Характеристика биологического действия Nigella sativa, Salvia officinalis и Trichoderma на живые системы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, кандидат наук Салли Мохамед Абделазиз Эльшафей

• Салли Мохамед Абделазиз Эльшафей
• кандидат наук
• 2015

Оглавление диссертации кандидат наук Салли Мохамед Абделазиз Эльшафей

ОГЛАВЛЕНИЕ

Стр.

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Характеристика N. sativa L

1.1.1. Химический состав N. sativa L

1.1.2. Целебные свойства N. sativa L

1.1.2.1. Противоопухолевое действие

1.1.2.1.1. Механизмы противоопухолевого действия

1.1.2.2. Антимикробные свойства

1.1.2.3. Противовоспалительные свойства

1.2. Характеристика S. officinalis L

1.2.1. Компонентный состав S. officinalis L

1.2.2. Лечебные свойства и применение S. officinalis L

1.2.2.1. S. officinalis как антиоксидантное средство

1.2.2.2. Противоопухолевая действие S. officinalis

1.2.2.3. Антимикробное действие S. officinalis

1.3. Грибы рода Trichoderma

1.3.1. Общая характеристика грибы рода Trichoderma

1.3.2. Химический состав метаболитов Trichoderma

1.3.3. Применение метаболитов Trichoderma

1.3.4.Противоопухолевое и противовоспалительное действия Trichoderma. 48 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Объекты исследований

2.1.1. Растительные препараты

2.1.2. Штаммы Trichoderma

2.1.3. Клеточные линии человека

2.1.4. Подопытные животные (сток мышей CD-I)

2.1.5. Патогенные и фитопатогенные грибы

2.1.6. Раствор тетрахлорметана

2.1.7. Семена кукурузы

2.2. Методы исследований

2.2.1. Определения синтеза микотоксинов Т. asperelliim 551

2.2.2. Определение активности лектинов у Т. asperelliim 551

2.2.3. Анализ жизнеспособности неперерожденных и раковых клеток (Hek, HeLa и MCF-7)

2.2.4. Цитотоксический анализ

2.2.5. Изучение изменения морфологии неперерожденных и раковых клеток (Hek, HeLa и MCF-7)

2.2.6.ТМКЕ-анализ мембранного потенциала митохондрий неперерожденных и раковых

2.2.7. Изучение влияния масел N. sativa, S. officinalis и метаболитов Т. asperelliun 551 на физические, биохимические, гематологические и гистологические параметры мышей стока CD-I получавших тетрахлорметан

2.2.7.1. Биохимические параметры мышей стока CD-I получавших тетрахлорметан

2.2.7.2. Гематологические параметры мышей стока CD-I получавших тетрахлорметан

2.2.7.3. Гистологические параметры мышей стока CD-I получавших тетрахлорметан

2.2.8. Определение удельной скорости роста патогенных и фитопатогенных грибов

2.2.9. Определение содержания фенолов в культуральном фильтрате патогенных и фитопатогенных грибов и растениях кукурузы

2.2.10. Определение содержания флавоноидов в культуральном фильтрате патогенных и фитопатогенных грибов и растениях кукурузы

2.2.11. Определение количества белков в культуральном фильтрате патогенных и фитопатогенных грибов и растениях кукурузы

2.2.12. Определение содержания танинов в культуральном фильтрате патогенных и фитопатогенных грибов и растениях кукурузы

2.2.13. Определение антиоксидантной активности в культуральном фильтрате патогенных и фитопатогенных грибов и растениях кукурузы

2.2.14. Определение ксиланазной активности в культуральном фильтрате патогенных и фитопатогенных грибов

2.2.15. Определение целлюлазной активности в культуральном фильтрате патогенных и фитопатогенных грибов

2.2.16. Определение амилазной активности в культуральном фильтрате патогенных и фитопатогенных грибов

2.2.17. Хроматографический анализ культуральной жидкости патогенных

и фитопатогенных грибов

2.2.18. Приготовление буферного экстракта из отходов производства фитопрепарата из N. Sativa

2.2.19. Приготовление водного экстракта S. officinalis из отходов сухого сбора

2.2.20. Приготовление культуральной жидкости Т. asperelliun 551

2.2.21. Фитотоксичность метаболитов N. sativa, S. officinalis и Т. asperelliun 551

2.2.22. Получение гомогенатов проростков и корней кукурузы

2.2.23. Статистический анализ

З.РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Сравнительная цитотоксическая активность препаратов на основе S. officinalis и Т. asperellum 551 в отношении неперерожденных и опухолевых клеточных линий Нек 293, HeLa и MCF-7 по сравнению

с известным противоопухолевым препаратом на основе N. sativa

3.1.1. Влияние препаратов на основе S.officinalis и Т. asperellum 551 на жизнеспособности неперерожденных и опухолевых клеток человека

по сравнению с препаратом на основе N. sativa

3.1.2. Определение средних токсических доз препаратов на основе S. officinalis и Т. asperellum 551 в отношении неперерожденных и опухолевых клеток человека по сравнению с N. sativa

3.1.3. Влияние препаратов на основе S. officinalis Т. asperellum 551 на морфологию неперерожденных и опухолевых клеток человека, по сравнению с N. sativa

3.1.4. Влияние препаратов на основе S. offcinalis и Т. asperellum 551 на мембранный потенциал митохондрий неперерожденных и опухолевых клеток человека по сравнению с N. sativa

3.2. Влияние препаратов на основе S. officinalis Т. asperellum 551 на биохимию и морфологию органов лабораторных мышей получавших тетрахлорметан в опытах in vivo по сравнению с N. sativa

3.2.1. Влияние препаратов на основе S.officinalis и Т. asperellum 551 на физические параметры печени и почек мышей, получавших тетрахлорметан по сравнению с N. sativa

3.2.2. Влияние препаратов на основе S.officinalis и Т. asperellum 551 на биохимические параметры печени и почек мышей получавших тетрахлорметан по сравнению с N. sativa

3.2.3. Влияние препаратов на основе масел S. officinalis и Т. asperellum 551 на гематологические параметры мышей получавших тетрахлорметан

по сравнению с N. sativa

3.2.4. Влияние препаратов на основе S. officinalis и Т. asperellum 551 на гистологию печени мышей, получавших тетрахлорметан по сравнению с N. sativa

3.3. фунгистатическая активность препаратов на основе масел N. sativa и S. officinalis по данным изменения физиологических и биохимических параметров в отношении патогенных и фитопатогенных грибов по сравнению с известным фунгицидом на основе Т. asperellum 551

3.3.1. Влияние масел N. sativa и S. officinalis на физиологические параметры патогенных и фитопатогенных грибов по сравнению с влиянием Т. asperellum. 551

3.3.2. Влияние масел N. sativa, S. officinalis на биохимические параметры патогенных и фитопатогенных грибов по сравнению с влиянием Т. asperellum

3.4. Влияние метаболитов N. sativa, S. officinalis на растения в опытах in vitro (фитотоксичность) относительно корней и проростков кукурузы по сравнению с влиянием биопрепарата Т. asperellum с известным ростстимулирующим на кукурузу действием

3.4.1. Влияние метаболитов N. sativa, S. officinalis на физиологические параметры кукурузы по сравнению с влиянием Т. asperellum

3.4.2. Влияние метаболитов N. sativa, S. officinalis на биохимические параметры кукурузы по сравнению с влиянием Т. asperellum

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЧАСТО УПОТРЕБЛЯЕМЫХ АББРЕВИАТУР

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Характеристика биологического действия Nigella sativa, Salvia officinalis и Trichoderma на живые системы»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования. Всемирная организация здравоохранения и Европейский Союз (ЕС) выступают за необходимость выпуска стандартизированных эффективных лекарственных средств природного происхождения. В связи с их большей безопасностью по сравнению с химически синтезированными лекарственными препаратами, для которых характерен риск серьезных побочных эффектов (Лепахин В.К. и др., 2002; Orhan I.E., 2014; Ujvary I., 2014). Показана необходимость расширения не только количества биопрепаратов медицинского назначения на основе растительного и микробного сырья, а также спектра их применения (Алимова Ф.К. и др., 2007; Hyman А.Н., Simons К., 2011; Громовых Т.Н. и др., 2014).

Биопрепараты приобретают большое значение в современном обществе также и для профилактической медицины, т.к. современный фармакологический рынок испытывает недостаток медицинских препаратов с протекторным действием и известным молекулярным механизмом (Вайновская И.Ф., 2011; Исакова А.Л., Прохоров В.Н., 2014; Gupta V.G. et al., 2014).

С древних времен известно, что экстракты лекарственных растений обладают биологической активностью, антибактериальными,

противогрибковыми, антиоксидантными и другими свойствами (Properzi A. et al.,

2013). Одним из широко известных медицинских фитопрепаратов являются препараты на основе черного тмина - Nigella sativa (Zaman R., Aklitar M.S., 2004; Al-Sheddi E.S. et al., 2014) и шалфея - Salvia officinalis (Lima S.F. et al., 2004).

Nigella sativa является одним из традиционно используемых растений для лечения опухолевых заболеваний (Houghton P.J. et al., 1995; Al-Sheddi E.S. et al.,

2014), для поднятия иммунитета, гепатопротекторным действием и др. (AI-Hader A. et al., 1993; El Tahir ICE. et al., 1998). Описано более 19 видов физиологически активных метаболитов этого растения. Тем не менее, многие клинические исследования нуждаются в дальнейшей оценке эффективности и безопасности в терапевтическом применении (LlaiyarajaN., Khanum F., 2010).

Salvia officinalis-растение, хорошо известно своим противовоспалительным, противодиабетическом и антиоксидантным действием. Тем не менее, механизмы действия физиологически активных веществ S.officinalis до настоящего времени не имеют биологического экспериментального подтверждения (Deans S.G., Simpson E.J.M., 2000; Lima S.F. et al., 2004).

Биопрепараты на основе грибов рода Trichoderma выращиваются в промышленных масштабах на отходях растениеводства для применения в промышленности, а таюке в сельском хозяйстве как фунгициды и регуляторы роста растений (Алимова Ф.К. 2005; Громовых Т.И. и др. 2014; Gupta V.G. et al., 2014). Однако в последнее время появились сообщения о возможности применения метаболитов Trichoderma и в медицине (Смирнова И.П. и др., 2005; Schuster А., Schmoll М., 2010; Тухбатова Р.И. и др., 2012).

Перед фармакологией стоит задача изыскание и синтез не только новых лекарственных препаратов, но и расширение спектра применения хорошо известных.

Производство любых биопрепаратов, как правило, сопряжено с накоплением отходов. Согласно современным подходам, производство фитопрепаратов медицинского назначения должно быть также экологически целесообразным. Разработка биологических препаратов на основе отходов производства медицинских фитопрепаратов лишенных побочных эффектов, представляется также важной задачей для сельскохозяйственной биотехнологии (Ткаченко К.Г., 2011; Симчук А.П., 2013).

Степень разработанности темы исследования. Проводимые зарубежные исследования в области производства лекарственных биопрепаратов основаны на сборе биологически безопасного растительного или микробного материала с высокой активностью (Gali-Muhtasib Н. et al., 2004; Lima S.F. 2006; Al-Sheddi E.S. et al., 2014; Gupta V.G. et al., 2014). Разработка диссертационной темы начата на основе предыдущих экспериментальных исследований, проводимых на кафедре биохимии и биотехнологии, Казанского федерального университета (Алимова

Ф.К. и др., 2007; Тазетдинова Д.И., 2008; Абдельрахман A.A., 2011; Тухбатова Р.И. и др., 2012). Показано что биопрепарат Фитотрикс на основе Trichoderma asperelliim может быть использован не только в агробиотехнологии, но и в медицине. Испытаны два вида микромицетов рода Trichoderma. Показано что Trichoderma может использоваться как фунгицид и стимулятор роста кукурузы. Получены предварительные данные о протекторном действии биопрепарата на основе Trichoderma при заболевании печени и почек у мышей, цитотоксическом действие к опухолевым клеткам линии Hela. Отобран наиболее эффективный вид Trichoderma asperelliim 551 (Абдельрахман A.A., 2011). В настоящей работе продолжены исследования по применению метаболитов Trichoderma asperelliim 551 как лекарственного средства с противоопухолевым и гепатопротекторным действием. Исследовалась биологическая активность биопрепаратов на основе S. officinalis и Т. asperelliim 551 в отношении культур неперерожденньтх и раковых клеток, а также лабораторных животных по сравнению с известным противоопухолевым фитопрепаратом на основе N. sativa. Исследовалась фунгистатическая активность фитопрепаратов по отношению патогенных микромицетов по сравнению с известным биофунгицидом на основе Т. asperelliim. Актуальной задачей для изучения является возможность использования отходов производства лекарственных фитопрепаратов в агробиотехнологии для защиты от фитопатогенных грибов и стимуляции роста растений. Рассматривается возможность использования биопрепаратов на основе отходов производств N. sativa и S. officinalis по сравнению с биопрепаратом на основе Т. asperelliim 551 как биофунгицидов и фиторегуляторов.

