Изучение активного центра мышечной гликогенсинтазы I тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, Сиссе, Бакари Мамаду

• Сиссе, Бакари Мамаду
• 1984

Оглавление диссертации Сиссе, Бакари Мамаду

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА I. АМИНОКИСЛОТНЫЙ СОСТАВ, МОЛЕКУЛЯРНАЯ МАССА И ОЛИГОМЕРНОЕ СОСТОЯНИЕ ГЛИКОГЕНСИНТАЗЫ а) Аминокислотный состав б) Молекулярная масса и олигомерное состояние

ГЛАВА П. ПУТИ РЕГУЛЯЦИИ АКТИВНОСТИ ГЛИКОГЕНСИНТАЗЫ

1. Фосфорилиро ванне - дефосфорилирование.

2. Аллостерическая регуляция.

ГЛАВА Ш. ХАРАКТЕРИСТИКА ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ГРУШ.

ГЛАВА 1У. МЕХАНИЗМ ДЕЙСТВИЯ ГЖКОГЕНСИНТАЗЫ.

ЭКСПЕРИГйЕНТАЛЬШЯ ЧАСТЬ. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Выделение гликогенсинтазы I из скелетных мышц кролика.

2. Диск-электрофорез в 7,5$ полиакриламидном геле в присутствии ДСН.

3. Методы определения белка.

4. Титрование сульфгидрильных групп.

5. Выделение гликогена

6. Метод определения активности гликогенсинтазы I

7. Модификация гликогенсинтазы I карбодиимидами

8. Модификация гликогенсинтазы I п-ФСБУ, м-ФСБУ, п-БМБУ.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

I. Выделение гликогенсинтазы I в комплексе с гликогеном.

2. Изучение действия урацила, уридина, глюкозы и 1,5глюконолактона на активность гликогенсинтазы I

3. Модификация гликогенсинтазы I карбодиимида

4. Определение рКа модифицируемой ЭДК карбоксильной грушш.

5. Влияние нуклеофилов на модификацию гликогенсинтазы I ЭДК.

6. Аффинная модификация гликогенсинтазы I.

7. бн - груша активного центра гликогенсинтазы. I

Заключение диссертации по теме «Другие cпециальности», Сиссе, Бакари Мамаду

выводы

1. Установлено, что 1,5-глюконолактон является сильным конкурентным ингибитором гликогенсинтазы I скелетных мышц кролика. Сделано предположение о том, что гликогенсинтазная реакция осуществляется с промежуточным образованием карбоний-иона.

2. Показано, что н -этил- N (3-диметиламинопропил) кар-бодиимид специфически модифицирует карбоксильную группу фермента. тор , продукт гликогенсинтазной реакции и 1,5-глюконолактон оказывают выраженный защитный эффект.

3. Определено значение рКа модифицируемой карбоксильной группы, равное 5,74* 0,03.

4. Гликогенсинтазу I в комплексе с гликогеном, а также освобожденную от гликогена характеризует наличие взаимодействующих центров по связыванию 1,5-глюконолактона. При хранении освобожденного фермента от гликогена кооперативность утрачивается.

5. В практику энзимологических работ введены новые реак-ционноспособные аналоги уридиловых нуклеотидов: 5'- ( п -фторсульфонилбензоил) уридин, 5'- (м-фторсульфонилбензоил) уридин и 5*- ( п -бромметилсульфонилбензоил)уридин. Для гликогенсинтазы I скелетных мышц кролика показано их необратимое действие, определены константы сродства на стадии образования обратимого фермент-ингибиторного комплекса и константы скорости химической модификации.

6. Изучена реакционная способность сульфз гидрильных групп комплекса гликогенсинтаза I - гликоген: показана существенная роль для активности эн -группы, находящейся в районе связывания глюкозильного остатка щрс.

заключение

Настоящая работа была проведена на гомогенном препарате гликогенсинтазы I в комплексе с гликогеном.

В результате проведенных исследований показано, что 1,5-глюконолактон является сильным конкурентным ингибитором гликогенсинтазы I скелетных мышц кролика. На основании этого, а также данных из литературы по кинетике действия фермента (103, 139, 147), сделано предположение, что в ходе гликогенсинтаз-ной реакции реализуется механизм с образованием карбоний-иона.

Критерием отнесения 1,5-глюконолактона к аналогу переходного состояния гликогенсинтазной реакции служит структура и значение его константы диссоциации с ферментом, совпадающей с Км для тгоро . 1,5-глюконолактон так же, как и карбоний-ион, характеризуется конформацией "полукресла" (12, 48, 75, 119, 173). Для реализации механизма с образованием переходного карбо-ний-иона необходима отрицательно заряженная группа (21, 22, 23, 28). В связи с этим нами впервые проведено исследование рож карбоксильных групп в активности фермента. В результате специфической модификации гликогенсинтазы I н -этил-нЧз-ди-метиламинопропил) карбодиимидом в активном центре выявлена карбоксильная группа со значением рКа, равным 5,74- 0,03. Для образования переходного карбоний-иона необходимо предварительное протонирование уходящей молекулы хгор . Выявленная карбоксильная группа может играть роль донора протона при разрыве гликозидной связи с последующим конформационным преобразованием остатка глюкозы. В случае лизоцима показано, что глю-35 с рКа 6,5 играет роль донора протона (92, 93).

