Кинетические закономерности циклооксигеназной и пероксидазной реакций, катализируемых простагландин-Н-синтазой тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.02, кандидат химических наук Цаплина, Людмила Александровна

• Цаплина, Людмила Александровна
• кандидат химических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат химических наук Цаплина, Людмила Александровна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Место РвШ в цепи синтеза простагландинов.

2. Структура РвНБ.

2.1 Доменная структура РвШ.

2.2 Структура циклооксигеназного и пероксидазного активных центров.

3. Каталитические свойства РвШ: циклооксигеназная и пероксидазная реакции.

4. Механизм циклооксигеназной реакции РвШ.

4.1 Циклооксигеназная реакция.

4.2 Роль торозил-радикала в осущесвлении циклооксигеназной реакции РвШ.

4.3 Связывание арахидоновой кислоты в циклооксигеназном активном центре.

4.4 Молекулярный кислород как субстрат циклооксигеназной реакции.

5. Механизм пероксидазной реакции РвНБ.

6. Кинетические особенности действия РвШ и схемы, предложенные для описания этих особенностей.

7. Влияние различных ингибиторов на циклооксигеназную активность фермента РвНБ.

7.1 Селективные ингибиторы по отношению к изоформам РвШ.

7.2 Механизмы действия ингибиторов РвШ.

7.3 Структурные различия циклооксигеназного активного центра РвНБ-! и 2, влияющие на механизмы их ингибирования.

7.4 Создание новых специфичных ингибиторов РОШ-2 путем биохимических преобразований КБАГОб.

7.5 Недостатки использования специфичных ингибиторов РОН8-2.

Сердечно-сосудистые заболевания.

8. Инактивация РвШ.

8.1 Инактивация РвШ в процессе реакции.

8.2 Кинетические механизмы, предлагаемые для описания инактивации РвШ.

9. Бифункциональные ферменты.

10. Многосубстратные ферментативные реакции.

11. Инактивация ферментативных реакций.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

1. Материалы.

2. Методы.

2.1 Получение РвШ.

2.2 Очистка РвШ.

2.3 Определение белка.

2.4 Электрофорез в полиакриаламидном геле.

2.5 Определение активностей РвШ.

2.5.1 Определение циклооксигеназной активности.

2.5.2 Определение пероксидазной активности.

2.5.3 Определение суммарной активности РвШ.

2.5.4 Определение каталазной активности.

2.5.5 Определение циклооксигеназной активности РвШ при различных значениях рН.

2.5.6 Ингибирование циклооксигеназной активности напроксеном.

2.5.7 Обработка кинетических кривых.

2.6 Определение активностей РвШ в ходе протекания альтернативной реакции.

2.6.1 Циклооксигеназная активность фермента РОНБ, инкубированного в условиях протекания пероксидазной реакции.

2.6.2 Пероксидазная активность фермента РвНБ, инкубированного в условиях протекания циклооксигеназной реакции.

2.7 Определение активностей РОШ при прединкубации фермента с перекисью водорода.

2.7.1 Определение циклооксигеназной активности.

2.7.2 Определение пероксидазной активности.

2.8 Обработка экспериментальных данных по инактивации РвШ.

2.9 Определение циклооксигеназной активности РОНБ в присутствии экзогенно добавленных гемина, сульфата аммония и додецилсульфата натрия.

2.10 Квантово-химические расчеты.

3. Приготовление растворов.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

I. Теоретическое исследование кинетических закономерностей ферментативных реакций.

1. Разработка теоретических моделей.

1.1 Обобщенная модель неразветвленной ферментативной реакции, сопровождающейся инактивацией фермента в процессе реакции.

I.2. Кинетические закономерности взаимного влияния двух реакций, катализируемых бифункциональным ферментом.

II. Экспериментальное исследование кинетических закономерностей фермента РвШ.

2. Очистка РвНБ методом колоночной хроматографии.

3. Исследование взаимного влияния циклооксигеназной и пероксидазной реакций фермента РвШ.

3.1 Влияние доноров электронов, субстратов пероксидазной реакции, на циклооксигеназную реакцию РОНБ.

3.2 Влияние перекиси водорода, субстрата пероксидазной реакции, на циклооксигеназную реакцию РОНБ.

3.3 Влияние напроксена, ингибитора циклооксигеназной реакции РвШ, на циклооксигеназную и пероксидазную реакции.

3.4 Влияние арахидоновой кислоты, субстрата циклооксигеназной реакции РОНБ, на пероксидазную реакцию.

3.5 Влияние напроксена, ингибитора циклооксигеназной реакции РвШ, на суммарную реакцию.

4. Кинетическая модель действия РОНБ.

4.1 Требования к кинетической модели действия РвШ.

4.2 Предполагаемая схема действия РвНБ.

4.3 Вывод уравнения зависимости начальной скорости циклооксигеназной реакции от концентрации арахидоновой кислоты и донора электронов ТМРО.

4.4 Обсуждение результатов исследования взаимовлияния реакций РОШ.

5. Инактивация циклооксигеназной и пероксидазной реакций РвШ в процессе катализа.

5.1 Влияние времени инкубации фермента РОНБ в условиях протекания циклооксигеназной реакции в отсутствие донора электронов на пероксидазную и циклооксигеназную активности.

5.2 Влияние времени инкубации фермента РвШ в условиях протекания циклооксигеназной реакции в присутствии донора электронов на пероксидазную и циклооксигеназную активности.

5.3 Влияние времени инкубации фермента РвШ в условиях протекания пероксидазной реакции на циклооксигеназную и пероксидазную активности.

6. Кинетическая модель инактивации циклооксигеназной и пероксидазной активностей РвНБ в процессе протекания катализируемых им реакций.

7. Прединкубация с перекисями.

7.1 Влияние времени прединкубации фермента РвШ с перекисью водорода и третбутилпероксида на пероксидазную и циклооксигеназную активности.

7.2 Влияние прединкубации фермента РвШ с различными концентрациями перекиси водорода на пероксидазную активность.

7.3 Влияние прединкубации фермента РвНБ с различными концентрациями перекиси водорода на циклооксигеназную активность.

7.4 Влияние прединкубации фермента РвШ с различными концентрациями третбутилпероксида на пероксидазную активность.

7.5 Влияние прединкубации фермента РвНБ с различными концентрациями третбутилпероксида на циклооксигеназную активность.

8. Кинетическая модель инактивации циклооксигеназной и пероксидазной активностей РвШ при прединкубации с перекисью водорода.

9. Обсуждение результатов исследования инактивации РвШ. Возможные молекулярные механизмы инактивации.

9.1 Обсуждение результатов исследования инактивации РвНБ.

9.2 Возможный молекулярный механизм (химизм) инактивации циклооксигеназной реакции.

9.3 Возможный молекулярный механизм (химизм) инактивации пероксидазной реакции.

10. Зависимость кинетических характеристик циклооксигеназной активности РвШ от значения рН.

11. Влияние гемина, сульфата аммония и додецилсульфата натрия на кинетику инактивации фермента РвШ в процессе циклооксигеназной реакции.

11.1 Влияние гемина на кинетику инактивации фермента РСНБ в процессе циклооксигеназной реакции.

11.2 Влияние сульфата аммония на кинетику инактивации фермента РСНБ в процессе циклооксигеназной реакции.

11.3 Влияние додецилсульфата натрия на кинетику инактивации фермента РйШ в процессе циклооксигеназной реакции.

