Изучение структуры и разработка методов обнаружения, идентификации и количественного определения микотоксинов, продуцируемых некоторыми представителями микроскопических грибов рода FUSARIUM тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Соболев, Виктор Сергеевич

• Соболев, Виктор Сергеевич
• кандидат биологических наук
• 1985

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Соболев, Виктор Сергеевич

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Структура и основные физико-химические свойства трихотеценовых микотоксинов

2.2. Биосинтез трихотеценовых микотоксинов

2.3. Метаболизм трихотеценовых микотоксинов

2.4. Характеристика методических подходов к изучению трихотеценовых микотоксинов

3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

3.1. Обоснование цели и выбора методов исследования

3.2. Материалы и методы исследования

3.2.1. Микологические методы исследования

3.2.1.1. Характеристика субстратов и штаммов 69 грибов, выбранных для исследования

3.2.1.2. Культивирование грибов на субстрате

3.2.1.3. Экстракция токсичных фракций из биоматериала

3.2.2. Хроматографические методы исследования

3.2.2.1. Методы выделения и очистки трихотеце- 74 новых микотоксинов с помощью колоночной хроматографии

3.2.2.2. Препаративное выделение трихотеценовых 77 микотоксинов с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии

3.2.2.3. Анализ трихотеценовых микотоксинов 78 методом тонкослойной хроматографии

3.2.2.3.1. Выбор адсорбента и систем раствори- 78 телей для разделения трихотеценовых микотоксинов в многокомпонентной смеси

3.2.2.3.2. Проявляющие реагенты, использовавшиеся при анализе трихотеценовых микотоксинов методом тонкослойной хроматографии

3.2.2.4. Анализ многокомпонентной смеси, содер- 84 жащей трихотеценовые микотоксины, с помощью газожидкостной хроматографии 3.2.2.4.1. Определение индексов удерживания 87 (Ковача) производных трихотецено-БЫХ микотоксинов

Определение калибровочного коэф- 89 фициента для некоторых трихоте-ценовых микотоксинов группы А по н-трикозану

Расчет содержания трихотеценовых 91 микотоксинов в анализируемом экстракте

Получение летучих производных трихотеценовых микотоксинов

3.2.3. Физико-химические методы исследования

3.2.3.1. Спектрометрия протонного магнитного 92 резонанса (ПМР)

3.2.3.2. Масс- и хромато-масс-спектрометрия

3.2.3.3. Инфракрасная спектрометрия (Ж)

3.2.3.4. Флуороденситометрия

3.2.4. Реагенты, растворители и стандарты трихоте- 93 ценовых микотоксинов

3.3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3,3.1. Разработка метода идентификации и количест- 94 венного определения трихотеценовых микотоксинов с помощью капиллярной газожидкостной хроматографии

3.3.1.1. Принципы подхода к разработке метода 94 анализа многокомпонентной смеси, содержащей трихотеценовые микотоксины

3.3.1.2. Выбор типа летучих производных три- 95 хотеценовых микотоксинов

3.2.2.4.2.

3.2.2.4.3.

3.2.2.4.4.

3.3.1.3. Разработка простого метода получения 97 трифторацетильных производных трихо-теценовых микотоксинов

3.3.1.4. Выбор внутреннего стандарта при ана- 98 лизе трихотеценовых микотоксинов

3.3.1.5. Идентификация трихотеценовых микоток- ЮО синов по параметрам удерживания

3.3.1.6. Определение содержания трихотеценовых 105 микотоксинов в анализируемых экстрактах

3.3.2. Разработка "Методических указаний по обнаруже- щ нию, идетификации и определению содержания

Т-2 токсина в пищевых продуктах и продовольственном сырье"

3.3.3. Изучение ТОКСИНООбраЗОВаНИЯ F.sporotrichiella

3.3.3.1. Изучение компонентного состава-трихоте- 112 ценовых микотоксинов, продуцируемых

19-ю различными штаммами f. sporo-trichieiia с помощью капиллярной газожидкостной хроматографии

3.3.3.2. Изучение токсинообразования p. sporo- 117 trichiella

3.3.3.2.1. Выбор токсигенного штамма 53315 и изу- ц7 чение компонентного состава трихотеценовых микотоксинов, продуцируемых им в условиях максимального токсинообразования

3.3.3.2.2. Выделение токсичного экстракта из суб- цд страта, зараженного штаммом 53315, и его фракционирование на компоненты методом жидкость-жидкостной экстракции

3.3.3.2.3. Изучение токсических свойств фракций, 121 выделенных из зараженного субстрата

3.3.3.2.4. Изучение состава токсичной хлороформ- 122 ной фракции методом капиллярной газожидкостной хроматографии

3.3.3.3. Выделение из зараженного штаммом

53315 зернового субстрата б чистом виде, идентифицированных трихоте-деновых микотоксинов: Т-2, НТ-2, NT -I, неосоланиола, а также двух неидентифицированных токсиновх и Y

3.3.3.3.1. Установление структуры неиден- 129 тифицированного токсина х , продуцируемого P. sporotrichieiia , штамм 53315 и оценка его токсических свойств

3.3.3.3.2. Установление структуры неиден- 135 тифицированного токсина y , продуцируемого f. sporotriciiieiia , штамм 53315 и оценка его токсических свойств

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение структуры и разработка методов обнаружения, идентификации и количественного определения микотоксинов, продуцируемых некоторыми представителями микроскопических грибов рода FUSARIUM»

Среди наиболее опасных загрязнителей пищевых продуктов особое место занимают микотоксины - вторичные метаболиты микроскопических грибов. В настоящее время известно свыше 100 микотоксинов, продуцируемых более 250-тью видами грибов и обладающие высокими токсическими свойствами, а некоторые из них - канцерогенными, мутагенными, тератогенными, эстрогенными свойствами. К особо опасным микотоксинам относят группу трихотеценовых микотоксинов (ТТМТ), включающую в себя более 60-ти представителей ( Bamturg j.r., 1983; Ueno Y., 1983). Внимание к этой группе микотоксинов привлечено ввиду повсеместной распространенности грибов-продуцентов ТТМТ, низкого температурного оптимума образования этих токсинов (климатические условия СССР), высоких токсических свойств и доказательства реальной опасности для здоровья человека (Билай В.И., 1977; Тутельян В.А., Кравченко Л.В., 1985 я).

Продуцентами ТТМТ являются микроскопические грибы родов Fusarium, Myrothecium, Stachy"botris, Trichoderma, Cephalosporium и др., среди которых особенно широко распространены грибы рода Fusarium . Наибольший интерес представляют грибы Fusarium sporo-trichieiia , явившиеся этиологическим фактором алиментарной токсической алейкии (АТА) - тяжелого заболевания людей, а также алиментарных токсикозов животных (Саркисов А.Х., 1945, 1950, 1954; Билай В.И., 1977; Мишустин Е.Н. и соавт., 1946; Олифсон Л.Е., 1965; Рубинштейн Ю.И., Лясс JI.C., 1948). До настоящего времени токсическое начало, вызывавшее АТА, не установлено; в литературе имеются лишь противоречивые данные. Олйфсоном Л.Е., (1965) показано, что токсические свойства зараженного е. sporotrichieiia зерна связаны с токсинами стероидной природы. Котик А.Н. и соавт., Тутельян В.А.,Кравченко Л.В. Микотоксины. М., Медицина, 1985.

1979) и Mirocha C.J. and Pathre s. , (1973) считают, что за развитие симптомокомплекса ATA. ответственны ТТМТ.

В основе строения ТТМТ лежит трициклический скелет - трихо-текан, содержащий 12,13-эпокси-группу. По химической структуре ТТМТ делят на четыре группы (иепо у., i9Q3)

Биосинтез ТТМТ осуществляется терпеноидным путем посредством конденсации трех молекул мевалоната через фарнезил-пирофосфат (Godtfredsen W.O. and Vangedal S., 1965; Achilladelis B.A. et al., 1968, 1972). Следует подчеркнуть, что далеко не все этапы биосинтеза ТТМТ изучены в достаточной степени. В отношении метаболизма ТТМТ также нет полной ясности. Имеющиеся в настоящее время сведения касаются лишь отдельных ТТМТ, главным образом, Т-2 токсина. (Yoshizawa т. et al. , 1980). Показано, что в организме животных Т-2 токсин деацилируется (при участии микросомных ферментов) и может окисляться по боковой цепи с образованием более полярных метаболитов ( Yoshizawa Т. et al., 1980, 1984; Chi M.S. et al., 1978a). Получены также доказательства участия реакции конъюгации в детоксикации Т-2 токсина (Кравченко Л.В. и соавт., 1983, 1984). Важно отметить, что прямое изучение как биосинтеза, так и метаболизма ТТМТ возможно лишь путем идентификации отдельных метаболитов в животных тканях, грибах и других биоматериалах. Для решения этой задачи необходимы высокочувствительные, точные, надежные и хорошо воспроизводимые методы анализа ТТМТ и их метаболитов.

