Характеристика эндофитсодержащих образцов овсяницы луговой (Festuca pratensis huds.) из коллекции ВИР им. Н.И. Вавилова тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.12, кандидат биологических наук Шеленга, Татьяна Васильевна

• Шеленга, Татьяна Васильевна
• кандидат биологических наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Шеленга, Татьяна Васильевна

Введение.

Глава 1. Литературный обзор.

1.1.Многолетние кормовые злаковые травы и их грибы- симбионты.

1.2.Методы обнаружения грибов-эндофитов.

1.3. История изучения грибов-эндофитов мполетних злаковых трав.

1 АТаксоиомическое положение грибов-эндофитов злаковых трав.

1.5. Эволюция грибов-эидофитов рода Neotyphodium.{ Gams W.A., Schardl C.L, Christensen M.J.).

1.6. Особенности роста и развития грибов рода Neotyphodium.

1.7. Проблема токсикозов травоядных животных.

1.7.1. Эрготалкалоиды.

1.7.2. Индол-детерпены.

1.7.3. Насыщенные аминопирролизидины.

1.7.4. Методы исследования алкалоидов.

1.8. Преимущества «эндофитинфицированных» трав.

1.8.1. Повышение засухоустойчивости злаковых трав.

1.8.2. Устойчивость «эндофитинфицированных» трав к отрицательным температурам.

1.8.3. Влияние грибов-эндофитов на вегетационное развитие «эндофитинфицированных» растений.

1.8.4. Влияние грибов-эндофитов на число побегов и рост корней.

1.8.5. Влияние грибов-эндофитов на эффективность усвоения углеводов.

1.8.6. Накопление зеленой массы у «эндофитинфицированных» растений.

1.8.7. Влияние грибов-эндофитов на семенную продуктивность многолетних кормовых злаковых трав.

1.8.8. Влияние грибов-эндофитов на устойчивость «эндофитинфицированных» растений злаковых трав к нематодам, иасекомым-вредителям и патогенам.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Характеристика эндофитсодержащих образцов овсяницы луговой (Festuca pratensis huds.) из коллекции ВИР им. Н.И. Вавилова»

Актуальность темы. Получение новых высокоурожайных и устойчивых к биотическим и абиотическим стрессам сортов многолетних кормовых злаковых трав остается важным направлением селекции. Для этих целей за рубежом уже два десятилетия используется естественная симбиотическая ассоциация трав с грибами-эндофитами рода Neotyphodium (=Acremonium) семейства Clavicipitaceae [1, 8, 22, 60, 73].

По литературным данным 95 % образцов овсяницы луговой (Festuca pratensis Huds.) и тростпиковидной (Farundinaceae Schreb.) в США, более 60 % в Новой Зеландии и до 52 % в Восточной Европе содержат мицелий гриба рода Neotyphodium [22, 28, 36, 44, 55, 67, 78]. В симбиоз с эндофитами вступают злаковые травы, которые согласно классификации Н. Н. Цвелева [18] являются представителями главным образом следующих триб семейства злаков (Poaceae Barnh.): Triticeae Dum. (роды Elymus L. и Hystrix Moench), Bromeae Dum. (род Bromus L.), Aveneae Dum. (роды Agrostis L., Calamagrostis Adans.j, Phleeae Dum. (род Phleum L.), Poeae R. Br. (роды Dactylis L., Festuca L., Lolium L. и Poa L.). Наиболее широко распространенными и практически востребованными в качестве сельскохозяйственных культур являются овсяницы луговая (F. pratensis) и тростниковидная (F. arundinaceae) и плевел многолетний (Lolium perenne L.) [22, 27, 67, 78].

В результате симбиоза многолетних злаковых трав и грибов-эндофитов значительно повышается устойчивость растений-хозяев к биотическим и абиотическим стрессовым факторам, в частности к различным насекомым-вредителям (личинка аргентинского долгоносика, злаковая тля, полосатая хлебная блошка и др.) и температурным колебаниям. Кроме того, инфицированные эндофитными грибами злаковые травы обнаруживают повышенную семенную продуктивность, ускорение колошения, а также увеличение выхода зеленой массы растений. Существует мнение, что грибы-эндофиты повышают способность своих растений-хозяев к адаптации их к неблагоприятным условиям окружающей среды, в том числе влияя на степень генетического разнообразия растений-хозяев [52, 59]. Наряду с улучшением ряда хозяйственно-ценных признаков, эти симбионты могут придавать растениям-хозяевам и отрицательные свойства. Грибы-эндофиты синтезируют ряд алкалоидов, которые могут вызвать интоксикацию у животных [20, 58, 70, 86].