12. Квантово-химический расчет геометрии арахидоновой кислоты и простагландинов йг и Н2.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Кинетические закономерности циклооксигеназной и пероксидазной реакций, катализируемых простагландин-Н-синтазой»

Фермент простагландин-Н-синтаза (РОНБ, простагландин - эндопероксид синтаза, циклооксигеназа К.Ф.1.14.99.1) - катализирует превращение арахидоновой кислоты в простагландин Н2, который является исходным соединением в биосинтезе всех простагландинов, тромбоксана и простациклина в организме большинства млекопитающих, в том числе человека [1]. РвН8 имеет два активных центра, на которых протекает циклооксигеназная (окисление арахидоновой кислоты до простагландина вг [2]) и пероксидазная (восстановление перекисной группы простагландина до спиртовой [3]) реакции. В результате двух реакций образуется простагландин Н2 [4]), который далее под действием специфических ферментов - конвертаз, может превращаться в другие физиологически активные соединения, такие как простагландины Е2, 02, ¥2а, тромбоксан А2, простациклин [1,5-7]. Простагландины являются внутриклеточными сильнодействующими регуляторами, участвующими в формировании клеточного ответа на самые различные внешние воздействия, включая гормональные, механические, действие лекарственных препаратов и др. [8].

Открыт [9-11] и описан субъединичный состав фермента [12], расшифрован аминокислотный состав [13] и пространственная структура белковой молекулы [14], найдено большое число ингибиторов циклооксигеназной реакции РвН8 [7,15,16].

Фермент РвШ в растворе присутствует в виде димера, состоящего из двух одинаковых субъединиц с молекулярным весом 72 кДа [12]. Каждая субъединица РвНБ связывает молекулу гемина в качестве простетической группы и осуществляет циклооксигеназный и пероксидазный катализ в комплексе с ним [11,17]. Кинетические [18] и кристаллографические [14] исследования показали, что циклооксигеназный и пероксидазный активные центры в субъединице РвНБ пространственно разнесены и расположены по обе стороны от плоскости гемовой группы. У млекопитающих простагландин-Н-синтаза постоянно присутствует в клетках, обеспечивая их нормальное функционирование [19], эта изоформа получила название РОН8-1. Другая изоформа (РОН8-2) нарабатывается в ответ на определенные стимулы, такие как цитокины или факторы роста [20]. В настоящей работе исследовались свойства РОШ-1 из везикулярных желез (семенных пузырьков) барана.

Несмотря на то, что фермент РвНБ на протяжении многих лет является объектом интенсивного изучения, многие вопросы остаются не выясненными.

Между двумя активностями РвН8 существуют довольно сложные взаимоотношения: циклооксигеназная реакция не протекает в отсутствие перекисей, т.к. во время пероксидазной реакции происходит образование радикала тирозина 385, необходимого для осуществления циклооксигеназной реакции, пероксидазная реакция идет как в присутствии, так и в отсутствие арахидоновой кислоты, а также в присутствии ингибиторов циклооксигеназы. Обе реакции РвН8 сопровождаются быстрой и необратимой инактивацией фермента в процессе реакции [3].

До настоящего времени не существовало адекватной модели, описывающей кинетику РвШ. Бифункциональный характер РвН8 является причиной того, что все предложенные механизмы принципиально не подходят для описания работы этого фермента, так как предполагают использование уравнения материального баланса по сумме промежуточных форм фермента, участвующих в циклооксигеназной и пероксидазной реакциях. Такие механизмы характеризуются конкуренцией между реакциями, что противоречит экспериментальным данным. Адекватных моделей, описывающих инактивацию фермента, тоже нет. Систематически инактивация двух активностей РвШ не исследовалась, поэтому остается непонятной взаимосвязь инактивационных процессов в ходе обеих реакций. Этот круг вопросов и предстояло исследовать в данной диссертационной работе.

Цель исследования. Разработать методологические подходы для экспериментального исследования кинетических закономерностей катализа и инактивации фермента РвНБ. Разработать кинетическую модель действия фермента РОНБ, учитывающую его бифункциональный характер, предполагающую независимое, но взаимовлияющее протекание реакций на одной молекуле фермента. Разработать кинетические модели инактивации фермента РОНБ.

Задачи исследования:

1) Разработать экспериментальные подходы для исследования взаимовлияния реакций РвНБ, инактивации в процессе реакции и инактивации при прединкубации с перекисями циклооксигеназной и пероксидазной активностей РвШ, а также получить очищенные препараты фермента.

2) Исследовать кинетические закономерности взаимодействия и взаимовлияния пероксидазной и циклооксигеназной реакций РОНБ.

3) Исследовать кинетику инактивации циклооксигеназной активности в ходе протекания циклооксигеназной и пероксидазной реакций, и кинетику инактивации пероксидазной активности в ходе протекания циклооксигеназной и пероксидазной реакций.

4) Исследовать кинетику инактивации циклооксигеназной и пероксидазной активностей РвНБ при прединкубации с перекисными субстратами пероксидазной реакции.

5) Разработать кинетические модели катализа и инактивации бифункционального фермента РвНБ, учитывающие все особенности его действия и состояние его двух активных центров, основываясь на моделях многосубстратной ферментативной реакции, ферментативной реакции, сопровождающейся необратимой инактивации и двумерной модели бифункционального фермента.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Место PGHS в цепи синтеза простагландинов.

Фермент PGHS является составной частью полиферментной системы, осуществляющей в организмах высших животных синтез простагландинов и родственных им соединений [1,5,6].

Первое упоминание о простагландинах появилось в 30-е годы 20 века, когда одновременно несколькими учеными был открыт этот новый тип биологических регуляторов [21-23]. Работы по изучению простагландинов значительно ускорились после выделения, очистки и установления структуры природных простагландинов [24] и открытия ферментативной системы, осуществляющей их синтез in vivo [25,26]. В 70-е годы стало очевидным, что PGHS играет ключевую роль в превращении арахидоновой кислоты в простагландин Н2, который является исходным соединением в биосинтезе всех простагландинов, тромбоксана и простациклина в организме млекопитающих. Установлено, что мишенью аспирина, в то время уже широко используемого, является фермент PGHS [7]. За открытие механизма действия аспирина в 1982 году была присуждена Нобелевская премия по физиологии и медицине. С тех пор интерес к изучению простагландинов лишь усилился. Это связано с исключительно важной ролью, которую играют простагландины и родственные им соединения тромбоксаны и простациклины в развитии воспалительных процессов, повышения температуры, аллергических реакций [27,28], иммунного ответа [8,29-31], в свертывании крови [32,33], показано их участие в возниновении раковых опухолей [34,35] и болезни Альцгеймера [36]. Кроме того, они служат медиаторами боли [37,38], поэтому регуляция их синтеза - актуальная на сегодня задача медицины.

Простагландины и родственные им соединения тромбоксаны -представляют собой продукты окисления полиненасыщенных жирных кислот. Наиболее распространённой кислотой способной вступать в реакцию биосинтеза простагландинов, является цис-5,8,11,14-эйкозатетраеновая (арахидоновая, 20:4) кислота [39] (схема 1).

