Характеристика пептидазной активности тонкой кишки цыплят тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Таврид, Ирена Леоновна

• Таврид, Ирена Леоновна
• кандидат биологических наук
• 1983

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Таврид, Ирена Леоновна

ВВЕДЕНИЕ

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Переваривание белка в организме животных

1.2. Регуляция активности ферментов

1.3. Адаптация кишечных ферментов

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Общая характеристика экспериментальных животных и методов исследования

2.2. Изоляция петли тонкой кишки m vivo

2.3. Получение препаратов тонкой кишки 'in vitro

2.3.1. Приготовление интактных кишечных препаратов

2.3.2. Приготовление гомогенатов слизистой тонкой кишки

2.3.3. Получение препаратов солюбилизированных ферментов

2.3.4. Выделение апикального гликокаликса

2.3.5. Фракционирование солюбилизированных ферментов ^

2.4. Определение интенсивности гидролитических процессов

2.4.1. Определение пептидазной активности по убыли субстрата

2.4.2. Определение пептидазной активности по приросту свободного глицина ^

2.4.3. Ферментативный метод определения пептидазной активности с помощью оксидазы l-аминокислот

2.4.4. Определение активности сахаразы

Определение содержания белка

2.6. Субстраты и модификаторы

2.7. Источники реактивов

2.8. Оборудование 55 Ел ава 3. РЕГУЛЯТОРНЫЕ СВОЙСТВА ГЛИЦИЛЛЕЙЦИНДИПЕПТИДАЗЫ тонкой КИШКИ ЦЫПЛЯТ

3.1. Влияние модификаторов на гидролиз глицил-Ь-лейцина (межцепные взаимодействия)

3.2. Взаимодействие пептидов в процессе гидролиза (внутрицепные взаимодействия)

3.3. Влияние модификаторов на гидролиз пептидов in vivo

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Характеристика пептидазной активности тонкой кишки цыплят»

Проблема усвоения белка всегда была в центре внимания исследователей, занимающихся изучением ассимиляции пищевых веществ в организме животных и человека. Как известно, этот процесс происходит благодаря функционированию классической триады: полостное пищеварение - мембранное пищеварение - всасывание (обзоры : Уго-лев, 1963, 1967, 1972). Все этапы механизма переваривания пищевых веществ интенсивно исследуются. Особый интерес представляет изучение промежуточных и заключительных стадий гидролиза белков, осуществляемых с помощью олигопептидаз, о чем свидетельствует организация е последние годы ряда симпозиумов по этой проблеме ( Peptide transport in bacteria and. mammalian gut, 1972,Peptide transport and hydrolysis, 1977).

До недавнего времени изучение пептидного пищеварения ограничивалось только анализом механизма переваривания индивидуальных пептидов. Однако, после установления A.M. Уголевым полисубстратного характера мембранного пищеварения, стало ясно, что расщепление пептидов тесно связано с усвоением других компонентов пищи, а сами кишечные пептидазы являются регуляторными ферментами ( обзоры: Уголев, 1972, Ugolev et al., 1975, Ugolev et al., 1979). Данные такого рода были получены, главным образом, в опытах in vitro , при использовании в качестве объектов исследования млекопитающих. Исследование регуляции кишечных пептидаз у представителей других классов животных еще только начинается.

Цель нашего исследования состояла в детальном изучении каталитических и регуляторных свойств ферментов, осуществляющих заключительные стадии гидролиза белка в тонкой кишке птиц. Для

- б выполнения поставленной цели пептидазную активность и влияние модификаторов на нее исследовали на различных уровнях организации ферментов: в живом организме, в интактных сегментах тонкой кишки, в гомогенате слизистой, во фракции апикального гликокаликса и со-любилизированных ферментов. Б связи с наличием в кишечных клетках высших животных 2-х типое пептидаз: мембранных и внутриклеточных (обзоры: Кушак, 1976, Kim , 1977) эффекты модификаторов изучались для каждой из групп этих ферментов. Особое внимание было уделено анализу регуляторных свойств кишечных пептидаз в условиях in vivo.

Актиеность кишечных ферментов, как известно, существенно зависит от функционального состояния животных, состава диеты и ряда других эндо- и экзогенных факторов (Уголев, 1972, ikegami et а1«» 1975, corring, 1980). В связи с этим исследовали влияние голодания, уровня белка в диете, а также стадии онтогенетического развития птиц на каталитические и регуляторные свойства пептидаз, что позволило охарактеризовать адаптационные возможности этих ферментов, их способность к быстрым и медленным перестройкам.

В последнее, время при анализе свойств апикальной мембраны кишечных клеток значительная роль отводится гликокаликсу, покрывающему наружную поверхность клеток ряда органов. Для характернее тики функций этой клеточной структуры изучали распределение некоторых диг- и трипептидаз между апикальным гликокаликсом энтероци-тов и слизистой тонкой кишки цыплят, а также регуляторные свойства ферментов, находящихся в его составе.

Особое внимание было уделено изучению фермент-мембранных связей энтероцитов цыплят. С этой целью производилась солюбили-зация пептидаз с поверхности слизистой с помощью различных агентов. Для более полной характеристики мембранных пептидаз изучали

- У не только регуляторные, но и некоторые физико-химические свойства солюОилизированных ферментов, а также пептидаз, выделенных в составе апикального гликокаликса (кинетические харатеристики, рН и температурный оптимум, терностабильность). Существенное внимание при этом обращалось на различия свойств ферментов, изолированных из различных отделов тонкой кишки.

Для анализа механизма пептидного гидролиза важное значение имеет исследование специфичности кишечных пептидаз. В нашей работе мы исследовали способность различных видов кишечных препаратов гидролизовать широкий спектр натуральных и модельных пептидов, что позволило выделить группы субстратов, гидролизуемых преимущественно мембранными и преимущественно внутриклеточными пептидазами. Характеристика специфичности пептидаз тесно связана с оценкой ферментного состава соответствующих клеточных структур. В связи с этим производили фракционирование мембранных пептидаз с последующим анализом специфичности получаемых фракций.

Работа была выполнена в Лаборатории биохимии и физиологии животных Института биологии АН Латв.ССР в период с 1976 по 1982 годы и является частью исследований, проводимых лабораторией по теме: 2.27.9.1.15. "Физиология и биохимия процессов ассимиляции биологически активных Беществ и их регуляция в животном организме".

- а

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Таврид, Ирена Леоновна

выводы

1. В опытах на цыплятах охарактеризована пептидазная активность тонкой кишки на разных уровнях организации (живой организм, ткань, отдельные клеточные структуры и Фракции, солюбилизирован-ные ферменты ). Биохимические методы определения пептидазной активности (по убыли субстрата и с помощью оксидазы L-аминокислот) применялись после их существенной модификации.

2.Регуляторные эффекты модификаторов в опытах in vitro с вывернутыми кишечными сегментами и in vivo с изолированной кишечной петлей сходны, что свидетельствует о реализации эффектов взаимодействия пищевых веществ в живом организме на уровне ферментов мембранного пищеварения.

3. Исследование адаптационных перестроек дипептидазной активности показало, что : а> 18-часовое голодание повышает глицил-лейциндипептидазную активность мембранных ферментов и изменяет их чувствительность к L -метионину, тогда как ферментативная актив -ность гомогената остается без изменений; 6) уровень глициллейцин-дипептидазной активности находится в прямой зависимости от содержания белка в диете; в J в течение 40 дней постнатальной жизни цыплят глицилвалиндипептидазная активность поверхности слизистой характеризуется постепенным падением уровня активности, формированием прокисмо-дистального градиента с максимумом в дистальном отделе и изменением чувствительности к сахарозе,^ -метионину и трибутирину. Указанные характеристики дипептидаз гомогената при этом не изменяются.

4. Установлено сходство уровня активности и чувствительности к модификаторам ряда пептидаз (Ьубстраты: глицил-L -лейцин,

Ь -валил-L -валин, глицил-L -лейцил-L -валин), выделенных с помощью метода агаровой реплики и находящихся в составе вывернутых кишечных сегментов, что свидетельствует о частичной локализации мембранных ферментов в составе апикального гликокаликса.

5. ^оказаны различия физико-химических свойств глициллейцин-дипептидазной активности поверхности слизистой прокпимального и дистального отделов тонкой кишки. Для фермента проксимального отдела характерны оптимум рН 8,5, температурный оптимум при 50°С, термостабильность при 50°С. Дипептидазная активность дистального отдела имеет температурный оптимум при 40°С, стабильна лишь в физиологическом диапазоне температур, ее рН оптимум сдвинут в щелочную сторону по сравнению с проксимальным отделом.

6. Регуляторные свойства глициллейциндипептидазы, полученной при различных способах солюбилизации фермента, являются неодинаковыми, Спонтанно солюбилизированная дипептидазная активность характеризуется чувствительностью к ь-метионину и сложной сигмоид-ной кинетикой. При обработке препаратов тонкой кишки Тритоном Х-100 ферментативная активность ингибируется в присутствии ь-ме-тионина и трибутирина. Солюбилизация папаином приводит к потере чувствительности к модификаторам и изменению характера кинетической кривой.

7. Спектр активности спонтанно солюбилизированных дипептидаз и ферментов вывернутых кишечных сегментов ( по отношению к 21 субстрату") совпадает, что указывает на возмошюсть солюбилизации с поверхности слизистой только мембранных дипептидаз и непрочности их связей с апикальной мембраной энтероцитов. Аминопептидазная активность не солюбилизируется с поверхности слизистой тонкой кишки цыплят без применения специальных агентов.

8. С помощью диск-электрофореза в полиакриламидном геле в составе солюбилизата обнаружено 10 белковых зон, 4 из которых обладают дипептидазной активностью.

ОБЩЕЕ ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Представленные в настоящей работе данные характеризуют активность ферментов, осуществляющих заключительные стадии гидролиза белка пищи в организме цыплят, их распределение вдоль тонкой кишки, а также между отдельными клеточными структурами, формирование пептидазной активности в процессе постнатального онтогенеза птиц, чувствительность этих ферментов к изменяющимся факторам внешней среды. Особое внимание уделено изучению влияния различных пищевых веществ на активность кишечных пептидаз, что изучено как в условиях живого организма, в опытах in vivo t и на примере отдельных клеточных структур и фракций.