Следовательно, одним из перспективных направлений работы с мировым генофондом многолетних кормовых злаковых трав является исследование их симбиотических отношений с грибами-эндофитами рода Neotyphodium. Важным представляется выяснение механизмов повышения устойчивости растений-хозяев к неблагоприятным факторам среды и увеличения их продуктивности, а также сведение к минимуму отрицательных проявлений, обусловленных присутствием симбиотических грибов и их жизнедеятельностью [28, 29, 38, 52, 53,59].

Целью Целью настоящей работы явилось изучение образцов коллекции овсяницы луговой, содержащих грибы-эндофиты рода Neotyphodium, для дальнейшего использования эидофит-содержащих образцов в селекции этой культуры, (далее говоря о присутствии мицелия грибов-эидофитов в растении мы будем иногда использовать термин -«инфекция».)

В связи с этим мы поставили перед собой следующие задачи:

• выделить из коллекции образцы, содержащие (Е+ образцы) и не содержащие (Е-образцы) грибы-эндофиты рода Neotyphodium;

• изучить коллекцию овсяницы луговой по признаку присутствие (Е+ образцы) или отсутствие (Е- образцы) грибов-эндофитов рода Neotyphodium;

• осуществить видовую идентификацию грибов-эндофитов в образцах овсяницы луговой;

• исследовать в Е+ образцах содержание и состав алкалоидов;

• исследовать содержание и состав алкалоидов в семенах Е+ и Е- образцов овсяницы луговой;

• выяснить степень влияния грибов-эндофитов на морозостойкость растения-хозяина овсяницы луговой;

• изучить полиморфизм запасных белков — проламинов у Е+ и Е- образцов. Научная новизна. В нашей стране систематические исследования симбиотических отношений многолетних кормовых злаковых трав и их грибных симбионтов не проводились.

Впервые образцы овсяницы луговой (F'. pratensis) из коллекции отдела генетических ресурсов кормовых растений ВИР были изучены нами на наличие грибов-эндофитов. Проведена идентификация гриба-эндофита, обнаруженного в образцах семян овсяницы луговой. Дана характеристика Е+ образцов овсяницы луговой из коллекции ВИР по биохимическим показателям (содержанию и составу алкалоидов), связанным с жизнедеятельностью грибов-эндофитов рода Neotyphodium. На примере овсяницы луговой, было изучено их влияние на адаптивные способности растений-хозяев (морозостойкость). Изучен полиморфизм запасных белков - проламинов у Е+ и Е- образцов.

Практическая значимость работы. В результате проведенного исследования в коллекции овсяницы луговой отдела генетических ресурсов кормовых культур ВИР были определены Е+ образцы. У Е+ образцов в незначительных количествах были найдены алкалоиды опасные для травоядных животных. В выявленных Е+ образцах было подтверждено отсутствие алкалоидов, опасных для травоядных животных. Подтверждено положительное влияние грибов-эндофитов па адаптивные способности растений-хозяев (в частности, на морозостойкость).

Подтверждены преимущества Е+ образцов овсяницы луговой из коллекции ВИР по сравнению с образцами, не имеющих грибов-симбионтов. В Е+ образцах овсяницы луговой обнаружено присутствие алкалоида лолина, влияющего на устойчивость растений-хозяев насекомым-вредителям. Е+ образцы овсяницы луговой оказались более устойчивыми к низким температурам по сравнению с образцами, не содержащими гриб-эндофит. Намечены перспективы использования молекулярных подходов к оценке адаптивных свойств Е+ популяций.

Проведенные исследования свидетельствуют в пользу актуальности и целесообразности изучения имеющегося в России генофонда многолетних злаковых трав в аспекте их симбиотических отношений с грибами-эндофитами в связи с перспективами более широкого использования этого феномена в отечественной селекции, которая должна быть направлена на использование потенциала микробно-растительпых взаимодействий в том числе на поиск оптимальных сочетаний генотипов гриба и растения хозяина.

Апробация работы. Результаты работы доложены на научно-практических конференциях аспирантов и молодых ученых ВНИИР им. Н.И. Вавилова в 2001 и 2003 гг. и на Международной научно-практической конференции (Санкт-Петербург, 2001, 2002), на Международном Микробиологическом конгрессе (Санкт-Петербург, 2003), на IX съезде Русского ботанического общества (Новосибирск, 2003) на конференции молодых ученых (Санкт-Петербург, 2004), конференции молодых ученых (Пушкин, 2005).

