Изучение физико-химических особенностей потивирусов, поражающих растения семейств Brassicaceae, Commelinaceae и Fabaceae на Дальнем Востоке тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.01.11, кандидат биологических наук Моисеенко, Лариса Игнатьевна

• Моисеенко, Лариса Игнатьевна
• кандидат биологических наук
• 1998

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Моисеенко, Лариса Игнатьевна

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1 Краткая характеристика вирусов потигруппы

1.1. Общие сведения о биологии потивирусов

1.2. Физико-химические особенности потивирусов

Г'

1.2.1. Седиментационные характеристики

1.2.2. Оптические свойства

1.2.3. Свойства белка оболочки

1.2.4. Структура.генома

1.3. Включения

1.4. Характеристика антигенных свойств

1.5. Таксономия

1.6. Дальневосточные потивирус

1.6.1. Вирус мозаики турнепса

1.6.2. Вирус традесканции белоцветковой

1.6.3. Вирус мозаики клевера горного

ГЛАВА 2. Материал и методы

2.1. Материал

2.2. Получение препаратов вирусов

2.2.1. Выделение вируса мозаики турнепса

2.2.2. Выделение вируса традесканции белоцветковой

2.2.3. Выделение вируса мозаики клевера горного

2.2.4. Физические свойства вируса мозаики клевера горного

2.3. Спектрофотометрическая характеристика препаратов

2.4. Электронная микроскопия препаратов потивирусов

2.5. Иммунохимические методы

2.6. Исследование седиментационных свойств вируса традесканции белоцветковой

2.7. Электрофорез белков потивирусов

2.8. Сравнительное пептидное картирование белков

2.9. Выделение РНК потивирусов

2.9.1. Характеристика РНК потивирусов

2.9.2. Фракционирование РНК потивирусов методом электрофореза

2.9.3. Трансляция РНК потивирусов

ГЛАВА 3. Результаты экспериментальных исследований

3.1. Вирус мозаики турнепса

3.1.1. Антигенные свойства

3.2. Изучение деформирующей мозаики редиса

3.3. Вирус традесканции белоцветковой

3.4. Вирус мозаики клевера горного

3.4.1. Биологические и физические свойства

3.4.2. Получение препарата вируса мозаики клевера горного

3.4.3. Антигенные свойства вируса мозаики клевера горного

3.5. Характеристика РНК потивирусов

3.5.1. Трансляция вирусных РНК

ГЛАВА 4. Изучение процесса деградации капсидных белков

потивирусов

4.1. Протеолитическое расщепление капсидных белков

в процессе хранения препаратов вирусов

4.2. Сравнительное пептидное картирование белков потивирусов. ГЛАВА 5. Обсуждение

5.1. Выделение потивирусов

5.2. Спектрофотометрическая характеристика

5.3. Электронная микроскопия

5.4. Седиментационные свойства вируса традесканции

белоцветковой

5.5. Свойства структурных компонентов

5.5.1. Белковые компоненты

5.5.2. Характеристика РНК потивирусов

5.6. Антигенные свойства потивирусов

5.7. Вредоносность изученных вирусов

5.8. Деформирующая мозаика редиса

5.9. Изучение деградации капсидных белков трех дальневосточных потивирусов в процессе очистки и хранения

ВЫВОДЫ

ЛИТЕРАТУРА

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение физико-химических особенностей потивирусов, поражающих растения семейств Brassicaceae, Commelinaceae и Fabaceae на Дальнем Востоке»

ВВЕДЕНИЕ

В связи с организационными изменениями в сельском хозяйстве России (возникновением арендаторства, фермерства) наблюдается падение объема защитных мероприятий, что ведет к увеличению поражаемости возделываемых культур вредителями и болезнями. Вирусы растений считаются второй по вредоносности группой возбудителей болезней после грибов. Детальное изучение патогенов является необходимым условием в разработке профилактики заболеваний и уменьшения их вредоносности.

Потивирусы, самая многочисленная группа на Дальнем Востоке, представлены вирусами, зачастую вызывающими снижение урожайности сельскохозяйственных культур. В дальневосточном регионе основные посевные площади заняты такими культурами, как соя и картофель. Чаще всего соя поражается вирусом мозаики сои. Потеря урожая зерна при этом составляет от 30 до 78 % (Рейфман, Поливанова, 1969). Ущерб, наносимый вирусными заболеваниями картофеля, в среднем по России определяется в 30 % (Атабеков, 1984, Бобкова и др. 1986). На территории Дальнего Востока распространены два потивируса, поражающие эту наиболее важную экономическую культуру, - Y- и А-вирусы картофеля. Наиболее вредоносным считается Y-вирус картофеля, так как он вызывает снижение урожайности от 30 до 80 % (Рейфман и др., 1971; 1973).