Учитывая, что продуценты ТТМТ могут поражать пищевые продукты, продовольственное сырье и корма на любом этапе их производства и хранения, важной мерой профилактики микотоксикозов является организация контроля за их загрязнением ТТМТ. При этом центральным звеном является разработка высокочувствительных, доступных и нетрудоемких методов их идентификации и количественного определения. В настоящее время в большинстве методик анализа ТТМТ на конечном этапе используются методы тонкослойной хроматографии (ТСХ), газожидкостной хроматографии (ГЖХ) и высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Наиболее чувствительным и селективным методом определения ТТМТ является ГЖХ, однако, большинство работ проведено с использованием наполненных колонок, что снижает эффективность и надежность метода; более перспективным представляется использование капиллярных колонок (Scott p.m. et ai., 1981; swan-son s.p. et ai. , 1983). Основной недостаток ТСХ и ВЭЖХ методов - высокий предел обнаружения, ограничивающий в настоящее время их широкое применение.

Разработка методов анализа, ТТМТ, отвечающих современным требованиям, продолжает оставаться одной из наиболее актуальных проблем в химии ТТМТ.

В связи с вышеизложенным целью настоящей работы явилось:

1. Разработка надежного и чувствительного метода обнаружения, идентификации и количественного определения ТТМТ в пищевых продуктах, продовольственном сырье и кормах с помощью капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ).

2. Изучение с помощью разработанного метода токсигенного потенциала некоторых видов грибов рода Fusarium , выделенных на территории СССР, Канады и Великобритании, и установление состава продуцируемых ими токсинов.

3. Изучение токсинообразования высокотоксигенного штамма 53315 Fusarium sporotrichieiia при культивировании на природном субстрате и выделение в чистом виде продуцируемых им микотоксинов.

4. Поиск и выделение новых ТТМТ, продуцируемых f. sporotri-* chieiia и установление их структуры.

5. Разработка и внедрение в практику органов Госсаннадзора "Методических указаний по обнаружению,идентификации и определению содержания Т-2 токсина в пищевых продуктах и продовольственном сырье".

2, ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Соболев, Виктор Сергеевич

ВЫВОДЫ

1. Разработан новый метод количественного определения трихотеценовых микотоксинов в многокомпонентных смесях (пищевые продукты и продовольственное сырье) с помощью капиллярной ГКХ ТФА-производных,определены параметры удерживания 14-ти трихотеценовых микотоксинов, являющихся надежным критерием их идентификации. Для количественного определения трихотеценов, продуцируемых грибами F. sporotrichiella , найдены калибровочные коэффициенты по внутреннему стандарту н-трикозану,

2. Изучен токсигенный потенциал ряда штаммов f. sporotrichiella и состав продуцируемых ими токсинов. Показано, что более 70% изученных штаммов, выделенных на территории СССР, продуцировали трихотеценовые микотоксины группы А: Т-2 токсин, НТ-2 токсин, NT -I токсин, неосоланиол, Т-2 триол и З-гидрокси-Т-2 токсин.

3. Изучено токсинообразование штамма 53315 P. sporotrichiella при культивировании на природном субстрате. Показано, что вся токсичность зараженного зерна связана исключительно с трихо-теценовыми микотоксинами группы А, прежде всего, - с Т-2 токсином.

4. Из зерна, искусственно зараженного p. sporotrichiella выделены в чистом виде трихотеценовые микотоксины: Т-2 токсин, НТ-2 токсин, NT -I токсин и неосоланиол, которые использовались как стандарты при химических, биохимических и токсикологических исследованиях; их структура подтверждена совокупностью физико-химических методов анализа: ЯМР-, масс-, хромато-масс- и ИК-спек-трометрии.

- 150

5. Впервые обнаружено, что p. sporotrichieiia , штамм 53315 продуцирует ранее неизвестные трихотеценовые микотоксины: 8-(3'-метилбутирилокси)-12,13-эпокситрихотец-9-ен-3,15-триол или Т-2 триол и 4,15-диацетокси-8-(3'-гидрокси-З'-метилбутирилокси)- 12, 13-эпокситрихотец-9-ен-3-ол или 3'-гидрокси-Т-2 токсин, установлена их структура, определены параметры удерживания различных летучих производных этих токсинов при ГЖХ, показана их высокая токсичность для крыс.

6. Разработаны, утверждены Минздравом СССР и внедряются в практику здравоохранения "Методические указания по обнаружению, идентификации и определению содержания Т-2 токсина в пищевых продуктах и продовольственном сырье".

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ТТМТ являются одними из наиболее опасных загрязнителей пищевых продуктов, продовольственного сырья и кормов, отличаются повсеместной распространенностью и выделяются своими высокими токсическими свойствами. В соответствии с целью и задачами исследования был разработан новый метод количественного определения основных ТТМТ групп А и Б с использованием капиллярной ИХ ТФА-про-изводных.

Описанные в литературе ГЖХ методы с применением наполненных колонок ( Swanson s.p. et ai. , 1983) не позволяли отделить основные ТТМТ друг от друга и от мешавших анализу примесей многокомпонентного экстракта, из-за чего их идентификация и количественное определение были затруднены. В результате проведенных исследований показано, что использование высокоэффективных капиллярных колонок с фазами ov -I и ov -101 позволяет полностью разделять основные ТТМТ групп А и В в виде их летучих ТФА-произ-водных, и, что дериваты этого типа являются более устойчивыми соединениями, чем применяемые обычно ТМС-производные, и имеют существенно меньшие параметры удерживания (Эллер К.И.,Соболев B.C., 1983). Был разработан простой и хорошо вопроизводимый метод получения ТФА-производных ТТМТ, основанный на действии трифторукI сусного ангидрида на токсины и экстракты в присутствии безводного карбоната натрия, не дающий побочных летучих продуктов (Эллер К. И.,Соболев B.C., 1983) в отличие от обычно применяющихся пиридина и диметиламина ( scott p.m. et ai. , 1981). Чувствительность разработанного ГЖХ метода определения ТТМТ - 100 мкг/кг по Т-2 токсину с использованием пламенно-ионизационного детектора отвечает современным требованиям,как в плане изучения контаминации ТТМТ пищевых продуктов и кормов, так и в плане изучения метаболизма и биосинтеза этих токсинов. Разработанные на базе этого метода "Методические указания по обнаружению, идентификации и определению содержания Т-2 токсина в пищевых продуктах и продовольственном сырье" позволяют надежно определять менее 50 мкг/кг Т-2 токсина. Метод использует доступное отечественное оборудование и реактивы и может быть достаточно широко использован для контроля за загрязнением пищевых продуктов Т-2 токсином, а также для изучения его тканевого распределения (Тутельян В.А. и соавт., 1984). Было показано, что для надежной идентификации ТТМТ в анализируемых экстрактах предпочтительно использовать параметры удерживания (индексы Ковача) по смеси н-алканов C2j - G3Q. Для ТФА-производ-ных 14-ти ТТМТ групп А и В и их ацетатов определены параметры удерживания при ГКХ, эти данные можно использовать для идентификации ТТМТ, не имея аутентичных стандартов этих токсинов (Соболев B.C. и соавт., 1984). В большинстве работ по ГКХ ТТМТ не приводятся воспроизводимые параметры их удерживания ( Yoshizawa т. et al. , 1980; Kuroda Н. et al. , 1979; Homer Т. К. et al., 1978). Найденные индексы характеризовались высокой воспроизводимостью, при этом, пики всех исследованных ТТМТ эффективно отделялись друг от друга и не накладывались на пики остальных компонентов экстракта. Методом хромато-масс-спектрометрии была подтверждена достоверность идентификации исследованных ТТМТ по параметрам удерживания. Для количественного определения ТТМТ, продуцируемых P. sporotrichiella(Т-2 (16), НТ-2 (15), иТ-1 (19) токсины, нео-соланиол (13), Т-2 триол (14) и З-гидрокси-Т-2 токсин (17)) найдены калибровочные коэффициенты по н-трикозану. Такие данные в литературе отсутствовали. Таким образом, разработан чувствительный, достаточно простой и надежный ГКХ-метод обнаружения, идентификации и количественного определения ТТМТ в растительных субстратах, позволяющий решить поставленные задачи по изучению токси

- 143 генного потенциала и токсинообразования грибов рода Fusarium (Эллер К.И., Соболев B.C., 1983*, Тутельян В.А. и соавт., 1984).

