рака разработаны критерии, позволяющие идентифицировать случаи с повышенным риском развития отдаленных метастазов.

Впервые при раке толстой кишки изучена корреляция между экспрессией белков базальных мембран, факторов неоангиогенез, апоптоза, активностью матриксных металлопротеиназ и компонентов системы активации плазминогена. Изучение особенностей экспрессии белковых маркеров в опухоли и сыворотке крови больных колоректальным раком позволило уточнить некоторые патогенетические механизмы прогрессирования опухоли.

Практическая значимость.

На основе анализа некоторых молекулярно-биологических характеристик опухоли определены критерии для выявления наиболее прогностически неблагоприятных случаев и предрасположенности больных колоректальным раком к развитию метастазов. Так, показатели общей выживаемости больных колоректальным раком при высоком уровне экспрессии ММР-9 в первичной опухоли в 3 раза достоверно ниже, чем при низкой экспрессии белка, а 5-летняя безрецидивная выживаемость пациентов ниже в 1,5 раза. Показатели общей 5-летней выживаемости больных раком толстой кишки зависели от уровня исходной концентрации ключевого активатора неоангиогенеза VEGF в сыворотке крови и при высоких его значениях (от 800 пг/мл и более), они были достоверно ниже, чем при значении VEGF менее 400 пг/мл. При этом, высокий уровень экспрессии ММР-9 в первичной опухоли больных колоректальным раком был связан с повышенными исходными уровнями VEGF в сыворотке крови. Общая 5-летняя выживаемость больных колоректальным раком при уровнях sFas в сыворотке крови от 10 нг/мл и более была достоверно ниже. Кроме того, обнаружено, что безрецидивная выживаемость больных раком толстой кишки достоверно различалась между больными по пороговому уровню 3 нг/мг белка для иРА, 2 нг/мг белка для tPA и 2 нг/мг белка для PAI-1. Многофакторный анализ выявил наиболее неблагоприятные сочетания маркеров при оценке общего прогноза рака толстой кишки: ММР-9-коллаген IV типа, MMP-9-uPA, MMP-9-PAI-1, коллаген IV типа-PAI-l и при прогнозе отдаленных метастазов ММР-9-sFas.

Таким образом, настоящее исследование представляет практический интерес для оценки послеоперационного прогноза больных раком толстой кишки и выделения групп повышенного риска развития метастазов и рецидивов, требующих дополнительного лечения или более тщательного динамического наблюдения.

Апробация работы.

Основные положения работы были доложены и обсуждены на: Российской научно-практической конференции с международным участием «Новые технологии в онкологии» (Барнаул, 7-8 июня 2005г.); VI Всероссийском съезде онкологов (Ростов-на-Дону, 9-14 октября 2005г.); II Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва, 20-21 октября 2005г.); на XIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 3-7 апреля 2006г.); Международной научно-практической конференции «Ведущий многопрофильный госпиталь страны: основные функции, достижения и направления развития» (Москва, 1-2 июня 2006г.); Российской научно-практической конференции с международным участием: «Современные методы лечения онкологических больных: достижения и неудачи» (Барнаул, 4-5 июля 2006г.); IV съезде онкологов и радиологов СНГ (Баку, 28 сентября - 1 октября 2006г.); X Российском онкологическом конгрессе (Москва, 21-23 ноября 2006г.); XIV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 16-20 апреля

2007г.); XV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство»

Москва, 14-18 апреля 2008г.).

Апробация диссертации проведена на совместной научной конференции с участием сотрудников кафедры клинической биохимии и лабораторной диагностики Московского государственного медико-стоматологического университета, лаборатории клинической биохимии, хирургического отделения проктологии, отдела патологической анатомии опухолей человека НИИ клинической онкологии ГУ Российского онкологического научного центра им. Н.Н. Блохина РАМН 12 июня 2008г.

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 19 научных работ, в том числе в изданиях, рекомендуемых ВАК, - 7 печатных работ.

Структура и объем диссертации.

Диссертация изложена на 173 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, 4 глав результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и практических рекомендаций. Текст иллюстрирован 58 таблицами и 23 рисунками. Указатель литературы содержит 74 работы отечественных авторов и 186 — зарубежных.

Заключение диссертации по теме «Клиническая лабораторная диагностика», Головков, Дмитрий Анатольевичд-р

ВЫВОДЫ

1. При иммуногистохимическом исследовании в 48,7% опухолей толстой кишки выявили высокий (неблагоприятный) уровень экспрессии ММР-9 , при этом частота выявления высокой экспрессии маркера в опухоли достоверно повышалась: при IVb стадии заболевания (80,0%), при низкой степени дифференцировки опухоли (80,0%), при наличии инвазии опухоли в кровеносные сосуды (82,4% больных).

2. Выявлено достоверное снижение показателей выживаемости среди больных раком толстой кишки с высокими уровнями экспрессии ММР-9 в опухоли по сравнению с низким содержанием фермента: общая 5-летняя выживаемость - примерно в 3 раза, а безрецидивная выживаемость - в 1,5 раза.

3. Обнаружили низкий (неблагоприятный) уровень экспрессии коллагена IV типа в опухоли 57,2% больных раком толстой кишки, при этом частота выявления низкой экспрессии белка достоверно повышалась: при IVb стадии заболевания (85,0%), при низкой степени дифференцировки опухоли (76,0%), при большой глубине инвазии опухоли в кишечную стенку с прорастанием всех слоев и врастанием в жировую клетчатку (75,0%), при наличии инвазии опухоли в сосуды (86,3% больных).

4. Показатель общей 5-летней выживаемости больных раком толстой кишки был достоверно ниже (примерно в 3 раза) при низкой экспрессии коллагена IV типа в опухоли по сравнению с пациентами с высокой экспрессией маркера, а безрецидивная 5-летняя выживаемость достоверно не различалась между этими группами больных.

Обнаружен достоверно высокий исходный уровень ключевого активатора неоангиогенеза VEGF в сыворотке крови больных раком толстой кишки (медиана 700 пг/мл) относительно группы контроля (медиана 301 пг/мл), при этом концентрация маркера достоверно повышалась: при IV стадии заболевания по сравнению с I и Па стадиями (показатели не отличались от группы контроля), при низкой степени дифференцировки опухоли по сравнению с высокой, при увеличении глубины инвазии опухоли в кишечную стенку, достигая максимальных значений при врастании в жировую клетчатку, и при наличии инвазии опухоли в сосуды.

6. Показатели выживаемости больных раком толстой кишки достоверно снижались при высоких исходных уровнях VEGF в сыворотке крови (800 пг/мл и более) по сравнению с низкими его значениями (менее 400 пг/мл), а общая 5-летняя выживаемость составила 46,2+6,2% и 80,1±9,1%, соответственно, при этом 5-летняя безрецидивная выживаемость снизилась в 2,5 раза.

7. Наряду с увеличением концентрации VEGF в сыворотке крови больных раком толстой кишки обнаружено достоверное повышение в опухоли уровня неблагоприятно высокой экспрессии ММР-9 и одновременно низкая экспрессия коллагена IV типа.

8. Обнаружено более частое выявление sFas в сыворотке крови больных раком толстой кишки (57,8%) по сравнению с практически здоровыми людьми (28,6%), а содержание маркера было достоверно выше у больных (медиана — 9,1 нг/мл), чем в контроле (медиана — 0,9 нг/мл). При этом показатели sFas были тесно связаны с основными клинико-морфологическими характеристиками болезни и достоверно повышались при неблагоприятной высокой экспрессии белков ММР-9 и низкой экспрессии коллагена IV типа в опухоли (медианы - 10,4 и 10,0 нг/мл, соответственно).