Возрастание роли потивирусов характерно не только для Дальнего Востока и России. В настоящее время во всем мире обнаруживаются новые представители группы потивирусов, увеличивается количество их штаммов, и численность группы составляет 182 постоянных и предполагаемых представителя (Edwardson, Christie, 1996). На Дальнем Востоке России идентифицировано 10 представителей группы потивирусов: Y- и А- вирусы картофеля, обыкновенной мозаики фасоли, желтой мозаики фасоли, мозаики гиппеаструма, желтой карликовости лука, мозаики сои, мозаики турнепса, мозаики коммелины и пест-ролепестности тюльпана (Крылов и др., 1987). Сразу отметим, что в настоящей

работе вирус мозаики коммелины мы называем "вирусом традесканции бело-цветковой", так как в дальневосточном регионе он был идентифицирован на растении Tradescantia albiflora Kunth. В 1987 году появилось сообщение еще об одном патогене, обнаруженном в Приморском крае, предположительно отнесенном к группе Potyvirus - вирусе мозаики клевера горного (Волков и др., 1989). Нами изучались три дальневосточных потивируса: мозаики турнепса, традесканции белоцветковой и мозаики клевера горного. Все три вируса впервые обнаружены в регионе. Вирус мозаики турнепса распространен повсеместно. Два последних возбудителя, возможно, впервые идентифицированы на территории России. Физико-химические свойства их не изучались.

Детальное изучение состава, физико-химических свойств, определение точного таксономического положения вирусов по принятой международной системе классификации, а также распространения и способов циркуляции в природе, механизмов их взаимодействия с растениями являются необходимым условием в разработке методов профилактики вирусных заболеваний и снижения их вредоносности. Знание свойств вирусов и их структурных компонентов позволяет разрабатывать и применять высокочувствительные методы диагностики. Это необходимо для предупреждения заболеваний, защиты сельскохозяйственных растений от вирусных инфекций и, в конечном итоге, повышения урожайности.

Предпринятые усилия в попытках увязать, а тем более использовать физико-химические свойства вирусов в борьбе с болезнями немногочисленны. Тем более, что изучение структурных компонентов потивирусов долгое время было затруднено в связи с их низкой концентрацией в инфицированных растениях (от 3 до 10 мг/100 г свежих листьев) и большими потерями в процессе очистки в результате агрегации и фрагментации частиц. С конца 70-х годов, в связи с развитием методов белковой химии и молекулярной биологии, позволяющих работать с небольшими количествами вещества началось интенсивное изучение потивирусов и разработка методов защиты растений от вызываемых ими инфек-

ций. Такими примерами могут служить термо- и химиотерапия, причем наиболее эффективной является тепловая обработка (Мэтьюз, 1973; Гиббс, Харрисон, 1978). Так, при тепловой обработке черенков сахарного тростника происходит прямая инактивация вируса мозаики сахарного тростника - члена группы поти-вирусов. В последние годы большое внимание уделяется и исследованию действия химических препаратов на вирусы. Известны примеры, когда после обработки антивирусными препаратами (диметилсульфоксидом, 2-тиоурацилом, малахитовой зеленью) снижается репродуктивность вирусов. Однако, следует отметить, что пока еще не найден препарат, приводящий к инактивации вирусов в клетке и оздоровлению пораженных растений.

Наиболее успешным примером использования физико-химических свойств вирусов в целях защиты растений являются разработки А.Г. Трубицина. Это люминесцентный экспресс - метод определения зараженности семян сои (Трубицин, 1974), который базируется на явлении возбужденной люминесценции белков при 340-350 нм и полифенолов при 400 нм. Соотношение спектров при заражении меняется в несколько раз (1,5-3) в сравнении со здоровым зерном. На основе метода были разработаны устройство для отбора безвирусных семян сои (Трубицин и др., 1974) и в дальнейшем промышленная установка (Технико-экономическая справка, Ермак, 1997). Производительность установки - 300 кг здоровых семян в час, при этом планируется увеличение урожая сои до 20 %.

Цель наших исследований - изучение физико-химических особенностей трех дальневосточных потивирусов: мозаики турнепса, мозаики клевера горного и вируса, идентифицированного на традесканции белоцветковой. Упомянутые возбудители наносят урон сельскохозяйственнным и декоративным растениям семейств ВгазБюасеае, 17аЬасеае и СоттеИпасеае в связи с чем проведенные исследования являются актуальными с позиций защиты растений. Эти исследования необходимы для выработки стратегии и тактики защиты растений от вирусных заболеваний.