В зависимости от субстрата конечные продукты биосинтеза простагландинов и тромбоксанов обозначаются цифровыми индексами, которые соответствуют числу двойных связей в молекуле продукта. Соединения, образующиеся в результате ферментативного превращения арахидоновой кислоты, отмечаются индексом 2 (например РОЕ2, Р002) в отличие от производных цис-8,11,14-эйкозатриеновой (20:3) (индекс 1) и цис-5,8,11,14,17-эйкозапентаеновой (20:5) (индекс 3) кислот. Буквенные обозначения (Н, Е, Б) соответствуют характеру заместителей в молекуле продуктов, который определяется специфичностью производящих их ферментативных систем [40]. РОШ может преобразовывать 20:3, 20:4, 20:5 в соответствующие простагландины с разной степенью эффективности (20:4>20:3»20:5) [41].

Схема биоспецифического окисления жирных кислот полиферментативной системой синтеза простагландинов на примере арахидоновой кислоты показана на схеме 1 [40]. Эта схема отражает тот факт, что синтез конечных продуктов окисления жирных кислот протекает в три этапа:

1) освобождение из фосфолипидов мембран под действием фермента фосфолипазы А2 субстрата (арахидоновой кислоты) [39];

2) синтез универсального предшественника простагландинов и тромбоксанов - простагландина Н2, протекающий под действием РвШ [39,40];

3) превращение РОН2 в конечные продукты, катализируемое органоспецифическими ферментами РОН-конвертазами [40].

Далее простагландин Н2 под действием специфических конвертаз может превращаться в физиологически активные соединения, такие как простагландины Е2, ¥2, тромбоксан А2, простациклин.

Таким образом, РвШ является центральным звеном цепи синтеза внутриклеточных регуляторов - простагландинов, обеспечивающим все последующие стадии универсальным «строительным материалом» -простагландином Н2

Фосфолипиды

Схема 1. Схема биоспецифического синтеза простагландинов и тромбоксанов.

2. Структура РСНБ.

Ферментативные системы, конвертирующие жирные кислоты в прстагландины, содержатся во всех обследованных органах и тканях [42], за исключением лейкоцитов [43]. Наиболее изученными представителями РОН-синтаз являются ферменты, выделенные из везикулярных желёз барана [9] и быка [44], так как эти источники наиболее богаты РвНБ, причём основные свойства этого фермента из желёз барана и быка одинаковы [9,19].

РвНБ - мембранно-связанный гликопротеин, активные центры которого находятся на поверхности эндоплазматической сети, граничащей с цитоплазмой. В раствор этот фермент переходит в присутствии неионного детергента (наиболее часто применяют твин-20) [9,11,17,44]. В 0,1% растворе твина-20 фермент связан с детергентом в соотношении 1:0,69 по массе [9].

Данные гель-хроматографии [9,11] и электрофореза в полиакриламидном геле [9-11] дают основания считать, что фермент РвШ в растворе присутствует в виде димера, состоящего из двух одинаковых субъединиц с молекулярным весом 72 кДа [12]. На основании изучения спектров абсорбции гемовой группы РвНБ было установлено, что каждая субъединица апофермента РвНБ связывает одну молекулу гемина [17] и осуществляет циклооксигеназный и пероксидазный катализ в комплексе с ним [11,17]. Связывание гемина строго необходимо для проявления каталитических активностей фермента [9,11,17,44] и, по-видимому, существенно изменяет конформацию белка, так как неустойчивый к обработке трипсином апофермент полностью сохраняется в присутствии гемина в концентрации, достаточной для образования холофермента [45]. Равновесная константа связывания РвНБ с гемином по данным работы [46] равна 0,6*108 М"1.

Кинетические [18] и кристаллографические [14] исследования показали, что циклооксигеназный и пероксидазный активные центры в субъединице РвНБ пространственно разнесены и расположены по обе стороны от плоскости гемовой группы [14]. У млекопитающих простагландин-Н-синтаза постоянно присутствует в клетках, обеспечивая их нормальное функционирование [19], эта изоформа получила название РОН8-1. Другая изоформа (РОН8-2) нарабатывается в ответ на определенные стимулы, такие как цитокины или факторы роста [20]. В настоящей работе исследовались свойства РОН8-1 из везикулярных желез (семенных пузырьков) барана.

Изоэлектрическая точка РОШ из везикулярных желез барана согласно данным изоэлектроэлектрического фокусирования равна 7.0±0,2 [9].

Заключение диссертации по теме «Биофизика», Цаплина, Людмила Александровна

выводы.

1. Показано, что активный центр пероксидазной реакции бифункционального фермента РвШ не чувствителен к состоянию активного центра циклооксигеназной реакции, так как кинетические характеристики пероксидазной реакции не зависят от наличия в реакционной смеси арахидоновой кислоты и ингибитора циклооксигеназной реакции.

2. Разработан подход для изучения инактивации фермента, заключающийся в исследовании кинетики изменения обеих активностей РОШ в ходе протекания как циклооксигеназной, так и пероксидазной реакций; получены очищенные препараты фермента. Показано, что после полной инактивации циклооксигеназной активности сохраняется пероксидазная активность, после полной инактивации пероксидазной активности - циклооксигеназная. Проведенные исследования инактивации циклооксигеназной и пероксидазной активностей РвШ в различных условиях показали, что химические механизмы инактивации этих активностей различны.

3. Показано, что при прединкубации фермента с перекисью водорода инактивация каждой активности РОШ протекает как минимум в две стадии. При прединкубации РОШ с исследуемыми перекисями показано, что концентрация последних в широком диапазоне не влияет на константу скорости инактивации пероксидазной активности. Для циклооксигеназной активности наблюдается зависимость константы скорости инактивации от концентрации перекиси, с которой проводили прединкубацию фермента. Изучение инактивации циклооксигеназной и пероксидазной активностей РОШ при прединкубации с перекисями показало, что инактивация этих активностей имеет разные химические механизмы. Экспериментальные данные описаны с помощью кинетической модели.

4. На основе обобщенной двумерной модели действия бифункционального фермента разработана кинетическая схема действия РвШ, которая, в отличие от предложенных в литературе схем, предусматривает учет материального баланса по всем возможным интермедиатам бифункционального фермента в ходе одновременного катализа двух реакций. Схема предусматривает независимое протекание двух ферментативных реакций на одной молекуле фермента, учитывая их взаимное влияние, и описывает полученные в настоящей работе и известные из литературы экспериментальные факты.

5. На основании проанализированных моделей (обобщенной двумерной модели действия бифункционального фермента, модели многосубстратной ферментативной реакции и ферментативной реакции, сопровождающейся необратимой инактивацией) разработана кинетическая модель инактивации обеих активностей бифункционального фермента в процессе катализируемых им реакций, которая описывает экспериментальные данные и может быть использована для описания инактивации других бифункциональных ферментов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

В данной работе с кинетической точки зрения изучено взаимовлияние реакций бифункционального фермента РвН8. Показано, что пероксидазная реакция протекает независимо от циклооксигеназной, так как кинетические характеристики пероксидазной реакции не зависят от наличия в реакционной смеси арахидоновой кислоты и ингибитора циклооксигеназной реакции. В отличие от пероксидазной реакции, протекание циклооксигеназной реакции нуждается в протекании пероксидазной, ее скорость зависит от того, в каком состоянии находится активный центр пероксидазной реакции. Восстановленные формы фермента наиболее каталитически активны по отношению к циклооксигеназной реакции. Предложена модель, по которой описаны все экспериментальные данные. Модель предполагает независимое протекание двух ферментативных реакций на одной молекуле фермента и учитывает их взаимное влияние, т.е. описывает зависимость скорости циклооксигеназной реакции от концентрации арахидоновой кислоты (субстрата циклооксигеназной реакции) и от донора электронов (субстрата пероксидазной реакции).