Цель и задачи исследований. Цель данной работы - расширение спектра применения растительных фитопрепаратов медицинского значения на основе N. Sativa, S. officinalis и отходов их производства, а также биопрепарата на основе Т. asperelliim 551 в медицине и агробиотехнологии. В соответствии с поставленной целью работы решались следующие задачи:

1. Оценить цитотоксическое действие биопрепаратов на основе S. officinalis и Т. asperellitm 551 в отношении клеточных линий Нек 293, Heia и MCF-7 по сравнению с противоопухолевым действием биопрепарата на основе N. sativa.

2. Выявить гепатопротекторное действие S. officinalis и Т. asperellum 551 по изменению физиологических, биохимических, гематологических и гистологических показателей у мышей стока CD-I по сравнению с влиянием N. sativa на фоне воздействия тетрахлорметана (ССЦ).

3. Определить фунгистатически характеристики биопрепаратов на основе N. sativa, S. officinalis по изменению физиологических и биохимических параметров патогенных и фитопатогенных грибов: Aspergillus niger, Aspergillus flavus, Aspergillus awamori и Fusarium oxysporum по сравнению с фунгистатическим действием на основе Т. asperellum 551.

4. Оценить роль экстрактов на основе растительных отходов производства лекарственных масел из N. sativa, S. officinalis в изменении биохимических и биоморфологических характеристик кукурузы по сравнению с влиянием биопрепарата на основе Т. asperellum 551.

Научная новизна работы.

Впервые установлено противоопухолевое, гепатопротекторное и фунгистатическое действия растительного масла S. officinalis. Противоопухолевое и гепатопротекторное действия растительного масла S. officinalis не уступает по эффективности фитопрепарату на основе масел N. sativa, а фунгистатическое действие - биопрепарату на основе Trichoderma.

Впервые установлено фунгистатическое действие масел N. sativa и его безопасность в отношении неперерожденных клеток Нек 293. фунгистатическое действие масел N. sativa превосходит по эффективности известный биофунгицид на основе Т. asperellum 551.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Получены экспериментальные основания для расширения спектра практического применения биопрепаратов на основе N. sativa, S. officinalis и Т. asperellum 551 в медицине и агробиотехнологии.

Цитотоксичность метаболитов Т. asperellum 551 и растительных экстрактов N. sativa и S. officinalis по отношению к линиям раковых клеток указывает на возможность использования этих биологических веществ в поддержке больных с онкологическими заболеваниями. Дешевизна и безопасность производства метаболитов Т. asperellum 551, а также растительных экстрактов является предпосылкой для промышленного производства этих веществ и разработки в дальнейшем противоопухолевых препаратов.

Расширен спектр возможных биопрепаратов с гепатопротекторным действием за счет фитопрепарата на основе S. officinalis и биопрепарата Фитотрикс на основе Trichoderma.

Отходы производства фитопрепарата на основе S. officinalis могут быть использованы в качестве биофунгицидов и стимуляторов роста кукурузы, а масла N. sativa - в производстве биофунгицидов. Результаты работы могут быть использованы в учебном процессе в рамках дисциплин «Биотехнология», «Биологически активные вещества микробного и растительного происхождения» и «Фармакология».

Методология и методы исследования. В рамках диссертационной работы проведены лабораторные эксперименты с использованием следующих объектов:

Лекарственные фитопрепараты - масло черного тмина (N.. sativa), масло шалфея (S. officinalis), водные экстракты из растительных отходов производства фитопрепаратов. Культуральную жидкости T.asperellum 551 готовили согласно технологии производства биопрепарата Фитотрикс ООО НПИ «Биопрепараты». Клеточные линии Hek, HeLa и MCF-7. Здоровые взрослые самцы швейцарских белых мышей стока CD-I на стадии 10-12 недель с массой тела~20 г. Семена

кукурузы сортов Краснодарский 194 MB и Поволжский 188 М. Тетрахлорметан (СС14).

Подготовка объектов исследования.

Клетки Hek, HeLa и МСР-7выращивали на среде Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM). Тетрахлорметан (ССЦ) растворяли в 25 мл оливкового масла до конечной концентрации 20 мг/мл. Мыши были разделены на 11 групп и подвергнуты воздействию ССЦ с последующим воздействием биопрепаратов для выявления гепатопротекторного действия. Штаммы микромицетов A niger, А. flavus, A. awamori 66А и F. oxysponim культивировали на Глюкозо-картофелыюм бульоне. Семена кукурузы использовались для оценки действия водных экстрактов на основе отходов производства масел из N. sativa, S. officinalis по биохимическим и биоморфологические характеристикм.

Цитотоксикологические методы анализа в опытах in vifro и in vivo. Цитотоксическую активность масел N. sativa, S. officinalis и культуральной жидкости Т. asperellum 551 в опытах in vitro по отношению к неперерожденным (Hek) и опухолевым (HeLa и MCF-7) клеточным линиям проводили с помощью метода определения жизнеспособности клеток (Patel S. et al., 2009), МТТ метода (Patel S. et al., 2009), наблюдения за изменениями морфологии клеток (Al-Sheddi E.S. et al., 2014), TMRE-анализа мембранного потенциала митохондрий клеток (Бондарь О.В., 2013). Цитотоксическую активность данных препаратов in vivo в отношении мышей получавших тетрахлорметан определили с помощью физических (Абдельрахман А.А., 2011), гематологических (NseAbasi N. et al., 2014), биохимических (Ryckman С. et al., 2013) и гистологических (Коржевский Д.Э., Гиляров А.В., 2010) параметров.

Микробиологические методы анализа. Синтез микотоксинов T.asperellum 551 определяли методом иммуноферментного анализа (Урусов А.Е., 2012). Для определения активности лектинов у данного штамма использовали реакцию агглютинации эритроцитов человека 1 группы крови (De-Mfsa M.D. et al., 2004).

Антагонистическая активность масел N. sativa, S. officinalis и культуральной жидкости T. asperelliim 551 по отношению к патогенным (A. awamori 66 А, А. flaviis, A niger) и фитопатогенным (F.oxysporum) грибам определяли по изменению удельной скорости роста (Шишаков В.В., 2014), содержанию фенолов, флавоноидов, белков, танинов, антиоксидантной (Makkar Н.Р. et al., 1993; Meda А. et al., 2005; Amin I. et al., 2006; Ianculov I. et al., 2010; Priya M.G. et al., 2011), и ферментативной активности в культуральной жидкости (König HJ. et al., 2006). Хроматографический анализ осуществляли методом гель-фильтрации культуральной жидкости микромицетов на хроматографе ÄKTA™ avant 25.

Фитотоксикологические и биохимические методы анализа растений. Фитотоксичность экстрактов на основе растительных отходов из N. sativa, S. officinalis и культуральной жидкости Т. asperelliim 551 в отношении кукурузы оценивали путем измерения длины корней и проростков (Алимова Ф.К. 2006; Abd El-Rahman A.A. et al., 2012), а также по содержанию фенолов, флавоноидов, белков, танинов и антиоксидантной активности (Makkar Н.Р. et al., 1993; Meda А. et al., 2005; Amin I. et al., 2006; Ianculov I. et al., 2010; Priya M.G. et al., 2011).

Обработка полученных экспериментальных данных, а также оценка значимости полученных результатов были выполнены с использованием стандартного математической статистики пакета программ SPSS версия 17.

Положения, выносимые на защиту:

1. Растительные масла N. sativa, S. officinalis и внеклеточные метаболиты Т. asperelliim 551 оказывают противоопухолевое действие в опытах in vitro и in vivo и не обладают цитотоксической активностью в отношении неперерожденных клеток. Биологические активные экстракты аттенуируют канцерогенную активность тетрахлорметана (ССЦ) и обладают гепатопротекторной активностью у мышей стока CD-I.

2. Масла N. sativa обладают фунгистатическым действием в отношении патогенных и фитопатогенных микромицетов и превосходит известный биофунгицид на основе Т. asperellum 551.

3. Растительные экстракты S. officinalis и метаболиты Т. asperellum 551 оказывают комплексное позитивное адаптогенное влияние на растения кукурузы, путем стимуляции роста и развития, а также подавления фитопатогенных грибов.

4. Суммарная биологическая активность исследуемых биопрепаратов по воздействию на отдельные параметры живых систем возрастает в ряду: S. officinalis > N. Sativa > Т. asperellum 551.

Степень достоверности результатов исследования. Все научные положения и выводы обоснованы с применением системного анализа поставленной темы исследования, современных методов научно-биологических исследований, достоверной выборкой испытуемых, большим объемом фактического материала, который подвергнут математическому анализу. Все проведенные исследований подтверждаются большим объемом многократных лабораторных экспериментов, выполненных и анализированных на современных приборах с высокой точностью; опубликованием полученных данных в Российской и международном научных журналах после рецензирования манускриптов ведущими учеными в данной области; сопоставлением с новыми данными и апробированием возможности использования исследуемых препаратов в поддержке больных с онкологическими заболеваниями и в качестве стимуляторов роста и развития сельскохозяйственных важных растений.

Апробация работы. Основные положения результаты диссертации

представлены на следующих конференциях:

1. Третья международная научная интернет-конференция Казанского федерального университета «Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии» (19-22 ноября 2012 г.)

2. Ежегодная научная конференция Казанского федерального университета (31 января 2013).

3. Вторая международная научная интернет-конференция Казанского федерального университета «Биотехнология. Взгляд в будущее» (26-27 марта 2013 г.)

4. Вторая международная научная интернет-конференция «Современные тенденции в сельском хозяйстве» Казань, (10-11 октября 2013 г.)

5. Четвёртая международная научная интернет-конференция Казанского федерального университета «Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии» (16-17 октября 2013 г.)

6. Международный симпозиум «Биохимия — основа наук о жизни», посвященного 150-летию образования кафедры биохимии Казанского федерального университета (21-23 ноября 2013г.)

7. Третья международная научная интернет-конференция Казанского федерального университета «Биотехнология. Взгляд в будущее» (25-26 марта 2014 г.)

8. Четвёртая международная научно-практическая конференция «Постгеномные методы анализа в биологии, лабораторной и клинической медицине», Казанский федеральный университет, Казань, 29 октября - 1 ноября 2014.

Связь работы с научными программами и собственный вклад автора в исследования. Работа выполнена в соответствии с тематическим планом института фундаментальной медициной и биологии КФУ в рамках проекта «Биохимические, молекулярно-генетические и биоинформационные аспекты взаимодействия нано и биопрепаратов с живыми организмами» (НИР КФУ, девиз Бюджет 12-01), НИЛ «Молекулярные основы патогенеза и терапии опухолевых заболеваний» и «Разработка опытного образца биоудобрения с двойным эффектом для растениеводства. Лабораторные исследования свойств опытного образца биоудобрения». Госконтракт с Фондом содействия развитию МП НТС (30.05.2011-17.09.2013, ЫНо.9375р/15160).