Заключение диссертации по теме «Защита растений», Моисеенко, Лариса Игнатьевна

ВЫВОДЫ

1. Охарактеризованы три патогена-потивируса, идентифицированные на Дальнем Востоке: вирус мозаики турнепса, вирус из традесканции белоцветко-вой и вирус мозаики клевера горного. Вирус мозаики клевера горного - новый представитель группы, изучен впервые. Круг растений-хозяев включает 17 видов, преимущественно из семейства бобовых, патоген передается механически и тлями неперсистентно. Точка термической инактивации - 55-60 °С, период сохранения инфекционности в соке бобов - двое суток, предельное разведение 1:100 - 1:1000.

2. Подтверждено по симптомам, в электронном микроскопе и электрофорезом суммарной РНК, что деформирующая мозаика редиса на Дальнем Востоке России - смешанное заболевание, вызываемое вирусами мозаики турнепса и редиса.

3. Предложены оригинальные методики выделения для каждого вируса, даны спектрофотометрические, электронномикроскопические, а для вируса из традесканции белоцветковой седиментационная, характеристики. Определены модальные размеры частиц возбудителей: 750-780 х 11-12 нм для вируса мозаики турнепса и 750-780 х 12 нм для вируса из традесканции белоцветковой. Размеры частиц вируса мозаики клевера горного, контрастированных ФВК при рН 4,5 составляли 780 х 12 нм, а при рН 7,5 - 825 х 13 нм.

4. Изучены антигенные свойства вирусов мозаики турнепса и мозаики клевера горного. Установлено, что по антигенным взаимоотношениям наиболее близки к вирусу мозаики турнепса А- и У-вирусы картофеля и вирус мозаики гиппеаструма. Для вируса мозаики клевера горного отмечена высокая степень антигенного родства с вирусом желтой мозаики фасоли. Разработаны иммуно-диагностикумы для непрямого варианта иммуноферментного анализа, которые позволяют определять в экстрактах зараженных растений уже 2-5 мкг/мл вируса мозаики турнепса и 1-3 мкт/мл вируса мозаики клевера горного. Метод позволяет диагностировать заражение этими вирусами на ранних стадиях инфекции.

5. Изучены свойства структурных компонентов вирусов. Молекулярные массы капсидных белков составляют 38 и 32 Ю для вируса мозаики турнепса, 34 кО для вируса из традесканции белоцветковой и 36 ГО для вируса мозаики клевера горного. Выделены РНК с молекулярными массами 3,0-3,5 МО. При трансляции РНК трех изученных патогенов в бесклеточных системах обнаружен гетерогенный набор полипептидов. По молекулярной массе определен белок-предшественник (300 ГО), белок цилиндрических включений (70 ГО), белок ядерных включений (50 ГО) и белок оболочки (30-40 ГО).

6. Изучен процесс деградации капсидных белков вирусов мозаики турнепса, мозаики клевера горного и вируса из традесканции белоцветковой при выделении препаратов и их хранении. Методом сравнительного пептидного картирования показано, что дискретные формы полипептидов с молекулярными массами 32 ГО у вируса мозаики турнепса (образуется в процессе выделения) и 32 ГО у вируса из традесканции белоцветковой (образуется при хранении) являются продуктами деструкции исходных капсидных белков. Изменение молекулярной массы белка ведет к увеличению плавучей плотности вируса из традесканции белоцветковой (от 1,316 до 1,340 г/см3). Разрушение капсидного белка замедляется при добавлении ФМСФ в буферные смеси на последних стадиях выделения и при хранении. Процесс протеолиза необходимо учитывать при разработке и использовании диагностикумов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Моисеенко, Лариса Игнатьевна, 1998 год

ЛИТЕРАТУРА

1. Аксельсен Н., Крелль И., Вееке В. Руководство по количественному иммуноэлектрофорезу. //М.: Наука. 1977. С. 200-205.

2. Артюкова Е.В., Пус С.Г., Крылов A.B. Некоторые физико-химические свойства вируса желтой карликовости лука. //Биологические науки. 1990. N 7. С. 27-32.

3. Атабеков И.Г. Молекулярная биология структурного белка фитовирусов. //Иммунитет сельскохозяйственных растений к болезням и вредителям. М.: 1975. С. 3-10.

4. Атабеков И.Г. Иммунодиагностика вирусов растений - резервные миллиарды в сельском хозяйстве. // Биотехнология. М.: Наука. 1984. 234-8. ?

5. A.C. 1205530. Способ выделения здоровых семян сои. Трубицин А.Г. Изобретение с приоритетом от 26.03.74,

6. Бобкова А.Ф., Тальянский М.Э., Атабеков И.Г. Перспективы теоретических и практических исследований по проблеме защиты растений от вирусных болезней. // Пути совершенствования микробиологической борьбы с вредными насекомыми и болезнями растений. М. 1986. С. 144-145.