Публикации. Опубликовано 7 печатных работ, 2 в печати.

Заключение диссертации по теме «Физиология и биохимия растений», Шеленга, Татьяна Васильевна

Выводы.

1. В семенах 53 из 270 изученных образцов овсяницы луговой из коллекции ВИР был идентифицирован гриб-эндофит, относящийся к виду N. uncinatum.

2. Эндофтисодержащие образцы овсяницы луговой в основном были представлены в коллекции дикорастущими оригинальными образцами.

3. Эндофтисодержащие образцы в отличие от «неинфицированных» содержали алкалоид лолин (защищающий растение-хозяина от насекомых вредителей) в количестве от 0,11мкг до 2,32 мкг на один грамм сухого веса семян.

4. Эндофтисодержащие образцы характеризовались большей устойчивостью к отрицательным температурам. Достоверное влияние на уровень морозостойкости оказывал только один фактор, а именно - присутствие гриба-эндофита в растении (F=102, 94; Р=0,05).

5. «Эпдофитинфицированные» образцы овсяницы луговой из коллекции ВИР содержали токсичные для травоядных млекопитающих алкалоиды лолитрем В и эрговалин в количествах, не превышающих ПДУ.

6. Эндофитная «инфекция» оказывала влияние на характер и уровень внутрипопуляционного генетического полиморфизма образцов овсяницы, выявляемого по спектрам проламина.

7. Подтверждено, что для поддержания жизнеспособности гриба-эндофита в образцах семян необходимо соблюдение определенных условий их хранения.

8. Результаты проведенных исследований позволяют сделать вывод о том, что инфированный грибами-эндофитами генофонд овсяницы луговой может служить исходным материалом для селекции овсяницы луговой на повышение устойчивости к отрицательным температурам и насекомым-вредителям.

Заключение.

В результате исследований установлено, что в мировой коллекции овсяницы луговой ВИР имеются образцы, содержащие гриб-эндофит рода Neotyphodium, который был идентифицирован при помощи разных видов микроскопии как N. uncinatum. Из числа проанализированных доля Е+ образцов составляла 20 %. Большая часть Е+ образцов была представлена дикорастущими оригинальными образцами Российского происхождения, произрастающими в природных зонах тайги, леса и лесостепи. Все изученные Е+ образцы были разделены по интенсивности «инфекции» на три основных группы: с низкими, средними и высокими показателями «инфицированности». Основную часть Е+ образцов составляли образцы со средними и высокими показателями «инфицированности».

По результатам анализа овсяницы луговой на устойчивость к отрицательным температурам Е+ образцы были поделены па три группы у первой группы образцов LT50 была в диапазоне (0°С —10°С), у второй группы образцы LT50 была в диапазоне (-10°С и ниже). Для того чтобы определить характер влияния происхождения образцов и уровня их «инфицированности» на устойчивость Е+ образцов к отрицательным температурам была отдельно выделена группа образцов, устойчивых к температуре ниже -15°С. и ниже. Среди образцов, обладающих хорошей устойчивостью к отрицательным температурам (от -10°С и ниже) преобладали Е+ образцы со средними и высокими показателями «инфицированности». Третью группу образцов (LT50 ниже -15°С) в основном составляли образцы с высоким уровнем «инфицированности», т.е была отмечена взаимосвязь между показателями морозостойкости и уровнем «инфицированности» Е+ образцов.

В результате анализа алкалоидов в значительном количестве был обнаружен алкалоид лолин, который присутствовал только в Е+ образцах. Содержание лолина оказалось связанным с устойчивостью Е+ образцов к отрицательным температурам.

Полученные данные подтвердили, что по содержанию лолина и по показателям устойчивости к отрицательным температурам Е+ образцы превосходят Е- образцы овсяницы луговой.

В результате проведения электрофоретического анализа проламипов Е+ и Е- образцов овсяницы луговой выявлены типы спектров характерные для этих двух групп образцов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Шеленга, Татьяна Васильевна, 2006 год

1. Билай В.И. Основы общей микологии // Киев. 1989. 573с.

2. Выскребенцева Э.И., Шугаев А.Г., Алексидзе Г.Я. Физиология растений // Москва.1990. Т. 37, № 5. С.318.

3. Зауралов О.А. Генетическая природа адаптации растений. Экспериментальный мутагенез в интродукции, акклиматизации и селекции // Саранск. 1987. 391 с.

4. Идентификация сортов и регистрация генофонда культурных растений по белкам семян // Ред. В. Г. Конарева. Санкт-Петербург. 2000. 386 с.

