Изучение структурных компонентов и физико-химических свойств гуминовых веществ низкоминерализованных иловых сульфидных грязей как источника антиоксидантных лекарственных средств тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.04.02, кандидат фармацевтических наук Жданова, Алина Валитовна

• Жданова, Алина Валитовна
• кандидат фармацевтических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат фармацевтических наук Жданова, Алина Валитовна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. СТРУКТУРА, СВОЙСТВА И ПЕРСПЕКТИВЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ ОРГАНИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ ЛЕЧЕБНЫХ ГРЯЗЕЙ КАК АНТИОКСИДАНТОВ ПРИРОДНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ.

1.1. Современные представления о патогенезе окислительно-восстановительных процессов в организме. Применение антиоксидантов в фармации и медицине.

1.2. Пелоидотерапия, классификация и состав лечебных грязей .'.

1.3 Структурная организация, свойства и медицинское применение гуминовых веществ.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Выделение и идентификация отдельных фракций гуминовых веществ пелоидов по общепринятым критериям.

2.2. Методы исследования элементного состава и структурных компонентов гуминовых веществ пелоидов.

2.3 Методы исследования антиоксидантной активности гуминовых веществ пелоидов в условиях in vitro.

2.4 Количественное определение гуминовых веществ амперометрическим методом.

2.5. Методы исследования биологической доступности. гуминовых веществ пелоидов.

2.5. Методы исследования про- и антиоксидантных свойств гуминовых веществ пелоидов условиях in vivo.

2.6. Статистическая обработка результатов исследования.

ГЛАВА 3. СОСТАВ И СТРУКТУРНЫЕ КОМПОНЕНТЫ ГУМИНОВЫХ ВЕЩЕСТВ НИЗКОМИНЕРАЛИЗОВАННЫХ ИЛОВЫХ СУЛЬФИДНЫХ ГРЯЗЕЙ.

3.1. Идентификация гуминовых веществ низкоминерализованных. иловых сульфидных грязей.

3.2. Сравнительная характеристика элементного состава компонентов гуминовых веществ низкоминерализованных иловых. сульфидных грязей.

3.2. ИК - спектроскопия гуминовых веществ пелоидов.;.

З.ЗЯМР 'Н и ЯМР С — спектроскопия гуминовых веществ пелоидов.

3.4. Парамагнитные свойства гуминовых веществ пелоидов.

ГЛАВА 4. АНТИОКСИДАНТНАЯ АКТИВНОСТЬ ГУМИНОВЫХ ВЕЩЕСТВ В УСЛОВИЯХ IN VITRO.

4.1. Определение антиоксидантных свойств гуминовых веществ пелоидов манометрическим методом.

4.2. Определение антиоксидантных свойств гуминовых веществ низкоминерализованных иловых сульфидных грязей амперометрическим методом.

4.3 Количественный анализ фракций гуминовых веществ пелоидов.

4.4. Определение антиоксидантных свойств гуминовых веществ пелоидов хемилюминесцентным методом.

ГЛАВА 5. АНТИОКСИДАНТНАЯ АКТИВНОСТЬ ГУМИНОВЫХ ВЕЩЕСТВ В УСЛОВИЯХ IN VIVO.

5.1. Биологическая доступность гуминовых веществ пелоидов.

5.2. Влияние гуминовых веществ пелоидов на процессы свободно-радикального окисления в сыворотке крови экспериментальных животных

5.3. Влияние гуминовых веществ пелоидов на процессы. свободнорадикального окисления в печени экспериментальных. животных гистологическими методами.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение структурных компонентов и физико-химических свойств гуминовых веществ низкоминерализованных иловых сульфидных грязей как источника антиоксидантных лекарственных средств»

Актуальность темы. Живой организм, как открытая термодинамическая система, активно реагирует на негативные изменения биосферы, и вместе с тем, характеризуется высоким постоянством состава внутренней среды. Поддержание окислительно-восстановительного гомеостаза, как неотъемлемого свойства живых организмов, обеспечивается комплексом взаимосвязанных биохимических процессов. Нарушение функций редокс-систем тканей и органов является важным звеном патогенеза ряда заболеваний, к которым относятся сахарный диабет, гепатиты различной этиологии [97], патологии сердечно-сосудистой системы [12; 110; 204], множество онкологических [15, 160] и аутоиммунных заболеваний, в том числе, ревматоидный полиартрит, склеродермия и другие [86; 92]. Сказанное обуславливает активный поиск средств лечения окислительно-восстановительных нарушений и коррекции свободнорадикального статуса организма. С этой целью широко используются синтетические антиоксидантные препараты, такие как ионол [110], пробу-кол (фенбутол) [91; 152], диметилсульфоксид, мексидол [20, 79] и другие, применение которых ограничено рядом противопоказаний. Причинно-следственные отношения между терапевтическим эффектом и побочными действиями синтетических препаратов остаются недостаточно изученными. Иногда токсическое действие лекарственных средств на организм становится источником серьезных патологий. Вместе с тем, далеко не полностью исчерпаны возможности по разработке и внедрению в фармацевтическую практику терапевтических препаратов на основе природных соединений. Приоритетной задачей фармации в настоящее время является создание инновационных лекарственных субстанций на основе отечественного природного сырья для производства современных конкурентоспособных фармацевтических препаратов.

Перспективными с этой точки зрения являются гуминовые вещества, которые предполагают реализацию терапевтического эффекта на субклеточном и молекулярном уровне. Актуально фармацевтическое использование гуминовых веществ пелоидов, формирующихся в восстановительных условиях при участии сульфатредуцирующих микроорганизмов, что отражается на их структуре и химических свойствах, которые определяют биологическую активность соединений. Гуминовые вещества обладают широким спектром терапевтического действия, что подтверждается экспериментальными исследованиями последних лет. Специфические органические вещества обладают адаптогенным [141], антитоксическим [5, 65], противомикробным [43], диуретическим [38], противовоспалительным [3, 6, 58] действием, а также являются универсальной матрицей, позволяющей ввести в организм человека необходимые микроэлементы в активной форме [3,7].

Отсутствие в информационных источниках сведений о влиянии гуминовых веществ пелоидов на окислительно-восстановительные процессы обуславливает актуальность и новизну проведенного исследования.

Цель работы. Исследование зависимости антиоксидантных свойств гуминовых веществ низкоминерализованных иловых сульфидных грязей от их структурной организации.

Задачи исследования:

1. Выделить и идентифицировать по общепринятым критериям гуминовые вещества низкоминерализованных иловых сульфидных грязей: фульвовые, гиматомелановые, гуминовые и гумусовые кислоты.

2. Исследовать структурные компоненты гуминовых веществ низкоминерализованных иловых сульфидных грязей физико-химическими методами: инфракрасной спектроскопии (ИКС), ядерно-магнитного резонанса (ЯМР), электронного парамагнитного резонанса (ЭПР).

3. Разработать методы количественного анализа гумусовых кислот и их компонентов: фульвовых, гиматомелановых и гуминовых кислот.

4. Охарактеризовать в сравнительном аспекте про- и антиоксидантные свойства отдельных фракций гуминовых веществ низкоминерализованных иловых сульфидных грязей в условиях «in vitro».

5. Оценить биодоступность отдельных фракций гуминовых веществ низкоминерализованных иловых сульфидных грязей на модельных опытах.

6. Изучить антиоксидантную активность фульвовых, гиматомелановых, гуминовых и гумусовых кислот пелоидов по основным гематологическим характеристикам в условиях «in vivo».

Научная новизна исследования

Получены новые сведения о структурных компонентах фульвовых, гиматомелановых, гуминовых кислот с использованием ИК, ЯМР, ЭПР-спектроскопии. Установлены особенности молекулярной структуры гуминовых веществ пелоидов.

Впервые уточнена и детализирована природа парамагнитных центров в молекулах гуминовых веществ пелоидов, свидетельствующая об их высокой реакционной способности. Установлены соотношения электронодонорных и электроноакцепторных свойств гуминовых веществ пелоидов.

Получены новые данные о влиянии гуминовых веществ пелоидов на динамику окислительного стресса в эксперименте. Выявлена антиоксидант-ная активность фульвовых, гиматомелановых, гуминовых и гумусовых кислот пелоидов, раскрывающая перспективность их использования в фармацевтической практике.