Различия в уровне активности, распределении вдоль тонкой кишки, специфичности, регуляторных свойствах, способности к быстрым и медленным перестройкам позволяют подтвердить наличие у цыплят %

2-х типов кишечных пептидаз: мембранных и внутриклеточных, подобно тому, как это существует у животных других видов, в частности у млекопитающих (обзоры: Кушак, 1976, Kim f 1977, Ugoiev et al., 1977). Оказалось, что мембранные дипептидазы являются ферментами с более широкими адаптационными возможностями по сравнению с внутриклеточными, что с большой убедительностью было продемонстрировано в опытах по исследованию влияния голодания, диет с различным содержанием белка и при изучении развития кишечных пептидаз в процессе раннего постнатального онтогенеза. В частности, было установлено, что 18-часовое голодание существенно повышает уровень активности мембранной глициллейциндипептидазы и изменяет ее чувствительность к ъ-метионину. Гидролиз глицил- L-лейцина гомвгенатами слизистой в присутствии L-метионина тормозился на 37-39% как у сытых, так и у голодных цыплят, тогда как ингибирующий эффект ь -метионина на мембранный ферментзотмечался лишь у сытых птиц (Тар

- 155 вид и др., 1981). Изменения регуляторных характеристик ферментов интактных кишечных препаратов наблюдали и при изменении содержания белка в рационе (Тарвид и др., 1982). Наиболее значительными были различия мембранных и внутриклеточных пептидаз при исследовании раннего постнатального онтогенеза цыплят. Было показано,что в процессе роста и развития птиц происходит существенное падение активности мембраннвх ферментов. На протяжении первых 2-х недель формируется градиент пептидазной активности с максимумом в дисталь-ной области. В процессе перехода от эндо- к экзогенному питанию меняются и регуляторные характеристики мембранной глицилвалинди-дипептидазы. В первые дни после вылупления характерен активирующий эффект сахарозы, который угасает в течение недели. Впоследствии появляются ингибирующие действия ь -метионина и трибутирина. Все вышеупомянутые характеристики внутриклеточного фермента оставались без изменений (Тарвид, Кушак, 1981). На основании представ21? ленных данных можно сделать вывод о функциональных различиях указанных групп ферментов. Это мнение в настоящее время разделяет боль* шинство исследователей, занимающихся проблемами пептидного пищеварения ( Fern fit al. , 1969, Caspary , I972,Fujita et al. , 1972, Rhodes , Foiecroft , 1972, Уголев, 1972, Смирнова и др., 1976). Несмотря на известное распределение пептидазной активности (5-10% в щеточной кайме и 95-90% в цитозоле), мембранным ферментам принадлежит доминирующая роль в заключительных стадиях гидролиза белка. Это подтверждается данными Фуджиты ( Fujita et al. , 1972), которые свидетельствуют, что при использовании улучшенной техники выделения щеточной каймы было показано наличие 15% дипептидаз-ной активности в составе этой клеточной структуры. Уровень пептидазной активности щеточной каймы вполне достаточен для обеспечения переработки белка, необходимого организму. Более того, часть ферментов, обладающих специфической дипептидазной активностью $ локализована в зоне щеточной каймы и способна расщеплять широкий спектр дипептидов (Noack et dj 1975,Friedrich et al., 1980ь). Следует учитывать также гликокаликс, связанный с апикальной мембраной микроворсинок, содержащий в своем составе ряд ферментов, способных гидролизировать дипептиды ( Ugoiev et al. , 1977,1979d ).

Основное значение ферментов цитозоля заключается, по-видимому, в их участии в процессах внутриклеточного катаболизма белка. Это предположение подтверждается данными, свидетельствующими о резком увеличении активности внутриклеточных пептидаз при длительном голодании, когда благодаря их деятельности реализуется потребность других жизненно важных органов в аминокислотах (Kim et al., 1973, Kim , 1977).

В целом выделяют три этапа финальных стадий усвоения белка: гидролиз на поверхности ТОНКОЙ КИШКИ ("Surface hydrolysis ", tfad-hakrishnan 9 1977); мембранный гидролиз и транспорт; внутриклеточный гидролиз дипептидов, транспортируемых в интактной форме ( Ugoiev et ai., 1977). Особая роль на первом этапе принадлежит гликокаликсу ( Gruzdkov et ai., 1981). Выделение апикального гли-кокаликса из мембраны энтероцитов тонкой кишки цыплят позволило установить наличие в его составе различных пептидаз (2-3,5% активности по отношению к слизистой) и тем самым выяснить роль этой структуры В гидролизе олигопептидов у ПТИЦ (Kuehak et al., 1981, Кушак и др., 1981). Аналогичные данные были получены в опытах на крысах (Уголев и др., 1978$fUgoiev et al. , I979d ).

В наших экспериментах было установлено, что уровень пептидаз, содержащихся в составе апикального гликокаликса, примерно такой же, как в интактных кишечных препаратах. На основании этих данных можно думать, что ферменты, осуществляющие мембранный гидролиз олигопептидов в значительной степени локализованы в структурах гликокаликса. Еще одним аргументом в пользу этого предположения является тот факт, что пептидазы, находящиеся в составе апикального гликокаликса по своим регуляторным свойствам не отличаются от ферментов интактных кишечных препаратов. Процедура снятия агаровой реплики не отражается на уровне каталитической активности, регуляторных характеристиках кишечных пептидаз и распределении ферментативной активности вдоль тонкой кишки цыплят (Кушак и др., 1981).

Изучение активности и регуляторных свойств солюбилизирован-ных ферментов позволило установить существенную роль мембраны в регуляции ферментативной активности кишечных пептидаз у цыплят. В частности, было показано, что спонтанно солюбилизированный фермент отличается от пептидазы, находящейся в составе фермент-мембранных комплексов. Если для глициллейциндипептидазы интактных кишечных препаратов был характерен ингибирующий эффект трибутирина, то на активность солюбилизированного фермента тормозящее действие оказывал L-ыетионин. Применение протеолитических агентов (папа-ин) и детергентов (Тритон Х-100) выявило роль отдельных компонентов белковой молекулы фермента в его функционировании. При обработке ткани Тритоном Х-100 в растворе обнаруживали фермент, обладающий каталитической активностью и чувствительностью к L-метио-нину и трибутирину, тогда как при применении папаина солюбилизи-роЕанная пептидаза сохраняла определенную активность, но теряла свои регуляторные свойства (Кушак, Тарвид, 1981). На основании этих данных можно думать, что кишечные пептидазы цыплят, также, как и крыс ( Ugoiev et ai. f 1979a), представляют собой амфипати-ческие молекулы, имеющие в своем составе гидрофильную - каталитическую и гидрофобную - регуляторную части. Опыты с фракционной солюбилизацией показали, что существуют 2 фракции мембранных пептидаз, переход которых в раствор происходит последовательно, и регуляторные свойства которых различаются между собой. Локализация этих двух фракций на мембране энтероцитов и прочность их связи с последней различны. Можно предположить неравномерное распределение в слизистой 2-х указанных ферментов. В этом случае для первого характерна более поверхностная локализация, низкая прочность сея-зи с мембраной и индифферентность к действию трибутирина. Второй фермент отличается более прочной связью с мембраной за счет более глубокого расположения в ней. Его активность тормозится в присутствии трибутирина.

Аналогичное предположение было высказано при анализе регуляторных свойств пептидаз в процессе развития цыплят. Были получены данные, свидетельствующие, что в первый момент после вылупления цыплят в тонкой кишке присутствует только первая форма фермента, и лишь на Еторой неделе жизни птиц появляется вторая.

Различия регуляторных свойств спонтанно солюбилизированной глициллейциндипептидазы и фермента, полученного при обработке Тритоном Х-100, по-видимому, объясняется тем, что при этих 2-х способах обработки ткани тонкой кишки в раствор переходят разные фракции пептидаз, глубина расположения которых в мембране различна.

Изучение кинетики солюбилизированных ферментов позволило установить, что мембранные дипептидазы, переходящие в раствор при спонтанной солюбилизации являются аллостерическими ферментами, зависимость скорости реакции от концентрации субстрата которых характеризуется сигмоидной зависимостью. Представление кинетики в обратных координатах Лайнуивера-Берка показало, что эти ферменты обладают свойством кооперативности, которое, однако, не является однородным (переход отрицательной кинетической кооперативности в положительную), вследствие наличия нескольких форм фермента.

Как уже отмечалось, отдельные фракции солюбилизированных ферментов не являются однородными. В специальных экспериментах по фракционированию солюбилизата, было показано, что в нем содержатся не 2, а 4 белковые фракции, обладающие дипептидазной активностью и различающиеся по своей способности гидролизироЕать различные дипептиды. Имеющиеся в литературе данные, относительно кинетических характеристик мембранных ферментов, осуществляющих финальные стадии гидролиза белка пищи, касаются характеристики интегральных белков апикальной мембраны энтероцитов - аминопептидаз. Показано, что, несмотря на амфипатическую структуру молекулы мембранной ами-нопептидазы, зависимость v от s для этого фермента описывается гиперболой и в обратных координатах IД от I/s представлена линейной зависимостью (Хюттер и др., 1982). Это, однако, не противоречит нашим данным, так как при исследовании специфичности ферментов, переходящих в раствор при использовании техники спонтанной солюбилизации было показано, что аминопептидазная активность в ферментном препарате отсутствует и гидролиз субстратов осуществляется только за счет функционирования дипептидаз.

Таким образом, в тонкой кишке цыплят мембранный гидролиз пептидов осуществляется за счет 2-х групп ферментов: аминопетидаз, прочно связанных с мембраной, и дипептидаз, которые относятся к периферическим мембранным белкам, легко отделяются от нее и переходят в раствор. Характерно, что в последнем случае сохраняется функциональная целостность молекулы, не теряющей своих каталитических и регуляторных свойств. Последние утрачиваются лишь в процессе десенсибилизации белковой молекулы фермента при ее обработке протеолитическим агентом.

Хорошо известно, что пептидазная активность тонкой кишки в различных ее отделах не является одинаковой ( Koldovsky f 1969,

Уголев, 1972, Уголев и др., 1974, 1977). При анализе адаптации кишечных ферментов у птиц было установлено, что максимальная активность мембранных дипептидаз сосредоточена в дистальных участках тонкой кишки (Тарвид, Кушак, 1981). Данные такого рода были получены И другими исследователями (Harrison,Webster $ 1971, Laval et al. , 1978,skovbjerg , 1981). Однако, нами было показано, что различие дипептидаз проксимального и дистального участков активности тонкой кишки цыплят касаются не только уровня каталитической, но и регуляторных свойств этих ферментов. Изучение развития глицил-валиндипептидазной активности в процессе раннего постанатального онтогенеза позволило выявить повышенную чувствительность дипептидаз дистального отдела тонкой кишки к присутствию модификаторов. Следует отметить, что такие закономерности были характерны лишь для дипептидаз поверхности энтероцитов; регуляторные свойства внутриклеточных ферментов не зависели от топографии тонкой кишки. Имеющиеся в литературе данные, свидетельствуют также о том, что дистальные отделы тонкой кишки более чувствительны к режиму кормления, чем проксимальные (Yasumoto , Sigiyama , 1981).

Различия пептидаз проксимального и дистального отделов тонкой кишки проявляются и при анализе физико-химических свойств ферментов (солюбилизированных и находящихся в составе апикального гликокаликса). Для ферментов дистального отдела температурный оптимум расположен при 40°С. При повышении температуры до 50°С следует быстрое и значительное падение ферментативной активности, независимо от вида используемого субстрата. Максимальная активность дипептидаз проксимального отдела отмечалась при 50°С.

Аналогичные результаты были получены при исследовании температурных адаптаций щелочной фосфатазы в составе интактных фермент-мембранных комплексов, и солюбилизированных при помощи Тритона Х-100 и трипсина у рыб и млекопитающих. Было обнаружено, что максимальная активность фермента проявляется при 50°С у крыс, и 40°С у рыб. (Уголев и др., 198Я}. Значит, температурный оптимум кишечных ферментов может быть сдвинут в сторону более высоких значений по сравнению с температурой тела животного. С другой стороны мембранные пептидазы начальных отделов тонкой кишки цыплят отличаются более узким оптимумом рН, который расположен в нейтральной области. Максимальный уровень мембранной глициллейциндипептидазы дистальных отделов расположен при резко щелочных значениях рН среды (10—II). Несмотря на кажущееся физиологическое несоответствие показателя кислотности химуса в полости тонкой кишки и рН оптимума дипептидаз, другие авторы тоже наблюдали высокую активность различных кишечных ферментов при щелочной реакции инкубационной среды (Кузьмина и др., 1981, Уголев и др., 1981$. Изучение термо-инактииации солюбилизированных из различных отделов тонкой кишки пептидаз с учетом их субстратной специфичности показало, что температурная устойчивость фермента существенно зависит от природы субстрата. В проксимальном1участке тонкой кишки наиболее устойчивыми являются валилвалин- и глициллейциндипептидазы. Можно предположить, что эти два субстрата гидролизуются одним ферментом,что подтверждается конкурентными взаимоотношениями глицил- L -лейцина и l -валил-L -валина при их совместном мембранном гидролизе. Лейцил-глицин по-видимому расщепляется под действием другой пептидазы которая способна сохранят^свою активность лишь при температуре тела птиц.

