Изучение антипатогенной активности гриба Fusarium sambucinum AF-967 тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.01.11, кандидат биологических наук Дорофеев, Дмитрий Александрович

• Дорофеев, Дмитрий Александрович
• кандидат биологических наук
• 2001

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Дорофеев, Дмитрий Александрович

Введение.

Глава I. Обзор литературы.

1.1. Грибы рода Fusarium, распространение и вредоносность.

1.2. Биологическая защита растений.

1.2.1. Бактериальные средства защиты растений.

1.2.2. Использование грибов в защите растений.

1.2.3. Использование непатогенных штаммов грибов рода Fusarium.

Глава II. Объекты и методы исследований.

2.1. Объект исследований.

2.2. Культивирование гриба.

2.3. Определение прорастаемости конидий Fusarium sambucinum AF-967.

2.4. Хранение конидий F. sambucinum AF-967 на инертных субстратах.

2.5. Получение экссудатов и метанольного экстракта из прорастающих спор F. sambucinum AF

2.6. Получение биомассы и фильтрата культуральной жидкости

F. sambucinum AF-967.

2.7. Экстракция биомассы F. sambucinum AF-967 метанолом.

2.8. Экстракция лиофилизированного мицелия

F. sambucinum AF-967 метанолом.

2.9. Выделение фракции высокомолекулярных метаболитов мицелия F. sambucinum AF

2.10. Получение метанольно-хлороформного экстракта лиофилизированного мицелия F. sambucinum AF-967.

2.11. Получение этанольного экстракта мицелия F. sambucinum AF

2.12. Вегетационные опыты.

2.13. Определение биологической активности экстрактов

F. sambucinum AF-967 in vitro.

2.14. Получение каллусных и суспензионных культур клеток пшеницы

2.15. Оценка защитного действия лиофилизированной фракции высокомолекулярных метаболитов мицелия F. sambucinum AF-967 in vitro.

2.16. Метод определения эргостерола в растительных тканях.

Глава III. Изучение трофических потребностей гриба

Fusarium sambucinum AF

3.1. Изучение возможности хранения конидий гриба

F. sambucinum AF-967 на инертных субстратах.

Глава IV. Изучение антипатогенной активности метаболитов

Fusarium sambucinum AF

4.1. Разработка метода проращивания конидий F. sambucinum AFв жидкой среде.

4.2. Оценка активности метаболитов F. sambucinum AFна стадии прорастания спор.

4.3. Изучение антипатогенной активности метаболитов

F. sambucinum AF-967 на стадии активного роста биомассы.

4.3.1. Оценка антипатогенной активности метанольного экстракта мицелия F. sambucinum AF

4.3.2. Оценка антипатогенной активности высокомолекулярных метаболитов мицелия F. sambucinum AF

4.3.3. Оценка антипатогенной активности метанольнохлороформного экстракта мицелия F. sambucinum AF

4.3.4. Оценка антипатогенной активности этанольного экстракта мицелия F. sambucinum AF

4.3.5. Оценка антипатогенной активности фильтратов культуральной жидкости F. sambucinum AF

Глава V. Исследование высокомолекулярной фракции метаболитов мицелия Fusarium sambucinum AF

5.1. Исследование активности высокомолекулярных метаболитов in vitro.

5.2. Изучение биологической активности фракции высокомолекулярных метаболитов в суспензионной культуре клеток пшеницы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение антипатогенной активности гриба Fusarium sambucinum AF-967»

Развитие аграрного сектора в мировой практике в последние десятилетия обеспечивается жесткой концентрацией и специализацией сельскохозяйственного производства, возделыванием сортов интенсивного типа и активным использованием мощных техногенных факторов - удобрений, техники, фитосанитарных препаратов. В практике защиты растений предпочтение имеют химические методы борьбы с вредными организмами. Однако вследствие широкого применения пестицидов может сложиться неблагоприятная экологическая ситуация - накопление остаточных количеств, загрязнение грунтовых вод, неблагоприятное воздействие на полезные организмы, распространение резистентных форм возбудителей болезней, вредителей, сорняков и т.д. Кроме того, интенсификация возделывания сельскохозяйственных культур привела к усилению процессов разрушения природных механизмов саморегуляции агроэкосистем и способствовала появлению новых, более агрессивных биотипов вредных организмов.

Проблемы охраны окружающей среды стали стержневым вопросом, определяющим направленность исследований по защите растений не только в нашей стране, но и за рубежом. В настоящее время четко проявляются две основные тенденции в построении систем земледелия, предусматривающие либо высокоинтенсивные или индустриальные технологии с применением широкого спектра химических средств, либо альтернативные системы защиты растений, которые базируются на использовании биологических агентов и ограниченном применении химических средств.

Биологические методы борьбы с рядом опасных вредителей и болезней растений достаточно высокоэффективны, относительно безвредны для человека, сельскохозяйственных животных и окружающей среды. Их основу составляет использование в качестве биопрепаратов разнообразных организмов или продуктов их жизнедеятельности. Значительное место в ряду биологических средств защиты растений принадлежит микроскопическим грибам. Наиболее широко применяются препараты на основе спор грибов-антагонистов, хотя при неблагоприятных для их развития погодных условиях их активность снижается. В связи с этим для повышения эффективности обработок предпочтительнее использовать активные метаболиты грибов, так как их биологическая активность не зависит от указанных обстоятельств, что делает их более удобными для применения в практике защиты растений.

В 1995 году на кафедре фитопатологии МСХА при участии сотрудников кафедры микробиологии из ризосферы яровой пшеницы был выделен штамм Fusarium sambucinum AF-967, не проявивший патогенных свойств на зерновых культурах (Афанди, 1995). Этот гриб in vitro проявлял антагонистическую активность в отношении некоторых возбудителей корневых гнилей (Афанди и др., 1995; Алзума, 1997). С 1995 г. на кафедре фитопатологии МСХА проводилось изучение биологических особенностей гриба F. sambucinum AF-967 и возможностей его применения для защиты зерновых и овощных культур от корневых гнилей. Эффективность применения спор гриба-антагониста была показана в полевых и лабораторных опытах на пшенице, ячмене, люпине, огурце, кормовой свекле и других культурах (Шкаликов, 1995; Зубейру, 1997; Моисеева, 1999; Хашем, 2000). Однако механизм антипатогенного действия этого штамма остался невыясненным.

