Хроматографическое и электрофоретическое определение стероидов и биогенных аминов в биологических объектах тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.02, кандидат химических наук Бессонова, Елена Андреевна

• Бессонова, Елена Андреевна
• кандидат химических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат химических наук Бессонова, Елена Андреевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРНЫХ ДАННЫХ.

1.1. Общие сведения о стероидных гормонах и их классификация.

1.2. Биосинтез и метаболизм кортнкостероидов. Биологические формы и действие кортнкостероидов в организме.

1.3. Физико-химические методы исследования стероидных гормонов.

1.3.1. Иммунологические методы.

1.3.2. Хроматографические методы анализа стероидных гормонов.

1.3.2.1. Определение стероидов методом тонкослойной хроматографии.

1.3.2.2. Газовая хроматография (ГХ) и хромато-масс-спектрометрия (ГХ-МС) при определении стероидов.

1.3.2.3. Определение стероидных гормонов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

1.3.2.3.1. Использование циклодекстринов (ЦД) в хроматографии стероидов.

1.3.2.3.2.Методы детектирования стероидных гормонов.

1.3.2.4. Мицеллярная жидкостная хроматография.

1.3.3. Определение кортнкостероидов методом мицеллярной электрокинетической хроматографии (МЭКХ).

1.3.3.1. Поверхностно-активные вещества, используемые в МЭКХ для разделения стероидных гормонов.

1.3.3.2. Буферные системы, используемые в МЭКХ стероидов

1.3.3.3. Влияние модификаторов в составе ведущего электролита на разделение кортикостероидов методом МЭКХ.

1.4. Подготовка биологических объектов к анализу.

1.4.1. Гидролиз коньюгатов стероидов.

1.4.2. Методы экстракции стероидных гормонов.

1.5. Биосинтез и метаболизм катехоламинов.

1.6. Физико-химические методы исследования катехоламинов.

1.6.1. Иммунологические методы определения катехоламинов.

1.6.2. Газовая хроматография для определения катехоламинов.

1.6.3. Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) катехоламинов.

1.6.4. Использование метода капиллярного электрофореза (КЭ) для определения катехоламинов (КА).

1.6.5. Детектирование катехоламинов в ВЭЖХ и КЭ.

1.6.6. Сравнительный анализ физико-химических методов определения катехоламинов.

1.6.7. Пробоподготовка реальных объектов к анализу катехоламинов.

ГЛАВА 2. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ОБЪЕКТОВ И МЕТОДОВ

ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Аппаратура.

2.2. Реактивы и материалы.

2.2.1. Подготовка рабочих растворов.

2.2.2. Отбор пробы.

2.3. Методы исследования.

2.3.1. Высокоэффективная жидкостная хроматография при определении стероидов и катехоламинов.

2.3.2. Капиллярный электрофорез.

2.4. Подготовка биологических объектов к анализу.

2.4.1. Подготовка биологических объектов к анализу смесей стероидных гормонов.

2.4.1.1. Жидкостная экстракция.

2.4.1.2. Твердофазная экстракция.

2.4.1.3. Определение стероидных гормонов методом ТСХ

2.4.2. Оптимизация пробоподготовки при определении катехоламинов.

2.4.2.1. Подготовка сорбента для экстракции катехоламинов.

2.4.2.2. Твердофазная экстракция катехоламинов.

ГЛАВА 3. УСТАНОВЛЕНИЕ ФАКТОРОВ, ВЛИЯЮЩИХ НА ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЕ {ОФ ВЭЖХ) И ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОЕ (МИЦЕЛЛЯРНАЯ ЭЛЕКТРОКИНЕТИЧЕСКАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ) РАЗДЕЛЕНИЕ КОРТИКОСТЕРОИДОВ.

3.1 Факторы, влияющие на разделение стероидов в режиме ОФ

ВЭЖХ.

3.2. Влияние добавки Р-циклодекстрина на разделение стероидных гормонов в изократическом режиме ОФ ВЭЖХ.

3.3 Расчет констант устойчивости, образующихся комплексов между |3~циклодекстрином и стероидами.

3.4. Сравнительная оценка жидкостной и твердофазной экстракции при определении кортикостероидов в сыворотке крови и в моче.

3.5. Факторы, влияющие на разделение кортикостероидов методом мицеллярной электрокинетической хроматографии.

3.6. Методы on-line концентрирования в МЭКХ при определении стероидных гормонов в биологических жидкостях.

3.7. Определение стероидов в биологических объектах методом

МЭКХ.

3.8. Сопоставление полученных результатов в режиме мицеллярной электрокинетической хроматографии с методом ОФ ВЭЖХ.

ГЛАВА 4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КАТЕХОЛАМИНОВ МЕТОДАМИ КЭ-УФ И КЭ-МС.

4.1. Факторы, влияющие на разделение катехоламинов в капиллярном зонном электрофорезе.

4.2. Факторы, влияющие на стабильность электрораспыления и чувствительность ESI-MS-детектирования.

4.3. Определение катехоламинов в реальных объектах методом КЭ-МС.

4.4. Сопоставление методов КЭ-МС и ОФ ВЭЖХ при определении катехоламинов.

ГЛАВА 5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ПРИЛОЖЕНИЕ.

5.1. Закономерности изменения стероидных профилей при различных дисфункциях коры надпочечников.

5.1.1. Подготовка пробы к анализу.

5.1.2. Характеристические стероидные профили при различных дисфункциях коры надпочечников методом ОФ-ВЭЖХ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Хроматографическое и электрофоретическое определение стероидов и биогенных аминов в биологических объектах»

Разработка метода определения стероидов и биогенных аминов (адреналина, норадреналина, дофамина) в плазме и сыворотке крови, тканях мозга и других биологических объектах является чрезвычайно важной задачей при диагностике различных заболеваний. Колебание их концентраций отражает целый ряд патологических состояний в организме человека.