Найдены кинетические закономерности инактивации обеих активностей РОНБ. Проведенные исследования инактивации циклооксигеназной и пероксидазной активностей РвШ в различных условиях показали, что химические механизмы инактивации этих активностей различны. Для исследования инактивации использовали различные инактивирующие агенты. Предложены модели, описывающие полученные экспериментальные зависимости. Предложены возможные молекулярные механизмы, которые могут лежать в основе процессов инактивации.

В ходе работы обнаружено, что экзогенно добавленный гемин может как инактивировать, так и стабилизировать молекулу фермента в зависимости от используемой концентрации последнего. Это явление пока не нашло объяснения.

Полученные результаты говорят о целесообразности исследования химических изменений, происходящих с молекулой фермента в процессе реакций (в том числе феномена инактивации) с помощью методов масс-спектрометрии и молекулярной динамики.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Цаплина, Людмила Александровна, 2007 год

1. Samuelsson В., Goldyne М., Granstrom Е., Hamberg М., Hammarstrom S., Malmsten С. Prostaglandins and thromboxanes // Annu. Rev. Biochem. 1978. V. 47. P. 997-1029.

2. Hamberg M., Svensson J., Wakabayashi Т., Samuelsson B. Isolation and structure of two prostaglandin endoperoxides that cause platelet aggregation // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1974. V. 71 (2). P. 345-349.

3. Hamberg M., Samuelsson B. Detection and isolation of an endoperoxide intermediate in prostaglandin biosynthesis // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1973. V. 70 (3). P. 899-903.

4. Helliwell R.J.A., Adams L.F., Mitchell M.D. Prostaglandin synthases: recent developments and a novel hypothesis // Prost. Leukot. and Essential Fatty Acids. 2004. V. 70 (2). P. 101-113.

5. Watanabe K., Yoshida R., Shimizu Т., Hayaishi O. Enzymatic formation of prostaglandin F2 alpha from prostaglandin H2 and D2. Purification and properties of prostaglandin F synthetase from bovine lung // J. Biol. Chem. 1985. V. 260(11). P. 7035-7041.

6. Vane J.R. Inhibition of prostaglandin synthesis as a mechanism of action for aspirin-like drugs//Nature. 1971. V. 231. P. 232-235.

7. Hammarstrom S. Biosynthesis and biological actions of prostaglandins and thromboxanes //Arch Biochem Biophys. 1982. V. 214 (2). P. 431-445.

8. Van der Ouderaa F.J., Buytenhek M., Nugteren D.H., Van Dorp D.A. Purification and characterisation of prostaglandin endoperoxide synthetase from sheep vesicular glands // Biochim Biophys Acta. 1977. V. 487 (2). P. 315-331.

9. Roth G.J., Siok C.J., Ozols J. Structural characteristics of prostaglandin synthetase from sheep vesicular gland I I J Biol Chem. 1980. V. 255 (4). P. 1301-1304.

10. Van der Ouderaa F.J., Buytenhek M., Slikkerveer F.J., van Dorp D.A. On the haemoprotein character of prostaglandin endoperoxide synthetase // Biochim Biophys Acta. 1979. V. 572(1). P. 29-42.

11. Smith, W.L., Garavito, R.M., DeWitt, D.L. Prostaglandin endoperoxide H synthases (cyclooxygenases)-l and -2 // 1996. J. Biol. Chem. V. 271 (52). P. 33157-33160.

12. Yokoyama, C., Takai, T., Tanabe, T. Primary structure of sheep prostaglandin endoperoxide synthase deduced from cDNA sequence // FEBS Lett. 1988. V. 231 (2). P. 347-351.

13. H.Picot D., Loll P.J., Garavito R.M. The X-ray crystal structure of the membrane protein prostaglandin H2 synthase-1 // Nature. 1994. V. 367. P. 243-249.

14. Roth G.J., Machuga E.T., Strittmatter P. The heme-binding properties of prostaglandin synthetase from sheep vesicular gland // J. Biol. Chem. 1981. V. 256 (19). P.10018-10022.

15. Marshall P.J., Kulmacz R.J. Prostaglandin H synthase: distinct binding sites for cyclooxygenase and peroxidase substrates // Arch. Biochem. Biophys. 1988. V. 266. P. 162-170.

16. Yokoyama C., Tanabe T. Cloning of human gene encoding prostaglandin endoperoxide synthase and primary structure of the enzyme // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1989. V. 165. P. 888-894.

17. Jones D.A., Carlton D.P., Mclntyre T.M., Zimmerman G.A., Prescott S.M. Molecular cloning of human prostaglandin endoperoxide synthase type II and demonstration of expression in response to cytokines // J. Biol. Chem. 1993. V. 268(12). P. 9049-9054.

18. Goldblatt M.W. A depressor substance in seminal fluid // J. Soc. Chem. Ind. 1933. V. 52. P. 1056-1057.

19. Von Euler U.S. On the specific vaso-dilating and plain muscle stimulating substances from accessory genital glands in man and certain animals (prostaglandin and vesiglandin) // J. Physiol. 1936. V. 88. P. 213-234.

20. Feigen L.P., Hyman A.L. Vascular influences of prostaglandins: introduction // Fed. Proc. 1981. V. 40 (7). P. 1985-1986.

21. Bergstrom S., Sjovall J. The isolation of prostaglandin E from sheep prostate glands//Acta. Chem. Scand. 1960. V. 14. P. 1693-1700.

22. Bergstrom S., Danielsson H., Samuelsson B. The enzymatic formation of prostaglandin E2 from arachidonic acid // Biochim. Biophys. Acta. 1964. V. 90(1). P. 207-210.

23. Van Dorp D.A., Beerthuis R.K., Nugteren D.H., Vonkeman H. The Biosynthesis of prostaglandins // Biochim. Biophys. Acta. 1964. 90 (1). P. 204-207.

24. Zhang Y., Shaffer A., Portanova J., Seibert K., Isakson P.C. Inhibition of cyclooxygenase-2 rapidly reverses inflammatory hyperalgesia and prostaglandin E2 production // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997. V. 283 (3). P. 1069-1075.

25. Kuehl F.A.Jr., Humes J.L., Egan R.W., Ham E.A., Beveridge G.C., Van Arman C.G. Role of prostaglandin endoperoxide PGG2 in inflammatory processes //Nature. 1977. V. 265. P. 170-173.

26. Vane J.R. Prostaglandins as mediators of inflammation // Adv. Prostaglandin and Thromboxane Res. 1976. V. 2. P. 791-801.

27. Kuehl F.A.Jr., Egan R.W. Prostaglandins, arachidonic acid, and inflammation // Science. 1980. V. 210 (4473). P. 978-984.

28. Patrono C. Aspirin as an antiplatelet drug // N. Engl. J. Med. 1994. V. 330 (18). P. 1287-1294.

29. Watanabe K., Yoshida R., Shimizu T., Hayaishi O. Biosynthesis of prostaglandin F2 alpha from prostaglandins H2 and D2 by an apparently homogeneous enzyme // Adv. Prostaglandin Thromboxane Leukot. Res. 1985.V. 15. P. 151-153.

30. Wlodawer P., Hammarstrom S. Some properties of prostacyclin synthase from pig aorta // FEBS Lett. 1979. V. 97 (1). P. 32-36.