Цель и задачи исследований. Цель исследований состояла в изучении антипатогенного действия фракций метаболитов гриба Fusarium sambucinum AF-967 по отношению к возбудителю фузариозной корневой гнили Fusarium culmorum, а также в установлении характера действия метаболитов на патоген.

В рамках общей проблемы решали следующие задачи:

- Изучение трофических потребностей F. sambucinum AF-967, включающее определение оптимальных источников азота и углерода и их соотношение.

-Разработка питательных сред для наработки биомассы и спор F. sambucinum AF-967 в глубинной культуре.

- Изучение возможности сушки и длительного хранения конидий F. sambucinum AF-967.

- Выбор метода экстракции антипатогенных метаболитов из мицелия F. sambucinum AF-967.

- Оценка антипатогенной активности фракций метаболитов F. sambucinum AF-967 на различных стадиях его онтогенеза - от прорастания спор до лизиса мицелия.

- Изучение возможного механизма воздействия активной фракции метаболитов F. sambucinum AF-967 на патоген и клетки растения-хозяина в условиях суспензионной культуры.

Научная новизна. Впервые установлено, что непатогенный штамм F. sambucinum AF-967 на разных стадиях своего развития продуцирует вещества индуцирующие защитные реакции проростков пшеницы по отношению к F. culmorum. Исследовано их действие in vitro на другие патогены, входящие в комплекс возбудителей корневых гнилей. Установлено их сенсибилизирующее действие на клетки различных по устойчивости к патогену сортов пшеницы в суспензионной культуре.

Практическая ценность работы. Разработаны условия глубинного культивирования F. sambucinum AF-967 и метод наиболее полного извлечения из биомассы активных метаболитов, определены их эффективные концентрации. Оптимизированы условия хранения конидий F. sambucinum AF-967 в течение длительного времени без потери жизнеспособности, что расширяет возможности заблаговременной наработки и применения спор гриба. Оценена возможность применения метаболитов гриба для повышения эффективности действия биопрепаратов на основе F. sambucinum AF-967.

Апробация. Основные положения диссертации были доложены на конференции, посвященной 40-летию ВНИИФ в 1999 г., а также на конференции молодых ученых в ТСХА в 2000 г.

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 4 статьи.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части (5 глав), выводов и списка литературы.

Заключение диссертации по теме «Защита растений», Дорофеев, Дмитрий Александрович

ВЫВОДЫ

1. Изучены потребности Fusarium sambucinum AF-967 в источниках азота и углерода для роста и спороношения в глубинной культуре. Максимальный рост биомассы обеспечивало сочетание сахарозы с органическими источниками азота (пептон, дрожжевой автолизат и др.). Для спороношения оптимальным было сочетание в среде соевой муки с мальтозой, фруктозой и маннитом.

2. Разработаны ферментационные среды для массового получения мицелия (на основе мелассы и пептона) и спор (с неохмелённым пивным суслом и соевой мукой) гриба Fusarium sambucinum AF-967. С этими средами хорошо сочеталась среда Райстрика, используемая в качестве посевной, так как она обеспечивала быстрое получение необходимых количеств жидкого инокулюма.

3. Определена динамика роста и спороношения Fusarium sambucinum AF-967 на подобранных средах. На мелассо-пептонной среде максимум биомассы образовывался на 2-е сутки культивирования, после чего начинался ее лизис. Спороношение на этой среде имело два пика: на 2-е и более высокий на 14-е сутки культивирования. На сусло-соевой среде максимумы роста и спороношения соответствовали 4-м суткам культивирования.

4. Показана возможность длительного сохранения жизнеспособности конидий Fusarium sambucinum AF-967 при + 4-5°С на перлите. Мелассо-пептонная среда способствовала более длительному сохранению спор без снижения прорастаемости.

5. Установлено, что антагонистическое действие гриба Fusarium sambucinum AF-967 основано не только на конкурентных отношениях антагониста и патогена, но и на биосинтезе метаболитов с антипатогенной активностью.

6. Метаболиты с антипатогенной активностью обнаружены на всех этапах онтогенеза Fusarium sambucinum AF-967 от прорастания спор до лизиса мицелия. Они содержались в молодом, интенсивно растущем мицелии и в образующихся на нем конидиях. В окружающую среду активные метаболиты выделялись в момент прорастания конидий и в период разрушения (лизиса) мицелия.

7. Антипатогенные метаболиты Fusarium sambucinum AF-967 наиболее полно извлекались из молодого мицелия экстракцией 1М КС1 в 0,05М фосфатном буфере (рН 6,0). Действующее начало осаждалось при насыщении экстракта сульфатом аммония и сохраняло активность после лиофильной сушки.

8. В вегетационных опытах предпосевная обработка семян пшеницы фракцией высокомолекулярных метаболитов показывала более высокую биологическую эффективность, чем при обработке семян спорами Fusarium sambucinum AF-967.

9. Фракция высокомолекулярных метаболитов in vitro ограничивала рост колоний Bipolaris sorokiniana и некоторых патогенных фузариев, в концентрациях, на порядок превышающих действующие в вегетационных опытах.

10. Установлено, что в суспензионной культуре клеток пшеницы антипатогенное действие метаболитов Fusarium sambucinum AF-967 обнаруживалось только при предварительном их внесении в суспензию клеток, с последующей сменой питательной среды перед инокуляцией патогеном. При одновременном внесении инокулюма патогена и метаболитов в суспензионную культуру, последние не угнетали рост патогена и не защищали клетки пшеницы. По-видимому, антипатогенные метаболиты Fusarium sambucinum AF-967 могли лишь косвенным путем воздействовать на патоген, индуцируя защитные реакции растения.

11. В условиях суспензионной культуры, индукция защитных реакций метаболитами Fusarium sambucinum AF-967 была более высокой у клеток сортов пшеницы с относительной и средней устойчивостью к фузариозам, чем у клеток восприимчивого сорта.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Предыдущие исследования гриба Fusarium sambucinum AF-967 позволяют заключить, что гриб в почве может проявлять антагонистическую активность посредством конкуренции с патогенами за субстрат и место обитания, так как обладает достаточно высокой скоростью роста и интенсивным спороношением (Афанди и др., 1995; Алзума и др., 1997; Мунир и Алзума, 1997). Результаты наших исследований по изучению трофических потребностей гриба показали, что рост и спороношение антагониста ограничены в отсутствие пептидных субстратов. Это, по-видимому, объясняет повышенную активность антагониста при использовании его со стромом (Афанди и др., 1995; Шкаликов и др., 1995; Алзума и др., 1997; Моисеева, 1999).

