Изучение гистоновых вариантов на разных стадиях развития дрозофилы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, кандидат биологических наук Иванченко, Мария Георгиевна

• Иванченко, Мария Георгиевна
• кандидат биологических наук
• 1984

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Иванченко, Мария Георгиевна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Гистоны. Гетерогенность гистонового пула - значение для процессов клеточной дифференцировки и развития организмов.

1.2 Гистоны дрозофилы.

1.3 Роль гистонов в организации и структурно-функциональных переходах хроматина.

1.4 Синтез гистонов и включение в хроматин.

1.5 Постановка проблемы и конкретных задач исследования.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОД!

2.1 Объекты исследования.

2.2 Получение ядер.

2.3 Разделение хроматина на транскрипционно-активную и неактивную фракции.

2.4 Экстракция гистонов и приготовление гистоновых препаратов.

2.5 Электрофоретические методы исследования гистонов.

2.6 Определение количества гистоновых фракций.

2.7 Авторадиографическое исследование меченных гистоновых фракций.

2.8 Окисление гистоновых фракций.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Идентификация субфракций гистоновых белков дрозофилы

3.1.1 Электрофоретические свойства.

3.1.2 Формы окисления.

3.1.3 Ацетилированные формы.

3.1.4 Фосфорилированные формы.

3.2 Гистоны дрозофилы при онтогенезе

3.2.1 Различия в составе гистонового пула на разных стадиях развития дрозофилы.

3.2.2 Изменения гистонов дрозофилы в ходе ранного эмбриогенеза.

3.3 Функциональное состояние клетки и состав гистонового набора

3.3.1 Гистоновые белки клеток культуры 675250 при росте между двумя последовательными пассажами.

3.3.2 Влияние экдистерона и ингибиторов клеточного метаболизма на состояние гистонов.

3.3.3 Свойства гистонов во фракциях хроматина, различающихся по транскрипционной активности.

3.3.4 Изменение гистоновых белков дрозофилы при тепловом шоке.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение гистоновых вариантов на разных стадиях развития дрозофилы»

Изучение связи между структурной организацией хроматина и его функциональной активностью является важнейшей проблемой молекулярной генетики. В этой проблеме один из нерешенных вопросов -участие гистонов в организации и поддержании специфических структур, различающихся по своей функциональной активности.

Возможным подходом при решении данного вопроса является исследование состава гистонов в связи с процессами клеточной диф-ференцировки и онтогенеза. Количественные и качественные изменения набора гистоновых субфракций выявлены в разных тканях позвоночных, установлено, что состав гистонов может изменяться в зависимости от стадии развития и в зависимости от функциональной активности ядер.

Дрозофила, являющаяся одним из излюбленных и наиболее изученных объектов генетики и имеющая при этом сложный цикл морфогенеза, весьма интересна для такого рода исследований. Однако, неизвестно, создается ли гетерогенность гистонов этого организма за счет структурных вариантов или за счет химически модифицированных форм. Существующие предположения о природе гистоновых субфракций дрозофилы сделаны по аналогии с другими объектами.

Исследование вопросов, какие именно гистоновые субфракции .»претерпевают изменения во время онтогенеза дрозофилы и с какими процессами клеточного метаболизма коррелируют эти изменения, поможет понять молекулярные механизмы дифференцировки эукариотичес-ких организмов и участие гистонов в этих механизмах. Поэтому, целью данного исследования было выявить гетерогенность гистоно-вого пула дрозофилы, -( выяснить чем вызвана эта гетерогенность и зависит ли она от стадий развития организма. Было интересно также выяснить, меняется ли состав гистонового пула в условиях культивирования клеток дрозофилы in vitro , и с какими процессами клеточного метаболизма связаны возможные изменения гистонов.

Проведенное нами исследование гистонов дрозофилы в различных электрофоретических системах во время всего эмбриогенеза, а также на онтогенетических стадиях личинки, куколки и имаго, не обнаружило существование у этого организма аналогов тех вариантов гистонов, которые найдены у других исследованных объектов. Н2а, Н4, HI и Д1 дрозофилы имеют фосфорилированные формы, а НЗ, Н4, Н2в и Д2 - ацетилированные формы. Кроме того, Н2а, НЗ, Н2в и Д2 подвергаются окислению.

Таким образом оказалось, что выявляемая гетерогенность гистонового пула дрозофилы обусловлена разного типа модифицированием гистоновых молекул. Тем не менее, мы наблюдали изменения количества HI и минорного гистоноподобного белка Д2 в ходе онтогенеза, и поэтому нельзя категорически утверждать, что гистоны дрозофилы не влияют на процессы клеточной дифференцировки.