Впервые предложен способ количественного определения гуминовых веществ пелоидов методом амперометрии, который может быть использован для стандартизации лекарственных субстанций.

Практическая значимость. Данные об антиоксидантной активности гуминовых субстанций являются основой при выработке алгоритма по рациональной пелоидотерапии с позиций доказательной медицины.

Совокупность сведений о составе, структурной организации, а также количественные характеристики антиоксидантной активности и биодоступности гуминовых веществ низкоминерализованных иловых сульфидных грязей являются необходимой базой для создания стандартизированных субстанций и лекарственных препаратов с целью дальнейшего использования в медицинской и фармацевтической практике.

Внедрение результатов работы позволит создать новый для России класс лекарственных средств сочетанного действия на основе экологически чистых природных веществ с доступной сырьевой базой.

Преимуществами применения пелоидопрепаратов, по сравнению с на-тивным грязелечением, является уменьшение противопоказаний и возможность использования лечебного фактора вне курортных зон.

По результатам исследований оформлено рационализаторское предложение:

- удостоверение на рационализаторское предложение № 122 от 1 февраля 2011г. «Средство природного происхождения для лечения инфицированных ран на основе хелатокомплекса гуминовых кислот пелоидов с ионами серебра».

Результаты диссертационного исследования внедрены:

• В учебный процесс на кафедре общей, бионеорганической и биоорганической химии ГОУ ВПО СамГМУ Минздравсоцразвития России (акт внедрения от 1.03.2011);

• В учебный процесс на кафедре химии фармацевтического факультета ГОУ ВПО СамГМУ Минздравсоцразвития России (акт внедрения от 1.03.2011).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Принадлежность субстанций выделенных из низкоминерализованных иловых сульфидных грязей к классу гуминовых веществ, а именно: фульво-вым, гиматомелановым и гуминовым кислотам, по общепринятым идентификационным признакам: элементному составу, ИК-спектроскопии, коэффициенту цветности.

2. Генетическое сходство представителей веществ гуминового ряда по совокупности результатов, полученных физико-химическими методами анализа: инфракрасной спектроскопии, ядерно-магнитного резонанса, электронного парамагнитного резонанса.

3. Антиоксидантная активность в ряду гуминовых веществ пелоидов в условиях in vitro по результатам амперометрического, манометрического и хемилюминесцентного методов.

4. Результаты определения биологической доступности отдельных фракций гуминовых веществ низкоминерализованных иловых сульфидных грязей на модельных опытах.

5. Методика количественного анализа фульвовых, гиматомелановых, гуминовых и гумусовых кислот пелоидов как основа для стандартизации лекарственных субстанций.

6. Сравнительный анализ антиоксидантной активности в ряду гуминовых веществ низкоминерализованных иловых сульфидных грязей в условиях in vivo.

Апробация работы

Результаты , диссертационной работы доложены и обсуждены на «XII конгрессе «Экология и здоровье человека» (г. Самара, 2007), межрегиональной научно-практической конференции по вопросам восстановительной медицины, курортологии и физиотерапии, посвященной 175-летию ФГУ «Санаторий «Сергиевские минеральные воды» (г. Самара, 2008), XVI и XVIII Международной научно-практической конференции «Экология и жизнь» (г. Пенза 2009, 2010), IV Международном симпозиуме «Механизмы действия сверхмалых доз» (г. Москва, 2008), VII Всероссийской конференции с Молодежной научной школой «Химия и медицина, ОРХИМЕД-2009» (г. Уфа, 2009), региональной конференции «Молодые ученые - медицине», «Аспирантские чтения, 2009» (г. Самара, 2009), V Всероссийской конференции «Гуминовые вещества в биосфере» (г. Санкт-Петербург, 2010).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 22 работы, из них 6 работ — в ведущих рецензируемых журналах ВАК.

Связь задач исследования с планами научных работ

Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (государственная регистрация № 01200809998).

Объем и структура работы

Диссертационная работа изложена на 138 страницах машинописного текста, содержит 20 таблиц, 33 рисунка. Диссертация состоит из введения, обзора литературы (глава 1), описания объектов и методов исследования (глава 2), трех глав (глава 3,4,5), отражающих результаты собственных исследований, заключения, общих выводов, приложения и списка литературы, включающего 209 источников, из которых 65 - на иностранных языках.

Заключение диссертации по теме «Фармацевтическая химия, фармакогнозия», Жданова, Алина Валитовна

ВЫВОДЫ:

1. Установлена и экспериментально подтверждена зависимость антиокси-дантных свойств в ряду гуминовых веществ низкоминерализованных иловых сульфидных грязей от характера сопряжения и особенностей структурной организации макромолекул.

2. Специфические органические вещества, выделенные из низкоминерализованных иловых сульфидных грязей, на основании совокупности результатов элементного, фотометрического и спектрального анализа относятся к группе гуминовых веществ и образуют генетический ряд: фульвовых, гиматомелановых и гуминовых кислот, характеризующихся общими и специфическими свойствами.

3. Установлен структурно-групповой состав фульвовых, гиматомелановых, гуминовых и гумусовых кислот пелоидов методами ИК-, ЯМР- , ЭПР- спектроскопии. Гиматомелановые кислоты отличаются от других фракций присутствием карбонильных атомов углерода хиноидной, сложноэфирной, еноловой и кетон-ной природы. Детализирована природа парамагнитных центров, свидетельствующая о высокой реакционной способности гуминовых веществ низкоминерализованных иловых сульфидных грязей.

4. Получены количественные характеристики окислительно-восстановительной активности в ряду гуминовых веществ пелоидов в условиях in vitro манометрическим, амперометрическим и хемилюминесцентным методами. Все фракции гуминовых веществ обладают антиоксидантной активностью, которая возрастает в ряду: фульвовые, гумусовые, гуминовые, гиматомелановые кислоты и зависит от особенностей структурной организации соединений, определяющим фактором которой является характер сопряжения. Высокая антиокси-дантная активность (in vitro) гиматомелановых кислот обусловлена сопряжением хиноидно - енолового типа с включением сложноэфирных фрагментов. Обнаружена полимодальная зависимость антиоксидантной активности гуминовых и гумусовых кислот.

5. Разработаны методики амперометрического количественного определения отдельных фракций гуминовых веществ низкоминерализованных иловых сульфидных грязей. Относительная ошибка методик определения не превышает для фульвовых кислот - 3,4 %, гиматомелановых кислот — 2,7%, гуминовых — 4,5% и гумусовых кислот -3,6 % . Валидационная оценка количественного амперомет-рического определения гуминовых веществ показала, что методики линейны, воспроизводимы и правильны.

6. Доказана способность отдельных фракций гуминовых веществ пелоидов диализировать через биологическую мембрану, возрастающая в ряду: гумино-вые-гумусовые-гиматомелановые-фульвовые кислоты. Биодоступность возрастает в присутствии трансагентов и ионов металлов и с повышением рН раствора.

7. По результатам гематологических и гистологических исследований выявлена способность гуминовых веществ пелоидов нивелировать воздействие свободно-радикального окисления при моделировании окислительного стресса in vivo, приводя показатели антиоксидантной защиты организма к норме. Установлено возрастание антиоксидантной активности в ряду: фульвовые, гумусовые, гуминовые, гиматомелановые кислоты.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Главным патогенетическим фактором любого заболевания являются свободные радикалы. Их образование стимулируют различные неблагоприятные экологические условия и электромагнитное воздействие (ежедневное пользование сотовыми телефонами, компьютерами).

Любая клетка организма способна к генерации активных форм кислорода, что приводит к окислительному стрессу, который способствует возникновению различных заболеваний и патологий. Применение антигипоксантов и антиокси-дантов позволит увеличить биологический возраст человека и способность организма противостоять вредным воздействиям окружающей среды, а так же различным патологическим процессам. В случае заболевания, необходимо вначале предотвратить окислительный стресс, который инициирует дальнейшие патологические процессы (например, воспаление) путем назначения антиоксидантов. Препараты природного происхождения, по сравнению с синтетическими, наряду с биологической активностью, обладают, как правило, минимумом побочных эффектов. Поэтому актуальным является поиск новых препаратов, природного происхождения, причем приоритетным направлением является разработка действующих веществ комплексного характера, обладающих разнонаправленным действием на животные организмы.

