Изучение влияния некоторых синаптотропных веществ на тромбоцитарную активность: Экспериментальное исследование тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.25, кандидат биологических наук Сакаев, Марат Рустамович

• Сакаев, Марат Рустамович
• кандидат биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Сакаев, Марат Рустамович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Структурные и морфологические особенности тромбоцитов.

1.2 Рецепторы, ГТФ-связывающие белки и эффекторные системы тромбоцитов.П

1.3 Механизмы регуляции внутриклеточной концентрации кальция.

1.4 Значение механизмов сигнальной трансдукции.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1 Оценка влияния пуриновых нуклеотидов на кинетические параметры активации и агрегации тромбоцитов.

3.2 Изучение влияния блокаторов кальциевых каналов на кинетику активации и агрегации тромбоцитов.

3.3 Исследование влияния БАВ, изменяющих внутриклеточную концентрацию циклических нуклеотидов, на функциональную активность тромбоцитов.

3.4 Изучение влияния биологически активных веществ на функциональную активность тромбоцитов в условиях обращенного ЗМа+/Са2+-обмена.

3.5 Изучение влияния агониста к-опиатных рецепторов U50488 на кинетику активации и агрегации тромбоцитов.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ Аагр - полнота агрегации

А - интенсивность рассеянного света в угле 12 градусов А - интенсивность рассеянного света в угле 2 градуса лА - прирост интенсивности светорассеяния

Са ]; - внутриклеточная концентрация ионов кальция

Са2+]0 - концентрация ионов кальция в среде

ЕС.so - концентрация БАБ, необходимая для достижения половины максимального эффекта

Ктах - константа Михаэлиса к - временная констатнта

Na+], - внутриклеточная концентрация ионов натрия

Na+]0 - концентрация ионов натрия в среде рН/ - внутриклеточная величина рН

PRP - плазма, обогащенная тромбоцитами ti/2 - период полуразвития рефрактерного состояния

Т - время пребывания тромбоцитов в активированном состоянии

У max - максимальная скорость ферментативной реакции

АДФ - аденозин-5-дифосфат

АТФ - аденозинтрифосфат

ГДФ - гуанозин-5-дифосфат

ГТФ - гуанозинтрифосфат цАМФ - циклический аденозин-3,5-монофосфат цГМФ - циклический гуанозин-3,5-монофосфат

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение влияния некоторых синаптотропных веществ на тромбоцитарную активность: Экспериментальное исследование»

Актуальность проблемы. В настоящее время внутриклеточная сигнализация является наиболее популярной моделью как для изучения механизма действия БАВ, так и для скрининга новых лекарственных препаратов. Она позволяет оценить влияние исследуемых веществ на мембранные рецепторы, Са2+- и фосфоинозитольный обмены, а также ферменты, участвующие в синтезе и разрушении вторичных посредников (2).

Одним из объектов, на которых проводятся эти исследования, являются тромбоциты. Эти клетки представляют собой возбудимую популяцию форменных элементов крови, ответственную за процессы коагуляции, репарации сосудистой стенки, депонирование и транспорт БАВ, осуществление иммунных реакций организма (138). Такая полифункциональность тромбоцитов обусловлена существованием на их мембране множества разнообразных рецепторных комплексов. Выявлено более 20 участков связывания БАВ различной химической природы (пуринов, катехоламинов, производных триптофана, простагландинов, пептидов и проч.) (41, 51, 87, 89, 126, 138).

5 У

Исследования действия БАВ на рецепторы тромбоцитов включают не только трудоемкие радиолигандные методы, но и оценку влияния изучаемых веществ на процессы агрегации. Как правило, для этого используется традиционный метод Борна (38). К сожалению, данный метод малочувствителен к стадии активации тромбоцитов (37), на которой происходит трансдукция сигнала от комплекса лиганд-рецептор по системе внутриклеточной сигнализации, что создает трудности в оценке влияния на нее БАВ.

Деркачевым Э.Ф. и др. (9) был разработан новый способ независимой регистрации активации и агрегации тромбоцитов методом малоуглового рассеяния, который позволяет проводить количественную оценку действия биологически активных веществ на тромбоциты без предварительной отмывки клеток от плазмы и при физиологической концентрации ионов кальция в среде.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось выяснение закономерностей действия некоторых синаптотропных веществ на внутриклеточные сигнальные системы тромбоцитов методом малоуглового светорассеяния.

В задачи исследования входили:

1. Оценка эффективности действия пуриновых нуклеотидов на Р2-рецепторы тромбоцитов.

2. Исследование механизма подавления блокаторами кальциевых каналов агрегации тромбоцитов.

3. Изучение влияния БАВ, изменяющих концентрацию циклических нуклеотидов, на кинетические параметры активации и агрегации тромбоцитов.

4. Изучение влияния БАВ и условий среды на функциональную н- 2+ активность тромбоцитов в условиях обращенного 3Na /Са -обмена.

5. Исследование механизма действия агониста /с-опиатных рецепторов U50488 на тромбоциты.

6. Изучение условий перехода клеток в рефрактерное состояние.