С использованием разработанного метода ГЖХ в данной части работы был изучен токсигенный потенциал грибов рода Fusarium на 19-ти штаммах F. sporotrichieiia ОСНОВНОГО вида И F. sporotrichieiia var. роае И F. sporotrichieiia var. tricinctum путем определения ряда наиболее опасных для здоровья человека и животных ТТМТ, продуцируемый этими грибами (Билай В.И. и соавт., 1983). Как известно, (Билай В.И., 1977; Саркисов А.Х., 1954), грибы рода Fusarium явились этиологическим фактором AIA. Олифсон Л. Е. (1965) предполагал, что ядовитые свойства зараженного f. sporotrichieiia зерна связаны с токсинами стероидной природы. Другие авторы (Котик А.Н. и соавт., 1979; Mirocha c.j. and Pathre s. , 1973) считали, что за развитие этого заболевания ответственны ТТМТ. До настоящего времени не проводилось систематических исследований токсигенного потенциала отечественных штаммов Грибов рода Fusarium.

В настоящей работе при изучении токсигенного потенциала грибов рода Fusarium , выделенных, в основном, на территории СССР установлено, что большее число штаммов продуцировало ТТМТ, преимущественно, Т-2 (16) и НТ-2 (15) токсины. Различные штаммы отличались спектром вторичных метаболитов, в то же время, резко варьировалось количество ТТМТ (от 2 до 286 мг/кг Т-2 токсина (16)). Наиболее активными продуцентами ТТМТ оказались представители Fusarium sporotrichieiia var. роае И F.sporotrichieiia var. tricinctum. В пределах секции sporotrichieiia существует видовая и штаммовая специфичность в отношении токсинообразующей способности; длительное хранение культур (около 30-ти лет) в лабораторных условиях не снизило их способности к токсинообразованию. Впервые было обнаружено (Билай В.И. и соавт., 1983), что независимо от субстрата, региона и времени выделения, более 70% отечественных штаммов Р. sporotrichieiia оказались токсигенными и продуцировали значительные количества ТТМТ (Билай В.И. и соавт., 1983). Одним из наиболее токсигенных оказался штамм 53315 p. sporotrichieiia . В литературе имеются немногочисленные сведения о токсинообразовании грибов рода Pusarium и составе продуцируемых ими токсинов (ueno у. 1983).

Подробное изучение токсинообразования грибов p. sporotric-Meiia штамм 53315 показало (Соболев B.C., и соавт., 1984), что вся токсиносгь зараженного субстрата (пшено) связана с водно-ме-танольной фракцией, из которой токсичный компонент полностью переэкстрагируется хлороформом; по данным ГЖХ ТФА-производных хлороформная фракция содержит более 98% исходного Т-2 токсина (16) и составляет менее 1% от массы зерна. Содержание Т-2 токсина (16) в хлороформной фракции составляет 35% от массы фракции. Проведение токсикологического эксперимента на крысах выявило практически одинаковую степень токсичности как исходного зерна, так и водно-метанольной и хлороформной фракций. После экстракции хлороформом, водно-метанольная фракция, зерно после экстракции водным метанолом и липидная фракция, получаемая экстракцией зерна диэтиловым эфиром оказались нетоксичными при введении животным в тех же количествах. В связи с тем, что токсичность зараженного P. sporotri-cMeiia зерна связана исключительно с хлороформной фракцией, был детально изучен её химический состав с помощью разработанного ГЖХ метода. По параметрам удерживания в хлороформной фракции обнаружены: Т-2 токсин (более 3 г/кг субстрата),,НТ-2 токсин (15),

T-I токсин, неосоланиол (13); кроме того фракция содержала не-идентифицированные вещества, некоторые из них X ( = 0.773) и у ( t^ = 2.423 и 3.015) вели себя как ТТМТ при появлении на ТСХ пластинках и соответствовали неидентифицированным пикам при ГЖХанализе.

В токсикологическом эксперименте на крысах вещество Y проявило несколько большую, а вещество X - в три раза меньшую токсичность, чем Т-2 токсин (16).Методами ЯМР-, масс-, хромато-масс- и ИК-спектрометрии, а также химическими методами структура токсина X определена как Т-2 триол (14), а токсина у как З-гидрокси-Т-2 токсин (17). Все идентифицированные токсины, продуцируемые f. sporotrichiella , штамм 53315 были выделены в кристаллическом виде, их структура подтверждена совокупностью физико-химических методов анализа.

Т-2 триол (14) и З-гидрокси-Т-2 токсин (17) впервые идентифицированы как природные метаболиты p. sporotriciiieiia (Ту-тельян В.А. и соавт., 1984). Как следует из обзора литературы ( Achiiiadeiis в.a. et ai. , 1968, 1972),вторичные метаболиты токсигенных грибов - микотоксины - образуются из первичных: ацетата, мевалоната, фарнезилпирофосфата (рис. 14); следующий продукт в ряду биосинтеза - триходиен - уже является вторичным метаболитом, из него строятся молекулы трихотеценовых токсинов. Конечным продуктом биосинтеза ТТМТ грибами P. sporotrichiella является Т-2 токсин (16) - основной по массе и наиболее токсичный вторичный метаболит. В молекуле Т-2 токсина (16) присутствует только одна гидроксильная группа при С-3. По мере деацилирования при С-4, C-I5 и С-8 (рис. 34 )токсичность образующихся соединений значительно снижается.

Это свидетельствует о том, что Т-2 токсин (16) является конечным, "целевым" метаболитом грибов, т.к. наиболее вероятная роль микотоксинов в жизнедеятельности грибов - выступать в качестве п сигнального" и токсичного агента в их борьбе за место в экологической нише ( Ciegier а. , 1979). Однако, какая-либо достоверная роль микотоксинов в жизнедеятельности грибов до настоящего времени не показана. Для понимания механизма токсического действия ТТМТ на различные виды животных и человека, для возможного предотвращения образования ТТМТ грибами-продуцентами очень важно знать истинную роль ТТМТ для самих грибов и пути их метаболизма и биосинтеза. При этом, единственным путем в настоящее время является изучение метаболитов грибов на разных стадиях их образования путем выделения в чистом виде и установления их структуры.

В настоящем исследовании при изучении токсинообразования F. sporotrichieiia штамм 53315, было показано, что наряду с вторичным метаболитом Т-2 токсином (16) грибы продуцировали НТ-2 (15), nt -I (19), З-гидрокси-Т-2 токсины (17), Т-2 триол (14) и неосоланиол (13).Перечисленные ТТМТ были обнаружены в качестве метаболитов Т-2 токсина (16) при его введении животным ( yoshizawa т.et al., 1982). Очевидно, при участии микросомных ферментов имеет место метаболизм Т-2 токсина (16) по схеме: Т-2 токсин (16) —^ НТ-2 токсин (15)—4-деацетилнеосоланиол (82)—Т-2 тетраол (12) (рис. 34 ) или Т-2токсин (16)-^неосоланиол (13)

4-деацетилнеосоланиол (82) —Т-2 тетраол (12), или Т-2 токсин (16)-— НТ-2 токсин (15) -Т-2 триол (14) —Т-2 тетраол (12) (рис. 34 ). При этом возможно существование одновременной биотрансформации Т-2 триола (14) и 4-деацетилнеосоланио-ла(82) из НТ-2 токсина (15) (рис. ^s и 34 ). Место нового метаболита - Т-2 триола (14) в данной схеме метаболизма наиболее вероятно, он может образовываться только из НТ-2 токсина (15) (рис. 34 ).

Интересно отметить, что конечный метаболит Т-2 тетраол (12) не был обнаружен, что, вероятно, объясняется малыми сроками культивирования грибов. Очевидно, этот метаболит образуется на конечном этапе жизнедеятельности гриба путем метаболизма основных ТТМТ: Т-2 (16), НТ-2 (15) токсинов, неосоланиола (13) и Т-2 триола (14)

АсО

ОАс

Т-2 токсин (16)

Ас(Г

НТ-2 токсин (15)

АсО 4-деацетил-неосоланиол(82) но

Т-2 триол (14)

Т-2 тетраол (12)

Рис. 34. Возможные пути биотрансформации Т-2 токсина (16) у P. sporotrichiella. рис. 34 ), функции которых на данной стадии жизнедеятельности п они гриба, очев1шо, исчерпаны и должны быть выведены из среды обитания в виде их более полярных метаболитов.

Что касается 3-гидрокеи-Т-2 токсина (17), то для его образования в теле гриба возможен только один путь: из Т-2 токсина (16) окислением изо-валерокси-группы при С-8 атоме углерода (рис.

35 ). Образование этого соединения, очевидно, идет параллельно с образованием продуктов деацилирования ( Yoshizawa т. et ai.t 1982).