В дистальном отделе дипептидазы сохраняют незначительную часть своей активности при их экспозиции в течение 60 мин при 50° С. Известно, что у крыс олигопептидазы щеточной каймы сохраняют свою активность даже после 60 минутной экспозиции при 60°С, только нагревание до 70°С снижает до 0 их способность гидролизогать олигопептиды ( Kim et al., 1974). Следовательно дипептидазы цыплят, солюбилизированные с поверхности тонкой кишки по своей термоустойчивости уступают ферментам крыс, так как выдерживают нагревание лишь до 50°С (ферменты проксимальных отделов). Это может быть обусловлено как видовыми различиями, так и изменением свойств солюбилизированных ферментов, по сравнению с пептидазами, находящимися в составе щеточной каймы.

Наблюдаемые различия кишечных пептидаз цыплят проксимального и дистального отделов могут быть объяснены в рамках концепции А.М.Уголева (1972), указывающей на возможность сорбции на мембране кишечных клеток панкреатических ферментов, способных осуществлять гидролиз дипептидов. Представляется очевидным, что подобная сорбция носит ярко выраженный проксимо-дистальный градиент и максимально выражена в начальных отделах тонкой кишки. С другой стороны нельзя исключить возможность топографической специфичности ферментов (различие свойств ферментов в зависимости от их локализации в различных отделах тонкой кишки). Представляется вполне вероятным, что пептидазы проксимального и дистального отделов отличаются организацией молекулы фермента, характером ее связи с мембраной, что в свою очередь, определяет различие их физико-химических свойств.

При исследовании субстратной специфичности пептидаз различных кишечных препаратов (интактная кишка, гомогенат слизистой, солюбилизированные ферменты), выделенных из проксимального и дистального отделов тонкой кишки не было выявлено существенных различий в зависимости от топографии тонкой кишки.

Однако, различия специфичности пептидаз проявляются при сравнении интактных кишечных препаратов, их солюбилизатов и гомогенатов слизистой тонкой кишки цыплят. Анализ гидролиза 21 субстрата гомогенатами слизистой показал, чтт) б ткани тонкой кишки присутствуют как аминопептидазы, так и дипептидазы. Все исследованные дипептиды можно условно разделить на 3 группы: не подвергающиеся гидролизу, трудно- и легкогидролизуемые. Для гомогената слизистой I группа представлена Бокпролил-L -аргинином и Бок-глицил-L-лейцином; ко П группе можно отнести глицил-fi -аланин, dl -<£ -аланил- dl -лейцин, остальные субстраты относятся к Ш группе. Для интактных кишечных препаратов и солюбилизированных ферментов I группу составляли - глицил-J?> -аланин, Бокглицил- L -лейцин, Бок-пролил- L-аргинин; П - глицил- L-jb-фенилаланин, l -аланил-ь-<к-аланин, ь-пролил- l-аргинин. Остальные субстраты относились к Ш группе. Для ферментов клеточной поверхности ко второй группе следует также отнести глицил- l-аспарнгин, глицил- dl -норлейцин, l-серил-глицин, которые относительно легко гидролизуются солюби-лизированными ферментами.

Изучение аминопептидазной активности на примере гидролиза модельных субстратов L-лейциламида и ь-лейцил-^-нафтиламида различными кишечными препаратами позволило установить, что указанная активность характерна для интактных кишечных препаратов и гомоге-натов слизистой тонкой кишки и отсутствует в препаратах солюбилизированных ферментов. Следует особо подчеркнуть, что аминопептидаз-ная активность тонкой кишки цыплят существенно (10-20 раз) ниже дипептидазной.

Вышеприведенные данные дают возможность не только оценить специфичность пептидаз, содержащихся на поверхности кишечных клеток и внутри них. Они также служат доказательством идентичности ферментов, связанных с мембранной энтероцитов и переходящих в раствор при солюбилизации и, таким образом отвергают возможность перехода внутриклеточных ферментов в раствор при этой процедуре.

Важная роль в анализе деятельности кишечных пептидаз принадлежит результатам, полученным в экспериментах с кишечной петлей. Полученные данные подтверждают общие закономерности регуляции ферментативной активности кишечных пептидаз цыплят, установленные в модельных опытах in vitro. Было продемонстрировано, что в условиях in vivo сохраняется взаимное влияние пищевых веществ на гидролиз полисубстратной смеси. Эффекты трибутирина, масляной кислоты, L -метионина на гидролиз глицил- L-лейцина в кишечной петле полностью соответствуют таковым in vitro (Тарвид, Кушак, 1976, Кушак и др., 1976). Влияние аминокислот, составляющих дипептид, определяется не специфичностью, а их суммарной концентрацией, в то время как действие одних и тех же модификаторов на гидролиз различных субстратов может отличаться (неодинаковые эффекты аминокислот на гидролиз глицил-ь-лейцина и ъ-лейцилглицина).

Интересным представляется сравнительный анализ эф|ектов сахарозы на пептидный гидролиз в различных кишечных препаратах. Как мы уже неоднократно отмечали ранее, действие сахарозы характеризуется лабильностью и зависит от ряда факторов. В частности, было показано, что активность мембранных ферментов (глициллейцин- и гли-цилвалиндипептидаз) тонкой кишки цыплят увеличивается в присутствии сахарозы при использовании в качестве источника ферментов апикального гликокаликса, а также в ранний период постнатального развития. У 30-40 дневных птиц активирующее влияние дисахарида отсутствует, тогда как в опытах in vivo , и при содержании цыплят на полусинтетических диетах с различным уровнем белка отмечается его достоверное тормозящее действие. Эти различия могут быть обусловлены различными причинами. Можно предположить, что регуляторные эффекты сахарозы существенно зависят от гида кишечного препарата,

- 165 то есть, от организации белковой молекулы фермента, наличия ее связи с мембраной и возможности взаимодействия с модификатором. Учитывая существование 4-х белковых фракций, обладающих дипептидазной активностью, различия регуляторных эффектов сахарозы на гидролиз глицил- L-лейцина^ возможно^объясняются тем, что каждая из пептидаз обладает разной чувствительностью к присутствию дисахари-да в инкубационной среде. В этом случае применение в качестве источника дипептидазной активности различных кишечных препаратов (вывернутые слизистой наружу отрезки тонкой кишки, солюбилизирован-ные ферменты* пептидазы, выделенные в составе апикального гликокаликса) сопровождается изменением регуляторных свойств различных ферментов (аналогичные результаты получены при исследовании регуляторных эффектов трибутирина при фракционной солюбилизации пептидаз). В пользу этого предположения свидетельствует также анализ динамики регуляторных эффектов сахарозы в онтогенезе. И, наконец, не следует исключать возможного влияния сахарозы, как энергетического субстрата, что может иметь важное значение при объяснении различий регуляторных эффектов сахарозы в условиях in vivo и in vitro.

В целом, можно отметить, что в тонкой кишке цыплят имеется ряд ферментов, осуществляющих промежуточные и заключительные этапы гидролиза белка, и способных гидролизовать все многообразие олиго- и дипептидов, образующихся в результате расщепления пищевой смеси. Активность этих ферментов регулируется различными механизмами, включающими в себя как непосредственную локальную регуляцию различными химическими соединениями, так и адаптационные перестройки ферментативной активности над действием функционального состояния и различной по составу пищи. Таким образом, регуляция активности кишечных пептидаз у цыплят осуществляется благодаря действию факторов окружающей среды и находится под генетическим контролем клетки.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Таврид, Ирена Леоновна, 1983 год

1. Асатиани B.C. Новые методы биохимической фотометрии, М., Наука, 1965.

2. Ашмарин И.П., Васильев Н.Н., Амбросов В.А. Быстрые методы статистической обработки и планирование экспериментов. Л., 1975.

3. Базанова Н.У., Измайлов Т.У., Мурзамадиев А.И. Роль слизистой пищеварительного тракта животных в гидролизе питательных веществ. В сб.: Физиология и патология тонкой кишки: Матер. Всесоюзн. конфер. гастроэнтерологов, Рига, 1970, с. 35-37.

4. Берман Ш.А., Салениеце И.К. Пристеночное пищеварение у рыб. -Вопр. ихтиологии, 1966, т. 6, в. 4(41), с. 720-724.

5. Бреслер С.Е. Введение в молекулярную биологию. Изд. 2-е, перераб., М.-Л., Наука, 1966.

6. Волошенович Н.И., Мюле В., Зарипов Б.З., Маматахунов А.И., Уго-леЕ A.M. Структурные и функциональные перестройки тонкой кишки при голодании. В кн.: Проблемы клинической и экспериментальной энтерологии. Л., 1981, с. 71-77.

7. Генгин М.Г., Шаинская А.Н., Рева Л.Д. Глицилглициндипептидаза нервной ткани кошек. Биохимия, 1982, т. 47, № 9, с. 14881493.

8. Гозите И.К. Характеристика пищеварительных функций изолированного кишечного эпителия. Б сб.: Физиология и патология тонкой кишки: Матер. Бсесоюзн. конфер. гастроэнтерологов.Рига1970, с. 50-53.

9. Голацц Л.Г. Влияние полного 20-суточного голода на фермент- выделительную функцию подделудочной железы. Матер, научн. конфер. молодых ученых, Л., Медицина, 1971, с. 82.

10. Гредин В. Г. Сравнительная характеристика каталитических и регуляторных свойств различных ферментов, осуществляющих мембранное пищеварение у млекопитающих и рыб при экспериментальной патологии. Автореф. канд. дис., Л., 1977

11. Диксон М., Уэбб Э. Ферменты, т. I, М., Мир, 1982.

12. Дэвени Т., Гергей Я. Аминокислоты, пептиды, белки. М., Мир,1976, 364 с.

13. Егорова В.В. Исследование регуляторных свойств некоторых собственно кишечных ферментов. Автореф.канд. дис., Л., 1972.

14. Жак об Ф., Моно Ж. Биохимические и генетические механизмы рефляции в бактериальной клетке. Б сб.: Молекулярная биология. Проблемы и перспективы. К 70-летию со дня ровд. акад.

15. Б.А. Энгельгарта. М., 1964, с. 14-39.

16. Измайлов Т.У. 0 пристеночном пищеварении в преджелудках у крупного рогатого скота. Изв. АН КазССР, сер. биол. наук, 1965, е. 5, с. 84-87.

17. Капралова Л.Т. К Еопросу о пищеварительных ферментах плаценты и пищеварительных органов плодов овец. Докл. АН СССР, 1963, т. 148, с. 985-988.

18. Комиссарчик Я.Ю., Уголев A.M. Ультраструктура и возможное функциональное значение гликокаликса микроворсинок кишечных клеток. Докл. АН СССР, 1970, т. 194, № 3, с. 731-733.

19. Коштоянц Х.С. Основы сравнительной физиологии. М.-Л., Изд. АН СССР, 1970, т. I.

20. Крамл Й., Кадлецова Л., Колинска И. Выделение некоторых мембранных и растворимых пептидаз слизистой тонкой кищки. В кн.: Физиология и патология пищеварения: Тез. докл. 3-го билатерального симпозиума СССР-ЧССР, Кишинев, 1981, с. 76-77.