Научная новизна. Впервые изучен диапазон полумаксимальных эффективных концентраций пуринов на стадиях активации и агрегации тромбоцитов. Определена чувствительность трех типов пуриновых Р2-рецепторов к АДФ. Установлено, что АТФ является парциальным агони-стом P2Yj-рецепторов тромбоцитов.

Показано, что катехоламины неконкурентно, а селективные адрено-миметики конкурентно модулируют активацию тромбоцитов, индуцированную АДФ.

Установлено, что факторы, повышающие внутриклеточную концентрацию ионов Na+ (преинкубация клеток с уабаином или моненсином) увеличивают скорость обращенного 3Na /Са -обмена.

Установлено, что активированные тромбоциты в отсутствии дополнительного стимула переходят в рефрактерное состояние.

Научно-практическая значимость. Полученные результаты расширяют представления о механизмах изменения концентрации внутриклеточного Са2+ в тромбоцитах при их рецептор-зависимой активации, а также в результате изменения ионного транспорта. Это позволяет выработать стратегию изучения действия БАВ на внутриклеточные сигнальные системы тромбоцитов. j 'у |

Разработан метод исследования 3Na /Са -обмена в тромбоцитах, позволяющий оценивать пригодность клеток для изучения рецепторных механизмов.

Представленная модель развития рефрактерного состояния тромбоцитов дает возможность объективно оценивать полученные результаты и может использоваться при изучении механизмов патологических состояний.

Апробация работы. Результаты диссертационной работы были доложены на VI Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1999); Международной конференции "Фармация в XXI веке: инновации и традиции" (С-Петербург, 1999); на заседании секции "Экологическая физиология" ИЭФБ им. И.М. Сеченова РАН (С-Петербург, 1999). 8

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения результатов и их обсуждения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 115 страницах, содержит 2 таблицы, 27 рисунков. Библиографический указатель включает в себя 164 источников литературы, в том числе 136 на иностранных языках.

Заключение диссертации по теме «Фармакология, клиническая фармакология», Сакаев, Марат Рустамович

ВЫВОДЫ

1. Пуриновые Р2-рецепторы тромбоцитов по чувствительности к АДФ располагаются в следующем порядке: P2Xi > P2Yi > v2yadp- АТФ проявляет свойства парциального агониста не только в отношении Р2Х]-рецепторов, но и в отношении P2Y]-рецепторов тромбоцитов. По эффективности действия на стадию активации пуриновые нуклеотиды располагаются в следующем порядке: АДФ > АТФ > L-Ду-метилАТФ.

2. Подавление нифедипином и дилтиаземом активации тромбоцитов крысы под действием АДФ обусловлено непосредственным угнетением кальциевых каналов, сопряженных с Р2Х1-рецепторами.

3. Катехоламины не конкурентно усиливают активацию тромбоцитов крысы под действием АДФ. Селективные «2- и /?2-адреномиметики модулируют активацию и агрегацию тромбоцитов крысы под действием АДФ по конкурентному типу: агонист а2-адренорецепторов клофелин уменьшает, а агонист /?2-адренорецепторов гинипрал увеличивает значение ЕС$о АДФ. Сходным с гексоприналином образом действуют агонист А2д-рецепторов аденозин, активатор аденилатциклазы форсколин и донор NO -нитропруссид натрия.

4. Активация тромбоцитов в KCl-среде, вызванная обращением натрий-кальциевого обмена, снижается при закислении среды. В условиях обращенного 3Na+/Са2+-обмена аденозин угнетает скорость активации тромбоцитов, а преинкубация клеток с уабаином или моненсином приводит к его усилению.

5. Агонист /с-опиатных рецепторов U50488 вызывает сферизацию тромбоцитов за счет мобилизации кальция из внутриклеточных депо и угнетает агрегацию посредством активации аденилатциклазы.

98

6. Активированные тромбоциты при отсутствии дополнительного стимула переходят в рефрактерное состояние. Скорость развития этой реакции зависит от степени активированности клеток.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Сакаев, Марат Рустамович, 2000 год

1. Авдонин П.В. и др. Потенциирование активатором протеинкиназы С форболовым эфиром действия простагландина Е2 на тромбоциты человека / Авдонин П.В., Бугрий Е.М., Ткачук В.А., Мазаев А.В. // ДАН СССР. 1986. Т.286. С. 746 - 749.

2. Авдонин П.В.Ткачук В.А. Рецепторы и внутриклеточный кальций. -М.: Наука, 1994.-288 с.

3. Авцын А.П. Шахманов В.А. Ультраструктурные основы патологии клетки. М.: Медицина, 1979. - 320 с.

4. Албертс Б., Брей Д., Льюис Дж., Рэфф М., Роберте К., Уотсон Дж. Молекулярная биология клетки. Том 2. М.: Мир, 1994 - 540 с.

5. Веренинов А.А., Марахова И.И. Транспорт ионов у клеток в культуре. -Л.: Наука, 1986. 292 с.

6. Гаврилов O.K., Козинец Г.Н., Черняк Н.Б. Клетки костного мозга и периферической крови. М.: Медицина, 1985. - 288 с.

7. Геннис Р. Биомембраны: Молекулярная структура и функции. М.: Мир, 1997. - 624 с.