Низкие концентрации стероидных гормонов (на уровне нг/мл) и катехоламинов в биологических объектах (на уровне нг и пкг), требуют высокочувствительного и селективного метода их определения.

Несмотря на активный интерес, проявляемый в мире к анализу биологических объектов на содержание стероидов, имеющиеся публикации в основном касаются либо определения ограниченного спектра кортикостероидов, либо соотношения важнейших из них - кортизола к кортизону.

В отечественной литературе опубликованы лишь единичные работы [24] в этой области. Традиционные методы определения стероидов -радиоиммунный и иммуноферментный анализы - имеют серьезные ограничения.

Наибольшее число публикаций по определению стероидов экзо- и эндогенного происхождения посвящено использованию ОФ ВЭЖХ в градиентном режиме. При этом для биологических объектов возникает проблема воспроизводимости факторов удерживания. Изократический режим вследствие резко различающейся гидрофобности стероидов приводит к значительному увеличению времени анализа с одновременным снижением эффективности разделения.

Определенные перспективы в улучшении селективности и эффективности разделения открываются при использовании в составе элюента различных комплексообразующих добавок.

Традиционный вариант решения этой проблемы в случае катехоламинов - ОФ ВЭЖХ с электрохимическим или флуориметрическим детектором. В последнем случае требуется предварительное получение производных. При этом варьирование рН и изменение содержания органического модификатора в подвижной фазе ВЭЖХ не решает задачи разделения исходных биогенных аминов с основными свойствами, их нейтральных и кислых метаболитов, а также аминокислот в одном хроматографическом цикле.

По химической природе эти классы соединений заметно различаются: одни (стероидные гормоны) представляют собой нейтральные соединения, различающиеся по гидрофобности; другие -биогенные амины - могут быть проанализированы в виде катионов или анионов.

Многообразие методов электрофоретического разделения позволяет проводить разделение ионных аналитов (катехоламины) - методом капиллярного зонного электрофореза и нейтральных (кортикостероидов) -методом мицеллярной электрокинетической хроматографии (МЭКХ).

Сопряжение режима зонного капиллярного электрофореза с масс-спектрометрическим детектированием представляется весьма перспективным при аналитическом решении задач определения катехоламинов в биологических жидкостях, что обусловлено сочетанием высокой эффективности разделения, малым объемом пробы нл), универсальным детектированием.

В данной работе проведено комплексное исследование, посвященное установлению закономерностей и выявлению доминирующих факторов при электрофоретическом и хроматографическом разделении стероидов и катехоламинов.

Полученные в работе результаты востребованы медицинской практикой.

Заключение диссертации по теме «Аналитическая химия», Бессонова, Елена Андреевна

Выводы.

1. Выявлены факторы, определяющие закономерности хроматографического и электрофоретического разделения стероидных гормонов: состав элюента (ацетонитрил - вода) и рабочего электролита (25 мМ ортофосфорная кислота; рН=2,5), концентрация мицеллообразователя (10 мМ ДДСН), природа и концентрация органических модификаторов (20% метанола и 4,5М раствора мочевины) в составе буферного электролита и подвижной фазы.

2. Обнаружен эффект доминирующего влияния Р -цикло декстрина, введенного в состав элюента, в изократическом режиме ОФ ВЭЖХ на разделение стероидов, и проведена количественная оценка имеющего место комплексообразования. Показано, что наиболее прочные комплексы с ДД образуют более гидрофобные стероиды - тестостерон и 11-дезоксикортикостерон.

3. Оптимизирован регламент пробоподготовки биологических жидкостей при определении стероидных гормонов и показано, что для анализа сыворотки крови предпочтительно использование твердо-фазной экстракции (сорбционные патроны Cjg; элюент - этанол).

4. Установлено, что использование динамического концентрирования (стэкинга и свипинга) при определении стероидов методом мицеллярной электрокинетической хроматографии позволяет снизить предел обнаружения при стэкинге ~ в 20 раз, при свипинге ~ в 100 раз.

5. Установлено влияние рН, состава и концентрации буферного электролита (50 мМ ацетатно-аммиачный буфер с добавкой 5 мМ диэтиламина; рН=4,5), режима работы электроспрейя (напряжение + 4 кВ; скорость газа-осушителя - 5 л/мин; скорость потока обволакивающей жидкости - 4 мкл/мин; состав обволакивающей жидкости: изопропиловый спирт/ вода (50:50 %, по объему), 0,5% уксусная кислота) на разделение катехоламинов в капиллярном зонном электрофорезе с масс-спектрометрическим детектированием.

6. Получены сравнительные количественные характеристики методов ОФ ВЭЖХ и МЭКХ с УФ детектированием при определении стероидных гормонов. По эффективности и времени анализа МЭКХ предпочтительна по сравнению с ОФ ВЭЖХ, незначительно уступая по пределу обнаружения.

7. На основании установленных закономерностей разработаны методики определения стероидных гормонов в сыворотке крови и моче методами изократической ОФ ВЭЖХ и МЭКХ и получены характеристические стероидные профили, используемые для диагностики эндокринных патологий.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Бессонова, Елена Андреевна, 2004 год

1. РозенВ.Б. Основы эндокринологии. М.: Мир, 1972.С. 384.

2. Под ред. М.С. Бирюковой. Эндокринные заболевания и синдромы. Вирилизм. "Знание-М" М., "Знание" Запорожье, 1999. С.310.