Интерес вызывают также неожиданно резкие перемены уровня фосфорилирования гистонового класса 2а. На некоторых эмбриональных стадиях, а также у имаго, фосфорилированная форма Н2а составляет 50% от всех Н2а молекул, а в молодых клеточных пассажах пересеваемых клеток дрозофилы - даже 80%. В позднем эмбриогенезе и у клеточных пассажей, вышедших из логарифмической фазы роста, Н2а фосформированы всего на 15-20%. Такое сильное фосфорилирова-ние Н2а и такие резкие перемены уровня этой модификации не отмечены ни у одного из изученных до сих пор организмов. У млекопитающих, например, Н2а фосфорилированы всего на 15% и этот уровень не так сильно меняется в клетках с различными функциями. Может быть, у насекомых процессы фо сформирования и дефосфорилирования Н2а имеют большее значение для контроля состояния клетки, чем у других филогенетических групп. Интересно, что во фракциях хроматина эмбрионов дрозофилы, обогащенных транскрипционно неактивными зонами, содержание фосфорилированной формы Н2а сильно занижено по сравнению с контролем.

Возможность индуцировать новую субфракцию Н2в в условиях блокирования синтеза ДНК и РНК, а также выявление белков ДЗ и Д4 при культивировании клеток дрозофилы in vitro указывает на то, что у дрозофилы может быть тоже существует возможновть для синтеза другого типа Н2в молекул и других минорных гистоноподоб-ных белков, которая возможно . осуществляется только в специальных условиях жизни клетки.

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Генетика», Иванченко, Мария Георгиевна

ВЫВОДЫ

1. При исследовании гистонов дрозофилы в различных электро-форетических системах выявлена гетерогенность всех классов нук-леосомных гистонов и минорных гистоноподобных белков Д1 и Д2. Показано, что наблюдаемая гетерогенность обусловлена следующими модификациями: у Н2а и Д1 - фосфорилированием, у НЗ, Н2в и Д2 -ацетилированием. Кроме того, Н2а, Н2в, НЗ и Д2 подвергаются окислению.

2. У дрозофилы не обнаружено стадий-специфических вариантов нуклеосомных гистонов, соответствующих вариантам, найденных у других объектов.

3. В ходе онтогенеза дрозофилы, гистоновый набор изменяется за счет разницы количества Н1 и минорного гистоноподобного белка Д2.

4. Показано, что количество фосфорилированной формы Н2а сильно меняется при онтогенезе ( в пределах 15-50% по отношению к не-модифицированной форме ) и при росте клеток между пассажами от 80 до 50% ).

5. Во фракциях хроматина, обогащенных транскрипционно-неактивными зонами, уровень фосфорилированной формы Н2а силвно занижен в сравнении с контролем.

6. В клеточных культурах двух видов дрозофилы обнаружены два дополнительных минорных белка гистоновых экстрактов, названных нами ДЗ и Д4, которых нет ни на одной онтогенетической стадии.

7. При изучении влияния различных воздействий ( температура, ингибиторы синтеза макромолекул, экдистерон ) единственным замеченным эффектом было изменение степени ацетилирования Н4 при воздействии температуры.

ключением.

Патерн гистонов культивируемых клеток дрозофилы имеет неко* торые специфические особенности. У клеточной линии 67j25D обнаруживается дополнительная минорная фракция гистонового пула ( обозначенная как ДЗ на рис. 24 и рис. 25 ), которая не была обнаружена нами при исследовании гистонов дрозофилы при развитии. В кислых гелях, содержащих мочевину ( направление-I электрофореза на рис. 24 и рис. 25 ), ДЗ движется чуть быстрее HI и ДГ, а в гелях, содержащих TXI00 ( направление-2 электрофореза на рис. 24 и рис. 25 ), этот белок движется немного медленнееД2. Это указывает на высокое сродство ДЗ к тритону - свойство типичное для нуклеосомных гистонов.

Кроме ДЗ в клетках 67j25d , вышедших из логарифмической фазы роста, обнаруживается еще один минорный белок гистоновой фракции, обозначенный как Д4 на рис. 24Б. Как видно на этом рисунке, сродство Д4 к тритону почти такое же высокое, как у Н2а. Количество ДЗ и Д4 меньше количества Д1 и Д2, и поэтому их легко обнаружить на окрашенных гелях, только если электрофорезу подвергается большое количество тотального гистонового препарата ( 160 мкг, как на рис. 24Б ).

Выявление ДЗ и Д4 в гистоновых экстрактах клеточной линии вряд ли связано с мутационными процессами в клеточной культуре. Скорее всего, способность к синтезу этих белков существует и in vivo , но только особенности роста клеток в культуре привели к их синтезу в количествах, которых можно регистрировать. Такое мнение складывается, если учесть, что эти белки существуют и в клеточной культуре D. virilis ( рис. 29 ), хотя о наличии их у этого вида дрозофилы нам не удалось найти каких-либо данных в литературе. Интересно, что и в клетках культуры 79f4Dv3g, ДЗ присутствует как в молодых, так и в стареющих пассажах рис. 29, А и Б ), а Д4 - только после выхода клеток из логарифмической фазы роста ( рис. 29Б). Поэтому появление Д4 может являться выражением процессов старения клеток между пересевами.