8. Деркачев Э.Ф., Миндукшев И.В., Кривченко А.И., Крашенинников А.А. "Способ исследования активации и агрегации тромбоцитов" Патент RU 2108579 С1 6 G01 N 33/49. 1998. Б.И. № 10 (II). С. 298.

9. Духанин А.С., Губаева Ф.Р. Фармакологическая регуляция активности тромбоцитов // Экспер. и клин, фармакол. 1998. № 4. С. 66-71.

10. Игнатов Ю.Д., Петрищев Н.Н., Митрейкин В.Ф. Влияние морфина и пентазоцина на функциональную активность тромбоцитов // Экспер. и клин, фармакол. 1997. № 4. С. 42 45.

11. Костюк П.Г. Кальций и клеточная возбудимость. М.: Наука, 1986. -255 с.

12. Крутецкая З.И. Лебедев О.Е. Структурно-функциональная организация G-белков и связанных с ними рецепторов. // Цитология. 1992 Т.34 №11/12. С.24-45.

13. Крутецкая З.И., Лебедев О.И. Метаболизм фосфоинозитидов и формирование кальциевого сигнала в клетках // Цитология. 1992. Т. 34. № 10. С. 26-44.

14. Левицкий Д.О. Кальций и биологические мембраны. М.: Высш. Шк, 1990. - 124 с.

15. Миндукшев И.В. Исследование кинетики активации и агрегации тромбоцитов методом малоуглового светорассеяния. Специальность 03.00.02 биофизика. Дис. на соиск. учен. степ. канд. биол. наук. - СПб.: СпбГУ, 1996. - 103 с.

16. Пермяков Е.А. Кальций-связывающие белки. М.: Наука, 1993. - 192 с.

17. Самаль А.Б., Черенкевич С.Н., Хмара Н.Ф. Агрегация тромбоцитов: методы изучения и механизмы. Мн.: Университетское из-во, 1990. -104 с.

18. Северин Е.С. Избирательная регуляция клеточного метаболизма. М.: Наука, 1991.-63 с.

19. Северина И.С. Растворимая форма гуанилатциклазы в молекулярном механизме физиологических эффектов окиси азота и в регуляции процесса агрегации тромбоцитов // Бюл. экспер. биол. 1995. №3. С.230 -235.

20. Ткачук В.А. Гормональная регуляция транспорта Са2+ в клетках крови и сосудов // Росс, физиол. журн. 1998. Т. 84. № 10. С. 1006 1018.

21. Ткачук В.А. Мембранные рецепторы и внутриклеточный кальций // Биол. мембраны. 1999. Т. 16. № 2. С. 212 229.

22. Фултон А. Цитоскелет. Архитектура и хореография клетки. М.: Мир, 1987. - 120 с.

23. Хухо Ф. Нейрохимия: Основы и принципы. М.: Мир, 1990. -384 с.

24. Чирков Ю. Ю., Белушкина Н. Н., Тыщук И. А. и др. Роль гуанилатциклазы в регуляции агрегации тромбоцитов человека. // Вестн. АМН СССР. 1991. №10. С51-54.I

25. Authi K.S. Са homeostasis and intracellular pools in human platelets // Adv. Exp. Med. Biol. 1993. V. 344. P. 83 104.

26. Beavo J.A. Multiple isoensimes of cyclic nucleotide phosphodiesterase, // Adv. Second Messenger Phosphoprotein Res. 1988. V.22. P. 1-38

27. Beavo J.A., Reifsnyder D.H. Prymary sequence of cyclic nucleotide phosphodiesterase isoensimes and the design of selective ingibitors // Trends Pharmacol. Sci. 1990. V.11.N4.P. 150-155.

28. Bentley J.K., Beavo J.A. Regulation and Function of cyclic nucleotides // Curr. Opin. Cell. Biol. 1992. V. 4. №2. P. 233-240.

29. Berridge M.J., Irvine R.F. Inositol phosphoates and cell signalling // Nature. 1989. V.341. P. 197 205.

30. Beukers M.W., Pirovano I.M., van Weert A., Kerkhof C.J. Characterization of ecto-ATPase on human blood cells. A physiological role in platelet aggregation? // Biochem. Pharmacol. 1993. V. 46. №11. P. 1959 1966.

31. Bian J.S., Wang H.X., Zhang W.M. Effects of kappa-opioid receptor stimulation in the heart and the involvement of protein kinase С // Br. J. Pharmacol. 1998. V. 124. №3. P. 600 606.

32. Bishop W.R., Bell R.M. Attenuation of 8sn-l,2-diacylglycerol second messengers by diacylglycerol kinase. Inhibition by diacylglycerol analogs in vitro and in human platelets // J. Biol. Chem. 1986. V. 261. P. 6993 -7000.

33. Born G.V.R. Observations on the change in shape of blood platelets brought about by adenosine diphosphate // J. Physiol. (London). 1970. V.209. P. 487-511.

34. Born G.V.R., Cross M.J. The aggregation of blood platelets // J.Physiol. (London). 1963. V.168. P.178 195.

35. Boyer J.L., Graber S.G., Waldo G.L., Harden Т.К., Garrison J.C. Selective activation of phospholipase С by recombinant G-protein alpha- and beta gamma-subunits// J. Biol. Chem. 1994. V. 269. №4. P. 2814 2189.