3. Герег Ш. Количественный анализ стероидов. М.: Мир, 1985.

4. Pirkko Volin. High-performance liquid chromatographic analysis of corticosteroids.//J. Chromatogr. B. 1995. V. 671. P. 319-340.

5. Nozaki O. Steroid analysis for medical diagnosis. Review. // J. Chromatogr. A. 2001. V: 935. P. 267-278.

6. Энциклопедия клинических лабораторных тестов. Под редакцией Тица Н.У.// Изд. «Лабинформ» М. 1997.С. 350.

7. Hartmann S., Steinhart Н. Simultaneous determination of anabolic and catabolic steroid hormones in meat by GC-MS.// J. Chromatogr. B: Biomed. Sci. Appl. 1997. V. 704 (1+2). P. 105-117.

8. Honour J.W. Steroid profiling.// Ann. Clin. Biochem. 1997. V. 34. N. 1. P. 3244.

9. Орлов E.H., Антипов E.M., Николаев H.H. Некоторые аспекты получения стероидных профилей мочи. // Вопросы медицинской химии. 1993. № 5. С. 79.

10. Wudy S. A., Harmatin М., Homoki J. Hormonal diagnosis of 21-hydrolxylase deficiency in plasma and urine of neonates using benchtop gas chromatography -mass spestrometry. //Journ. ofEndocrin. 2000. V. 165. P. 679-683.

11. Jap В. K., Johnston G.A.R., Kazlauskas R. Routine screening and quantitation of urinary corticosteroids using bench-top gas chromatography mass-selective detection.//J. Chromatogr. B. 1992. V. 573. P. 183-190.

12. Shibasaki H., Arai I., Furuta T. and Kasuya Y. Simultaneous determination of serum Cortisol and cortisone in humane plasma by stable-isotope dilution mass-spectrometry.// J. Chromatogr. B. 1992. V. 576. N. 1. P. 47-52.

13. Fallon A., Booth R.F.G., Bell L.D. Applications of HPLC in biochemistry. Elsevier Science Publishers B.V. 1987. P. 410.

14. Pirkko Volin. Simultaneous determination of serum Cortisol and cortisone by reversed-phase liquid chromatography with ultraviolet detection.// J. Chromatogr. B. 1992. V. 584. P. 147-155.

15. Amin M., Harrington K., Wandruszka von R. Determination of steroids in urine by micellar HPLC with detection by sensitized terbium fluorescence.// Anal. Chem. 1993. V. 65. P. 2346-2351.

16. Carpene G., Vettoretti A., Pedini F., Rocco S., Mantero F., Opocher G. Hypertensiv congenital adrenal enzymatic defects detected by high-performance liquid-chromatography of corticosteroids.// J. Chromatogr. B. 1991. V. 553. P. 201-204.

17. C. Lejeune-Lenain, S. Kina, D. Bosson. Preparative HPLC for analysis of mineralocorticoids in human plasma/// Chromatographia. 1987. V. 24. P. 333336.

18. Hariharan M., Naga S., VanNoord Т., Kindt E.K. Simultaneous assay of corticosterone and Cortisol in plasma by reversed-phase liquid chromatography.// Clin. Chem. 1992. V. 38. N. 3. P. 346-352.

19. Turnell D.C., Cooper J.D.H., Green В., Hughes G., Wright D.J. Tottally automated liquid-chromato graphic assay for Cortisol and associated glucocorticoids in serum, with use of ASTEM sample preparation. // Clin. Chem. 1988. V. 34. N. 9. P. 1816-1820.

20. Hariharan M., Naga S., VanNoord Т., Kindt E.K. Assey of human plasma cortison by LC, normal plasma concentrations (between sand 10 a.m.) of cortisone and corticosterone.// J. Chromatogr. 1993. V. 613. P. 195-201.

21. T. Yoshitake, S. Нага, M. Yamaguch, Y. Ohkura, S. Gorog. Measurement of 21-hydroxy corticosteroids in human and rat sera by high-performance liquid chromatography with fluorimetric detection.// J. Chromatogr. 1989 V. 489. N. 2. P.364-369.

22. Королева E.M., Гампер H.JI., Великанова Л.И. Определение кортикостероидов плазмы крови методом микроколоночной жидкостной хроматографией.//Журнал аналитической химии. 1996. Т. 29. С. 16-24.

23. Mc Whinney B.C., Ward G., Hickman P.E. Improved HPLC method for simultaneous analysis of Cortisol, 11-deoxycortisol, prednisolone, methylprednisolone, dexamethasone in serum and urine.// Clin. Chem. 1996. V. 42. N. 6. P. 979-981.

24. Kuronen P., Volin P., Laitalainen T. Reversed-phase HPLC screening method for serum steroid using retention index and diod-array detection. // J. Chromatogr. B: Biomed. Appl. 1998. V. 718. N. 2. P. 211-224.

25. А. Хеншен, К.-П. Хуле, Ф. Лотшпайх, В. Вельтер. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии. М. Мир. 1988. С. 580.

26. L.R.Snyder, J.L. Glajch, J.J.Kirkland. Practical HPLC method development. US 1988. P. 320.

27. Shoneshofer M., Weber В., Dulche H.J. Estimation of free urinary aldosteroneand 18-hydrocorticisterone by a combination of automatic high-performance liquid chromatography and radioimmunoassay.// J. Chromatogr. 1982. V. 227. P. 492496.

28. Nozaki O., Ohata Т., Ohaba J., Moriyama H., Kato J. Determination of serum Cortisol by reversed-phase liquid chromatography using precolumn sulphuric acid-ethanol fluorescence derivation and column switching.// J. Chromatogr. 1991. V. 570. P. 1-7.