Рис. 29. Двумерный электрофорез гистонов из клеток 79^41)УЗе на пятый (А) и двенадцатый (Б) день роста.

3.3.2 Влияние экдистерона и ингибиторов клеточного метаболизма на состояние гистонов

Экдизон - гормон роста, который у насекомых ответствен за переход личинки в куколку. Из всех производных этого гормона наиболее активен ^-экдизон ( экдистерон ) [28]. Его концентрация в гемолимфе насекомых сильно меняется при онтогенезе, повышаясь перед каждой линькой и , особено, у куколки [38]. Добавление экдистерона в питательную среду культивируемых клеток дрозофилы влияет на морфологию ^ клеток [147]. Его присутствие в культуральной среде клеточной линии 67а25Б ингибирует деление клеток [1471. Ингибируется также и включение радиоактивного уридина [там же].

В условиях нашего эксперимента, при воздействии экдистероном, клетки стали крупнее, а содержимое цитоплазмы приобрело более зернистую консистенцию. Предполагается, что такие ответы со стороны ' клеток на добавление экдизона являются отражением процессов диф-ференцировки, вызываемой гормоном [147].

Учитывая возможность неспецифического действия экдистерона как ингибитора синтеза РНК и ДНК, мы изучали параллельно и действие оксимочевины, останавливающей репликацию ДНК, а так же и актиномицина-Д, который блокирует транскрипцию на уровне связывания РНК-полимеразы с хроматином. Оптимальные концентрации этих агентов были подобраны при предварительных экспериментах так, чтобы не повышался процент мертвых клеток в культуре.

Для проверки эффективности блока синтеза РНК и ДНК АВД и ОМ, клетки метили сразу после добавления агентов соответствено % -уридином и %-тимидином и сравнивали включение радиоактивности в обработанные и необработанные клетки.

Оксимочевина в концентрации 0,2 мМ за три часа не подействовала на включение %-тимидина в клетки. За сутки, однако, она повлияла в какой-то мере на скорость клеточного деления ( см. табл.1и2). При следующей проверке выяснилось, что 5 мМ концентрация ОМ оптимальна для такого рода исследований - она не влияла на процент мертвых клеток и сразу давала нужный эффект,( табл.2 ).

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Иванченко, Мария Георгиевна, 1984 год

1. Брауде-Золоторева Т.Я., Какпаков В.Т., Никошков А.Б. Получение и описание новой линии эмбриональных клеток Drosophila virilis iy съезд Всесоюзного общества генетиков и селекционеров им. Н.И.Вавилова. Тезисы докладов. Кишинев, 1981, с.38-39

2. Гвоздев В.А., Какпаков В.Т., Муховатова Л.М., Полукарова Л.Г., Тарантул В.З., 1974: Влияние экдистерона на рост клеток и синтез макромолекул в пересеваемых культурах эмбриональных клеток Drosophila melanogaster Онтогенез, т.5, №1, с.33-42

3. Какпаков В.Т., Гвоздев В.А., Плетова Т.П., Полукарова Л.Г., 1969: Линии эмбриональных клеток Drosophila melanogaster » пересеваемые in vitro Генетика, т.5, №12, с.67-75

4. Метаковский Е.В. Исследование влияния экдистерона на пересеваемую культуру клеток D.melanogaster : изменение синтеза белков, гликопротеинов и свойств поверхности клетки. Дисс. на соискание ученой степени канд. биол. наук. M., 1977, 181 с.

5. Остерман Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот: Электрофорез и ультрацентрофугирование. М., Наука, 1981, 383 с.

6. Стент Г., Кэлиндар Р. Молекулярная генетика ( пер. с англ. ). М., Мир, 1981, 646 с.

7. Хаджиолов A.A., Венков П.В., Карагьозов Л.К. Структура и функция на гените. София, Наука и изкуство, 1976, 406 с.

8. Adler A.J., 1974: Altered conformational effect of naturally acetylated histone f2a1 ( IV ) in f2a1-deoxyribonucleic acid complexes. J. Biol. Chera., v.249, N9, p.2911-2914

9. Agrell I. & Christensson E., 1965: Changes of histone composition in the developing chick embryo. Nature, v.207, N4997» p.638-640

10. Ajiro K., Borun T.W & Cohen L.H., 1981: Phosphorylation states of different histone 1 subtypes and their relationship to chromatin function during the HeLa S-3 Cell cycle. -Biochem., v.20, N6, p.1445-1454

11. Alfageme C.R., Zweidler A., Mahowald A. & Cohen L.H., 1974: Histones of Drosophila embryos-electrophoretic isolation and structural studies. J. Biol. Chem., v.249, N12, p.3729-3736