Личный вклад автора. Автор активное участвовал в выборе направления исследований диссертационной работы и принимал непосредственное участие во всех проводимых экспериментах: получении экстрактов растений и культуральной жидкости Т. asperellum 551, исследованиях по влиянию этих веществ на штаммы фитопатогенных микромицетов, а также динамическом наблюдении за растениями, клеточными линиями и животными. Освоение методов анализа данных (цитотоксикологически, микробиологические фитотоксикологических, и статистических). В результате самостоятельного проведения экспериментов, обработки полученных результатов, их анализа и интерпретации получены новые знания о биобезопасности, биологической и биохимической активности метаболитов растительного (N. Sativa, S. officinalis) и грибного происхождения {Т. asperellum 551) в отношении различного уровня живых систем: культур неперерожденных и раковых клеток, лабораторных животных, фитопатогенных грибов и растений. Обсуждение и подготовка статей по материалам диссертации к публикации (написание и редактирование) проводились с соавторами.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 14 научных работы, из них 1 статья в зарубежном издании, включенном в базу систем цитирования ISI Web of Science и Scopus, 4 статей в Российских изданиях, включенных в список Высшей аттестационной комиссии (ВАК), 9 материалов международных и Всероссийских конференций.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 168 страницах машинописного текста, иллюстрирована 4 таблицами и 39 рисунками. Диссертация состоит из введения, четырех глав, заключения и выводов, а также списка литературы, состоящего из 48 отечественных и 188 зарубежных публикаций.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Характеристика N. sativa L.

N. sativa является одной из традиционно используемых трав, с хорошо известными целебными свойствами. Это - однолетнее цветущее растение, которое принадлежит семейству лютиковых, родом из юго-западной Азии, культивируемое в средних регионах Восточного Средиземноморья, на юге Европы, в Сирии, Турции, Саудовской Аравии, Пакистане и Индии (Zaman R., Akhtar M.S., 2004). С давних времен ученые изучали воздействие черного тмина на человека, особенно в процессе заживления ран.

Семена N. sativa, широко известного как черное семя, или черный тмин, использовались на протяжении тысяч лет, как пряность и пищевой консервант, а также в качестве защитного и лечебного средства против многих заболеваний (Worthen D.R. et al., 1998). При изучении состава семян N. sativa было обнаружено, что N. sativa содержит множество витаминов, минералов и растительного протеина, а также жирные нерастворимые кислоты, важные для здоровья кожи, волос и слизистой оболочки носа, которые уравновешивают выработку гормонов и благотворно влияют на жизненно важные функции организма (LlaiyarajaN., Khanum F., 2010).

В течение последних двух десятилетий были проведено много исследований влияния экстрактов семян N. sativa на различные системы организма как in vitro, так и in vivo. Фармакологические исследования экстрактов семян выявили широкий спектр мероприятий, включая иммуностимуляцию, антигистаминное (Medinica R. et al., 1994), антидиабетическое (AI-Hader A. et al., 1993), антигипертензивные (El Tahir K.E. et al., 1998), противовоспалительное и антимикробное действие (Houghton PJ. et ai., 1995). Многие из этих эффектов были отнесены к действию хининовых соединений, содержащихся в семенах N. sativa (Ali В.Н., Blunden G., 2003).

Препараты из семян N. sativa могут использоваться для профилактики онкологических заболеваний и, при совместном использовании, могут снизить

дозы стандартных токсичных противоопухолевых препаратов (Salomi NJ. et al., 1992). Местное применение экстракта N. Sativa ингибирует два этапа инициации-продвижение канцерогенеза кожи у мышей диметилбенз-[а]-антраценом (кротоновым маслом) (Salomi NJ. et al., 1992). Саломи с соавт, показали, что сырой метанольный экстракт оказывает сильное цитотоксическое действие на асцитную карциному Эрлиха, асцитные лимфомы и саркомы клеток Дальтона, но показывают минимальную цитотоксичность на нормальных лимфоцитах (Salomi M.J. et al., 1991). В этих исследованиях также показаны цитотоксические свойства экстрактов семян в естественных условиях: так было показано ингибирование роста асцитной карциномы Эрлиха у мышей, получавших 2 мг экстракта на мышь в день в течение 10 дней (Salomi M.J. et al., 1991). Кроме того, новый тритерпеновый сапонин (а-хедерин), недавно выделенный из семян N. sativa, показал значительное дозозависимое ингибирование опухоли при введении внутрибрюшинно в течение 7 дней при 5 и 10 мг / кг мышам с сформированными опухолями. (Swamy S.M., Tan В.К., 2001). Аналогичным образом, Вортен и его коллеги (Worthen D.R. et al., 1998) испытали в лаборатории неочищенную смолу, фиксированную маслом, и два очищенных компонента семени (тимохинон (TQ), и дитимохинон (DTQ) для проверки цитотоксичности в некоторых родительских линиях и линиях опухолевых клеток человека с множественной лекарственной устойчивостью. Они обнаружили, что смола и масло (до 1%, вес/объем) были лишены цитотоксичности, в то время как TQ и DTQ оказывали цитотоксическое действие как на родительские линии, так и на линии опухолевых клеток человека с множественной лекарственной (Salomi M.J. et al., 1991). Кроме того, показано, что TQ вызывает апоптоз клеток в человеческих колоректальных раковых клетках, которые коррелируют с G1 фазе сердца клеточного цикла (Gali-Muhtasib Н. et al., 2004). Индукции апоптоза путем TQ были связаны с увеличением экспрессии мРНК в р53 гена-мишени, p21Wafl, и значительным ингибированием анти-апоптоза Вс1-2 белка (Gali-Muhtasib Н. et al., 2004).

Для получения масла N. sativa различается два основных способа: отжим и экстрагирование. Отжим в свою очередь, делится на холодный и горячий. В холодном отжиме под пресс кладут измельченные и очищенные от кожуры семена, и на выходе масла получается 30-40% от общей массы мезги. В горячем отжиме мезгу предварительно подогревают до 100-200 градусов, для того чтобы в семенах открылись капилляры. Масла получается уже на 10% больше, но полезных веществ и витаминов в нем остается меньше. Что касается экстрагирования, то оно представляет собой двухступенчатый процесс извлечения масла из измельченных семян при помощи специальных растворителей, а затем удаление этих растворителей путем прогона через дистиллятор (Гаджиев М.И. и др., 2006).

1.1.1. Химический состав К sativa L.

По данным различных источников, N. sativa содержит более 100 действующих веществ и около 50 катализаторов естественного биосинтеза клеток (Kanter М. et al., 2003; Llaiyaraja N., Khanum F., 2010; Randhawa M.A., Alghamdi M.S., 2011; Al-Sheddi E.S. et al., 2014). Разнообразие питательных веществ в N. sativa различно в разных органах растения в зависимости от региона, где производится культивирование, условий хранения и степени зрелости. Семена N. sativa содержат 26,7% белков, 28,5% жиров, 24,9% углеводов, 8,4% сырой клетчатки и 4,8% золы в пересчете на сухую массу (Tkruri H.R., Dameh М.А., 1998; Gharby S. et.al., 2014). Семена N. sativa также являются хорошим источником многих витаминов и минералов, особенно богаты медью, фосфором, цинком и железом. Нелетучее масло содержит 22% мононенасыщенных жирных кислот и 50% полиненасыщенных жирных кислот, а также богато линоленовой и олеиновой кислотами. Среди стиролов преобладает альфа-ситостерол, который составляет 44% и 54% от всего количества стиролов в разновидностях тунисских и иранских масличных семян соответственно, следом идет стигмастерол (6,57 -20,92% от общего числа стиролов) (Cheikh-Rouhou S. et al., 2008; Mehta B.K. et al., 2008). Общее содержание полифенолов в масле N. sativa представлено 250-300

микрограммами галловой кислоты на килограмм масла. Эфирное масло (от 0,41% до 0,44%), проанализированное при помощи ОСМ8, состоит из смеси монотерпенов (Виг1л8 М., Висог Р., 2000).

Рис. 1. Химическая структура активных ингредиентов масла N. sativa L.

Около 32 соединений было идентифицировано, среди которых тимохинон (30-48%), тимогидрохинон, дитимохинон, пара-ищлол (7-15%) карвакрол (6-12%), 4 - терпинеол (2-7%), транс - анетол (1-4%), сесквитерпеновые лактоны (1-8%) и альфа-пинен являются преобладающими соединениями. Другие производные обнаружены в незначительных количествах, включая карвон, лимонен, цитронеллол. Многие из этих веществ проявляют лечебное действие на человека. Многие свойства цельных семян или их экстрактов в основном относятся к производным хинина, среди которых тимохинон является наиболее распространенным, а также мощным фармакологически активным соединением, которое легко димеризуется до дитимохинона. Семена содержат индазольное кольцо, присутствующее в алкалоидах, таких как нигеллицин, нигеллидин, тогда как нигеллимин и его N-оксиды являются изохинолиновыми алкалоидами (Rahman A.U. et al., 1995).

тимохинон

нигеллици

нигеллиди

нигеллими

Таблица 1

Содержание различных веществ в масле N. Sativa (Llaiyaraja N., Khanum F., 2010)

Класс соединения Наименование Описание Свойства Содержание, % Формула

алколоид дамасценин метиловый эфир З-метокси-Ы метилантранило- вой кислоты, метиловый эфир З-метокси-2-метиламинобенз ойной кислоты Действует разрушающе на свободные радикалы, но с другой стороны, является мутагеном, плохо изучен - о хмн лу-

биогенный амин ацетилхолин является четвертичным моноаммониевы м соединением это химически нестойкое вещество, которое в организме при участии специфического фермента холинэстеразы (ацетилхолинэстераз ы) легко разрушается с образованием холина и уксусной кислоты - СН, 1 СН,С—0—СН,СН2—Н,_СН] 11 1 0 СН3 Ацегилхолин

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Салли Мохамед Абделазиз Эльшафей, 2015 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Абдельрахман А.А. Влияние Trichoderma почв Египта и Республики Татарстан на отдельные параметры живых систем / Атеф Абдельмохсен Абдельрахман Ахмед // Диссертация кандидата биологических наук: КФУ. -2011.- 158с

2. Абдельрахман А.А. Клеточный и кальциевый ответы Aspergillus awamori на воздействие амфотерицином / А.А. Абдельрахман, О.В. Козлова, С.М.А. Элыиафей, Ф.К. Алимова, Ф.Г. Куприянова Ашина // Микробиология. -2014. - Т.83. -№ 4. - С.436-444.

3. Алимова Ф.К. Trichoderma Hypocrea (Fungi, Ascomycetes, Hypocreales) таксономия и распространение / Ф.К. Алимова // Казанский государственный университет им. В.И. Ульянова-Ленина. — 2005. — 263с.

4. Алимова Ф.К. Биотехнология. Промышленное применение грибов рода Trichoderma: учебно методическое пособие / Ф.К. Алимова, Д.И. Тазетдинова, Р.И. Тухбатова. — Казань: Казанский государственный университет им. В.И. Ульянова-Ленина. - 2007. - 230с. + 4 фотогр

5. Алимова, Ф.К. Промышленное применение грибов рода Trichoderma / Ф.К. Алимова // — Казань: Казанский государственный университет, 2006. - 208с.

6. Атаханов А.Ш. Получение лекарственных препаратов на основе растительного сырья чистеца (сухой экстракт, таблетки) / А.Ш. Атаханов // Диссертация магистра технологических наук. - Ташкентский фармацевтический институт. - 2009. - 67с.

7. Багаева Т.В. Микробиологическая ремедиация природных систем от тяжелых металлов / Т.В. Багаева, Н.Э. Ионова, Г.В. Надеева // учеб. -метод, пособие. — Казань: Казанский университет, 2013. - 56 с.

8. Байкова Е.В. Компонентный состав эфирных масел некоторых видов рода Salvia L., выращенных в условиях Новосибирска (Россия)/ Е.В. Байкова, Е.А. Королюк, А.В. Ткачев // Химия растительного сырья. - 2002. - № 1.- С. 37-42.

9. Бондарь O.B. Исследование цитотоксической активности и взаимодействия с компонентами клеточных мембран конъюгатов амфифильных полимеров с янтарной кислотой / Автореф. диссертации... кандидата биологических наук. - Казанский федеральный университет Казань, 2013.