Таким образом, в настоящем исследовании получены новые данные о

-невозможных путях биотрасформации ТТМТ в теле грибов-продуцентов

Т-2 токсин (16)

З-гидрокси-Т-2 токсин (17)

Рис.35. Биотрансформация Т-2 токсина (16) в З-гидрокси-Т-2 ТОКСИН (17) у P. sporotrichieiia.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Соболев, Виктор Сергеевич, 1985 год

1. Авреньева Л.И.,Соболев B.C.,Кравченко Л.В.,Тутельян В.А. Энзиматическая оценка подострого действия низких доз Т-2 токсина. Гигиена и санитария, 1983, № 12, с. 27-28.

2. Арнольд Г.Р. Международный симпозиум по проблеме рас у грибов. Микол. и фитопатология, 1968, 2, с. 76.

3. Батикян С.Г. Некоторые цитологические особенности грибов из рода Fusarium и оценка их значения для систематики. Биол. журн. Армении, 1968, 21, с. 45-52.

4. Батикян С.Г. Некоторые новые данные по цитологии представителей рода Fusarium . Биол. журн. Армении, 1973, 26, с. 45-48.

5. Билай В.И. Виды Fusarium на зерне хлебных злаков и их токсические свойства. Микробиология, 1947, 16, с. I.

6. Билай В.И. Действие экстрактов токсических грибов на животные и растительные ткани. Микробиология, 1948, 17, с. 2.

7. Билай В.И. Ядовитые грибы на зерне хлебных злаков. Биология И систематика секции Sporotrichieiia рода Fusarium Lk. К. , АН УССР, 1953, 93 с.

8. Билай В.И.,Мусич Е.Г. Почвенные целлюлозоразрушающие грибы. В кн.: Систематика, экология и физиология почвенных грибов. К., Наукова думка, 1975, с. I0I-I02.

9. Билай В.И. Фузарии. К., Наукова думка, 1977, гл. 1,8.

10. Билай В.И.,Тутельян В.А. ,Элланская И.А.,Эллер К.И.,Соболев В. С.Компонентный состав трихотеценов,продуцируемых Fusarium sporotrichieiia Bilai .Микробиол.ж., 1983, 45, вып.5, с. 45-49.- 165

11. Брюхина И.П. Изучение токсичности Fusarium sporotrichiella различными методами. В кн.: Мат-лы I конф. по микотоксикозам б Лит.ССР Вильнюс, 1965.

12. Веселова A.M. Разработка диагностических признаков в распознавании многоядерных и специализированных видов и форм Fusarium . В кн.: Итоги н.-и. работ ВИЗРА за 1935-1936 г.г., Л., 1937.

13. Ермаков В.В.,Костюкина Н.А. ,Курманов Н.А., Выделение и идентификация МИКОТОКСИНЭ Т-2, продуцируемого Fusarium sporotrichiella . Докл. ВАСХНИЛ, 1978, 3, с. 36-38.

14. Котик А.Н. ,Рухляда В.В.,Труфанова В.А. Способ обнаружения в кормах микотоксинов из группы 12,13-эпокси- А-^-трихотеценов. Авт. свид. № 660653, 1979, 2 с.

15. Котик А.Н.,Чернобай В.Т. ,Комиссаренко Н.Ф.,Труфанова В.А. Выделение микотоксина Fusarium sporotrichiella и изучение его физико-химических токсических свойств. Микробиол. ж., 1979, 41, № 6, с. 636-639.

16. Кравченко Л.В.,Тутельян В.А. Микотоксины. 1ВХ0 им. Д.И.Менделеева, 1978, 23, № 4, с. 390.

17. Кравченко Л.В. ,Авреньева Л.И.,Тутельян В.А. Уменьшение содержания SH-глутатиона и активности глутатионтрансферазы в печени как фактор, усиливающий токсичность Т-2 токсина. Вопр. мед. хим., 1983, 29, вып. 5, с. 135-137.

18. Кравченко Л.В.,Конь И.Я.,Авреньева Л.И.,Тутельян В.А. Влияние избытка витамина А и Т-2 токсина на активность ферментных систем второй фазы метаболизма ксенобиотиков в печени крыс. Вопр. мед. хим., 1984, 30, вып. 6, с. 88-91.

19. Кругляк Е.Б.,Билуши С.Г. ,Зайцев П.М.,Коршунова Л.Г. Использование полярографического метода для определения трихотецена. Антибиотики, 1977, 22, 1088-1093.

20. Курманов И.А.,Таланов Г.А. К методике определения токсичности фуражного зерна. Ветеринария, 1975, 4, с. 94-95.

21. Мисюренко И.П. География?, sporotrichieiia Bilai . в кн.: Систематика, экология и физиология почвенных грибов. К., На-укова думка, 1975, с. 98-99.

22. Олифсон Л.Е. Химические и биологические свойства ядовитых веществ зерна, пораженного грибами Pusarium sporotrichieiia. Автореф. докт. дис. Оренбург, 1965.

23. Олифсон Л.Е. К вопросу о биосинтезе токсических стеролов микроскопическими грибами Pusarium sporotrichieiia . В КН.: Тез. докл. симпоз. по микотоксинам. К., 1972, с. 12.

24. Павленко В.Ф.,Элланская И.А. Распространение грибов рода Pusarium в почвах плодовых насаждений Украины. В кн.: Систематика, экология и физиология почвенных грибов. К., Наукова думка, 1975, с. 38-40.

25. Покровский А.А.,Тутельян В.А.,Кравченко Л.В. К механизму токсического действия МИКОТОКСИНЭ Pusarium sporotrichieiia. Вопр. мед. химии, 1976, 22, № 5, с. 581-595.

26. Рубинштейн Ю.И.,Лясс Л.С. Об этиологии алиментарно-токсической алейкии. Гиг. и санит., 1948, 7, с. 33.

27. Саркисов А.Х. К вопросу об этиологии так называемой "септической ангины". В кн.: Тез. докл. на респ. совещ, по алиментарно-токсической алейкии. М., 1945, с.- 167

28. Саркисов А.Х.,Квашнина Е.С. Токсикобиологические свойства Fusarium sporotrichioides . В кн.: Перезимовавшие под снегом злаковые культуры. М., 1948, с.

29. Саркисов А.Х. Этиология "септической ангины" у людей. I. микробиол. эпид. и иммунологии, 1950, I, с.

30. Саркисов А.Х. Микотоксикозы. Фузариотоксикоз от перезимовавших в поле зерновых культур (алиментарно-токсическая алейкия). М., Сельхозгиз, 1954, 136 с.

31. Соболев B.C. Применение хроматографических методов в изучении токсинообразования плесневых грибов Fusarium sporotrichioides. В кн.: Хроматография в биологии и медицине. Тез. докл. I Всесоюзн. конф., М., 1983, с. 74-75.

32. Соболев B.C.,Эллер К.И.,Болтянская Э.В.Дмитриева И.В., Тутельян В.А. Изучение токсинообразования Fusarium sporotri-chiella . Известия АН СССР, серия биол., 1984, № I, с. 137141.

33. Тутельян В.А.,Эллер К.И.,Соболев B.C. ,Авреньева Л.И. ,Розынов Б.В.,Богданова И.А. Т-2 триол новый микотоксин Fusarium sporotrichiella . ДАН СССР, 1984, 274, № 3, с. 727-730.

34. Тутельян В.А.,Эллер К.И.,Соболев B.C. "Методические указания по обнаружению, идентификации и определению содержания Т-2 токсина в пищевых продуктах и продовольственном сырье", М., Минздрав СССР, 1984, № 3184-84, 10 с.

35. Хохряков М.К. Некоторые вопросы систематики грибов. Тр. ВИЗР, 1951, 3.- 168

36. Эллер К.И.,Соболев B.C. Идентификация и количественное определение трихотеценовых микотоксинов методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Ж. аналит. химии, 1983, 38, вып.5, с. 903-907.

37. Эллер К.И.,Соболев B.C. Продуцирование трихотеценовых микотоксинов микроскопическими грибами Fusarium sporotrichiella. В кн.: Мицелиальные грибы (.физиология, биохимия, биотехнология).Тез. докл. Всесоюзн. конф., г. Пущино, 1983, с. 67.

38. Элпидина O.K. О фитотоксинах в зерне, вызывающем септическую ангину. ДАН СССР, 1945, 46, с. 2.

39. Abbas Н.К.,Mirocha С.J.,Shier W.T. Mycotoxins produced from fungi isolated from foodstutts and soil: comparison of toxicity in fibroblasts and rat feeding tests. Appl. Environ. Microbiol., 1984, 48, N 3, 654-661.

