Изучение метаболома плантационного и биотехнологического сырья маклейи сердцевидной Macleaya cordata (Willd R. Br.) как источника антимикробных биологически активных веществ тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.04.02, кандидат фармацевтических наук Бушуева, Гульнара Раисовна

• Бушуева, Гульнара Раисовна
• кандидат фармацевтических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат фармацевтических наук Бушуева, Гульнара Раисовна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Алкалоиды изохинолинового ряда.

1.1.1. Классификация изохинолиновых алкалоидов. Общая характеристика.

1.1.2. Бензо[с]фенантридиновые алкалоиды. Строение.

1.2. Источники бензо[с]фенантридиновых алкалоидов в JIPC.

1.3. Биосинтез бензо[с]фенантридиновых алкалоидов в лекарственных растениях.

1.4. Физико — химические свойства бензо[с]фенантридиновых алкалоидов.

1.5. Методы аналитического контроля бензо[с]фенантридиновых алкалоидов.

1.5.1. Химические методы анализа бензо[с]фенантридиновых алкалоидов.'.

1.5.2. Хроматографические методы анализа бензо[с]фенантридиновых алкалоидов.

1.5.2.1. Анализ бензо[с]фенантридиновых алкалоидов в тонком слое сорбента (ТСХ).

1.5.2.2. Анализ бензо[с]фенантридиновых алкалоидов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

1.5.2.3. Анализ бензо[с]фенантридиновых алкалоидов методом газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с масс-спектрометрией.

1.5.3. Физико-химические методы анализа бензо[с]фенантридиновых алкалоидов.

1.5.3.1. Метод !Н-ЯМР - спектроскопии.

1.5.3.2. Метод масс — спектрометрии.

1.6. Способ выделения бензо[с]фенантридиновых алкалоидов.

1.7. Биологическая активность бензо[с]фенантридиновых алкалоидов.

1.8. Применение бензо[с]фенантридиновых алкалоидов в медицине.

1.9. Растительное сырье маклейи - как источник бензо[с]фенантридиновых алкалоидов.

1.10. Биотехнологическое сырье — культура тканей и клеток лекарственных растений — источник билогически активных веществ.

1.10.1. Культура клеток растений - источник антимикробных бензо[с]фенантридиновых алкалоидов.л.

1.11. Культура клеток в промышленном применении.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы исследования.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Методы макро - и микроскопического анализа.

2.2.2. Методы товароведческого анализа.

2.2.3. Физико — химические методы анализа.

2.2.4. Определение содержания бензо[с]фенантридиновых алкалоидов в сухой клеточной культуре Macleaya cor data (Willd R.Br) штамма МЛ-3-99 ВИЛАР:.,.

2.2.5. Методы определения антимикробной активности.

2.2.6. Планирование экспериментов и методы статистической обработки данных.

Глава 3. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ПО БАЛАНСОВОМУ СОДЕРЖАНИЮ БЕНЗО [С] ФЕНАНТРИДИНОВЫХ АЖАЛОИДОВ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКОГО * И ПЛАНТАЦИОННОГО СЫРЬЯ МАКЛЕЙИ.

3.1. Тонкослойная хроматография (ТСХ).

3.2. УФ - спектроскопия.

3.3. Идентификация бензо[с]фенантридиновых алкалоидов в сухой клеточной культуре Macleaya cordata (WilldR.Brj

3.3.1. Выделение индивидуальных соединений.

3.3.2. Идентификация бензо[с]фенантридиновых алкалоидов методом 'Н-ЯМР-спектроскопии.

3.3.3. Изучение компонентного состава алкалоидов сухой клеточной культуры Macleaya cordata (Willd R.Br) методом хромато - масс -спектрометрии (ХМС).1.

Глава 4. ФИЗИОЛОГИЧЕСКАЯ И БИОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА КЛЕТОЧНОЙ КУЛЬТУРЫ MACLEAYA CORDATA (WILLD R. BR.) ШТАММА МЛ-3-99 ВИЛАР.

4.1. Динамика накопления биомассы и бензо[с]фенантридиновых алкалоидов в клеточной культуре Macleaya cordata (Willd R.Br).

4.2. Изменение содержания бензо[с]фенантридиновых алкалоидов в сухой клеточной культуре Macleaya cordata (Willd R.Br) при длительном культивировании в режиме периодического выращивания.

Глава 5. ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОДЛИННОСТИ СУХОЙ КЛЕТОЧНОЙ КУЛЬТУРЫ MACLEAYA CORDATA (WILLD R. BR.) ШТАММА МЛ-3

ВИЛАР.

5.1. Исследование макроспических признаков сухой клеточной культуры Macleaya cordata (WilldR.Br)

5.2. Исследование микроскопических признаков сухой клеточной культуры Macleaya cordata (Willd R.Br)

5.3. Установление подлинности биосырья - сухой клеточной культуры Macleaya cordata (Willd R.Br)

5.3.1. Качественный анализ на содержание алкалоидов.

5.3.1.1. Исследование на присутствие алкалоидов.

5.3.1.2. Идентификация бензо[с]фенантридиновых алкалоидов физико-химическими методами.

5.3.2. Количественное определение бензо[с]фенантридиновых алкалоидов в сухой клеточной культуре Macleaya cordata (Willd R.Br).

5.3.3. Определение числовых показателей для сухой клеточной культуры Macleaya cordata (Willd R.Br)

5.3.4. Изучение стабильности сырья — сухой клеточной культуры Macleaya cordata (WilldR.Br) в процессе хранения.

5.3.5. Разработка нормативной документации на сырье сухую клеточную культуру Macleaya cordata (WilldR.Br)

Глава 6. ФОТОХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ СУХОЙ КЛЕТОЧНОЙ КУЛЬТУРЫ MACLEAYA CORDATA (WILLD R. BR.) ШТАММА МЛ-3-99 ВИЛАР.

6.1. Качественный анализ на основные группы биологически активных веществ сухой клеточной культуры Macleaya cordata (Willd R.Br).

6.2. Изучение аминокислотного состава сухой клеточной культуры Macleaya cordata (Willd R.Br)

6.2.1. Изучение компонентного состава аминокислот сухой клеточной культуры Macleaya cordata(Willd R.Br) методом ТСХ.

6.2.2. Изучение компонентного состава аминокислот сухой клеточной культуры Macleaya cordata(Willd R.Br) методом ВЭЖХ.

6.3. Исследование состава жирных кислот сухой клеточной культуры Macleaya cordata (Willd R.Br) методом газо-жидкостной хроматографии (ГЖХ).

Глава 7. РАЗРАБОТКА СПОСОБА ВЫДЕЛЕНИЯ БЕНЗ О [С] ФЕНАНТРИДИНОВЫХ АЛКАЛОИДОВ ИЗ СУХОЙ КЛЕТОЧНОЙ КУЛЬТУРЫ MACLEAYA CORDATA (WILLD R. BR.) ШТАММА МЛ-3-99 ВИЛАР.

7.1. Изучение технологических свойств сухой клеточной культуры Macleaya cordata (Willd R.Br)

7.2. Подбор оптимальных условий пробоподготовки и условий выделения бензо[с]фенантридиновых алкалоидов из сухой клеточной культуры Macleaya cordata (Willd R.Br) .Ill

Глава 8. ИССЛЕДОВАНИЕ АНТИМИКРОБНОЙ АКТИВНОСТИ СУММЫ БЕНЗ О [С] ФЕН АНТРИДИНОВЫХ АЛКАЛОИДОВ ИЗ СУХОЙ КЛЕТОЧНОЙ КУЛЬТУРЫ MACLEAYA CORDATA (WILLD R. BR.)