Ю.Ботиров Э.Х. Химическое исследование флавоноидов лекарственных и пищевых растений / Э.Х. Ботиров, A.A. Дренин, A.B. Макарова // Химия растительного сырья. - 2006. - №1. - С. 45-48.

11 .Вайновская И.Ф. Разработка методов культивирования in vitro шалфея лекарственного Salvia officinalis L. / И.Ф. Вайновская, T.B. Мазур, Т.И. Фоменко//М.: МГУПП 2011. - 40с.

12.Воронина JI.II. Оценка биологической активности промышленных гуминовых препаратов / Л.П. Воронина, О.С. Якименко, В.А. Терехова // Агрохимия. - 2012. - № 6. - С. 50-57.

13.Гаджиев М.И. Чудо черного тмина, лечение черным тмином и его маслом / М.И. Гаджиев, М.М.Р. Гаджиев, A.A. Магомедов // Махачкала, 2006. - 96 с.

14.Герасимов И.Г. Оценка жизнеспособности клеток по их морфометрическим параметрам на примере культивируемых фибробластов / И.Г. Герасимов, А.Г. Попандопуло // Цитология. - 2007. -Т.49. - С.204-209.

15.Громовых Т.И. Микромицеты рода Trichoderma (Pers.): научное обоснование использования в технологиях агропромышленного комплекса / Т.И. Громовых, B.C. Садыкова, Ф.К. Алимова IfM.: МГУПП, 2014. - 189 с.

16.Гуринович Л.К. Эфирные масла: химия, анализ и применение / Л.К. Гуринович, Т.В. Пучкова - М.: школа косметических химиков, 2005. - 192с.

17.Дубровин И.И. Целительный шалфей / И.И. Дубровин; Алтей Серия: Всё о растениях, -2007. - 220с.

18.Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках / Н.С. Егоров; - 4-е изд., перераб. и доп. - Москва: Высш. шк. -1987.-448с.

19.Зенкевич И.Г. Аналитические параметры компонентов эфирных масел для хроматографической и хроматомасс-спектрометрической идентификации. Моно- и сесквитерпеновые углеводороды / И.Г. Зенкевич // Растит. Ресурсы. - 1996.-Т. 32,- вып. 1.-С. 48-58.

20.Исакова АЛ. Фенология развития генотипов рода чернушка (Nigella) в условиях северо-востока Беларуси / A. JI. Исакова, В. Н. Прохоров // М.: МГУПП2014.-С .32-35.

21.Киселёва И.А. Каминский применение растительного препарата «альба» в лечении больных с патологией щитовидной железы / И.А. Киселёва, Е.В. Тёплая // Врачебное дело. - 2012 - № 7 - С. 1-4.

22.Коваленко H.A. Динамика накопления и компонентный состав эфирных масел некоторых видов рода Salvia L / H.A. Коваленко, Г.Н. Супиченко, В.Н. Леонтьев // Труды БГУ. - 2010. -Т.5. - №2. - С. 27-33.

23.Козлов A.B. Изучение устойчивости микроорганизмов к действию добавок с консервирующими свойствами. / A.B. Козлов, Н.В.Нефедова, А.С.Багдасарян, И.С.Цюрина // Современные проблемы науки и образования. -2010. - №6. - С. 10

24.Коржевский Д.Э. Основы гистологической техники / Д.Э. Коржевский, A.B. Гиляров -Москва: Спец. Лит. -2010. 148с.

25.Лепахин В.К. Врачебные ошибки как причина осложнений лекарственной терапии / В.К. Лепахин, A.B. Астахова, Е.А. Овчинникова, Л.К. // Качественная клиническая практика. - 2002. - Вып.1. - С.12-18.

26Лубсандоржиева П.Б. Содержание биологически активных веществ в некоторых растениях Забайкалья, и их антиоксидантная активность / П.Б. Лубсандоржиева // Химия растительного сырья. - 2009. -№3. -С. 133-137.

27Лукаткин A.C. Влияние эпибрассинолида на термоустойчивость проростков кукурузы / A.C. Лукаткин, H.H. Каштанова, П. Духовскис // Агрохимия. -2013.-№ 6.-С. 24-31.

28.0хрименко Л.П. Исследование фенольных соединений листьев голубики, брусники, толокнянки, черники и зимолюбки, произрастающих в республике саха (якутия) / Л.П. Охрименко, Г.И. Калинкина, Е.А. Лукша, Н.Э. Коломиец // Химия растительного сырья. — 2009. —№3. - С. 109-115.

29.Племенков В.В. Введение в химию природных соединений / В.В. Племенков. Казань, 2001. - 376с.

30.Рудаков, Г. А. Химия и технология камфоры / Г. А. Рудаков // Москва. — 1976.-203с.

31.Садыкова B.C. Экология грибов рода Trichoderma (pers: fr.) бассейна реки енисей, их биологические свойства и практическое использование / Автореф, диссертации...доктора биологических наук. -МГУ, Москва, 2012.

32.Свистова И. Д. Индикаторные виды микромицетов в почве под лекарственными растениями / И.Д. Свистова, А.Ю. Парамонов // Проблемы медицинской микологии. -2011. — №3. - С.51-56.

33.Северина Е.С. Биохимия, ГЭОТАР-Медия, 2014. - 768с.

34.Симчук А.П. Эколого-генетический подход к защите растений в сельском хозяйстве / А.П. Симчук // Экосистемы, их оптимизация и охрана. -2013.— Вып. 8. - С. 66 -70.

35. Смирнова И.П. Триходерма - продуцент ингибитора вируса иммунодефицита человека / И.П. Смирнова, С.Б. Алексеев, Д.А. Мошков // мед. химии,-2005 .-№ 51.-С. 133-136.

36.Тазетдинова Д.И. Биологическая активность выщелоченных черноземов Юго-Востока республики Татарстан. Автореферат диссертации кандидат биологических наук. - КФУ. Казань-2008.

37.Терехин A.A. Технология возделывания лекарственных растений / A.A. Терхин, В.В. Вандышев- М.: РУДН, 2008. - 201с.

38.Ткаченко К.Г. Эфирномасличные растения и эфирные масла: достижения и перспективы, современные тенденции изучения и применения / К.Г.

Ткаченко // Вестник удмуртского университета, биология, науки о земле. — 2011. -Вып.1. - С.88-100.

39.Туан Н.Т. Характеристика комплекса метаболитов штаммов рода streptomyces в опытах in vitro и in vivo: дипломная работа, 2012. — 52с

40.Тухбатова Р.И. Влияние метаболитов Trichoderma asperellum на регенерацию тканей на фоне пирена / Р.И. Тухбатова, A.A. Абдельрахман, A.C. Мухаметзянова, Т.Т. Нгуен, T.JI. Хоанг, А.Н. Фаттахова, Ф.К. Алимова // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. — 2012. — Т.7. —№ 3. — С.159-163.

41.Урусов А.Е. Разработка и сравнительная характеристика систем экспрессного иммунохимического определения микотоксинов / Автореф, диссертации... кандидата химических наук. - Институт биохимии им. А.Н.Баха Российской академии наук, Москва, 2012.

42.Хабриев Р.У. Руководство по экспериментальному изучению новых фармакологических веществ, - М.: Медицина, 2005. - 832 с.

43.Хейфиц JI.A. Душистые вещества и другие продукты для парфюмерии: Справ, изд. / JI.A. Хейфиц, В.М. Дашунин. Москва: Химия, 1994. - 226с.

44.Чернышева М.Б. Изучение защитного действия мелатонина на модели индуцированного фиброза печени: оценка гистологической картины / М.Б. Чернышева, Ю.И. Василегина, Д.С. Налобин, К.А. Клюс, Т.С. Невредимова, Н.В. Мармий, Е.А. Супруненко, А.Ю. Беспятых, Д.С. Есипов // Биологические механизмы старения: материалы X международного симпозиума, Харьков 2012г. - С. 65-66.

45.Шакирова Ф.М. Неспецифическая устойчивость растений к стрессовым факторам и ее регуляция. Уфа: Гилем, 2001. - 160с.

46.Шариков A.M. Исследование антибактериальной активности метаболитов некоторых высших грибов Средней Сибири / A.M. Шариков // Современные наукоёмкие технологии. — 2011 - № 6 - С. 128-129.

47.Шишаков В.В. Комбинированные скейлинговые модели для инженерных расчетов термодинамических свойств на линии насыщения /В.В. Шишаков // Диссертация кандидата технических наук. МГУ. - 2014. - 179с.

48.Штерншис М.В. Тенденции развития биотехнологии микробных средств защиты растений в России / М.В. Штерншис // Вестник томского государственного университета. Биология. - 2012. - V.2. - С. 92-100.

49.Abd El-Rahman А.А. Cytotoxicity of Trichoderma spp. cultural filtrate against human cervical and breast cancer cell lines / A.A. Abd El-Rahman, S.M.A. El-Shafei, E.V. Ivanova, A.N. Fattakhova, A.Y. Pankova, M.A. El-Shafei, E.A. El-Morsi, F.K. Alimova // Asian Рас J Cancer Prev.-2014.-V.15.-No.17. - P.7229-7234.

50.Abd El-Rahman A.A. Effect of treatment maize grains before planting with Trichoderma Spp as bioagents on the yield / A.A. Abd El-Rahman, S.M.A. El-Shafei, D. I. Tazetdinova, R.I. Tukhbatova, F.G. Kuriyanova-Ashina, F.K. Alimova// In the proceeding of the Minia International Conference for Agriculture and Irrigation in the Nile Basin Countries, organized by faculty of agriculture, Minia university, El-Minia, Egypt, 26th -29th March 2012, P. 12771283.

51.Adewale O.B. Carbon tetrachloride (CC14)-induced hepatic damage in experimental Sprague Dawley rats: Antioxidant potential of Xylopia aethiopica / O.B. Adewale, A.O. Adekeye, C.O. Akintayo, A. Onikanni, S. Saheed // The Journal of Phytopharmacology. -2014. -V. 3. - P. 118-123.

52.Ahmad A. A review on therapeutic potential of Nigella sativa: A miracle herb / A. Ahmad, A. Husain, M. Mujeeb, S.A. Khan, A.K. Najmi, N.A. Siddique, Z.A. Damanhouri, F. Anwar // Asian Pacif. J. Trop. Biomed. -2013. - V.3. - P. 337352.

53.Ahmed W.A. The in vitro promising therapeutic activity of thymoquinone on hepatocellular carcinoma (HepG2) cell line / W.A. Ahmed, S.A. Hassan, F.M.

Galeb, M.A. El-Taweel, F.A. Abu-Bedair // Global Veterinaria. -2008. - V.2. -P. 233-241.

54.Ait-Lahsen H. An antifungal exo-a(l—>3)-glucanase (AGN13.1) from the biocontrol fungus T. harzianum / H. Ait-Lahsen, A. Soler, M. Rey, J. de la Cruz, E. Monte, A. Llobell // Appl Environ Microbiol. - 2001. - V. 67. - P. 5833-5839.

55.AIeksovski A. Supercritical Co2 extraction of S. officinalis L. / A. Aleksovski, H. Sovova // The Journal of Supercritical Fluids. -2007. -V.40. -P.239-245.

56.AI-Ghamdi M.S. The anti-inflammatory, analgesic and antipyretic activity of N. sativa / M.S. Al-Ghamdi // J Ethanophormacol. -2001. -V.76. -P. 45-48.

57.A1-Hader A. Hypoglycaemic effects of the volatile oil of N. sativa / A. Al-Hader, M. Aqel, Z. Hassan / Int J Pharmacognosy. - 1993. -V. 31. -P. 96-100.

58.Alhaj N.A. Extraction of Essential Oil from using Supercritical Carbon Dioxide: Study of Antibacterial Activity / N.A. Alhaj, M.N. Shamsudin, H.F. Zamri, R. Abdullah // Am J Pharmacol Toxicol. -2008. -V.3. -P. 225-228.

59.AIhosin M. Induction of apoptosis by thymoquinone in lymphoblastic leukemia Jurkat cells is mediated by a p73-dependent pathway, which targets the epigenetic integrator UHRF1A. / M. Alhosin, M. Achour, T. Sharif, C. Muller, J. Peluso, T. Chataigneau, C. Lugnier, V.B. Schini-Kerth, C. Bronner, G. Fuhrmann // Biochem. Pharmacol. -2010.-V.79. - P. 1251-1260.