40. Abrahamsson S.,Nilsson Б. Direct determination of molecular structure of trochodermin. Proc. Chem. Soc., 1964, 188-189

41. Abrahamsson S.,Nilsson Б. The molecular structure of tricho-dermin. Acta Chem. Scand., 1966, 20, 1044-1052.

42. Achilladelis Б.,Hanson J.R. Studies in terpenoid biosynthesis -I. The biosynthesis of metabolites of Trichothecium roseum.

43. Phytochemistry, 1968, 7, 589-594.

44. Achilladelis Б.,Adams P.M.,Hanson J.R. The biosynthesis of the sesquiterpenoid trichothecane antibiotics. Chem. Comm., 1970, 511

45. Achilladelis B.,Adams P.M.,Hanson J.R., Studies in terpenoidbiosynthesis. Part. VIII. The formation of the trichothecane nucleus. J.Chem.Soc., Perkin Trans. 1, 1972, 1425-1428.

46. Achini R. ,Miiller B.,Tamm Ch. Biosynthesis of verrucarol, the sesquiterpene moiety of the verrucarins and roridins. Chem. Comm., 1971, 404-405.

47. Achini R. ,Miiller B.,Tamm Ch. Biosynthesis of verrucarins and roridins. Part I. The transformation of mevalonic acid into verrucarinic acid. Evidence for a hydrogen 1,2-shift. Helv. Chim. Acta, 1974, 57, 1442-1459.

48. Adams P.M.,Hanson J.R. Biosynthesis of the sesquiterpenoid trichothecane antibiotics. Chem. Comm., 1970, 1569-1570.

49. Arigoni D.,Cane D.E.,Miiller B.,Tamm Ch. The mode of incorporation of farnesyl pyrophosphate into verrucarol. Helv. Chim.

50. Acta, 1973, 56, 2946-2949.

51. Arndt R.R.,Holzapfel C.W.,Perreira N.P.,Marsh J.J. The structure and biogenesis of desoxyverrucarin E, a metabolite of

52. Eupenicillium hirayamae. Phytochemistry, 1974, 13, 1865-1870.

53. Austwick R.K.C. Human mycotoxicosis past, present and future. Chem. and Ind., 1984, N 15, 547-551.51 . Bamburg J.R. Biological activity and detection of naturally occurring 12,13-epoxy- A^- trichothecenes. Clin. Toxicol., 1972, 5, 495-515.

54. Bamburg J.R., Chemical and biochemical studies of the trie ho-thecene mycotoxins. In: Rodrics J.V., ed. Mycotoxins andother fungal related food problems, V/ashington, American

55. Chemical Society, 1976, 144-162.- 170

56. Bamburg J.R. Biological and biochemical actions of tricho-thecene mycotoxins. Progress in molecular and subcellular biology. ed. Hahn P.E., 1983, 8,

57. Bamburg J.R. and Strong P.M., 12,13-epoxytrichothecenes. In: Kadis S.,Ciegler A. and Ajl S.J. ed. Microbial toxins, New York, Acad. Press, 1971, 7, 207-292.

58. Bennett G.A.,Peterson R.E.,Plattner R.D.,Shotwell O.L. Isolation and purification of deoxynivalenol and a new trichothe-cene by high pressure liquid chromatography. J. Am. Oil Chem. Soc., 1981, 58, 1002A-1005A.

59. BlanK.,King G., Eds. Heyden, London, 1977, 326.

60. Breitenstein W.,Tamm Ch. Verrucarin K, the first natural trichothecene derivative lacking the 12,13-epoxy group. Helv. Chim. Acta, 1977, 60, 1522-1527.

61. Breitenstein W.,Tamm Ch.,Arnold E.V.,Clardy J. The absolute configugation of the fungal metabolite verrucarin B. Biosynthetic consequences. Helv. Chim. Acta, 1979, 62, 2699-»2705.

62. Bu'Lock J.D., The Biosynthesis of Natural Products., 1965, McGraw-Hill, New York.

63. Butler Y/.H. Pathological aspects of mycotoxicoses. Chem. and Ind., 1984, N 15, 541-542.

64. Chayet L.,Pont-Lezica R.,George-Nascimento C.,Cori 0. Biosynthesis of sesquiterpene alcohols and aldehydes by cell free extracts from Orange Plavedo.Phytochemistry,1973,12,95-Ю1.

65. Chaytor J.P.,Saxby M.J. Development ofa method for the analysis of T-2 toxin in maize by gas chromatography-mass spectroscopy. J. Chromatogr., 1982, 237, 107-113.

66. Chi M.S.,Mirocha C.J.,Kurtz H.J.,Weaver G.,Bates P.,Shimoda

67. W. Effects of T-2 toxin on reproductive performance and health of laying hens. Poultry Sci., 1977, 56, 628-637.

68. Chi M.S.,Robison T.S.,Mirocha C.J.,Reddy K.R. Acute toxicity of 12,13-epoxytrichothecenes in one-day-old broiler chicks. Appl. Environ. Microbiol., 1978, 35, 636-64O.

69. Chi M.S.,Robison T.S.,Mirocha C.J.,Swanson S.P.,Shimoda W. Excretion and tissue distribution of radioactivity from tritium-labeled T-2 toxin in chicks. Toxicol. Appl. Pharmacol., 1978a, 45, 391-402.

70. Chu P.S.,Grossman S.,Wei R.D.,Mirocha C.J. Production of antibody against T-2 toxin. Appl. Environ. Microbiol., 1979, 37, 104-108.

71. Ciegler A. Mycotoxins their biosynthesis in fungi; biosynthesis of the trichothecenes. J. Pood Protect.,1979, 42, 825-828.

72. Collins C.J.,Rosen J.D. Distribution of T-2 toxin in wet-milled corn products. J. Pood Sci., 1981, 46, 877-879.

73. Cordel G.A. Biosynthesis of sesquiterpenes. Chem. Rev., 1976, 76, 425-460.

74. Cornforth J.W.,Cornforth R.H. ,Donninger C.,Pop;jak G.,Ryback G.,Schroepfer G.J. Studies on the biosynthesis of cholesterol. XVII. The asymmetric synthesis of a symmetrical molecule. Proc. Roy. Soc., Ser. Б (London), 1966, 163, 436-464.

75. Cot£ L.M.,Reynolds J.D.,Vesonder R.P.,Buck W.B.,Swanson S.P. Coffey R.Т.,Brown D.C. Survey of vomitoxin contaminated feed grains in midwestern Unated states, and associated health problems in swine. JAVMA, 1984, 184, N 2, 189-192.

76. Dalgleish C.E.,Horning E.C.,Horning M.H.,Knox E.L.,Yarger K. A gas-liquid chromatographic procedure for separating a wide range of metabolites occurring in urine and tissue extracts. Biochem. J., 1966, 1O1, 792-795.

77. Davis G.R.P.,Westcott N.D.,Smith J.D.,Neish G.A.,Schiefer H. B. Toxigenic isolated of Fusarium sporotrichioides obtained from hay in Saskatchewan. Can. J. Microbiol.,1982, 28, 259261.

78. Dawkins A.W., Phytotoxic compounds produced by Fusarium equiseti. Part II. The chemistry of diacetoxyscirpenol. J. Chem. Soc., (C), 1, 1966, цб-123.

79. Eockerill В.,Hanson J.R.,Siverns M. The biosynthesis of trichothecin from acetate-(i,2-15C2). Phytоchemistry, 1978, 17, 427-430.

80. El-Banna A.A.,Hamilton R.M.G.,Scott P.M.,Trenholm H.L. Nontransmission of deoxynivalenol (vomitoxin) to eggs and meat in chickens fed deoxynivalenol contaminated diets. J. Agric. Food Chem., 1983, 31, 1381-1384.

81. El-Banna A.A.,Lau P.-Y.,Scott P.M. Pate of mycotoxins during processing of foodstuffs. II. Deoxynivalenol (vomitoxin) during making of Egyptian bread. J. Pood Prot., 1983a, 46, 484-486.

82. El-Banna A.A.,Scott P.M.,Lau P.-Y.,Sakuma Т.,Piatt H.W. Campbell V. Formation of trichothecenes by Fusarium solani var. coeruleum and Fusarium sambucinum in potatoes. Appl. Environ. Microbiol., 1984, 47, N 5, 1169-1171.

83. Eller E.I. High-performance liquid chromatography in the analysis of mycotoxins. FAO/UNEP/USSR, Moscow, Centre of International Projects, GENT, 1984, 39 p.

84. Eller E.I.,Sobolev V.S. Application of gas-liquid chromatography in the fusariotoxin analysis (trichothecene, zearale-none). FAO/UNEP/USSR, Moscow, Centre of International Projects, GENT, 1984, 14 p.