5. Косулина Л.Г., Луценко Э.К., Аксенова В.А. Физиология устойчивости растений к неблагоприятным факторам среды// Ростов-на-Дону. 1993. 440 с.

6. Крепе Е.М. Липиды клеточных мембран // Ленинград. 1981. 244 с.

7. Лутова Л.А., Проворов Н.А., Тиходеев О.Н., Тихонович И.А. Генетика развития растения // Санкт-Петербург. 2000. 387 с.

8. Мюллер.Э.Ф., Леффлер В.М. Микология // Москва. 1995. 557 с.

9. Перчук И.Н. Полиморфизм проламина и его использование в идентификации и регистрации генетических ресурсов овсяиицы //Автореф. канд. биол. наук. Санкт-Петербург. 1992. 18 с.

10. Петровская-Баранова Л.Я. Физиология адаптации и интродукции растений // Москва. 1983.451 с.

11. Полевой В.В. Физиология растений // Москва. 1989.464 с.

12. Проворов Н.А. Тихонович И.А. Эколого-генетические принципы селекции растений на повышение эффективности взаимодействия с микроорганизмами // Сельскохозяйственная биология. 2003. №3. С.11-25.

13. Сопииа Н.Ф., Карасев Г.С., Трунова Т.И. Адаптация растений к низким температурам // Физиология растений. Т. 41, № 4. 1994. С.546-551.

14. Трунова Т.И. О механизме адаптации растений к низким температурам. Условия среды и продуктивность растений // Иркутск. 1985. 370 с.

15. Трунова Т.И. Методы определения морозостойкости растений // Москва. 1967. 557 с.

16. Туманов И.И. Физиология закаливания и морозостойкости растений // Москва. 1979. 350 с.

17. Хочачка П.Н., Сомеро Дж.И. Биохимическая адаптация // Москва. 1988. 568 с.

18. Цвелев Н. Н. Злаки СССР // Ленинград. 1976. 988 с.

19. Шеленга Т.В. Влияние грибов рода Neotyphodium на хозяйственно-ценные признаки овсяницы луговой //Научн.-инф. Бюлл. ВНИИР им. Н.И.Вавилова. Санкт-Петербург. 2002. № 241. С.7-9.

20. Элберсгейм П.Б., Дарвилл А.Г. Олигосахарины// Москва. 1985. 123 с.

21. Aldrich C.G., Paterson J.A., Tate J.L., Kerley M.S. The effects of endophyte-infected Tall Fescue consumption on diet utilization and thermal regulation in cattle // Anim. Sci. 1993. V.71, №3. P.164-170.

22. Arechavaleta M.D., Bacon C. W., Hoveland C., Raddiff D.E. Effect of the tall fescue endophyte on plant response to environmental stress // Agron. J. 1989. V.81. P.83-90.

23. Blankenship J.D., Spiering M.J., Wilkinson H.H., Fannin F.F., Bush L.P., Schardl C.L. Production of loline alkaloids by the grass endophyte, Neotyphodium uncinatum, in defined media// Phytochemistry. 2001. V.58, №3. P.395-401.

24. Berde B.L., Schild H.O. Ergot Alkaloids and related compounds // New York. 1978. 474 p.

25. Bond J.P., Powell J.В., Undersander D.J. Forage composition and growth and physiological characteristics of cattle grazing several varieties of tall fescue during summer conditions // Anim. Sci. 1999. V.59, № 3. P.584-593.

26. Bray E.A. Molecular responses to water deficit // Plant physiol. 1993. V.103, № 4. P.1035-1040.

27. Bultman T.L., White F.L., Bowdish T.I., Welch A.M., Johnston J.K. Mutalistic transfer of Epichloe spermatia by Phobia flies // Mycology. 1995. V.87, №2. P.182-189.

28. Bush L.P., Wilkinson H.H., Schardl C.L. Bioprotective Alkaloids of Grass Fungal Endophyte Symbioses // Plant Physiol. 1997. V.l 14, № 1. P.l-7.

29. Christensen M.J. Host specificity of grass endophytes / Forage grasses / Tsukuba. Japan. 2000. P. 244-246.

30. Christensen M.J., Easton H.S., Simpson W.R., Tapper B.A. Occurrence of the fugal endophyte Neotyphodium coenophialum in leaf blade of tall fescue and implications for stock health // N. Z. J. Agric. Res. 1998. V.41. P.595-602.

31. Christensen M.J., Hopcroft D.H., Rowan D.D, Tapper B.A. Conidial morphology, alkaloid production, and host specificity of Acremonium uncinatum, an endophyte of Festucae pratensis / Acremonium/Grass Interaction // New York. USA. 1993. P. 385-387.