29. Ji~qing W., Xian-teng Z., Ji-lu W. Simultaneous measurement of eight corticosteroids by liquid chromatography and application of the procedure to diagnosis of congenital adrenal hyperplasia. // Clin. Chem. 1987. V. 33. N. 8. P. 1354-1359.

30. Stoner E., Loche S., Mirth A.M., New M.I. Clinical utility of adrenal steroid measurement by high-performance liquid chromatography in pediatric endocrinology. //J. Chromatogr. 1986. V. 374. P. 358-362.

31. Stolker A.A.M., Schwillens P.L.W.J., van Ginkel L.A., Brinkman U.A.Th. Comparison of different liquid chromatography methods for the determination of corticosteroids in biological matrices. // J. Chromatogr. A. 2000 V. 893. P. 55-67.

32. Морозова М.Г., Гампер Н.Л., Дубинина Ю.Л., Нуллер Ю.Л., Лебедев А.В. Высокоэффективная жидкостная хроматография кортикостероидов у больных с депрессией и деперсонализацией. // Клиническая лабораторная диагностика. 2000. №4. С. 14-16.

33. Steffen Steffenrud and George Maylin. Termospray liquid chromatography -mass spectrometry of corticosteroids.// J. Chromatogr. B. 1992. V. 577. P. 221227.

34. Ohno M., Yamaguchi I., Saiki M., Yamamoto I., Azuma J. Specific determination of urinary 6(3-liydroxycortisol and Cortisol LC-MS. // J. Chromatogr. B. 2000. V. 746. P. 95-101.

35. Miksik I., Vylitova M., Pach J., Deyl Z. Separation and identification of corticosterone metabolites by liquid chromatography electrospray mass spectrometry. // J. Chromatogr. B. 1999. V. 726. P. 59-69.

36. Marwah A., Marwah P., Lardy H. Liguid chromatography electrospray ionization mass spectrometric analysis of corticosterone in rat plasma using selected ion monitoring. // J. Chromatogr. B. 2001. V. 757. P. 333-342.

37. Csehati Т., Forgacs T. Effect of {3-cyclodextrin derivatives on the retention of steroidal drugs.//J. Chromatogr. B: Biomed. Appl. 1996. V. 681. N. 1 P. 205211.

38. NurekD., Kleyle R.M., Mc Cain C.L., Risley D.S., Ruterbories K.J. Statistical method for quantifying mobile phase selectivity in one- and two- dimensional over pressured layer chromatography.// Anal. Chem. 1997. V. 69. N. 7. P. 1398 -1405.

39. Feuske M., Schonheiter H. Thin-lair chromatography on silica coated aluminum sheet as an adjunct to radioimmunoassay of steroid.// J. Chromatogr. 1991. V. 563. N. 1. P.178-183.

40. Резников А.Г. Методы определения гормонов. // Киев. 1980. С. 266-267.

41. Сергеев П.В. Стероидные гормоны. //М. Наука. 1984. 239 С.

42. Shibasaki Н., Furuta Т., Kasuya J. Quantification of corticosteroids in human plasma by liquid chromatography termospray mass spectrometry using stable isotope dilution.// J. Chromatogr. B. 1997. V. 692. N. 1. P. 7-14.

43. Masatoki Katayata. Determination of corticosteroids in plasma by HPLC after pre-column derivatization with 2-(4-carboxyphenyl)-5,6-dimethylbenzimidazole.// J. Chromatogr. B. 1993. V. 612. P. 33-39.

44. Taylor M.R., Teale P., Westwood S.A., Perrett D. Analysis of corticosteroids in biofluids by capillary electrochromatography with gradient elution.// Anal. Chem. 1997. V. 69. N.13. P. 2554-2558.

45. Oka K., Noghi M., Kitamura Т., Shima S. Liquid chromatography and radioimmunoassay compared for determination of Cortisol and corticosterone in plasma after a dexamethasone suppression test. // Clin. Chem. 1987. V. 33. N. 9. P. 1639-1642.

46. Stoner E., Loche S., Mirth A.M., New M.I. Clinical utility of adrenal steroid measurement by high-performance liquid chromatography in pediatric endocrinology.// J. Chromatogr. 1986. V. 374. P. 358-362.

47. Flood K.G., Reynolds E.R., Snow N.H. Characterization of inclusion complexes of dexamethasone related steroids with cyclodextrins using high-performance liquid chromatography. //J. Chromatogr. A. 2000. V. 903. P. 49-65.

48. Hughes G., Green В. Urinary excretion rates of 15 free steroids, potential utility in defferential diagnosis of Cushing's syndrome.// Clin Chem 1986. V. 32. N.l.P. 93-96.

49. Карцова JI.А. Макроциклы как компоненты хроматографических фаз. // Докторская диссертация. 2002. СПб. СПбГУ. 320 С.

50. Forgacs Т., Csehati Т. Interaction of some steroid drugs with p-cyclodextrin polymer. // J. Chromatogr. A. 1999. V. 845. P. 447-453.

51. Shneiderman E., Stalcup A.M. Review. Cyclodextrins: a versatile tool in separation science. // J. Chromatogr. B. 2000. V. 745. P.83-102.

52. Connors K.A. The stability of cyclodextrin complexes in solution.// Chem. Rev. 1997. V. 97. P. 1325-1357.

53. Gunasingham H., Tay B.T., Ang K.P. Determination of estriol in pregnancy urine by normal-phase high-performance liquid chromatography with electrochemical detection.//J. Chromatogr. 1985. V. 341. P. 271-276.

54. Appelblad P., Irgum K. Review. Separation and detection of neuroactive steroids from biological matrices.// J. Chromatogr. A. 2002. V. 955. P. 151-182.