85. Eller E.I.,Sobolev Y.S. Gas-liquid chromatography and its application in the analysis of mycotoxins. FAO/UNEP/USSR, Moscow, Centre of International Projects, GENT, 1984a, 37 p.

86. Engelhardt G.,Rintelen J.,Wallnofer P.R. Vorkommen von toxin-bildenden schimmelpilzen der gattung Fusarium in cerealien aus dem erntejahr 1982 in Bayern. Bayer, landwirt. Jahrb., 1984, 61, N 12, 338-347.

87. Eppley R.M. Methods for detection of trichothecenes. J. Assoc. Off. Anal. Chem., 1975, 58, 906-908.

88. Eppley R-rM. Trichothecenes and their analysis. J. Amer. Oil Chem., 1979, 56, 824-829.

89. Evans R.,Holtom A.M.,Hanson J.R., Biosynthesis of 2-cis-far-nesol.J. Chem. Soc., Chem. Comm., 1973, 465r466.

90. Evans R.,Hanson J.R., Marten T. Studies in terpenoid biosynthesis. Part XI. Stereochemistry of some stages in tricho-thecane biosynthesis. J. Chem. Soc., Perkin Trans., 1, 1974, 857-860.

91. Evans R.,Hanson J.R. The formation of trichodiene from all-trans-farnesyl pyrophosphate by Triehothecium roseum. Chem. Comm., 1975, 231-232.

92. Evans R.,Hanson J.R. Studies in terpenoid biosynthesis. Part XIV. Formation of the sesquiterpene trichodiene. J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 1976, 326-329.

93. Evans R.,Hanson J.R.,Marten T. Studies in terpenoid biosynthesis. Part XVI. Formation of the sesquiterpenoid tricho-thecin. J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 1976, 1212-1214.

94. Pishman J.,Jones E.R.,Lowe G.,Whiting M.C. The structure and biogenesis of trichothecin. Proc. Chem. Soc., 1959, 127-128.

95. Forrester J.M.,Money T. Sequence studies in biosynthesis: trichothecin. Can. J. Chem., 1972, 50, 3310-3314.

96. Foster P.M.D.,Slater T.F.,Patterson D.S.P. A possible engr-matic assay for trichothecene mycotoxins in animal feed-stuffs. Biochem. Soc. Trans., 1975, 3, 875-878.

97. Freeman G.G.,Morrison R.I. Trichothecin: an antifungal metabolic product of T. roseum Link. Nature, 1948, 162, 30.

98. Gendloff E.H.,Pestka J.J.,Swanson S.P.,Hart L.P. Detection of T-2 toxin in Pusarium sporotrichiides infected corn by enzymelinked immunosorbent assay. Appl. Environ. Microbiol., 1984, 47, N 5, 1161-1163.

99. Chosal S.,Chakrabarti D.K.,Chaudhary К.C. The occurence of 12,13-epoxy trichothecenes in seeds safflower infected with Pusarium oxysporum f. sp. carthani. Experientia, 1977, 33, 574-575.

100. Ghosal S.,Chakrabarti D.K.,Srivastava A.K.,Srivastava R.S. Toxic 1 2,13-epo^richothecenes from anise fruits infected with Trichothecium roseum. J. Agric. Pood Chem., 1982, 30,106.109.

101. Glaz E.T.,Schneiber E.,Jarvis K. Studies on a new antifungal antibiotic. Acta Physiol. Acad., Sci. Hung., i960, 18, 225232.

102. Godtfredsen W.O.,Vangedal S. Trichodermin, a new sesquiterpene antibiotic. Acta Chem. Scand., 1965, 19» ю88-ц02.

103. Eodtfredsen W.0.,Grove J.F.,Tamm Ch. On the nomenclature of a new class of sesquiterpenes. Helv. Chim. Acta, 1967, 50, 1666-1668.

104. Gordon W.L. The occurence of Fusarium species in Canada. II. Prevalence and taxonomy of F. species in cereal seed. Can. J. Bot., 1952, 30, 209-251.

105. Grove M.D.,Burmeister H.R.,Taylor S.L.,Weisleder D.,Plattner R.D. Effects of chemical modification on the epoxytricho-thecene induced feed refusal response. J. Agric. Food Chem., 1984, 32, N 3, 541-544.

106. Gyongyossy-Issa M.I.C.,Christie E.J.,Khachatourians G.G. Charge-shift electrophoretic behavior of T-2 toxin in agarose gels. Appl. Environ. Microbiol., 1984, 47, N 5, 11821184.

107. Hanson J.R.,Achilladelis B. The role of farnesyl pyrophosphate in the biosynthesis of trichothecin. Chem. Ind., 1967, 1643-1644.

108. Hsu I.-Ch.,Smalley E.В.,Strong F.M.,Ribelin W.E. Identification of T-2 toxin in moldy corn associated with a lethal toxicosis in dairy cattle.Appl.Microbiol.,1972,24,684-690.

109. Ikediobi C.O.,Hsu I.-Ch.,Bamburg J.Т.,Strong P.M., Gas-liquid chromatography of mycotoxins of the trichothecene group. Anal. Biochem., 1971, 43, 327-340.

110. Imai K.,Marumo S. Stereochemistry of C-1 hydrogen exchange2 Ъduring Д *J trans-cis isomerization of farnesol by Helmin-thosporum sativum. Tetrahedron Lett., 1974, 4401-4404.

111. Ishii K. Solaniol, a toxic metabolite of Fusarium solani. Appl. Microbiol., 1971, 22, 718-720.

112. Ishii K. Two new trichothecenes produced by Pusarium sp. Phytochemistry, 1975, 14, 2469-2471.

113. Ishii K.,Ando Y.,Ueno Y. Txicological approaches to the metabolites of Pusaria. IX. Isolation of vomiting factor from moldy corn infected with Pusarium species. Chem.

114. Pharm. Bull., 1975, 23, 2l62-2i64,

115. Jarvis B.B.,Midiwo J.O.,Flippen-Anderson J.b.,Mazzola E.P. Stereochemistry of the roridins. J. Natur. Prod., 1982, 45, 440-448.

116. Jarvis B.B.,Yatawara C.S.,Green S.L.,Vrudhula V.M. Production of verrucarol. Appl. Environ. Microbiol., 1984, 48,1. N 3, 673-674.

117. Jemmali M.,Ueno Y.,Ishii K.,Frayssinet C.,Etienne M.,Natural occurence of trichothecenes (nivalenol, deoxynivalenol, T-2) and zearalenone in corn., Experientia, 1978, 34, 13331334.

118. Joffe A.Z. Biological properties of some toxic fungi isolated from overwintered cereal. Mycopathol. Mycol. Appl.,1962, 16, 201-221.

119. Joffe A.Z.,Toxicity of Fusarium poae and F. sporotrichioides and its relation to alimentary toxic aleukia. In: Purchase I.F.H. ed., Mycotoxins, Amsterdam, Elsevier Sci. Pub. Co., 1974.

120. Jones E.R.H.,Lowe G. The biogenesis of trichothecin. J. Chem. Soc., i960, 3959-3962.

121. Kamimura H.,Nishijima M.,Saito K.,Takahashi S.,Ibe A., Ochiai S. and Naoi Y. Studies on mycotoxins in foods (VIII). Analytical procedure of trichothecene mycotoxins, Jpn. J. Hyg. Soc., 1978, 19. 443-448.- 179

122. Kamimura H.,Nishijima M.,Yasuda E.,Saito E.,1Ъе A.,Nagayama T.,Ushiyama H.,Naoi Y. Simultaneous detection of several Fusarium mycotoxins in cereals, grains and foodstuffs. J. Assoc. Off. Anal. Chem., 1981, 64, 1067-1073.

123. Eato T. and Takitani S. Thin layer chromatographic determination of trichothecene mycotoxins with 4-(p-nitrobensyl)pi-ridine. J. Jap. assoc. Mycotoxicol., 1978, 7, 22-23.

124. Enbll W., Ta.mm Ch. Biosynthese der Yerrucarine und Roridine. Teil 5. Synthese von'Zwei Diastereoisomerenpaaren des 1,8-N -oC-Bisabolols und versuche zu deren Einbau in Verru-carol. Helv. Chim. Acta, 1975, 58, цб2-ц71.

125. Eocor M.,Siewinski A. The biosynthesis of verrucarol. Acad. Polon. Sci., Ser. Sci. Chim.,1966, 14, 341-345.

126. Eupchan S.M., Jarvis B.B.,Dailey R.G.,Bright W.,Bryan R.J., Shizari Y. Baccharin, a novel potent antileukemic trichothecene triepoxide from Baccharis megapotamica. J. Am. Chem. Soc., 1976, 98, 7092-7093.