12. Allis C.I)., Glover C.V.C., Bowen J.K. & Gorovsky M.A., 1980: Histone variants specific to the transcriptionally active, amitotically dividing macronucleus of the unicellular euca-ryote, Tetrahymena thermophila. Cell, v.20, N3, p.609-617

13. Allis C.D. & Gorovsky M.A., 1981: Histone phosphorylation in macro- and micronuclei of Tetrahymena thermophila. Biochem., v.20, N13, p.3828-3833

14. Anderson K.V. & Lengyel J.A., 1980: Changes rates of DNA and

15. RNA synthesis in Drosophila embryos. Devel. Biol., v.76, N1, p.186-209

16. Arceci R.J. & Gross P.R., 1977*- Noncoincidence of histone and DNA synthesis in cleavage cycle of early development. -Proc. Natl. Acad. Sei. USA, v.74, N11, p.5016-5020

17. Aulin R.J., Dam V.T., Miclette J., Bronsseau Y., Huletsky A. 8s Poirier G.G., 1982: Hyper ( ADP-ribosyl )ation of histone H1. Can. J. Biochem., v.60, H12, p.1085-1094

18. Axel R., 1975: Cleavage of DNA in huclei and chromatin with staphylococcal nuclease. Biochem., v.14, N13, p.2921-2925

19. Blumenthal A., Kriegstein H.J. & Hognes D.S., 1974: The units of DNA replication in Drosophila melanogaster chromosomes. -Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., v.38, p.205-223

20. Boffa L.C., Vidali G., Mann R.S. & Allfrey V.G., 1978: Suppression of histone deacetylation in vivo and in vitro by sodium butirate. J. Biol. Chem., v.253, N10, p.3364-3366

21. Böhm J., Schlaeger E.-J. & Knippers R., 1980S Acetilation of nucleosomal histones in vitro. Eur. J. Biochem., v.112, N2, p.353-362- 102

22. Bonner W.M. & Stedman J.D., 1979: Histone 1 is proximal to histone 2A and to A^. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, v.76, N5, p.2190-2194

23. Borat P., Bollenbacher W.E., O'Connor J.D., King D.S. & Fris-ton J.W., 1974: Ecdyzone levels during metamorphosis of Droso-phila melanogaster. Devel. Biol., v.39, N2, p.308-316

24. Borelikas T., Wiseman J.M. & Garrard W.T., 19S0: Points of contact between histone H1 and the histone octamer. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, v.77, N1, p.127-131

25. Breindl M. & Gallwitz D., 1973-' -Identification of histone mRNA from Hela cells. Eur. J. Biochem., v.32, N2, p.381-391

26. Brown I.R., 1980: Histone synthesis in isolated neuronal perikaryon relative to the postnatal appearance of a short DNA repeat leuth. Devel. Biol., v.80, N1, p.248-252 ( Brief note )

27. Camerini-Otero R.D. & Felsenfeld G., 1977: Histone H3 disulfide dimers and nucleosome structure. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, v.74, N12, p.5519-5523

28. Candido E.P.M. & Dixon G.H., 1971: Different accessibilities in chromatin to histone acetylase. J. Biol. Chem., v.246, N10, p.3182-3188

29. Carpenter B.G., Baldwin J.P., Bradbury E.M. and Ibel K., 1976: Organisation of subunits in chromatin. Nucleic Acids Res., v.3, N7, p.1739-1746

30. Chalkley R. & Hunter C., 1975: Histone-histone propinquity by aldehyde fixation of chromatin. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, v.72, N4, p.1304-1308

31. Cohen l.h. & Gotchel B.V., 1971: Histone of polytene and non-polytene nuclei of Drosophila melanogaster. J. Biol. Chem., v.246, N6, p.1841-1848

32. Cohen L.H., Newrock K.M. and Zweidler A., 1975: Stage specific switches in histone synthesis during embryagenesis of thesea urchin. Science, v.196, N4218, p994-997

33. Cremisi Ch. & Yaniv M., 1980: Sequential assembly of newly synthesized histones on replicating SV40 DNA. Biochem. Bio-phys. Res. Comm., v.92, N4-, p.1117-1123

34. Crick F.H.C. & Klug A., 1975: Kinky helix. Nature, v.255, N5509, p.530-533

35. Detke S., Lichtler A., Phillips I., Stein J. and Stein G., 1979: Reassessment of histone gene expussing during cell cycle in human cells by using homologus H4 histone cDNA. -Proc. Natl. Acad. Sci. USA, v.76, N10, p.4995-4999

36. Dewhurst S.A. & Seecof R.L., 1975: Development of acetylcholine metabolizing enzymes in Drosophila embryos and in- 104 cultures of embryonic Drosophila cells. Oomp. Biochem. Rhysiol. v.$0C, p.53-58

37. Duncan M.R., Robinson M.J. andDell'orco R.T., 1983: Kinetics of histone hyperacetylation and deacetylation in human diploid fibroblasts. Biochem. et Biophys. Acta, v.762, N2, p.221-226

38. Elgin S.O.R. & Hood L.E., 1973: Biochem., v.12, N24-, p.4984-4991: Chromosomal proteins of Drosophila embryos.

39. Elsevier S.M., Lipps H.J. and Steinbriik K.G., 1978: Histone genes in macronuclear DNA of the ciliate Stylonychia mytilus. Cromosoma, v.69, N3, p.291-306

40. Fambrought D,M. & Bonner J., 1968: Sequence homology and role of cysteine in plant and animal arginine-rich histones.