60.AH B.H. Pharmacological and toxicological properties of N. sativa / B.H. Ali, G. Blunden // Phytother Res. -2003. -V. 17. - P. 299-305.

61.AIjabre S.H. Antidermatophyte activity of ether extract ofN. sativa and its active principle, thymoquinone / S.H.M. Aljabre, M.A. Randhawa, N. Akhtar, O.M. Alakloby, A. Alqurashi // Ethanophormacol. -2005. -V. 101. -P. 116-119.

62.AI-Sheddi E.S. Cytotoxicity of Nigella sativa seed oil and extract against human lung cancer cell line / E.S. Al-Sheddi, N.N. Farshori, M.M. Al-Oqail, J.Musarrat, A.A. Al-Khedhairy, M.A.Siddiqui // Asian Pac J Cancer Prev. - 2014. - V. 15. -P. 983-987

63.Amin I. Antioxidant activity and phenolic content of raw and blanched Amaranthus species / I. Amin, Y. Norazaidah, K.I. Emmy // Food Chemistry. -2006. -V.94 - P. 47-52.

64.AnseImi K. Gliotoxin causes apoptosis and necrosis of rat Kupffer cells in vitro and in vivo in the absence of oxidative stress: exacerbation by caspase and serine protease inhibition / K. Anselmi, D.Stolz, M.Nalesnik, S.Watkins, R.Kamath, C.Gandhi // J Hepatol. - 2007. — PMID: 17466404

65.Asgary S. Nigella sativa L. improves lipid profile and prevents atherosclerosis: Evidence from an experimental study on hypercholesterolemic rabbits / S. Asgary, A. Ghannadi, G. Dashti, A. Helalat, A. Sahebkar, S. Najafi // J.Functional food. - 2013. - V.5. - P. 228-234.

66.Avato P. Glandular Hairs and Essential Oils in Micro Propagated Plants of S. officinalis / P. Avato, I.Fortunato, C.Ruta, R. D' Elia // Plant Sci. -2005. -V.169. -P. 29-36.

67.Awad E.M. In vitro decreases of the fibrinolytic potential of cultured human fibrosarcoma cell line, HT1080, by Nigella sativa oil / E.M. Awad // Phytomedicine. -2005. — V. 12.-P. 100-107.

68.AyatoIIahi A. Two Flavones from Salvia leriaefolia / A. Ayatollahi, A.Shojaii, F.Kobarfard, M. Mohammadzadeh, M. Choudhary // IJPR. - 2009. -V.8. -P. 179-184

69.Badary O.A. Inhibition of benzo(a)pyrene induced foreomach carcinogenesis in mice by themoquinone / O.A. Badary, O.A. Al-Shabanah, M.N. Nagi, A.C. Al-Rikabi, M.M. Elmazar // Eur. J. Cancer Prev. -1999. -V.5. -P. 435^140.

70.Badary O.A. Inhibitory effect of thymoquinone against 20-methylchlolanthrene-induced fibrosarcoma tumorigenesis / O.A. Badary, A.M. Gamal El-din // Cancer Detect. Prev. -2001.-V.25. - P. 362-368, 2001.

71.Bamosa A. Nigella sativa is a safe herbal product / A. Bamosa // J. Integrative Medicine.-2014.-V.12.-P. 66-70.

72.Baranauskiene R. Influence of Harvesting Time on the Yield and Chemical Composition of Sage (S. officinalis L.) / R. Baranauskiene, E. Dambrauskiene, P.Venskutonis //Foodbalt. -2011. -V. 14. -P. 104-109.

73.Baricevic D. Topical Anti- Inflammatory Activity of S. officinalis L. leaves: The Relevance of Ursolic Acid / D. Baricevic, S.Sosa, R.Loggia, A.Tubaro, B. SimonovskaB, A. Krasna// J. Ethnophrmacol-2001.-V.75.-P. 125-32.

74.BartIes H. Serum creatinine determination without protein precipitation / H. Battles, M. Bohmer, C. Heirli // Clin.Chem.Acta. -1972. -V.37. -P.193-197.

75.Bavvadi H.A. Thymoquinone in the control of hypoxia-induced angiogenic disease biomarkers: insight into the mechanism of action in vitro / H.A. Bawadi, R.R. Bansode, J.N. Losso // In: IFT Annual Meeting, 12 July, Las Vegas NV USA, 2004.

76.BernfeId, P. Amylases, a and 6 /P.Bernfeld //Met. Enzymology. -1955. -V.l. — P. 149-158.

77.Bhatti I.U. Effect of prophetic medicine kalonji (N. sativa L.) on lipid profile of human being: in vivo approach / I.U. Bhatti, F.U. Rehman, M.A. Khan S.K. Marwat // World Applied Sciences Journal. -2009. -V.6. -P. 1053-1057.

78.Bin-Umer M. Trichothecene mycotoxins inhibit mitochondrial translation— implication for the mechanism of toxicity / M.Bin-Umer, E. John, B.Debaleena, M.Susan, E.Nilgun // Phytochemistry Reviews. - 2011. - PMC3268453.

79.Boskabady M. Pharmacological effects of Rosa damascena / M. Boskabady, M. Shafei, Z. Saberi, S. Amini // Iran J Basic Med Sci. - 2011-V.14. -P. 295-307.

80.Bottex-Gauthier C. The Rel/NF-kappa-B transcription factors: complex role in cell regulation / C. Bottex-Gauthier, S. Pollet, A. Favier, D.R. Vidal // Pathol. Biol. - 2002. -V.50. - P. 204-211.

81.Bruckner H. Paracelsin, a peptide antibiotic containing alpha-aminoisobutyric acid, isolated from Trichoderma reesei Simmons / H. Bruckner, H. Graf // Experientia - 1983. -PMID: V.6. -P. 406-426.

82.Brunn G. Direct inhibition of the signaling functions of the mammalian target of rapamycin by the phosphoinositide 3-kinase inhibitors, wortmannin and LY294002 / G. Brunn, J. Williams, C. Sabers, G.Wiederrecht, J. Lawrence, R.Abraham // Embo J. - 1996. - PMC: 8895571.

83.Burtis M. Antioxidant activity ofN. sativa essential oil / M. Burtis, F.Bucor // Phytother Res.2000.-V.14. -P. 323-328.

84.Cecarinin V. Effects of thymoquinone on isolated proteosomes / V. Cecarinin, L. Quassinti, A. Di-Blasio, L. Bonfili, M. Bramucci, G. Lupidi, M. Cuccioloni, M. Mozzicafreddo, M. Angeletti, A.M. Eleuteri // FEBS J. -2010. -V. 277. -P. 2128-2141.

85.Cheikh-Rouhou S. Sterol composition of black cumin (N. sativa L.) and Aleppo pine (Pinus halepensis Mill.) seed oils / S. Cheikh-Rouhou, S. Besbes, G. Lognay, C. Blecker, C. Deroanne, H. Attia / J Food Comp Anal. -2008. -V.21. - P. 162168.

86.Choi, H.S. Discovery of gliotoxiri as a new small molecule targeting thioredoxin redox system / H.S. Choi, J.S. Shim, J.A. Kim, S.W. Kang, HJ. Kwon // Biochem. Biophys. Res. Commun. -2007. -V. 359. -P. 523-528.

87.Creemer L. Synthesis and in vitro evaluation of new wortmannin esters: potent inhibitors of phosphatidylinositol 3-kinase / L.Creemer, H.Kirst, C.Vlahos, R.Schultz // J Med Chem. - 1996. - PMC: 8960564.

88.Dacie S.J. Practical Haematology 7th Ed. / S.J. Dacie, S.M. Lewis // Churchill Livingstone. -1991. - 532c.

89.Deans S.G. The Genus Salvia Antioxidants from S. officinalis / S.G. Deans, E.J.M. Simpson // In: Kintzios SE (Ed.), SAGE -, Harwood Academic Publishers, Amsterdam. -2000. -P. 185-192.

90.De-Mfsa M.D. Purification of lectin from mature seeds of malunggay (Moringa pterygosperma) / M.D. De-Mfsa, E.R. Mojica, F. Merca // Philip. J. Crop Sci. -2004.-V. 29.-P. 3-24.

91.Desjardins A. Trichothecene biosynthesis in Fusarium species: chemistry, genetics, and significance/ A.Desjardins, T.Hohn, S. McCormick // Mycotoxin Research Unit. -1993. - V.57. -P. 372-387.

92.DoIlah M.A. Toxicity Effect of N. sativa on the Liver Function of Rats / M.A. Dollah, S. Parhizkar, L.A. Abdul Latiff, M.H.B. Hassan // Adv. Pharm. Bull. -2013.-V. 3.-P. 97-102.

93.Dollah S.N. Exploring the Major Determinants of Student Satisfaction on University Cafeteria Food Services: A Malaysian Case / S.N. Dollah, N. Mansor, M. Mohamed // Interdisciplinary Journal of Research in Business. -2012. -V.2. -P. 62-73.

94.Dongare P.P. Standardization of Carbon Tetrachloride-Induced Hepatotoxicity in the Rat / P.P. Dongare, S.R. Dhande, V.J. Kadam // Am. J. Pharm. Tech. Res. -2013. -V.3. - P.438-445.

95.Dongare P.P. Standardization of Carbon Tetrachloride-Induced Hepatotoxicity in the Rat / P.P. Dongare, S.R. Dhande, V.J. Kadam // Am. J. Pharm. Tech. Res. -2013.-V.3.-P.438-445.

96.DonzeIli B.G. Cloning, sequence and structure of a gene encoding an antifungal glucan 1,3-ß-glucosidase from Trichoderma atroviride / B.G. Donzelli, M. Lorito, F. Scala, G.E. Harman // Gene. -2001 - V. 277. - P. 199-208.

97.Druzhinina I.S. Trichoderma: the genomics of opportunistic success / I.S. Druzhinina, V. Seidl-Seiboth, A. Herrera-Estrella, B.A.Horwitz, C.M. Kenerley, E.Monte, P.K. Mukherjee PK, S. Zeilinger, I.V. Grigoriev, C.P.Kubicek // Nat Rev Microbiol. -2011. -V. 10. - P.749-759.

98.Druzhinina I.S. Trichoderma: the genomics of opportunistic success / V. Seidl-Seiboth, A. Herrera-Estrella, B.A.Horwitz, C.M. Kenerley, E.Monte, P.K. Mukherjee PK, S. Zeilinger, I.V. Grigoriev, C.P.Kubicek // Nat Rev Microbiol.-2011.-Vol. 10.-P.749-759.

99. Eidi M. Effects of S. officinalis L. (Sage) Leaves on Memory Retention and its Interaction with the Cholinergic System in Rats / M.Eidi, A Eidi, M. Bahar // Nutrition. -2006. -V.22. -P. 321-326.

100.Eisenvveiner H.G. Kinetishe Bestimung des Harnstottes mit dem LKB-System / H.G. Eisenweine //J. Clin. Chem. Clin. Biochem. -1976. -V.14. -P.261-264.

101.EI Tahir K.E. The cardiovascular actions of the volatile oil of the black seed (N. sativa) in rats: elucidation of the mechanism of action / K.E. El Tahir, M.M. Ashour, M.M. al-Harbi // Gen Pharmacol. -1993. -V. 24. -P.l 123-1131.

102.El-Aziz M.A. The biochemical and morphological alterations following administration of melatonin, retinoic acid and N. sativa in mammary carcinoma: an animal model / M.A. El-Aziz, H.A. Hassan, M.H. Mohamed, A.R. Melci, S.K. Abdul-Ghaffar, M.R. Hussein // Int. J. Exp. Pathol. -2005.-V. 86. - P.383-396.

103.EI-Dakhakhny M. Effects ofN. sativa oil on gastric secretion and ethanol induced ulcer in rats / M. El-Dakhakhny, M. Barakat, M.A. El-Halim, S.M. Aly // J Ethanophormacol. -2000. -V .72. -P. 299-304.