7. Волков Ю.Г., Костин В.Д., Дьяконов К.П. Вирусное заболевание клевера горного в Приморском крае. // Защита растений на Дальнем Востоке. 1989. Владивосток. С. 7-11.

8. Гиббс А., Харрисон Б. //Основы вирусологии растений. 1978. М.: Мир.

430 с.

9. Гнутова Р.В., Сибирякова И.И., Радавский Ю.Л., Ярвеюольг Л. Зайцева Л.С. Антигенная характеристика капсидных белков штаммов У-вируса картофеля. // Биологические науки. 1991. N 11. С. 35-46.

10. Гнутова Р.В. Серология и иммунохимия вирусов растений. //М.: Наука. 1993. 301 с.

11. Гольдштейн M.И., Гребенщиков Н.И., Куст C.B., Кафтанова A.C., Добров E.H., Атабеков И.Г. Влияние протеолитического расщепления белка оболочки Х-вируса картофеля на его способность к реконструкции РНК и на инфекционность вируса. //Молекулярная, генетика, микробиология и вирусология. 1990. № 2. С. 9-16.

12. Какарека H.H. Сравнительная антигенная характеристика капсидных белков потивирусов (Дальневосточные изоляты) и их иммунодиагностика. //Дис...канд. биол. наук. Владивосток. 1995. 137 с.

13. Крылов A.B., Малевич В.М., Сапоцкий М.В., Гнутова Р.В., Рублева Н.В. Вирус мозаики редиса - новый для СССР комовирус. //Биологические науки. 1981. N3. С. 24-30.

14. Крылов A.B., Ларина Э.И., Артюкова Е.В. Кадастр вирусов растений СССР. //Препринт. Владивосток. 1987. 51 с.

15. Крылов A.B. Вирусы растений Дальнего Востока. // М.: Наука. 1992.

110с.

16. Р. Мэтьюз Вирусы растений. //М.: Мир. 1973. 600 с.

17. Новиков В.К., Николаева О.В., Варицев Ю.А. Гатаулина И.А., Рампян А.Х. Выделение очищенных препаратов вирусов картофеля для приготовления диагностических антивирусных сывороток. //Теория и практика использования иммунитета сельскохозяйственных культур к вирусным болезням: Тез. докл. УШ всесоюзн. совещ. Вильнюс. 1984. С. 250-251.

18. Пинкевич Е.В., Крылов A.B. Выделение и некоторые физиологические свойства вируса мозаики сои. //Биологические науки. 1977. N 11. С. 26-31.

19. Развязкина Г.М., Полякова Г.П., Штейн-Марголина В.А. Упрощенный метод обнаружения в электронном микроскопе частиц из сока больных растений//Вопросы вирусологии. 1968. № 5. С. 633-634.

20. Рейфман В.Г., Поливанова Т.А. Вирусные болезни сои на Дальнем Востоке СССР. // Вирусные болезни сельскохозяйственных растений Дальнего Востока. Владивосток. 1969. Вып. 1. С. 83-104.

21.Рейфман В.Г., Крылов A.B., Степаненко В.И., Костин В. Д. Возбудители вирусных болезней картофеля на Дальнем Востоке // Вирусные болезни сельскохозяйственных растений Дальнего Востока. Владивосток, 1971. Вып. 3. С. 31-49.

22. Рейфман В.Г., Поливанова Т.А., Крылов A.B. Вирусные болезни растений и их возбудители на Дальнем Востоке.// С.-х. биология. 1973. Т. 8, N 4. С. 560-563.

23. Реунов A.B. Цитопатология пораженной вирусами (ВТМ, ХВК) растительной клетки и проблема устойчивости растений. Автореф, дисс...на соискание ученой степени доктора биол. наук. //1989. Киев. 1989. 36 с.

24. Сапоцкий М.В. Выделение F-вируса картофеля и некоторые свойства его структурного белка. // Вирусные болезни растений и меры борьбы с ними. Владивосток. 1980. С. 50-58.

25. Сапоцкий М.В. Дальневосточный изолят вируса мозаики редиса. Идентификация и структура генома. //Автореф. дисс...на соискание ученой степени канд. биол. наук. 1990. М. 24 с.

26. Сибирякова ИИ., Курика A.B., Гнутова Р.В., Павленко А.Ф., Оводов Ю.С., Крылов A.B. Исследование иммуноферментными методами антигенного родства белого клевера, Х-вируса картофеля и аукуба мозаики картофеля. //Биологические науки. 1987. N 2. С. 20-26.