55. Столяров В.В., Савинов И.М., Виттенберг А.Г., Карцова Л.А.и др. Практическая газовая и жидкостная хроматография. Изд. СПбГУ. 1998. 610 С.

56. Стыскин ЕЛ, Ициксон Л.Б., Брауде Е.В. Практическая ВЭЖХ. М. "Химия". 1986. 256 С.

57. Rao L.V., Petersen J.R., Bissell G., Okorodudu A.O., Mohammad A.A. Development of a urinary free Cortisol assay using solid-phase extraction -capillary electrophoresis. // J. Chromatogr. A. 1999. V. 730. P. 123-128.

58. Palmer J., Munro N.J., Landers J.P. A universal concept for stacking neutral analytes in micellar capillary electrophoresis. // Anal. Chem. 1999. V.71. 16791687.

59. Liu Y., Pietzyk J. Capillary-electrochromatographic separations with copolymeric reversed-stationary phase and ion-exchanger-packed columns. // J. Chromatogr. A. 2001. V. 920. P. 367-375.

60. Bumgarner J.G., Khaledi M.G. Mixed micelles of short chain alkyl surfactants and bile salts in electrokinetic chromatography: enhanced separation of corticosteroids. // J. Chromatogr. A. 1996. V. 738. P. 275-283.

61. Nishi H., Fukuyama Т., Matsuo M., Terabe S. Separation and determination of lipophilic corticosteroids and benzothiazepin analogues by micellar electrokinetic chromatography using bile salts. // J. Chromatogr. A. 1990. V. 513. P. 279-295.

62. Quirino J.P., Terabe S. On-line concentration of neutral analytes for micellar electrokinetic chromatography. 5. Field-enhanced sample injection with reverse migrating micelles. // Anal. Chem. 1998.V. 70. P. 1893-1901.

63. Vomastova L., Miksik I., Deyl Z. Microemulsion and micellar electrokinetic chromatography of steroids. // J. Chromatogr. B. 1996. V. 681. P. 107-113.

64. Mohammand A.A., Peterson J.R., Bissell M.G. Micellar electrokinetic capillary chromatographic separation of steroids in urine by trioctylphosphine oxide and cationic surfactant. // J. Chromatogr. B. 1995. V. 674. P. 31-38.

65. Palmer J., Burgi D.S., Landers J.P. Electrokinetic stacking of neutral analytes under continuous conductivity conditions. // Anal. Chem. 2002. V. 74. P. 632638.

66. Mohammand A.A., Bissell M.G., Peterson J.R. Micellar electrokinetic capillary chromatography to separate steroids that are increased in congenital adrenal hyperplasia. // Clinical chemistry 1995. V. 41. N. 9. P. 1369-1370.

67. Jumppanen J.H., Wiedmer S.K., Siren H., Rekkola M.-L., Haario H. Optimized separation of seven corticosteroids by micellar electrokinetic chromatography. //Electrophoresis. 1994. V. 15. P. 1267-1272.

68. Wu C.-H., Chen M.-C., Su A.-K., Shu P.-J., Chou S.-H., Lin C.-H. Determination of corticosterone in mouse plasma by a sweeping technique using micellar electrokinetic chromatography. // J. Chromatogr. B. 2003. V. 785. P. 317-325.

69. Kim J.-B., Otsuka K., Terabe S. On-line sample concentration in micellar electrokinetic chromatography with cationic micelles in a coated capillary. // J. Chromatogr. A. 2001. V. 912. P. 343-352.

70. Palmer J., Burgi D. S., Munro N.J., Landers J.P. Electrokinetic injection for stacking neutral analytes in capillary and microchip electrophoresis. // Anal. Chem. 2001. V. 73. P. 725-731.

71. Steard D.A., Reid R.G., Taylor R.B. Capillary electrochromatography of steroids. Increased sensitivity by on-line concentration and comparison with high-performance liquid chromatography. // J. Chromatogr. A. 1998. V.798. P. 259-267.

72. Terabe S., Otsuka K., Ichikawa K., Tsuchiya A., Ando T. Electrokinetic separations with micellar solutions and open-tubular capillaries. // Anal. Chem. 1984. V. 56. P. 111-113.

73. Lin C.-E., Huang H.-C., Chen H.-W. A capillary electrophoresis study on the influence of p-cyclodextrin on the critical micelle concentration of sodium dodecyl sulfate. // J. Chromatogr. A. 2001.V 917. P. 297-310.

74. Ahuja E.S., Preston B.P., Foley J.P. Anionic-zwitterionic mixed micelles in micellar electrokinetic chromatography: sodium dodecyl sulfate N-dodecyl-N,N-dimethylammonium-3-propane-1-sulfonic acid. // J. Chromatogr. B. 1994. V.657. P. 271-284.

75. Palmer J., Atkinson S., Yoshida W.Y., Stalcup A.M., Landers J.P. Charged chelate capillary electrophoresis of endogenous corticosteroids. // Electrophoresis. 1998. V. 19. P. 3045-3051.

76. Katzuta S., Saitoh K.J.Control of separation selectivity in micellar electrokinetic chromatography by modification of the micellar phase with solubilized organic compounds (Review). // J. Chromatogr. A. 1997. V. 780. P. 165-178.

77. Quirino J.P., Terabe S. On-line concentration of analytes for micellar electrokinetic chromatography. I. Normal stacking mode. // J. Chromatogr. A. 1997: V. 781. P. 119-128.

78. Quirino J.P., Terabe S. On-line concentration of neutral analytes for micellar electrokinetic chromatography. II. Reversed electrode polarity stacking mode. // J. Chromatogr. A. 1997. V. 791. P. 255-267.