41. J. Biol. Chem.,v.243, N17, p.4434-4439

42. Felsenfeld G., 1978: Chromatin. Nature, v.271, N5641, p.115-^22

43. Finch J.T. & Klug A., 1976: Solenoidal model for superstructure in chromatin. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, v.73, N6,p. 1897-1901

44. Glotov B.O., Itkes A. V., Nicolaev L.G. and Severin E.S.* 1978, Evidence for the close proximity of histones H1 and H3 in chromatin of intact nuclei. FEBS Lett., v.91, N1, p.149-151

45. Glotov B.O., Nicolaev L.G. and Severin E.S., 1978: Histone H1-DNA interaction. On the mechanism of DNA strands crosslin-king by histone H1. Nucl. Acids Res., v.5, N7, p.2587-2605

46. Gorovsky M.A.,Pleger G.L., Kecvert J.B. and Johman C.A., 1973: Studies on histone fraction F2A1 in macro- and micro-nuclei of Tetrahimena pyriformis. J. Cell Biol., v.57, N3, p.773-781

47. Gottesfeld J.M. & Melton D.A., 1978: The length of nucleoso-me-associated DNA is the same in both transcribed and non transcribed regions of chromatin. Nature, v.273, N5660,1. P. 317-319

48. Groppi V.E.Jr. & Coffino Ph., 1980: G1 and S phase mammalian cells synthesize histones at equvalent rates. Cell, v.21,p. 195-204

49. Grunstein M. & Grunstein J.E., 197Si The histone BU gene of Strongylocentrotus purpuratus DNA and mHNA sequences at the 5'end. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., v.17, p.1083-1092

50. Grunstein M.P., Schedel P. and Kedes L.H., 1976: Sequence analisis and evolution of sea urchin ( L. pictus and S. pur-puratos ) histone H4 messenger RNA. J. Mol. Biol., v.104, N2, p.351-369

51. Gurley L., D'Anna J., Barham S., Deaven L. and Tobey R., 1978: Histone phosphorylation and chromatine structure during mitosis in hamster cells. Eur. J. Biochem., v.84, N1, p.1-15

52. Gurley L.R. & Hardin J.M.,1969: The metabolism of histone fractions II. Conservation and turnover of histones in mammalian cells. Arch. Biochem. Biophys., v.130, N1, p.1-6

53. Gurley L.R., Walters R.A. and Tobey R.A., 1973*- Biochem. Biophys. Res. Comm., v.50, N3: Histone phosphorylation in late interphase and mitosis.

54. Gurley L.R., Walters R.A. and Tobey R.A., 1973: The metabolism of histone fractions. VI. Difference in the phosphorylation of histone fractions during the Cell Cycle. Arch. Biochem. Biophys., v.154, N1, p.212-218

55. Gurley L.R., Walters R.A and Tobey R.A., 1975: Sequental phosphorylation of histone subfractions in the Chinese hamster cell cycle. J. Biol. Chem., v.250, N10, p. 3936-3944

56. Hacket P.B., Traub P. and Gallwitz D., 19.8: The histone genes in HeLa cells are on individual transcriptional units- 107

57. J. Mol. Biol., v.126, N4, p.619-635

58. Hadlaczky G., Sumner A.T. and Ross A., 1981: Protein-depleted chromosomes II. Experiments concerning the reality pf chromosome scaffolds. Gromosoma, v.81, N4, p.557-567

59. Haleck M.S. & Gurley L.R., 1980: Histone H2a subtractions and their phosphorylation in cultured peromyscus cells. -Exp. Cell. Res., v.125, N2, p.377-388

60. Hancock R., 1969:Conservation of histones in chromatin during growth and mitosis in vitro. J. Mol. Biol., v.40, N3, p.457-466

61. Hancock R., 1978: Assembly of new nucleosomal histones and new DNA into chromatin. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, v.75, N5, p.2130-2134

62. Harvey R.P. & Wells J.R.E., 1979: Isolation of a genomal clone containing chicken histone genes. Nucl. Acids Res., v.7, N7, p.1787-1797

63. Hayashi 0. & Ueda K., 1977: Poly( ADP-ribose ) and ADP ribo-silation of proteins. Ann. Rev. Biochem., v.46, p.95-11677« Hereford L. & Rosbash M., 1977: Regulation of a set of abundant mRNA sequences. Cell, v.$0, N3, p.453-462