27. Станюлис Ю.П., Макутенайте М.К., Зитикайте И.С. Некоторые свойства изолятов вируса огуречной мозаики (ВОМ), выделенных из бобовых и декоративных растений в Литве. //Штаммы вирусов растений. Владивосток. 1977. С. 198-203.

28. Технико-экономическая справка по проекту разработки и производства промышленных установок УРС-1 для отделения семян сои, зараженных соевой мозаикой. //Научно-техническая фирма "Экмос" (ECMOS Со Ltd); Руководитель проекта Ермак В.Д. Владивосток. 1997. Рукопись.

29. Толкач В.Ф., Чуян А.Х., Крылов А.В. Характеристика вируса из группы Potyvirus, выделенного из Tradescantia albiflora. //Бюллетень Главного ботанического сада. 1990. Вып. 157. С. 76-80.

30. Толкач В.Ф. Идентификация и биологическая характеристика поти- и тобамовирусов (дальневосточные изоляты). //Автореферат дисс...на соискание степени кандидата биологических наук. 1995. Владивосток. 24 с.

31. Шоймоши Ф. Вирусология . //Кирай 3., Клемент 3., Шоймоши Ф., Вереш И. Методы фитопатологии. М.: Колос. 1974. С. 6-80.

32. Allison R.F., Dougherty W.G., Parks T.D., Willis L., Jonston R.E., Kelly M.E., Armstrong F.B. Biochemick analysis of the capsid protein gene and capsid protein of tobacco etch virus: N-terminal amino acids are located on tne virions surface. //Virology. 1985. V. 147. P. 309-316.

33. Allison R., Johnston R.E., Dougherty W.G. The nucleotide se uence of the coding region of tobacco etch vims genomic RNA: Evidence for the synthesis of a single polyprotem. //Virology. 1986. V. 154. P. 9-20.

34. Artyukova E.V., Krylov A.V. Physical and chemical properties of potato aucuba mosaic vims and its coat protein. //Phytopathology Z. 1983. Bd. 107, N 2. P. 263-275.

35. Baker C.F., Zetter F.W. Viruses infecting wild and cultivated species of the Commelinaceae. //Plant Disease. 1988. V. 72, N 6. P. 513-518.

36. Bazan J.F., Fletterick R.J. Structural and catalytic models of trypsin-like viral proteases. Semliki//Virology. 1990. V. 1. P. 311-322.

37. Berger P.H., Piron T.R. The effect of helper component on the uptake and localization of potyviruses in Muzus persicae. //Virology. 1986. V.153. P. 256-261.

38. Bloomer A.C. Champness J.N. Brigogne G., Staden R., Klug A. Protein disc of tobacco mosaic vims at 2-8 A resolution showing the interactions with and between subumts. //Nature. London. 1978. V. 276. P. 362-368.

39. Bokx J.A., Huttinga H. Potato virus Y. // C.M.I/A.A.B. Description of plant viruses. 1981. N242. 4 p.

40. Bos L. The identification of three new viruses isolated from Wisteria and Pisum in the Netherlands, and the problems of variation within the potato virus Y-group. //Neth. J. Plant Pathology. 1970. V. 76. P. 8-46.

41. Carrington J.C., Dougherty W.G. Small nuclear inclusion protein encoded by a plant potyvirus genom is a protease. //J. Virology. 1987. V. 61. P. 2540-2548.

42. Carrington J.C., Cary S.M., Parks T.D., Dougherty W.G. A second proteinase encoded by a plant potyviral genome. //EMBO J. 1989. V. 8. P. 365-370.

43. Cech M., Mokra V., Branislova H. Stabilisation of virus particles from the mosaic diseased Freasia by phenylmethylsulfonyl fluoride during purification and storage. //Biol. Plant. 1977. V. 19. N 1. P. 65-70.

44. Cleveland D.W., Stuart G., Fischer ML, Kirschner W., Laemmli U.K. Peptide mapping by limited proteolysis in sodium dodecyl sulfate and analysis by gel electrophoresis. //J. Biol.Chemistry. 1977. V. 252, N3. P.l 102-1106.

45. Dekker E.L., Derks A.F.M., Asjes C.J., Lemmers M.E.C., Bol J.F., Langeveld S.A. Characterization of potyviruses from tulip and lily wich cause flowerbreaking. //J. Gen. Virology. 1993. V. 74. P. 881-887.

46. Domier L.L., Franklin K.M., Shahabuddin M., Helmann G.M., Overmeyer J.H., Hiremath S.T., Slaw M.F.E., Lomonossoff G.P., Shaw J.G., Rhoads K.E. The nucleotide se uence of tobacco vein mottling virus RNA. //Nucleic Acids Research. 1986. V. 14. P. 5417-5430.