79. Quirino J.P., Terabe S. On-line concentration of neutral analytes for micellar electrokinetic chromatograph. 3. Stacking with reverse migrating micelles. // Anal. Chem. 1998. V.70. P. 149-157.

80. Quirino J.P., Terabe S. Sweeping of analyte zones in electrokinetic chromatography.// Anal. Chem. 1999. V. 71. P. 1638-1644.

81. Quirino J.P., Terabe S. Electrokinetic chromatography. // J. Chromatogr. A. 1999. V. 856. P. 465-482.

82. Kim J.B., Otsuka K, Terabe S. Anion selective exhaustive injection sweep -micellar electrokinetic chromatography.// J. Chromatogr. A. 2001. V. 932. P. 129-137.

83. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. // М. 1990. 410 С.

84. В.Т. Hofreiter, А.С. Mizera, J.P. Allen, A.M. Masi, W.C. Hicok. Solid-state extraction of Cortisol from plasma or serum for liquid chromatography.// Clin Chem. 1983 V. 29. N. 10. P. 1808-1809.

85. Kagedal В., Goldstein D. Catecholamines and their metabolites. Review. // J.

86. Chromatogr. B. 1988. V. 429. P. 177-233.

87. Paquette D.M., Sing R., Banks P.R., Waldron K.C. Capillary electrophoresis withlaser-induced native fluorescence detection for profiling body fluids. // J.

88. Chromatogr. B. 1998. V. 714. P. 47-57.

89. Rosano T.G., Swift T.A, Hayes L.W. Advances in catecholamine and metabolitemeasurements for diagnosis of pheochromocytoma. // Clin. Chem. 1991. V. 37. N.10. P. 1854-1867.

90. Westermami J., Hubl W., Kaiser N., Salewski L. Simple, rapid and sensitive determination of epinephrine and norepinephrine in urine and plasma by noncompetitive enzyme immunoassay, compared with HPLC method. // Clin. Lab. 2002. V. 48. N. 1-2. P. 61-71.

91. Lovelady H.G., Foster L.L. Quantitative determination of epinephrine and norepinephrine in the picogram range by flame ionization gas-liquid chromatography. //J. Chromatogr. 1975. V. 108. N. 1. P. 43-52.

92. Wang M.-T., Imai K., Yoshioka M., Tamura Z. Gas-liquid chromatographic and mass-fragmentographic determination of catecholamines in human plasma. // Clin. Chim. Acta. 1975. V. 63. P. 13-9.

93. Ehrhart J.-D., Schwartz J. A gas chromatography mass spectrometry assay of human plasma catercolamines. // Clin. Chim. Acta. 1978. V. 88. P. 71-9.

94. Jacob K., Vogt W., Knedel M. Schwerfeger G. Quantitation of adrenaline and noradrenaline from human plasma by combined gas chromatography high-resolution mass fragmentography. // J. Chromatogr. 1978. V. 146. P. 221-6.

95. Karoum F., Cattabeni, Costa E., Rutherven C.R.J., Sandler M. Gas chromatographic assay of picomole concentrations of biogenic amines. // Anal. Biochem. 1972. V. 47. P. 550-61.

96. Volin P. Determination of free urinary catecholamines by high-performance liquid chromatography with electrochemical detection. // J. Chromatogr. B. 1994. V. 655. P. 121-126.

97. Ohkura Y., Kai M., Nohta H. Fluorigenic reactions for biomedical chromatography. // J. Chromatogr. B. 1994. V. 659. P. 85-107.

98. Chan E.C.Y., Wee P.Y, Ho O.Y. HPLC assay for catecholamines and metanephrines using fluorimetric detection with pre-column 9-fluorenylmethyloxy-carbonyl chloride derivatization // J. Chromatogr. B. 2000. V. 749. P. 179-189.

99. Riggin R. M., Kissinger P. T. Determination of catecholamines in urine by reverse-phase liquid chromatography with electrochemical detection. // Anal. Chem. 1977. V.49.N. 13. P. 2109-2111.

100. Honda S., Takahashi M., Araki Y., Kakehi K. Postcolumn derivatization of catecholamines with 2-cyanoacetamide for fluorimetric monitoring in high-performance liquid chromatography. // J. Chromatogr. B. 1983. V. 274. P. 45-52.

101. Mitsui A., Mohta H., Ohkura Y. High- performance liquid chromatography of plasma catecholamines using 1,2-diphenylethylenediamine as precolumn fluorescence derivatization reagent. // J. Chromatogr. B. 1985. V. 344. P. 61-70.

102. Todoriki H., Hayashi Т., Naruse H., Hirakawa A. Y. Sensitive high-performance liquid chromatographic determination of catecholamines in rat brain using a laser fluorimetric detection system. // J. Chromatogr. B. 1983. V. 276. P. 45-54.

103. Yamaguchi M., Ishida J., Yoshimura M. Simultaneous determination of urinary catecholamines and 5-hydroxyindoleamines by high-performance liquidchromatography with fluorescence detection. // Analyst. 1998. V. 123. N. 2. P. 307-11.

104. Higashidate S., Imai K. Determination of femtomole concentrations of catecholamines by high-performance liquid chromatography with peroxyoxalate chemiluminescence detection. // Analyst. 1992. V. 117. N. 12. P. 1863-68.

105. Mitsui A., Nohta H., Ohkura Y. High-performance liquid chromatography of plasma catecholamines using 1,2-diphenylethylenediamine as precolumn fluorescence derivatizationreagent. // J. Chromatogr. 1985. V. 344. P. 61-70.