ШТАММА МЛ-3-99 ВИЛАР.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение метаболома плантационного и биотехнологического сырья маклейи сердцевидной Macleaya cordata (Willd R. Br.) как источника антимикробных биологически активных веществ»

Актуальность темы

Арсенал медицины постоянно пополняется новыми эффективными лекарственными препаратами, изготовленными на основе БАВ, выделенных из фитосырья. Преимуществом препаратов природного происхождения, является их высокая активность, биосовместимость, меньшее количество побочных явлений по сравнению с синтетическими продуктами.

Во Всероссийском научно — исследовательском институте лекарственных и ароматических растений Российской академии сельскохозяйственных наук (ВИЛАР) РАСХН с использованием рациональной схемы целенаправленного поиска на основе лекарственных растений был создан ряд фитопрепаратов противоинфекционного действия, относящихся к различным классам природных химических соединений: алпизарин, гипорамин, флакозид, хелепин, анмарин, эвкалимин, лютенурин, сангвиритрин.

Особый интерес у исследователей вызывает лекарственный препарат «Сангвиритрин», представляющий собой смесь бисульфатов двух близких по структуре и свойствам четвертичных бензо[с]фенантридиновых алкалоидов сангвинарина и хелеритрина.

На данный момент в России (РФ) маклейя сердцевидная и маклейя мелкоплодная являются единственными источниками бензо[с]фенантридиновых алкалоидов сангвинарина и хелеритрина, используемых в фармакологии при изготовлении антимикробного препарата «Сангвиритрин».

Маклейя сердцевидная - Macleaya cordata (Willd R Br.) — травянистое вечнозеленое растение семейства маковых - Papaveraceae в естественных условиях на территории России не произрастает. Ее родина - Юго-Восточный

Китай и Япония. В нашей стране это растение введено В' культуру и выращивается в. основном в южных районах европейской части России (Краснодарский край).

Трудности при размножении маклейи связаны с тем, что плоды растения формируются семенами, обладающими низкой всхожестью, или семена не завязываются. Вегетативное размножение маклейи малоэффективно, закладка новых производственных плантаций этой культуры происходит медленными темпами.

Изыскание путей компенсации дефицита данного вида фитосырья достаточно актуально. В последние десятилетия серьезно рассматривается возможность применения нового метода получения отдельных биологически активных соединений in vitro, в котором в качестве фитосырья используются изолированные ткани и клетки, растущие на искусственных питательных средах. Решению именно такой проблемы посвящена данная работа.

Объектом проводимых исследований является клеточная культура маклейи сердцевидной - Macleaya cordata (Willd В.г.) штамма MJ1-3-99 ВИЛАР полученная в условиях in vitro, как возможный источник антимикробных бензо[с]фенантридиновых алкалоидов.

Цель и задачи исследования

Целью настоящей работы было изучение клеточной культуры Macleaya cordata (Willd R.Br.) штамма МЛ-3-99 ВИЛАР, как источника антимикробных бензо[с]фенантридиновых алкалоидов.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- провести экспериментальную сравнительную оценку по балансовому содержанию бензо[с]фенантридиновых алкалоидов биотехнологического и плантационного сырья маклейи, с использованием методов ТСХ и УФ-спектроскопии;

- изучить структуру бензо[с]фенантридиновых алкалоидов, выделенных из сухой клеточной культуры Macleaya cordata (Willd R. Br.) штамма MJT-3-99 ВИЛАР с применением методов 'Н-ЯМР-спектроскопии и хромато - масс-спектрометрии;

- подобрать оптимальные технологические условия выделения субстанции; представляющей собой очищенную " сумму солей бензо[с]фенантридиновых алкалоидов, из сухой клеточной культуры Macleaya cordata {WilldR. Br.) штамма МЛ-3-99 ВИЛАР;

- изучить влияние многократных субкультивирований в течение года на изменение содержания бензо[с]фенантридиновых алкалоидов в образцах сырья, полученного из клеточной культуры Macleaya cordata (Willd R. Br.) штамма МЛ-3-99 ВИЛАР;

- провести фармакогностическое изучение нового вида биосырья сухой клеточной культуры Macleaya cordata (Willd R. Br.) штамма МЛ-3-99 «ВИЛАР; определить антимикробную активность суммы солей бензо[с]фенантридиновых алкалоидов, выделенной из сухой, клеточной культуры Macleaya cordata (WilldR. Br.) штамма МЛ-3-99 ВИЛАР;

- разработать ТУ на новый вид сырья - сухой клеточной культуры Macleaya cordata (WilldR. Br.) штамма МЛ-3-99 ВИЛАР.

Научная новизна работы

Впервые изучено изменение качественного и количественного содержание суммы бензо[с]фенантридиновых алкалоидов при длительном субкультивировании в течение года.

Изучены структуры бензо[с]фенантридиновых алкалоидов, выделенных из сухой клеточной культуры Macleaya cordata (Willd R. Br.) штамма МЛ-3-99 ВИЛАР с применением методов 'Н-ЯМР-спектроскопии и хромато - масс-спектрометрии.

На основании макро- и микроскопического анализа установлены значимые диагностические признаки сырья, определены числовые показатели сухой клеточной культуры Macleaya cordata (Willd R. Br.) штамма МЛ-3-99 ВИЛАР.

Дана количественная оценка содержания аминокислот методом ВЭЖХ и установлен качественный состав жирных кислот (ГЖХ) в сухой клеточной, культуре Macleaya cordata (Willd R. Br.) штамма МЛ-3-99 ВИЛАР. .

Подобраны оптимальные условий^ выделения бензо[с]фенантридиновых алкалоидов и изучена антимикробная активность выделенной суммы бензо[с]фенантридиновых алкалоидов из' сухой клеточной культуры Macleaya cordata (Willd R: Br.) штамма МЛ-3-99 ВИЛАР.

Практическая значимость работы

На основании проведенных исследований составлены технические условия ТУ 9375-149-04868244-2009 «Маклейи сердцевидной биомасса сухая».

Основные положения, выносимые на защиту

- результаты изучения алкалоидного, состава и показателей стабильности содержания бензо[с]фенантридиновых алкалоидов биомассы в процессе субкультивирования в течение 1 года в сухой клеточной культуры Macleaya cordata (Willd R. Br.) штамма МЛ-3-99 ВИЛАР;

- фармакогностические характеристики нового вида сырья сухой клеточной культуры Macleaya cordata (Willd R. Br.) штамма МЛ-3-99 ВИЛАР;

- результаты исследований по разработке технологии выделения суммы бензо[с]фенантридиновых алкалоидов (субстанции) из сухой , клеточной культуры Macleaya cordata (WilldR. Br.) штамма МЛ-3-99 ВИЛАР; результаты изучения антимикробной активности субстанций, выделенных из сухой клеточной культуры Macleaya cordata (Willd R. Br.) штамма МЛ-3-99 ВИЛАР.

Апробация работы

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на VI Всероссийской научной конференции «Биомедицинские технологии» (Москва 2008).