21. КуваеЕа И.Б., Барановская Н.И. Ферментные адаптации в тонком итолстом кишечнике и химизм полости толстых кишок при качественно различном питании. В сб.: Механизм нейро-гуморальной регуляции вегетативных функций. М., Наука, 1970, с. 216-224.

22. Курганов Б.И. Аллостерические ферменты. М., Наука, 1978, 248с.

23. Кушак Р.И. Топография глицил-L-лейциндипептидазной активности в тонкой кишке птиц и рыб разного возраста. 5-е научн. со-вещ. по эволюц. физиол., посвящен, памяти акад. Л.А. Орбели: Тез. и рефер. докл. Л., 1968,с!44.

24. Кушак Р.И. Топография дипептидазной активности в тонкой кишкецыплят. В кн.: Физиологически активные компоненты питания животных. Рига, Зинатне, 1969а, с. 353-359.

25. Кушак Р.И. Гидролиз глицил- L-лейцина в тонкой кишке карпов. В кн.Физиологически активные компоненты питания животных. Рига, Зинатне, 19696, с. 361-366.

26. Кушак Р.И. Мембранные и внутриклеточные кишечные пептидазы. -Изв. АН ЛССР, 1976, № 5, с. II6-I29.

27. Кушак Р.И. Интенсивность гидролитических и транспортных процессов в различных отделах тонкой кишки и кишечных ворсинок. -В кн.:Всасывание и обмен веществ у животных. Рига, Зинатне, 1980, с. 57-69.

28. Кушак Р.И., Алексюк Н.Р. Гидролиз олигопептидов глицина в тонкой кишке цыплят и его регуляция с помощью различных модификаторов. В кн.: Усвоение пищевых веществ в организме животных. Рига, Зинатне, 1977, с. 123-134.

29. Кушак Р.И., Басова Н.А. Новый критерий для исследования локализации пептидаз. В кн.: Физиология и патология пищеварения:' Матер. 2-го билатерального симпоз. ЧССР-СССР, Оломоуц, 1978, с. 56-59.

30. Кушак Р.И., Басова Н.А. Взаимодействие некоторых дипептидов в тонкой кишке цыплят может происходить на уровне продуктов их гидролиза. Изв. АН ЛССР, 1983, в печати.

31. Кушак Р.И., Жигуре Д.Р. Локализация фосфатаз в клетках тонкой кишки крыс в ранний постнатальный период. Изв. АН ЛССР, 1970, № II, с. 93-98.

32. Кушак Р.И., Жигуре Д.Р. Сорбция протеаз на поверхности слизистой тонкой кишки некоторых млекопитающих и птиц. В кн.: Всасывание и обмен питательных вещестЕ в организме жиеотных. Рига, Зинатне, 1975, с. 46-54.

33. Кушак Р.И., Жигуре Д.Р., ЩербакоЕ Г.Г. К вопросу о солюбилизации кишечных пептидаз. В кн.: Физиология и патология тонкой кишки: Матер. Всесоюзн. конфер. гастроэнтерологов. Рига, 1970, с. 64-67.

34. Кушак Р.И., Кис Р.Е. Солюбилизации пептидаз в тонкой кишке цыплят. В кн.: Всасывание и обмен питательных веществ в организме животных. Рига, Зинатне, 1975, с. 46-54.

35. Кушак Р.И., Озол А.Я., Буйке А.Г. Развитие ферментативной активности тонкой кишки цыплят. В кн.: Физиология пищеварения: Тез. докл. IX конфер., посвящ. 50-летию Великой Октябрьской соц. рев., Одесса, 1967, с. 172-173.

36. Кушак Р.И., Озол А.Я., Буйке А.Г. Развитие ферментативной активности тонкой кишки цыплят в ранний постнатальный период. -Изв. АН ЛССР, 1968, № 7, с. 96-102.

37. Кушак Р.И., Озол А.Я., Нуркс Е.Е., Санжура Т.С., Ивкина Т.М.

38. Полисубстратная регуляция гидролитических и транспортных ■ процессов в тонкой кишке. Третий Всесоюзн. биохим. съезд: Рефер. научн. сообщений. Рига, 1974а, т. I, с.202.

39. Кушак Р.К., Озолс А.Я., Тарвид И.Л., Бертовская Ж.Э. Регуляторные функции ферментов тонкой кишки. В кн.: Пищеварительные ферменты: Матер, билатерального Советско-Чешского симпоз., Ужгород, 1976, с. 58-62.

40. Кушак Р.И., Санжура Т.С. Алиментарная регуляция каталитической активности и регуляторных свойств кишечных дипептид-гидро-лаз. Физиол. журн.СССР, 1981, т.67, № 3, с. 433-441.

41. Кушак Р.И., Санжура Т.С., Фомина Г.А. Влияние метионина на пепти-дазную активность тонкой кишки цыплят. Физиол. журн.СССР, 19746, т. 60, № II, с. 1718-1722.

42. Кушак Р.И., Фомина Г.А. К Еопросу об ингибирующем действии метионина на гидролиз пептидов. Изв. АН ЛССР, 1973, № 3, с. 121.

43. Кушак Р.И., Тарвид И.Л. Регуляция активности кишечных пептидаз. В кн.: Регуляция процессов обмена вещестЕ и энергии: Тез. докл. У1 объединенного симпоз. биохимических обществ СССР и ГДР, Таллин, 1981, с. 50-51.

44. Кушак Р.И., Уголев A.M. К локализации пептидазной активности в-клетках тонкой кишки белых крыс. Докл. АН СССР, 1966, т. 168, с. 477-479.

45. Лойко А.Ф. Актиеность ферментов дуоденального химуса кур при разном уровне обменной энергии корма. Сельскохозяйственная -биология, 1974, т. 9, № I, с. II9-I23.

46. Мазо В.К., Конышев В.К., Шатерников В.А. Всасывание в кишечнике белковых молекул и их крупных фрагментов. Вопросы питания, 1982, № 4, с. 3-10.

47. Митюшова Н.М. Некоторые вопросы методики изоляции щеточной каймы. В сб.? Физиология и патология тонкой кишки: Матер. Всесоюзн. конфер. гастроэнтерологов, Рига, 1970, с. 18-20.

48. Мосолов В.В. Протеолитические ферменты. М., Наука, 1971.

49. Нейфах С.А. Аллостерическое регулирование ферментативной активности. В сб.: Вопросы общей и Еозрастной фармакологии. Труды ленинградского педиатр, инст., в. 32, Л., 1963, с. I03-II6.

50. Ньюсхолм Э., Старт К. Регуляция метаболизма. М., Мир, 1977.

51. Озолс А. Я. Алиментарные эффекты мембранного гидролиза и транспорта углеводов в тонкой кишке птиц. Агтореф. докт. дис., Л., 1982.

52. Озолс А.Я. Кушак Р.И., Басова Н.А. Влияние уровня белка в диете на процессы мембранного гидролиза и транспорта пищевых веществ в тонкой кишке птиц. В кн.: Проблемы белкововитамин-ных воздействий в норме и патологии: Тез. докл., Рига, 1978, с. 22-24.

53. Парина Е.В., Калиман П.А. Механизмы регуляции ферментов в онтогенезе. Харьков, Вища школа, 1978, 202 с.

54. Покровский А.А. Роль биохимии в развитии науки о питании. М., 1974, 126 с.

55. Преображенский С.Н. Изменение активности гидролаз гликозидов в кишечнике цыплят с возрастом. Труды Всесоюзн. научно-ис-след. института физиологии и биохимии с/х животных, Боровск, 1967, с. 175-185.

56. Рахимов Р.К. Амилолитическая активность кишечника крыс в зависимости от функционального состояния органов пищеварения. -В сб.: Проблемы физиологии человека и животных в условиях' жаркого климата. Ташкент, 1965, с. 159-163.

57. Рахимов Р.К. Ферментативная активность кишечной поверхности у голодных и накормленных крыс. Матер. ХУ1 научн. сессии инст. питания АМН СССР, в. I, М., 1966, с. 153-154.

58. Розенфельд Е.Л. Механизм регуляции ферментов, участвующих в обмене гликогена. В кн.: Химические факторы регуляции активности и биосинтеза ферментов. М., Медицина, 1969,с.54-81.

59. Смирнова Л.Ф., Тимофеева Н.М., Уголев A.M. К вопросу о субклеточной локализации гидролиза дипептидов в тонкой кишке животных. Докл. АН СССР, 1976, т. 228, с. 992-994.

60. Тарвид И.Л., Кушак Р.И. Регуляция кишечных пептидаз in vivo- Б кн.: Химические и физиологические проблемы создания и использования синтетической пищи. Белковое питание. Рига, Зинатне, 1976, с. 94-III.

61. Тарвид И.Л., Кушак Р.И. Рёгуляторные свойства кишечных пептидаз и их изменения в онтогенезе. Тез. докл. У1 конфер. биохимиков прибалтийских республик, Белорусской ССР и Ленинграда, Рига, Зинатне, 1981, с. 480-4-82.

62. Тарвид И.Л., Кушак Р.И. Определение пептидазной активности по убыли субстрата. Лабораторной дело, 1983, № 5, с. 57-59.

63. Тарвид И.Л., Кушак Р.И., Тара А.А., Сийгур Ю.Р. Использование очищенного препарата оксидазы I-аминокислот из яда гюрзы для анализа кинетики кишечных пептидаз. Б кн.: Транспорт и обменные процессы в кишечнике животных. Рига, Зинатне, 1983, в печати.

64. Тарвид И.Л., ШешукоЕа Т.А., Кушак P.M., Озолс А.Я. Влияние диет с различным уровнем белка на рост и активность некоторых кишечных ферментов цыплят. Матер. Бсесоюзн. симпоз. по биохимии с/х животных, Витебск, 1982, с. 129-130.

65. Ташходжаев П.И., Мавриди Д.И. Ультраструктура призматических клеток тощей кишки при жировой нагрузке. В сб.: Физиология ипатология тонкой кишки: Матер. Бсесоюзн. конфер. гастроэнтерологов, Рига, 1970, с. 26-28.

66. Тимофеева Н.М., Иезуитова Н.Н., Черняховская М.Ю., ДеЛей П.,

67. Уголев A.M. Взаимодействие трибутирина, дипептида и сахарозы при их гидролизе слизистой тонкой кишки. Докл. АН СССР, 19676, т. 176, № 6, с. I451-1454.

68. Тимофеева Н.М., Кушак Р.И. Механизм гидролиза дипептидов кишечными клетками. Матер. ХУ1 научн. сессии инст. питания М.,

69. АМН СССР, в. I, 1966, с. 150-151.

70. УголеЕ A.M. Пищеварение и его приспособительная эволюция. М., Высшая школа, 1961.

71. Уголев A.M. Пристеночное (контактное) пищеварение. М.-Л., Изд. АН СССР, 1963.

72. Уголев A.M. Физиология и патология пристеночного (контактного) пищеварения. Л., Наука, 1967.

73. УголеЕ A.M. Организация и регуляция процессов мембранного пищеварения и транспорта. Физиол. журн. СССР, 1970, т. 56,4, с. 651-662.

74. Уголев A.M. Мембранное пищеварений. Полисубстратные процессы, организация и регуляция. Л., Наука, 1972, 358 с.

75. Уголев A.M., Груздков А.А., Зильбер Ю.Д., Иезуитова Н.М., Тимофеева Н.М., Черняховская М.Ю. : Взаимоотношения ферментативных функций поджелудочной железы и тонкой кишки при адаптивных процессах. Физиол. журн. СССР, 19786, т. 64, № 9, с. I2I7-I228.