31. Ullrich V., Haurand M. Thromboxane synthase as a cytochrome P450 enzyme // Adv. Prostaglandin Thromboxane Leukot. Res. 1983. V. 11. P. 105-110.

32. Christ-Hazelhof E., Nugteren D.H. Purification and characterisation of prostaglandin endoperoxide D-isomerase, a cytoplasmic, glutathione-requiring enzyme //Biochim. Biophys. Acta. 1979. V. 572 (1). P. 43-51.

33. Bergstrom S., Danielsson H., Samuelsson B. The enzymic formation of prostaglandin E2 from arachidonic acid. Prostaglandins and related factors 32 // Biochim. Biophys. Acta. 1964. V. 90. P. 207-210.

34. Kuehl F.A.Jr., Egan R.W., Prostaglandins, arachidonic acid, and inflammation // Science. 1980. V. 210 (4473). P. 978-984.

35. Feigen L.P., Hyman A.L., Vascular influences of prostaglandins: introduction // Fed. Proc. 1981. V. 40 (7). P. 1985-1986.

36. Xie W.L., Chipman J.G., Robertson D.L., Erikson R.L., Simmons D.L. Expression of a mitogen-responsive gene encoding prostaglandin synthase is regulated by mRNA splicing // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991. V. 88 (7). P. 2692-2696.

37. Tomura T., Ogata H. Distribution of prostaglandins in the animal kingdom // Biochem. Biophys. Acta. 1976. V. 431 (2). P. 127-131.

38. Borgeat P., Samuelsson B. Arachidonic acid metabolism in polymorphonuclear leucocytes: unstable intermediates in formation of dihydroxy acids // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1976. V. 73 (7). P. 32133217.

39. Miyamoto T., Ogino N., Yamamoto S., Hayaishi O. Purification of prostaglandin endoperoxide synthetase from bovine vesicular gland microsomes // J. Biol. Chem. 1976. V. 251 (9). P. 2629-2636.

40. Kulmacz R.J., Lands W.E. Protection of prostaglandin H synthase from trypsin upon binding of heme // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1982. V. 104 (2). P. 758-764.

41. Veno R., Shimizu T., Kondo K., Hayaishi O. Activation mechanism of prostaglandin endoperoxide synthetase by hemoproteins // J. Biol. Chem. 1982. 257 (10). P. 5584-5588.

42. Fu J.Y., Masferrer J.L., Seibert K., Raz A., Needleman P. The induction and suppression of prostaglandin H2 synthase (cyclooxygenase) in human monocytes // J. Biol. Chem. 1990. V. 265 (28). P. 16737-16740.

43. Smith W.L., DeWitt D.L., Garavito R.M. Cyclooxygenases: structural, cellular, and molecular biology // Annu. Rev. Biochem. 2000. V. 69. P. 145182.

44. Luong C., Miller A., Barnett J., Chow J., Ramesha C., Browner M.F. Flexibility of the NSAID binding site in the structure of human cyclooxygenase-2 //Nat. Struct. Biol. 1996. V. 3. P. 9277-9233.

45. Kulmacz R.J., Lands W.E. Protection of prostaglandin H synthase from trypsin upon binding of heme // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1982. V. 104. P. 758-764.

46. Kulmacz R.J. Concerted loss of cyclooxygenase and peroxidase activities from prostaglandin H synthase upon proteolytic attack // Prostaglandins. 1989. V.38.P. 277-288.

47. Raz A., Needleman P. Differential modification of cyclo-oxygenase and peroxidase activities of prostaglandin endoperoxidase synthase by proteolytic digestion and hydroperoxides // Biochem. J. 1990. V. 269. P. 603-607.

48. Guo Q., Chang S., Diekman L., Xiao G., Kulmacz R.J. Comparison of prostaglandin H synthase isoform structures using limited proteolytic digestion // Arch. Biochem. Biophys. 1997. V. 344. P. 150-158.

49. Guo Q., Kulmacz R.J. Distinct influences of carboxyl terminal segment structure on function in the two isoforms of prostaglandin H synthase // Arch. Biochem. Biophys. 2000. V. 384. P. 269-279.

50. Kulmacz R.J., van der Donk W.A., Tsai A.L. Comparison of the properties of prostaglandin H synthase-1 and -2 // Prog. Lipid. Res. 2003.V. 42 (5). 377-404.

51. Toh H. Prostaglandin endoperoxide synthase contains an EGF-like domain // FEBS Lett. 1989. V. 258. P. 317-319.

52. Smith T., Leipprandt J., DeWitt D. Purification and characterization of the human recombinant histidine-tagged prostaglandin endoperoxide H synthases-1 and -2 // Arch. Biochem. Biophys. 2000. V. 375. P. 195-200.

53. Shaftel S.S., Olschowka J.A., Hurley S.D., Moore A.H., O'Banion M.K. COX-3: a splice variant of cyclooxygenase-1 in mouse neural tissue and cells // Brain. Res. Mol. Brain. Res. 2003 V. 119. P. 213-215.

54. Malkowski M.G., Ginell S.L., Smith W.L., Garavito R.M. The productive conformation of arachidonic acid bound to prostaglandin synthase // Science. 2000. V. 289 (5486). P. 1933-1937.

55. Struijk C.B., Beerthuis R.K., Van Dorp D.A. Specificity in the enzymayic conversion of polyunsaturated fatty acids into prostaglandins. Nobel

56. Symposium 2 // Prostaglandins. Stokholm. Almqwist & Wiksell. 1967. P. 51-56.

57. Van Dorp D.A. Recent development in the biosynthesis and analyses of prostaglandins//Ann.N.Y. Acad. Sci. 1971. V. 180 (1). P. 181-195.

58. Samuelsson B. On the incorporationn of oxygen in the conversion of 8,11,14-eicosatrienoic acid to prostaglandin Ei // J. Amer. Chem. Soc. 1965. V. 87(13). P. 3011-3013.

59. Nugteren D.H., van Dorp D.A. The participation of molecular oxygen in the biosynthesis of prostaglandins // Biochim. Biophys. Acta. 1965. V. 98 (3). P. 654-656.

60. Hemler M.E., Crawford C.G., Lands W.E. Lipoxygenation activity of purified prostaglandin-forming cyclooxygenase // Biochemistry. 1978. V. 17 (9). P. 1772-1779.

61. Hemler M.E., Graff G., Lands W.E. Accelerative autoactivation of prostaglandin biosynthesis by PGG2 // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1978. V. 85(4). P. 1325-1331.

62. Hemler M.E., Lands W.E. Evidence for a peroxide-initiated free radical mechanism of prostaglandin biosynthesis // J. Biol. Chem. 1980. V. 255 (13). P. 6253-6261.

63. Egan, R.W., Gale P.H., Baptista E.M., Kennicott K.L., VandenHeuvel W.J., Walker R.W., Fagerness P.E., Kuehl F.A.Jr. Oxidation reactions by prostaglandin cyclooxygenase-hydroperoxidase // J. Biol. Chem. 1981. V. 256 (14). P. 7352-7361.

64. Egan R.W., Gale P.H., Kuehl F.A. Jr. Reduction of hydroperoxides in the prostaglandin biosynthetic pathway by a microsomal peroxidase // J. Biol. Chem. 1979. V. 254 (9). P. 3295-3302.