Связь задач исследований с проблемным планом НИР

Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематикой и планом научно-исследовательских работ Всероссийского научно-исследовательского института лекарственных и ароматических растений (номер государственной регистрации 01860074455).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 3 научные работы.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 152 страницах, состоит из введения, обзора литературы, шести глав экспериментальной части, библиографии из 190 источников литературы, из которых 104 на иностранных языках и приложения. Работа содержит 27 таблиц, 30 рисунок.

Заключение диссертации по теме «Фармацевтическая химия, фармакогнозия», Бушуева, Гульнара Раисовна

выводы

1. Исследовано балансовое содержание бензо[с] фенантридиновых алкалоидов биотехнологического и плантационного сырья маклейи с использованием современных физико — химических методов (ТСХ, УФ- и !Н-ЯМР -спектроскопии, хромато-масс-спектрометрии).

2. Определены характерные отличия в алкалоидном составе клеточной культуры Macleaya cordata (Willd R. Вг.)ттамма MJI-3-99 ВИЛАР от интактного растения маклейи. В траве маклейи сумма состоит из двух основных алкалоидов: сангвинарина и хелеритрина. В клеточной же культуре Macleaya cordata (Willd R. Br.) штамма МЛ-3-99 ВИЛАР основная сумма состоит из следующих алкалоидов: сангвинарин: хелирубин: дигидропроизводные (дигидросангвинарин и дигидрохелирубин) в примерном соотношении 1:1:2 и из алкалоидов макарпина и дигидромакарпина в следовых количествах.

3. Установлены основные параметры выделения суммы бензо[с]фенантридиновых алкалоидов и из сухой клеточной культуры Macleaya cordata (Willd R. Br.) штамма МЛ-3-99 ВИЛАР: для достижения полноты извлечения необходимо проводить экстракцию в течение 16 часов с размером частиц 1-2 мм, при использовании в качестве экстрагента хлороформа.

4. Отмечена стабильность культуры Macleaya cordata (Willd R. Br.) штамма МЛ-3-99 ВИЛАР в отношении синтеза алкалоидов бензо[с]фенантридинового ряда при многократном субкультивировании в течение года.

5. Установлены показатели подлинности и доброкачественности биосырья: определены диагностические признаки, характеристики ТСХ и УФ спектра, числовые показатели. Изучение стабильности сухой клеточной культуры Macleaya cordata (Willd R. Br.) штамма МЛ-3-99 ВИЛАР при хранении по всем показателям качества сырья позволило рекомендовать срок годности этого сырья 2 года.

6. Отмечена антимикробная активность суммы очищенных солянокислых солей бензо [с] фенантридиновых алкалоидов, выделенных из сухой клеточной культуры Macleaya cordata (Willd R. Br.) штамма МЛ-3-99 ВИЛАР.

7. Разработан и утвержден проект ТУ 9375-149-04868244-2009 на лекарственное сырье «Маклейи сердцевидной биомасса сухая».

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

С целью профилактики и лечения различных заболеваний в медицинской практике широко используются противовоспалительные и антимикробные средства растительного происхождения. К лекарственным растениям данного спектра действия относятся, различные виды маклейи Macleaya cordata (Willd. R. Br.) и Macleaya microcarpa (Maxim.) Fedde, в траве которой содержатся* четвертичные бензо[с]фенантридиновые алкалоиды сангвинарин и хелеритрин, представляющие большой интерес как биологически активные вещества широкого спектра действия. На данный момент в России (РФ) оба вида маклейи являются единственными источниками бензо[с]фенантридиновых алкалоидов сангвинарина и хелеритрина, используемых в фармакологии при изготовлении антимикробного препарата «Сангвиритрина». Целью настоящей работы было исследование сухой клеточной культуры Macleaya cordata (Willd R.Br.) штамма MJI-3-99 ВИЛАР, как дополнительного источника антимикробных бензо[с]фенантридиновых алкалоидов.

В результате экспериментального исследования с использованием методов тонкослойной хроматографии (ТСХ), УФ-, 'Н-ЯМР - спектроскопии и хромато-масс-спектрометрии было доказано, что сухая клеточная культура Macleaya cordata (Willd R.Br.) штамма МЛ-3-99 ВИЛАР содержит бензо[с]фенантридиновые алкалоиды. Выполненная экспериментальная работа показало основное различие в алкалоидном составе двух видов сырья -плантационного и биотехнологического. В траве маклейи сумма состоит из двух основных алкалоидов: сангвинарина и хелеритрина, примерно в равных соотношениях, тогда как дигидропроизводные данных алкалоидов в траве содержатся в следовых количествах. В клеточной культуре

Macleaya cordata (Willd R. Br.) основная сумма состоит из четвертичных алкалоидов сангвинарина, хелирубина, а также их дигидропроизводных -дигидросангвинарина и дигидрохелирубина, в примерном соотношении 1:1:2, соответственно, и алкалоидов макарпина и дигидромакарпина в следовых количествах.

Для оценки эффективности использования клеточной культуры как лекарственного сырья большое значение имеют его физиологические показатели, дающие качественную и количественную характеристику процессов прироста биомассы и накопления в ней ценных вторичных метаболитов. Установлено, что рост клеточной культуры

Macleaya cordata (Willd R. Br.) в течение одного субкультивирования характеризовался типичной S-образной кривой, а накопление бензо [с] фенантридиновых алкалоидов происходило параллельно нарастанию клеточной биомассы и соответствовало максимальному накоплению сухой биомассы на 20-21 сутки. Последующие исследования показали, что при длительном культивировании клеточной культуры

Macleaya cordata (Willd R. Br.) в течение одного календарного года количественное содержание суммы бензо [с] фенантридиновых алкалоидов колебалось в достаточно широких пределах - от 0,71% до 1,91%. Самая низкая биосинтетическая активность суспензионной культуры была отмечена в летние месяцы культивирования. Что касается отдельных алкалоидов, то в их количественном содержании, при длительном культивировании, отмечалась та же закономерность. При сравнительном исследовании было установлено, что содержание суммы алкалоидов в клеточной культуре Macleaya cordata (Willd R. Br.) в определенные сроки выращивания достигает величины суммы алкалоидов в траве маклейи.

Впервые был проведен фармакогностический анализ сухой биомассы маклейи сердцевидной, как возможного сырья для получения бензо [с] фенантридиновых алкалоидов. При визуальном осмотре было определено, что сухая клеточная культура Macleaya cordata (Willd R. Br.) представляла собой смесь мелких и крупных конгломератов вытянутой, округлой или неправильной формы. Крупные конгломераты представляли собой достаточно плотные образования, не распадающиеся при легком нажиме на более мелкие кусочки. Цвет биомассы варьировал от светло -до темно коричневого. Сырье обладало специфическим, слабым сладковатым запахом. При микроскопическом анализе были выявлены диагностические признаки: скопления одиночных клеток и многоклеточных конгломератов. Одиночные клетки имели вытянутую или овальную форму с тонкими стенками. Среди них выделялись как крупные прозрачные клетки, так и клетки с содержимым, окрашенным в оранжево - бурый цвет. Были изучены также и числовые показатели (влажность, зола, содержание экстрактивных веществ) сухой клеточной культуры Macleaya cordata (Willd R. Br.). Изучение стабильности сухой клеточной культуры Macleaya cordata (Willd R. Br.) при хранении в рекомендуемой упаковке позволило установить в проекте ТУ срок годности этого сырья 2 года.