76. Уголев A.M., Йезуитова Н.Н. Определение активности инвертазы и других дисахаридаз.-В кн.: Исследование пищеварительного аппарата у человека. Л., 1969, с. 192-196.

77. Уголев A.M., Йезуитова Н.Н., Тимофеева Н.М., Кушак Р.И. Микротопография распределения в интра- и экстрацеллюлярной жидкости гексоз и аминокислот, образующихся при гидролизе дипепти

78. ДОВ И дисахаридов. Die Nahrung , 1967а, Ig.II, N 7/8, S. 595-606.

79. Уголев A.M., Йезуитова Н.Н., Тимофеева Н.М., Черняховская М.Ю. Закономерности нормального распределения пищеварительных ферментов вдоль тонкой кишки млекопитающих. -Die Nahrung, 1970 a, lg.I4, N 6, s.453-457.

80. Уголев A.M., Колтушкина Г.Г. Мембранное пищеварение и ферментный аппарат микроворсинок. В кн.: Структура и функции биологических мембран. М., 1975, с. 276-306.

81. Уголев A.M., Смирнова Л.Ф., Тимофеева Н.М. Спонтанная солюбилиза-ция дипептидаз с поверхности интактной кишечной слизистой.- Докл. АН СССР, 1975 б, т. 221, № 4, с. 984-986.

82. Уголев A.M., Тимофеева Н.М.Определение пептидазной активности.- В кн.: Исследование пищеварительного аппарата у человека. Л., 1969, с. I78-I8I.

83. Уголев A.M., Тимофеева Н.М., ИезуитоЕа Н.Н., Груздков А.А., Ле-согор В.Н. Функциональная топография ферментативных и транспортных процессов в тонкой кишке. В кн.: Руководство по физиологии. Физиология ЕсасыЕания. Л., Наука, 1977, с. 524-565.

84. Уголев A.M., Тимофеева Н.М., Иезуитова Н.Н., Рахимов К.Р.

85. Уголев A.M., Устинкова Э.М. К вопросу о значении хемосррбции в фиксации амилазы на поверхности тонкой кишки. В кн.: Физио- 182 логия пищеварения: Тез. докл. IX конфер., посвященной 50-летию Великой Октябрьской соц. рев.ч.II, Одесса, 1967, с. 122-123.

86. Фершт Э. Структура и механизмы действия ферментов. М., Мир, 1980.

87. Хейсин Е.М. Пиноцитоз. В кн.: Руководство по цитологии. М.-Л., Наука, 1965, с. 166-172.

88. Шешукова Т.А., Озолс А.Я. Субстратная регуляция дисахаридазной активности тонкой кишки цыплят. Матер. Всесоюзн. симпоз. по биохимии с/х животных, Витебск, 1982, с. 143.

89. Шишова-Касаточкина О.А. Некоторые вопросы всасывания аминокислот е кишечнике. Вопросы питания, 1964, т.23, с. 3-17.

90. Шлыгин Г.К. Ферменты кишечника в норме и патологии. Л., Медицина, 1967.

91. Щербаков Г.Г. Сравнительно-физиологические исследования пристеночного (мембранного) пищеварения у кур, рыб и млекопитающих. Автореф. канд. дис., Л., 1969.

92. Яремко Е.Е. Изменение ультраструктуры микроворсинок кишечногоэпителия при всасывании глюкозы. Физиол. журн. СССР, 1968, т. 54, № 5, с. 603-606.

93. Acldison J.Li. , Burston D. , Li at thews D.Li. Evidence for active transport of the dipeptide glycyl-sarcosine by hamster jejunum in vitro. Glin. Sci., 1972, vol. 43, N 6, p. 907-911.

94. Adibi 3.A. Intestinal transport of dipeptides in man. Relative importance of hydrolysis and intact absorption.• -J. Glin. Invest., 1971, vol. 50, N 11, p. 2266-2275.

95. Adibi S.A., Liercer D.vi. Protein digestion in human intestine as reflected in luminal, mucosal and plasma amino acid concentration after meals. J. Clin. Invest., 1973» vol. 52, К 7, p. 1586-1594.

96. Adibi S.A., Liorse E.L. The number of glycine residues which limits intact absorption of glycine oligopeptides in human jejunum. J. Glin. Invest., 1977» vol. 60, p. 1008-1016.

97. Agar iv.T., Iiird F.J.R., Si dim G.S. The active absorption of amino acids by the intestine. J. Physiol., 1953» vol. 121, p. 255-263.

98. Alexander B., Landwehr G., Seligman A. A specific micromethod for the colorimetric determination of glycine in blood and urine. J. Biol. Chem. , 194-5, vol. 160, p. 51-59.

99. Auricchio S., Greco L. , de Vizia B., Buonocore V. Lipeptidylaminopeptidase and carboxypeptidase activities of thebrush border of rabbit small intestine. Gastroenterol.,1978, vol. 75, N 6, p. 1075-1079. Pierro

100. Auricchio s .Li. , Orsatti Li. Assay of peptidase activities of intestinal brush border membrane with L-amino acid oxidase. Anal. Biochem., 1971» vol. 39, p. 15-23.

101. Bale J.jR. , Chock P.В., Huang P.Y. The nature of negative co-operativity in alkaline phosphatase. Kinetic patterns contrary to the flip-flop model. J. Biol. Chein. , 1980, vol. 255, p. 8424-8430.

102. Baksi K. Effects of neonatal undernutrition on small intestinal dipeptidase(s) activity. Indian J. Exp. Biol., 1979, vol. 17, p. 1107-1111.

103. Eayer R.C., Chawan C.B. , Bird p.H. , Liusgrave S.D. Characteristics of the absorptive surface of the small intestine of the chicken from 1 day to 14 weeks of age. Poultry Sci., 1975, vol. 54, N 1, p. 155-169.

104. Bayer R.C., Rittenburg J.H., Bird P.H., Chawan C.B., Allen Ы. Influence of short term fasting on chicken alimentary canal mucosa. Poultry Sci., 1981, vol. 60, IT 6, p. 1295-1502.

105. Beeken IT.L. , Korman 1.1. Degradation of albumin by isolated segments of the gastrointestinal tract in rats. -Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1964, vol. 117, A1 1, p. 24.

106. Behrman H.R. , Кare H.R. Adaptation of canine pancreatic enzymes to diet composition. J. Physiol., 1969, vol. 205,p. 667-676.

107. Benajiba A., Maroux S. Purification and characterization of aminopeptidase A. from hog intestinal brush-border membrane. Eur. J. Biochem. , I960, vol. 107, AT 2, p. 581-588.

108. Benajiba A., Llaroux S. Subunit structure of hog intestinal brush border aminopeptidase I\f. Biochem. J. , 1981, vol. 197, p. 573-580.

109. Berteloot A., Khan A.H., Kamaswany K. Characteristics of di-peptide transport in normal and papain-treated brush border membrane vesicles from mouse intestine. II. Uptake of glycyl-L-leucine. Biochim. biophys. acta, 1982, vol. 086, N 1, p. 47-54.

110. Bockus IvI.L. Gastroenterology, 2. Philadelphia London, 1964.

111. Bolin T.D. , LIcKern A. , Davis A.E. The effect of diet onlactase activity in the rat. Gastroenterology, 1971» vol. 60, p. 432-437.

112. Bolin T.D., Pirola R.C., Davis A.E. Adaptation of intestinal lactase in the rat. Gastroenterology, 1969, vol. 57» p. 406-409.

113. Boorman K.il'. Digestion and absorption of protein. In: Digestion in the fowl. Ed. by K.Lf. Boorman, B.ivi. Freeman, Edinburgh, 1976, p. 27-61.

114. Borgstrtfm В., Dahlqvist A., Lundh G., Sjtfvall J. Studies of intestinal digestion and absorption in the human. -J. Clin. Invest., 1957, vol. 36, p. 1521-1536.

115. Boyd C.A.R., Parsons D.3. The fine structure of the microvilli of isolated brush borders of intestinal epithelial cells. J. Cell Biol., 1969, vol. 41, p. 646-651.

116. Burston D. , Addison J.LI. , Matthews D.LI. Uptake of dipeptides containing basic and acidic amino acids by rat small intestine in vitro. Glin. Sci., 1972, vol. 43, И 6, p. 823-637.

117. Burstone M.S. , tfeisburger E.K. Histochemical demonstration ofaminopeptidase by a new oxidation technique. J. Histo-chem. Cytochem., 1961, vol. 9, p. 712-713.

118. Gain G.D. , Lloore P., Patterson H. , LicElveen Li. A. The stimulation of lactase by feeding lactose. Scand. J. Gastroenterol., 1969, vol. 4, p. 545-550.

119. Casparу w.F. Intestinal transport mechanism for amino acidsderived from dipeptides. Eur. J. Clin. Invest., 1972, vol. 2, N 4, p. 278.

120. Chapman D. Biological membranes. In: Intestinal absorption.

121. Biomembranes. vol. 4A. Plenum Press, London New York,1974, p. 123-158.

122. Gheeseman G.J. The transport of dipeptides by the small intestine.-Can. J. Physiol. Pharmacol., 19o0, vol. 58, p. 1326-1333.

123. Cheesman G.J., Newey H. , Smyth D.I1. Effect of amino acids on the hydrolysis of dipeptides by rat small intestine. -J. Physiol., 1970, vol. 212, p. 25-26.

124. Gheesman G.J., Smyth D.H. Interaction of amino acids, peptides and peptidases in the small intestine. Proc. Hoy. Soc. London, 1975, vol. B190, N 1099 > p. 149-163.

125. Ghen I'.l.L. , Rogers ^.R. , Harper A.E. Observations on protein digestion in vivo. I?. Further observations on the gastrointestinal content of rats fed different dietary proteins. J. Nutr., 1962, vol. 76, p. 235-241.

126. Golbeau A., Liaroux S. Integration of alkaline phosphatase in the intestinal brush border membrane. Biochim. biophys. acta, 1978, vol. 511, p. 39-51»

127. Coleman R. Membrane-bound enzymes. Biochim. biophys. acta, 1973, vol. 300, p. 1-30.

128. Cook G.C. Comparison of intestinal absorption rates of glycine and glycylglycine in man and the effect of glucose in the perfusing fluid. Clin. Sci., 1972, vol. 43, Ж 3, p. 443-453.

129. Cori C.F. The fate of sugar in the animal body. I. The rate of absorption of hexoses and pentoses from the intestinal tract. J. Biol. Chem., 1925, vol. 66, Ж 2,p. 691-715.

130. Corring 1'. Ine adaptation of digestive enzymes to the diet: its physiological significance. Reprod. Hutr. Develop., 1980, vol. 20 (4B), p. 1217-1235.

131. Corring T., Saucier R. Secretion pancreatique sur porefistule adaptation a la teneur en proteines au regime.-Ann. Biol. Anim. Biochim. Biophys., 1972, vol. 12, p. 223-241.

132. Craft I.L. , Geddes D., Hyde G.w. , i'/ise I., Matthews D.Li. 1

133. Absorption and malabsorption of glycine and glycine peptides in man. Gut, 1968, vol. 9, К 4, p. 425-437.

134. Crane R.K. Absorption of sugars. In: Handbook of physiology, sec. 6, Alimentary canal, vol. III. Intestinal absorption. Washington, 1968a, p. 1323-1351'

135. С r an e 2. H. Digestive-absorptive surface of the small bowel mucosa. Ann. Rev. Lied., 1968b, vol. 19, p. 57-60.