Проведенное нами исследование антипатогенной активности фильтратов культуральной жидкости и экстрактов из конидий и мицелия на всех этапах онтогенеза Fusarium sambucinum AF-967, от прорастания конидий до лизиса мицелия, выявило способность гриба продуцировать вещества, подавляющие в вегетационных опытах развитие Fusarium culmorum, одного из наиболее вредоносных возбудителей корневых гнилей зерновых культур. Было установлено, что эти вещества содержатся как в конидиях, так и в молодом, активно растущем мицелии и выделяются в окружающую среду при прорастании спор гриба и разрушении (лизисе) его мицелия. Следовательно, при предпосевной обработке семян спорами F. sambucinum AF-967, метаболиты конидий могут проникать в зерно и при его прорастании, когда растение наиболее доступно для инфекции, обеспечивая защитный эффект. В период вегетации это действие может быть усилено за счет поступления метаболитов из разрушающегося мицелия и молодых прорастающих спор.

Однако эффективность препаратов на основе живых организмов в значительной степени зависит от условий внешней среды: наличия питательного субстрата, влажности, температуры, состава местной микрофлоры. Даже в том случае, когда механизмы защитного действия биоагента включают биосинтез активных метаболитов, эффект от его применения может быть нестабильным, поскольку биосинтез в этом случае протекает в неконтролируемых условиях. Использование биопрепаратов на основе заранее наработанных продуктов жизнедеятельности микроорганизмов позволяет стабилизировать эффективность их действия.

Биосинтез непатогенными фузариями метаболитов, снижающих пораженность растений различными заболеваниями, довольно широко распространен в природе, а некоторые из этих веществ обладают антибиотической активностью (Logrieco et al., 1994; Nihei et al., 1998). Другие штаммы продуцировали метаболиты, которые не оказывали прямого токсического воздействия на патоген in vitro, но индуцировали защитные реакции растений (Oyarzum et al., 1994; Gullino, Migheli et al., 1995; Larkin and Fravel, 1996; Blok et al., 1997).

Химическая природа индукторов устойчивости, продуцируемых непатогенными штаммами Fusarium spp., а также характер защитных реакций растений, вызываемых ими, изучены пока очень слабо.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Дорофеев, Дмитрий Александрович, 2001 год

1. Алзума М. 3., Шильникова В. К., Шкаликов В. А. Антагонистические свойства Fusarium sp. (AF-967) // Изв. ТСХА. 1997. - № 2. - С. 109-113.

2. Андресон Р. К., Бойко Т. Ф., Галимзянова Н. Ф., Мелентьев А. И. Микробиологические процессы в ризосфере яровой пшеницы при обработке семян штаммами бацилл антагонистов почвенных фитопатогенов // С.-х. биол. Серия Биол. раст. - 1994. - № 5. - С. 91-95.

3. Афанди М. А., Шкаликов В. А., Шильникова В. К., Сизова Т. П. Гриб-антагонист в ризосфере яровой пшеницы // Защита и карантин растений. -1995. -№3.- С. 19.

4. Ашмарина Л. Ф., Дашкевич В. С., Дашкевич Н. Ю., Рудакова В. В., Шушаро А. И. Испытывается новый биопрепарат // Защита и карантин растений. -2000.- №6. -С. 41.

5. Бегунов И. И., Ярошенко В. А., Вяткина Г. Г. Оценка эффективности биопрепаратов против септориоза озимой пшеницы // Экологиз. с.-х. пр-ва Сев. -Кавказ, региона: Тез. докладов участников семин. -совещ., Анапа, 2629 июля, 1995. Москва. - 1995. - С. 42-43.

6. Беккер 3. Э. Физиология и биохимия грибов. М.: МГУ, 1988. - 230 с.

7. Бенкен А. А., Магила А. С., Хацкевич Л.К., Гришечкина С. Д. Корневая гниль зерновых культур в Литве в севооборотах с разным уровнем зернового насыщения // Микология и фитопатология. 1992. - Т. 26. - Вып. 5. - С. 388-393.

8. Бенкен А. А., Хацкевич Л. К. Оценка устойчивости растений к почвенным фитопатогенам // Микология и фитопатология. 1980. - Т. 14. - Вып. 6. - С. 531-538.

9. Бенкен А. А., Хацкевич Л. К., Нестеров А. Н. Проблема корневой гнили злаков // Микология и фитопатология. 1987. - Т. 21. - Вып. 6. - С. 566-573.

10. Билай В. И. Методы экспериментальной микологии. Киев: Наукова Думка, 1973.-242 с.

11. Билай В. И. Микроскопические грибы продуценты антибиотиков. - Киев: Изд-во Академии Наук УССР, 1961. - 184 с.

12. Билай В. И. Основы общей микологии. Киев: Вища Школа, 1974. - 396 с.

13. Билай В. И. Фузарии. Киев: Наукова Думка, 1977. - 442 с.

14. Боровая В. П. Использование ризоплана с поливинилпирролидом для предпосевной обработки семян озимой пшеницы // Агрохимия. 1997. - № 10.-С. 43-44.

15. Боровков А. В., Берестецкий О. А. Фитотоксические метаболиты грибов рода Fusarium Fr. // Микология и фитопатология. 1983. - Т. 17. - Вып. 4. -С. 349-358.

16. Воронин А. М., Кочетков В. В. Биологические препараты на основе псевдомонад // Агро XXI. 2000. - № 3. - С. 3-5.

17. Бутенко Р. Г., Хромова Л. М., Седнина Г. В. Методические указания по получению вариантных клеточных линий и растений у различных сортов картофеля. М.: ВАСХНИЛ, 1984. - 28 с.

18. Васютин А. С., Будынков Н. И., Рудаков О. Л. Корневые гнили -опаснейшие болезни зерновых // Зерновые культуры. 1996. - № 2. - С. 1920.

19. Горленко М. В., Афанасьева М. М. Почвенные микроскопические грибы и актиномицеты антагонисты Helmintosporium sorokiniamim Sacc. // Микология и фитопатология. - 1977. - Т. 11. - Вып. 6. - С. 492-498.