104.EI-Mahdy M.A. Thymoquinone induces apoptosis through activation of caspase-8 and mitochondrial events in p53-null myeloblastic leukemia HL-60 cells / M.A. El-Mahdy, Q. Zhu, Q.E. Wang, G. Wani, A.A. Wani // Int. J. Cancer. - 2005.-V. 117.-P. 409-417.

105.E1-Mahmoudy A. Thymoquinone suppresses expression of inducible nitric oxide synthase in rat macrophages T / A. El-Mahmoudy, H.Matsuyama, M.A. Borgan, Y. Shimizu, M.G. El-Sayed, N. Minamoto // Int Immunopharmocol. -2002.-V.2.-P. 1603-1611.

106.Evan G.I. Proliferation, cell cycle and apoptosis in cancer / G.I. Evan, K.H.Vousden// Nature. - 2001. -V.411. -P. 342-348.

107.Farhoudi M. Effects of S. officinalis Extract on Carbon Tetrachloride Induced Hepatotoxicity / M. Farhoudi, S. Ghodratizadeh // Global Veterinaria. -2011. -V.7. -P.353-357.

108.Feinberg M. HTLV-I11 expression and production involves complex regulation at the levels of splicing and translation of viral RNA / M. Feinberg, R.F. Jarrett, A. Aldovini, R.C. Gallo, F. Wong- Staal // Cell. -1986. -V.46. -P. 807-817.

109.GaIi-Muhtasib H. Roessner and R. Schneider-Stock. Thymoquinone triggers inactivation of the stress response pathway sensor CHEK1 and contributes to apoptosis in colorectal cancer cells / H. Gali-Muhtasib, D. Kuester, C. Mawrin, K. Bajbouj, A. Diestel, M. Acker, C. Habold, C. Foltzer- Jourdainne, P. Schoenfeld, B. Peters, M. Diab-Assaf, W. Itani, H. Lippert / A.Cancer Res. -2008. -V. 68. -P. 5609-5618.

110.Gali-Muhtasib H. Thymoquinone extracted from black seed triggers apoptotic cell death in human colorectal cancer cells via a p53- dependent mechanism / H. Gali-Muhtasib, M.Diab-Assaf, C.Boltze, J.Al-Hmaira, R.Hartig , A.Roessner // J Oncol. - 2004. -V. 25. -P. 857-866.

111.Gali-Muhtasib H. Thymoquinone: a promising anti-cancer drug from natural sources, A. Roessner and R. Schneider-Stock / H. Gali-Muhtasib // Int. J. Biochem. Cell Biol. - 2006.-Y.38.-P. 1249-1253.

112.Gardiner D. The sirodesmin biosynthetic gene cluster of the plant pathogenic fungus Leptosphaeria maculans / D.Gardiner, A.Cozijnsen, L.Wilson, M.Pedras, B.Howlett//Mol Microbiol. -2004. -V.53. -P. 1307-1318.

113.Gazzar M.E. Downregulation of leukotriene biosynthesis by thymoquinone attenuates airway inflammation in a mouse model of allergic asthma / M.E. Gazzar, R.E. Mezayen, M.R. Nicolls, J.C. Marecki, S.C. Sdreskin // Biochem Biophys Acta. -2006. -V.1760. -P. 1088-1095.

114.Ghannadi A. An investigation of the analgesic and anti-inflammatory effects of N. sativa seed polyphenols An investigation of the analgesic and antiinflammatory effects of N. sativa seed polyphenols / A. Ghannadi, V.Hajhashemi, H. Jafarabadi // J Med Food. -2005. -V.8. -P. 488-493.

115.Gharby S. Chemical investigation of Nigella sativa L. seed oil produced in Morocco / S. Gharby, H. Harhar, D.Guillaume, A. Roudani, S. Boulbaroud, M.

Ibrahimi, M. Ahmad, S. Sultana, T. Hadda, I.C. Moussaoui, Z. Charrouf //J. Saudi Soci. Agric. Sci. -2014. - V.15. - P. 983-987.

116.Graeme S. Structural and functional characterization of TRI3 trichothecene 15-O-acetyltransferase from Fusarium sporotrichioides! S.Graeme, P. Susan, J.Nancy, I. Rayment // The Protein Society - 2009. -V.27. -P. 625-637.

117.Gupta V.G. Biotechnology and biology of Trichodenna / V.G. Gupta, M. Schmoll, A. Herrera-Estrella, R.S. Upadhyay, I.S. Druzhinina, M. Tuohy // The Boulevard, Langford Lane, Kidlington, Oxford 0X5 1GB, UK, 2014. - 650p.

118.Gurdip-singh M. Chemical constituents and antimicrobial and antioxidant potentials of essential oil and acetone extract of N. sativa seeds / M. Gurdip-Signh, P. Marimuthu, C.S.D. Heluani, C.S.O. Catalan // J Sci Food Agr. -2005. -V.85. -P. 2297- 2306.

119.Gurung R.L. Thymoquinone induces telomere shortening, DNA damage and apoptosis in human glioblastoma cells / R.L. Gurung, S.N. Lim, A.K. Khaw, J.F. Soon, K. Shenoy, A.S. Mohamed, M. Jayapal, S. Sethu, R. Baskar, M.P. Hande //PLoS One. -2010. -V.5. - P. 121-124.

120.Hadri A. Cytotoxic Activity of a-humulene and Transcaryo-phyllene from S. officinalis in Animal and Human Tumor Cells / A. Hadri, M. Gomez Del Rio, J.Sanz, A. Coloma, M. Idaomar, B. Ozanas //An R. Acad. Nac. Farm. -2010. -V.76.-P. 343- 56.

121.Harman G.E. Changing Models for Commercialization and Implementation of Biocontrol in the developing and the developed world / G.E. Harman, M.A.Obregon, G.J. Samuels, M. Lorito//Plant dis.-2010.-Vol.5.-P.928-939.

122.Harman G.E. Combination of fimgul cell degrading enzyme and fungul cell membrane affecting compound / G.E. Harman, M. Lorito, A. Di Pietro, C.K. Hayes, F. Scala, C.P. Kubicek // US Patent 6,512,166, issued Jan.28, 2003.

123.Harman G.E. Multifunctional fungal plant symbionts: new tools to enhance plant growth and productivity / G.E. Harman // New Phytologist. -2011. -V.189. -P.647-649.

124.Harman, G.E. Overview of mechanisms and uses of Trichoderma spp / G.E. Harman // Phytopathology. -2006. - V.96. -P. 190-194.

125.Harman, G.E. Trichoderma species-opportunistic, avirulent plant symbionts / G.E. Harman, C.R. Howell, A. Viterbo, I. Chet, M. Lorito // Nat. Rev. Microbiol. - 2004. - V.2. - P.43-56.

126.Hartley K. DNA-dependent protein kinase catalytic subunit: a relative of phosphatidylinositol 3-kinase and the ataxia telangiectasia gene product. / K. Hartley, D. Gell, G. Smith, H. Zhang, N. Divecha, M. Connelly, A. Admon, S. Lees-Miller, C. Anderson, S. Jackson // Cell. - 1995. - PMC: 7671312.

127.Hassan, S.A. In vitro challenge using thymoquinone on hepatocellular carcinoma (HepG2) cell line / S.A. Hassan, W.A. Ahmed, F.M. Galeb, M.A. El-Taweel, F.A. Abu-Bedair // Iran J. Pharm. Res. - 2008. - V.7. - P. 283-290.

128.Hengartner M.O. The biochemistry of apoptosis / M.O. Hengartner // Nature.-2000. - V.407. -P. 770-776.

129.HoId, K.M. Detoxification of alpha- and beta-Thujones (the active ingredients of absinthe): site specificity and species differences in cytochrome P450 oxidation in vitro and in vivo / K.M. Hold, N.S. Sirisoma, J.E. Casida // Chem Res Toxicol. - 2001. - V.14. - P. 589-595.

130.Houghton P.J. Fixed oil of N. sativa and derived thymoquinone inhibit eicosanoid generation in leukocytes and membrane lipid peroxidation / P.J. Houghton, R. Zarka, B. de las Heras, J.R. Hoult // Planta Med. -1995. -V.61. -P. 33-36.

131.Howell C.R. Mechanisms employed by Trichoderma species in the biological control of plant diseases: the history and evolution of current concepts / C.R. Howell // Plant Dis. -2006. -V.87. -P.4-10

132.Hurne A. Inactivation of rabbit muscle creatine kinase by reversible formation of an internal disulfide bond induced by the fungal toxin gliotoxin / A.Hurne, C.Chai, P.Waring // J. Biol. Chem. - 2000. - V.275. -P. 25202-25206.

133.Hussain A. Antioxidant Attributes of Four Lamiaceae Essential Oils / A. Hussain, F.Anwar, T. Iqbal, I. Bhatti //Pak. J. Bot. -2011. -V.43. - P. 13151321.

134.Hyman A.H. The new cell biology. Beyond HeLa cells / A.H. Hyman, K.Simons // Nature. - 2011- V.480. -P.34-39.

135.Ianculov I. Determination of total proteins in gemotherapeutic preparations with the Folin-Ciocalteu reagent Romanian Biotechnological Letters / I. Ianculov, D. Botau, D.M. Bordean, M. Cucu, V. Bolda, P. Pruna // Romanian Biotechnological Letters. - 2010. - V. 15. - P. 5410-5416. 136.1ddamaldeniya S.S. Thammitiyagodage.: Protection against diethylnitrosoamine-induced hepatocarcinogenesis by an indigenous medicine comprised of N. sativa, Hemidesmus indicus and Smilax glabra : a preliminary study / S.S. Iddamaldeniya, N. Wickramasinghe, I. Thabrew, E.N. Ratnathung //J Carcinog. - 2003. -V.2. -P. 2-6. 137.ISCH International Committee for Standardization in Hematology. British

Journal of Haematology.-1967.-V. 13. - P.71-75. 138.1tani W. Anti Colon Cancer Components from Lebanese Sage {Salvia libanotica) Essential Oil / W.Itani, S. El-Banna, R.Larsson, A. Bazarchi, H.Gali-Mutasib // Cane. Biol. Ther. -2008. -V.7. -P. 1765-1773. 139.IUPAC Measurement of cellulase activities. Pure and App Chem. - 1987. - V. 59.-P. 257-268.

140.Jafri S.H. Thymoquinone and cisplatin as a therapeutic combination in lung cancer: in vitro and in vivo / S.H. Jafri, J. Glass, R. Shi, S. Zhang, M. Prince, H. Kleiner-Hancock // J. Exp. Clin. Cancer Res. - 2010. -V. 29. - P.87 - 89.

141.Janakat S. Optimization of the dose and route of injection, and characterization of the time course of carbon tetrachloride-induced hepatotoxicity in the rat / S. Janakat, H. Al-Merie // J. Pharmacol. Toxicol. Methods. - 2002. - V.48. - P. 41-44.

142.Jedinak A. Antiprotease and Antimetastatic Activity of Ursolic Acid Isolated from S. officinalis / A. Jedinak, M. Muckova, D.Kost'alova, T. Maliar, I. Masterova // Naturforschung. -2006. -V. 61. -P. 777-782.

143.Kamatou P. Antioxidant, Anti-inflammatory Activities and HPLC Analysis of South African Salvia Species / P. Kamatou, A.Viljoen, P. Steenkamp // Food Chem.- 2009. -V.12. -P. 7-10.

144.Kanter M. Effects of Nigella sativa L. and Urtica dioica L. on lipid peroxidation, antioxidant enzyme systems and some liver enzymes in CCI4-treated rats / M. Kanter, I. Meral, S. Dede, H. Gunduz, M. Cemek, H. Ozbek, I. Uygan // J Vet Med A Physiol Pathol Clin Med. - 2003. - V.50. -P.264-268.

145.Kaseb A.O. Androgen receptor and E2F-1 targeted thymoquinone therapy for hormone-refractory prostate cancer / A.O. Kaseb, K. Chinnakannu, D. Chen, A. Sivanandam, S. Tejwani, M. Menon, Q.P. Dou, G.P. Reddy // Cancer Res. -2007. - V.67. - P. 7782-7788.