Для более полной фармакогностической характеристики биотехнологического сырья сухой клеточной культуры

Macleaya cordata (WilldR. Br.) были проведены дополнительные исследования. На основании предварительного фитохимического анализа установлено наличие следующих групп БАВ в сухой клеточной культуре Macleaya cordata (Willd R. Br.): алкалоидов, дубильных веществ, полисахаридов, сапонинов. Проведенный аминокислотный анализ показал, что суммарное содержание аминокислот в сухой клеточной культуре Macleaya cordata (WilldR. Br.) равно 39,53 мг/100г. Было идентифицировано 17 аминокислот из которых 9 являются незаменимыми для организма человек (аланин, треонин, валин, метионин, лейцин, лизин, изолейцин, аргинин, фенилаланин, гистидин) на долю которых приходится 43,5% от общей суммы аминокислот. При изучении жирнокислотного состава сухой клеточной культуры Macleaya cordata (Willd R. Br.) было идентифицировано 26 жирных кислот, в том числе непредельные эссенциальные — линолевая и линоленовая. В общей сумме преобладали олеиновая, линолевая, пальмитиновая, а -линоленовая и бегеновая жирные кислоты. Они составляли около 85 % от всей суммы всех жирных кислот. В состав липидов жирные кислоты входили также в виде триглицеридов, что следует из данных 'Н-ЯМР спектра- наличием мультиплетов 4.10- 4.50 м.д., обусловленных глицериновыми фрагментами.

Были предприняты исследования по разработке способа выделения суммы бензо[с]фенантридиновых алкалоидов из сухой клеточной культуры Macleaya cordata (Willd R. Br.) в результате которых установили, что для-достижения полноты извлечения необходимо проводить экстракцию в течение 16 часов с размером частиц 1-2 мм, в соотношение 1:20 при использовании в качестве экстрагента хлороформа.

Заключительным этапом настоящей работы являлось изучение антимикробных свойств бензо[с]фенантридиновых алкалоидов; полученных из биотехнологического сырья - сухой клеточной культуры Macleaya cordata (Willd R. Br.). Показана бактериостатическая . и фунгистатическая активность выделяемой суммы солей бензо[с]фенантридиновых алкалоидов и водно — спиртовых извлечений из сухой клеточной культуры Macleaya cordata (Willd R. Br.).

Таким образом, анализ результатов проделанной работы показал, что клеточную культуру Macleaya cordata (Willd R.Br.) штамма МЛ-3-99 ВИЛАР можно рассматривать как биотехнологическое сырье, содержащее бензо[с]фенантридиновые алкалоиды. На основании всех проведенных исследований были оформлены технические условия ТУ 9375-149-048682442009 на лекарственное сырье «Маклейи сердцевидной биомасса сухая».

Список литературы диссертационного исследования кандидат фармацевтических наук Бушуева, Гульнара Раисовна, 2010 год

1. Абизов Е. А,. Фармагностическое изучение представителей рода-Macleaya //Афтореф. дис. канд. фарм. наук. Москва. -2004.- с. 15-18.

2. Бабаев Н. А., Алиев А. М. Комплексонометрическое определение сангвиритрина в лекарственных препаратах // Фармация. 1989. -№5. -с 78 — 81.

3. Баширов Р. М. Вторичные метаболиты растений. — Ташкент, 2003. 240 с.

4. Булатов А.А., Бузук Г.Н., Ловкова М.Я., Сабирова Н.С. Изменчивость качественного и количественного состава алкалоидов чистотела большого в течение вегетации // Хим-фарм.журнал. 1990. - №5. - с. 50-53.

5. Березнеговская Л. Н., Гусев И. Ф., Дмитрук С. Е. и др. Культура тканей и клеток алкалоидоносныхрастений. -Томск, 1975. 194 с.

6. Бортникова В.В, Сравнительная токсикологическая характеристика и новые фармакологические свойства антимикробных и противовирусных препаратов растительного происхождения //Афтореф. дис. канд. биол.наук Купавна. -1988.

7. Брыкалов А.В., Мазницына Л. В. Получение экологически безопасных биологически активных препаратов растительного происхождения // Роль биотехнологии в экологизации природной среды, питания и здоровья человека.-Ставрополь. -2001. с. 129.

8. Брыкалов А.В., Мазницына Л. В. Исследование фунгицидной активности биопрепаратов растительного происхождения // Сборник научных трудов. Защита и карантин растений. Ставрополь. 2003. с. 21-25.

9. Бутенко Р. Г. Клеточные технологии для получения экономически важных веществ растительного происхождения.// Культура клеток растений и биотехнология. М.: Наука. 1986. - с. 3-20.

10. Быков В.А., Вичканова С.А., Глызин В.И., Климахин Г.И. Эффективность-применения и перспектива разработок лекарственных препаратов на основе Сангвиритрина // III Рос. Нац: Конгр. «Человек и лекарство». Тез. докл. М.: Медицина. 1996. - с.12.

11. Быкова А.О., А. Г. Кодаш. Культура маклеи на Кубани // IV Международная научно производственная конференция «Селекция, экология, технологии возделывания и переработки нетрадиционных растений». -Алушта. 1995. с56-57.

12. Варпаховская И. Биотехнология самая динамичная отрасль мировой Фарминдустрии//Ремедиум. - 1997. - №2. - с. 45-49.

13. Вичканова С. А. Итоги и перспективы работ Всесоюзного- научно -исследовательского института лекарственных растений по изысканию новых химиотерапевтических свойств растительного происхождения // Фитонциды. Киев. 1975. с. 89-93.4.

14. Вичканова С. А. Особенности клинического применения фиотопрепаратов антимикробного и противовирусного действия // Сборник научных трудов ВИЛР «Химия, технология, медицина». Москва. -2003. с. 165-174.

15. Вичканова С. А. Скрининг растений — продуцентов антимикробных веществ // Сборник научных трудов ВИЛР «Химия, технология, медицина». Москва. 2003. с. 175 -183.

16. Вичканова С. А. Перспективы поисков новых химиотерапевтических препаратов- их высших растений // Материалы Всесоюз. научн. Конф. по фармакол. и клин, изучению лекарственных препаратов из растений. Москва. 1972. с. 194-203.

17. Вичканова С. А., Адгина В. В., Рубинчик М. А. Фунгистатическая активность высших растений /В кн.: Антифунгальные свойства высших растений. Новосибирск. 195-201. (1969).

18. ВФС 42- 2666- 89 «Трава маклейи»

19. Воллосович А. Г. Культура изолированных органов, тканей и клеток // Труды I Всемирной конференции. Москва. 1970. - с. 234 - 244.

20. Высокоэффективная газовая хроматография. Редактор Хайвер К.Пер. с анг.-М.: Мир. 1983.- с. 175-185.

21. Генри Т. А. Химия растительных алкалоидов. М. 1956. - 289 с.

22. Государственная Фармакопея СССР, изд е 10. М.: Медицина. 1968. -1080 с.

23. Государственная Фармакопея СССР: Вып.1. Общие методы анализа./ МЗ СССР.- 11-е издание. -М.: Медицина. 1987. вып.1. 336 с.

24. Государственная Фармакопея СССР. Вып.2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР.- 11 — е издание. — М.: Медицина. 1989. вып.1. 400 с.

25. ГОСТ 240 27.2-80. Сырье лекарственное растительное. Методы определения влажности, содержания золы, экстрактивных и дубильных веществ, эфирных масел. Лекарственное растительное сырье. 284-295. (1980).

26. Езерский М. Я. Основные характеристики порошкообразных материалов. Обзорная информация. М. 1989. - с 33-36.