36. Brass L.F., Hoxie J.A., Kiber-Emmons Т., Manning D.R. Agonist receptors and G protein as modulators of platelet activation // Mechanisms of platelet activation and control. New York: Plenum Press, 1993. - P.17 - 36.

37. Bylund D.B. Subtypes of ar and a2-adrenergic receptors // FASEB J. 1992. V. 6. P. 832-839.

38. Bylund D.B., Eikenberg D.C., Hieble J.P., Langer S.Z., Lefkowitz R.J. IV. International union of pharmacology nomenclature of adrenoceptors // Pharmacol. Rev. 1994. V. 46. №2. P. 121 136.

39. Camps M., Hou C., Sidiropoulos D., Stock J.B., Jakobs K.H. Stimulation of phospholipase С by guanine-nucleotide-binding protein beta gamma subunits // Eur. J. Biochem. 1992. V. 206. №3. P. 821 831.

40. Carlson K.E., Brass L.F., Manning D.R. Thrombin and phorbol esters cause the selective phosphorylation of a G-protein other than Gi in human platelets // J. Biol. Chem. 1989. V.264. P. 13289 13305.

41. Carpenter E., Gent J.P., Peers C. Opioid receptor independent inhibition of Ca2+ and K+ currents in NG108-15 cells by the kappa opioid receptor agonist U50488H// Neuroreport. 1996. V. 7. №11. P. 1809-1812.

42. Castagna M., Taka Y., Kaibuchi K., Sano K., Kikkawa U., Nishizuka Y. Direct activation of calcium-activated, phospholipid-dependent protein kinase by tumor-promoting phorbol esters // J. Biol. Chem. 1982. V. 257. P. 7847-7851.

43. Clapham D.E., Neer E.G. G protein /fy subunits // Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1997. V. 37. P. 167 203.

44. Clapham D.E., Neer E.J. New roles for G-protein beta gamma-dimers in transmembrane signalling // Nature. 1993. V. 365. №6445. P 403 406.

45. Coade S.B., Pearson J.D. Metabolism of adenine nucleotides in human blood // Circ. Res. 1989. V. 65. №3. P. 531 537.

46. Da Prada M., Cesura A.M., Launay J.M., Richards J.G. Platelets as a model for neurones? // Experientia. 1988. V. 44. № 2. P. 115 126.

47. Daniel J.L., Adelstein R.S. Isolation and properties of platelet myosin light chain kinase// Biochemistry. 1976. V. 15. P. 2370-2377.

48. Daniel J.L., Dangelmaier C., Jin J., Ashby B. Molecular basis for ADP-induced platelet activation: I. Evidence for three distinct ADP receptors on human platelets // J. Biol. Chem. 1998. V. 273. P. 2024 2029.

49. Dhawan B.N., Cesselin F., Raghubir R., Reisne Т., Bradley P.В., Portho-gese P.S. Imternational union of pharmacology. XII. Classification of opioid receptors // Pharmacol. Rev. 1996. V. 48. № 4. P . 567 592.

50. Doyle V.M., Ruegg U.T. Lack of evidence for voltage dependent calcium channels on platelets // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1985. V. 127. №1. P. 161-167.

51. Dubyak G.R., el-Moatassim C. Signal transduction via P2-purinergic receptors for extracellular ATP and other nucleotides // Am. J. Physiol. 1993. V. 265. P. 577-606.

52. Enouf J., Bobe R., Lacabaratz-Porret C., Bredoux R. The platelet Ca2+ transport ATPase system//Platelets. 1997. V.8. P. 5 13.

53. Fay S.P., Posner R.G., Swann W.N., Sklar L.A. Real-time analysis of the assembly of ligand, receptor, and G protein by quantitative fluorescence flow cytometry // Biochemistry. 1991. V. 30. P. 5066 5075.

54. Ferris C.D., Huganir R.L., Supattapone S., Snyder S. Purifide inositol 1,4,5-trisphosphate receptor mediates calcium flux in reconstituted lipid vesicles // Nature. 1989. V. 342. P. 87 89.

55. Fong H.K.W., Yoshimwoto K.K., Eversol-Cire P., Simon M.G. Identification of a GTP-binding protein subunit that lacks an apparent ADP ribosylation site for pertussis toxin //Proc. Nat. Acad. Sci. 1988. V. 85. P. 5580 -5583.

56. Frassetto S.S., Dias R.D., Sarkis J.J. Characterization of an ATP diphos-phohydrolase activity (APYRASE, EC 3.6.1.5) in rat blood platelets // Mol. Cell Biochem. 1993. V. 129. №1. P. 47 55.

57. Fredholra B.B., Abbracchio M.P., Burnstock G., Daly J.W. VI. Nomenclature and classification of purinoceptors. // Pharm.Rev. 1994. V. 46. №2. P. 143-156.

58. Frojmovic M.M., Milton J.G. Human platelet size, shape, and related functions in health and disease // Physiolog. Rev. 1982. V. 62. №1. P. 185 -261.