127. Eupchan S.M.,Strulman D.R.,Jarvis B.B.,Dailey R.G.,Sneden A.T. Isolation of potent new antileukemic trichothecenes from Baccharis megapotamica. J. Org. Chem., 1977, 42, 42214225.

128. Euroda H.,Matsumura S.,Mori T.,Nishioka C.,0kasaki H., Takagi M. Studies on gas chromatographic determination of trichothecene mycotoxins in food. Shokuhin Eiseigaku Zasshi, 1979, 20, 137-142.

129. Ъее S.,Chu F.S. Radioimmunoassay of T-2 toxin in corn and wheat. J. Assoc. Off. Anal. Chem., 1981, 64, 156-161.131 bee S.,Chu F.S. Radioimmunoassay of T-2 toxin in biological fluids. J. Assoc. Off. Anal. Chem., 1981a, 64, 684-688.

130. Lee Y.-W.,Mirocha C.J. Production of nivalenol and fusarenone -Z by Fusarium tricinctum Fn-2B on a rice substrate. Appl. Environ. Microbiol., 1984, 48, N" 4, 857-858.

131. Machida Y.,Nozoe S. Biosynthesis of trichothecin and related compounds. Tetrahedron Lett., 1972, 1969-1971.

132. Machida Y.,Nozoe S. Biosynthesis of trichothecin and related compounds. Tetrahedron, 1972a, 28, 5113-5117.

133. Matsumoto H.,Ito T.,Ueno Y. Toxicological approaches to the metabolite of Fusaria XII. Fate and distribution of T-2 toxin in mice. Jap. J. Exp. Med., 1978, 393-399.

134. Mirocha C.J.,Pathre S. Identification of the toxic principle in a sample of poaefusarin. Appl. Microbiol., 1973, 26, 719-724.

135. Mirocha C.J.,Pathre S.V.,Schauerhamer B.,Christensen C.M. Natural occurence of Fusarium toxins in feedstuff. Appl. Environ. Microbiol., 1976, 32, 553-556.

136. Moss M.O. Conditions and factors influencing mycotoxin formation in the field and during the storage of food. Chem. and Ind., 1984,N 15, 533-536.

137. Muller B.,Achini R.,Tamm Ch. Biosynthese der Verrucarine und Roridine. Teil 2. Der Einbau von Acetat in die cis, trans-Muconsaure und von Mevalonat in die Roridinsaure. Helv. Chim Acta, 1975, 58, 453-470.

138. Muller B.,Achini R.,Tamm Ch. Biosynthese der Verrucarine und Roridine. Teil 3. Der Einbau von (3R)-5-1^c. -, [2-14с]und an C(2) stereospezifish tritliertem Mevalonat in Verrucarol. Helv. Chim. Acta, 1975a, 58, 471-482.

139. Nakano N.,Kunimoto T.,Aibara K.Chemical and biological assays of fusarenon X and diacetoxyscirpenol in cereal grains. Shokuhin Eiseigaku Zasshi, 1973, 14, N 1, 56-64.

140. Naoi Y.,Kazama E.,Saito K.,0gawa H.,Shimura K.,Kimura Y. Mycotoxins in foods.Analytical procedure for T-2 toxin and diacetoxyscirpenol. Tokyo Toritsu Eisei Kenkyusho Kenkyu Nem-po, 1974, 25, 203-206.

141. Niku-Paavola M.-L.,Ilus Т.,Ward P.J.,Nummi M.,Thin layer analysis of Pusarium toxins in grain samples. Arch. Inst. Pasteur Tunis, 1977, 3-4, 269-277.

142. Nozoe S.,Machida Y. Isolation and structure of trichodiol ,a new sesquiterpenoid from Trichothecium roseum.Tetrahedron Lett., 1970, 1177-1179.

143. Nozoe S.,Machida Y. Structure of trichodiene. Tetrahedron Lett., 1970a, 2671-2674.

144. Nozoe S.,Machida Y. The structures of trichodiol and trichodiene. Tetrahedron, 1972, 28, 5l05-5m.

145. Ohta M.,Matsumoto H.,Ishii K.,Ueno Y. Metabolism of trichothe-cene mycotoxins. II. Substrate specificity of microsomal deacetylation of trichothecenes. J. Biochem. (Tokyo), 1978, 84, 697-706.

146. Overton K.H.,Roberts P.M. Biosynthesis of 2-trans, 6-trans-and 2-cis, 6-trans-farnesols by soluble enzymes from tissue cultures of Andrographis paniculata. J. Chem. Soc., Chem. Commun., 1973, 378-379.

147. Overton K.H.,Roberts P.M. Stereochemistry of C-1 hydrogen exchange in the interconversion of trans, trans- and cis, trans-farnesols by soluble enzymes from tissue cultures of Andrographis paniculata. J. Chem. Soc., Chem. Commun., 1974, 385-386.

148. Overton K.H.,Roberts P.M.,Biosynthesis of trans, trans- andcis, trans-farnesols by soluble enzymes from tissue cultures of Andrographis paniculata. Biochem. J., 1974 a, 144, 585-592.152.

149. Overton K.H.,Roberts P.M., Interconversion of trans, trans and cis, trans-farnesol by enzymes from Andrographis paniculata. Phytochemistry, 1974b, 13, 2741-2743.

150. Palmisano P.,Visconti A.,Bottalico A.,Lerario P., Zambonin P.G. Differential-pulse polarography of trichothecene toxins: detection of deoxynivalenol in corn. Analyst, 1981 , 106, 992-998.

151. Palyusik M. Biological test for the toxic substance of Stachybotrys abternans. Acta Yet. Acad. Sci. Hung., 1970, 18, 363-372.

152. Parker W.,Roberts J.S.,Ramage R. Sesquiterpene biogenesis. Quart. Rev. Chem. Soc., 1967, 21 , 331-363.

153. Pathre S.V., Mirocha C.J. Analysis of deoxynivalenol from cultures of Fusarium species. Appl. Environ. Microbiol., 1978, 35, 992.

154. Penn J.D. Mycotoxin testing: A chemical controversy. Clin. Chem. News, 1982, 8, 1-3.

155. Pestka J.J.,Lee S.C.,Lau H.P.,Chu F.S. Enzyme-linked immunosorbent assay for T-2 toxin. J. Am. Oil Chem. Soc., 1981, 58, 940A-944A.

156. Puis R.,Greenway J.A. Fusariotoxicosis from barley in British Columbia.II. Analysis and toxicity of suspected bari^ey. Can. J. Сотр. Med., 1976, 40, 16-19.

157. Roberts B.A.,Patterson D.S.P. Mycotoxins. Defection of twelve mycotoxins in mixed animal feedstuffs, using a novelmembrane cleanup procedure. J. Assoc. Off. Anal. Chem., 1975, 58, 1178-1181.

158. Robinson T.S., Mirocha C.J.,Kurtz H.J.,Behrens J.C.,Chi M.S. Weaver G.A.,Nystrom S.D. Transmission of T-2 toxin into bovine and porcine milk. J. Dairy Sci., 1979, 62, 637-641.

159. Romer T. Mycotoxins in corn and corn milling products. Cereal foods world, 1984, 29, N 8, 459-462.

160. Romer T.R.,Boling T.M.,McDonold J.L. Gas-liquid chromatographic determination of T-2 toxcin and diacetoxyscirpenol in corn and mixed feed. J. Assoc. Off. Anal. Chem., 1978, 61, 8o1-8o8.

161. Rukmini C.,Prasad J.S.,Rao K. Effects of feeding T-2 toxin to rats and monkeys. Pood Cosmet. Toxicol., 1980, 18, 267269.

162. Ruzicka L. Perspektiven der Biogenese und der Chemie der Terpene. Pure Appl. Chem., 1963, 6, 493-523.

163. Sano A.,Asabe Y.,Takitani S.,Ueno Y. Pluorodensitometric determination of trichothecene mycotoxins with nicotinamide and 2-acetylpyridine on silica gel layer. J. Chromatogr., 1982, 235, 257-265.

164. Schmidt R.,Ziegenhagen E.,Dose K. High-performance liquid chromatography of trichothecenes. I. Detection of T-2 toxin and HT-2 toxin-r J. Chromatogr., 1981, 212, 370-373.

165. Schmidt R.,Przybylski M.,Dose K. Identification of acetyl-T-2 toxin, a trichothecene in moldy rice by HPLC and PIMS. Presenius Z. Anal. Chem., 1982, 311, 402-4031 69• Schweighardt H.,Boehm J.,Abdelhamid A.M.,Leibetseder J.,

166. Schuh Ш.,Glawischnig E. Analysis of the fusariotoxins zea-ralenone and vomitoxin (deoxynivalenol) in human foods and animal feeds Ъу high perfomance liquid chromatography (HPLC). Chromatographia, 1980, 13, 447-450.