146.Kermanshah H. In vitro Evaluation of Antibacterial Activity of Hydroalcoholic Extract of S. officinalis and Pimpinella Anisum against Carigenic Bacteria / H. Kermanshah, S. Kamangar, S. Arami, A. Mirsalehian, M. Kamalineghad, M. Karimi // J. Dent. Med. - 2009. -V. 22. - P. 149-154.

147.Keshavarz M. Anti Tumor Activity of S. officinalis is Due to Its Antiangiogenic, Anti-migratory and Anti-proliferative effects / M. Keshavarz, A. Bidmeshkipour, A. Mostafavi, K. Mansouri, H. Mohamadi-Motlagh // Cell Journal. -2011. -V.12. - P. (4):477-82.

148.Khalaf A.A. Comparative study on the protective effect of some antioxidants against CCI4 hepatotoxicity in rats / A.A.A. Khalaf, M.E.M. Mekawy, M.S. Moawad, A.M. Ahmed // Egyptian Journal of Natural Toxins. -2009. -V.6. - P. 59-82.

149.Khalil R. Antimicrobial Activity of Essential Oil of S. officinalis L. Collected in Syria / R. Khalil. Z. Li // Afr. J. Biotechnol. -2011. -V.10. -P. 8397-8402.

150.Khan M.A. Anticancer activities of Nigella sativa (black cumin) / M.A. Khan, H.C. Chen, M. Tania, D.Z. Zhang // Afr.J. Tradit. Comp. Altern Med. —2011. — V.8. - P. 2269-232.

151.Konig, H.J. Diversity and Lignocellulolytic activities of cultured microorganisms. In: Intestinal microorganisms of termites and other inverterbrates / H.J. Konig, H.J. Frochlich, H. Hertel //Springer-Verlag, Berlin. -2006.-P. 271-301.

152.Kristin A. Gliotoxin causes apoptosis and necrosis of rat Kupffer cells in vitro and in vivo in the absence of oxidative stress: Exacerbation by caspase and serine protease inhibition / A.Kristin, B.Donna, N.Michael, C.Simon, K.Ravindra, R.Chandrashekhar // J Hepatol. - 2007. - V. -10. -P. 1016-1018.

153.Kubicek C.P. Trichoderma and Gliocladium, basic biology, taxonomy and genetics / C. P. Kubicek, G. E. Harman. - London: Taylor and Francis, 2002. -278c.

154.Kubicek, C.P. Properties of a conidial-bound cellulase enzyme system from Trichoderma reesei / C.P. G. Kubicek, M. Muhlbauer, M. Klotz, E. John, E.M. Kubicek-Pranz // J.Gen.Microbiol.-1988.-Vol.l34.-P. 1215-122.

155.Kumari M. Tannins: An Antinutrient with Positive Effect to Manage Diabetes / M. Kumari, S. Jain // Research Journal of Recent Sciences. -2012. -V.l. - P. 70-73.

156.Larsen K. Creatinine assay by a reaction-kinetic principle / K. Larsen / Clin. Chem. Acta-1972. -V.41. -P. 209-217.

157.Lima C.F. Effects of Salvia officinalis in the liver: Relevance of glutathione levels. - PhD Thesis in Biological Sciences. University of Minho Portugal. -2006. -238p

158.Lima C.F. Evaluation of toxic/protective effects of the essential oil of S. officinalis on freshly isolated rat hepatocytes / C.F. Lima, F. Carvalho, E. Fernandes,M. Bastos, P. Santos-Gomes, M. Fernandes-Ferreira, C. Pereira-Wilson // Toxicolo. in vitro. - 2004. -V.18. -P. 457-465.

159.Limdi J.K. Evaluation of abnormal liver function tests / J.K. Limdi, G.M. Hyde // Postgrad. Med. J. - 2003. - V.79. -P. 307-312.

160.LIaiyaraja N. Nigella Sativia L: a review of therapeutic applications/ N. llaiyaraja, F. Khanum, //Journal of Herbal Medicine and Toxicology. -2010. -V. 4.-P. 1-8.

161.Loizzo M. Cytotoxic Activity of Essential Oils from Labiatae and Lauraceae Families against In Vitro Human Tumor Models / M.Loizzo, R. Tundis, F.E. Menichini, A. Saab, G. Statti, F. Menichini //Anticancer Res. -2007. -V. 27. -P. 3293-3300.

162.Lu Y. Flavonoid and Phenolic Glycosides from S. officinalis / Y.Lu, L.Yeap // Phytochemistry. -2000. -V.55. -P. 263-267.

163.Lu Y. Salvianolic Acid L, A Potent Phenolic Antioxidant from S. officinalis / Y. Lu, L.Yeap // Tetrahedron Letters. -2001. -V. 42. -P. 8223-225.

164.Makkar H.P. Gravimetric determination of tannins and their correlations with chemical and protein precipitation methods / H.P.S. Makkar, M. Bluemmel, N.K. Borowy, K. Becker// J. Sci. Food Agric. - 1993.-V.61.-P.161-165.

165.Manibusan M.K. Postulated Carbon Tetrachloride Mode of Action: A Review / M.K. Manibusan, M. Odin, D.A. Eastmond // J. Environmen. Sci. Health. -2007.-V.25.-P. 185-209.

166.Mbarek L.A. Anti-tumor properties of blackseed (N. sativa L.) extracts Mouse / L.A. Mbarek, H.A. Elabbadi, N. Bensalah, M. Gamouh, A. Aboufatima, R. Benharref, A. Chait, A. Kamal, M. Dalai, A. Zyad // Braz J Med Biol Res. -2007. -V.40. -P. 839-847.

167.Meda A. Determination of the total phenolic, flavonoid and proline contents in burkina fasan honey, as well as their radical scavenging activity / A. Meda, C.E. Lamien, M. Romito, J. Millogo // Nacoulma Food Chemistry. - 2005. - V. 91. -P.571-577.

168.Medinica R. Immunomodulatory and anticancer activity of N. sativa plant extract in humans / R. Medinica, S.Mukerjee, T.Huschart, W. Corbitt //

Proceedings of the American Association for Cancer Research Annual Meeting. 1994. - P.2865-2873.

169.Mehta B.K. Lipid Constituents Identified in Seeds ofN. sativa (Linn) / B.K. Mehta, M.Verma, M. Gupta, B.K. Mehta, M. Verma, M.J. Gupta // Novel Braz. Chem. Soc. -2008. -V.19. -P. 458-462.

170.MeIander O. Novel and conventional biomarkers for prediction of incident cardiovascular events in the community / O. Melander, C. Newton-Cheh, P. Almgren, B. Hedblad, G. Berglund // JAMA. -2009 - V. 302. - P. 49-57.

171.MeschIer J.P. Thujone exhibits low affinity for cannabinoid receptors but fails to evoke cannabimimetic responses / J.P. Meschler, A.C. Howlett // Pharmacol Biochem Behav. - 1999. - V.62. -P.473-80.

172.Mezayen R.E. Effect of thymoquinone on cyclooxygenase expression and prostaglandin production in a mouse model of allergic airway inflammation / R.E. Mezayen, M.E. Gazzar, M.R. Nicolls, J.C. Marecki, S.C., Dreskin, H. Nomiyama // Immunol lett. -2006. -V.106. -P.72-81.

173 .Mishra B.K. Biocontrol efficacy of Trichoderma viride isolates against fungal plant pathogens causing disease in Vigna radiata L / B.K. Mishra, R.K. Mishra, R.C. Mishra, A.K. Tiwari, R.Singh //Appl. Sci. Res.- 2011.-Vol. 3.-P. 361-369.

174.Nair M.K Antibacterial effect of black seed oil on Listeria monocytogenes / M.K.M. Nair, P. Vasudevan, K. Venkitanarayanan // Food Control. -2005. -V.16.-P. 395-398.

175.Nickavar B. In Vitro Free Radical Scavenging Activity of Five Salvia Species / B. Nikavar, M. Kamelinejad, H. Izadpanah //Pak. J. Pharm. Sci. -2007. -V.20. -P. 291-94.

176.Nikavar B. Alpha-amylase Inhibitory Activities of Six Salvia Species / B. Nikavar, L.Abolhasani, H. Izadpanah // IJPR. - 2008. -V.7. -P. 297-303.

177.Nishida S. Fungal metabolite gliotoxin targets flavocytochrome b558 in the activation of the human neutrophil NADPH oxidase / S. Nishida, L.Yoshida, T.

Shimoyama, H. Nunoi, T. Kobayashi // Infect Immun. - 2005. - V.73. -P. 235244.

178.NseAbasi N. Haematological Parameters and Factors Affecting Their Values / N. NseAbasi, E.Mary, E. Williams, U.Akpabio, E.A. Edem // Agricultural Science. -2014. -V.2. -P.37-47. 179.0deigah P.G. Sperm head abnormalities and dominant lethal effects of formaldehyde in albino rats / P.G.C. Odeigah // Mutat. Res. - 1997. -V. 389. -P. 141-148.

180.0rhan I.E. Pharmacognosy: Science of natural products in drug discovery / I.E. Orhan // Biolmpacts. - 2014. - V.4. - P. 109-110.

181.Patel S. In vitro cytotoxicity of Solanum nigrum extract against HeLa cell line and Vero cell line / S. Patel, N. Cheewala, A. Suthar, A.Shah // Inter. J. Pharm. Sci.-2009.-V.l.-P. 38-46.

182.Pedro D. Modulation of DNA Damage Prevention and Signaling Pathways in Diet Induced Colon Cancer Prevention / D. Pedro, A. Ramos, C. Lima, F. Baltazar, C. Pereira-Wilson //BMC Proceedings. -2010. -V. 4. -P.53-59.

183.Pestka J.J. Stachybotrys chartarum, trichothecene mycotoxins, and damp building-related illness: new insights into a public health enigma / J.J. Pestka, I.Yike, D.G. Dearborn, M.D. Ward, J.R. Harkema // Toxicological Sciences. -2008.-V.l04-P. 4-26.

184.Priya M.G. in vitro study of anti-inflammatory and antioxidant activity of 4-(3h) - quinazolinone derivatives / M.G.R. Priya, K. Girija, N. Ravichandran // Rasayan. -2011. - V.4. -P. 418-424.

185.Properzi A. Some Biological Activities of Essential Oils / A. Properzi, P.Angelini, G. Bertuzzi, R.Venanzoni // Med Aromat Plants. -2013. -V.2. -P. 136-139.

186.Radulescu V. Capillary Gas Chromatography-mass Spectrometry of Volatile and Semi-volatile Compounds of S. officinalis / V. Radulescu, S.Chiliment, E.Oprea // J. Chromatogr. -2004. -V.1027. -P. 121-126.

187.Rahman A.U. A new indazole alkaloid from the seeds ofiV. sativa / S.Malik, S.S. Hasan, M.I. Choudhary, C. Ni, J. Clardy, J. Nigellidine //Tetrahedron Lett. -1995.-V. 36.-P. 1993- 1996.

188.Rakhshandeh H. In vitro and in vivo study of the antibacterial effects of N. sativa methanol extract in dairy cow mastitis / H. Rakhshandeh, N.Vahdati-Mashhadian, M. khajekaramadini //Avicenna J Phytomed. -2011. -V.l. - P. 29-35.

189.Randhawa M.A._Anticancer activity of Nigella sativa (black seed) - a review / M.A. Randhawa, M.S. Alghamdi // Am J. Chin Med. - 2011. - V. 39. - P. 1075-1091.

190.Randhawa M.A. Thymoquinone, an active principle of N. sativa, inhibited Fusarium solani / M.A. Randhawa, O.M. Alakloby, S.H.M. Aljabre, A.M. Alqurashi, N. Akhtar // Pak J Med Res. -2005. -V.44. -P. 1-4.

191.Rcino J.L. Secondary metabolites from species of the biocontrol agent Trichoderma / J.L. Reino, R.F.Guerrero, R. Hernandez-Galan, I.G. Collado // Phytochem Rev. -2008. -V.l. -P.89-123.

192.Reitman S. Colourimeteric of serum transaminases / S. Reitman, S. Frankel // Am.J.Clin.Pathol. -1957. -V.28. -P.56-62.