47. Dougherty W.G., Hiebert E. Translation of potyvirus RNA in a rabbit reticulocyte lysate: reaction conditions and identification of capsid protein as one of the products of in vitro translation of tobacco etch and pepper motle viral RNA. //Virology. 1980. V. 101. P. 466-474.

48. Dougherty W.G., Carrington J.C. Expression and functional of potiviral gene products. //Annual Review of Phytopathology. 1988. V. 26. P. 123-142.

49. Dougherty W.G. Parks T.D. Post-translational processing of the tobacco etch virus 49 kDa small nuclear inclusion polyprotein identication if an internal

cleavage site and delimitation of VPg and proteinase domains. //Virology. 1991. V. 183. P. 449-456.

50. Dougherty W.G., Semler B.L. Expression of virus-encoded proteinase: functional and structural similarities with cellular enzymes. //Micro. Reviews. 1993. V. 57. P. 781-822.

51. Dougherty W.G., Willis L., Jonstin R.E. Topografic amalisis of tobacco etch vims capsid protein epitopes. //Virology. 1985. V. 144. P. 66-72.

52. Edwardson J.R., Christie R.G. Cylindrical inclussions. //Monogrraph. Series. Florida Agricultural Experiment Station. 1996. 80 p.

53. Fenner F. Classification and nomenclature of vimses (second report of the international committee on taxonomy of vimses //Intervirology. 1976. V. 7. P. 1-115.

54. Francki R.I.B. Current problems in plant vims taxonomy. //In Critical appraisal of viral taxonomy. Edited by R.E.F. Matthews. Boca Raton: CRC Press. 1983. P. 63-104.

55. Francki R.I.B., Milne R.G., Hatta T. Atlas of Plant Vimses. //Boca Ration: CRC Press. 1985. V.I and II.

56. Garret R.G. Comfirmation of the presence of clover yellow vein vims in Victoria. //Abstracts of Papers. Fourth International Congress of Plant Pathology. Melbourne, Australia. 1983. P. 115.

57. Gibbs A.J. Tobamovims group. //CMI/AAD Descriptions of plant vimses. 1977. N184. 4 p.

58.Gill C.C. Purification of Oat Necrotic Mottle vims with silver nitrate as clarifying agent. //J. Gen. Virology. 1971. V. 12. P. 259-270.

59. Gough K.H., Shukla D.D. Coat protein of potyvims I. Comparison of the four australia strain of sugarcane mosaic vims. //Virology. 1981. V. III. P. 455-462.

60. Gough K.H., Azad A.A., Hanna P.J., Shukla D.D. Nucleotide sequence of the capsid and nuclear inclusion protein gtnts from the Jonson grass strain of Sugarcan mosaic vims RNA. //J. Gen. Virology. 1987. V. 68. P. 297-304.

61. Had Q., Strivastava K.M., Raizada R.K., Singh B.P., Jam R.K., Mishra A., Shukla D.D. Biological, serological and coat protein properties of a strain of turnip mosaic vims causing a mosaic disease of Brassica campestris and B-juncea in India. //Phytopathology Z. 1994. V. 140, N 1. P. 55-64.

62. Hamilton R.I., Edwardson I.R., Francki R.I.F., Hsu H.T., Hull R., Koenig R., Milne R. Gude lines for the identification and characterization of plant viruses. //J. Gen.l Viroology. 1981. V. 54. P.223-241.

63. Harrison B.D. Usefulness and limitations of the species concept for plant viruses. //Intervicology. 1985. V. 25. P. 71-78.

64. Hiebert E., McDonald J.G. Capsid protein heterogeneity in turnip mosaic virus. //Virology. 1976. V. 70. P. 144-150.

65. Hiebert E., Tremain J.H., Ronald W.P. The effect of limited proteolysis out the amino acid composition of five potyviruses and on the serological reaction and peptide maps of the tobacco etch virus capsid protein. //Phytopathology. 1984. V. 74. P. 411-416.

66. Hisachi J., Wakimoto S. An improved method for purification of soybean mosaic virus. //Ann. Phytopath. Soc. Japan. 1985. V. 54. N 4. P. 465-474.

67. Hollings m(..UM., Investigation of chrysanthemum viruses. I. Aspermy flc distotion //Ann. Appl. Biology. 1955. V. 43, N 1. P. 86-102.

68. Hollings M., Brunt A. A. Potyvirus group. //CMI/AAB Descriptions of Plant Viruses. 1981. N245. 4 p.

69. Hollings M., Brunt A. A. Potyviruses. In Handbook of Plant Virus Infections: Comparative Diagnosis. //Edited by E.Kurstak. Amsterdam: Elsevier/North-Holland. 1981 (a). P. 731-807.

70. Johansen E., Rasmussen O.F., Heide M., Borkhardt B. The complete nucleotide se uence of pea seed-borne mosaic virus RNA. //J. Gen. Virology. 1991. V. 72. P. 2625-2632.