32. Christensen M.J., Latch G.C. Variation among isolates of Acremonium endophytes {A.coenophialum and possibly A.typhinum) from tall fescue (F.arundinaceae) // Mycol. Res. 1991. V.95,№9. P.l 123-1126.

33. Christensen M.J., Latch G.C., Tapper B.A. Variation within isolates of Acremonium endophytes from perennial ryegrasses // Mycol. Res. 1991. V.95, №8. P.918-923.

34. Christensen M.J., Leuchtmann AH., Rowan D.D., Tapper B.A. Taxonomy of Acremonium endophytes of tall fescue (Festuca arundinacea), meadow fescue (Festuca pratensis), and perennial rye-grass (Loliumperenne) II Mycol. Res. 1993. V.97, №9. P.1083-1092.

35. Christensen M.J., Simpson W.R., Samarrai T.A1. Infection of tall fescue and perennial ryegrass plants by combination of different Neptyphodium endophytes // Mycol. Res. 2000. V.104, №8. P.974-978.

36. Chung K.-R., Schardl C.L. Sexual cycle and horizontal transmission of the grass symbiont Epichloe typhina // Mycology. 1997. V.57, №4. P. 1035-1042.

37. Collet M.A., Bradshow R.E., Scott D.B. A mutualistic fungal symbiotic of perennial ryegrass contains two different pyr4 genes, both expressing orotidine-5'-monophoshate decarboxylase//Genetics. 1995. V.158. P.31-39.

38. Cross D.L., Redmond L.M., Strickland J.R. Equine Fescue toxicosis: signs and solutions // Anim.Sci. 1995. V.73, №2. P.899-908.

39. Dahlman D.L., Eichenseer H., Siegel M.R. Chemical perspectives on endophyte-grass interactions and their implications to insect herbivory / Endophyte-grass interactions // New York. USA. 1991. P.227-252.

40. Dice L.R. Measures of the amount of ecologic association between species // Ecology. 1945. V. 26. P. 297-302.

41. Davies J. I., Soveng R. J. Phylogenetyc structure in the family Clavicipitaceae as inferred from chloroplast DNA restriction site variation // Am. Bot. 1993. V.80 P.1444-1454.

42. Gallanger R.T,.Hawkes A.D,.Stewart J.M. Rapid Determination of the neurotoxin Lolitrem В in perennial ryegrass by High-performance Liquid Chromatography with Fluorescence detection // Chrom. 1984. V.32. P.217-226.

43. Gams W.A. Cephalosporium like Hyphomycetes // Stuttgart. 1971. 410 p.

44. Ganley A.R., Scott B.X. Extraordinary ribosomal spacer length heterogeneity in a Neotyphodium endophyte hybrid: implication for concerted evolution // Genetics. 1998. V.150. P.1625-1637.

45. Garner G.B., Rottinghaus G.E., Cornell C.N., Testereci H.Y. Chemistry of compounds associated with endophyte/grass interaction: Ergovaline- and ergopeptine-related alkaloids //

46. Agric. Ecosyst. & Environ. 1993. V.44. P.65.

47. Glenn A.E., Bacon C.W., Price R., Hanlin R.T. Molecular phylogeny of Acremonium and its taxonomic implication // Mycology. 1996. V.88,№4. P.396-383.

48. Gusta L.V., Chen T.T. Freezing tolerance test // Plant Physiol. 1983. V.73. P.71-75.

49. Gwinn K.D., Collins-Shepard M.H., Reddick B.B. Tissue Print- Immunoblot an Accurate Method for the Detection of Acremonium coenophialum in Tall Fescue // Phytopathology. 1991. V. 81, №7. P.747-748.

50. Gwinn K.D., Friborg H.A., Waller J.C. Changes in Neotyphodium coenophialum infestations levels in Tall Fescue pastures due to different grazing pressures // Crop Sci. 1998. V.38. P.201-204.

51. Gwinn K.D., Gavin A.M. Relationship between endophyte infection level of tall festuca lots an Rhizoctinia zeae seedling disease // Plant. Dis. 1992. V.76, №3. P.911-914.

52. Hill N.S, Belesky D.P., Stringer W.C. Competitiveness of Tall Fescue as influenced by Acremonium coenophialum И Crop Sci. 1991. V.31. P.185-190.

53. Hill N. S., Rottinghaus G.E., Agee C.S., Schultz L. M. Simplified Sample Preparation for HPLS Analysis of Ergovaline in Tall Fescue // Crop Sci. 1993. V. 33. P.331-333.