9. При высоком исходном уровне sFas в сыворотке крови больных раком толстой кишки (10 нг/мл и более) выявлены достоверно низкие показатели выживаемости: общая 5-летняя выживаемость составила 37,6±7,1% (медиана 25,4 мес.), а безрецидивная 43,9±8,2% (медиана 18,0 мес.).

10. Содержание активатора плазминогена урокиназного типа (иРА) и его ингибитора (PAI-1) в ткани опухоли больных раком толстой кишки было достоверно выше, чем в неизмененной слизистой оболочке толстой кишки. Их уровни достоверно повышались: при IV стадии болезни, при низкой степени дифференцировки опухоли и ее прорастании всех слоев стенки кишки, при наличии инвазии опухоли в сосуды, а также при неблагоприятно высоких уровнях экспрессии ММР-9 и низком содержании коллагена IV типа.

11. Общая 5-летняя выживаемость больных раком толстой кишки достоверно уменьшалась: при значениях иРА в ткани опухоли более 0,85 нг/мг белка (47,8±4,7%, медиана - 58,9 мес.); при значениях PAI-1 более 0,5 нг/мг белка (44,3±5,0%, медиана — 39,1 мес.), при значениях tPA менее 2 нг/мл (44,1±5,4%, медиана - 38,8 мес.). Безрецидивная выживаемость больных раком толстой кишки достоверно различалась при пороговых значениях маркеров, которые составляли: для .иРА — 3 нг/мг белка; для tPA - 2 нг/мг белка; для PAI-1 - 2 нг/мг белка.

12. Установлены наиболее значимые комбинации маркеров, сочетания которых указывают на: неблагоприятный прогноз общей выживаемости - ММР-9/коллаген IV типа, MMP-9/uPA, MMP-9/PAI-1, коллаген IV типа/PAI-l; высокий риск развития отдаленных метастазов - ММР-9/sFas.

Практические рекомендации

На основе анализа некоторых молекулярно-биологических характеристик опухоли определены критерии для выявления наиболее прогностически неблагоприятных случаев и предрасположенности больных колоректальным раком к развитию метастазов. Так, показатели общей выживаемости больных колоректальным раком при высоком уровне экспрессии ММР-9 в первичной опухоли в 3 раза достоверно ниже, чем при низкой экспрессии белка, а 5-летняя безрецидивная выживаемость пациентов ниже в 1,5 раза. Показатели общей 5-летней выживаемости больных раком толстой кишки зависели от уровня исходной концентрации ключевого активатора неоангиогенеза VEGF в сыворотке крови и при высоких его значениях (от 800 пг/мл и более), они были достоверно ниже, чем при значении VEGF менее 400 пг/мл. При этом высокий уровень экспрессии ММР-9 в первичной опухоли больных колоректальным раком был связан с повышенными исходными уровнями VEGF в сыворотке крови. Общая 5-летняя выживаемость больных колоректальным раком при уровнях sFas в сыворотке крови от 10 нг/мл и более была достоверно ниже. Кроме того, обнаружено, что безрецидивная выживаемость больных раком толстой кишки достоверно различалась между больными по пороговому уровню 3 нг/мг белка для иРА, 2 нг/мг белка для tPA и 2 нг/мг белка для PAI-1. Многофакторный анализ выявил наиболее неблагоприятные сочетания маркеров при оценке общего прогноза рака толстой кишки: ММР-9-коллаген IV типа, MMP-9-uPA, MMP-9-PAI-1, коллаген IV типа-PAI-l и при прогнозе отдаленных метастазов ММР-9-sFas.

Список литературы диссертационного исследования доктор медицинских наук Головков, Дмитрий Анатольевичд-р, 2009 год

1. Аббасова С.Г., Кушлинский Н.Е., Степанов Ю.М. и соавт. Ингибитор апоптоза растворимый Fas-антиген в сыворотке крови больных хроническим гастритом и раком желудка // Журн. АМН УкраТни. - 1999. - №2. С.347-351.

2. Аббасова С.Г., Щепрова Ж.М., Ламан А.Г. и соавт. Эпитопное картирование человеческого Fas с помощью пептидного фагового дисплея // БЭБМ. 2007. - Том 44, №10. - С.З95-400.

3. Абелев Г.И., Эрайзер Т.Л. На пути к пониманию природы рака // Биохимия. 2008. - Том 73. Вып. 5. - С.605-618.

4. Ананьев B.C., Царюк В.Ф. Рак ободочной кишки // Энциклопедия клинической онкологии. Ред. Давыдов М.И. М. - 2004. - С.305-310.

5. Аруин Л.И., Капуллер Л.Л., Исаков В.А. Морфологическая диагностика болезней желудка и кишечника. М. 1998. - 483С.

6. Барсуков Ю.А., Кныш В.И. Современные возможности лечения колоректального рака // Соврем, онкол. 2006. — том 8, №2. — С.7-16.

7. Барышников А.Ю., Шишкин Ю.В. Программированная клеточная смерть (апоптоз) // Российский онкологический журнал. 1996. - № 1. -С.58-61.

8. Барышников А.Ю., Шишкин Ю.В. Иммунологические проблемы апоптоза. М.: Издательство «Эдиториал УРСС». 2002. - 318с.

9. Белохвостов А.С., Румянцев А.Г. Онкомаркеры: молекулярно-генетические, иммунохимические, биохимические анализы: Пособие для врачей. 2-е изд., перераб. и доп. - М.: МАКС Пресс. - 2003. - 91с.

10. Белушкина Н.Н. Апоптоз клеток как пример межклеточного взаимодействия // Глава в книге под ред. Пальцева М.А., Иванова А.А., Северина С.Е. «Межклеточные взаимодействия». М.: Медицина. 2003. -С.187-218.

11. Белушкина Н.Н. Особенности регуляции апоптоза при опухолевых, вирусных и аутоиммунных заболеваниях // Автореф.дисс.канд.мед.наук. -М. 2004. - 47с.

12. Белушкина Н.Н., Белецкий И.П. Молекулярно-медицинские аспекты клеточной гибели // В книге «Введение в молекулярную медицину» (под ред. Пальцева М.А.). М.:Медицина. - 2004. - С.414-445.

13. Герштейн Е.С., Кушлинский Н.Е. Активаторы плазминогена урокиназного и тканевого типов и их ингибитор PAI-1 в опухолях человека // Бюлл. Эксп. Биол. и Мед. 2001. - Том 131, №1. -С.81-88.

14. Герштейн Е.С., Кушлинский Н.Е. Тканевые маркеры как факторы прогноза при раке молочной железы // Практ. онкол. — 2002. Том 3, №1. — С.38-45.

15. Гланц С. Медико-биологическая статистика // М.:Издательство «Практика». 1999. - 459с.

16. Давидсон Б., Райх Р., Рисберг Б., Несланд Я.М. Биологическая роль и регуляция матричных металлопротеиназ при раке // Архив патол. 2002. -Том 64, №3. - С.47-53.

17. Давыдов М.И., Аксель Е.Н. Статистика злокачественных новообразований в России и странах СНГ (состояние онкологической помощи, заболеваемость и смертность). М. 2002.

18. Давыдов М.И., Аксель Е.М. Злокачественные новообразования в России и странах СНГ в 2003 году. М. 2005.

19. Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Кушлинский Н.Е. Экспрессия белков NM23 и C-ERBB-2 в клетках первичного колоректального рака и его метастазов // Архив патологии. — 2003. — Том 65. — С.11-15.