65. Marnett L.J., Bienkowski M.J. Hydroperoxide-dependent oxygenation of trans-7,8-dihydroxy-7,8-dihydro benzoa.pyrene by ram seminal vesicle microsomes. Source of the oxygen // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1980. V. 96 (2). P. 639-647.

66. Marnett L.J., Bienkowski M.J., Pagels W.R. Oxygen 18 investigation of the prostaglandin synthetase-dependent co-oxidation of diphenylisobenzofuran //J. Biol. Chem. 1979. V. 254 (12). P. 5077-5082.

67. Marshall P.J., Kulmacz R.J., Lands W.E. Constraints on prostaglandin biosynthesis in tissues // J. Biol. Chem. 1987. V. 262 (8). P. 3510-3517.

68. Samuelsson B. Biosynthesis of prostaglandins // Fed. Proc. 1972. V. 31 (5). 1442-1450.

69. Hamberg M., Samuelsson B. On the mechanism of the biosynthesis of prostaglandins E-l and F-l-alpha // J. Biol. Chem. 1967. V. 242 (22). P. 5336-5343.

70. Marnett L.J. Cyclooxygenase mechanisms // Curr. Opin. Chem. Biol. 2000 V. 4. P. 545-552.

71. Mason R.P., Kalyanaraman B., Tainer B.E., Eling T.E. A carbon-centered free radical intermediate in the prostaglandin synthetase oxidation of arachidonic acid. Spin trapping and oxygen uptake studies // J. Biol. Chem. 1980. V. 255 (11). P. 5019-5022.

72. Hamberg M., Samuelsson B. Oxygenation of unsaturated fatty acids by the vesicular gland of sheep // J Biol Chem. 1967. V. 242 (22). P. 5344-5354.

73. Egan R.W., Paxton J., Kuehl F.A.Jr. Mechanism for irreversible self-deactivation of prostaglandin synthetase // J. Biol. Chem. 1976. V. 251 (23). P. 7329-7335.

74. Kalyanaraman B., Mason R.P., Tainer B., Eling T.E. The free radical formed during the hydroperoxide-mediated deactivation of ram seminal vesicles is hemoprotein-derived //J. Biol. Chem. 1982. V. 257 (9). P. 4764-4768.

75. Karthein R., Dietz R., Nastainczyk W., Ruf H.H. Higher oxidation states of prostaglandin H synthase. EPR study of a transient tyrosyl radical in the enzyme during the peroxidase reaction // Eur. J. Biochem. 1988. V. 171 (12). P. 313-320.

76. Shimokawa T., Kulmacz R.J., DeWitt D.L., Smith W.L. Tyrosine 385 of prostaglandin endoperoxide synthase is required for cyclooxygenase catalysis // J. Biol. Chem. 1990. V. 265 (33). P. 20073-20076.

77. Tsai A.L., Hsi L.C., Kulmacz R.J., Palmer G., Smith W.L. Characterization of the tyrosyl radicals in ovine prostaglandin H synthase-1 by isotope replacement and site-directed mutagenesis // J. Biol. Chem. 1994. V. 269 (7). P. 5085-5091.

78. Smith W. L., Eling T.E., Kulmacz R.J., Marnett L.J., Tsai A. Tyrosyl radicals and their role in hydroperoxide-dependent activation and inactivation of prostaglandin endoperoxide synthase // Biochemistry. 1992. V.31(l). P. 3-7.

79. Malkowski M.G., Theisen M.J., Scharmen A., Garavito R.M. The formation of stable fatty acid substrate complexes in prostaglandin H(2) synthase-1 // Arch. Biochem. Biophys. 2000. V. 380 (1). P. 39-45.

80. Lands W.E.M., Sauter J., Stone G.W. Oxygen requirement for prostaglandin biosynthesis // Biochem. Prostaglandins and Medicine. 1978. V. 1 (2). P. 117-120.

81. Juranek I., Suzuki H., Yamamoto S. Affinities of various mammalian arachidonate lipoxygenases and cyclooxygenases for molecular oxygen as substrate // Biochim. Biophys. Acta. 1999. V. 1436 (3). P. 509-518.

82. Longu S., Medda R., Padiglia A., Pedersen J.Z., Floris G. The reaction mechanism of plant peroxidases // Ital. J. Biochem. 2004. V. 53(1). P. 41-45.

83. Hsuanyu Y., Dunford H.B. Prostaglandin H synthase kinetics. The effect of substituted phenols on cyclooxygenase activity and the substituent effect on phenolic peroxidatic activity // J. Biol. Chem. 1992. V. 267 (25). P. 1764917657.

84. Bakovic M, Dunford H.B. Reactions of prostaglandin endoperoxide synthase and its compound I with hydroperoxides // J. Biol. Chem. 1996. V. 271 (4). P. 2048-2056.

85. Koshkin V., Dunford B.H. Coupling of the peroxidase and cyclooxygenase reactions of prostaglandin H synthase // Biochim. Biophys. Acta. 1999. V. 1430 (2). P. 341-348.

86. Egan R.W., Gale P.H., Beveridge G.C., Marnett L.J., Kuehl F.A.Jr. Direct and indirect involvement of radical scavengers during prostaglandin biosynthesis // Adv. Prostaglandin Thromboxane Res. 1980. V. 6. P. 153155.

87. Robak J., Wieckowski A., Gryglewski R. The effect of 4-acetamidophenol on prostaglandin synthetase activity in bovine and ram seminal vesicle microsomes // Biochem. Pharmacol. 1978. V. 27. P. 393396.

88. Wei С., Kulmacz R.J., Tsai A.L. Comparison of branched-chain and tightly coupled reaction mechanisms for prostaglandin H synthase // Biochemistry. 1995. V. 34 (26). P. 8499-8512.

89. Tien J.H., Hazelton W.D., Sparks R., Ulrich C.M. A Michaelis-Menten-style model for the autocatalytic enzyme prostaglandin H synthase // Bull. Math. Biol. 2005. V. 67 (4). P. 683-700.

90. Hazelton W.D., Tien J.H., Donato V.W., Sparks R., Ulrich C.M. Prostaglandin H synthases: members of a class of quasi-linear threshold switches // Biochem. Pharmacol. 2004. V. 68 (3). P. 423-432.

91. McCarthy D. Nonsteroidal anti-inflammatory drug-related gastrointestinal toxicity: definitions and epidemiology // Am. J. Med. 1998. V. 105(5A). P.3S-9S.

92. Laine L. Nonsteroidal anti-inflammatory drug gastropathy // Gastrointest Endosc. Clin. N. Am. 1996. V. 6 (3). P. 489-504.

93. Mitchell J.A., Akarasereenont P., Thiemermann C., Flower R.J., Vane J.R. Selectivity of nonsteroidal antiinflammatory drugs as inhibitors of constitutive and inducible cyclooxygenase // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. V. 90 (24). P. 11693-11697.

94. Варфоломеев С.Д. Простагландины новый тип биологических регуляторов // Соросовский образовательный журнал. 1996. Т. 1. С. 4047.

95. Humes J.L., Winter C.A., Sadowski S.J., Kuehl. F.A. Jr. Multiple sites on prostaglandin cyclooxygenase are determinants in the action of nonsteroidal antiinflammatory agents // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1981. V. 78 (4). P. 2053-2056.

96. Appleton R.A., Brown K. Conformational requirements at the prostaglandin cyclooxygenase receptor site: a template for designing nonsteroidal anti-inflammatory drugs // Prostaglandins. 1979. V. 18 (1). P. 2934.