64. Hozier J., Nehls P. and Renz M., 1977: The chromosome fiber: Evidence for an ordered superstructure of nucleosomes.- 108

65. Chromosoma, v.62, N4, p.301-317

66. Isenberg I., 1979: Histones. Ann. Rev. Biochem., v.48, p. 159-191

67. Jorcano J.L. & Ruiz-Carrillo a., 1979: H3-H4 tetramer directs dna and core histone organisation in the nucleosome core particle. Biochem., v.1'8, N5, p.768-774

68. Kedes L.H., 1976: Histone messengers and histone genes. -Cell, v.8, N2, P321-331

69. Kinkade J.M. & Cole R.D., 1966: The resolution of four lisi-ne rich histones derived from calf thymus. J. Biol. Chem., v.241, N24, p.5790-5797

70. Kornberg R.D., 1874: Chromatin structure: A repeating unit of histones and DNA. Science, v.184, N4139, p.868-871

71. Laskey R.A., Honda B.M., Mills A.D. and Finch J.T., 1978: Nucleosomes are assembled by an acidic protein which binds histones and transfers them to DNA. Nature, v.275, N5679, p.416-420

72. Leffak L.M.,Grainger R. and Weintraub H., 1977: Conservative assembly and segregation of nucleosomal histones. -Cell, v.12, N3, p.837-846

73. Leffark L.M. & Li H.-J., 1981: Sequence sensitivity of histone binding. Biochem. Biophys. Acta, v.656, p.86-92

74. Levy A. & Jakob K.M., 1978: Nascent DNA in nucleosome-like structures from chromatin. Cell, v.14, N2, p259-267

75. Lewis P.N. & Shiu S.S., 1980: Effect of histone H3 sulfhyd-ryl modifications on histone-histone interactions and nucleo-some formation and structure. Eur. J. Biochem., v.109, N2, p.369-376

76. Liberti-Langenbuch J., Wilhelm M.L., Gigot C. and Wilhelm F.X., 1980: Plant and animal histones are completiy interchangeable in the nucleosome core. Biochem. Biophys. Res. Comm., v.94, N4, p.1161-1168

77. Lichtler A.C., Detke S., Phillips I.R., Stein G.S. and Stein J.Z., 1980: Multiple forms of H4 histone mRNA in human cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA., v.77, N4, p.1942-1946

78. Liew C.C., Haslett G.W. and Allfrey V.G., 1970: N-acetyl-ce-ryl-tRNA and polypeptide chain initiation during histone biosynthesis. Nature, v.226, N5244

79. Lipps H.J. & Morris N.R., ^977: Chromatin structure in thenuclei of the ciliate Stylonychia mytilus. Biochem. Biophys.

80. Res. Comm., v.74, N1, p.230-234

81. Mahowald A.P., 1968: Polar granules of Drosophila II. Ultrastructural changes during early embryogenesis. J. Exp. Zool. v.167, p.237-241

82. Mitsui Y., Hiroshi S., Murota S.-I. and lamada M.-A., 1980: Age-related declain in histone H1 fraction in human diploid fibroblast cultures. Exp. Cell Res., v.126, N2, p.289-298

83. Moav B. and Nemer M., 1971: Histone synthesis. Asignment to a special class of polyribosomes in sea urchin embryos.- Biochem., v.10, N5, p.881-888

84. Moss B., Gerchowitz A., weber L.A. and Baglioni C., 1977: Histone mRNA contain blocked and methylated 5*terminal sequences but lack methylated nucleosides at internal positions. Cell, v.fO, N1, p.113-120

85. Muller V., Zentgraff H., Eicken I. and Keller ¥., 1978: Higher order structure of simian virus 40 chromatin. -Science, v.201, N4354, p.406-415

86. Nadeau P., Oliver D. and Chalkley R., 1978: Effect of inhibition of DNA synthesis on histone synthesis and deposition. Biochem., v.17, N23, p.4885-4-893

87. Nelson D.C. & Chalkley R., 1980: Segregation of rapidly acetylated histones from intact nuclei by the action ofmicrdcoccal nuclease, Nucl. Acids Res., v.8, N8, p.1745-1763

88. Nelson D.A., Perry M., Sealy L. and Chalkley R., 1978: DNAse I preferentially digests chromatin containing hyper-acetylated histones. Biochem. Biophys. Res. Comm., v.82, N4, p.1346-1353

89. Nemer M. & Lindsay S., 1969: Evidence that the S-polysomes of early sea urchin embryos may be responsible for the synthesis of chromosomal histones. Biochem. Biophys. Res. Comm., v. 35» N1, p.156-160

90. Neuman J.R., Housman D. and Ingram V.M., 1978J Nuclear protein synthesis and phosphorylation in Friend erythro-leukemia cells stimulated with DMSO. Exp. Cell Res., v.111, N2, p.277-285