136. Creamer Б. Intestinal structure in relation to absorption. -In: Intestinal absorption. Biomembranes, vol. 4A. Plenum Press, London New York, 1974, p. 1-42.

137. Critchley D.R., Howell K.E., Eichholz A. Solubilization ofbrush borders of hamster small intestine and fractionation of some of the components. Biochim. biophys. acta, 1975, vol. 394, p. 361-376.

138. Dagorn J.C., Lahaie R.G. Dietary regulation of pancreaticprotein synthesis. I. Rapid and specific modulation of enzyme synthesis by changes in dietary composition. -Biochim. biophys. acta, 1961, vol. b54, p. 111-118.

139. Dal Eorgo G., Harrison P.O., McGinnis J. A method for cannulat-ing of pancreatic ducts in young chicks. Poultry Sci., 1968, vol. 47, IT 6, p. 1818-1820.

140. Das i,i. , Radhakrishnan A.ti. Glycyl-L-leucine, a versatile "master" dipeptidase from monkey small intestine. Biochem. J., 1973, vol. 135, p. 609-615.

141. Das Li. , Radhakrishnan A.IT. Studies on the uptake of glycyl-1-leucine by strips of monkey small intestine. Indian J. Biochem. Biophys., 1974, vol. 11, N 1, p. 12-16.

142. Das Ы. , Radhakrishnan A.IT. Studies on a wide-spectrum intestinal dipeptide uptake system in the monkey and in the human. -Biochem. J., 1975, vol. 146, p. 133-139*

143. Das 1,1., Radhakrishnan A.K. Role of peptidases and peptide transport in the intestinal absorption of proteins. World Rev. Kutr. Diet, 1976, vol. 24, p. 58-07.

144. De Laey P. Die Ivlembranverdauung der Starke. 6. Liitt. Die Bin-dung der Amylase auf der Intestinal-Iviucosa. Die ITah-rung, 1967, Bd. 11, N 1, S. 17-30.

145. De Laey P. Adsorption of pancreatic enzyme on the intestinal membrane. In: Protides of the biological fluids, (Proc. 15th Coll. Bruges, 1967, Elsevier, Amsterdam London - IJew York, 1968, p. 159-165.

146. Daren J.J. Development of intestinal structure and function. -In: Handbook of physiology, sec. 6. Alimentary canal, vol. III. Intestinal absorption, Washington, 1968, p. 1099-1123.

147. Desnuelle P. Pancreatic lipase. In: Handbook of Physiology, sec. 6. Alimentary canal, vol. V. Bile digestion, ruminal physiology, ,/ashington, 1968, p. 2629-2636.

148. Desnuelle P. The tenth sir Hans Krebs lecture. Intestinal andrenal aminopeptidase: a model of a transmembrane protein.-Eur. J. Biochem., 1979, vol. 101, p. 1-11.

149. Desnuelle P., Reboud J.P., Ben A.Bdeljill A. Influence of the composition of the diet on the enzyme content of rat pancreas. In Renck A.V.S., Cameron M.P. the exocrine pancreas, normal and abnormal functions. Giba fund. Syrnp., 1962, London, p. 90-114.

150. Doell R.G. , ivretchmer N. Intestinal invertase: precious development of activity after injection on hydrocortisone.-Science, 1964, vol. 143, N 3601, p. 42-47.

151. Donlon J., Eottrell P.P. quantitative determination of intestinal peptide hydrolase activity using L-amino acid oxidase. -Glin. chiin. acta, 1971, vol. 33, p. 34-5.

152. Donlon J., Pottrell P.P. Studies of substrate specifities andsubcellular location of multiple forms of peptide hydrolases in guinea-pig intestinal mucosa. Gomp. Biochem. Physiol., 1972, vol. 4IB, p. 181-193.

153. Doumeng Gh., Llaroux Б. Aminotripeptidase, a cytosol enzyme from rabbit intestinal mucosa. Biochem. J., 1979, vol. 177,p. 801-808.

154. Dubois R.S., Kumar V., Ilunka S. Dietary regulation of intestinal glycyl-proline hydrolase. Gastroenterology, 1972, vol. 64, I\T 4, p. 745.

155. Eichholz A. i Studies on the organization of the brush border inintestinal epithelial cells. V. Subfractionation of enzymatic activities of microvillous membrane. Biochim. bio-phys. acta, 1968, vol. 163, p. 101-107

156. Fabry P. On the mechanism of the adaptation of pancreaticenzymes to dietary composition. Feeding patterns and nutritional adaptations. Prague, 1969.

157. Ferraci H., Liaroux S. Rabbit intestinal aminopeptidase purification and molecular properties. Biochim. biophys. acta, 1980, vol. 399, p. 448-463.

158. Fern ill.В. , Ilider R.C., London D.R. The sites of hydrolysis of • dipeptides containing leucine and glycine by rat jejunum in vitro. Biochem. J., 1969, vol. 114, IT 4, p.835-861.

159. Forstner G.G. Incorporation of (1-"^C) glucosamine by rat intestinal microvillus membrane. Biochim. biophys. acta, 1968, vol. 150, p. 736-738.

160. Forstner G.G. Surface sugar in the intestine. Amer. J. Med. Sci., 1969, vol. 258, p. 172-180.

161. Forstner G.G. Release of intestinal surface-membrane glycoproteins associated with enzyme activity by brief digestion with papain. Biochem. J., 1971, vol. 121, p. 781

162. Fottrell P.F., Klane R., Parley J. Comparison of peptide hydrolases from brush border and cytosol fractions of rat and guinea-pig intestinal mucosa. Сотр. Biochem. Physiol., 1972, vol. 43, N 1, p. 129-135.

163. Friedman F.K., Beychok S. Probes of subunit assembley and re-constitution pathways in multisubunit proteins. In: Ann. Rev. Biochem., 1979, vol. 48, p. 217-250.

164. Fujita M., Ohta H., Uezato T. Characterization of brush borders purified in iso-osmotic medium and microvillar membranes subfractionated from mouse small intestine. Biochem. J., 1981, vol. 196, p. 669-673.

165. Fujita IvI. , Parsons D.S. , '.Vo jnarowska F. Gligopeptidases ofbrush border membranes of rat small intestinal mucosal cells. J. Physiol., 1972, vol. 227, N 2, p.377-394.

166. Ganapathy V., Radhakrishnan A.N. Interaction of amino acids with gly-L-leu hydrolysis and transport in monkey small intestine. Clin. Sci., 1979» vol. 37, LT 6, p. 521-527.

167. Ghosh LI.K. , Fishman Л.Н. L-phenylalanine inhibition of ratintestinal alkaline phosphatase: a homosteric phenomenon.-Arch. Biochem. Biophys., 1968, vol. 126, LT 2, p.700-706.

168. Goldberg D.Li., Campbell R. , Roy A.D. Binding of trypsin and chymotrypsin by human intestinal mucosa. Biochim. biophys. acta, 1968, vol. 167, IT 3, p. 6I3-6I5.

169. Goldberg D.Li., Campbell R., Roy A.D. Studies on the bindingof trypsin and chymotrypsin by human intestinal mucosa. -Scand. J. Gastroenterol., 1969, vol. 4, p. 217-226.

170. Goldberg D.Li. , Campbell R. , Roy A.D. The interaction of trypsin and chymotrypsin with intestinal cells in man and several animal species. Сотр. Biochem. Physiol., 1971, vol. 38В, p. 697-706.

171. Gorvel J.P. , Benajiba A. , Liaroux S. Purification and characterization of the rabbit intestinal brush border aminopeptidase. Biochim. biophys. acta, 1980, vol. 615, N 1, p. 271-275.

172. Gray G.IVI. , Santiago H.A. Intestinal surface amino-oligopeptid-ases. 1. Isolation of two weight isomers and their sub-units from rat brush border. J. Biol. Cliem. , 1977, vol. 2p2, N 14, p. 4922-4928.

173. Gruzdkov A.A., Gusev V.Li. , Ugolev A.M. The three compartamental enzyme system of the enterocybe relating to its digestive and barrier functions. In: Adv. Physiol. Sci., vol. 29. Gastrointestinal defence mechanisms, 1981, Budapest, p. 503-314.

174. Guandalini S., Rubino A. Development of dipeptide transport in the intestinal mucosa of rabbits. Pediatr. Res., 1982, vol. 16, p. 99-103.

175. Harrison D.D., Webster H.L. Proximal to distal variations inenzymes of the rat intestine. Biochim. biophys. acta, 1971, vol. 244, p. 432-436.

176. Hartman P.A., Hays V.W., Baker R.O. , Neagl L.W., Catron D.V. Digestive enzyme development in the young pig. J. Anim. Sci., 1961, vol. 20, p. 114-23.

177. Heizer w.D. , Isselbacher K.J. Intestinal peptide hydrolases:differences between brush border and cytoplasmic enzymes. -Glin. Research Proc., 1970, vol. 18, N 2, p. 382.

178. Heizer tf/.D., Isselbacher K.J. Intestinal peptide hydrolases: differences between brush border and cytoplasmic enzymes. Clin. Res., 1980, vol. 18, p. 382.

179. Heizer v/.D., Shoaf C.R. Brush-border peptide hydrolases: isolation of two enzymes with different substrate specifities. Gastroenterology, 1972, vol. 62, Ж 4,p. 7ь2.

180. Hill K.J. The physiology of digestion. In: Physiology and biochemistry of the domestic fowl. Academic Press, New York - London, 1971, p. 25-49.

181. Hill K.J. The anatomy and general physiology of the alimentary tract. In: Digestion in the Fowl, ed. by А.Ж.Norman, B.H.Freeman, Edinburgh, 1976, p. 3-24.

182. Himukai H., Kano-Kameyama A., Hoshi T. Mechanisms of inhibition of glycyl-glycine transport by glycyl-L-leucine and L-leucine in guinea pig small intestine. Biochim. biophys. acta, 1982, vol. 687, p. 170-178.

183. Himukai II. , Suzuki Y., Hoslti T. Differences in characteristics between glycine and glycylglycine transport in guinea pig small intestine. Jap. J. Physiol., 1978, vol. 28,p. 499-ЗЮ.

184. Holt J.H., Miller D. The intestinal brush border as a digestive surface. Localization of aminopeptidase and phosphatase in the mucosal epithelial cell. J. Labor. Clin. Med., 19ol, vol. 3d, p. 827.

185. Huang Y. , Ehee 3.G., Chock P.B. Subunit cooperation and enzymatic catalysis. In: Annual Review of Biochemistry.1982, vol. 31, p. 935-973

186. Huber J.Т., Jacobson H.L. , Allen R.S. Digestive enzyme activities in the young calf. J. Dairy Sci., 1961, vol. 44, p. 1494-1501.

187. Johnson C.F. Hamster intestinal brush border surface particles and their function. Feder. Proc., 1969, vol. 28, p. 26-29

188. Josefsson L., Lindberg T. Intestinal aipeptidases. I. Spectro-photometric determination and characterization of di-peptidase activity in pig intestinal mucosa. Biochim. biophys. acta, 1965 a,vol. 105, H 1, p. 149-161.

189. Josefsson L., Lindberg T. Intestinal aipeptidases. II. Distribution of dipeptidases in the small intestine of the pig. Biochim. biophys. acta, 1965b,vol. 105, 1, p. 162-166.

190. Josefsson L., Lindberg T. Intestinal dipeptidases. III. Characterization and determination of dipeptidase activity in adult rat intestinal mucosa. Acta physiol. scand., 196b, vol. 66, p. 410-418.