Гуминовые вещества низкоминерализованных иловых сульфидных грязей, представляющие собой биотермодинамически устойчивые соединения, которые образуются в результате разложении и биотрансформации растительных и животных остатков, относятся к группе биологически активных веществ сочетанно-го действия. Они состоят из нескольких фракций, основными из которых являются фульвовые, гиматомелановые и гуминовые кислот. Каждая из фракций представляет собой не индивидуальное соединение, а группу соединений близких по молекулярной структуре, массе, способу выделения и ряду физико-химических свойств. Гумусовые кислоты имеют более сложный состав, включающий все фракции гуминовых веществ, с преобладающим содержанием гуминовых и фульвовых кислот. При получении гумусовые кислоты выделяют в первую очередь. Вещества, выделенные из низкоминерализованных иловых сульфидных грязей, по ряду количественных характеристик и качественных показателей (элементному составу, коэффициентам экстинкции и характеристическим полосам в спектрах) относятся к группе гуминовых.

Рассчитанные по результатам элементного анализа общепринятые соотношения показывают, что максимальная степень обуглероженности характерна для гуминовых кислот и убывает через гиматомелановые к фульвовым. Значение соотношения водорода и углерода используется для оценки доли ароматической и алифатической составляющей в составе соединений. Значения Н/С < 1 характеризуют преобладание ароматических фрагментов, а при значении соотношения > 1 — алифатических фрагментов в составе соединений. Анализ указанного соотношения позволяет предположить в составе гуминовых кислот значительной доли ароматической составляющей, представленной в остальных фракциях в меньшей степени. Отношение О/С имеет наибольшее значение (1,55) в фульвовых кислотах и наименьшее (0,39) в гиматомелановых кислотах.

Расчет степени окисленности с учетом количества углерода, кислорода и водорода является косвенной характеристикой окислительно-восстановительных свойства исследуемых фракций. Фульвовые кислоты, имеющие наибольшее значение степени окисленности, обладают, по—видимому, менее выраженными восстановительными свойствами по сравнению с гиматомелановыми, которые характеризуется явным преобладанием восстановительных свойств. Для гуминовых кислот характерно значение степени окисленности, близкое к нулю, что свидетельствует о высокой окислительно-восстановительной буферности и химической стабильности соединений данной фракции. Рассчитанная на основании результатов элементного анализа степень бензоидности подтверждает выявленный характер изменения ароматичности, который согласуется с коэффициентами экс-тинкций фракций гуминовых веществ. Степень бензоидности увеличивается в ряду фульвовые, гиматомелановые, гуминовые кислоты.

Анализ ИК- и ЯМР-спектров позволил с достаточной определенностью выявить как сходство молекулярной структуры всех фракций гуминовых веществ пелоидов, так и особенности их строения. Все гуминовые вещества характеризуются присутствием алифатических фрагментов метильного и метиленового типа, а также сигналов связей О-Н, причем форма полос свидетельствует о структурированном характере спиртовых фрагментов, по-видимому, за счет водородных связей. Для всех фракций характерно наличие карбоксильных групп, достоверно установленных как ИК-, так и ЯМР-спектрами, а также сигналов, которые можно отнести как к сигналам ароматических структур, так и ненасыщенных фрагментов типа олефиновых. Скорее всего указанные сигналы являются проявлением совокупности всех ненасыщенных фрагментов, включая колебания С=С в хиноидных молекулах. Таким образом, в фульвовых кислотах преобладают разветвленные алифатические цепочки с большим количеством спиртовых групп типа углеводов. Молекулярная структура гуминовых кислот представляет собой ароматический каркас, в котором боковые алифатические радикалы включают карбоксильные и спиртовые группы. Установлено, что гиматомелано-вые кислоты по своей молекулярной структуре имеют существенные отличия от структур других фракций, прежде всего, присутствием множества карбонильных атомов углерода различной природы: хиноидной, сложноэфирной, еноловой, ке-тонной. Указанная особенность молекулярного строения гиматомелановых кислот определяет наиболее выраженную степень сопряжение структурных фрагментов, и ее можно условно отнести к наиболее ненасыщенной фракции пелоидов. Наличие в молекулах гуминовых веществ широкого спектра функциональных групп (карбоксильных, гидроксильных, карбонильных, азот и серусодержа-щих) в сочетании с присутствием ароматических и алифатических фрагментов обеспечивает способность гуминовых веществ вступать в ионные и донорно-акцепторные взаимодействия, образовывать водородные связи. Это обуславливает их высокую реакционную способность и представляет возможность получения новых высокоэффективных пелоидопрепаратов широкого спектра действия и дальнейшего изучения их механизмов действия. Таким образом, анализ положения и относительной интенсивности характеристических полос спектров показал, что молекулярная структура гуминовых кислот представлена ароматическими и алифатическими фрагментами, в фульвовых кислотах преобладают группы хиноидного и спиртового характера. В структуре гиматомелановых кислот содержится, кроме алифатической и ароматической части, максимальное по сравнению с другими фракциями количество карбонильных групп хиноидного, спиртового, сложноэфирного характера. Концентрация парамагнитных центров, определенная с помощью электронного парамагнитного резонанса, свидетельствует о том, что минимальное число свободных радикалов содержат молекулы фульвовых кислот. Концентрация свободных радикалов в гуминовых кислотах имеет промежуточное значение и находится в интервале между фульвовыми и гиматомелановыми кислотами. Таким образом, данные ЭПР согласуются с особенностями молекулярной структуры соединений гуминовой природы.

Антиоксидантная активность всех фракций гуминовых веществ пелоидов была доказана химическими методами. Исследуемые фракции обладают антиок-сидантной активностью и тормозят окисление 1,4-диоксана в модельной системе. Наибольшим ингибирующим действием обладают гиматомелановые кислоты, незначительное количество которых вызывает практически полное торможение окислительного процесса. Выяснено, что гуминовые кислоты обладают как антиоксидантными, так и прооксидантными свойствами при возрастании их концентрации, что возможно, связано с усилением межмолекулярных взаимодействий. Количественные кинетические характеристики скорости ингибирования и эффективная константа скорости ингибирования увеличиваются в ряду: фульво-вые, гумусовые, гуминовые, гиматомелановые кислоты.

Результаты хемилюминесцентного определения антиоксидантной активности подтверждают закономерности манометрического исследования.

Применение амперометрического метода для определения суммарного содержания антиоксидантов по кверцетину позволило выявить, что эффективность проявления субстанциями антиоксидантная активность зависит от их концентрации обратно пропорционально: чем меньше содержание препарата, тем выше антиоксидантная активность фракций. Следует отметить, что наибольшее содержание антиоксидантов при малых концентрациях характерно для гиматомелановых кислот. Полученные результаты позволят в будущем при создании лекарственных средств на основе субстанций регулировать соотношение «доза — эффект».

Полученные в работе результаты амперометрического анализа позволяют использовать его как один из способов стандартизации гуминовых веществ, так как установлено, что суммарное содержание антиоксидантов прямолинейно зависимость от концентрации гуминового вещества.

Важным фармакокинетическим свойством любого потенциального лекарственного средства является его биологическая доступность. В работе доказана биодоступность гуминовых веществ методом диализа через мембрану животного происхождения. Степень диализа зависит от кислотности раствора: чем больше значение водородного показателя, тем больше степень диализа. При уменьшении значений рН до 4,0 происходит резкое уменьшение степени диализа в 5, 7 и 8 раз в фульвовых, гиматомелановых и гуминовых кислотах соответственно. Наибольшая степень диализа при физиологической кислотности (7,4) характерна для фульвокислот (0,5), а наименьшая для гуминовых кислот (0,2). Гиматомелановые кислоты характеризуются промежуточным значением е равным 0,35. Введение диметилсульфоксида и ионов металлов улучшает способность гуминовых веществ к диализу. Отмеченные особенности диализа определяются, по-видимому, непостоянством конформационных форм гуминовых веществ.