71. Koenig R., Lesemann D.E. Tymovirus group. //CMI/AAB Description of plant viruses. 1979. N 214. 4 p.

72.Kobyko T., May z. Identificacia virusa mozaiki rzepy (Turnip mosaic vims) wyizolowanego z bmkwi (Brassica napabrassica L.) //Acta agr. Tt silv. Ser. Agr. 1989. №28. P. 19-23.

73. Koenig R., Framcksen H., Stegeman H. Comparison of tymovims capsid proteins in SDS-poliyacrilamid porosity gradient gels after partial cleavage with different proteases. //Phytopathology Z. 1981. Bd. 100, № 4. P. 347-355.

74. Kong L.J., Fang R.X., Chen Z.H., Mang K.Q. Molecular cloning and nucleotide sequence of coat protein gene of tulip mosaic vims. //Nucleic Acid Reseach. 1990. V. 18. 5555.

75. Laemmli U.K. Cleavage of structural protein during the assembly of the headof bacteriophage T4. //Nature. 1970. V. 27, N 5259, P.680-685.

76. Lain S., Reichmann J.L., Garsia J.A. The complete nucleotide se uence of plum pox potyvirus RNA. //Virus Research. 1989. V. 13. P. 157- 172.

77. Liza V., Lovisolo O. Biological and serological characterization of the alliaria strain of turnip mozaic vims. //Phytopath.. Z. 1976. Bd. 86, № 1. P. 90-93.

78. Lockliart B.E., Betzold J.A., Pfleger F.L. Characterization of a potyvirus causing a leaf distortion disease of Tradescantia and Zebrina spp. //Phytopathology. 1981. V. 81, N6. P. 602-604.

79. Maiss E. Timpe U., Brisske A., Jelkmann W., Casper R., Himmler G., Matanovich D., Katinger H.W.D. The complete nucleotide se uence of plum pox vims RNA. //J. Gen. Virology. 1989. V. 70. P. 513-524.

80.. Matthews R.I.F. Classification and nomenclature of vimses. 4-th Rep. Intern. Comm. Taxon. Vimses. //Intervirology. 1982. V. 17, N 1-3. P. 1-179.

81. Matthews R.E.F., "Plant Virology" (3rd ed.) //Academic Presss, San Diego.

1991.

82. Matthews R.I.F., Smith W.W., Ferre R.A., Condon B., Budahazi G., Sisson W., Villafranca J.E., Janson C.A., McElroy H.E., Gribskov C.L., Worland A. Structure of human rhino vims 3C protease reveals a trypsin like polypeptide fold,

RNA-binding site, and means for cleaving precursor polyprotein. //Cell. 1994. V. 77. P. 761-771.

83. Mayo M.A., Robinson D.J., Perombelon M.C. Some properties of bacterial proteases of bacterial protease with specific effect on the protein in tobacco rattle virus particles. //J. Gen. Microbiology. 1974. V. 85. P. 121-129.

84. McLaughlin M.R., Hill J.H., Benner H.I. Serological relationships among potyviruses: maize dwarf mosaic virus, tobacco etch virus and turnip mosaic virus //Phytopath. 1975. V. 65, № 3. P 334-335.

85. Migliory A., Lastra R. Characterization dun viruses de Commelina diffusa (SDV). //Ann. Phytopathology. 1980. V. 12, N 2. P. 145-151.

86. Moghal S.M., Francki R.I.B. Towards a system for the identification and classification of potyviruses. I Serology and amino asid composition of six distinct viruses. //Virology. 1976. V. 73. P. 350-362.

87. Morales F.I., Zettler F.W. Characterization and electron microscopy of a potivyrus infecting Commelina diffusa. //Phytopathology. 1977. V. 67. P. 839-843.

88. Nakashima H, Saco N. Hori K. Nucleotide sequences of helper component -proteinase genes of aphid transmissible and non-transmissible isolates of turnip mosaic virus. //Archives of Virology. 1993. V. 131. Iss. 1-2. P. 17-27.

89. Nicolas O., Laliberte J.F., The use of PCR for the cloning of large cDNC fragments of turnip mosaic potyviras. //J. Virological Methods. 1991. V. 32. P. 57-66.

90. Nicolas O., Laliberte J.F. The complete nucleotide sequence of turnip mosaic potyviras RNA. //J. General Virology. 1992. V. 73. P. 2785-2793.

91. Papa G. The coat protein of Alliaria strain of turnip mosaic virus: molecular weight and degradation products formed during purification and upon storage. //J. Gen. Virology. 1975. V. 29. P. 121-126.