27. Лазурьевский Г. В., Терентьева Н. В., Шамшурин А. А. Практические работы по химии природных соединений. Методы выделения, разделения и идентификации. Вып.1. М. Высшая школа. 1961. - с. 60 - 61, 178.

28. Запрометов М.Н. Вторичный метаболизм и его регуляция в культурах клеток и тканей растений // Культура клеток растений. М.: Наука, 1981.- 365 с.

29. Итоги исследования алкалоидоносных растений. Под ред. Архипова Х.Н.// Ташкент. ФАН. 1993.- 312 с.

30. Калинин Ф. Л., Сарнацкая В. В., Полищук Е. Е. Методы культуры тканей в физиологии и биохимии растений. — К.: Наукова думка.-1980.- 488 с.

31. Карначук Р.А., Дорофеев В.Ю., Шилова И.В., Краснов Е.А. Синтез сапонинов в культуре ткани Atragene sibirica L. // IV Съезд общества физиологов растений России. Тезисы докладов. —Москва. 1999. с. 593 - 597.

32. Кодаш А. Г., Захарова О. И., Шевердинов В. Т., Захаров А. М., Хлапцев Е. Е. Динамика содержания сангвиритрина в маклейе сердцевидной и маклейе мелкоплодной, выращиваемых на Северном Кавказе // Растительные ресурсы. Т. XI. -вып.2. - 1975.-с. 217-219.

33. Копылова И. Е., Маслова Г. А., Перельсон М. Е. Применение хроматоспектрофотометрического метода для количественного определения сангвиритрина в траве маклейи // Хим.-фарм. журн. Вып.1. — 1980. - с. 58-61.

34. Кунах В.А. Изменчивость растительного генома в процессе дедифференцировки и каллусообразования in vitro // Физиология растений -Т. 46. № 6. - 1999. - с. 919-929.

35. Кунах В. А. Кацан В. А. Биосинтез изохинолиновых алкалоидов мака в природе в культуре in vitro // Украинский биохимический журнал. Т. 76. -№5.- 2004. - с. 29-45.

36. Куркин В. А. // Фармакогнозия. Учебник для студентов фармацевтических вузов. Самара. 2004. - 1180 с.

37. Крешков А. П. // Основы аналитической химии. М.: Химия. 1965. Т.2. -375 с.

38. Лапа Г. Б, Шейченко В. И., Толкачев О. Н. Изучение новых подходов к синтезу бензо с. фенантридиновых алкалоидов // Труды Всероссийского НИИ лекарственных и ароматических растений. РАСХН. Химия, технология, медицина. Москва. - 2000. - с. 22 - 26.

39. Линдси К., Йомэн М.М. Новые эксперименальные системы для изучения синтеза вторичных метаболитов с использованием культуры тканей растений.// В кн.: Биотехнология сельскохозяйственных растений. Пер. с анг. В. И. Негрука. М.: Агропромиздат. 1987. -443 с.

40. Ловкова М. Я. Биосинтез и метаболизм алкалоидов в растениях.- М.: Наука. 1981.-420 с.

41. Ловкова М.Я., Рабинович A.M., Пономарева С.М., Бузук Г.Н., Соколова С.М. // Чистотел большой. Семейство маковых. В кн. "Почему растения лечат" /ред. В.Л.Кретович. М.: Наука. 1989. -315 с.

42. Лукманова К. А., Рябчук Н. X., Саликова Н. X. Аминокислотный и минеральный состав фитопрепарата люцерны // Фармация. -2000.- №1.- с. 2527.

43. Молчанов Г. И. Интенсивная обработка лекарственного сырья.- М.: Медицина.-1981.-203 с.

44. Моженок Т. П., Беляева Т. Н., Леонтьева Е. А., Фаддеева М. Д. Модуляция слияния везикулярных мембран и актинового цитоскелета при действии сангвинарина и лекарственного препарата Украин на макрофаги. // Цитология. 2005. - Т. 47. - №Ю. - с. 860-865.

45. Муравьева Д. А. // Фармакогнозия. М.: Медицина. 1991. - 560 с.

46. Нейман Д. Культура изолированных органов, тканей и клеток растений. // Труды I Всесоюзной конференции. М.: Наука. 1970. - с. 245-249.

47. Николаева Л. А. Культура тканей лекарственных растений и ее биотехнологическое использование//Текст лекций. Санкт-Петербург. 1992. -с. 250.

48. Опытно — промышленный регламент № 39-20-152 на производство «Сангвиритрина» из травы маклейи сердцевидной Macleaya cordata (Willd R.Br).

49. Орехов А.П. Химия алкалоидов. М.: АН СССР. 1955. - 859 с. •

50. Охотникова В. Ф., Гагулашвили Л. И. Разработка получения кишечно-растворимой оболочки на таблетки сангвиритрина // Труды Всероссийского НИИ лекарственных и ароматических растений. Химия, технология, медицина (ВИЛАР).Т. XVI. Москва. 2003. -с.51-52.

51. Пасешниченко В. А. Растения продуценты биологически активных веществ// Сороковский образовательный журнал. -2001. - Т. 7. - №8, - с. 1517.

52. Патент США 5133981, 4813533, US 546-41.

53. Заявка РФ 95117356, А 61 К 35/78 «Способ получения сангвиритрина».

54. Патент 1725756. Штамм культивируемых клеток растений Rhodiola rosea -продуцент фенольных соединений адаптогенов.

55. Попов Ю. Г., Шаин С. С. Состояние научных разработок в области культуры растительных тканей и их использование в лекарственном растениеводстве.// Лекарственное растениеводство. М.: 1985. - выпуск 4. - с. 12-13.

56. Потопальский А.И. Препараты чистотела в биологии и медицине. К.: Наукова думка. 1992. - 237с.

57. Рузинов Л.П., Слободчикова Р. И. Планирование эксперимента в химии и химической технологии.-М.:Химия:-1980.-280 с.

58. Савина А. А., Шейченко В. И., Толкачев О. Н: Изучение сопутствующих веществ при производстве сангвиритрина из маклеи мелкоплодной. // Хим.-фарм. журн. Т. 31. - 1997.-с. 32 — 33.

59. Савина Т.А, Цыбулько Н: С, Шаин С.С. Исследование процессов роста и метаболизм суспензионной культуры маклеи сердцевидной // Тезисы V съезда Общества физиологов России. Т. 2. - 2000. - с. 680.

60. Сатритдинов; Ф. С., Курмуков А. Т. Фармакогнозия растительных алкалоидов и их применение в медицине. Ташкент. 1980. - 312 с.

61. Спиридонов В: Щ Лопаткин А. А. Математическая обработка физико-химических данных. М.: МГУ,-1970,-221 с.

62. Тарасов В. Е., Кожевникова О. В. Пат. 2280466 Россия, МПК {7}. А 61 К 36/66. N 2004134484/15 Заявл. 25.11.2004; Опубл. 27.07.2006. Колос.- 1971.-С.269—272.

63. Толкачев О. Н., Вичканова С. А. Зависимость активности от структуры и реакционной способности некоторых природных четвертичных гетероароматических соединений и их аналогов// Фармация. -Вып. 1. 1978. -с. 38-41.

64. Толкачев О. Н., Лаская О. Е., Маслова Г. А. Образование эфиров псевдооснований из солей четвертичных алкалоидов сангвинарина и хелеритрина// Химия природных соединений. 1975. - №5. - С. 615-617.