20. Злокачественные новообразования в России и странах СНГ в 2002 году / Под ред. М.И.Давыдова и Е.М.Аксель. М.: Мед.информ.агентство. 2004. - 279с.

21. Иванов А.А., Гладских О.П., Кузнецова А.В., Данилова Т.И. Межклеточные и клеточно-матриксные взаимодействия в патологии. // Мол. Мед. 2005. - №2. - С. 16-20.

22. Имянитов Е.Н. Клинико-молекулярные аспекты колоректального рака: этиопатогенез, профилактика, индивидуализация лечения // Практ. онкол. -2005. Том 6. - №2. - С.65-70.

23. Канцерогенез (под ред. Заридзе Д.Г.) // М.: Научный мир. 2000. - 420с.

24. Киселев Ф.Л. Новые подходы в молекулярной диагностике рака // В материалах II Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва, 20-21 октября 2005г.). М. - 2005. - С. 156.

25. Киселев В.И., Лященко А.А. Молекулярные механизмы регуляции гиперпластических процессов // М.: Компания «Димитрейд График Групп®». -2005. 337с.

26. Клишо Е.В., Кондакова И.В., Чойнзонов E.JI. и соавт. Прогностическая значимость протеаз у больных плоскоклеточными карциномами головы и шеи // Бюлл. СО РАМН. 2005. - №2 (116). - С.82-91.

27. Коган Е.А., Угрюмов Д.А. Соотношение процессов пролиферации и клеточной гибели в немелкоклеточном раке легкого с железистой дифференцировкой на разных стадиях опухолевой прогрессии // Архив патол. 2002. - Том 64, №1. - С.33-37.

28. Колесник А.П., Паламарчук И.Д., Сидоренко A.M. Молекулярные маркеры прогрессирования колоректального рака // Онкология. — 2006. Том 8, №1. - С.13-17.

29. Копнин Б.П. Мишени действия онкогенов и опухолевых супрессоров: ключ к пониманию базовых механизмов канцерогенеза (обзор) // Биохимия. — 2000.-Том 65.-С.5-33.

30. Корсакова Н.А. Особенности экспрессии Е-кадхерина, муцина-2 и Ki-67 в аденокарциномах толстой кишки // Архив патологии. — 2003. Том 65, №5. — С.15-18.

31. Кушлинский Н.Е., Герштейн Е.С. Современные возможности молекулярно-биохимических методов оценки биологического «поведения» рака молочной железы // Вестн. РАМН. 2001. - №9. - С.65-70.

32. Кушлинский Н.Е., Бритвин Т.А., Аббасова С.Г. и соавт. Растворимый Fas-антиген в сыворотке крови больных раком толстой кишки. // БЭБМ. 2001. - Том 131, №4. - С.430-434.

33. Луценко С.В., Киселев С.М., Фельдман Н.Б., Северин С.Е. Молекулярные механизмы ангиогенеза в физиологических и патологических процессах // В книге «Введение в молекулярную медицину» (под ред. М.А.Пальцева). — М.: Медицина. 2004. - С.446-496.

34. Лушников Е.Ф., Абросимов А.Ю. Гибель клетки (апоптоз). М. 2001.

35. Мартынюк В.В. Рак толстой кишки (заболеваемость, смертность, факторы риска, скрининг). В книге «Практическая онкология» (под ред. С.А.Тюляндина и В.М.Моисеенко). Санкт-Петербург: Издательство «Центр ТОММ». 2004. - С.151-161.

36. Новик А.А., Камилова Т.А., Цыган В.Н. Введение в молекулярную биологию канцерогенеза: Учебное пособие для мед.вузов. / Под ред. Ю.Л.Шевченко. М.: ГЭОТАР-МЕД. 2004. - 224с.

37. Новиков B.C. Программированная клеточная гибель. Санкт-Петербург. 1996.-274с.

38. Обухова В.В., Белушкина Н.Н., Макарова О.В. и соавт. Система FAS/FASL при новообразованиях желудка и толстой кишки // Мол. Мед. -2004. №2. - С.49-54.

39. Онкологические заболевания: профилактика и методы лечения / Под ред. В.В.Маршака. М.: Новый издательский дом. - 2004. — 348с.

40. Пальцев М.А., Иванов А.А., Северин С.Е. Межклеточные взаимодействия // М.: Медицина. 2003. - 287с.

41. Пальцев М.А. (под ред.). Введение в молекулярную медицину // М.: Медицина. 2004. - 496с.

42. Патютко Ю.И., Чучуев Е.С., Котельников А.Г. и соавт. Синхронные операции при метастатическом раке печени // Хирургия. 2006. - №5. - С.15-19.

43. Переводчикова Н.И. Химиотерапия метастатического колоректального рака. В книге «Практическая онкология» (под ред. С.А.Тюляндина и

44. B.М.Моисеенко) // Санкт-Петербург: Издательство «Центр ТОММ». 2004. —1. C.230-244.

45. Пожарисский К.М., Леенман Е.Е. Значение иммуногистохимических методик для определения характера лечения и прогноза опухолевых заболеваний // Архив патол. 2000. — №5. — С.3-11.

46. Пожарисский К.М., Леенман Е.Е. Прогностическое и предсказательное значение иммуногистохимических маркеров. Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека. Ред. Петров С.В., Райхлин Н.Т. Казань. - 2004. - СЗ10-329.

47. Портянко А.С., Черствой Е.Д. Система Fas/FasL и ее значение для регуляции взаимоотношений опухоли и иммунной системы при папиллярном раке щитовидной железы у детей и подростков // Архив патол. — 2003. Том 65, №4. — С.14-18.

48. Пророков В.В., Малихов А.Г., Кныш В.И. Современные принципы диагностики и скрининга рака прямой кишки. В книге «Практическая онкология» (под ред. С.А.Тюляндина и В.М.Моисеенко) // Санкт-Петербург: Издательство «Центр ТОММ». 2004. - С. 162-167.

49. Ровенский Ю.А. Клеточные и молекулярные механизмы опухолевой инвазии //Биохимия. 1998. - Том 63, вып. 9. - С.1204-1221.

50. Снарская Е.С., Молочков В.А., Франк Г.А., Завалишина Л.Э. Матриксные металлопротеиназы и их тканевые ингибиторы при базально-клеточном и метатипическом раке кожи // Архив патол. 2005. - Том 67, №3. — С.14-17.

51. Соловьева Н.И. Матриксные металлопротеиназы и их биологические функции // Журнал Биоорганич. химии. 1998. - №24. - С.217-226.

52. Трапезников Н.Н., Аксель Е.М. Статистика злокачественных новообразований в России и странах СНГ // М.-РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН.-2001.-296с.

53. Уманский С.Р. Апоптоз: молекулярные и клеточные механизмы // Молекулярная биология. 1996. - Т.30. - Вып.З. - С.487-502.

54. Фильченков А.А. Современные представления о роли апоптоза в опухолевом росте и его значении при противоопухолевой терапии // Эксперим. Онкология. 1998. - Т.20. - С.259-270.

55. Фильченков А.А., Стойка Р.С. Апоптоз и рак // Киев: Издательство «Морион». 1999. - 184с.

56. Фильченков А.А. Апоптомодуляторы // Биомедицинская химия. 2003. - Т.49, №4. - С.333-359.

57. Фильченков А.А. Каспазы: регуляторы апоптоза и других клеточных функций // Биохимия. 2003. - Т.68. - Вып.4. - С.453-466.