54. Hill N.S., Stringer W.C., Rottinghaus G.E., Belesky D.P, Parrot W.A, Pope D.D. Growth, Morphological and Chemical Component Responses of Tall Fescue to Acremonium coenophialum II Crop Sci. 1990. V. 30. P.156-161.

55. Hill N.S., Studemann J.A., Ware G.O., Petersen J.C. Pasture Sampling Requirement for Near Infrared Reflectance Spectroscopy Estimates of Botanical Composition // Crop Sci. 1989. V.29. P.774-777.

56. Holder T.L., West C.P. and ot. Incidence and viability of Acremonium endophytes in tall fescue and meadow fescue plant introductions // Crop Sci. 1994. V.34. P.252-254.

57. Hoveland C.S., Schmidt S.P., King C.C. and ot. Steer performance and association of Acremonium coenophialum fungal endophyte on tall fescue pasture // Agronomy. 1983. V.75, №1. P.821-824.

58. Johnson-Cicalese J., Seeks M.E. Cross species inoculation of chewing's and strong creeping red fescues with fungal endophytes // Crop Sci. 2000. V.40. P. 1485-1489.

59. Joost R.E. Acremonium in Fescue and Ryegrass: Boon or Bane? A Review // Anim. Sci. 1995. V.73, №l.P.881-888.

60. Joost R.E., Rottinghaus G.E. Quantification of Ergovaline in Tall Fescue by near Infrared Reflectance Spectroscopy // Crop Sci. 1997. V. 37. P.281-284.

61. Justus M.D., White L.K., Hartman Т.О. Levels and tissue distribution of loline alkaloids inendophyte-infected Festuca pratensis II Phytochemitry. 1997. V.44, №1. P.l 51-57.

62. Karnovsky M.J. A formaldehyde-glyteraldehyde fixative of high osmolality for use in electron microscopy // Cell. Biol. 1965. V.27. P.137-138.

63. Kennedy C.W., Bush L.P. Effect on environmental and management factors on the accumulation of N-acetyl and N-formyl loline alkaloids in tall Fescue II Crop Sci. 1983. V.23. P.547-552.

64. Kieckhefer W.E., Petroski R.E., Powell R.J. Naturally occurring and synthetic loline alkaloid derivatives: insect feeding behavior modification and toxicity // Entomol. Sci. 1991. V.26. P.122-129.

65. Koga H., Kimigafukuro Т., Tsukiboshi Т., Uematsu T. Incidence of endophytic fungi in perennial ryegrass in Japan // Ann. Phytopathol. Soc. Jap. 1993. V.59. P. 180-184.

66. Kuldau G.A., Tsai H.-F., Schardl C.L. Genome size of Epichloe species and anamorphic hybrids // Mycology. 1999. V.91. P.776-782.

67. Lane G.A.,Tapper B.A., Christencen M.J., Latch G.C. Occurrence of extreme alkaloid levels in endophyte-infected perennial ryegrass, tall fescue, and meadow fescue / Plenum press «Neotyphodium/Grass interactions» //New York. USA. 1997. P. 435-437.

68. Latch G.C., Christensen M.J. Artificial infection of grass with endophytes // Am. Appl. Biol. 1985. V.107.P.17-24.

69. Leuchtmann A.B., Schardl L.C., Siegel M.R. Sexual compatibility and taxonomy of new species of Epichloe symbiotic with fine fescue grasses // Mycology. 1994. V.86, №6. P.802-812.

70. Lewis G.C. Significance of endophyte toxicosis and current practices in dealing with the problem in Europe / «Neotyphodium/Grass interactions» // New York. USA. 1997. P. 234236.

71. Lyons P.C., Plattner R.D., Bacon C.W. Occurrence of Peptide and Clavine Ergot Alkaloids in Tall Fescue Grass // Sci. 1986. V.232. P.487-489.

72. Mica V.I., Bumenri J.K. Define of endophyte viability during seed storage // Herbage Seed // Germany. 1995. P. 154-156.

73. Mohr M.M., Meyer W.A., Mansue C., Incidence of Neotyphodium endophyte in seed lots of cultivars and selections of the 2001 national tall fescue test / Turf grasses // New Jercey. USA. 2002. V.34. P. 259-268.

74. Moon C.D., Tapper B.A., Scott B.B. Identification of Epichloe Endophytes in plants by a micro satellite-based PCR fingerprinting assay automated analysis // Appl. and envir. Micr. 1999. V.65, №3. P.1268-1279.