Изучение антиоксидантных свойств гуминовых веществ пелоидов в условиях in vivo, на модели окислительного стресса, вызванного добавлением поли-хлорированных бифенилов, показало, что они обладают эффективными антиок-сидантными свойствами, поскольку угнетают свободнорадикальное окисление модельной системы, причем наибольшей способностью угнетать свободно-радикальное окисление модельной системы обладают гуминовые и гиматомелановые кислоты, у которых светосумма снижается на 79% и 45% соответственно. Под действием фульвовых и гумусовых кислот пелоидов показатель светосуммы снижался, но незначительно. Введение гуминовых кислот перорально и парентерально показало, что их антиоксидантное действие не зависит от пути введения.

Таким образом, установлено, что при острой затравке крыс соволом инициируются процессы свободнорадикального окисления, развивается недостаточность антиокислительной защиты, токсическое поражение печени.

Коррекция нарушений метаболических процессов у животных препаратами гуминового ряда снимала тяжесть поражения гепатоцитов, активировала антирадикальные резервы организма, причем на третьи сутки гуминовые вещества оказывают существенное антиоксидантное действие, активируя ферментные системы организма.

Объективным критерием оценки антиоксидантной активности являются гистологические исследования. Воздействие дифенилов значительно вызывают нарушения структуры печени. Наблюдается массивная гибель эпителиоцитов, нарушение радиального расположения печеночных балок и разрыв анастомозов между ними, изменена форма и размеры гепатоцитов, часть гепатоцитов лишена ядер, или находится в состоянии гидропической и баллонной дистрофии, отсутствует гликоген в гепатоцитах печеночных долек. При лечении крыс гуминовы-ми веществами пелоидов восстанавливается структура стенок желчных протоков, выявляются зерна гликогена, застой в венозных сосудах уменьшается, восстанавливается структура стенки междольковых желчных протоков, выявляются зерна гликогена отсутствуют микроочаги некрозов.Таким образом, экспериментальные данные, полученные различными физико-химическими и химическими методами подтверждают антиоксидантную активность гуминовых веществ пелоидов, которая возрастает в ряду фульвовых, гумусовых, гуминовых, гиматоме-лановых кислот низкоминерализованных иловых сульфидных грязей.

117

Список литературы диссертационного исследования кандидат фармацевтических наук Жданова, Алина Валитовна, 2011 год

1. Аввакумова, Н.П. Биохимические аспекты терапевтической эффективности гумусовых кислот лечебных грязей Текст. / Н.П. Аввакумова. Самара: ГП Перспектива; СамГМУ, 2002. - 124с.

2. Аввакумова, Н.П. Противовоспалительная активность препаратов в ряду гумусовых кислот низкоминерализованных иловых сульфидных грязей Текст. / Н.П. Аввакумова // Международный журнал по иммунореабилитации. 2002. -Т. 4, № 1.-С. 190-191.

3. Агапов, А.И. Специфические органические вещества лечебных грязей как источник пелоидопрепаратов гуминового ряда Текст.: автореф. дис. . д-ра биол. наук / А.И. Агапов. Самара, 1999. - 58с.

4. Адсорбционные равновесия в системе гуминовые кислоты -Ag+ Текст. / М.А. Кривопалова, Н.П. Аввакумова, A.B. Жданова [и др.] // Тр. V Всерос. конф. Гуминовые вещества в биосфере. СПб., 2010. - С. 256.

5. Аммосова, Я.М. Свойства гуминовых кислот окультуренных подзолистых почв Мурманской области Текст. / Я.М. Аммосова, Е.Д. Балаганская // Почвоведение. 1991. - № 7. - С. 29-39.

6. Антиоксиданты. Термины и определения стандарт СТО ИБХН РАН 1.0 Текст. / Е.Б. Бурлакова, В.М. Мисин [и др.]. М., 2010. - 64с.

7. Ю.Антонюк, М.В. Эффективность электрофореза гумата натрия при ревматоидном артрите Текст. / М.В. Антонюк, T.JI. Магалиш // Вопр. курортологии, физиотерапии и ЛФК. 2005. - № 4. - С. 20-22.

8. П.Апресин, Э.А. Эффективность комплексного лечения антибактериальными препаратами и пелоидопрепаратами больных туберкулезом легких Текст.: дис. . канд. мед. наук / Э.А. Апресин. Казань, 1986. - 169с.

9. Барсель, В.А. Коррекция некоторых биохимических нарушений липидного обмена у больных атеросклерозом с помощью антиоксиданта дибунола Текст. / В.А. Барсель, И.М. Корочкин, Г.В. Архипова // Изв. АН СССР. Сер. Биол. 1988 - № 1. - С. 75-85.

10. Бахман, В.И. Методика анализа лечебных грязей (пелоидов) Текст. / В.И. Бахман, К.А. Овсянникова, А.Д. Вадковская. М.: ЦНИИКиФ, 1965. - 217с.

11. Беркович, A.M. Лекарства для здоровья: достижения и перспективы ветеринарии Текст. / A.M. Беркович, B.C. Бузлама // Животноводство России. -2005. № 8. - С. 59.

12. Бурлакова, Е.Б. Биоантиоксиданты в лучевом поражении и злокачественном росте Текст. / Е.Б. Бурлакова, Е.Б. Алексеенко, Е.М. Молочкина. М.: Наука, 2005. -211с.

13. Варламова, P.M. Групповое и индивидуальное иммунохимическое определение некоторых биологически значимых соединений с амперометрическим детектированием Текст.: автореф. дис. . канд. хим. наук / P.M. Варламова. -Казань, 2007. 26с.

14. Варшал, Г.М. Исследование сосуществующих форм ртути (II) в поверхностных водах Текст. / Г.М. Варшал, Н.С. Буачидзе // Журн. аналит. химии. -1983. № 38(12). - С. 2155-2167.

15. Виброфорез экстракта липидов грязи в восстановительном лечении больных остеоартрозом Текст. // Г.Г. Решетова, Т.Н. Зарипова, C.B. Новикова [и др.] // Вопр. курортологии, физиотерапии и ЛФК. 2004. - № 1. - С. 30-33.

16. Владимиров, Ю.А. Свободные радикалы в биологических системах Текст. / Ю.А. Владимиров//Соросовский образовательный журн. 2000.-№12.-С.З-19.

17. Владимиров, Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты Текст. / Ю.А. Владимиров // Вестн. РАМН. 1998. - № 7. - С. 43-50.

18. Владимиров, Ю.А. Хемилюминесценция клеток животных Текст. / Ю.А. Владимиров, М.П. Шерстнев // Итоги науки и техники. Сер. Биофизика. -1989. Т. 24. - С. 176.

19. Влияние некоторых препаратов гуминовых веществ торфа на нуклеиново-белковые взаимодействия Текст. / Е.Ф. Конопля, В.К. Зимицкая, С.И. Кра-шевская [и др.] // Тканевая терапия: тез. науч. конф. Одесса, 1983.-С.73-74.

20. Влияние способов очистки на структуру и выход гуминовых кислот при их извлечении из типичного чернозёма Текст. / В.А. Холодов, И.А. Бутнева, Н.Ю. Гречищева [и др.] // Агрохимический вестн. 2008. - № 5. - С. 31-33.

21. Глебова, Г.И. Гиматомелановые кислоты почв Текст. / Г.И. Глебова. М.: МГУ, 1985. - 73с.

22. Глебова, Г.И. Структурные различия гиматомелановых и гуминовых кислот чернозема типичного Текст. / Г.И. Глебова, A.A. Ларионова, Д.С. Орлов // Почвоведение. 1985. - № 7. - С. 31-37.

23. Гордон, А. Спутник химика Текст. / А. Гордон, Р. Форл.- М. Мир, 1976.-51с.

24. Гуминовые кислоты: связь между поверхностной активностью и стимуляцией роста растений Текст. / Д.Б. Вахмистров, O.A. Зверкова [и др.] // Докл. АН СССР. 1987 - Т. 293, № 5. - С. 1277-1280.

25. Давыдова, О.Б. Бальнеотерапия: Основные результаты исследований последнего десятилетия Текст. / О.Б. Давыдова // Вопр. курортологии. 1998. - № 4. - С. 4-8.