20. Горобей И. М., Ашмарина Л. Ф. Эффективность биологических средств защиты ячменя от болезней // Матер, конференции мол. ученых, посвящ. 26-летию СО РАСХН. Новосибирск, 1996. - С. 6-7.

21. Горобей И. М., Ахметгареева А. Ш. Изучение эффективности биопрепарата на основе бактерий рода Pseudomonas против болезней яровой пшеницы // Матер, конференции мол. ученых, посвящ. 26-летию СО РАСХН. -Новосибирск, 1996. С. 7-8.

22. Громовых Т. И., Гукасян В. М., Голованова Т. И., Шмарловская С. В. Trichoderma harzianum Rifai Aggr. как фактор повышения устойчивости томатов к возбудителю корневой гнили // Микология и фитопатология. -1998. Т. 32. - Вып. 2. - С. 73-78.

23. Денщиков М. Т. Отходы пищевой промышленности и их использование. -М.: Колос, 1963.-256 с.

24. Дорофеев Д. А., Артеменко Е. Н., Девяткина Г. А. Оптимизация метода определения биомассы Fusarium spp. по содержанию эргостерола // Доклады Россельхозакадемии. 2002. -№ 1. - С. 13-15.

25. Жалиева JI. Д. Биопрепараты для защиты озимой пшеницы от фузариозной инфекции // Экол. безопас. и беспестицид, технол. получ. растениевод, продукции: Матер. Всерос. науч. -произв. совещ., Краснодар, 24-26 авт., 1994. Ч. 2. Пущино, 1994. - С. 19-20.

26. Захарова Т. И., Чумаков А. Е. Вредоносность основных грибных болезней зерновых культур // Микология и фитопатология. 1986. - Т. 20. - Вып. 2. -С. 143-153.

27. Иващенко В. Г., Назаровская Л. А. Источники инфекции фузариоза колоса злаковых культур в Краснодарском крае // Защита и карантин растений. -1998. № 11.-С. 30-31.

28. Иващенко В. Г., Сотченко Е. Ф., Шипилова Н. П. Фузариоз початков кукурузы // Микология и фитопатология. 2000. - Т. 34. - Вып. 6. - С. 63-70.

29. Иващенко В. Г., Шипилова Н. П., Кирцидели И. Ю. Экологический мониторинг возбудителей фузариоза семян зерновых культур на северозападе России // Микология и фитопатология. 1997. - Т. 31. — Вып. 2. - С. 64-70.

30. Иващенко В. Г, Шипилова Н. П., Левитин М. М. Видовой состав грибов рода Fusarium на злаках в Азиатской части России // Микология и фитопатология. 2000. - Т. 34. - Вып. 4. - С. 54-58.

31. Иващенко В. Г, Шипилова Н. П., Нефедова Л. И, Гагкаева Т. Ю, Назаровская JL А, Хлопунова Л. Б. Биоэкологические и фитосанитарные аспекты исследования фузариоза колоса // Микология и фитопатология. -1997.-Т. 31.-Вып. 2.-С. 58-63.

32. Изотова Т. Е, Карпачева Н. С., Полях Г. И, Матюшин М. С., Шаламова А. А. Опыт комплексного изучения биологического препарата "Ризоплан" // 75 лет Тат. НИИ с.х. Матер. Науч. -практ. конф., Казань, 1995: Тез. докл. -Казань, 1996.-С. 119-121.

33. Казначеев М. Н. Биопрепараты на службе урожая // Защита и карантин растений. 2000. - № 7. - С. 14.

34. Калинина Р. Т. Определение патогенности и наличия фитотоксинов у грибов рода Fusarium возбудителей корневой гнили озимой пшеницы // Микология и фитопатология. - 1980. - Т. 14. - Вып. 1. - С. 51-56.

35. Калько Г. В, Воробьев Н. И., Лагутина Т. М, Новикова И. И. Ингибирование микробами-антагонистами фитопатогенного гриба Fusarium oxysporum в торфогрунте // Микология и фитопатология. 2001. - Т. 35. -Вып. З.-С. 66-75.

36. Кожыбски Т, Ковшык-Гиндифер 3., Курылович В. Антибиотики: происхождение, природа и свойства. Варшава: Польское государственное медицинское издательство, 1969. - Т. 2. - 1343 с.

37. Коломбет Л. В, Жиглецова С. К, Дербышев В. В., Ежов Д. В., Косарева Н. И, Быстрова Е. В. Микофунгицид препарат на основе Trichoderma viride для борьбы с болезнями растений // Прикладная биохимия и микробиология. -2001.-Т. 37. - № 1.-С. 110-114.

38. Котляров В. В. Устойчивость сортов пшеницы к фузариозу и методы ее определения // Селекция и семеноводство. 1986. - № 6. - С. 51-54.

39. Левитин М. М., Иващенко В. Г., Шипилова Н. П. Фузариоз колоса пшенцы // Микология и фитопатология. 1990. - Т. 24. - Вып. 5. - С. 446-453.

40. Левитин М. М., Гагкаева Т. Ю. Сравнительный анализ популяций Fusarium graminearum Schwabe, выделенных с разных органов озимой пшеницы // Микология и фитопатология. 1991. - Т. 25. - Вып. 1. - С. 73-79.

41. Лексущенкова Л. И., Алеева Л. А., Бондаренко А. Ф. Биологическая защита злаков от корневых гнилей // Актуал. проблемы науки в с.-х. пр-ве: Тезисы докладов науч.-практ. конф., Иваново., 11-12 апреля, 1995. Иваново. -1995.-С. 126.

42. Максимова Н. И., Мацкявичене Е. В. Взаимоотношения гриба Phytophthora infestans и клеток картофеля в суспензионной культуре при совместном выращивании // Физиология растений. 1996. - Т. 43. - № 2. - С. 285-290.

43. Матевосян Г. Л., Кудашов А. А., Езаов А. К., Сотник В. Г., Павлюшин В. А. Эффективность различных сроков применения микробиологических препаратов и регуляторов роста при выращивании томата в защищенном грунте // Агрохимия. 2001. - № 2. - С. 61-69.