75. Moubarak Ali S., Piper Ed.L., West, C.P., Johnson Z.J. Interaction of Purified Ergovaline from Endophyte-Infected Tall Fescue with Synaptosomal ATPase Enzyme System // Agr. Food Chem. 1993. V.41. P.407-410.

76. Munday-Finch S.C., Wilkins A.L., Miles C.O., Tomoda H., Omura S. Isolation and structure elucidation of a possible biosynthetic precursor of the lolitrem family of tremorgenic mycotoxins // Agr. & Food Chem. 1997. V.45. V. 199-204.

77. Nelson L.R., Evers G.W., Growdon J., Ward S.l. Effect of endophyte on seed weight, germination, tillering, biomass, heading date and forage yield of annual rye grass / Herbage Seed//Germany. 1995. P. 312-317.

78. Nemoto N., Myazawa S., Kume H.A. Observation method of freezing dry to fungi // Technic. Res. Conf. Med. and Biol. Electron. Microscopy. 1992. V.6. P.78-79.

79. Panaccione D.G., Johnson R.D., Wang J. Elimination of ergovaline from a grass-Neotyphodium endophyte symbiosis by genetic modification of the endophyte // Plant Biol. 2001. V.98, №22. P. 12820-12825.

80. Paterson John, Forchrio Chris, Larson Brian. The effects of fescue toxicosis on cattle productivity //Anim. Sci. 1995. V.12,№2. P.889-898.

81. Petrroski R.J., Powell R.J. Preparative separation of complex alkaloid mixture by highspeed countercurrent chromatography // Am. Chem. Soc. Symp. Series. 1991. №2. P.426-449.

82. Popay A.G., Townsend R.G., Fletcher L.R. The effect of endophyte (Neotyphodium uncinatum) in meadow fescue on grub larvae / New Zealand Plant protection // New Zealand. 2003. P. 235-240.

83. Pope D.D., Hill N.S., Effects of various culture media, antibiotics and carbon sources on growth parameters of Acremonium coenophialum the fungal endophyte of fall fescue // Mycology. 1991. V.83, № 1. P. 110-115.

84. Porter J.K. Analysis of endophyte toxins: Fescue and other grasses toxic to livestock // Anim. Sci. 1995. V.73, №2. P.871-880.

85. Porter J.K., Stuedemann J.A., Thompson F.N., Lipham L.B. Neuroendocrine measurements in steers grazed on endophyte-infected fescue // Anim. Sci. 1990. V.68 P.3285-3292.

86. Read J.C., Camp B.J. The effect of the fungal endophyte Acremonium coenophialum in fall fescue on animal performance, toxicity and stand maintenance // Agronomy. 1986. V.78,2. P.848-850.

87. Rex.T., Gallagner A.D., Hawkes J. M. Rapid Determination of the Neurotoxin Lolitrem В in Perennial Ryegrass by High- Performance Liquid Chromatography with Fluorescence Detection//Chrom. 1985. V.321. P.217-226.

88. Rise J.S, Pinkerton B.W., Stringer W.C. Seed production in tall fescue affected by fungal endophytes//Crop. Sci. 1998. V.30. P.1303 -1305.

89. Roberts C.A., Joost R.E., Rottinghaus G.E. Quantification of Ergovaline in Tall Fescue by near infrared reflectance spectroscopy // Crop Sci. 1997. V.37. P.281-284.

90. Roberts C.A., Marek S.M., Wang Lei, Karr A.L. Determination of Chitinase Activity in T.F. by near Infrared Reflectance Spectroscopy // Crop Sci. 1994. V.34. P. 1070-1073.

91. Rolston M.P., Rowarth J.S. Aspects of endophyte in ryegrass (Lolium perenne) seed production / Herbage Seed // Germany. 1995. P. 433-437.

92. Ronald D.P., Yates S.G., Porter J.K. Quadruple mass Spectrometry/Mass Spectrometry of Ergot Cycle Alkaloids // Agr. Food Chem. 1983. V.31. P.785-789.

93. Rowan D.D., Latch G.C. Utilization of endophyte-infected perennial ryegrasses for increased insect resistance / Biotechnology of Endophytic Fungi of grasses // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. P. 278-281.

94. Saha D.C,. Jacson M.A., Johnson J.M. A Rapid Staining Method for Detection of Endophytic Fungi in Turf and Forage Grasses // Phytopathology. 1988. V.78, №2. P.237-239.

95. Sakai A., Larcher W.K. Frost survival of plants / Responses and adaptation to freezing stress // Berlin. Germany. 1987. P. 230-233.