91. Neumman N.P., 1972: In Methods in enzymology, v.25: Enzyme structure, part B, p.393» New York, Academic press

92. Newrock K.L., Alfageme C.R., Nardi R.V. and Cohen L.H., 1978: Histone changes during remodeling in embryogenesis. Cold Spring Harbor Simp. Quant. Biol., v.17» part 1,p.421-431

93. Noll M., 1977: DNA folding in the nucleosomes. J. Mol. Biol., v.116, N1, p.49-71

94. Palmer D., Snyder L.A. and Blumenfeld M., 1980: Drosophila nucleosomes contain an unusial histone-like protein. Proc* Natl. Acad. Sci. USA, v.77, N5, p.2671-2675

95. Panyim S., Bilek D. and Chalkley R., 1971: An electrophoretic comparison of vertebrate histones. J. Biol. Chem.,v.246, N13, p.4206-4215

96. Panyim S. & Chalkly R., 1969: High resolution acrylamide gel electrophoresis of histones. Arch. Biochem. Biophys. v.130, N1, p.337-346

97. Paponov V.D., Gromov P.S., Sokolov N.A., Spitkovsky D.M. and Tseitlin P.I., 1978: The nature of interactions for the differences in the affinities of Jiistones for DNA. -Biochem. Biophys. Res. Comm., v.82, N2, p.574-679

98. Paulson J.R. & Laemmly U.K., 1977: The structure of histo-nedeplated metaphase chromosomes. Cell, v.12, N3, p.817-828

99. Perry R.P. & Kelley D.E., 1973: Messenger RNA turnover in mouse L cells. J. Mol. Biol., v.79, N4, p.681-699

100. Piha R.S. & Valkonen K.H., 1979: Changes in liver nuclear histones during bovine ontogeny. PEBS Lett., v.108, N2, p.326-330

101. Prentice D.A., Loechel S.C. and Kitos P.A., 1982: Histone- 113

102. H2a phosphorylation in animal cellsfi Functional considerati-' ons. Biochem., v.21, N10, p.2412-2420

103. Prentice D.A., Taylor S.E., Newmark M.Z. and Kitos P.A., 1978: The effect of dexamethasone on histone phosphorylation in1.cells. Biochem. Biophys. Res. Comm., v.85, N2, p.541-550

104. Purkaystha R. & Neelin J.M., 1966: Comparison of histones from avian erythroid tissues by zone electrophoresis. Biochem. Biophys. Acta, v.127, N2, p.468-477

105. Rail G.C., Okinaka R.T. and Streniste G.F., 1977: Histone composition of nucleosomes isolated from cultured Chinese hamster cells. Biochem., v.16, N22, p.4940-4944

106. Rattner J.B., Sanders C., Pavie J.R. and Hamkalo B.A., 1982: Ultrastructural organization of yeast chromatin. J. Cell Biol., v.92, N1, £.217-222

107. Renz M., 1979: Heterogeneity of the chromosome fiber. -Nucl. Acids Res., v.6, N8, p.2761-2767

108. Resley M.S. & Eckhardt R.A., 1981: H1 histone variants in Xe-nopus laevis. Devel. Biol., v.84, N1, p.79-87

109. Roark D.E., Geoghegon T.E., Keller G.H., Matter K.V. and En-gle R.L., 1976: Histone interactions in solution and susceptibility to denaturation. Biochem., v.15, N14, p.3019-3025

110. Rodrigues J. deA., Brandt W.F. and Von Holt C., 1979: Plant hist.-2 from weat germ, grupp of H2a histones. Biochem. Biophys. ¿eta, v.578, N1, p.196-206

111. Ruderman J.V., Baglioni C. and Gross P.R., 1974: Histone mRNA and histone synthesis during embryogenesis. Nature, v.247, N5435, p.36-38

112. Ruderman J.V. & Pardue M.L., 1978: A portion of all major classes of histone messenger RNA in amphibian oocytes is po-lyadenylated. J. Biol. Chem., v.253, N6, p.2018-2025

113. Ruiz-Carrillo A. & Palau J., 1973: Histones from embryos of the sea urchin Arbacia lixula. Devel. Biol., v.35, N1, p.115-119

114. Ruiz-Carrillo A., WangkL.J. and Allfrey V.G., 1975: Processing of newly synthesized histone molecules. Science, v.19o, N4210, p.117-128

115. Ruiz-Carrillo A., Wangh L.J. and Allfrey V.G., 1976: Selective synthesis and modification of nuclear proteins during maturation of avian erythroid cells. Arlih. Biochem. Bio-phys., v.174, N1, p.275-290

116. Russanova V., Venkov Ch. and Tsanev R., 1980: A comparison of histone variants in different rat tissues. Cell Differ. v.9, N6, p.339-350

117. Russev G. and Hancock R., 1981: Formation of hybrid nucleo-somes containing new and old histones. Nucl. Acids Res., v.9, N16, p.4129-4137