97. Guo Q., Wang L.H., Ruan K.H., Kulmacz R.J. Role of Val509 in time-dependent inhibition of human prostaglandin H synthase-2 cyclooxygenase activity by isoform-selective agents // J. Biol. Chem. 1996. V. 271 (32). P. 19134-19139.

98. Marnett L.J., Rowlinson S.W., Goodwin D.C., Kalgutkar A.S., Lanzo C.A. Arachidonic acid oxygenation by COX-1 and COX-2. Mechanisms of catalysis and inhibition//J. Biol. Chem. 1999. V. 274 (33). P. 22903-22906.

99. Roth G.J., Stanford N., Majerus P.W. Acetylation of prostaglandin synthase by aspirin // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1975. V. 72 (8). P. 30733076.

100. Kalgutkar A.S., Crews B.C., Rowlinson S.W., Garner C., Seibert K., Marnett L.J. Aspirin-like molecules that covalently inactivate cyclooxygenase-2 // Science. 1998. V. 280 (5367). P. 1268-1270.

101. Kalgutkar A.S., Kozak K.R., Crews B.C., Hochgesang G.P.Jr., Marnett L.J. Covalent modification of cyclooxygenase-2 (COX-2) by 2-acetoxyphenyl alkyl sulfides, a new class of selective COX-2 inactivators // J. Med. Chem. 1998. V. 41 (24). P. 4800-4818.

102. Bayly C.I., Black W.C., Leger S., Ouimet N., Ouellet M., Percival M.D. Structure-based design of COX-2 selectivity into flurbiprofen // Bioorg. Med. Chem. Lett. 1999. V. 9 (3). P. 307-312.

103. Psaty B.M., Furberg C.D. COX-2 inhibitors-lessons in drug safety // N. Engl. J. Med. 2005. V. 352 (11). P. 1133-1135.

104. Nussmeier N.A., Whelton A.A., Brown M.T., Langford R.M., Hoeft A., Parlow J.L., Boyce S.W., Verburg K.M. Complications of the COX-2 inhibitors parecoxib and valdecoxib after cardiac surgery // N. Engl. J. Med. 2005. V. 352 (11). P. 1081-1091.

105. Becker R.C. COX-2 inhibitors // Tex. Heart. Inst. J. 2005. V. 32 (3). P. 380-383.

106. Smith W.L., Lands W.E.M. Oxygenation of polyunsaturated fatty acids during prostaglandin biosynthesis by sheep vesicular gland // Biochemistry. 1972. V. 11. P. 3276-3285.

107. Smith F.L., Carpenter M.P. Studies of the mechanism of inactivation of prostaglandin endoperoxide synthetase // Fed. Proceedings. 1982. V. 41 (4). P. 1443-1450.

108. Kulmacz R.J., Pendleton R.B., Lands W.E.M. Interaction between peroxidase and cyclooxygenase activities in prostaglandin-endoperoxide synthase. Interpretation of reaction kinetics // J. Biol. Chem. 1994. V. 269 (8). P. 5527-5536.

109. Kulmacz R.J. Prostaglandin H synthase and hydroperoxides: peroxidase reaction and inactivation kinetics // Arch. Biochem. Biophys. 1986. V. 249 (2). P. 273-285.

110. Song I., Ball T.M., Smith W.L. Different suicide inactivation processes for the peroxidase and cyclooxygenase activities of prostaglandin endoperoxide H synthase-1 // Biochem. Biophys. Res. Communs. 2001. V. 289 (4). P. 869-875.

111. Wu G., Wei C., Kulmacz R.J., Osawa Y., Tsai A.L. A mechanistic study of self-inactivation of the peroxidase activity in prostaglandin H synthase-1 //J. Biol. Chem. 1999. V. 274 (14). P. 9231-9237.

112. Tsai A.L., Palmer G., Kulmacz R.J. Prostaglandin H synthase. Kinetics of tyrosyl radical formation and of cyclooxygenase catalysis // J. Biol. Chem. 1992. V. 267 (25). P. 17753-17759.

113. Lu G., Tsai A.L., Van Wart H.E., Kulmacz R.J. Comparison of the peroxidase reaction kinetics of prostaglandin H synthase-1 and -2 // 1999. J. Biol. Chem. V. 274 (23). P. 16162-16167.

114. Bambai B., Rogge C.E., Stec B., Kulmacz RJ. Role of Asn-382 and Thr-383 in activation and inactivation of human prostaglandin H synthase cyclooxygenase catalysis // J. Biol. Chem. 2004. V. 279 (6). P. 4084-4092.

115. Wu G., Kulmacz R.J., Tsai A.L. Cyclooxygenase inactivation kinetics during reaction of prostaglandin H synthase-1 with peroxide // Biochemistry. 2003. V. 42 (46). P. 13772-13777.

116. Yourno J., Kohno T., Roth J.R. Enzyme evolution: generation of a Afunctional enzyme by fusion of adjacent genes // Nature. 1970. V. 228 (5274). P. 820-824.

117. Smith S. The animal fatty acid synthase: one gene, one polypeptide, seven enzymes // FASEB J. 1994. V. 8 (15). P. 1248-1259.

118. Liang P.H., Anderson K.S. Substrate channeling and domain-domain interactions in bifunctional thymidylate synthase-dihydrofolate reductase // Biochemistry. 1998. V. 37 (35). P. 12195-12205.

119. Huang X., Holden H.M., Raushel F.M. Channeling of substrates and intermediates in enzyme-catalyzed reactions // Annu. Rev. Biochem. 2001. V. 70. P. 149-180.

120. Meek T.D., Garvey E.P., Santi D.V. Purification and characterization of the bifunctional thymidylate synthetase-dihydrofolate reductase from methotrexate-resistant Leishmania tropica // Biochemistry. 1985. V. 24 (3). P. 678-686.

121. Miles E.W., Rhee S., Davies D.R. The molecular basis of substrate channeling//J. Biol. Chem. 1999. V. 274 (18). P. 12193-12196.

122. Trujillo M., Donald R. G.K., Roos D.S., Greene P.J., Santi D.V. Heterologous expression and characterization of the bifunctional dihydrofolate reductase-thymidylate synthase enzyme of Toxoplasma gondii //Biochemistry. 1996. V. 35 (20). P. 6366-6374.

123. Schneider T.R., Gerhardt E, Lee M, Liang P.H., Anderson K.S., Schlichting I. Loop closure and intersubunit communication in tryptophan synthase // Biochemistry. 1998. V. 37 (16). P. 5394-5406.

124. Leys D., Basran J., Scrutton N.S. Channelling and formation of'active' formaldehyde in dimethylglycine oxidase // EMBO J. 2003. V. 22 (16). P. 4038-4048.

125. Miles B.W., Banzon J.A., Raushel F.M. Regulatory control of the amidotransferase domain of carbamoyl phosphate synthetase // Biochemistry. 1998. V. 37 (47). P. 16773-16779.

126. Eling T.E., Glasgow W.C., Curtis J.F., Hubbard W.C., Handler J.A. Studies on the reduction of endogenously generated prostaglandin G2 by prostaglandin H synthase // J. Biol. Chem. 1991. V. 266 (19). P. 1234812355.

127. Easterby J.S. A generalized theory of the transition time for sequential enzyme reactions//Biochem. J. 1981. V. 199 (1). P. 155-161.

128. Easterby J.S. The kinetics of consecutive enzyme reactions. The design of coupled assays and the temporal response of pathways // Biochem. J. 1984. V. 219(3). P. 843-847.