58. Черноглазова Е.В., Дбар Ж.Н., Степанова Е.В. Молекулярные механизмы опухолевого ангиогенеза // Успехи современной биологии. -2004. Т. 124, №5. - С.480-488.

59. Франк Г.А., Завалишина Л.Э., Андреева Ю.Ю. Состояние внеклеточного матрикса и маркеры адгезии в уротелиальном раке мочевого пузыря // Архив патол. 2005. - Том 67, №3. - С.11-14.

60. Хансон К.П. Молекулярная онкология: фундаментальные достижения и практические перспективы // Тезисы Российской конференции по фундаментальной онкологии «Петровские чтения-2005». — СПб. 2005. — С.3-4.

61. Чиссов В.И., Старинский В.В. (под ред.) Злокачественные новообразования в России в 1999 году (заболеваемость и смертность). М. -2000. 263с.

62. Чиссов В.И., Дарьялова C.JI. (под ред.). Избранные лекции по клинической онкологии // М.: Издательство общественного фонда «Паллиативная медицина и реабилитация больных». 2000. - 735с.

63. Чиссов В.И., Дарьялова C.JI. (под ред.). Онкология (клинические рекомендации) // М.: Издательская группа «ГЕОТАР-Медиа». 2006. - 720с.

64. Ярилин А.А. Апоптоз. Природа феномена и его роль в целостном организме // Патол. физиол. экспер. тер. 1998. - Том 2. - С.38-48.

65. Abdel-Wahed М.М., Asaad N.Y., Aleskandarany М. Expression of matrix metalloproteinase-2 in renal cell carcinoma // J. Egypt. Natl. Cane. Inst. 2004. -Vol.16, N.3. - P.168-177.

66. Adachi Y., Wang Yu., Piao W. et al. Treatment with a new IGF-I receptor tyrosine kinase inhibitor for human colorectal carcinomas // Tumor Biology. -2008.-Vol.29 (Suppl.l). -P.45.

67. Aglund K., Rauvala M., Puistola U. et al. Gelatinases A and В (MMP-2 and MMP-9) in endometrial cancer MMP-9 correlates to the grade and the stage // Gynecol. Oncol. - 2004. - Vol.94, N.3. - P.699-704.

68. Ahmed F.E. Development of novel diagnostic and prognostic molecular markers for sporadic colon cancer // Expert Review of Molecular Diagnostics. — 2005. Vol.5, N.3. - P.337-352.

69. Ahmed F.ED|. Molecular markers that predict response to colon cancer therapy // Expert Review of Molecular Diagnostics. 2005. - Vol.5, N.3. - P.353-375.

70. Aldrighetti L., Castoldi R., Di Palo S. et al. Prognostic factors for long-term outcome of hepatic resection for colorectal liver metastases // Chir. Ital. 2005. -Vol.57, N.5. - P.555-570.

71. Ambiru S., Miyazaki M., Isono T. et al. Hepatic resection for colorectal metastases: analysis of prognostic factors // Dis. Colon. Rectum. 1999. Vol.42, N.5. -P.632-639.

72. Arii S., Ishigami S., Mori A. et al. Implication of VEGF and MMPs in hepatic metastasis of human colon cancer // Nippon. Geka. Gakka.i Zasshi. 1998. -Vol.99, N.7. - P.436-440.

73. Arnold C.N., Blum H.E. Colon cancer: molecular markers // Dtsch. Med.Wochenschr. 2005. - Vol.130, N.14. - P.880-882.

74. Baker E.A., Leaper D.J. The plasminogen activator and matrix metalloproteinase systems in colorectal cancer: relationship to tumour pathology // Eur. J. Cancer. -2003. Vol.39, N.7. -P.981-988.

75. Baldus S.E. Clinical, pathological and molecular prognostic factors in colorectal carcinomas // Pathologe. 2003. - Vol.24, N.l. - P.49-60.

76. Beatty J.D., Beatty B.G., Vlahos W.G. (1987). Measurement of monoclonal antibody by non-competitive enzyme immunoassay // J. Immunol. Methods. -Vol.100.-P.173-179.

77. Bendardaf R., Lamlum H., Pyrhonen S. Prognostic and predictive molecular markers in colorectal carcinoma // Anticancer Res. 2004 - Vol.24, N.4. -P.2519-2530.

78. Bennett M.W., O'Connell J., Houston A. et al. Fas ligand upregulation is an early event in colonic carcinogenesis // J. Clin. Pathol. 2001. - Vol.54, N.8. -P.598-604.

79. Berney C.R., Yang J.L., Fisher RJ. et al. Vascular endothelial growth factor expression is reduced in liver metastasis from colorectal cancer and correlates with urokinase-type plasminogen activator // Anticancer Res. 1998. - Vol.18, N.2A. -P.973-977.

80. Berney C.R., Yang J., Fisher R.J. et al. Correlates of urokinase-type plasminogen activator in colorectal cancer: positive relationship with nm23 and c-erbB-2 protein expression // Oncol Res. 1998. - Vol.10, N.l. - P.47-54.

81. Berney C.R., Fisher R.J., Yang J. et al. Protein markers in colorectal cancer: predictors of liver metastasis // Ann. Surg. 1999. - Vol.230, N.2. - P.179-184.

82. Bianchi E., Cohen R.L., Dai A. et al. Immunohistochemical localization of the plasminogen activator inhibitor-1 in breast cancer // Int. J. Cancer. 1995. -Vol.60, N.5. - P.597-603.

83. Bianco A.R., Carlomagno C., De Laurentiis M. et al. Prognostic factors in human colorectal cancer // Tumori. 1997. - Vol.83, N.l (Supp. L). - P.S15-18.

84. Boedefeld W.M. Bland K.I., Heslin MJ. Recent insights into angiogenesis, apoptosis, invasion, and metastasis in colorectal carcinoma // Arm. Surg. Oncol. -2003. Vol.10, N.8. - P.839-851.

85. Brabletz Т., Jung A., Dag S. et al. Beta-catenin induces invasive growth by activating matrix metalloproteinases in colorectal carcinoma // Verh. Dtsch. Ges. Pathol. 2000. - Vol.84. - P. 175-181.

86. Chakraborti S., Mandal M., Das S. et al. Regulation of matrix metalloproteinases: An overview // Mol. Cell Biochem. 2003. - Vol.253. -P.269-285.

87. Chen J.Q., Zhan W.H., He Y.L. et al. Expression of heparanase gene, CD44v6, MMP7 and nm23 protein and their relationship with the invasion and metastasis of gastric carcinomas // World. J. Gastroenterol. 2004. - Vol.10, N.6. - P.776-782.

88. Chen Y., Sasatomi E., Satoh T. Abnormal distribution of collagen type IV in extrahepatic bile duct carcinoma // Pathol. Int. 2000. - Vol.5, N.l 1. - P.884-890.

89. Clark I.M., Swingler Т.Е., Sampieri C.L. et al. The regulation of matrix metalloproteinases and their inhibitors // Int. J. Biochem. Cell Biol. 2007.

90. Curran S., Murray G.I. Matrix metalloproteinases in tumour invasion and metastasis // J. Pathol. 1999. - Vol.189. - P.300-308.

91. Curran S., Murray G.I. Matrix metalloproteinases: molecular aspects of their in tumour invasion and metastasis // Eur. J. Cancer. 2000. - Vol.36, N.13. -P.1621-1630.