59. Gachet C., Cazenave J. P., Ohlmann P. ADP receptor-induced activation of guanine-nucleotide-binding proteins in human platelet membranes // Eur. J. Biochem. 1992. V. 207. №1. P. 259 63.

60. Geiger J., Nolte C., Butt E., Sage S.O. Role of cGMP and cGMP-dependent protein kinase in nitrovasodilator inhibition of agonist-evoked calcium elevation in human platelets // Proc. Natl. Acad. Sci. 1992. V. 89. № 3. P. 1031 1035.

61. Geiger J., Nolte C., Walter U. Regulation of calcium mobilisation and calcium entry in human platelet by cyclic nucleotide-elevating and endotelium deriving factors // Am. J. Physiol. 1994. V. 267. P. 236 244.

62. Geiger J., Walter U. Properties and regulation of human platelet cation channels // EXS. 1993. V. 66. P. 281- 288.

63. Hallam T.J., Rink T.J. Responses to adenosine diphosphate in human platelets loaded with the fluorescent calcium indicator quin2 // J. Physiol, (bond). 1985. V. 368. P. 131 146.

64. Hallbriigge M., Walter U. The regulation of platelet function by protein kinases // Protein kinases In Blood Cell Function. USA.: CRC Press, 1993. -P. 32 -45.

65. Herbert J.M., Augereau J.M., Gleye J., Maffrand J.M. Chelerythryne is a potent and specific inhibitor of protein kinase С // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1990. V. 172. № 3. P. 993 999.

66. Hilgemann D.W., Matsuoka S., Nagel G.A. Collins A. Steady-state and dynamic properties of cardiac sodium-calcium exchange. Sodium-dependent inactivation // J. Gen. Physiol. 1992. V.100. № 6. P. 905 932.

67. Honore' H., Martin C., Mironneau C., Mironneau J. An ATP-sensitive conductance in cultured smooth muscle cells from pregnant rat myometrium // Am. J. Physiol. 1989. V. 257. P. 294 305.

68. Hourani S. M., Hall D. A. Receptors for ADP on human blood platelets // Trends Pharmacol. Sci. 1994. V.15. P. 103 108.

69. Hourani S.M.O., Hall D.A. P2T purinoceptors: ADP receptors on platelets // P2 Purinoceptors: Localization, Function and Transduction Mechanisms. -Chichester: John Wiley & Sons, 1996. P. 53 - 70.

70. Hussain J.F., Mahaut-Smith M.P. Reversible and irreversible intracellular Ca2+ spiking in single isolated human platelets // J. Physiol. (London). 1998. V. 514. P. 713-718.

71. Jin J., Daniel J.L., Kunapuli S.P. Molecular basis for ADP-induced platelet activation: II. The P2Yrreceptor mediates ADP-induced intracellular calcium mobilization and shape change in platelets // J. Biol. Chem. 1998. V. 273. P. 2030-2034.

72. Johansson J.S., Haynes D.H. Cyclic GMP increasas the rate of the calcium extrusion pump in intact human platelets but has no direct effect on the dense tubular calcium accumulation system // Biochim. Byophis. Acta. 1992. V. 1105. P. 40-50.

73. Johansson J.S., Neid L.E., Haynes D.H. Cyclic AMP stimulates Ca2+-ATPase mediated Ca2+ extrusion from human platelets // Biochim. Byophis. Acta. 1992. V. 1105. P. 19-28.

74. Johnson G.J., Leis L.A., Francis G.S. Disparate effects of the calcium-channel blockers, nifedipine and verapamil, on alpha 2-adrenergic receptors and thromboxane A2-induced aggregation of human platelets // Circulation. 1986. V. 73. №4. P. 847-854.

75. Kaneko S, Nakamura S, Adachi K, Akaike A, Satoh M Mobilization of intracellular Ca2+ and stimulation of cyclic AMP production by kappa opioid receptors expressed in Xenopus oocytes // Brain Res Mol Brain Res. 1994. V. 27. №2. p. 258-264.

76. Kaneko S., Fukuda K., Yada N., Akaike A. Ca2+ channel inhibition by kappa opioid receptors expressed in Xenopus oocytes // Neuroreport. 1994. V. 5. №18. P. 2506-2508.

77. Kanemasa Т., Asacura K., Ninomiya M. kappa-opioid agonist U50488 in1. Л Ihibits P-type Ca channels by two mechanisms // Brain Res. 1995. V. 702. №1-2. P. 207-212.

78. Katz A., Wu D., Simon M.I. Subunits beta gamma of heterotrimeric G protein activate beta 2 isoform of phospholipase С // Nature. 1992. V. 360. № 6405. P. 686-689.

79. Katz A.M. Cardiac ion channels // N. Engl. J. Med. 1993. V. 328. №17. P. 1244-1251.

80. Kenakin T. The classification of seven transmembrane receptors in recombinant expression systems //Pharmacol. Rev. 1996. V. 48. № 3. P.413 463.

81. Kerry R., Scrutton M.C. Platelet adrenoceptors // The platelets: physiology and pharmacology. New-York: Academic Press, 1985. - P. 113 - 156.