44. Мелентьев А. И., Галимзянова Н. Ф. Влияние метаболитов бацилл-антагонистов на прорастание спор и развитие грибов-возбудителей обыкновенной корневой гнили // Прикладная биохимия и микробиология. -1999. Т. 35. - № 3. - С. 353-357.

45. Метлицкий Л. В., Озерецковская О. Л., Дорожкин Н. А., Иванюк В. Г., Чалова Л. И., Юрганова Л. А., Барамидзе В. Г. Индуцирование устойчивости картофеля к паразитарным грибам // Прикладная биохимия и микробиология. 1978. - Т. 14. - Вып. 2. - С. 262-270.

46. Методические указания по диагностике, учету и оценке вредоносности пирикуляриоза риса // ВНИИФ / Отв. ред. Кирюхина Р. И. М.:ВАСХНИЛ, 1988.-40 С.

47. Миронова Г. В. Биологические методы защиты яровой пшеницы от листовой инфекции // Вестн. Омск. гос. аграр. университета. 1998. - № 4. - С. 46-47.

48. Монастырский О. А. Мониторинг токсинообразующих грибов зерновых злаков // Агрохимия. 2001. - № 8. - С. 79-87.

49. Мунир А. X., Алзума М. 3. Влияние Fusarium sp. AF-967 на ризоценозы ячменя и пшеницы // Изв. ТСХА. 1997. - № 4. - С. 113 -119.

50. Муромцев Г. С., Черняева И. И. Использование микробиологических факторов для защиты растений от корневых инфекций // Вестн. с.-х. науки. -1988.-№7.-С. 29-35.

51. Никонорова А. К. Особенности взаимодействия Bacillus subtilis с Helmintosporium sativum Pam., King et Bakke // Микология и фитопатология. 1996. - Т. 30. - Вып. 5-6. - С. 69-74.

52. Новикова И. И., Иващенко В. Г., Калько Г. В., Бойкова И. В., Назаровская Л.

53. A., Литвиненко А. И. Испытание новых биопрепаратов в борьбе с фузариозом колоса // Микология и фитопатология. 1994. - Т. 28. - Вып. 1. -С. 70-75.

54. Новожилов К. В., Левитин М. М. Направление исследований для решения проблемы фузариоза колоса зерновых культур // Вестник сельскохозяйственной науки. 1990. - № 10 . - С. 64-67.

55. Павлова Т. В., Измалкова А. Г. Фузариоз колоса пшеницы в Краснодарском крае // Защита и карантин растений. 1995. - № 11. - С. 28-29.

56. Павловская Ж. И., Михайлова Р. В., Лобанок А. Г., Мороз И. В., Кобзарова

57. B. С. Антагонистические свойства Trichoderma lignorum (TODE) harz от 534 и gliocladium catenulatum Gilman et Abbot 453 в отношении Fusarium sambucinum Fuckel // Микология и фитопатология. 1998. - Т. 32. - Вып. 3. -С. 41-46.

58. Парфенова Т. А., Алексеева Т. П. Токсическое влияние фильтрата культуральной жидкости грибов рода Fusarium на семена пшеницы // Микология и фитопатология. 1995. - Т. 29. - Вып. 1. - С. 78-82.

59. Покровский Н. П., Нугманова Т. А., Кабаргина М. В. Исследование биологической активности новых стимуляторов роста, полученных путем культивирования эндофитных грибов. М.: НПП ПВОН "Биоин", 1999. - 6 с.

60. Помелов А. В. Эффективность биологического препарата ризоплан на ячмене // Почва, биол. раст. и агротехн. их воздел.: Тез. докл. науч. конф., Киров, 1997. Киров. - 1997. - С. 44-47.

61. Попов Ю. В. Корневая гниль яровой пшеницы в Кустанайской области // Микология и фитопатология. 1982. - Т. 16. - Вып. 3. - С. 263-266.

62. Райлло А. И. Грибы рода Фузариум. М.: Сельхозгиз, 1950. - 415 с.

63. Сидоров И. А., Есауленко Е. А. Фузариоз колоса пшеницы // Защита и карантин растений. 2000. - № 9. - С. 24-25.

64. Сидоров И. А., Есауленко Е. А., Анпилогова JL К., Соколов М. С. Сравнительная характеристика вредоносности различных форм возбудителя фузариоза колоса пшеницы // Агрохимия. 1998. - № 5. - С. 86-90.

65. Сидорова С. Ф., Рябчикова В. В., Берестецкая JI. И. Особенности патогенного комплекса возбудителей корневых гнилей зерновых культур в условиях Воронежской области // Микология и фитопатология. 1992. - Т. 26.-Вып. 6.-С. 493-501.

66. Соколов М. С., Пикушова Э. А., Левашова Г. И. Традиционные и новые приемы защиты озимой пшеницы от болезней, поражающих корневую систему и основание стебля пшеницы // Агрохимия. 1998. - № 1. - С. 84-93.

67. Терехов В. И., Бессмельцев В. И., Анпилогова Л. К., Глебов Е. И., Есауленко Е. А. Прогноз вредоносности фузариоза зерна озимой пшеницы // Доклады РАСХН.- 1998.-№ 1.-С. 11-12.

68. Феофилова Е. П., Немцев Д. В., Терешина В. М., Козлов В. П. Полиамидосахариды мицелиальных грибов: новые биотехнологии и перспективы практического использования (обзор) // Прикладная биохимия и микробиология. 1996. - Т. 32. - № 5. - С. 483-492.

69. Хацкевич Л. К., Бенкен А. А. Роль научно-методического подхода в изучении корневой гнили зерновых культур // Микология и фитопатология. 1994. - Т. 28. - Вып. 5. - С. 65-69.

70. Хацкевич Л. К., Нестеров А. Н. Патогенный комплекс возбудителей корневой гнили яровой пшеницы на Южном Урале // Микология и фитопатология. 1994. - Т. 28. - Вып. 6. - С. 71-75.

71. Цветкова Н. А., Федорова Ф. А. Этиология корневой гнили озимой пшеницы в Московской области // Вестник сельскохозяйственной науки. 1990. - № 12.-С. 97-100.

72. Чумаков А. Е., Власов Ю. Н., Бушкова Л. Н., Сидорова С. Ф., Гуськова Л. А. Инфекционные фоны в фитопатологии. М.: Колос, 1979. - 208 с.