92. Curran S., Dundas S.R., Buxton J. et al. Matrix metalloproteinase/tissue inhibitors of matrix metalloproteinase phenotype identifies poor prognosis colorectal cancers // Clin. Cancer Res. 2004. - Vol.10, N.24. - P.8229-8234.

93. Davies В., Miles D.W., Happerfield L.C. et al. Activity of type IV collagenases in benign and malignant breast disease // Br. J. Cancer. 1993. Vol.67, N.5.-P.l 126-1131.

94. Davies R.J., Miller R., Coleman N. Colorectal cancer screening: prospects for molecular stool analysis // Nat. Rev. Cancer. 2005. - Vol.5. - P.199-209.

95. Decock J., Paridaens R., Ye S. Genetic polymorphisms of matrix metalloproteinases in lung, breast and colorectal cancer // Clin. Genet. 2008. -Vol.73, N.3.-P.197-211.

96. Doger F.K., Meteoglu I., Tuncyurek P. et al. Does the EGFR and VEGF expression predict the prognosis in colon cancer? // Eur. Surg. Res. 2006. -Vol.38, N.6. - P.540-544.

97. Duan G.J., Yan X.C., Bian X.W. The significance of beta-catenin and matrix metalloproteinase-7 expression in colorectal adenoma and carcinoma // Zhonghua Bing Li Xue Za Zhi. 2004. - Vol.33, N.6. - P.518-522.

98. Egeblad M., Werb Z. New functions for the matrix metalloproteinases in cancer progression // Nat. Rev. Cancer. 2002. - Vol.2. - P. 161 -174.

99. Engstrom P.F. Colorectal cancer // Clinical Oncology. 2000. - P.361-370.

100. Feng G., Tan Y. Expression and significance of MMP2 and type IV collagen in gastric cancer // Zhonghua Wai. Ke. Za. Zhi. 2000. - Vol.38, N.10. - P.775-777.

101. Ferrara N. Role of vascular endothelial growth factor in physiologic and pathologic angiogenesis: therapeutic implications // Semin Oncol. 2002. -Vol.29, N.6. (Suppl. 16). - P.10-14.

102. Ferrara N., Gerber H.P., LeCouter J. The biology of VEGF and its receptors // Nat. Med. 2003. - Vol.9. - P.669-676.

103. Ferrone S. and Dierich M.P. (Eds.). Monoclonal antibodies production: principles and practice. In: Handbook of Monoclonal Antibodies. Applications in Biology and Medicine // Noyes Publ., New Jersey, USA. 1985.

104. Folkman J. The role of angiogenesis in tumor growth // Semin. Cancer Biol. 1992.- Vol.3. -P.65-71.

105. Forte A., D'Urso A., Gallinaro L.S. et al. Prognostic markers of the epithelial tumors of the large intestine // Ann. Ital. Chir. 2002. - Vol.73, N.6. - P.587-596.

106. Fujita M., Khazenzon N.M., Bose S. et al. Overexpression of beta 1-chain-containing laminins in capillary basement membranes of human breast cancer and its metastases // Breast Cancer Res. 2005. - Vol.7, N.4. - P.411-421.

107. Fujita S., Akasu Т., Moriva Y. The resection of synchronous liver metastases from colorectal cancer // Jpn. J. Clin. Oncol. 2000. - Vol.30, N.l. - P.7-11.

108. Furuya M., Ishikura H., Kawarada Y. Expression of matrix metalloproteinases and related tissue inhibitors in the cyst fluids of ovarian mucinous neoplasms // Gynecol. Oncol. 2000. - Vol.78, N.2. - P.106-112.

109. Furuya Y., Fuse H., Masai M. Serum soluble Fas level for detection and staging of prostate cancer // Anticancer Res. 2001. - Vol.21, N.5. - P.3595-3598.

110. Galbavy S., Lukac L., Porubsky J. et al. Collagen type IV in epithelial tumours of colon // Acta Histochem. 2002. - Vol. 104, N.4. - P.331-334.

111. Galizia G., Lieto E., Ferraraccio F. et al. Determination of molecular marker expression can predict clinical outcome in colon carcinomas // Clin. Cancer Res. -2004. Vol.10, N.10. - P.3490-3499.

112. Galizia G., Ferraraccio .F, Lieto E. et al. Prognostic value of p27, p53, and vascular endothelial growth factor in Dukes A and В colon cancer patients undergoing potentially curative surgery // Dis. Colon Rectum. 2004. - Vol.47, N.ll. -P.1904-1914.

113. Gasparini G. Prognostic value of vascular endothelial growth factor in breast cancer // Oncologist. 2000. - Vol.5. - P.37-44.

114. Gerber H.P., Hillan K.J., Ryan A.M. et al. VEGF is required for growth and survival in neonatal mice // Development. 1999. - N.126. - P. 1149-1159.

115. Gontero P., Banisadr S., Frea B. et al. Metastasis markers in bladder cancer: a review of the literature and clinical considerations // Eur. Urol. 2004. - Vol.46, N.3. -P.296-311.

116. Graca В., Lunet C., Coelho A.S. et al. Angiogenesis and cancer: from biopathology to therapy // Acta Med. Port. 2004. - Vol.17. - P.76-93.

117. Greenlee R.T., Murray Т., Bolden S. et al. Cancer statistics 2000 // CA Cancer J. Clin. 2000. - Vol.50. - P.7-33.

118. Grell, V., Krammer P.H., Scheurich P. Segregation of APO-l/Fas antigen-and tumor necrosis factor receptor-mediated apoptosis // Eur. J. Immunol. 1994. - Vol.24. -P.2563-2566.

119. Gulubova M.V. Collagen type IV, laminin, alpha-smooth muscle actin (alphaSMA), alpha 1 and alpha6 integrins expression in the liver with metastases from malignant gastrointestinal tumours // Clin. Exp. Metastasis. 2004. - Vol.21, N.6. -P.485-494.

120. Нага Т., Tsurumi H., Takemura M., et al. Serum-soluble fas level determines clinical symptoms and outcome of patients with aggressive non-Hodgkin's lymphoma // Am. J. Hematol. 2000. - Vol.64, N.4. - P.257-261.

121. Hewitt R.E., Powe D.G., Carter G.I. et al. Basement membrane collagen-IV synthesis in colorectal tumours. // Int. J. Cancer. — 1992. Vol.51, N.4. - P.530-536.

122. Hewitt R.E., Powe D.G., Morrell K. Laminin and collagen IV subunit distribution in normal and neoplastic tissues of colorectum and breast // Br. J. Cancer. 1997. - Vol.75, N.2. - P.221-229.

123. Hida J., Matsuda Т., Kitaoka M. et al. The role of basement membrane in colorectal cancer invasion and liver metastasis // Cancer. 1994. - Vol.74, N.2. -P.592-598.

124. Hiendlmeyer E., Regus S., Wassermann S. et al. Beta-catenin up-regulates the expression of the urokinase plasminogen activator in human colorectal tumors // Cancer Res. 2004. - Vol.64, N.4. - P. 1209-1214.

125. Hiki Y., Iyama K., Tsuruta J. et al. Differential distribution of basement membrane type IV collagen alphal(IV), alpha2(IV), alpha5(IV) and alpha6(IV)chains in colorectal epithelial tumors 11 Pathol. Int. 2002. - Vol.52, N.3. - P.224-233.

126. Hicklin D.J., Ellis L.M. Role of the vascular endothelial growth factor pathway in tumor growth and angiogenesis // J. Clin. Oncol. 2005. - Vol.23, N.5. -P.1011-1027.