26. Действие антиоксидантов на кинетику цепного окисления липидов в липосо-мах Текст. / О.В. Васильева, О.Б. Любицкий [и др.] // Биол. мембраны. 1998. -Т. 15, №2.-С. 177-183.

27. Денисов, Е.Т. Ингибирование цепных реакций Текст. / Е.Т. Денисов, В.В. Азатян. Черноголовка: ИФХЧ РАН, 1997. - 268с.

28. Денисов, Е.Т. Константы скорости гомогенных жидкофазных реакций Текст. /Е.Т. Денисов. -М.: Наука, 1971. 711с.

29. Дубшцев, A.B. Исследование влияния гуминовых веществ пелоидов на экскреторную функцию почек Текст. / A.B. Дубищев, JI.E. Меньших // Известия самарского научного центра РАН. Самара, 2010. - Т. 12, № 1(8). - С. 20232026.

30. Евсеева, М.М. Пелоидотерапия в современной гинекологической практике Текст. / М.М. Евсеева // Вестн. восстановительной медицины. 2008. - № 1(23). - С. 54-59.

31. Екатеринина, JI.H. Исследование производных гуминовых кислот (к вопросу о механизме реакции с двухлористым оловом) Текст. / JI.H. Екатеринина, Т.А. Кухаренко // Почвоведение. 1971. - № 3. - С. 68-75.

32. Ерюхин И.А. Экстремальное состояние организма. Патофизиологическая концепция и ее клиническое воплощение Текст. / И.А. Ерюхин // Патофизиология экстремальных состояний. СПб., 1993. - С. 64-72.

33. Ефуни, С.Н. Гипоксические состояния. Механизмы развития и пути коррекции Текст. / С.Н. Ефуни, В.А. Шпектор // Руководство по гипербарической оксигенации. М.: Медицина, 1986. - С. 416.

34. Жернов, Ю.В. Перспективы разработки химиотерапевтических препаратов на основе гуминовых кислот пелоидов Текст. /Ю.В. Жернов // Материалы II ежегодного Всерос. конгр. по инфекционным болезням. М., 2010. - С. 111.

35. Жилин, Д.М. Исследование реакционной способности и детоксицирующих свойств гумусовых кислот по отношению к соединениям ртути (II) Текст.: автореф. дис. канд. хим. наук / Д.М. Жилин. М., 1998. -24с.

36. Инишева, Л.И. Торфяные почвы: их генезис и классификация Текст. / Л.И. Инишева//Почвоведение. 2006. - С. 781-786.

37. Исаков, Ю.Ф. Сепсис у детей Текст. / Ю.Ф. Исаков, Н.В. Белобородова. М.: Мокеев, 2001.-369 с.

38. Исматова, P.P. Влияние комплекса гуминовых кислот из торфов Сибири на течение аллергической реакции Текст. / P.P. Исматова, Х.М. Насыров // Фармацевтическая наука в решении вопросов лекарственного обеспечения. М., 1998.-С. 270-275.

39. Использование ИК-спектроскопии в медицине, экологии и фармации Текст. / под ред. проф. A.B. Каргаполова. Тверь: Триада, 2003.-.216с. , . „ ^

40. К вопросу о допустимом содержании радионуклидов в минеральных водах, лечебных грязях, глинах Текст. / В.Б. Адилов, И.И. Гусаров [и др.] // Вопр. курортологии, физиотерапии и ЛФК. 2001. - № 3. - С. 30-33.

41. Калинин, C.B. Физиология грязелечения как частный случай неспецифической адаптации организма Текст. / C.B. Калинин // Вопр. курортологии. -2003.-№4. -С. 52-53.

42. Кархалев, В.А. У озера. К 175-летию санатория «Сергиевские минеральные воды» Текст. / под ред. глав, врача санатория В.А. Кархалева. Самара: БМВ и К, 2008. - 200с.

43. Касаткина, Т.Б. Этика экспериментальных исследований животных в космической биологии и медицине Текст. / Т.Б. Касаткина, A.C. Капланский // Авиакосмическая и экологическая медицина. 2000. - № 2. - С. 17-21.

44. Катунина, Е.Е. Экологическая и биохимическая активность гиматомелановых кислот пелоидов Текст.: автореф. дис. . канд. биол. наук / Е.Е. Катунина. -Самара, 2007. 20с.

45. Кеель, Э.И. Факторы действия лечебной грязи и «Гумизоля» Текст. / Э.И. Кеель // Тр. Эстонского института экспериментальной и клинической медицины АМН СССР. Таллин, 1966. - Вып. 3. - С. 7-14.

46. Клюев, H.A. Определение полихлорированных бифенилов в окружающей среде и биоте. Полихлорированные бифенилы. Текст. / H.A. Клюев, Е.С. Бродский // Супертоксиканты XXI века. Инф. выпуск № 5, ВИНИТИ, Москва. -2000.-№ 5.-С. 31-63.

47. Комиссаров, И.Д. К вопросу о молекулярной массе гуминовых кислот Текст. / И.Д. Комиссаров, Л.Ф. Логинов // Гуминовые препараты. Тр. Иркутского с.-х ин-та. Тюмень, 1971. - Т. 14. - С. 125-130.

48. Комплексное лечение и реабилитация больных в санатории «Красноусольск» Текст.: монография / Ф.Х. Мазитов, Л.Т. Гильмутдинова, Р.В. Ахмадуллин [и др.]; под ред. Л.Т. Гильмутдиновой. Уфа: ГУЛ Уфим. полиграфкомб., 2004. -136с.

49. Костюк, В.А. Биорадикалы и биоантиоксиданты Текст. / В.А. Костюк, А.И. Потапович. Минск: БГУ, 2004. - 174с.

50. Косьянова, З.Ф. Химическая характеристика и биологическая активность гумусовых кислот некоторых лечебных грязей Текст.: автореф. дис. . канд. биол. наук / З.Ф. Косьянова. М., 1985. - 20с.

51. Кречетова, Е.В. Гуминовые кислоты горючих сланцев, их свойства и строение Текст.: автореф. дис. канд. биол. наук / Е.В. Кречетова. М., 1994. - 20с.

52. Кривопалова, М.А. Проницаемость в ряду гумусовых кислот пелоидов Текст. / Аввакумова Н.П., Глубокова М.Н., Жданова A.B. // Тр. IV Всерос. конф. Гуминовые вещества в биосфере. СПб., 2007. - С. 46-49.

53. Курорт «Сергиевские минеральные воды» здравница России Текст. / Б.Н. Жуков, В.Г. Яковлев, М.Г. Шебуев [и др.]. - Самара, 1994. - 288с.

54. Курортология и физиотерапия Текст. Т. 1 / под ред. В.М. Боголюбова. М: Медицинская литература от издательства: БИНОМ 2008. - 408 с.

55. Кухаренко, Т.А. О молекулярной структуре гуминовых кислот Текст. / Т.А. Кухаренко // Гуминовые вещества в биосфере. 1993. - № 4. - С. 27-36.

56. Ланкин, В.З. Перекисное окисление липидов в этиологии и патогенезе атеросклероза Текст. / В.З. Ланкин, A.M. Вихерт // Арх. патолог. 1989. - Т.51, Вып. 1.-С. 80-84.

57. Лесная энциклопедия Текст.: В 2 т. Т.1 / гл. ред. Г.И. Воробьев; ред. кол.: H.A. Анучин, В.Г. Атрохин, В.Н. Виноградов [и др.]. М.: Сов. энцикл., 1985. - 563с.

58. Лещинский, А.Ф. Пелоидо- и фармакотерапия при воспалительных заболеваниях Текст. / А.Ф. Лещинский, З.И. Зуза. Киев, 1985. -184с.

59. Лодыгин, Е.Д. Структурно-функциональные параметры гумусовых веществ подзолистых болотно-подзолистых почв Текст. / Е.Д. Лодыгин, В.А. Безно-сиков, С.Н. Чуков. СПб.: Наука, 2007. - С. 5-8.

60. Лукьянова, Л.Д. Особенности антигипоксического действия мексидола, связанные с его специфическим влиянием на энергетический обмен Текст. / Л.Д. Лукьянова, В.Е. Романова // Хим. фарм. журн. 1990. - № 8. - С. 9-11.