82. Kerry R., Scrutton M.C. Platelet ^-adrenoceptors // Br. J. Pharmacol. 1983. V. 79. P. 681-691.

83. Kerry R., Scrutton M.C., Wallis R.B. Mammalian platelet adrenoceptors // Br. J. Pharmacol. 1984. V.81. P. 91 102.

84. Knapp R.J., Malatynska E., Collins N., Fang L. Molecular biology and pharmacology of cloned opioid receptors // FASEB J. 1995. V. 9. №7. P. 516-525.

85. Koesling D., Bohme E., Schultz G. Guanylyl cyclases, a growing family of signal-transducing enzymes // FASEB J. 1991.V. 5 № 13. P. 2785 2791.

86. Krupinsky J. The adenylyl cyclase family // Mol. Cell. Biochem. 1991. V. 104. P. 73-78.

87. Kunapuli S.P. Multiple P2 receptor subtypes on platelets: A new interprita-tion of their function // Trends Pharmacol. Sci. 1998. V.19. P. 391 394.

88. Lapetina E.G.The signal transduction induced by thrombin in human platelets // FEBS Lett. 1990. V.268. P400 404.

89. Lawrence D.M., Joseph D.B., Bidlack J.M. Kappa opioid receptors expressed on three related thymoma cell lines. Differences in receptor-effector coupling // Biochem. Pharmacol. 1995. V. 49. №1. P. 81 89.

90. Lenox R.H., Ellis J., van Rippen D., Ehrlich Y.H. Alpha2-adrenergic receptor-mediated regulation of adenylate cyclase in the intact human platelet. Evidence for a receptor reserve // Mol. Pharmacol. 1985. V. 27. P. 1 9.

91. Leon C., Hechler В., Vial C., Gachet C. The P2Y1 receptor is an ADP receptor antagonized by ATP and expressed in platelets and megakaryoblastic cells // FEBS Lett. 1997. V. 403. P. 26 30.

92. Li C., Peoples R.W., Weight F.F. Mg2+ inhibition of ATP-activated current in rat nodose ganglion neurons: Evidence that Mg2+ decreases the agonist affinity of the receptor//J. Neurophysiol. 1997. V. 77. P. 3391 3395.

93. Lincoln T.M., Cornwell T.L. Intracellular cyclic GMP receptor protein // FASEB J. 1993. V.7. P. 328 338.

94. Livne A., Grinstein S., Rothstein A. Characterization of Na/H exchange in platelet // Thromb. Haemost. 1987. V. 58. №4. P. 971 977.

95. Livne A., Grinstein S., Rothstein A. Volume-regulating of human platelets //J. Cellular Physiol. 1987. V. 131. P. 354-363.

96. Maclntyre D.E., McNicol A., Drummond A.H. Tumour-promoting phorbol esters inhibit agonist-induced phosphatidate formation and Ca2+influx in human platelets //FEBSLett. 1985. V.180. P. 160-164.

97. MacKenzie A.B., Mahaut-Smith M.P. Chloride channels in excised membrane patches from human platelets: effect of intracellular calcium // Biochim. Biophys. Acta. 1996. V. 1278. № 1. P. 131 136.

98. Mahaut-Smith M.P. Chloride channels in human platelets: evidence for activation by internal calcium // J. Membr. Biol. 1990. V. 118. P. 69-75.

99. Mahaut-Smith M.P., Sage S.O., Rink T.J. Rapid ADP-evoked currents in human platelets recorded with the nystatin permeabilized patch technique // J. Biol. Chem. 1992. V. 267. P. 3060 3065.

100. Mahaut-Smith M.P., Sage S.O., Rink T.J. Receptor-activated single channels in intact human platelets // J. Biol. Chem. 1990. V. 265. P. 10479 -10483.

101. Marcus A.J., Safier L.B. Tromboregulation: multicellular modulation of platelet reactivity in hemostasis and thrombosis // FASEB J. 1993. V. 7. P. 516-522.

102. Mechrishi J.N., Mills I.H. Opiate receptors on lymphocytes and platelets in man // Clin. Immunol. Immunopathol. 1983. V. 27. №2. P. 240 249.

103. Meng F., Xie G-X. Thompson R.C., Mansour A. Cloning and pharmacological characterization of a rat kappa opioid receptor // Proc. Natl. Acad. Sci. 1993. V. 90 №21. P. 9954 9958.

104. Moncada S., Palmer R.M.J., Higgs E.A. Nitric oxide: physiology, pathophysiology and pharmacology //Pharmacol. Rev. 1991. V. 43 №2. P. 109 -114.

105. Mooren F.C. Kinne R.K.H. Cellular calcium in health and disease // Biochem. Biophys. Acta. 1998. V. 1406. P. 127 151.

106. Motulsky H.J., Shattil S.J., Insel P. A. Characterization of «2-adrenergicлreceptors on human platelets using H.yohimbine // Biochem. Biophys. Res. 1980. V. 97. P. 1562 1570.