127. Hlubek F., Spaderna S., Jung A. et al. Beta-catenin activates a coordinated expression of the proinvasive factors laminin-5 gamma2 chain and MT1-MMP in colorectal carcinomas // Int. J. Cancer. 2004. - Vol.108, N.2. - P.321-326.

128. Holten-Andersen M.N., Hansen U., Briinner N. et al. Localization of tissue inhibitor of metalloproteinases 1 (TIMP-1) in human colorectal adenoma and adenocarcinoma // Int. J. Cancer. 2005. - Vol.113, N.2. - P. 198-206.

129. Hurst N.G., Stocken D.D., Wilson S. et al. Elevated serum matrix metalloproteinase 9 (MMP-9) concentration predicts the presence of colorectal neoplasia in symptomatic patients // Br. J. Cancer. 2007. - Vol.97, N.7. - P.971-977.

130. Illemann M., Bird N., Majeed A. et al. MMP 9 is differentially expressed in primary human colorectal adenocarcinomas and their metastases // Mol. Cancer Res. 2006. - Vol.4, N.5. - P.293-302.

131. Issa J.-P. Epigenetic profiling and epigenetic therapy in cancer // Tumor Biology. 2008. - Vol.29 (Suppl.l). - P.2.

132. Jodo S., Kobayashi S., Nakajima Y. et al. Elevated serum levels of a soluble fas/apo-1 (cd95) in patients with hepatocellular carcinoma // Clin. exp. immunol. -1998.-Vol.112.-P.166-171.

133. Johansson N., Ahonen M., Kahari V.M. Matrix metalloproteinases in tumor invasion //. Cell Mol. Life Sci. 2000. - Vol.57. - P.5-15.

134. Joo Y.E., Seo K.S., Kim J. et al. Role of tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMPs) in colorectal carcinoma // J. Korean Med. Sci. 1999. -Vol.14, N.4. - P.417-423.

135. Kahlenberg M.S., Sullivan J.M., Witmer D.D., Petrelli N.J. Molecular prognostics in colorectal cancer. Review // Surg. Oncol. 2003. - Vol.12, N.3 -P.173-186.

136. Kamat A.A., Fletcher M., Gruman L.M. et al. The clinical relevance of stromal matrix metalloproteinase expression in ovarian cancer // Clin. Cancer Res. 2006. - Vol.12, N.6. - P. 1707-1714.

137. Karakiulakis G., Papanikolaou C., Jankovic S.M. et al. Increased type IV collagen-degrading activity in metastases originating from primary tumors of the human colon // Invasion Metastasis. 1997. - Vol.17, N.3. - P.158-168.

138. Kato К., Hara A., Kuno T. et al. Matrix metalloproteinases 2 and 9 in oral squamous cell carcinomas: manifestation and localization of their activity // J. Cancer Res. Clin. Oncol. 2005. - Vol.131, N.6. - P.340-346.

139. Kim T.D., Song K.S., Li G. et al. Activity and expression of urokinase-type plasminogen activator and matrix metalloproteinases in human colorectal cancer. // BMC Cancer. 2006. - Vol.6. - P.211.

140. Kohler G., Milstein C. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of redefined specificity // Nature. 1975. - Vol.256. - P.495-497.

141. Langenskiold M., Holmdahl L., Falk P. et al. Increased plasma MMP-2 protein expression in lymph node-positive patients with colorectal cancer // Int. J. Colorectal. Dis. 2005. - Vol.20, N.3. - P.245-252.

142. Lazaris ACh., Tzoumani A.N., Thimara I. et al. Immunohistochemical assessment of basement membrane components in colorectal cancer: prognostic implications // Exp. Clin. Cancer Res. 2003. - Vol.22, N.4. - P.599-606.

143. Leeman M.F., Curran S., Murray G.I. New insights into the roles of matrix metalloproteinases in colorectal cancer development and progression // J. Pathol. -2003. Vol.201, N.4. - P.528-534.

144. Lee S., Chen T.T., Barber C.L. et al. Autocrine VEGF signaling is requiredfor vascular homeostasis // Cell. 2007. - Vol.130, N.4. - P.691-703.

145. Li B.H., Zhao P., Liu S.Z. et al. Matrix metalloproteinase-2 and tissue inhibitor of metallo-proteinase-2 in colorectal carcinoma invasion and metastasis. // World J. Gastroenterol. 2005. - Vol.28, N.20. - P.3046-3050.

146. Liu D., Nakano J., Ishikawa S. et al. Overexpression of matrix metalloproteinase-7 (MMP-7) correlates with tumor proliferation, and a poor prognosis in non-small cell lung cancer // Lung Cancer. 2007. - Vol.58, N.3. -P.384-391.

147. Liu В., Su Y.Y., Ishikawa Sh. et al. (3-catenin is a sensible therapeutic marker of cancer // Tumor Biology. 2008. - Vol.29 (Suppl.l). - P.44.

148. Lochter A., Sternlicht M.D., Werb Z. et al. The significance of matrix metalloproteinases during early stages of tumor progression // Ann. N.-Y. Acad. Sci. 1998. - Vol.23, N.857. - P.l80-193.

149. Lynch C.C., Matrisian L.M. Matrix metalloproteinases in tumor-host cell communication // Differentiation. 2002. - Vol.70. - P.561-573.

150. Madigan M.C., Kingsley E.A., Cozzi PJ. et al. The role of extracellular matrix metalloproteinase inducer protein in prostate cancer progression // Cancer Immunol. Immunother. — 2008.

151. Matsuyama Y., Takao S., Aikou T. Comparison of matrix metalloproteinase expression between primary tumors with or without liver metastasis in pancreatic and colorectal carcinomas // J. Surg. Oncol. 2002. - Vol.80, N.2. - P.105-110.

152. Mignatti P., Rifkin D.B. Plasminogen activators and matrix metalloproteinases in angiogenesis // Enzyme Protein. 1996. - Vol.49. - P. 117137.

153. Mook O.R., Frederiks W.M., Van Noorden C.J. The role of gelatinases in colorectal cancer progression and metastasis // Biochim. Biophys. Acta. 2004. -Vol.1705, N.2.-P.69-89.

154. Moran A., Iniesta P., Garcia-Aranda C. et al. Clinical relevance of MMP-9, MMP-2, TIMP-1 and TIMP-2 in colorectal cancer // Oncol. Rep. 2005. - Vol.13, N.l. -P.115-120.

155. Mori S., Ogata Y., Shirouzu K. Biological features of sporadic colorectal carcinoma with high-frequency microsatellite instability: special reference to tumor proliferation and apoptosis // Int. J. Clin. Oncol. 2004. - Vol.9, N.4. -P.322 -329.

156. Mottolese M., Buglioni S., Bracalenti C. et al. Prognostic relevance of altered Fas (CD95) sestem in human breast cancer // Int. J. Cancer. - 2000. -Vol.89, N.2.-P.127-132.

157. Muller W., Schneiders A., Hommel G. et al. Expression of nm 23 in gastric carcinoma: association with tumor progression and poor prognosis // Cancer. 1998. - Vol.15. -N. 83. -P.2481 - 2487.

158. Murray D., Morrin M., McDonnell S. Increased invasion and expression of MMP-9 in human colorectal cell lines by a CD44-dependent mechanism // Anticancer Res. 2004. - Vol.24, N.2A. - P.489-494.

159. Mysliwiec A.G., Ornstein D.L. Matrix metalloproteinases in colorectal cancer // Clin. Colorectal Cancer. 2002. - Vol.1, N.4. - P.208-219.