118. Russev G., Vassilev L. and isanev R., 1980S Histone exchange in chromatin of hydroxyurea-bloked Ehrlich ascites tumour cells. Nature, v.285, N5766, p.584-586

119. Saiga H. & Kinoshita S., 1976: Changes of chromatin structure induced by mucopolysaccharides. Exp. Cell Res., v.102, N1, p.143-153

120. Sanders M. & Hedli Ch.-C., 1980: Changes in histone and higher-order chromatin structure during embryogenesis of drosophila. Eur. J. Biol., v.22, N1, p.90-94

121. Scheer V., 1978: Changes in nucleosome frequency in nucleolar and non-nucleolar chromatin: an electron microscopy study. Cell, v.13, N3, p.535-549- 115

122. Schneider I. & Blumenthal A.B., 1978: Drosophila cell and tissue culture. Gen. Biol. Drosophila, v.2c, part 6,p.264-315

123. Seale S.L., 1978: Nucleosomes associated with newly replicated DNA have an altered conformation. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, v.75, N6, p.2717-2721

124. Seyedin S.M. & Kistler W.S., 1979: levels of chromosomal protein high mobility group 2 parallel the proliferative activity of testis, skeletal muscle, and other organs. -J. Biol. Chem., v.254, N22, p.11264-11271

125. Shaw B.R., Herman T.M., Kovacic R.T., Beandreau G.S. and van Holde K.E., 1976: Analysis of subunit organization inchicken erythrocyte chromatin. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, v. 73, N2, p.505-509

126. Simpson R.T., 1978: Structure of chromatin containing extensively acetylated H3 and H4. Cell, v.13, N4, p.691-699

127. Sobel H.M., Tsai C.C., Gilbert S.G., Jain S.G. and Sakore T.D., 1976: Organization of DNA in chromatin. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, v. 73, N9, p.3068-3072

128. Solner-Webb B. & Felsenfeld G., 1975: A comparison of the digestion of nuclei and chromatin by staphylococcal nuclease Biochem., v.14, N13, p.2915-2920

129. Sperling R. & Bustin M., 1976: Histone dimers: a fundamental unit of histone assembly. Nucl. Acids Res., v.3, N5, p. 1263-1275

130. Stein A., Whitlock J.P. and Bina M., 1979: Acidic polypep-tides cSn assemble both histones and hromatin in vitro at physiological ionic strength. Proc. Natl. Acad. Sci. USA v. 76, N10, p.5000-5004-116

131. Sumner-Smith M. & Phillips J., 1978: RNA-synthesis in isolated Drosophila nuclei. Insect Biochem., v.§, p.55-60

132. Thomas J.O. & Hornberg R.D., 1975: Cleavable cross-links in the analysis of histone-histone assotiations. FEBS Lett., v. 58, N1, p.353-358

133. Thomas J.O. & Thompson R.J., 1977: Variation in chromatin structure in two cell types from the same tissue: A short DNA repeat lenth in cerebral cortex neurons. Cell, v.10, N3,p.633-640

134. Tsanev R. & Sendov Bl., 1971: Possible molecular mechanism for cell differentiation in multicellular organisms. J. Theor. Biol., v.30, N2, p.337-393

135. Urban M., 1978: Changes in histone variant pattern during chicken development and maturation. J. Cell Biol., v.79, N2, part 2, p. 274

136. Urban M.K., Franclin S.G. and Zweidler A., 1979: Isolation and characterization of the histone variants in chicken erythrocytes. Biochem., v.18, N18, p.3952-3960

137. Varshavsky A.J., Bakayev V.V. and Georgiev G.P., 1976: Heterogeneity of chromatin in vitro and location of histone H1. -Nucl. Acids Res., v.3, N2, p.477-492

138. Vendrely R. & Picaud M., 1968: 35ude comparee des histones d'erythrocytes de differentes especes animals. Exp. Cell Res., v.49, N1, p.13-24

139. Whitlock J.P.Jr. & Stein A., 1978: Folding of DNA by histones which lack their NHg-terminal regions. J. Biol. Chem., v.253» N11, p.3857-3861

140. Woodland H.R. & Adamson E.D., 1977: The synthesis and storage of histones during the oogenesis in Xehopus lacvis. Devel. Biol., v.57, N1, p.118-135

141. Woodland H.R., Flunn J.M. and Wyllie A.J., 1979: Utilization of stored mRNA in Xenopus embryos and its replasement by newly synthesized transcripts histone H1 synthesis using interspecial hybrides. Cell, v.18, N1, p.165-171

142. Worcel A. & Benyajati Ch., 1977: Higher order coiling of DNA in chromatin. Cell, v.12, N1, p.83-100

143. Zlatanova J. & Swetly P., 1978: Uncoupled synthesis of histones and DNA during Friend cell differentiation. -Nature, v.276, N5685, p.276-277

144. Methods in cell biology, v.17, p.223-233, New York, Academic Press, G.Stein, J. Stein and Kleinsmith L.J., editors