65. Толкачев О. Н., Савина А.А. К структуре глубоко окрашенных пигментов из маклейи мелкоплодной // Сборник научных трудов ВИЛР «Химия, технология, медицина». Москва. 2000. - с. 90-95.

66. Толкачев О. Н., Савина А. А., Шейченко В. И., Проскудина В. В. 8 0 -деметилхелеритритрин из маклеи сердцевидной // Химико — фармацевтический журнал. - Т. 33 (6). - 1999. - с. 28 — 29.

67. Троцан И. А., Белюченко И. С. Особенности развития и выращивания маклеи. // Бюллетень Бот. Сада Куб. Кос. Агр. Универ. Краснодар. 1996. - с. 38 -41.

68. Уланцева Г. Г., Назырова Г.Л., Миронова П. И., Федорова И. Л. и др. 1994. Russ. RU 2,012, 329. 15.05.94; Appl 4, 948, 754. 25. 06.91. Бюл. Изобрет. 1994. №9.

69. Фонин В. С., Цыбулько Н. С., Толкачев О. Н. Применение хроматоспектрофотометрического количественного определения алкалоидов культуры ткани маклейи. // Прикладная биохимия и микробиология. Т. 35. -№4.- 1999. - с. 468-472.

70. Фонин В. С., Шейченко В. И., Савина А. А., Литовская В. И., Толкачев О. Н., Быков В. А. Культура клеток маклейи сердцевидной -продуцент антимикробных бензос.фенантридиновых алкалоидов // Антибиотики и химиотерапия. - Т. 40. - №8. - 1995. - с. 17-22.

71. Царепов В.Ж. Основы биотехнологии: культивирование изолированных клеток и тканей. -Москва.2003. 280 с.

72. Цыбулько Н. С., Савина Т. А., Минеева М. Ф. Хелерубин как альтернативный источник антимикробной активности // Труды Всероссийского НИИ лекарственных и ароматических растений. Химия, технология, медицина (ВИЛАР). Москва 2003. - Т. XVI. - с. 116-117.

73. Цыбулько Н. С., Савина А. А. Физико химические свойства сангвинарина // Труды Всероссийского НИИ лекарственных и ароматических растений. Химия, технология, медицина (ВИЛАР). - Москва. 2006. - Т. XVII. - с. 170 -171.

74. Челомбитько В". А, Муравьева Д. А. Боккония мелкоплодная — источник алкалоидов хелеритрина и сангвинарина // Химико фармацевтический журнал. -№2. -вып.1. - 1968. - с. 52-56.

75. Чибиляев Х.Л. «Состояние и перспективы работ по культивированию тканей и клеток лекарственных растений». Методы синтеза и технология производства лекарственных средств // Химико — фармацевтический журнал. -№ 8.- 1984.- с. 972, 974-976.

76. ЮнусовС. Ю. Алкалоиды. Ташкент: ФАН. 1981. -419 с.

77. Юнусов С.Ю., Алкалоиды (Приложение 2). Ташкент. Фан. 1989. - 92 с.

78. Ahmad N., Gupta S., Husain M.M. et al.: Differential antiproliferative and apoptotic response of sanguinarine for cancer cells versus normal cells. Clin.Canc Res. 6. 2000. pp. 1524-1528.

79. Babich H., Zuckerbraun H. L., Barder I. В., Babich S. В., Borenfreund E. Pharmacol. Toxicol. 1996. Vol. 78(6). pp. 397-403.

80. Bambagiotti-Alberti M, Pinzauti S, Moneti G, Gratteri P, Coran SA, Vincieri FF. Characterization of Sanguinaria canadensis L. fluid extract by FAB mass spectrometry. JPharm Biomed Anal. 1991. 9(10-12). pp. 1083-1087.

81. Bai L.P., Zhao Z.Z., Cai Z.W., Jiang Z.H.: DNA-binding affinities and sequenceselectivity of quaternary benzophenanthridine alkaloids sanguinarine, chelerythrine, and nitidine. Bioorg. Med. Chem. 14. 2006. pp. 5439-5445.

82. Bareto M.C., Pinto R.E., Arraba9a J.D., Pavao M.L.: Inhibition of mouse liver respirtion by Chelidonium majus isoquinoline alkaloids; Toxicol. Lett. 146. 2003. pp. 37-47.

83. Battersby A. R., Francis R.J., Ruveola E. A. J. Chem. Soc. Chem. Communis. 1965. №5. pp. 89-91.

84. Berlin J., Forche E., Wray V et all. Formation of benzophenantridine alkaloids by suspension culture Eschscholtzia californica. Z. Natur. Forsch. 1983. V. 38. № 5-6. pp. 346-352.

85. Belaeva Т., Leontieva E., Shpakov A., Mozhenok Т., Faddejeva M. Sensivity of lysosomal enzymes to the plant alkaloid sanguinarine: comparison witluother SH — specific agents. Cell. Biol. Int. 2003. 27. pp. 887 895.

86. Canellakis, Z.N. and Cohen, P.P. Purification studies of tyrosine-a-ketoglutaric acid transaminase. J. Biol. Chem. 222. 1956. pp. 53-62.

87. Chou V. M., Kutchan Т. M. Plant J. 1998. 15. №3. pp. 280-300.

88. Colombo Ml L., Bosisio E. Pharmacological activities of Chelidonium majus L. (Papaveraceae). Pharmacol Res. 33 (2). 1996. pp. 127-134.

89. Das S., Kumar G.S., Ray A'., Maiti M: Spectroscopic and thermodynamic studies on the binding of sanguinarine and berberine to triple and double helical DNA and RNA structures; Journal Biomol. Struct. Dynam. 20. 2003. pp. 703-713.

90. Debiton E., Madelmont J.C., Legault J., Barthomeuf C.: Sanguinarine-induced apoptosis is» associated with an early and severe cellular glutathione depletion. Cane. Chemother.Pharmacol. 51. 2003. pp. 474-484.

91. Dostal J. Two faces of alkaloids. J. Chem. Educ. 77 (8). 2000. P. 993-998.

92. Dostal. J., Bocharacova H. and etc. Structure of sanguinarine base. J. Nat. Prod 1996. №59. pp. 599-602.

93. Dostal J., Potacek M.: Quaternary benzoc.phenanthridine alkaloids. Collect. Czech. Chem. Commun. 55 (12). 1990. pp. 2840-2873.

94. Dostal. J., Slavik. J. Determination of a symmetrical dimmer structure benzophenanthridine alkaloids by pulsed field gradient HMBC. Tetrahedron. Letters. 1996. V. 37. №10. pp. 1655-1658.

95. Dostal J., Slavik J., v: Atta-ur-Rahman (Ed.). Studies in Natural Products Chemistry. Elsevier Science B.V. 2002. pp. 155-184.

96. Dostal J., Slavik J. Novejsi poznatky о sanguinarinu a pribuznych alkaloidech. Chem. Listy. 94. 2000. pp. 15 20.

97. Dostal J., Slavik J.and etc. Structural Studies of Chelirubine and Chelilutine Free Bases. Collect. Czech. Chem. Commun. 1998. 63. pp. 1045-1055.

98. Dzink J.L., Socransky S.S. Antimicrob. Agents Chemother. V. 27(4). 1985. pp. 663-665.

99. Facchini P.J. Alkaloid biosynthesis in plants: biochemistry, cell biology, molecular regulation, and metabolic engineering applications. Annual Review of Plant Physiology and Plant Molecular Biology. 2001.52. pp. 29-66.