73. Чкаников Д. И. Использование различий химического состава фитопатогенных грибов и растений при изучении их взаимоотношений // Физиология растений. 1996. - Т. 43. -№ 5. - С.671-678.

74. Шамрай С. Н. Паразитические свойства возбудителей корневой гнили ярового ячменя на Украине // Микология и фитопатология. 1988. - Т. 22. -Вып. 5.-С. 463-466.

75. Шемякин М. М, Хохлов А. С, Колосов М. Н, Бергельсон JI. Д, Антонов В. К. Химия антибиотиков. М.: Издательство АН СССР, 1961. - Т. 2. - 1551 с.

76. Alabouvette С, Couteaudier Y. Biological control of Fusarium wilts with nonpathogenic Fusaria // Biological control of plant diseases. Plenum Press, New York, 1992. - P. 415-426.

77. Arras G., Arru S. Mechanism of action of some microbial antagonists fungal pathogens // Annals of microbiology and enzimology. 1997. - V. 48. - № 1. - P. 97-120.

78. Asaka O., Shoda M. Biocontrol of Rhizoctonia solani damping-off of tomato with Bacillus subtilis RB14 // Appl. And Environ. Microbiol. 1996. - V. 62. - № 11. -P. 4081-4085.

79. Attitalla I. H., Quintanilla P., Brishammar S. Induced resistance in tomato plants against Fusarium wilt invoked by Fusarium sp., salicylic acid and Phytophthora cryptogea // Acta phytopathol. et entomol. hung. 1998. - V. 33. - № 1-2. - P. 89-95.

80. Biles C. L., Martyn R. D. Local and systemic resistance induced in watermelons by formae speciales of Fusarium oxysporum// Phytopathology. 1989. - V. 79. -P. 856-860.

81. Blok W. J., Zwankhuisen M. J., Bollen G. J. Biological control of Fusarium oxysporum f.sp. asparagi by applying non-pathogenic isolates of Fusarium oxysporum // Biocontrol Sci. And Technol. 1997. - Y. 7. - № 4. - P. 527-541.

82. Booth C. The genus Fusarium. Commonwealth Mycological Institute, Kew, Surrey, UK, 1971.-237 p.

83. Chakrabotry A., Gupta P. K. S. Factors affecting cross protection of Fusarium wilt of pigeon pea by soilborne nonpathogenic fungi // Phytoparasitica. 1995. -V. 23.-№4.-P. 323-334.

84. Chao W. L., Nelson E. В., Harman G. E., Hoch H. C. Colonization of the rhizosphere by biological control agents applied to seeds // Phytopathology. -1986.-V. 76.-P. 60-65.

85. Cook R. J., Weller D. M., Thomashow L. S. Potential for biological control of root pathogens with Pseudomonas species introduced into the rhizosphere // Phytoparasitica. 1998. -V. 26. - № 3. - P. 251-252.

86. Deacon J. W. Significance of ecology in the development of control agents against soil-borne plant pathogens // Biocontrol science and technology. 1991. -У. l.-P. 5-20.

87. Dhingra O. D., Sinclair J. B. Basic plant pathology methods. Boca Ration, Florida: CRC Press, Inc., 1986. - 355 p.

88. Duffy В. K., Ownley В. H., Weller D. M. Soil chemical and physical properties associated with suppression of take-all of wheat by Trichoderma koningii // Phytopathology. 1997. - V. 87. - № 11. - P. 1118-1124.

89. Elad J., Barak R., Chet J., Henis J. Ultrastructural studies of the interaction between Trichoderma spp. and plant pathogenic fungi // Phytopathology Z. -1983.-V. 107,-№2.-P. 168-175.

90. Ferrata M., Ambra V. D. Morphological aspects of Trichoderma harzianum parasitism on Sclerotium rolfsii // Riv. Patol. Veg. 1985. - V. 21. - № 2. - P. 53-59.

91. Fravel D. R., Larkin R. P. Biocontrol of Fusarium wilt of hydroponically-grown basil (Fusarium oxysporum f. sp. basilici) using F. oxysporum CS-20 // Phytopathology. 1999. - V. 89. - № 6. - S26. Publication № P-1999-0181-AMA.

92. Giessler L. J., Yuen G. Y. A non-fluorescent Pseudomonas sp. antagonistic to brown patch: Abstr. APS Annu. Meet., Albuquerque, N. M., Aug. 6-10, 1994 // Phytopathology. 1994. - V. 84. - № 10. - P. 1113.

93. Griffin G. J. Carbon and nitrogen requirements for macroconidial germination of Fusarium solani: dependence on conidial density // Canadian journal of microbiology. 1970. - V. 16. - № 8. - P. 733-740.

94. Griffin G. J. Fusarium oxysporum and Aspergillus flavus spore germination in the rhizosphere of peanut // Phytopathology. 1969. - V. 59. - P. 1214-1218.

95. Gullino M. L., Mezzalama M., Migheli Q., Giuria V. Risk analysis for antagonistic Fusarium spp.: Abstr. APS Annu. Meet., Pittsburgh, Pa, Aug. 12-16, 1995//Phytopathology. 1995.-V. 85.-№ 10.-P. 1117.

96. Gullino M. L., Migheli Q., Mezzalama M. Risk analysis in the release of biological control agents. Antagonistic Fusarium oxysporum as a case study // Plant Disease.- 1995. V. 79.-№ 12.-P. 1193-1201.

97. Handelsman J., Stabb E. V. Biocontrol of soilborne plant pathogens // Plant Cell. 1996. - V. 8. -№ 10. - P. 1855-1869.

98. Hadar J., Chet J., Henis J. Biological control of Rhizoctonia solani damping-off with wheat bran culture of Trichoderma harzianum // Phytopathology. 1979. -V. 69.-P. 64.

99. Hillocks R. J. Cross protection between strains of Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum and its effect on vascular resistance mechanisms // J. Phytopathology. 1986. - V. 117.-P. 216-225.

100. Huang Y., Wong P. T. W. Effect of Burkholderia (Pseudomonas) cepacia and soil on the control of crown rot in wheat // Plant and soil. 1998. - V. 203. - № 1. -P. 103-108.

101. Hyill D. J., Peng G. Evaluation of AtEze for suppression of Fusarium wilt of chrysanthemum: Abstr. Saskatchewan-Alberta Reg. Meet., Can. Phytopathol. Soc., 1998 // Hybridoma. 1999. - V. 18. - № 1. - P. 194-195.