106. Gerlo E.A., Sevens C. Urinary and plasma catecholamines and urinary catecholamine metabolites in pheochromocytoma: diagnostic value in 19 cases. // Clin. Chem. 1994. У. 40. N. 2. P. 250-6.

107. Soga Т., Inoue Y. Determination of catecholamines in urine and plasma by online sample pretreatment using an internal surface boronic acid gel. // J. Chromatogr. 1993. V. 620. N. 2. P. 175-81.

108. Weicker H., Feraudi M., Hagele H., Pluto R. Electrochemical detection of catecholamines in urine and plasma after separation with HPLC. // Clin. Chim. Acta. 1984. V. 141. N. l.P. 17-25.

109. Moleman P, van Dijk J. Determination of urinary norepinephrine and epinephrine by liquid chromatography with fluorescence detection and pre-column derivatization. // Clin. Chem. 1990. V. 36. N. 5. P. 732-726.192

110. Wu A.H., Gornet T.G. Preparation of urine samples for liquid-chromatographic determination of catecholamines: bonded-phase phenylboronic acid, cation-exchange resin, and alumina adsorbents compared. // Clin. Chem. 1985. V. 31. N. 2. P. 298-302

111. Tsuchiya H., Hayashi T. High-performance liquid chromatographic analysis of catecholamines in biological samples by liquid/liquid extraction prepurification. // Journ. of Pharmacol. Methods. 1990. V. 23. N. 1. P. 21-30.

112. Ganhao M.F., Hattingh J., Hurwitz M.L., Pitts N.I. Evaluation of a simple plasma catecholamine extraction procedure prior to high-performance liquid chromatography and electrochemical detection. // J. Chromatogr. 1991. V. 564. N. 1. P. 55-66.

113. Rentel C., Gfrorer P., Bayer E. Coupling of capillary electrochromatography to coordination ion spray mass spectrometry, a novel detection method. // Electrophoresis 1999. Y. 20. N. 12. P. 2329.

114. Chen D.-C., Zhan D.-Z., Cheng C.-W., Liu A.-C., Chen C.-h. Determination of urine catecholamines by capillary electrophoresis with dual-electrode amperometric detection. // J. Chromatogr. B. 2001. Y. 750. P. 33-39.

115. Durgbanshi A., Kok W.Th. Capillary electrophoresis and electrochemical detection with a conventional detector cell.// J. Chromatogr. A. 1998. V. 798. P. 289-296.

116. Wallingford R.A. and Ewing A.G. Amperometric detection of catechols in capillary zone electrophoresis with normal and micellar solutions. // Anal. Chem. 1988. V. 60. P. 258-263.

117. Vuorensola K., Kokkonen J., Siren H., Ketola R.A. Optimization of capillary-electrophoretic-electrospray ionization-mass spectrometric analysis of catecholamines. //Electrophoresis. 2001. V. 22. P. 4347-4354.

118. Choudhary G., Apffel A., Yin H., Hancock W. Use of on-line mass spestometric detection in capillary electrochromatography. // J. Chromatogr. A. 2000. V. 887. P. 85-101.

119. Britz-McKibbin P., Chen D.D.Y. Selective focusing of catecholamines and weakly acidic compounds by capillary electrophoresis using a dynamic pH junction. // Anal. Chem. 2000. V. 72. P. 1242-1252.193

120. Kirby D. P., Thorne J. M., Gotzinger W. K., Karger B. L. A CE/ESI-MS interface for stable, low-flow operation // Anal. Chem. 1996. V. 68. P. 44514457.

121. Zhu R., Kok W.Th. Determination of catecholamines and related compounds by capillary electrophoresis with post column terbium complexation and sensitized luminescence detection // Anal. Chem. 1997. V. 69. P. 4010-4016.

122. Swanek F.D., Chen G., Ewing A.G. Identification of multiple components of dopamine in a single cell by CE with scanning electrochemical detection. // Anal. Chem. 1996. V. 68. P. 3912-3916.

123. Britz-McKibbin P., Wong J., Chen D.D.Y. Analysis of noradrenaline from 15 different dental anestetic formulations by capillary electrophoresis. // J. Chromatogr. A. 1999. V. 853. P. 535-540.

124. Chang H.-T., Jeung E. S. Determination of catecholamines in single adrenal medullary cells by capillary electrophoresis and laser-induced native fluorescence. // Anal. Chem. 1995. V. 67. P. 1079-1083.

125. Siren H., Karjalainen U. Study of catecholamines in patient urine samples by capillary electrophoresis. // J. Chromatogr. A. 1999. V.853. P. 527-533

126. Zhu R., Kok W.Th. Determination of catecholamines and related compounds by CE with postcolumn terbium complexation and sensitized luminescence detection. // Anal. Chem. 1997. V. 67. P. 4010 4016.

127. Imai K., Wang M.-T., Yoshiue S., Tamura Z. Determination of catecholamines in the plasma of patients with essential hypertension and of normal persons. // Clin. Chim. Acta 1973. V. 43. P. 145-9.

128. Pestoris A., Cerutti L., Sacco R., Vecchi L. De, Sbaffi A. Automated analysis of urinary catecholamines by high-performance liquid chromatography and on-line sample pretreatment. // J. Chromatogr. B. 1995. V. 664. P. 287-293.

129. Raggi M.A., Sabbioni C., Casamenti G., Gerra G., Calonghi M., Masotti L. Determination of catecholamines in human plasma by high-performance liquid chromatography with electrochemical detection. // J. Chromatogr. B. 1999. V. 730. P. 201-211.

130. Москвин JI.H., Царицын Л.Г. Методы разделения и концентрирования в аналитической химии. // Л. Химия. 1991. 256 С.