100. Garcia V.P., Valdes F., Martin R., Luis J.C., Afonso A.M., Ayala J.H. Biosynthesis of antitumoral and bactericidal sanguinarine. Journal of Biomedicine and Biotechnology Art. No 63518. 2006.

101. Golkiewicz W., Gadzikowska M.: Isolation of some quaternary alkaloids from the extract of roots of Chelidonium majus L. by column and thin-layer chromatography; Chromatographia. 20(1/2). 1999. pp. 52-56.

102. Grothe Т., Lenz R., Kutchan Т. M. J. Biol. Chem. 276. №33. 2001.-pp. 3071730723.

103. Gutierrez Perez R.M., Vargas Solis R., Diaz Gutierrez G., Martinez-Martinez i F.J.: Identification of benzophenanthridine alkaloids from Bocconia arborea by gas chromatography-Mass spectrometry; Phytochem. Anal. 13. 2002. pp. 177-180.

104. Habermehl G. und Sehunck J. Zur disproportionierung von pseudobasen. Liebigs Ann. Chem. 1971. pp. 128-135.

105. Hisashi Ishii, Toshiaki Ichida and others. The structure of chelirubine. Tetrahedron Letters. №5. 1975. pp. 319-322.

106. Herbert J.M., Augereau J.M., Gleye J., Maffrand J.P.: Chelerythrine is a potent and specific inhibitor of protein-kinase-C. Biochem. Biophys. Res Commun. 172. 1990. pp. 993-999.

107. Hisashi Ishii, Toshiko Watanabe, Tsutomu Ishikawa. Sanguirubine and Sanguilutine. Chem. Pharm. Bull. Vol. 26. 1978. №10. pp. 3252- 3254.

108. Ishii H., Ishikawa T. Chem. Pharm.Bull. 19771 № 25. pp. 3120-3124.

109. Kang J.S., Long-PH., Lim HM., Kim YH., Blaschke G. Achiral and Chiral determination of Benzophenanthridine alkaloids from methanol extracts of Hylomecon species by High Performance Liquid Chromatography. Arch. Pharm. Res. 26 (2). 2003. pp. 114-119.

110. Ishikawa T. Benzoc.phenanthridine bases and their antituberculosis activity, Med. Res. Rev. 21 (1). 2001. pp. 61-72.

111. Kang JS, Long PH, Lim HM, Kim YH, Blaschke G. Achiral and" chiral determination of benzophenanthridine alkaloids from methanol extracts of Hylomecon species by high performance liquid chromatography. Arch. Pharm. Res. 2003. 26(2). pp. 114-119.

112. Kemeny-Beke A., Aradi J., Damjanovich J., et al.: Apoptotic response of uvealmelanoma cells upon treatment with chelidonine, sanguinarine and chelerythrine. Cancer Lett. 237. 2006. pp. 67 — 75.

113. Klvana M, Chen J, Lepine F, Legros R, Jolicoeur M. Analysis of secondary metabolites from eschscholtzia californica by high-performance liquid chromatography. Phytochem Anal. 17(4). 2006. pp. 236-242.

114. Klvana M., Legros R., Jolicoeur M.: In situ extraction strategy affects benzophenanthridine alkaloid production fluxes in suspension cultures of Eschscholtzia californica. Biotechnology and Bioegineering. 89(3). 2005. pp. 280289.

115. Kokoska L., Polesny Z., Rada V., Nepovim A., Vanek T. Screening of some Siberian medicinal plants for antimmicrobial activity. J. Ethnopharmacol. 82. 2005. pp. 51-53.

116. Kopyfko Y.F., Dargaeva T.D., Sokol'skaya T.A., Grodnitskaya E., Kopnin A.A.: New methods for the quality control of a homeopathic matrix tincture of greater celandine; Pharmaceutical Chemistry Journal. 39(11). 2005. pp. 603-609.

117. Kursinszki L., Sarkozi A., Kery A., Szoke Ё. Improved RP-HPLC method for analysis of isoquinoline alkaloids in extracts of Chelidonium majus. Chromatographia Suppl. 63. 2006. pp. 131-135.

118. Iagodina O.V., Nikol'skaia E. В., Faddeeva M.D. Inhibition of liver mitochondrial monoamine oxidase activity by alkaloids isolated from Chelidonium and Macleaya and by their derivative drugs. Tsitologiia. 2003. 45(10). pp. 1032-1037.

119. Leete E., Murril.J. Tetrahedron Lett. 1967. №3. pp. 147-151.

120. Lenfeld J, Kroutil M, Marsalek E, Slavik J, Preininger V, Simanek V. Antiinflammatory activity of quaternary benzophenanthridine alkaloids from Chelidonium majus. Planta Medica. 1981. 43(2). pp. 161—165.

121. Lecky R., Hook J., Sheridian H. Enhancement of dihydrosanguinarine production in suspension cultures of papaver bracteatum. J. Natur. Prod. V. 55. № 10. 1992. pp. 1513-1517.

122. Liepins A., Nowicky J.W. Modulation of immune effector cell cytotoxic activity and tumour growth inhibition in vivo by ukrain (NSC 631570). 1996. Drugs Exp. Clin. Res. (Suppl). 22. pp. 31-41.

123. Lovenberg W., Weissbach H. and Udenfriend S. Aromatic L-amino acid decarboxylase. J. Biol. Chem. 237. 1962. pp. 89-93.

124. Lou X-B., Chen В., Yao S-Z. Rapid determination of protopine, allocryptopine, sanguinarine and chelerythrine in fruits of Macleaya cordata by microwave-assisted solvent extraction and HPLC-ESI/MS. Phytochem. Anal. 17 2006. pp. 431-438.

125. Malikova J., Zdarilova A., Hlobikova A. Effects of sanguinarine and chelerithrine on the cell cycle and apoptosis. Biomed Pap Med Fac Univ Palacky Olomouc Czech Repub. 150(1). 2006. pp. 5-12.

126. Manady G., Beecher C.W.W. Phytochemistry. 1994. Vol. 37. №2. pp. 415-419.

127. Matkar S.S, Wrischnik L.A, Hellmann-Blumberg U. Sanguinarine causes DNA damage and p53 independent cell death in human colon cancer cell lines Chem Biol Interact. 10. 172(1). 2008. pp. 63-71.

128. Mestikawy, S., Glowinski, J. and Hamon, M. Tyrosine hydroxylase activation in depolarized dopaminergic terminals -involvement of Ca" -dependent phosphorylation. Nature (Lond.) 302. 1983. pp. 830-832.

129. Navarro V., Delgado G.: Two antimicrobial alkaloids from Bocconia arborea\ J. Ethnopharmacol. 66. 1999. pp. 223-226.

130. Nonaka J., Nishioka J. Chem. and Pharmacol Bull. 1973. V. 21. №7. P. ИЮНИ.

131. Nowicky W.1990. United States Patent: 4. 970. 212 USA.

132. Nowicky W., Nowicky J.W., Liepins A. 1993. Cytolastic and cytotoxic effects of ukrain on molignanats cells. 5. Suppl. 1. 797 800.

133. Pi G, Ren P, Yu J, Shi R, Yuan Z, Wang C. Separation of sanguinarine and chelerythrine in Macleaya cordata (Willd) R. Br. based on methyl acrylate-co-divinylbenzene macroporous adsorbents. J. Chromatogr A. 2008. May 23. 1192(1). pp. 17-24.