102. Ilan C., Jacob I. Biological control of fungal pathogens // Appl. Biochem. And Biotechnol. A. 1994. -V. 48. -№ 1. - P. 37-43.

103. Joffe A. Z. Fusarium species: their biology and toxicology. USA: John Wiley & Sons, Inc., 1986.-590 p.

104. Keel С. J. Bacterial antagonists of plant pathogens in the rhizosphere: Mechanisms and prospects: New Approaches Biol. Contr. Soil-Borne Diseases: Workshop, Copenhagen, 30 June 4 July, 1991 // JOBC/WPRS Bulletin. - 1992. -V. 15. -№ l.-P. 93-99.

105. Kilic O., Griffin G. J. Effect of dsRNA-containing and dsRNA-free hypovirulent isolates of Fusarium oxysporum on severity of Fusarium seedling disease of soybean in naturally infected soil // Plant and soil. 1998. - V. 201. -№ l.-p. 123-135.

106. Ко W. H., Lockwood J. Z. Soil fungistasis: relation to fungal spore nutrition // Phytopathology. 1967. - V. 57. - № 8. - P. 894-901.

107. Korsten L. Biological control potential against Colletotrichum gloeosporioides // Phytoparasitica. 1998. - V. 26. - № 4. - P. 356.

108. Kulichova R. Ucinnost' biopreparatu trichonitrin proti rhynchosporovej skvrnitosti jacmena jarneho // Ochr. rostlin. 1997. - V. 33. - № 3. - P. 213-219.

109. Kumar A. S. Evaluation of biological control agents against red rot (Colletotrichum falkatum) of sugarcane // Ann. Appl. Biol. 1998. - V. 132. -Suppl.-P. 72-73.

110. Landa В. В., Hervas A., Bettiol W., Jimenez-Diaz R. M. Antagonistic activity of bacteria from the chickpea rhizosphere against Fusarium oxysporum f. sp. ciceris // Phytoparasitica. 1997. - V. 25. - № 4. - P. 305-318.

111. Larkin R. P., Fravel D. R. Ecological characteristics of biological control of Fusarium wilt of tomato using nonpathogenic Fusarium spp. // Phytopathology. -1996. -V. 86.-№ 11.-S9.

112. Larkin R. P., Fravel D. R. Efficacy of biological control of Fusarium wilt of tomato under varying environmental conditions // Phytopathology. 1997. - V. 87. - № 6. - S56, Publication № P-1997-0398-AMA.

113. Larkin R. P., Fravel D. R. Mechanism of action and dose-response relationships governing biological control of Fusarium wilt of tomato by nonpathogenic Fusarium spp. // Phytopathology. 1999. - V. 89. - № 12. - P. 1152-1161.

114. Larkin R. P., Hopkins D. L., Martin F. N. Biological control of Fusarium wilt of watermelon using non-pathogenic isolates Fusarium oxysporum: Abstr. APS Annu. Meet., Pittsburgh, Pa, Aug. 12-16, 1995 // Phytopathology. 1995. - V. 85.- № 10.-P. 1167.

115. Larkin R. P., Hopkins D. L., Martin F. N. Suppression of Fusarium wilt of watermelon by nonpathogenic Fusarium oxysporum and other microorganisms recovered from disease-suppressive soil // Phytopathology. 1996. - V. 86. - № 8.-P. 812-819.

116. Lewis J. A., Papavizas G. C. Application of Trichoderma and Gliocladium in alginate pellets for control of Rhizoctonia damping-off // Plant Pathology. 1987. -V. 36.-№4.-P. 438-446.

117. Lewis J. A., Papavizas G. C. Chlamidospore formation by Trichoderma spp. in natural substrates // Canadian journal of microbiology. 1984. - V. 30. - P. 1-7.

118. Lewis J. A., Papavizas G. C. Germiability changes in hyphae of Rhizoctonia solani induced by germling preparations of Trichoderma and Gliocladium // Phytopathology. 1987. - V. 77. - № 5. - P. 699-703.

119. Lewis J. A., Papavizas G. C. Proliferation of Trichoderma and Gliocladium from alginate pellets in natural soil and reduction of Rhizoctonia solani inoculum // Phytopathology. 1984. - V. 74. - № 7. - P. 836 (A 372).

120. Lewis J. A., Papavizas G. C., Lumsden R. D. A new formulation system for the application of biocontrol fungi to soil // Biocontrol science and technology. -1991.-№ 1.-P. 59-69.

121. Logrieco A., Mule G., Bottalico A. Antagonistic activity in Fusarium acuminatum// J. Phytopathol. 1994. - V. 140. -№ 3. - P. 193-200.

122. Magie R. O. Fusarium disease of gladioli controlled by inoculation of corms with non-pathogenic Fusaria // Proc. Fla. State Hort. Soc. 1980. - V. 93. - P. 172-175.

123. Mandeel Q., Baker R. Mechanisms involved in biological control of Fusarium wilt of cucumber with strains of nonpathogenic Fusarium oxysporum // Phytopathology. 1991. - V. 81. - P. 462-469.

124. Marchant R. The carbon metabolism and swelling of Fusarium culmorum conidia // Journal of general microbiology. 1967. - У. 48. - P. 65-77.

125. Marchant R., White M. F. Spore swelling and germination in Fusarium culmorum // Journal of general microbiology. 1966. - V. 42. - № 2. - P. 237244.

126. Maurhofer M., Keel C., Haas D., Defago G. Influence of plant species on disease suppression by Pseudomonas fluorescens strain CHAO with enhanced antibiotic production // Plant pathol. 1995. - V. 44. - № 1. - P. 40-50.

127. Michalikovi A., Michrina J. Ucinnost' biopreparatov v ochrane jacmena jarneho proti fuzariozam // Ochr. rostl. 1997. - V. 33. - № 1. - P. 33-48.

128. Miedaner Т., Perkowski J., Geiger H. H. Genetic basis of resistance to Fusarium head blight and mycotoxin content in winter rye // Fusarium -mycotoxins, taxonomy and pathogenicity. Elsevier Science Publishers В. V., 1995.-P. 124.

129. Miller J. D.,Young J. C., Trenholm H. L. Fusarium toxins in field corn. I. Time course of fungal growth and production of deoxynivalenol and other mycotoxins // Can. J. Bot. 1983. - V. 61. - P. 3080-3087.