61. Мальцева, Е.В. Физико-химические свойства гуминовых кислот модифицированных методом механоактивации каустобиолитов, и их взаимодействие с биоцидами Текст.: автореф. дис. канд. хим. наук Томск, 2010. - 23с.

62. Манынина, Н.В. Курортология для всех. За здоровьем на курорт Текст. / Н.В. Маныпина. М.: Вече, 2007. - 592с.

63. Мартинович, Г.Г. Окислительно-восстановительные процессы в клетках Текст. / Г.Г. Мартинович, С.Н. Черенкович. Минск: БГУ, 2006. - 154с.

64. Мартыненко, C.B. Физико-химические свойства, структура и поглотительная способность гуминовых кислот чернозема обыкновенного и лугово-черноземного солонца Текст.: автореф. дис.канд. с-х.наук Воронеж, 2003.-22с.

65. Маянский, Д.Н. Хроническое воспаление Текст. / Д.Н. Маянский. М.: Медицина, 1991. - 272с.

66. Меныцикова, Е.Б. Окислительный стресс при воспалении Текст. / Е.Б. Меныцикова, Н.К.Зенков//Успехи соврем, биологии-1997.-Т. 17. С. 155-171.

67. Метод определения каталазы Текст. / М.А. Королюк, Л.И. Иванова, И.Г. Майорова, В.Е. Токарев // Лабораторное дело. 1988. - № 1. - С. 16-19.

68. Нечипуренко, О.Н. Грязи — природные биогенные стимуляторы, механизмы целебного действия Текст. / О.Н. Нечипуренко // Провизор. 1998. -№ 6. - С. 54-57.

69. Никонова, С.И. Применение метода ЭПР к изучению модельных гумусово-железистых соединений Текст. / С.И. Никонова, С.Н. Чуков // Моделирование почвообразовательных процессов гумидной зоны. Л.: Изд-во Ленингр. ун-та, 1984. С. 115-128.

70. Орлов, Д.С. Гумусовые кислоты почв и общая теория гумификации / Д.С. Орлов // Химия почв. М.: МГУ, 1992. - 325с.

71. Острый алкогольный гепатит: прогноз и подходы к терапии Текст. / С.Н. Мехтиев, В.Б. Гриневич, Ю.А. Кравчук [и др.] // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 2008. - T. XVIII, № 6. - С. 43-49.

72. Оценка антиокислительной активности плазмы крови с применением желточных липопротеидов Текст. / И.В. Бабенков, Ю.О. Теселкин [и др.] // Лабораторное дело. 1988. - № 2. - С. 59-62.

73. Патент на изобретение. Способ анализа гуминовых кислот пелоидов/ Авваку-моваН.П., Агапов и др.. № 2312343 от 28.11.2005 Самара.-2005.

74. Патент на изобретение. Способ анализа гиматомелановых кислот пелоидов /Аввакумова Н.П., Агапов А.Щи др.. № 2338188 от 10.11.08 -Самара-2008.

75. Перминова, И.В. Гуминовые вещества вызов химикам XXI века/ И.В. Пер-минова. // Химия и жизнь. 2008 - №1. - 60 с.

76. Перминова, И.В. Гуминовые вещества в контексте зеленой химии Текст. / И.В. Перминова, Д.М. Жилин // Зеленая химия в России. М.: Изд-во Моск. Ун-та, 2004. - С. 146-162.

77. Пономарева, С.О. Пелоидотерапия в комплексном курортном лечении детей раннего возраста с последствиями перинатального поражения головного мозга Текст. / С.О. Пономарева, JI.M. Бабина // Вопр. курортологии, физиотерапии и ЛФК. 2003. - № 6. - С. 21-23.

78. Попов, А.И. Гуминовые вещества: свойства, строение, образование Текст. / А.И. Попов; под ред. Е.И. Ермакова. СПб., 2004.-248с.

79. Послыхалина, О.В. «Оценка эффективности Гувитан-С в условиях производства» Текст. / О.В. Послыхалина // Технология животноводства. 2008. -№7(7).-С. 17-18.

80. Применения антиоксиданта коэнхима Q10 как вариант цитопротекции при ишемической болезни сердца Текст. / А.Л. Сыркин, А.Х. Коган, C.B. Дрини-цин [и др.] // Клин. мед. 1998. - № 7. - С. 24-27.

81. Природные лечебные ресурсы Самарской области Текст. / В.Б. Адилов, Е.С. Бережнов, Т.М. Требухова, Я.А. Требухов // Вопр. курортологии, физиотерапии и ЛФК. 2008. - № 2. - С. 45-47.

82. Пунтус, Ф.А. Изучение химической природы гумусовых кислот сапропе-лей Текст.: автореф. дис. . канд. хим. наук / Ф.А. Пунтус. М., 1976. - 18с.

83. Реестр лекарственных средств России. Энциклопедия лекарств Текст. / глав. ред. Ю.Ф. Крылов. 8-е изд., перераб. и допол. - М.: РЛС, 2001. - 1503с.

84. Репин, В.С Клеточные механизмы атеросклероза Текст. / B.C. Репин // Соросовский образовательный журн. 1998. - № 9. - С. 34-38.

85. Самутин, H.M. Актуальные проблемы пелоидотерапии Текст. / Н.М. Са-мутин, Н.Г. Кривобоков // Вопр. курортологии. 1997. - № 3. - С. 33-35.

86. Свободнорадикальное окисление и сердечно-сосудистая патология: коррекция антиоксидантамиТекст., М. 2003.-С.22.

87. Севостьянова, Н.В. Антимутагенный эффект гумизоля в культурах Т-лимфоцитов крови, подвергнутых воздействию циклофосфана Текст. / Н.В. Севостьянова //Вопр. курортологии, физиотерапии и ЛФК.-1998.-№4.-С.46-47.

88. Семионова, М.А. Химико-фармацевтическое и организационно-экономическое обоснование применения гуминовых кислот пелоидов Текст.: автореф. дис. канд. фарм. наук / М.А. Семионова. Самара, 2006. - 20с.

89. Современные методы исследования .гуминовых веществ почв проблемы и перспективы Текст. / В.В. Демин, Ю.А. Завгородняя [и др.] // Гуминовые вещества в биосфере: тез. III Всерос. конф. - СПб., 2005. - С. 58-59.

90. Содикова, Г.С. Физико-химические свойства гуминовых кислот типичных сероземов Текст./Г.С.Содикова, Н.Б.Раупова, Н.Г.Сагдуллаева// Вестн.Алтайского государственного аграрного университета-2007.-№7.-С.27

91. Степанова, Е.А. Химические свойства и строение гуминовых кислот сапропе-лей Текст.: автореф. дис. . канд. биол. наук / Е.А. Степанова. М., 1996. -21с.

92. Стругацкий, В.М. Физические факторы в акушерстве и гинекологии Текст. / В.М. Стругацкий. М.: Медицина, 1992, с.250-256.

93. Татевосов, С.Р. Грязелечение Текст. / С.Р. Татевосов. М., 1958. - 13с.

94. Тейт, P.III. Органическое вещество почвы Текст. //.- М.:Мир,1991.- 41с.

95. Терапевтични възможности на нов български торфен препарат «Торфосол» при болни с остеоартроза Текст. / Д. Костадинов, Д. Кръстева, Я. Дафинова [и др.] // Курортология, физиотерапия. 1987. - Т. 24, №14. - С. 21-27.

96. Техника и методики физиотерапевтических процедур Текст.: справочник / под ред. В.М. Боголюбова. М., 2004. - Изд. 3-е, перераб. - 408с.

97. Трапезникова, Н.К. О новых достижениях в проблеме «Грязевые и рапные препараты» по отечественным и зарубежным источникам информации 1983 г. Текст. / Н.К. Трапезникова, Л.П. Орлова // Препараты из лечебной грязи и рапы. Томск, 1983. - С. 93-96.

98. Улащик, B.C. Общая физиотерапия Текст.: учебник / B.C. Улащик, И.В. Лу-комский. Минск, 2004. - 327с.

99. Фархутдинов, P.P. Хемилюминесцентные методы исследования свободнора-дикального окисления в биологии и медицине Текст. / P.P. Фархутдинов, В.А. Лиховских. Уфа: БГМУ, 1995. - 90с.