160. Nagase H. Zinc Metalloproteinases in Health and Disease. Ed. N.M.Hooper, Taylor & Francis Ltd. // London. - 1996. - P. 153.

161. Nakajima I. Immunohistochemical study of the extracellular matrix in non-small cell lung cancer: relation to lymph node metastasis and prognosis // Hokkaido Igaku Zasshi. 1991. - Vol.66, N.3. - P.356-368.

162. Nanashima A., Yamaguchi H., Sawai T. et al. Prognostic factors in hepatic metastases of colorectal carcinoma: immunohistochemical analysis of tumor biological factors //Dig. Dis. Sci. -2001. Vol.46, N.8. - P. 1623-1628.

163. Naumnik W., Izycki Т., Ossolinska M. et al. Serum levels of sFas and sFasLl during chemotherapy of lung cancer // Exp. Oncol. 2007. - Vol.29, N.2. -P.132-136.

164. Neal C.P., Garcea G., Doucas H. Molecular prognostic markers in resectable colorectal liver metastases: a systematic review // Eur. J. Cancer. 2006. - Vol.42, N.12. - P.1728-1743.

165. Noguchi Т., Kikuchi R., Ono K., et al. Prognostic significance of p27/kipl and apoptosis in patients with colorectal carcinoma // Oncol. Rep. 2003: -Vol.10, N.4.-P.827-831.

166. Ochs A.M., Wong L., Kakani V. et al. Expression of vascular endothelial growth factor and HER2/neu in stage II colon cancer and correlation with survival // Clin. Colorectal Cancer. 2004. - Vol.4, N.4. - P.262-267.

167. O'Connell J., Bennett M.W., Nally K. et al. Altered mechanisms of apoptosis in colon cancer: Fas resistance and counterattack in the tumor-immune conflict // Ann. N.-Y. Acad. Sci. -2000. Vol.910. - P. 178-192.

168. Offerhaus G.J., Giardiello F.M., Bruijn J.A. et al. The value of immunohistochemistry for collagen IV expression in colorectal carcinomas // Cancer. 1991. - Vol.1, N.67 (1). - P.99-105.

169. Okada N., Ishida H., Murata N. et al. Matrix metalloproteinase-2 and -9 in bile as a marker of liver metastasis in colorectal cancer // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2001. - Vol.288, N.l. - P.212-216.

170. Olszewski A.J., Grossbard M.L., Kozuch P.S. The horizon of antiangiogenic therapy for colorectal cancer // Oncology. 2005. - Vol.19, N.3. - P.297-306.

171. Ondruschka C., Buhtz P., Motsch C. et al. Prognostic value of MMP-2, -9 and TIMP-1,-2 immunoreactive protein at the invasive front in advanced head and neck squamous cell carcinomas // Pathol. Res. Pract. 2002. - Vol.198, N.8. -P.509-515.

172. Orita H., Korenaga D., Maehara Y. Laminin distribution patterns are closely related to liver metastasis in gastric cancer // Cancer. 1993. - Vol.15, N.71 (4). -P.1201-1206.

173. Osaki M., Kase S., Kodani I. et al. Expression of Fas and Fas ligand in human gastric adenomas and intestinal-type carcinomas: correlation with proliferation and apoptosis // Gastric Cancer. 2001. - Vol.4, N.4. - P. 198-205.

174. Papadopoulou S., Scorilas A., Arnogianaki N. et al. Expression of gelatinase-A (MMP-2) in human colon cancer and normal colon mucosa // Tumour Biol. -2001. Vol.22, N.6. - P.383-389.

175. Parkin D.M., Pisani P., Ferlay J. Global cancer statistics // CA Cancer J. Clin. 1999. - Vol.49, N.l. - P.33-64.

176. Parsons S.L., Watson S.A., Collins H.M. et al. Gelatinase (MMP-2 and -9) expression in gastrointestinal malignancy // Br. J. Cancer. — 2000. Vol.82, N.l. -P.249.

177. Parsons D.W., Jones S., Leary R.J. et al. Large-scale mutational analyses of human cancers: lessons learned from sequencing cancer genomes // Tumor Biology. 2008. - Vol.29 (Suppl.l). - P.2.

178. Pasche В., Mulcahy M., Benson A.B. 3rd. Molecular markers in prognosis of colorectal cancer and prediction of response to treatment Review // Best. Pract. Res. Clin. Gastroenterol. 2002. - Vol.16, N.2. - P.331-345.

179. Peduto Eberl L., Guillou L., Saraga E. et al. Fas and Fas ligand expression in tumor cells and in vascular smooth-muscle cells of colonic and renal carcinomas // Int. J.Cancer. 1999. - Vol.81, N.5. -P.772-778.

180. Perucho M., Samuelsson J., Leodolter A. et al. Aging, DNA Hypomethylation, genetic alterations, and gastrointestinal cancer // Tumor Biology. 2008 - Vol.29 (Suppl. 1). - P.45.

181. Piard F., Martin L., Chapusot C. et al. New histologic prognostic factors in colorectal cancer // Gastroenterol. Clin. Biol. 2002. - Vol.26, (5 Suppl.) - P.62-73.

182. Ramnath N., Creaven P.J. Matrix metalloproteinase inhibitors (review) // Curr. Oncol. Rep. 2004. - Vol.6, N.2. - P.96-102.

183. Rosen L.S. VEGF-targeted therapy: therapeutic potential and recent advances // The oncologist. 2005. - Vol.10, N.6. - P.382-391.

184. Rundhaug J.E. Matrix metalloproteinases and angiogenesis // J. Cell Mol. Med. 2005. - Vol.9, N.2. - P.267-285.

185. Ryan A.E., Shanahan F., O'Connell J., et al. Fas ligand promotes tumor immune evasion of colon cancer in vivo // Cell Cycle. 2006. - Vol.5, N.3. -P.246-249.

186. Saito N., Kameoka S. Serum laminin is an independent prognostic factor in colorectal cancer // Int. J. Colorectal Dis. 2005. - Vol.20, N.3. - P.238-244.

187. Sarris M., Lee C.S. Nm23 protein expression in colorectal carcinoma metastasis in regional lymph nodes and the liver // Eur. J. Surg. Oncol. 2001. -Vol.27.-N.2.-P. 170- 174.

188. Sheen-Chen S.M., Chen H.S., Eng H.L., Chen W.J. Circulating soluble Fas in patients with breast cancer // World J. Surg. 2003. - Vol.27, N. 1. - P.l0-13.

189. Shimokawa K., Inada K. Advances of immunohistochemistry and its application to histopathology studies on liver metastasis of colorectal carcinoma -venous basement membrane laminin // Rinsho Byori. - 1990. - Vol.38, N.2. -P.l 15-123.

190. Shin J.E., Jung S.A., Kim S.E. et al. Expression of MMP-2, HIF-lalpha and VEGF in Colon Adenoma and Colon Cancer // Korean J. Gastroenterol. 2007. -Vol.50, N.1.-P.9-18.

191. Shinkaruk S.3 Bayle M., Lain G. et al.Vascular endothelial cell growth factor

192. VEGF), an emerging target for cancer chemotherapy // Curr. Med. Chem.

193. Anticancer Agents. 2003. - Vol.3, N.2. - P.95-117.

194. Shinto E., Mochizuki H., Ueno H. et al. A novel classification of tumour budding in colorectal cancer based on the presence of cytoplasmic pseudo-fragments around budding foci // Histopathology. 2005. - Vol. 47, N. 1. - P. 25 -31.