191. Josefsson L. , Lindberg T. Intestinal dipeptidases. IX. Studies on dipeptidases of human intestinal mucosa. Acta chem. scand., 1967, vol. 21, p. 1965.

192. Josefsson L. , SjHstrtJm H. Intestinal dipeptidases. IV. Studies on the release and subcellular distribution of intestinal dipeptidases of the mucosa cells of the pig. Acta physiol. scand., 1966, vol. 67, p. 27-35

193. Kania R.J. , Santiago П.А., Gray G.lVi. Intestinal cell surface peptidase: potential role in protein digestion. -Gastroenterol., 1972, vol. 62, N 4, p. 7Ь8.

194. Kania R.K. , Santiago IT.A., Gray G.Li. Intestinal surface amino-oligopeptidases. II. Substrate kinetics and topography of the active site. J. Biol. Chem., 1977, vol. 252, К 14, p. 4929-4954.

195. Kenneth «7. , Smiths on, Gray G.Li. Intestinal assimilation of a tetrapeptide in the rat obligate function of brush border aminopeptidase. J. Clin. Invest., 1977, vol. 60, p. b65-674.

196. Kenny A.J. , Booth A.G. Liicrovilli. Their ultras true ture,enzymology and molecular organization. In: Essays in biochemistry, ed. by Campbell, Dickens, 1978, vol. 14, p. 1-44.

197. Kim Y.S. Intestinal mucosal hydrolysis of proteins and peptides.-In: Peptide transport and hydrolysis. Ciba Pound. Syrnp. Elsevier/Excerpta Liedica /North-Holland. 1977, p. 151-171.

198. Kim Y.S. , Birtwhistle ii/. , Kim Y.7/. Peptide hydrolases in the brush border and soluble fractions of small intestinal mucosa of rat and man. J. Clin. Invest., 1972, vol. 51, IT 6, p. 1419-1450.

199. Kim Y.S., Birtwhistle '.7., Kim Y.17., Sleisenger Li.PI. Intestinal peptide hydrolases: multiple forms of enzymes in cytoplasm and brush border. Gastroenterol., 1971, vol. 60, N 4, p. 685.

200. Kim Y.S., Brophy E.J. Rat intestinal brush border membrane peptidases. I. Solubilization, purification and physicochemical joroperties of two different forms of the enzyme. J. Biol. Chem., 1976, vol. 251, N H, P. 3199-5205.

201. Kim Y.S. , Brophу E.J. Effect of amino acids on purifiedrat intestinal brush border membrane aminooligopeptid-ase. Gastroenterol., 1979, vol. 76, IT 1, p. 82-87.

202. Kim Y.S., Kim Y. </., Gaines H.D. , Sleisenger I.I.H. Zymogram studies of human intestinal brush border and cytoplasmic peptidases. Gut, 1979, vol. 20, N 11, p. 987-991.

203. Kim Y.S., Kim Y.V/. , Sleisenger M.H. Studies on the projjerties of peptide hydrolases in the brush border and soluble fractions of small intestinal mucosa of rat and man. -Biochim. biophys. acta, 1974, vol. 370, p. 283-296.

204. Kimura T. , Kato T. , Tsukazaki K. , Yoshida A. Effect of diets supplemented with amino acids and intestinal sucrose and leucine aminopeptidase activities in rats. -J. Kutr.' Sci. Vitaminol. , 1979, vol. 25, IT 3, p. 195-204.

205. Koldovsky 0. Development of the functions of the small intestine in mammals and man. Karger, Basel Hew York, 1969.

206. Koshland D.E. , Heme thy G. , Filmer D. -Comparison of e:xperimental binding data and theoretical models in proteins containing subunits. Biochemistry, 1966, vol. 5, H 1, p. 365-385.

207. Krzysik B.A., Adibi S.A. Cytoplasmic dij)ex)tidase activities of kidney, ileum, Jejunum, liver, muscle and blood. -Arner. J. Physiol., 1977, vol. 233, 6, p. E450-E456.

208. Kushak R., Ozols A., Antonyuk Z. , Gailite B., Tarvid I.,

209. Maestracci D., Schmitz J., Preiser H., Crane R.K. Proteins and glycoproteins of the human intestinal brush border membrane. Biochim. biophys. acta, 1975, vol. 323, p. 113-124.

210. Maroux S. Peptide transport and hydrolysis. Ciba Pound. Symp.

211. Elsevier/Exceprta Medica/ITorth-Holland, 1977» Discussion, P. 193.

212. Maroux S., Louvard D. On the hydrophobic part of aminox^eptidase and maltases which bind the enzyme to the intestinal brush border membrane. Biochim. biophys. acta, 1976, vol. 419, p. 189-195.

213. Maroux S., Louvard D., Baratti J. The aminopeptidase from hogintestinal brush border. Biochim. biophys. acta, 1973, vol. 321, p. 282-295.

214. Misch 'D.i'J. , Giebel P.E. , Faust R.G. Intestinal microvilli:response to feeding and fasting. Eur. J. Cell Biol., 1980, vol. 21, p. 269-279.

215. Ionod J. , Changeux J.P. , Jacob P. Allosteric proteins and cellular control systems. J. Mol. Biol., 1963, vol. 6, II 4, p. 306-329.

216. Ionod J. , iVyman J. , Changeux J.P. On the nature of allosteric transitions: a i^lausible model. J. Hoi. Biol., 1965, vol. 12, II 1, p. 88-118.

217. Moore G.J. , Benoiton N.L. Effect of modifiers on the hydrolysis of basic and neutral peptides by carboxypeptidase B. -Can. J. Biochem., 1975, vol. 53, N 7, p. 747-757

218. Morita A., Bella A., Kim J.S. Purification, characterizationand biosynthesis of rat intestinal brush border dipeptidyl-aminopeptidase IV (DAP). Gastroenterol., 1980, vol.78, N 5, part 2, p. 1226.

219. Nelson N. A photometric adaptation of the Somogoji method for the determination of glucose. J. Biol. Ghem., 1944, vol. 153, p. 375.

220. Newey H., Smyth D.H. The intestinal absorption of some dipeptides.-J. Physiol., 1939, vol. 145, p. 48-56.

221. Newey H., Smyth D.H. Intracellular hydrolysis of dipeptides during intestinal absorption. J. Physiol., I960, vol. 152, p. 367-380.

222. Nicholson J.A., McCarthy D.M., Kim Y. The response of rat intestinal brush border and cytosol peptide hydrolase activities to variation in dietary protein content. -J. Glin. Invest., 1974, vol. 54, N 4, p. 890-898.

223. Nicholson J.A. , Peters P.J. Subcellular distribution of di-, tri-, tetra- and pentapeptidase in human jejunum. -Gut, 1977, vol. 18, N 11, p. A960-A961.

224. Noack R. Biochemische, ernHhrungsphysiologische und klinischchemische Untersuchungen tlber Verdauungsenzyme der Dttnn-darmmucosa. Habilita^ionsschrift Humboldt-Uhiversit^t, Berlin, 1969.

225. Noack R'. , Friedrich M. , Proll J. , Ulilig 2Г. Verdauung und Resorption von Proteinen. Die Nahrung, 1975, Bd. 19, N 9/10, S. 391-901.

226. Noack R. , Koldovsky 0., Friedricli Ы., Heringova A., Jirsova V., Schenk G. Proteolytic and peptidase activi ties of the jejunum and ileum of the rat during postnatal development. Biochem. J., 1966, vol. 100, p. 775-778.

227. Noack R. , I.Iooz R. , Friedrich LI. Solubilisierung mucosaler

228. Enzyme des Diinndarins der Ratte, -В КН.* Теоретическиеи прикладные аспекты мембранного пищеварения. Тез.докладов 2-го Всесоюзн. симп. Рига, "Зинатне",1978, с. 166-167.

229. Noren 0., Sj'OstrSm Н. The insertion of pig microvillus arnino125peptidase into the membrane as probed by ( J) Jodo-naphthylazide. Eur. J. Biochem., 1980, vol. 104,p. 25-51.

230. Noren 0., Sj'BstrcJm H. , Svensson В., Jeppesen L. , Staun M. , Josefsson L. Intestinal brush border peptidases. -In: Peptide transport and hydrolysis. Ciba Found. Symp. 50, ASP-Amsterdam Oxford - New York, 1977, p. 117-191.

231. O'^uinn G., Fottrell P.F. The relationship between peptide hydrolases of cytoplasm and brush borders of guinea pig small intestinal mucosa. Biochem. Soc. Transactions, 1975, vol. 3, N 6, p. 1219-1221.

232. Ozols A.J. , Sheshukova T.A. Effects of di- and monosaccharides on the proximo-distal gradient of carbohydrase activity of chick small intestine. Сотр. Physiol. Biochem., 1983, vol. 74A, N 3, p. 761-764. .

233. Parsons D.S. Summary. In: transport across intestine. Ed. Ъу iV. L. Bur land, P.D.Samuels. Churchill Livingstone, London, 1972, p. 233.

234. Path ale jR.H. , Liahmood A. , Dud-ija P.K. , Subrahmanyam D. Intestinal brush border membrane structure and function: effect of early postnatal undernutrition. Pediat. Pes., 1981, vol. 13, N 15, p. 112-114.

235. Pattus P., Verger Ii., Desmiella P. Comparative study of the interactions of the trypsin and detergent form of the intestinal aminopeptidase with liposomes. Biochim. Biophys. Pes., 1976, vol. 69, IT 3, p. 718-723.

236. Pelot D. , Grossman LI. J. Distribution ana fate of pancreatic enzymes in small intestine of the rat. Amer. J. Physiol., 1962, vol. 202, IT 2, p. 285-288.

237. Peptide transport in bacteria and mammalian gut. Ciba Pound.

238. Symp. 4. Associated Sci. Publishers, Amsterdam, 1972.

239. Peptide transport and hydrolysis. Ciba Pound. Sympi 50. Elsevier/Excerpt a Lie die a/Forth Holland, 1977.

240. Peters T.J. The subcellular localization of di- and tripeptide hydrolase activity in guinea-pig small intestine. -Biochem. J., 1970, vol. 120, p. 195-203.

241. Peters T.J. Subcellular fractionation of the enterocyte with special reference to peptide hydrolases. In: Peptide transport in bacteria and mammalian gut. Ciba Pound. Symp. 4. Amsterdam, 1972, p. 108-121.

242. Peters T.J. The subcellular localization of intestinal peptide hydrolases. In: Peptide transport in protein nutrition. Amsterdam Oxford - New York, 1975, p. 243-267.

243. Peters T.J. , Donlon J., Fottreii P.P. The subcellular localization and specifity of intestinal peptide hydrolases. -In: Transport across the intestine, ed. by W.L.Burland. Churchill Livingstone, Edinburgh London, 1972, p. 153-167.

244. Peters T.J., LlcMahon M.T. The absorption of glycine and glycine oligopeptides by the rat. Glin. Sci., 1970, vol. 39, p. 811-821.

245. Peters T.J. , Llodha K. , LlcMahon M.T. The digestion and absorption of glycine oligopeptides. Gut, 1969, vol. 10, Ж 12, P. 1955.

246. Piggott C.O., Fottreii P.F. Purification and characterization from guinea pig intestinal mucosa of two peptide hydrolases which preferentially hydrolyse dipeptides. -Biochim. biophys. acta, 1975, vol. 391, p. 403-409.