100. Фенольные биоантиоксиданты Текст. / Н.К. Зенков, Н.В. Кандалинцева [и др.]. Новосибирск: СО РАМН, 2003. - 328с.

101. Филов, В.А. Новый отечественный многофункциональный препарат Олипи-фат (Лигфол) Текст. / В.А. Филов, A.M. Беркович // Бюл. междунар. науч. хирургической ассоциации. 2006. - Т. 1, № 2. - С. 42.

102. Филов, В.А. Олипифат как представитель БАВ из лигнина: онкологический аспект Текст. / В.А. Филов, В.В. Резцова, A.M. Беркович // Рос. биотерапевтический журн. 2002. - Т. 1, № 2.

103. Хайруллина, В.Р. Сравнительное изучение антиокислительных свойств фла-ванолов и флаванонов Текст. /В.Р. Хайруллина, А.Я. Герчиков, С.Б. Денисова // Кинетика и катализ. 2010. - Т. 51, № 2. - С. 1-5.

104. Черепанова, М.Н. Групповой состав органических веществ лечебных грязей Текст. / М.Н. Черепанова // Вопр. изучения лечебных минеральных вод, грязей и климата. М., 1976. - Т. 31. - С. 142-146.

105. Черепанова, М.Н. Физико-химическая характеристика гуминовых веществ торфяных грязей Текст. / М.Н. Черепанова // Грязи и их лечебное применение. Киев, 1969. - С. 27-29.

106. Черников, В.А. Агроэкология Текст. / В.А.Черников, А.И. Черкес [и др.]. -М.: Колос, 2000. 536с.

107. Чуков, С.Н. Структурно-функциональные параметры органического вещества почв в условиях антропогенного воздействия Текст. / С.Н. Чуков. СПб.: СПбГУ, 2001.-216с.

108. Шанин, В.Ю. Патофизиология критических состояний Текст. / В.Ю. Шанин. СПб.: ЭЛБИ, 2003. - 128с.

109. Шанин, Ю.Н. Антиоксидантная терапия в клинической практике (теоретическое обоснование и стратегия поведения) Текст. / Ю.Н. Шанин, В.Ю. Шанин, Е.В.Зиновьев. СПб., ЭЛБИ, 2003. - 128с.

110. Шинкаренко, А.Л. Органические вещества лечебных грязей и их роль в механизме действия на организм Текст.: метод, рекомендации / А.Л. Шинка-ренко, Н.Г. Миленина. Пятигорск, 1973. - 27с.

111. Шинкаренко, А.Л. Органическое вещество донных отложений Текст. / А.Л. Шинкаренко // Тамбуканское озеро и его лечебная грязь. Ставрополь, 1954.- С. 50-68.

112. Шустов, Л.П. Экстракты иловой сульфидной грязи и их лечебное применение Текст. Томск, 1996. - 182с.

113. Шустов, Л.П. Экстракты иловой сульфидной грязи и обоснование их применения в клинической практике Текст. / Л.П. Шустов // Вопр. курортологии.- 1999. № 6. - С. 35-37.

114. Экспериментальный анализ адаптогенной активности лигногумата Текст. / A.B. Бузлама Ю.Н. Чернов [и др.] // Вестн. ВГУ. Сер. Химия. Биология. Фармация. 2010. - № 2. - С. 135-139.

115. Эммануэль, Н.М. Окисление этилбензола Текст. / Н.М. Эммануэль, Д.Р. Гал. М.: Наука, 1984. - С. 186.

116. Янковский, О.Ю. Токсичность кислорода и биологические системы (эволюционные, экологические и медико-биологические аспекты) Текст. / О.Ю. Янковский. СПб.: Игра, 2000. - 294с.

117. Яшин, А.Я. Инжекционно-проточная система с амперометрическим детектором для селективного определения антиоксидантов в пищевых продуктах и напитках Текст. // Рос. хим. журн. 2008. - Т. 52, № 2. - С. 130-135.

118. A new approach for determination of humic substances antioxidant activity / E.V. Stepanova, V.V. Suprenok et al. // Abstracts of the 11th Nordic-Baltic IHSS symposium «Functioning of NOM in the Environment». Joensuu, Finland, 2007. -P. 17.

119. Aruoma, O.I. Applications and bioefficacy of the functional food supplement fermented papaya preparation./ O.I. Aruoma, J.Amer // Oil Chem. Soc., 1998, P. 199-212.

120. Aruoma, O.I. Evalution on the Antioxidant and Prooxidant Action on Gallic Acid and Its Derivatives. / O.I. Aruoma, A. Mursia, J. Butler // J. Agric. Food. Chem., №41,- 1993, P. 1880-1885.

121. B. Halliwell, Free Radicals in Biology and Medicine / J.M.C. Gutteridge // Oxford: Clarendon Press; 1999. p. 530-533.

122. Black, M.C. Dissolved organic matter reduces the uptake of hydrophobic organic contaminants by gills of the rainbow trout, Salmo gairdneri Environ. / M.C. Black and J.F. McCarthy // Toxicol. Chem. 7, P. 593-600.

123. Bollag, J.-M. Detoxification of aquatic and terrestrial sites through binding of pollutants to humic substances. / J.-M. Bollag, K.Mayers //Sci. Total Environ. 1992. V. 117/118. P. 357-366.

124. Bubert, H. Structural and elemental investigations of isolated aquatic humic substances using X-ray photoelectron spectroscopy / H. Bubetrt, J. Lambert, p, Burba // Fresenius J. Anal. Chem. 2000. - V. 368. - No 2-3. - P. 274-280.

125. Burkitt, M.J. Calcium indicator dye Quin-2 inhibits hydrogen peroxide induced strand break formation via chelation of iron. / M.J.Burkitt, L. Milne, S.Y. Tsang, S.C. Tamil Arch. Biochem. Biophys., 1994, P. 321-328.

126. Cadenas, E. Basic mechanisms of antioxidant activity. // Biofactors, 1997, 6(4), P. 391 -397.

127. Characteristic of soil organic matter of different Brazilian Ferralsols under native vegetation as a function of soil depth / C.N. Goncales, R.S.D. Dalmolin et al. // Geoderma. 2005. - Vol. 124. - P. 319-333.

128. Copper-ion-dependent damage to bases in DNA in the presence of hydrogen peroxide / O.I. Aruoma, B. Halliwell et al. // Biochem. j. 1991. - Vol. 273. - P. 601-604.

129. Denisov, E.T. Oxidation and Antioxidants in Organic Chemistry and Biology / E.T. Denisov, I.B. Afanas'ev // Taylor and Francis, Boca Raton, 2005, 982 p.

130. Determination of OH groups in humic acids using methilation with dimethylsul-fate / P. Kuran, L. Madronova et al. // Talanta. 2008. - № 4. - P. 960-963.

131. Fukushima, M. Degradation characteristics of humic acid during photo- Fenton processes. / M. Fukushima, K. Talsumi // Analyt. Sci. 2001. V. 17. P. Í821-Í823.

132. Gaffney, J.S. Humic and Fulvic Acids / J.S. Gaffney, N.A. Marley, S.B. Clark // ACS Symposium Series No. American Chemical Society. Washington, DC. -1996.-651 p.

133. Halliwell B. Free Radicals in Biology and Medicine / Gutteridge J.M.C, Clarendon Press, Oxford 1999, P. 141.

134. Hayes, M.H.B. Humic Substances II: In Search of Structure. / M.H.B. Hayes et al. // New York: Wiley-Interscience, 1989. P. 67-87.

135. Hansen, S.A. Association of fractures with caffeine and alcohol in postmenopausal women: the Iowa Women's Health Study / S.A. Hansen, A.R. Folson, L. Ceder et al. // Public health nutr. 2000. - Vol. 3. - P. 253-261.

136. Harman, D. Aging: Prospects for further increases in the functional life span / D. Harman // Age. 1994. - Vol. 17. - P. 119-146.