107. Nachmias V.T. Cytoskeleton of human platelets at rest and after spreading // J.Cell Biol. 1980. V. 86. P. 795 802.

108. Nahorski S.R., Barnette D.B., Cheung Y.-D. Alpha-adrenergic receptor effector coupling: affinity states or heterogenity of the alpha-2 adrenergic receptor? // Clin. Sci. 1985. V. 68. P. 39 42.

109. Neubig R.R. Membrane organization in G-protein mechanisms // FASEB J. 1994. V. 8. №12. P. 939-946.

110. Neubig R.R., Gantzos R.D., Thomsen W.J. Mechanism of agonist and antagonist binding to alpha-2-adrenergic receptors: evidence for a precoupled receptor-guanine nucleotide protein complex // Biochemistry. 1988. V. 27. №7. P. 2374-2384.

111. Nicholson C.D., Challiss R.A., Shahid M. Differential modulation of tissue function and therapeutic potential of selective inhibitors of cyclic nucleotide phosphodiesterase isoenzymes // Trends Pharmacol. Sci. 1991. V. 12. №1. P. 19-27.

112. Nishizuka Y. The role of protein kinase С in cell surface signal transduction and tumor promotion //Nature. 1984. V. 308. P. 693 698.

113. Olashaw N.E., Rhee S.G., Pledger W.J. Cyclic AMP agonists induce the phosphorylation of phospholipase C-tau and of a 76 kDa protein co-precipitated by anti-(phospholipase C-tau) monoclonal antibodies in

114. BALB/c-ЗТЗ cells. Relationship to inositol phosphate formation // Biochem. J. 1990. V. 272. №2. P. 297 303.

115. Ongini E., Fredholm B.B. Pharmacology of adenosine A2a receptors // Trends Pharmacol. Sci. 1996. V. 17. №10. P. 364 372.

116. Park D. J., Min H.K., Rhee S.G. Inhibition of CD3-linked phospholipase С by phorbol ester and by cAMP is associated with decreased phosphotyrosine and increased phosphoserine contents of PLC-gamma 1 // J. Biol. Chem. 1992. V.267 №3. P. 1496 1501.

117. Posner R.G., Fay S.P., Domalewski M.D., Sklar L.A. Continuous spec-trofluorometric analysis of formyl peptide receptor ternary complex interactions // Mol. Pharmacol. 1994. V. 45. №1. P. 65 73.

118. Radomski M.W., Palmer R.M., Moncada S. Characterization of the 1-arginine nitric oxide pathway in human platelets // Br. J. Pharmacol. 1990. V.101.P. 325-328.

119. Ralevic V., Burnstock J. Receptors for purines and pyrimidines // Phar-macol.Rev. 1998. V.50 № 3. P. 415 492.

120. Reimers H.-J. Adenine nucleotide in blood platelets // The platelets: physiology and pharmacology. New-York: Academic Press, 1985. - P. 85 -112.

121. Rens-Domiano S., Hamm H. Structural and functional relationships of heterotrimeric G-protein // FASEB J. 1995. V. 9. P. 1059- 1066.

122. Rink T.J., Smith S.W., Tsien R.Y. Cytoplasmic free Ca2+ in human platelets: Ca thresholds and Ca-independent activation for shape change and secretion // FEBS Lett. 1982. V. 148. P. 21 26.

123. Sage S.O. Calcium entry mechanisms in human platelets // Exp. Physiol. 1997. V. 82. P. 807-823.

124. Sage S.O., MacKenzie A.B., Jenner S., Mahaut-Smith M P. Purinocep-tor-evoked calcium signalling in human platelets // Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids. 1997. V. 57. № 4-5. P. 435 438.

125. Sage S.O., Sargeant P., Heemskerk J.W.M., Mahaut-Smith M.P. Calcium influx mechanisms and signal organization in human platelets. // Mechanisms of platelet activation and control. New York: Plenum Press, 1993. - P. 69 -82.

126. Schmidt H.H., Lohmann S.M., Walter U. The nitric oxide and cGMP signal transduction system: regulation and mechanism of action // Biochim Biophys Acta. 1993. V. 1178. №2 P. 153 175.

127. Scrutton M.C. The platelet as Ca -driven cell: Mechanisms which may1. Л Imodulate Ca -driven responses // Mechanisms of platelet activation and control. New York: Plenum Press, 1993. - P.l - 15.

128. Shattil S.J., Kashiwagi H., Pampori M. Integrin signalling: The platelet paradigm // Blood. 1998. V.91. P. 2645 2657.

129. Sheng J.Z., Wong N.S., Wang H.X., Wong T.M. Pertussis toxin, but not tyrosine kinase inhibitors, abolishes effects of U-50488H on Ca2+., in myocytes // Am. J. Physiol. 1997. V. 272. №2. P. 560 564.

130. Sheu S.S., Sharma V.K., Uglesity A. Na+-Ca2+ exchange contributes to increase of cytosolic Ca2+ concentration during depolarization in heart muscle// Am. J. Physiol. 1986. №4. P. 651 -656.

131. Siess W. Molecular mechanisms of platelet activation. //Physiol. Rev. 1989. V.69. № 1. P. 58- 178.

132. Siess W., Grundberg В., Luber K. Functional relationship between cyclic AMP-dependent protein phosphorylation and platelet inhibition // Mechanisms of platelet activation and control. New York: Plenum Press, 1993. -P. 229-235.