92. Parks T.D., Howard E.D., Wolpert T.I., Arp D.J., Dougherty W.D. Expression and purification of a recombinant tobacco etch virus Nla proteinase: Biohcemical analyses of the full-lenght and a naturally occurring truncated proteinase form. //Virology. 1995. V. 210. P. 194-201.

93. Pelham H.R.B., Jackson R.J. An efficient mRNA-dependent translation system from reticulocyte lysates. //Bur.J. Biocam. 1976. V. 67, N 1. P. 247-256.

94. Purcifull D., Hiebert E. Tobacco etch virus. //CMI/AAB, Deacription of Plant Viruses. 1982. N 258. 4 p.

95. Reichmann J.L., Lain S., Garcia J.A. Highlights and prospects of potyvirus molecular biology. //J. Gen. Virology. 1992. V. 73. P. 1-16.

96. Rickwood D., Hames B.D., eds. Gel electrophoresis of nucleic acid: A practical approach, published by IRL Press Ltd., Oxford and Washington, D.C. 1982.

97. Robaglia C., Durand-Tardif M., Tranche T.M., Bouddazin G., Astier-Manifacier S., Casse-Delbar T.F. Nucleotide sequence of potato virus Y (N strain) genomic RNA. //J. Gen. Virology. 1989, V. 70. P. 935-947.

98. Rickwood D., eds., Centrifugation: A practical approach, 2nd Edition, published by IRL Press, Ltd., Oxford and Washington, D.C. 1984.

99. ShuklaD.D., Inglis A.S., McKern N.M., Gough K.H. Coat protein of potyviruses. 2. Amino acid sequence of coat protein of potato virus Y. //Virology. 1986. V. 152. P. 118-125.

100. Shukla D.D., Gough K.H., Ward C.W. Coat protein of potyviruses. 3. Comparison of amino acid sequences of the coat proteins of four Australian strains of sugarcane mosaic virus. //Archives of Virology. 1987. V. 97. P. 59-74.

101. Shukla D.D., Strike P.M., Tracy S.L., Gough K.H., Ward C.W. The N and C termini of the coat proteins of potyviruses are surface - located and the N tenninus contains the major vims-specific epitopes. //Virology. 1988. V. 69. P. 1497-1508.

102. Shukla D.D., Ward C.W. Amino acid sequence homology of coat proteins as a basis for identification and classification of the potyvirus group. //J. Gen. Virology. 1988. V. 69. P. 2703-2710.

103. Shukla D.D., Jilka I., Tosic M., Ford R.E. A novel approach to the serology of potyviruses involving affinity purified polyclonal antibodies directed towards virus specific N-termini of coat proteins. //J. Gen. Virology. 1989. V. 70. P. 13-23.

104. Shattuck V.I., Brolley B., Stobbs L.W., Lougheed E.C. The effect of turnip mosaic virus infection on the mineral content and storability of field - groun rutabaga. //Communication in Soil Science and Plant Analysis. 1989. V. 20. P. 581-595.

105. Tochihara H. Radish enation mosaic virus. //Ann. Phytopahol. Soc. (Japan). 1968. V. 34. P. 129.

106. Tracy S.L., Frencel M.J., Gough K.H., Hanna P.J., Shukla D.D. Btan yellow mosaic, clover yellow vein and pea pea mosaic are distinct potyviruses -evidence from coat protein gene-sequence and molecular hybridization involving the 3' noncoding regions. //Archives of Virology. 1992. V. 122, Iss. 3-4. P. 249-261.

107. Turpen T. Molecular cloning of a potato virus Y genom: nucleotide sequence homology in non-coding regions of potyviruses. //J. Gen. Virology. 1989. V. 70. P. 1951-1960.

108. Verchot J., Koonin E.V., Carrington J.C. The 35 kDa protein functions as a third virus-encoded proteinase. //Virology. 1991. V. 185. P. 527-535.

109. Verchot J., Carrington J.C. Evidence that the potyyirus PI proteinase functions in trans as a accessory factor for genome amplification. //J. Gen. Virology. 1995. V. 69. P. 3663-3674.

110. Ward C.W., Shukla D.D. Taxonomy of potyviruses: current problems and sove solutions. //Intervirology. 1991. V. 32. P. 269-296.

111. Weber K., Osborn M. The reability of moleculfr weiht determination on by dodecyl sulfate-acrilamid gel electrophoresis. //J. Biol. Chemistry. 1969. V. 244, № 16. P.4406-4412.

112. Uyeda I., Takahashi T., Shikata E. Relatedness of the nucleotide sequence of the 3-terminal region of clover yellow vein potyvirus RNA to bean yellow mosaic potyvirus RNA. //Intervirology. 1994. V. 32 Iss. 4. P. 234-245.