96. Schardl C.L., Leuchtmann A.O., Chung K.-R., Penny D., Siegel M.R. Co evolution by common descent of fungal symbionts (Epichloe spp.) and grass hosts // Mol. Biol. Evol. 1997. V.12.P.96-104.

97. Schardl C.L., Phillips T.D. Protective grass endophytes plant disease // Phytopathology. 1997. V.81,№5. P.430-438.

98. Schoberlein W., Eggestein St., Pfannmoller M. Effects of endophyte infected varieties of Festuca pratensis on seed production / Herbage. Seed // Germany. 1995. P.438-442.

99. Scott В., Young C., Mcmillan L. Molecular biology of Epihloe endophyte toxin biosynthesis // Grassland Res. and practice series. 1997. V.45. P.77-102.

100. Shelby R.A. Improved Method of Analysis for Ergovaline in Tall Fescue by High-Performance Liquid Chromatography //Agr. Food Chem. 1997. V.45. P.1797-1800.

101. Shelby R. A., Dalrymple L.W. Incidence and distribution of Tall Fescue endophyte in the US // Plant Dis. 1987. V.71, №9. P.783-786.

102. Shelly G.Y., Powell R.G. Analysis of Ergopeptine Alkaloids in Endophite-Infected Tall Fescue //Agric. Food Chem. 1988. V.36. P.337-340.

103. Shelly G.Y., Plattner R.D., Garner G.B. Detection of Ergopeptine Alkaloids in EI, Toxic KY-31 T.F. by Mass Spectrometry // Agric. Food Chem. 1985. V.33. P.719-722.

104. Sosic H.G. Biosynthesis and physiology of ergot alkaloids // Fungal Biotech. 1992. V.12. P.123-155

105. Spiering M.J., Wilkinson H.H., Blankenship J.D., Schardl C.L. Expressed sequence tags and genes associated with loline alkaloid expression by the fungal endophyte Neotyphodium uncinatum // Fungal Genet Biol. 2002. V.36, №3. P.242-254.

106. Statistica for Windows Computer program manual.// Tulsa. USA. 1995. 350p.

107. TePaske M.R., Powell R.G. Analyses of endophyte-infected grasses for the presence of loline-type and ergot-type alkaloids //Agr. Food Chem. 1993. V.41. P.2299-2303.

108. TePaske M.R., Powell R.G., Petroski R.J. Quantitative analyses of bovine urine and blood plasma for loline alkaloids // Agr. Food Chem. 1993. V.41. P.231-234.

109. Ward J.H. Hierarhical grouping to optimize an objective function // Am. Stat. Assoc. 1963. V. 58. P. 36-244.

110. West C.P., Izecor E., Oosterhuis D.M.,Robbins R.T. The effect of Acremonium coenophialum on the growth and nematode infestation of tall fescue // Plant and Soil. 1988. V.112. P.3-6.

111. White J.F., Endophyte-host associations in grasses. XVII. Ecological and physiological features characterizing Epichloe typhina and some anamorphic varieties in

112. England // Mycology. 1997. V.84, №3. P.431-441.

113. White J.F., Cole Jr.T., Cole G.T. Endophyte-host associations in forage grasses. Distribution of fungal endophytes in some species of Lolium and Festuca II Mycology. 1985. V.77,№2. P.323-327.

114. White J.F., Martin T.T., Gabral D. Endophite-host association in grasses. Rr. Conidia formation by Acremonium endophytes on the phylloplanes of Agrostis hiemalis and Poa rigidifolia И Mycology. 1996. V.88. P.174-178.

115. Wilkinson H., Scharld C. The evolution of mutualism in grass-endophyte associations / Grass/Endophyte association // New York. USA. 1997. P. 13-23.

116. Wilson A.D., Clement S.L., Survey and Detection of Endophytic Fungi in Lolium Germ Plasm by Direct Staining and Aphid Assays // Plant Dis. 1991. V.2, №1. P.169-173.

117. Yates L., Breen J. Assay alkaloids production of Acremonium endophyte I I Ann. Rev. J. Entomol. & Phytopath. 1990. V. 39. P.401-423.

118. Yates S.G., Petroski R.J., Powell R.G. Analysis alkaloids in endophyte-infected tall fescue by capillary gas chromatography // Agr. Food Chem. 1990. V.38. P. 182.

119. Yue Q., Wang C., Gianfagna T.J., Meyer W.A. Volatile compounds of endophyte-free and infected tall fescue (Festuca arundinaceae Schreb) // Phytochemistry. 2001. V.58, №3. P.935-941.