130. Muller P., Rudolph K. Induzierte resistenz durch bakterielle lipopolysaccharide (LPS): 50 Dtsch. Pflanzenschutztag., Munster, 23-26 Sept., 1996 // Mitt. Biol. Bundesanst. Land- und Forstwirt. Berlin-Dahlem. 1996. - № 321. - P. 287.

131. Nihei К., Iton Н., Hashimoto К., Miyairi К., Okuno Т. Antifungal ciclodepsipeptides W493A and B, from Fusarium sp.; isolation and structural determination // Bioscience, Biotechnology and Biochemistry. 1998. - V. 62. -№5.-P. 858-863.

132. Nihei К., Iton H., Hashimoto К., Miyairi К., Okuno Т. Antifungal ciclodepsipeptides W493A and B, from Fusarium sp.: Isolation and structural determination // Biosci., Biotechnol. and Biochem. 1998. - V. 62. - № 5. - P. 858-863.

133. Ogawa K., Komada H. Biological control of Fusarium wilt of sweet potato by non-pathogenic Fusarium oxysporum // Ann. Phytopath. Soc. Japan. 1984. - V. 50.-P. 1-9.

134. Ogawa K., Komada H. Induction of systemic resistance against Fusarium wilt of sweet potato by non-pathogenic Fusarium oxysporum // Ann. Phytopath. Soc. Japan. 1986. - V. 52. - P. 15-21.

135. Oyarzun P. J., Postma J., Luttikholt A. J. G., Hoogland A. E. Biological control of foot and root rot in pea caused by Fusarium solani with nonpathogenic Fusarium oxysporum isolates // Can. J. Bot. 1994. - V. 72. - № 6. - P. 843-852.

136. Papavizas G. C. Survival of Trichoderma harzianum in soil and in pea and bean rhizospheres // Phytopathology. 1982. - V. 72. - № 7. - P. 121-125.

137. Papavizas G. C. Trichoderma and Gliocladium: Biology, ecology, and potential for biocontrol // Ann. Rev. Phytopathol. 1985. - V. 23. - P. 23.

138. Park C.-S., Paulitz Т. C., Baker R. Biocontrol of Fusarium wilt of cucumber resulting from interactions between Pseudomonas putida and nonpathogenic isolates of Fusarium oxysporum // Phytopathology. 1988. - V. 78. - № 2. - P. 190-194.

139. Parry D. W., Jenkinson P., McLeod L. Fusarium ear blight (scab) in small grain cereals a review // Plant pathology. - 1995. - V. 44. - № 2. - P. 207-238.

140. Postma J., Luttikholt A. J. G. Colonization of carnation stems by a nonpathogenic isolate of Fusarium oxysporum and its effect on Fusarium oxysporum f. sp. dianthi // Can. J. Bot. 1996. - V. 74. - № 11. - P. 1841-1851.

141. Punja Z. K. Compararive efficacy of bacteria, fungi, and yeasts as biological control agents for diseases of vegetable crops // Can. J. Plant Pathol. 1997. - V. 19. -№ 3. -P. 315-323.

142. Purss G. S. Pathogenic specialization in Fusarium graminearum // Austr. J. Agr. Res. 1971. - V. 22. -№ 4. - P. 553-561.

143. Ragazzi A., Danti S., Turco E. Colletotrichum spp.: Controllo biologico con antagonisti fungini // Riv. agr. subtrop. e trop. 1996. - V. 90. - № 1. - P. 85-93.

144. Rankin L., Paulitz Т. C. Evaluation of rhizosphere bacteria for biological control of Pythium root rot of greenhouse cucumbers in hydroponic culture // Plant Disease. 1994. -V. 78. -№ 5. - P. 447-451.

145. Seitz L. M., Bechtel D. B. Chemical, physical and microscopical studies of scab-infected hard red winter wheat // J. Agric. Food Chem. 1985. - V. 33. - № 3.-P. 373-377.

146. Shearer C. A. Fungal competition // Can. J. Bot. 1995. - V. 73 (Suppl. 1). -S1259-S1264.

147. Schneider R. W. Effects of nonpathogenic strains of Fusarium oxysporum on celery root infection by F. oxysporum f. sp. apii and a novel use of the Lineweaver-Burk double reciprocal plot technique // Phytopathology. 1984. - V. 74.-P. 646-653.

148. Silva-Hanlin D. M. W., Menezes M. Potencial antagonico de especies de Trichoderma no controle de Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum, о agentecausal da murcha do algodoeiro // Arq. biol. e tecnol. 1997. - V. 40. - № 4. - P. 927-940.

149. Sivan A., Ucko O. Biological control of Fusarium crown rot of tomato by Trichoderma harzianum under field condition // Plant disease. 1987. - V. 71. -№7.-P. 587-92.

150. Steiner U. Biologische verfahren zur bekampfung der Fusarienwelke bei cyclamen: 51 Dtsch. Pflanzenschutztag., Halle/Saale, 5-8 Okt., 1998 // Mitt. Biol. Bundesanst. Land- und Forstwirt. Berlin-Dahlem. 1998. -№ 357. - P. 357.

151. Swadling I. R., Jeffries P. Antagonistic properties of two bacterial biocontrol agents of grey mould disease // Biocontr. Sci. And Technol. 1998. - V. 8. - № 3. - P. 439-448.

152. Wells H. D. Trichoderma as biocontrol agent // In "Biocontrol of plant diseases". USA: CRC Press, Inc., 1988. -V. 1. - Chapter 5. - P. 72-81.

153. Wells H. D., Beil D. K., Javorski C. A. Efficacy of Trichoderma harzianum as a biocontrol for Scleroyium rolfsii // Phytopathology. 1972. - V. - 62. - P. 442.107

154. Yates E., Meredith F., Bacon C. W., Jaworski A. J. Fusarium moniliforme production of fumonisin Bi suppresed by Trichoderma viride // Phytopathology. -1999. V. 89. - S88. Publication № P-1999-0629-AMA.

155. Zhangliang C., Yaping W., Yiqiang L. Isolation, purification and characterization of antifungal protein from antagonistic bacteria // 15 Int. Bot. Congr., Yokogama, Aug. 28 Sept. 3, 1993: Abstr. - Yokogama, 1993. - P. 192.