131. Bovingdon М.Е., Webster R.A. Derivatization reactions for neurotransmitters and their automation. // J. Chromatogr. B. 1994. V. 659. P. 157-183.

132. Vuorensola K., Siren H. Determination of urinary catecholamines with capillary electrophoresis after solid-phase extraction // J. Chromatogr. A. 2000. V. 895. P. 317-327.

133. Bardelmeijer H.A., Waterval J.C.M., Lingeman H., van't Hof R., Bult A., Underberg W.J.M. Pre-, on- and post-column derivatization in capillary electrophoresis. //Electrophoresis. 1997. V. 18. P. 2214-2227.

134. Kushnir M.M., Urry P.M., Frank E.L., Roberts W.L., Shushan B. Analysis of catecholamines in urine by positive-ion electrospray tendem mass spectrometry.// Clinical Chem. 2002. V. 48. N. 2. P. 323-331.

135. Kushnir M.M., Urry F.M., Frank E.L., Roberts W.L., Shushan B. Analysis of catecholamines in urine by positive-ion electrospray tandem mass spectrometry. // Clin. Chem. 2002. V. 48. N. 2. P. 323-31.

136. Nomura S., Fujitaka M., Sakuka N., Ueda K. Circadian rhythms in plasma cortisone and Cortisol and the cortisone/cortisol ratio.// Clinica Chemica Acta. 1997. V. 266. P. 83-91.1. ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ.

137. Сокращение Полное название Английский эквивалент

138. КЭ капиллярный электрофорез СЕ, НРСЕ (Capillary Electrophoresis, High Performance Capillary Electrophoresis)кзэ капиллярный зонный электрофорез CZE (Capillary Electrophresis)

139. МЭКХ мицеллярная электрокинетическая хроматография MEKC (Micellar Electrokinetic Chromato graphy)

140. НМ-МЭКХ вариант МЭКХ с нормальной миграцией NM-MEKC (Normal Migration Electrokinetic Chromatography)

141. МС масс-спектрометрия MS (Mass-Spectrometry)

142. ВЭЖХ высокоэффективная жидкостная хроматография HPLC (High Performance Liquid Chr omato graphy)

143. ОФ-ВЭЖХ обращено-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография RF HPLC (Reversed Phase High Performance Liquid Chromato graphy)

144. ГХ газовая хроматография GC (Gas Chromato graphy)эоп электроосмотический поток EOF (Electroosmotic Flow)

145. ПАВ поверхностно-активное вещество Surfactant

146. ДДСН додецилсульфат натрия SDS (Sodium Dodecylsulfate)осн октилсульфонат натрия SOS (sodium octylsulfonate)

147. ДТАБ додецилтриметил аммоний бромид DTABбиологически-активные ПАВ: Bile salts:

148. XII холат натрия SC (Sodium Cholate)тхн таурохолат натрия STC (Sodium Taurocholate)

149. ДХН дезоксихолат натрия SDC (Sodium Desoxycholate)

150. ДГХН дегидрохолат натрия SDHC (Sodium Dehydrocholate)

151. Ы-додецил-ЬТД- диметил-3 -амино-1 -пропансульфонат SB3-12од Циклодекстрин CD (Cyclodextrin)ср-ВД сульфированный р-циклодекстрин sp-CD (cP- Cyclodextrin)ккм критическая концентрация мицеллообразования CMC (Critical Micelle Concentration)

152. ЭДТА этилендиаминтетрауксусная кислота EDTA (Ethylene Diaminotetraacetic Acid)

153. МЭС 2-(К-морфолино)-этансульфоновая кислота, MES (2-(N-Morpholinoethanesulfonic Acid)

154. ЦАПС 3 -(циклогексиламино) пропансульфоновая кислота CAPS (3-(Cyclo-hexylamino) Propanesulfonic Acid)

155. ТОФО триоксифосфоний оксид TOPO

156. ТФЭ твердофазная экстракция SFE (Solid Phase Extraction)жжэ жидкостно-жидкостная экстракция LLE (Liquid-Liquid Extraction)1. F кортизол F (Cortisol)1. Е кортизон E (Cortison)

157. А 11-дегидрокортикостерон A (11-Dehydrocorticosterone)

158. В кортикостерон В (Corticosterone)

159. DOC 11-дезоксикортикостерон DOC (11-Dezoxycorticosteron)

160. Т тестостерон T (Testosterone)

161. ОНРг 17-гидроксипрогестерон 17-OHPr (17-Hydroxyprogesterone)

162. And андростендион And (Androstendion)

163. S 11-дезоксикортизол S (11-DeoxyCortisol)

164. Рг прогестерон Pr (Progesterone)

165. КА катехоламины CA (Catecholamine)

166. А (Е) адреналин (эпинефрин) A (E) (Adrenaline (Epinephrine))

167. NA (NE) норадреналин (норэпинефрин) NA or NE (Noradrenaline or Norepinephrine)1. ДА дофамин DA (Dopamine)

168. Сер серотонин Ser (Serotonine)

169. ДОРА дигидроксифенилаланин ДОФА1. Dihydroxyphenylalanine)тн тирозин гидроксилаза ТН (Tyro sinehydroxylase)

170. DC декарбоксилаза DC (Dehydroxylase)

171. DBH дофамин р гидроксилаза DBH (Dopamine (3-Hydroxylase)

172. PNMT фенилэтаноламин N -метилтрансфераз PNMT

173. ПТФЭ политетрафторэтилен PTFE (Polytetrafluorethylene)

174. ОФА opmo-фталевый альдегид OPA (o-Phthalialdehyde)

175. MXK монохлоруксусная кислота MCA (Monochloracetic Acid)