133. Siffert W., Akkerman J.W.N. Activation of sodium-proton exchange is a prerequisite for Ca2+ mobilisation in human platelets // Nature. 1987. V. 325. P. 456-458.

134. Siffert W., Akkerman J.W.N. Intracellular pH and cytoplasmatic free Ca2+ //Nature. 1987. V. 327. P. 376.

135. Siffert W., Akkerman J.W.N. Na+/H+-exchange as a modulator of platelet activation//Trends Pharmacol. Sci. 1988. V.13. P. 148 151.

136. Simon M.I., Strathmann M.P., Gautam N. Diversity of G proteins in signal transduction // Science. 1991. V. 252. P. 802 808.

137. Smart D., Lambert D.G. The stimulatory effects of opioids and their possible role in the development of tolerance // Trends in Pharmacol. Sci. 1996. V. 17. №7. P. 264-269.

138. Souslau G., Youngprapakorn D. A possible dual physiological role of extracellular ATP in the modulation of platelet aggregation // Biochim. Bio-phys. Acta 1997. V. 1355. № 2. P. 131 140.

139. Spalding A., Vaitkevicius H., Dill S., MacKenzie S. Mechanism of epinephrine- induced platelet aggregation // Hypertension. 1998. V. 31. P. 603 -607.

140. Takahasi I., Nakanishi S., Kobayashi E., Nakano H. Hypericin and pseu-dohypericin specially inhibit protein kinase C: possible relation to their antiretroviral activity // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1990. V. 165. № 3.P. 1207-1212.

141. Tamaoki Т., Nimoto H., Takahashi N. Staurosporine, a potent inhibitor of phospholipid / Ca -dependent protein kinase // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1986. V.135. P. 397 402.

142. Tang W.J., Gilman A.G. Adenylyl cyclases // Cell. 1992. V. 70. №6. P. 869-872.

143. Tao J., Johansson J.S., Haynes D.H. Stimulation of dense tubular Ca2+ uptake in human platelets by cAMP // Biochim. Biophys. Acta. 1992. V.1105. №1. P. 29 -39.1. J 1

144. Taylor C.W., Broad L.M. Pharmacological analysis of intracellular Ca signalling: problems and pitfalls // Trends Pharmacol. Sci. 1998. V.19. P. 370 -375.

145. Taylor S.J., Che H.Z., Ree S.G. Activation of the beta isozyme of phos-pholipase С by alpha subunits of the Gq class of G proteins // Nature. 1991. V.350. P.516 518.

146. Tremblay J., Gerzer R., Hamet P. Cyclic GMP in cell function // Adv. Second Messenger Phosphoprotein Res. 1988. V. 22. P. 319 -383.

147. Valant P.A., Adjei P.N., Haynes D.H. Rapid Ca2+ extrusion via the Na+/Ca2+ exchange of the human platelet // J. Membr. Biol. 1992. V. 130. №1. P. 63-82.

148. Valant P.A., Haynes D.H. The Ca2+-extruding ATPase of the human platelet creates and responds to cytoplasmic pH changes, consistent with a 2Ca2+/nH+ exchange mechanism // J. Membr. Biol. 1993. V. 136. № 2. P. 215 -230.

149. Ventura C., Spurgeon H., Lakata E.G., Guarneieri C. Kappa and delta opioid receptor stimulation affects cardiac myocyte function and Ca2+ release from an intracellular pool in myocytes and neurons. // Circ. Res. 1992. V. 70. №1. P. 66-81.

150. Von Voigtlahder P.F., Lahti R.A., Ludens J.H. U50,488H, a selective and structurally novel non-mu (kappa) opioid agonist // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1988. V. 245. P. 13-16.

151. Wang L., Gintzler A.R. Bimodal opioid regulation of cyclic AMP formation: implication for positive and negative coupling of opiate receptors to adenylyl cyclase // J. Neurochem. 1994. V. 63. P. 1726 1730.

152. Ware J.A., Johnson P.C., Smith M., Salzman E.W. Inhibition of human platelet aggregation and cytoplasmic calcium response by calcium antagonists: studies with aequorin and quin2 // Circ. Res. V. 59. № 1. P. 39 42.

153. Williams A.G., Ponez M., Manning D.R. Guanine nucleotide binding proteins in platelets and HEL cells // Circulation. 1988. V.78 №2. P. 516 -521.

154. Yamahishi J., Takai Y., Kaibushi K., Sano K. Synergistic function of phorbol ester and calcium in serotonin release from human platelets // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1983. V. 112. P. 778 786.

155. Yu X.C., Li H.Y., Wang H.X., Wong T.M. U50,488H inhibits effects of norepinephrine in rat cardiomyocytes-cross-talk between kappa-opioid and beta-adrenergic receptors // J. Mol. Cell. Cardiol. 1998. V. 30. №2. P. 405 -413.

156. Zhang W.M., Wang H.X. Suppresion of cAMP by phosphoinositol/Ca2+ pathway in the cardiac kappa opioid receptor // Am. J. Physiol. 1998. V. 274. № l.P. 82-87.