167. Scott P.M. Assessment of quantitative methods for determination of trichothecenes in grains and grain products. J. Assoc. Off. Anal. Chem., 1982, 65, 876-883.

168. Scott P.M.,The occurrence of vomitoxin (deoxynivalenol, don) in Canadian grains. In: Toxigenic Fungi Their toxins and Health Hazard., 1984, ed. Kodansha Ltd., 182-189.

169. Scott P.M.,Lawrence J.W.,Y/. van Walbcek. Detection of mycotoxins by thin-layer chromatography: application to screening of fungal extracts. Appl. Microbiol., 1970, 20, 839842.

170. Scott P.M.,Lau P.-Y.,Kanhere S.R. Gas chromatography with electron capture and mass spectrometric detection of deoxynivalenol in wheat and other grains. J. Assoc. Off. Anal. Chem., 1981, 64, 1364-1371.

171. Scott P.M.,Nelson K.,Kanhere S.R.,Karpinski K.F.,Hayward S., Neish G.A.,Teich A.H. Decline in deoxynivalenol (vomitoxin) concentrations in 1983 Ontario winter wheat before harvest. Appl. Environ. Microbiol., 1984, 48, N 4, 884-886.

172. Sigg H.P.,Mauli R.,Flury E.,Hauser D. Die Konstitution von Diacetoxyscirpenol. Helv. Chim. Acta, 1965, 48, 962-988.

173. Skinner С.E.,Emmons C.W.,Tsuchiya H.M. Molds, Yeasts and Actinomycets. Ed. Wiley, New York, 1947.

174. Smalley P.M., Strong E.M., In: Mycotoxins, Ed. Purhcase I.P.H.,Elsevier Sci. Publ., 1974, 199-228.

175. Smith J.E. Summary and thoughts on possible direction of future research effort. Chem. and Ind., 1984, N 15, 551-552.in

176. Snyder Y/.C.,Hansen H.N. The species conceptPusarium with reference to discolore and other sections. Am. J. Bot., 1945, 32, 657-666.

177. Sobolev V.S. Chemical analytic methods of trichothecene mycotoxins. Basic facts about trichothecenes. FAO/UNEP/USSR Moscow, Centre of International Projects, GENT, 1984, 14 p.

178. Sorenson W.G.,Sneller M.R.,Larsh H.W. Qualitative and quantitative assay of trichothecine: a mycotoxin produced by Trichothecium roseum Appl. Microbiol., 1975, 29, 653-657.

179. Stahr H.M.,Kraft A.A.,Schuh M. The determination of T-2 toxin, diacetoxyscirpenol, and deoxynivalenol in foods aid feeds. Appl. Spectroscopy, 1979, 33, 294.

180. Steyn P.S.,Vleggaar R.,Rable C.J.,Kriek N.P.J.,Harington J.S. Trichothecene mycotoxins from Fusarium sulphureum. Phytoche-mistry, 1978, 17, 949-951.

181. Suzuki Y.,Marumo S. Trans-to cis 2.3-double bond isomeriza-tion of epoxyfarnesol and farnesol by fungus,Tetrahedron Lett., 1972, 5101-5Ю4.

182. Szathmary C.S.,Galacz J.,Vida L. and Alexander G. Capillary gas chromatographic mass spectrometric determination of some mycotoxins causing fusariotoxicoses in animals. J. Chroma-togr., 1980, 191, 327-331.

183. Takitani S.,Asabe Y.,Kato Т.,Suzuki M.,Ueno Y. Spectroden-sitometric determination of trichothecene mycotoxins with4.(p-nitrobenzyl)pyridine on silicagel layer. J. Chromatogr., 1979, 172, 335-342.

184. Tamm Ch. Zur Biosynthese der Sesquiterpenester-Antibiotika. Chimia, 1968, 22, 315-316.

185. Tamm Ch.,Breitenstein W. The biosynthesis of trichothecene mycotoxins. In: Steyn P.S., ed. The biosynthesis of mycotoxins. Academic Press. New York, 1980, 69-79,

186. Tandaka K.,Amano R.,Kawada K.,Tanabe H. Gas-liquid chromatography of trichothecene mycotoxins. Shokuhin Eiseigaku Zasshi, 1974, 15, N 3, 195-200.

187. Tatsuno T.,Saito M.,Enomoto M.,Tsunoda H. Nivalenol, a toxic principle of Pusarium nivale. Chem. Pharm. Bull., 1968, 16, 2519-2520.

188. Tatsuno T.,Ohtsubo K.,Saito Ш. Chemical and biological detection of 12,13-epoxytrichothecenes isolated from Pusarium species. Pure Appl. Chem., 1973, 35, 309-313.

189. Thompson W.L. ,Y/annemacher R.W. Detection and quantitation of T-2 mycotoxin with a simplified protein synthesis inhibition assay. Appl. Inviron. Microbiol. 1984, 47, 1176-Ц80.

190. Trucksess M.W.,Uesheim S.,Eppley R.M. Thin layer chromatographic determination of deoxynivalenol in wheat an corn. J. Assoc. Off. Anal. Chem., 1984, 67, H 1, 40-43.

191. Ueno Y. Trichothecenes: Overview adress. In: Rodrics J.V., Hesseltine C.W. and Mehlman M.A., eds., Mycotoxins in Human and Animal Health, Park Forest South, IL, Pathotox, 1977, 189-207.

192. Ueno Y. Trichothecenes. Chemical, biological and toxicolo-gical aspects., Elsevier, Amsterdam., 1983, 56-120.

193. Ueno Y.,Ueno I.,Tatsuno T.,0hokubo K.,Tsunoda H., Fusarenon-X, a toxic principle of Fusarium nivale-culture filtrate. Experientia, 1969, 25, 1062.

194. Ueno Y.,Nakajima M.,Sakai K.,Ishii K.,Sato N.,Shimada N. Comparative toxicology of trichothec mycotoxins. Inhibition of protein synthesis in animal cells. J. Biochem., 1973, 74, 285-296.

195. Ueno Y.,Sato N.,Ishii K.,Sakai K.,Tsunoda H.,Enomoto M. Biological and chemical detection of trichothecene mycotoxins of Fusarium species. Appl. Microbiol., 1973a, 25, 699-704.

196. Ueno Y.,Sawano M.,Ishii K. Production of trichothecene mycotoxins by Fusarium species in s.hake culture. Appl. Microbiol., 1975, 30, 4-9.

197. Vesely D.,Vesela D.,Jelinek R. Use of chick embryo in screening for toxin-producing fungi. Mycopathologia, 1984, 88, 135-140.

198. Vesonder R.F.,Ciegler A.,Rohwedder W.K. Reexymination of 1972 Midwest corn for vomitoxin. Toxicon., 1979, 17, 658660.

199. Watson D.H. Survey and control of mycotoxins in animal and human foods. Chem. and Ind., 1984, N 15, 536-540.

200. Weaver G.A.,Kurtz H.J.,Mirocha C.J.,Bates P.Y.,Behrens J.C., Robison T.S.,Swanson S.P. The failure of purified T-2 myco-toxin to produce hemorrhaging in dairy cattle. Can. Vet. J.,1980, 21 , 2ю-213.

201. Yagen В.,Horn P.,Joffe A.Z.,Cox R.H.Isolation and structural eluciation of a novel sterol metabolite of Pusarium sporo-trichioides 921. J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 1980, 29142917.

202. Yoshizawa T.,Morooka N. In: Mycotoxins in Human and Animal Health, eds. Rodricks J.V.,Hesseltine C.W. and Mehlman M.A., Pathotox Pub., Park Porest South, IL, USA. 1977, 309.

203. Yoshizawa T.,Swanson S.P.,Miricha C.J. T-2 metabolites in3the excreta of broiler chickens administered H-labeled T—2 toxin. Appl. Environ. Microbiol., 1980, 39, 1172-1177.

204. Yoshizawa T.,Swanson S.P.,Mirocha C.J., In vitro metabolism of T-2 toxin in rats. Appl. Environ. Microbiol., 1980a, 40, 901-906.

205. Yoshizawa Т.,Mirocha C.J.,Behrens J.C.,Swanson S.P. Metabolic fate of T-2 toxin in a lactating cow. Pood Cosmet. Toxicol1981, 19, 31-39.

206. Yoshizawa Т.,Sakamoto T.,0kamoto K. In vitro formation of 3'-hydroxy T-2 and 3*-hydroxy HT-2 toxins from T-2 toxin by liver homogenates from mice and monkeys. Appl. Environ. Microbiol., 1984, 47, 130-134.

207. Young J.C.,Pulcher R.G. Mycotoxins in grains: causes, consequences and cures.Cereal Pood World,1984,29,N11,725-728.