134. Psotova J., Vecera R., Zdarilova A etc. Safety assessment of sanguirithrine, alkaloid fraction of Macleaya cordata, in rats. Veterinarni Medicina. 51. 2006. (4). P. 145- 155.

135. Richard L., Tipton A. J. 1992. PCT Int. Appl. WO 92,19, 242, 12.11.92; US Appl. 696, 093, 06.05.91; С. A. 118, 109712a. 1993.

136. Rueffer M. and Zenk M.H. Distant precursors of benzylisoquinoline alkaloids and their enzymatic formation. Z. Naturforsch. C: Biosci. 42. 1987. pp. 319-332.

137. Santavy F. Papaveraceae alkaloids. Alkaloids Chemistry Physiology. New York. 1979. Vol. 11. pp. 385-544.

138. Sarkozi A., Kursinszki L., Kery A. Alkaloid composition of Chelidonium majus L. studied by different chromatographic techniques; Chromatographia. Suppl. 63. 2006. pp. 81-86.

139. Sedo A., Malik R., Vicar J., Simanek V., Ulrichova J. Quaternary benzoc.phenanthridine alkaloids as inhibitors of dipeptidyl peptidase IV like activity bearing enzymes in human blood plasma and glioma cell lines. Physiol. Res. 52. 2003. pp. 367 -372.

140. Schmeller Т., Latz Bruning В., Wink M. Biochemical activities of berberine, palmatine and sanguinarine mediating chemical defence against microorganisms and herbivores. Phytochemistry. Vol.44. №2. 1997. pp. 257 — 266.

141. Sevcik J., Vicar J. Ulrichova J., Valka I., Lemr K., Simanek V. Capillary electrophoretic determination of sanguinarine and chelerythrine in plant extracts and pharmaceutical preparation. J. Chromatogr. A. 866. 2000. pp. 293-298.

142. Simanek V. Benzophenanthridine alkaloids. The Alkaloids. Vol. 26. New York, NY. Academic Press. 1985. p. 185-240.

143. Simanek V., Zdarilova A., Ulrichova J. Sanguinarine and chelerithrine: chemical behaviour and biological activities. Annales of polish Chemical Society. 13. 2004. pp. 613-616.

144. Slaninova I, Slanina J, Taborska E. Quaternary benzoc.phenanthridine alkaloids- novel cell permeant and red fluorescing DNA probes. Cytometry A. 2007 Sep. 71(9). pp. 700-708.

145. Slavik J., Hanus V., Slavikova L. Alkaloids From Stylophorum lasiocarpum (Oliv) Fedde. Collect. Czech. Chem. Commum. 56. 1991. pp. 1116-1122.

146. Slavik J., Slavikova L. Alkaloidy rostlin makovitych (Papaveraceae) VI; О alkaloidech z Macleaya microcarpa (Maxim.) Fedde. Chem. Listy. 48. 1954. pp. 106 -110.

147. Slavikova L., Slavik J. Alkaloidy rostlin Makovitych (.Papaveraceae) IX. Dicranostigma franchetianum (Prain) Fedde. Chem. Listy. 51. 1957. pp. 1923-1926.

148. Southard G. L., Hardrader R. I. 1989. Eur. Pat. Appl. EP. 297, 535, 04. 01.89; US Appl. 68, 251, 30. 06.87; С. A., 111 (16), P 140510 b. 1989.

149. Spell J. C., Stewart J. T. Quantative analysis of p — aminosalisylic acid and it is major impurity aminophenol in p - aminosalisylic acid drug substance by HPTLC and scanning densitometry. J. Planar. Chromatog. Mod. TLC. 1994. Vol.7. № 6. pp. 272-473.

150. Suchomelova J, Bochorakova H, Paulova II, Musil P, Taborska E. HPLC quantification of seven quaternary benzoc.phenanthridine alkaloids in six species of the family Papaveraceae; J. Pharm Biomed Anal. 2007. 44(1). pp; 283-287.

151. Takao N., Kamigauchi M., Okada M. Biosynthesis of benzoc.phenanthridine alkaloids sanguinarine, chelirubine and macarpine. Helvetica Ghimica Acta. 1983. V.66. pp. 473-484.

152. Tousek J., Dommisse R., Dostal J., et al. Configurations and conformations of sanguinarine and chelerythrine free bases stereoisomers; J. Mol. Struct':i613 (1-3). 2002. pp. 103-113.

153. Ulrichova J., Dvorak Z., Vicar J., Lata J., Smrzova J;, Sedo Д., Simanek V. Cytotoxicity of natural compounds in hepatocyte cell culture models. The case of quaternary benzoc.phenanthridine alkaloids. Toxicol. Lett. 125. 2001. pp. 125 — 132.4/

154. Ulrichova J., Walterova D., Vavreckova C., Kamarad V., Simanek V. Cytotoxicity of benzoc.phenanthridinium alkaloids in isolated rat hepatocytes; Phytother.Res. 10. 1996. pp. 220-223.

155. Vavreckova C., Ulrichova J. Biologicka alctivita kvarterni'ch benzoc.fenanthridinovych alkaloidia sanguinarinu a chelerytrinu; Chem. Listy. 88. 1994. pp. 238-248.

156. Weiss D, Baumert A, Vogel* M, Roos W. Sanguinarine reductase, a key enzyme of benzophenanthridine detoxification. Plant. Cell. Environ. 29 (2). 2006. pp. 291-302.

157. Williams R. D., Chauret N., Bedard C. Biotechnology. 1992. Vol. 40. №8. pp. 971-977.

158. Wolf J., Knipling L.: Antimicrotubule properties of benzophenanthridine alkaloids. Biochemistry. 32. 1993. pp. 13334-13339.

159. Yamamoto S., Seta K., Morisco C., Vatner S. F etc. Chelerythrinerapidly induses apoptosis through-generation of reactive oxygen species in cardiac myocites. J. Moll Cell Cardiol 33. 2001.pp. 1829- 1848.

160. Yu JS, Yu JP. Study on separation and purification of total alkaloids from Macleaya cordata. Zhong Yao Cat 2007 Aug. 30(8). pp. 1008-1012.

161. Zajoncova L, Kosina P, Vicar J, et al. Study of the inhibition of alpha-amylase by the benzoc.phenanthridine alkaloids sanguinarine and chelerythrine. J. Enzym. Inhib. Med. Chem. 20 (3). 2005. pp. 261-267.

162. Zenk. M. H. The formation of benzophenanthridine alkaloids. Pure and Appl. Chem. V. 66. №10/11. 1994. pp. 2023-2028.

163. Zdarilova A., Malikova J., Dvorak Z., Ulrichova J., Simanek V. Quaternary isoquinoline alkaloids sanguinarine and chelerythrine. In vitro and in vivo effects. Chem. Listy. 100. 2006. pp. 30-41.

164. Zdarilova1 A., Vrzal R., Rypka M., Ulrichova J., Dvorak Z. Investigation of sanguinarine and chelerythrine effects on CYP1A1 expression and activity in human hepatoma cells. Food Chem. Toxicol. 2. 2006. pp. 242-249.

165. Zhang F., Chen В., Xiao S., Yao S-Z. Optimization and comparison of different extraction techniques for sanguinarine and chelerythrine in fruits of Macleaya cordata (Willd) R.Br. Sep. Purif.Technol. 42. 2005. pp. 283-290.