193.Roepke M. Lack of p53 augments thymoquinone-induced apoptosis and capsase activation in human osteosarcoma cells / M. Roepke, K. Bajbouj, D. Walluscheck, P. Schonfeld, A. Roessner, R. Schneider-Stock, H. Gali-Muhtasib // Cancer Biol. Ther. -2007.-V. 6. - P. 160-169.

194.Rooney S. Effect of alpha-hedrin and thymoquinone, constituents of N. sativa, on human cancer cell lines / S. Rooney, M.F. Ryan // Anticancer Res. - 2005-V. 25. — P. 2199-2204.

195.Ryckman C. Pro inflammatory activities of S100: proteins S100A8, S100A9, and S100A8/A9 induce neutrophil chemotaxis and adhesion / C. Ryckman, K. Vandal, P. Rouleau, M. Talbot, P.A. Tessier // J. Immunol. - 2003. - V.l5. - P. 3233-3242.

196.Sa C. Sage Tea Drinking Improves Lipid Profile and Antioxidant Defences in Humans / C. Sa, A. Ramos, M. Azevedo, C. Lima, M. Fernandes- Ferreira, C. Pereira-Wilson //Int. J. Mol. Sci-2009.-V.10. -P.3937-3950. 197.Salem M.L. Immunomodulatory and therapeutic properties of the Nigella sativa L. seed/M.L. Salem//Int. Immunopharmacol.-2005. - V.13.-P. 1749-1770. 198.SaIomi M.J. Inhibitory effects of N. sativa and saffron (Crocus sativus) on chemical carcinogenesis in mice / M.J. Salomi, S.C. Nair, K.R. Panikkar // Nutr Cancer. - 1991.-V.16.-P. 67-72. 199.Salomi N.J. Antitumour principles from N. sativa seeds / N.J. Salomi, S.C. Nair, K.K. Jayawardhanan, C.D. Varghese, K.R. Panikkar // Cancer Lett. -1992.-V. 63.-P. 41-46. 200.Sanz L. Cell wall-degrading isoenzyme profiles of Trichoderma biocontrol strains show correlation with rDNA taxonomic species / L. Sanz, M. Montero, I. Grondona, J. Vizcaino, A. Llobell A.// Curr Genet.- 2004. - V. 46. - P. 277286.

201.Sanz L. Expression of an a-l,3-glucanase during mycoparasitic interaction of Trichoderma asperellam / L. Sanz, M. Montero, J. Redondo, A. Llobell, E. Monte // FEBS Journal. -2005 - V. 272. - P. 1-7. 202.Sarkaria J. Inhibition of phosphoinositide 3-kinase related kinases by the radiosensitizing agent wortmannin / J. Sarkaria, R. Tibbetts, E. Busby, A. Kennedy, D. Hill, R. Abraham // Cancer Res. - 1998. - PMC: 9766667. 203.Schuster A. Biology and biotechnology of Trichoderma / A. Schuster, M.

Schmoll // Appl Microbiol Biotechnol. -2010. -V.87. -P.787-799. 204.Sch\vartsmann G. Anticancer Drug Discovery and Development Throughout the World / G. Schwartsmann, M.J. Ratain, G.M. Cragg, J.E. Wong, N. Saijo, D.R. Parkinson, Y. Fujiwara, R. Pazdur, D.J. Newman, R. Dagher, L. Di // Journal of Clinical Oncology. -2002. -V.20. -P.47-59. 205.Sethi G. Targeting nuclear factor-{kappa }-B activation pathway by thymoquinone: role in suppression of antiapoptotic gene products and

enhancement of apoptosis / G. Sethi, K.S. Ahn, B.B. Aggarwal // Mol. Cancer Res. - 2008. - V.6. - P. 1059-1070.

206.Shafi G. Methanolic extract of N. sativa seeds is potent clonogenic inhibitor of PC3 cells / G. Shafi, T.N. Hassan, N.A. Syed, // Int J Pharmacol. -2008. -V.4. -P. 477-481.

207.Shi M. Antimicrobial peptaibols, novel suppressors of tumor cells, targeted calcium-mediated apoptosis and autophagy in human hepatocellular carcinoma cells / Shi M., H.Wang, S. Xie, Y.Luo, C. Sun, X. Chen, Y. Zhang // Mol Cancer. - 2010. - V. 10. -P. 9-26.

208.SmidIing D. Evaluation of Antiviral Activity of Fractionated Extracts of Sage S. officinalis L. (Lamiaceae) / D. Smidling, D.Mitic-Culafic, B.Vukovic-Gacic, D.Simic, J. Knezevic-Vukcevic // Arch. Biol. Sci.-2008. - Y.60. -P. 421-429.

209.Smith R. A wortmannin-cetuximab as a double drug / R. Smith, H. Yuan, R. Weissleder, L. Cantley, L. Josephson // Bioconjug Chem. - 2009. - PMID: 19883074.

210.Stanojevic D. In Vitro Synergistic Antibacterial Activity of S. officinalis and Some Preservatives / D. Stanojevic, L. Comic, O. Stefanovic, S. Solujic-Sukdolak // Arch. Biol. Sci. -2010. -V. 62. - P. 175-183.

21 l.Suffness M. Methods in drugs development / M. Suffness, J. Douros, J. De Vita Jr, H. Busch // Drugs of plant origin. New York: Academic Press, 1982. - 346c.

212.Swamy S.M. Extraction, isolation and characterization of anti-tumor principle, alpha-Hederin, from the seeds of N. sativa / S.M. Swamy, B.K. Tan // Planta Medica. - 2001. -V.67. - P. 29-32.

^ 213.Takahashi S. Increased cytotoxicity of carbon tetrachloride in a human

hepatoma cell line overexpressing cytochrome P450 2E1 / S.Takahashi, T. Takahashi, S. Mizobuchi, M. Matsumi, K. Morita, M. Miyazaki, M. Namba, R. Akagi, M. Hirakawa // J. Inter. Med. Res. - 2002. - V.30. - P. 400-405.

214.Takahashi S. Increased cytotoxicity of carbon tetrachloride in a human hepatoma cell line overexpressing cytochrome P450 2E1 / S.Takahashi, T.

Takahashi, S. Mizobuchi, M. Matsumi, K. Morita, M. Miyazaki, M. Namba, R. Akagi, M. I-Iirakawa // J. Inter. Med. Res. - 2002. - V.30. - P. 400-405.

215.TambuwaI F.M. Haematological and biochemical values of apparently healthy red sokoto goats.Agale / F.M. Tambuwal, B.M. Bangana // A Proceeding of the 27th Annual conference. Nigerian Society of Animal Production held at FUTA. -2002.-P. 50-53.

216.Tanko Y. Analgesic and anti-inflammatory activities of ethanol seed extract of N. sativa (black cumin) in mice and rats / Y. Tanko, A. Mohammed, M.A. Okasha, A. Shuaibu, M.G. Magaji, A.H. Yaro // Eur J Sci Res. -2007. -V.l8. -P. 277-281.

217.Thanaboripat, D. Importance of aflatoxins / D. Thanaboripat // Science J.-2002.-Vol.2.-P. 38-45.

218.Tietz N.M. Textbook of clinical chemistry / N.M. Tietz // W.B. Saunders Co. 1983. -244c.

219.Tijerino A. Overexpression of the Trichoderma brevicompactum tri5 Gene: Effect on the Expression of the Trichodermin Biosynthetic Genes and on Tomato Seedlings / A. Tijerino, R. Hermosa, R.E. Cardoza, J. Moraga, M.G. Malmierca, J. Aleu, I.G. Collado, E. Monte, S. Gutierrez // Toxins.-2011.-Vol.3.-P. 1220-1232.

220.Tkruri H.R. Study of the nutritional value of black cumin seeds (N. sativa L) / H.R. Tkruri, M.A. Dameh //J.Sci.Food.Agric. -1998. -V.76. -P. 404-410.

221.Torres M.P. Effects of thymoquinone in the expression of mucin-4 in pancreatic cancer cells: implications for the development of novel cancer therapies / M.P. Torres, M.P. Ponnusamy, S. Chakraborty, L.M. Smith, S. Das, H.A. Arafat, S.K. Batra // Mol. Cancer Ther. -2010. -V. 9. - P. 1419-1431.

222.Treasure J. Urtica semen reduces serum creatinine levels / J. Treasure // J. Am. Herbal. Guild. - 2003. - V.4. - P. 22-25.

223.Tsuna\vaki S. Fungal metabolite gliotoxin inhibits assembly of the human respiratory burst NADPH oxidase / S.Tsunawaki, L.Yoshida, S .Nishida, T. Kobayashi, T.Shimoyama // Infect Immun. - 2004. - V.72. -P. 3373-3382.

224.Turkdogan M.K. The role of antioxidant vitamins (C and E), selenium and N. sativa in the prevention of liver fibrosis and cirrhosis in rabbits / M.K. Turkdogan, Z. Agaoglu, Z. Yener, R. Sekeroglu, H.A. Akkan, M.E. Avci // New hopes, Dtsch Tierarztl Wochenschr. -2001. -V.l08. -P. 71-73.

225.Ujvary I. Psychoactive natural products: overview of recent developments / I. Ujvary // Ann 1st Super Sanita. - 2014. - V.50. - P. 12-27.

226.VinaIe, F. Trichoderma-plant-pathogen interactions / F.Vinale, K. Sivasithamparam, E.L. Ghisalberti, R. Marra, M.J. Barbetti, H. Li, S.L. Woo, M. Lorito // Soil Boil. Biochem. -2008a. -№ 40. -P.l-10.

227.Viterbo A. Expression regulation of the endochitinase chit36 from Trichoderma asperellum (7! harzianumT-203) / A. Viterbo, M.Montero, O. Ramot, D. Friesem, E. Monte, A. Llobell, I. Chet // Curr Genet- 2002. - V. 42. - P. 114122.

228.Walch S. Antioxidant Capacity and Polyphenolic Composition as Quality Indicators for Aqueous Infusions of S. officinalis L. (Sage Tea). / S. Walch, L.Tinzoh, B. Zimmerman, W. Stuhlinger, D. Lachenmeier //Front. Pharmacol. -2011.-V. 2. -P.79-85.

229.Watson A.J. Homologs of aflatoxin biosynthesis genes and sequence of aflR in Aspergillus oryzae and Aspergillus sojae / A.J. Watson, LJ. Fuller, D.J. Jeenes, D.B. Archer //Appl. Environ. Microbiol. -1999. -V.65. -P. 307-310.

230.Wipf P. Chemistry and biology of wortmannin / P. Wipf, R. Halter // Org Biomol Chem. - 2005. -PubMed: 15917886.

231.Worthen D.R. The in viti-o anti-tumor activity of some crude and purified components of blackseed, N. sativa L. / D.R. Worthen, O.A. Ghosheh, P.A. Crooks // Anticancer Res.-l998. -V. 18. -P. 1527-1532.

232.Xi-wen L.I. Salvia L. // Li Xi-wen, I.C. Hedge// Flora of China. - 1994. -V.17. -P. 195-222.

233.Yadav S. In Vitro antioxidant Properties of Salvia coccinea Buchozex and S. officinalis L / S. Yadav, U. Mukundan // Indian J. Fundam. Appl. Life Sci. -2011.-V.l.-P. 232-238.

234.Yurtseven S. Effect of Sage Extract (S. officinalis) on Growth Performance, Blood Parameters, Oxidative Stress and DNA Damage in Partridges / S. Yurtseven, M. Cetin, T. Sengiil, B. Sogut // Afr. J. Anim. Sci. -2008. -V.38. -P. 145-152.

235.Zaman R. Gastroprotective and anti-secretory effect of N. sativa seed and its extracts in indomethacin-treated rats / R. Zaman, M.S. Akhtar //Pak J Biol Sci. -2004.-V.7.-P. 995-1000.

236.Zuridah H. in vitro antibacterial activity N. sativa against Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumonia, Escherichia Coli and Bacillus cereus / H. Zuridah, A.R.M. Fairuz, A.H.Z. Zakri, M.N.A. Rahin // Asian J Plant Sci. -2008. -V.7. -P.331-333.