129. Liang P.H., Anderson K.S. Kinetic reaction scheme for the dihydrofolate reductase domain of the bifunctional thymidylate synthase-dihydrofolate reductase from Leishmania major // Biochemistry. 1998. V. 37 (35). P. 12206-12212.

130. Вржещ П.В. Кинетическая модель бифункционального многосубстратного фермента. Стационарное приближение // Биохимия. 1999. Т. 64 (4). С. 502-512.

131. Alberty R.A. The relationship between Michaelis constants, maximum velocities and the equilibrium constants for an enzyme-catalysed reaction // J. Amer. Chem. Soc. 1953. V. 75 (8). P. 1928-1932.

132. Theorell H., Chance B. Studies of liver alcohol dehydrogenase. II. The kinetics of the compound of horse liver alcohol dehydrogenase and reduced diphosphopyridine nucleotide // Acta. Chem. Scand. 1951. V. 5 (7-8). P. 1127-1144.

133. Dalziel K. Initial steady state velocities in the evaluation of the enzyme-coenzyme-substrate reaction mechanism // Acta. Chem. Scand. 1957. V. 11 (10). P. 1706-1723.

134. Cleland W.W. The kinetics of enzyme-catalyzed reactions with two or more substrates or products. I. Nomenclature and rate equations // Biochim. Biophys. Acta. 1963. V. 67. P. 104-137.

135. Cleland W.W. The kinetics of enzyme-catalyzed reactions with two or more substrates or products. II. Inhibition: nomenclature and theory // Biochim. Biophys. Acta. 1963. V. 67. P. 173-187.

136. King E.L., Altman C. A schematic method of deriving the rate laws for enzyme-catalyzed reactions//J. Phys. Chem. 1956. V. 60. P. 1375-1378.

137. Ferdinand W. The interpretation of non-hyperbolic rate curves for two-substrate enzymes. A possible mechanism for phosphofructokinase // Biochem. J. 1966. V. 98 (1). P. 278-283.

138. Sweeny J.R., Fisher J.R. An alternative to allosterism and cooperativity in the interpretation of enzyme kinetic data // Biochemistry. 1968. V. 7 (2). P. 561-565.

139. Monod J., Wyman J., Changeux J.-P. On the nature of allosteric transitions: a plausible model //J. Mol. Biol. 1965. V. 12. P. 88-118.

140. Koshland D.E.Jr., Nemethy G., Filmer D. Comparison of experimental binding data and theoretical models in proteins containing subunits // Biochemistry. 1966. V. 5 (1). P. 365-385.

141. Peller L., Alberty R.A. Multiple intermediates in steady state enzyme kinetics. I. The mechanism involving a single substrate and product // J. Amer. Chem. Soc. 1959. V. 81. P. 5907-5914.

142. Volkenstein M.V., Goldstein B.N. A new method for solving the problems of the stationary kinetics of enzymological reactions // Biochim. Biophys. Acta. 1966. V. 115 (2). P. 471-477.

143. Volkenstein M.V., Goldstein B.N. Allosteric enzyme models and their analysis by the theory of graphs // Biochim. Biophys. Acta. 1966. V. 1152.. P. 478-485.

144. Cha S. A simple method for derivation of rate equations for enzyme-catalyzed reactions under the rapid equilibrium assumption or combined assumptions of equilibrium and steady state // J. Biol. Chem. 1968. V. 243 (4). P. 820-825.

145. Roy, A.B. Kinetic properties of arylsulphatase A~theoretical treatment // Biochim. Biophys. Acta. 1972. V. 276 (2). P. 488-490.

146. Walsh C., Cromartie T., Marcotte P. Suicide substrates for flavoprotein enzymes // Method Enzymol. 1978. V. 53. P. 437-448.

147. Waley. S.G. Kinetics of suicide substrates // Biochem. J. 1980. V. 1853.. P. 771-773.

148. Tatsunami S., Yago N., Hosoe M. Kinetics of suicide substrates. Steady-state treatments and computer-aided exact solutions // Biochim. Biophys. Acta. 1981. V. 662 (2). P. 226-235.

149. Duggleby R.G. Progress curves of reactions catalyzed by unstable enzymes. A theoretical approach//Theor. Biol. 1986. V. 123 (1). P. 67-80.

150. Garrido-del Solo C., Garcia-Canovas F., Havsteen B.N., Varon-Castellanos R. Kinetic analysis of a Michaelis-Menten mechanism in which the enzyme is unstable // Biochem. J. 1993. V. 294 (2). P. 459-464.

151. Lowry O.H., Rosenbrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent // J. Biol. Chem. 1951. V. 193 (1). P. 265-272.

152. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding //Anal. Biochem. 1976. V. 72. P. 248-254.

153. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 //Nature. 1970. V. 227 (5259). P. 680-685.

154. Merril C.R. Gel-staining techniques // Meth Enzymol. 1990. V. 182. P. 477-488.

155. Reisner A.H., Nemes P., Bucholtz C. The use of Coomassie Brilliant Blue G250 perchloric acid solution for staining in electrophoresis and isoelectric focusing on polyacrylamide gels // Anal. Biochem. 1975. V. 64 (2). P. 509-516.

156. Франк Г.М., Кондрашова M.H., Мохова E.H., Ротенберг Ю.С. Руководство по изучению биологического окисления полярографическим методом // Наука. Москва. 1973.

157. Kulmacz R.J., Ren Y., Tsai A.L., Palmer G. Prostaglandin H synthase: spectroscopic studies of the interaction with hydroperoxides and with indomethacin // Biochemistry. 1990. V. 29 (37). P. 8760-8771.

158. Кузнецова Ю.А., Ромах В.Б., Строкин М.Л., Мевх А.Т. Чувствительный метод определения активности простагландин-Н-синтазы // Вестн. моек, ун.-та. 1998. Т. 39 (5). С. 302-304.

159. Вржещ П.В. Интегральная кинетика многосубстратных ферментативных реакций. Критерии кинетического поведения и характеристические координаты для решения прямой и обратной задач // Биохимия. 1996. Т. 61. С. 2069-2083.

160. Falk J.E. (1964) in: Porphyrins and metalloporphyrins, Elsevier Amsterdam. N.Y.-L. V. 2. P. 181-241.

161. Kulmacz R.J. Prostaglandin G2 levels during reaction of prostaglandin H synthase with arachidonic acid // Prostaglandins. 1987. V. 34 (2). P. 225240.

162. Варфоломеев С.Д., Мевх А.Т. Простагландины молекулярные биорегуляторы. МГУ. Москва. 1985.

163. Roth G.J., Siok C.J. Acetylation of the NH2-terminal serine of prostaglandin synthetase by aspirin // J. Biol. Chem. 1978. V. 253 (11). P. 3782-3784.

164. Selinsky B.S., Gupta К., Sharkey С.Т., Loll P.J. Structural analysis of NSAID binding by prostaglandin H2 synthase: time-dependent and time-independent inhibitors elicit identical enzyme conformations // Biochemistry. 2001. V. 40. P. 5172-5180.

165. Strout D.L., Scuseria G.E. A quantitative study of the scaling properties of the Hartree-Fock method // J. Chem. Phys. 1995. V. 102. P. 8448-8452.

166. McCammon J.A. Protein dynamics // Rep. Progr. Phys. 1984. V. 47. P. 1-46.