247. Piatt B.S. Digestion in infancy. Feder. Proc., 1961, vol. 20, part III, suppl. 7, p. 188-195.

248. Poort S.R. , Poort C. Effect of diet composition on the protein synthetic pattern of the rat pancreas after a feeding period of five days. Biochim. biophys. acta, 1980, vol. 606, p. 138-147.

249. Porteous J.'vV. , Clark B. The isolation and characterization ofsubcellular' components of the epithelial cells of rabbit small intestine. Biochem. J., 1965, vol. 7, N 96, p. 159-171.

250. Radhakrishnan A.N. Intestinal dipeptidases and dipeptide transport in the monkey and in man. In: Peptide transport and hydrolysis. Ciba Found. Symp. 50, ASP-Amsterdam -Oxford - New York, 1977, p. 37-52.

251. Raul F., Kedinger M., Simon P.Li., Grenier J.F., Naffen K.

252. Comparative in vivo and in vitro effect of mono- and disaccharides on intestinal brush border enzyme activities in suckling rats. Biol. Neonate, 1981, vol. 39, p. 200-207.

253. Revel J., Ito S. The specificity of cell surfaces, 1967.

254. Reynolds J.A. Solubilization and characterization of membraneproteins. In: Membrane receptors. Methods for purification and characterization. Receptors and recognition, 1982, series B. vol. 11, p. 33-60.

255. Rhodes J.B., Folscroft J. Hydrolysis of small gliadin peptidesby hog intestinal microvillus membranes. Gastroenterol., 1972, vol. 62, p. 865.

256. Robertson J.D. Origin of the unit membrane concept. Proto-plasma, 1967, vol. 63, N 1-3, p. 218-245.

257. Robinson G.B. The distribution of peptidases in subcellularfractions from the mucosa of the small intestine of the rat. Biochem. J., 1963, vol. 88, p. 162-168.

258. Rohtman J.E., Lenard J. Membrane assymetry. Science, 1977, vol. 195, p. 743-753.

259. Rosenzweig N.S., Herman R.H. Diet and disaccharidases. -Amer. J. Clin. Nutr., 1969, vol. 22, p. 99-202.

260. Rosenzweig U.S., Herman R.H. , Stifel F.B. Dietgrcy regulation.of small intestinal enzyme activity in man. Amer. J. Glin. ITutr., 1971, vol. 24, p. 65-69.

261. Rosenzweig U.S., Stifel F.B. , Herman R.H. , Lakim D. The dietary regulation of the glycolytic enzymes. II. Adaptive changes in human jejunum. Biochim. biophys. acta,1968, vol. 170, p. 228-234.

262. Rubino A. , Pierro IVI. , Vetrella Li. , Provenzale L., Auricchio 3. L-glutaminyl-L-proline dipeptide hydrolase activity in the human small intestine. Biochim. biophys. acta,1969, vol. 191, p. 663-667.

263. Ruhlen J., Rhodes J.B. Hydrolysis of related tri- and dipeptides by hamster microvillus membranes. Gastroenterol. , 1974, vol. 66, IT 4, p. A209-863.

264. Saidel L.J., Edelstein J. Hydrolysis and absorption of proline dipeptides across the wall of sacs prepared from everted rat intestine. Biochim. biophys. acta, 1974, vol. 167, p. 75-80.

265. Saito Ы. Daily rhythmic changes in brush border enzymes ofthe small intestine and kidney in rat. Biochim. biophys. acta, 1972, vol. 286, p. 212-215.

266. Saito Li. , Suda M. Effect of diet on enzymes of the brush border of the small intestine and kidney of rats. J. ITutr. Sci. Vitaminol., 1975a,vol. 21, p. 207-215

267. Saito Li., Suda LI. Effect of diet on digestiire and absorptive functions of rat small intestine. J. ITutr. Sci. Vitaminol., 1975b,vol. 21, p. 313-315.

268. Sanford P.A., Smyth D.H. The effect of fasting on hexose transfer in rat intestine. J. Physiol., 1974, vol. 239, IT 2, p. 285-299.

269. Saunders S.J., Isselbacher K.J. Intestinal absorption of amino acids. Gastroenterol., 1966, vol. 50, p. 586-595*

270. Scharrer E. Adaptation of intestinal amino acid transport. -Experientia, 1972, vol. 15, IT 3, p. 267.

271. Schiller G.I.i. , Tal In Huang P.D. , Heizer II.D. Isolation and characterization of four peptide hydrolases from the cytosol of rat intestinal mucosa. Gastroenterol., 1977, vol. 72, p. 93-Ю0.

272. Schimke R.T. Control of enzyme levels in mammalian tissues. -Adv. Enzymol., 1973, vol. 37, p. 135-187.

273. Schimke R.T. Protein degradation in vivo and its regulation. -Circulat. Res., 1976, vol. 38, N 5, suppl. 1, p.131-134, Discuss, p. 134-137.

274. Scott J., Maze M., Peters T.J. Prednizolone enhances amino-peptidase turnover in adult rat small intestine. -Biochim. biophys. acta, 1982, vol. 719, p. 464-473.

275. Shoaf C.R., Berko R.M., Heizer V/.D. Isolation and characterization of four peptide hydrolases from the brush borddr of rat intestinal mucosa. Biochim. biophys. acta, 1976, vol. 445, p. 694-719.

276. Shoaf C.R. , Isselbacher K.J. , Heizer »V.D. Rapid colorimetricassay for intestinal peptide hydrolases. Anal. Biochem., 1974, vol. 61, p. 72-85.

277. Seetharam В., Radiiakrishnan A.IT. Intestinal glycosidases.

278. Sugar malabsorption. J. Sci. Ind. Res., 1971, vol. 30, IT 12, p. 689-702.

279. Siddons R.C., Effect of diet on disaccharidase activity in the chick. Brit. J. ITutr. , 1972, vol. 27, p. 343-352.

280. Sigrist-iTelson K. Dipeptide transport in isolated intestinal brush border membrane. Biochim. biophys. acta, 1975> vol. 394, p. 220-226.

281. Silk D.B.A., Perrett D. , v/ebb Joan P.V/., Clark M.L. Absorption of two tripeptides by the human small intestine: a study using a perfusion technique. Clin. Sci. Mol. Med., 1974, vol. 46, IT 3, P. 393-402.

282. Singer S.J. The molecular organization of membranes. Ann. Rev. Biochem., 1974, vol. 43, p. 805-833

283. Singer S.J. The proteins of membranes. In: Colloid and interface sciences, vol. I. Plenary and invited lectures. Academic Press, New York - San-Francisko - London, 1977» p. 477-^83.

284. SjOstrOm H. , ITore.n 0. Structural properties of pig intestinal prolin clipeptidase. Biochim. "biophys. acta, 1974, vol. 359, p. 177-185.

285. SjOstrOm H. , IToren 0., Jeppesen L., Staun M. , Svensson В.,

286. Christiansen L. Purification of different amphiphilic forms of a microvillus aminopeptidase from pig small intestine using immunoadsorbent chromatography. Eur. J. Biochem., 1978, vol. 88, p. 503-5U.

287. SjGstrUm H. , lioren 0. , Josefsson L. Purification and specificity of pig intestinal prolidase. Biochim. biophys. acta,1973, vol. 327, p. 457-470.

288. Snook J.T. Adaptive and non-adaptive changes in digestive enzyme capacity influencing digestive function. Feder. Proc.,1974, vol. 33, p. 88-93.

289. Snook J.T., Meyer J.H. Responses of digestive enzymes to dietary protein. J. ITutr. , 1964, vol. 82, p. 409-414.

290. Skia.n D. Distribution and absorption of casein at different dietary levels in the chick. Effect of fatty acid and bile acid absorption. J. ITutr. , 1980, vol. 110, IT 5,p. 9o9-995.

291. Skovbjerg H. Immunoelectrophoretic studies on human small intestinal brush border proteins the longitudinal distribution of peptidases and disaccharidases. - Clin. Qhim. acta, 1981, vol. 112, IT 2, p. 205-212.

292. Solimano C., Burgess E.A., Levin B. Protein-caloric malnutrition: effect of deficient diets on enzyme levels of jejunal mucosa of rats. Brit. J. i-Tutr. , 1967, vol. 21, p. 55-68.

293. Svensson Б. , Danielsen M. , Staun Li. , Jeppesen L. , IToren 0. ,

294. SjBstrttmH. An amphiphilic form of dipeptidyl peptidase ly-from pig small intestinal brush border membrane.

295. Purification by immunоadsorbent chromatography and some properties. Eur. J. Biochem., 1978, vol. 90, IT 3,p. 489-498.

296. Take sue Y., ITishi Y. Topographical studies on the intestinal microvillous leucine. -Jb-naphthylamidase on the outer membrane surface. J. Membrane Biol., 1978, vol. 39,p. 285-296.

297. Teipel J., ICoshland D.E. The significance of intermediatory plateau regions in enzyme saturation curves. Biochemistry, 1969, vol. 8, IT 11, p. 4656-4663.

298. Toinkins G.M. , Gelehrter T.D. The present status of genetic regulation by hormones. In: Biological actions of hormones, vol. 2, ed. by Litwak. Academy Press, New York, 1972, p. 1-20.

299. Ugoiev A.M. , Egorova 7.7. , Jezuitova 1T.H. , Mitjusova IT.I.i.

300. Die regulatorischen Eigenschaften der Darenzyme hUherer und niederer Tiere als Adaptationsmechanismus der 7er-dauung und der Resorption. Die Nahrung, 1979b,Bd. 23, IT 4, S. 371-579.

301. Ugolev A.Li., Jesuitova N.N. , Timofeeva H.LI., Fediushina J.LI. Location of hydrolysis of certain disaccharides and peptides in the small intestine. Nature, 1964, vol. 202, IT 4954, p. 807-809

302. Ugolev A.LI. , Liityushova IT. lvl. , Egorova V.V. , Gozite 1.1С.,

303. Koltushkina G.G. Catalytic and regulatory properties of the triton and trypsin forms of the brush border hydrolases. Gut, 1979c,vol. 20, py 737-742.

304. Yamada K., Bustamante S., Koldovsky 0. Time- and dose-dependency of intestinal lactase activity in adult rat on starch. -Biochim. biophys. acta, 1981a,vol. 676, p. 108-112.

305. Yamada K., Bustamante S., Koldovsky 0. Dietary-induced rapid increase of rat jejunal sucrase and lactase activity in all regions of the villus. FEBS Letters, 1981b, vol. 129, IT 1, p. 89-92.

306. Yasuinoto K., Sugiyama K. Circadian rhythmicity of glycyl-Lleucine absorption mechanism in rat small intestine. -Agr. Biol. Ghem. , 1981, vol. 45, IT 6, p. 1393-1401.

307. Yeh K.Y. , Lloog F. Development of the small intestine in thehypophysectomized rat. I. Growth, histology and activity of alkaline phosphatase, maltase and sucrase. -Developm. Biol., 1975a, vol. 47, p. 156-172.

308. Yeh K.Y., Lloog F. Development of the small intestine in the hypophysectomized rat. II. Influence of cortisone, thyroxine, growth hormone and prolactin. Developm. Biol., 1975b, vol. 47, p. 173-184.

309. Yeh K.Y. , Lloog F. Influence of thyroid and adrenal glands on the growth of the intestine of the suckling rat, and on the development of intestinal alkaline phosphatase and disaccharidase activities. J. Exp. Zool., 1977, vol. 200, IT 3, p. 337-347.

310. Zeman F.J., Fratzke LI.L. Protein, dipeptiae and amino acid absorption in the young of protein-deprived rats. -Pediat. Res., 1977, vol. 11, p. 972-977.