137. Haworth, R.D. The chemical nature of humic acid / R.D. Haworth // Soil.Sci. -1971. — Vol.III. №1. — P. 71.

138. Humic Substances II: In Search of Structure / M.H.B. Hayes et al.. N.Y.: Wiley-Interscience, 1989. - P. 16-23.

139. Humic Substances in the Suwannee River, Georgia: Interactions, Properties, and Proposed Structures / R.C. Averett, J. A. Leenheer et al. //U.S. Geological Survey Open-File Report. Denver, Colorado, 1989. - 377 p.

140. Kastner, M. Microbial degradation of poly cyclic aromatic hydrocarbons in soils affected by the organic matrix of compost / M. Kastner, B. Mahro // Appl. micro-biol. biotechnol. 1996. - Vol. 44, - № 5. - P. 668-675.

141. Kappler, A. Synthesis and characterization of specifically 14C-labeledhumic model compounds for feeding trials with soil-feeding termites / A. Kappler, R. Ji, A.L. Brune // Soil Biol. Biochem. 2000 - V.32 - pp. 1271-1280.

142. Klinische Prüfung der analgetischen Wirksamkeit von Rheumabädern bei Lum-boischialgien / G. Kuban, K.M. Weber, L. Horbach et al. // Therapiewoche. -1985. Bd. 35, № 17. - S. 2026-2033.

143. Kleinhempel, D. Characteristics humic substances of soil / D. Kleinhempel // Albrecht.Thaer.Archiv. 1970. - B.14. - №1. - S. 3-14. •

144. Lin, C.C. Chemiluminescence and antibody-dependent, cell-mediated cytotoxicity between human alveolar macrophages in smokers, non smokers and lung cancer patients / C.C. Lin, W.C. Huang // Chest. 1989. - Vol. 95. - P. 553-557.

145. Lind, Y. The influence of humic substances on the absorption and distribution of cadmium in mice / Y. Lind, A.W. Glynn // Pharmacol. Toxicol. 1999. - V. 84. -No 6.-P. 267-273.

146. Macromolecular properties of soil humic substances: fact, fiction and opinion / R.S. Swift // Soil Sei. 1999. - № 164. - P. 790-802.

147. McDowell, R.W. Soil phosphorus fractions in solution: influence of fertiliser and manure, filtration and method of determination / R.W. McDowell, A.N. Sharpley // Chemosphere. -2001. V. 45, № 6-7. - P. 737-748.

148. Mitochondrial contributions to cancer cell physiology: Redox balance, cell cycle, and drug resistance / A. Dorward, S. Sweet, R. Moorehead, G. Singh // J. bio-energ. biomembr. 1997. - Vol. 29. - P. 385-392.

149. Mougin, C. Fungal laccases: from structure-activity studies to environmental applications / C. Mougin, C. Jolivalt,-P. Briozzo,-C. Madzak // Environ. Chem. Lett. -2003-V.l-P. 145-148.

150. Multiple polar components in poorly-humified humic acids stabilizing free radicals: Carboxil and nitrogen-containing carbons / H. Yabuta, M. Fukushima, M. Kawasaki et al. // Org. geochem. 2008. - № 9. - P. 1319-1335.

151. Neto, L.M. EPR of micronutrients-humic substances complexes extracted from a Brazilian soil / L.M. Neto, O.R. Nascimento, J. Nalamoni // Soil Sci. 1991. -Vol. 151, № 5. - P. 369-373.

152. Nobukawa, T. Effect of bromide ions on genotoxicity of halogenated by-products from chlorination of humic acid in water / T. Nobukawa, S. Sanukida // Water Res. 2001. - V. 35. - No 18. - P. 4293-4298.

153. Norwood, D.L. Humic substances and their role in the environment / D.L. Norwood. N.Y.: John Wiley & Sons, 1988. - P. 133-148.

154. Oris, J.T. Humic acids reduce the photo-induced toxicity of anthracene tofish and daphnia / J.T. Oris, A.T Hall, J.D. Tylka // Environ. Toxicol. Chem. -1990 V.9 — pp. 575-583.

155. Perez, M.G. Characterization of humic acids from a Brazilian Oxisol under different tillage systems by EPR, 13C NMR, FTIR and fluorescence spectroscopy / M.G. Perez, Neto L.M., Saab S.C. et al. //Geoderma.-2004.-Vol. 118.-P. 171-190.

156. Pitas, R.E. Expression of the acetyl low density lipoprotein receptor by rabbit fibroblasts and smooth muscle cells. Up-regulation by phorbol esters//J.Biol. Chem. 1990.-Vol.265.-P.622-627.

157. Pflug, W. Inhibition of malate dehydrogenase by humic acids / W. Pflug, W. Ziechmann // Soil Biol. Biochem. 1981 - V. 13 - pp. 293-299.

158. Posner, A.M. A study of humic acids by equilibrium ultracentrifugation / A.M. Posner, S.M. Greeth // Soil. Sci. 1972. - Vol. 23. - P. 333-341.

159. Protein measurement with Folin phenol reagent / O. Lowry, N. Rosebrough, A. Farr, G. Randal // J. biol. chem. 1951. - Vol. 193. - P. 265-275.

160. Physico-chemical caracteristics of humic substances of major soil association of Bihar (India) / B. Mishra, L.L. Strivastava // Plant, and Soil. 1990. - Vol. 122, №2.-P. 185-191.

161. Rice-Evans C.A. Current status of antioxidant therapy. / Rice-Evans C.A., A.T. Diplock // Free Radical Biol. Med., 15, P. 77 96 (1993)

162. Safe, S. Polychlorinated biphenyls (PCBs): Environmental impact, biochemical and toxic responses, and implications for risk assessment / S. Safe // Crit. rev. toxicol. 1994. - Vol. 24, № 2. - P. 87-149.

163. Sanjay, H.G. Mixed Waste Remediation Using HUMASORB-CSTM an Adsorbent to Remove Organic and Inorganic Contaminants/ H.G. Sanjay, K.C. Srivastava, D.S. Walia // ARCTECH, Inc., - 1997. - P. 19-23.

164. Saldan, V.I. Study of Huminat on the Human RH Line Cells // 12th International Peat Congress, Tampere, Finland, Abstracts.-2004.-V.2,-P.1205-1208.

165. Scandalios J.G, Oxidative Stress and the Molecular Biology of Antioxidant Defenses. // Cold Spring Harbor Laboratory, Plainview, 1997. P. 343-406.

166. Simpson, A.J. Molecular structures and associations of humic substances in the terrestrial environment//Naturwissenschaften. 2002. - Vol. 89, № 2. - P. 84-88.

167. Skjemstad, J.O. Structural units in humic acids from South-eastern Queensland soils as determined by carbon-13 NMR/ J.O. Skjemstad, R.L. Frost, P.F. Barron // Austr. j.soil res.-l983.-Vol.21 .-P. 539.

168. Stevenson, F.J. Humus chemistry, genesis, composition, reactions //- N.Y.rJohn Wiley & Sons,1982.-443p.

169. Strampfer, M.J. Smoking, estrogen, and prevention of heart disease in women / M.J. Strampfer//Mayo clin. proc. 1989. - Vol. 84. - P. 1553-1557.

170. Tan, K.H. Infrared absortion similarities between hymatomelanic acid and methylated humic acid // Soil. Sci. Soc. Amer. J. 1975- Vol.39.-№ 1.- P.70-73.

171. Ussiri D. A. N. Characterization of organic matter in a northern hardwood forest1 "Xsoil by C NMR spectroscopy and chemical metods. / D.A.N. Ussiri, C.E. Jonson // Geoderma.- 2003 .-Vol. 111 .-P. 123-149.

172. Vaughan, D. Influence of humic substances on biochemical processes in plants / D. Vaughan, R.E. Malcom, B.G. Ord // In: Soil organic matter and biological activity, Dordrecht, 1985 P. 77-108.

173. Walther, H. Moorpackungen //Deine gesundheit. -1989.-№ 3.-P.20-26.

174. Zaborska, D. The treatment of onychomycosis with terbinafine. Clinical, deratofi-broscopic and scanned electric microscope study / D. Zaborska, J. Peg, V. Fetisova // Austral. J. dermatol. 1997. - № 12. - P. 210-213.

175. Yllner, S. Metabolism of 1, 2-dichloroethane 14C in the mose // Acta pharmacol. et toxicol. 1971. - Vol. 30, № 4. - P. 257-265.I