195. Shiraki K., Tsuji N., Shioda T. et al. Expression of Fas ligand in liver metastases of human colonic adenocarcinomas. // Proc. Natl. Acad. Sci. US A.-1997.-Vol. 94.-N 12.-P. 6420-6425.

196. Sis В., Sagol O., Kupelioglu A. et al. Prognostic significance of matrix metalloproteinase-2, cathepsin D, and tenascin-C expression in colorectal carcinoma // Pathol. Res. Pract. 2004. - Vol.200, N.5. - P.379-387.

197. Sohail A., Sun Q., Zhao H. et al. MT4-(MMP17) and MT6-MMP (MMP25), A unique set of membrane-anchored matrix metalloproteinases: properties and expression in cancer // Cancer Metastasis Rev. 2008.

198. Song E., Chen J., Ouyang N. et al. Soluble Fas ligand released by colon adenocarcinoma cells induces host lymphocyte apoptosis: an active mode ofimmune evasion in colon cancer // Br. J. Cancer. 2001. Vol.85, N.7. - P. 1047i1054.

199. Staton C.A., Chetwood A.S., Cameron I.C. et al. The angiogenic switch occurs at the adenoma stage of the adenoma carcinoma sequence in colorectal cancer // Gut. 2007. - Vol.56, N. 10. - P. 1426-1432.

200. Sutnar A, Pesta M, Liska V. et al. Clinical relevance of the expression of mRNA of MMP-7, MMP-9, TIMP-1, TIMP-2 and CEA tissue samples from colorectal liver metastases // Tumour Biol. 2007. - Vol.28, N.5. - P.247-252.

201. Suwa Т., Sakurai J., Ohtsubo T. Can CEA be a risk factor for reccurence in stage II colon cancer // Tumor Biology. 2008 - Vol.29 (Suppl.l). - P.83.

202. Takahashi M., Kataoka S. Development of anti cancer drugs targeted on Fas-mediated apoptosis signal // Gan. To. Kagaku. Ryoho. 1997. - Vol.24, N.2. -P.222-228.

203. Tien Y.W., Jeng Y.M., Hu R.H. et al. Intravasation-related metastatic factors in colorectal cancer // Tumour Biol. 2004. - Vol.25. - N.l-2. - P.48 - 55.

204. Tomita Т., Iwata K. Matrix metalloproteinases and tissue inhibitors of metalloproteinases in colonic adenomas-adenocarcinomas // Dis. Colon Rectum. -1996.-Vol.39, N.l 1.-P.1255-1264.

205. Tonini G., Pantano F., Vincenzi B. et al. Molecular prognostic factors in patients with pancreatic cancer // Expert. Opin. Ther. Targets. 2007. - Vol.11, N.12. - P.1553-1569.

206. Turpeenniemi-Hujanen T. Gelatinases (MMP-2 and -9) and their natural inhibitors as prognostic indicators in solid cancers // Biochimie. 2005. - Vol.87, N.3-4. - P.287-297.

207. Tutton M.G., George M.L., Eccles S.A. et al. Use of plasma MMP-2 and MMP-9 levels as a surrogate for tumour expression in colorectal cancer patients // Int. J. Cancer. 2003. - Vol.107, N.4. - P.541-550.

208. Ueno K., Kaneko S., Nakamura M. et al. Frizzled-7 as a potential therapeutic target in colorectal cancer // Tumor Biology. 2008. - Vol.29 (Suppl. 1). - p.44.

209. Visse R., Nagase H. Matrix metalloproteinases and tissue inhibitors of metalloproteinases: structure, function and biochemistry // Circ. Res. 2003. -Vol.92.-P.827-839.

210. Waas E.T., Wobbes Т., Lomme R.M. et al. Matrix metalloproteinase 2 and 9 activity in patients with colorectal cancer liver metastasis // Br. J. Surg. 2003. -Vol.90, N.12. - P. 1556-1564.

211. Waas E.T., Wobbes Т., Ruers T. et al. Circulating gelatinases and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 in colorectal cancer metastatic liver disease // Eur. J. Surg. Oncol. 2006. - Vol.32, N.7. - P.756-763.

212. Wadler S. Targeted therapy in colorectal cancer // Clin. Colorectal Cancer. -2007. Vol.6, N.5. - P.357-361.

213. Watermann I., Gerspach J., Lehne M. et al. Activation of CD95L fusion protein prodrugs by tumor-associated proteases // Cell Death Differ. 2007. -Vol.14, N.4. - P.765-774.

214. Werner J. A., Rathcke I.O., Mandic R. The role of matrix metalloproteinases in squamous cell carcinomas of the head and neck // Clin. Exp. Metastasis. 2002. -Vol.19, N.4. - P.275-282.

215. Woessner J.F.J. Matrix metalloproteinases and their inhibitors in connective tissue remodeling//FASEB J. 1991. - Vol.5. -P.2145-2154.

216. Vogelstein В., Fearon E.R., Hamilton S.R. et.al. Genetic alterations during colorectal tumor development // N. Engl. J. Med. 1988. - P.319-525.

217. Von Kleist S. From the study of carcinoembryonic proteins to molecular medicine // Tumor Biology. 2008. - Vol.29 (Suppl.l). - P.7.

218. Woo M., Park K., Nam J. et al. Clinical implications of matrix metalloproteinase-1, -3, -7, -9, -12, and plasminogen activator inhibitor-1 gene polymorphisms in colorectal cancer // J. Gastroenterol. Hepatol. 2007. — Vol.22, N.7. - P.1064-1070.

219. Yamada H., Kondo S., Okushiba S. et al. Analysis of predictive factors for recurrence after hepatectomy for colorectal liver metastases // World J. Surg. — 2001. Vol.25, N.9. - P.l 129-1133.

220. Yang X., Dong Y., Zhao J. et al. Increased expression of human macrophage metalloelastase (MMP-12) is associated with the invasion of endometrial adenocarcinoma // Pathol. Res. Pract. 2007. - Vol.203, N.7. - P.499-505.

221. Yamada H., Kondo S., Okushiba S. et al. Analysis of predictive factors for recurrence after hepatectomy for colorectal liver metastases // World J. Surg.2001. Vol.26, N.9. - P. 1129-1133.

222. Yamasita M., Suzuki H., Nojima M. et al. Epigenetic silencing of interferon regulatory factor (IRF) family genes in colorectal and gastric cancer // Tumor Biology. 2008. - Vol.29 (Suppl.l). - P.43.

223. Yoon S.O., Park S.J., Yun C.H. et al. Roles of matrix metalloproteinases in tumor metastasis and angiogenesis // J. Biochem. Mol. Biol. — 2003. Vol.36. — P.128-137.

224. Zheng S., Han M.Y., Xiao Z.X et al. Clinical significance of vascular endothelial growth factor expression and neovascularization in colorectal carcinoma // World J. Gastroenterol. 2003. - Vol.9, N.6. - P. 1227-1230.

225. Zhou L., Xie M., Zhou J.Q. et al. 67-kDa laminin receptor in human laryngeal squamous cell carcinoma // Laryngoscope. 2006. — Vol. 116, N. 1. - P.28-32.

226. Zhu Q., Liu J.Y., Xu H.W. et al. Mechanism of counterattack of colorectal cancer cell by Fas/Fas ligand system // World J. Gastroenterol. 2005. - Vol. 11, N.39. -P.6125-6129.

227. Zucker S., Vacirca J. Role of matrix metalloproteinases (MMPs) in colorectal cancer //Cancer Metastasis Rev. -2004.- Vol.23, N.2.-P.101-117. :