Анализ защитного влияния предполагаемого аналога переходного состояния 1,5-глюконолактона привел нас к заключению о кооперативном взаимодействии активных центров комплекса глико-генсинтаза I - гликоген. Известно, однако, что гликогенсин-таза в клетке прочно связана с гликогеном (115, 117), который является не только субстратом, но и, обусловливает, по-видимому, формирование или поддержание каталитически активной форш фермента. В результате исследований, проведенных на свободном от гликогена ферменте, нами показано, что коо-перативность является свойством самого белка. Однако она сохраняется лишь в комплексе фермента с гликогеном и при освобождении от гликогена легко утрачивается.

Для избирательной модификации гликогенсинтазы I использованы новые аффинные ингибиторы: 5* - ( п -фторсульфонил-бензоил) уридин, 5* - (м-фторсульфонилбензоил) уридин и 5'-(п -бромметилбензоил)уридин, синтезированные сотрудником проблемной лаборатории химии ферментов Биологического факультета МГУ Хроповым Ю.В. Показан необратимый характер их действия, определены константы сродства на стадии образования промежуточного диссоциирущего фермент-ингибиторного комплекса и константы необратимой модификации. Применение данных ингибиторов, а также титрование сульфгидрильных групп фермента с помощью 5,5' - дитиобис-(2-нитробензойной кислотц)привело нас к выводу о присутствии остатка цистеина в активном центре мышечной гликогенсинтазы в области связывания глюкозиль-ного остатка udpg

Список литературы диссертационного исследования Сиссе, Бакари Мамаду, 1984 год

1. Аваева С.М.»Воробьева. Н.Н.,Мельник М.С.»Назарова Т.И.Реакция аспарпшовой кислоты активного центра неорганической пирофосфатазы дрожей с гидроксиламином и боргидридом натрия. Биоорганическая химия,1979»Т.5» ЖО,с. 1570-1578.

2. Аваева С.М.»Назарова Т.И. Карбоксильная группа в активном центре некоторых ферментов фосфорного обмена. В кн.функциональная активность ферментов и пути ее регуляции. М.: МГУ,1981» с.3-29.

3. Аваева С.М. Химия белка. M.I983.

4. Богуславский Л.И. »Волков А.Г. »Каргамолов А.В. »Милейковская Е.И. »Козлов И.A. К^-АТР™ Micrococcus Iffsodeikticus вdo dрастворе и на границе октан/вода. Биоорганическая химия, 1976» Т.2, В 6» с.846-854.

5. Горшкова И.И. Даврик О.И. Дмлипов В.В. Роль карбоксильных групп во взаимодействии фенилаланил тРНК - синтетазы с Субстратами. Молекулярная биол., 1981, Т.15, Ж,с.62-70.

6. Евстафьева 0.1.»Новикова. Л.А.»Соловьева Г.А. Кинетический анализ природы множественных форл гликогенсинтазы I скелетных мышц кролика. Докл.АН СССР, 1977, т.235, Л 5, с.1199-1202.

7. Евстафьева ОД.»Сахарова И.С.»Соловьева Г.А. Четвертичная структура гликогенсинтазы I скелетных мышц кролика.' Биохимия,1978, т.43, В I, с.174-178.

8. Пелковскии A.M. »Апсалон У.Р.,Дьяков В.Л. »Гинодаан Л.М., Мирошников А.И. »Антонов В.К. Карбоксильная группа в активном центре фосфолипазы Ag из яда кобры Naja Naja oxiana . Биоорганическая химия, 1977, т.З» Ж0» с.1430-1431.

9. Желковский A.M. Дъяков В.Л. ,Гинодаан JT.M.,Антонов В.К. Активный центр бю сто липазы из яда среднеазиатской кобры. Каталитически активная карбоксильная группа. Биоорг.химия, 1978, т.4, JS 12, с.1665-1672.

10. Имедидзе Э.А. »Козлов И.А. ,Метельская В.А. и Милъгром Я.И. Ингибирование митохондриальной АТРазы водорастворимым карбодиимидом. Биохимия, 1978, т.43, AS, с.1404-1413.

11. Мальян А.Н. Об участии карбоксильной группы в активном центре CFj- АТРазы хлоропластов. Докл. АН СССР, 1979, т.247, В 4, с.993-996.

12. Мецпер Д. Биохимия. М.: Мир, 1980, т.2, с.98.

13. Мирсалихова H.H. »Баранова Л.А. ,Туницкая В.Л.,Гуляев H.H. Взаимодействие Na, К-АТРазы с модифицирующими аналогами АТР и хлорметшгфосфорновой кислотой. Биохимия, 1981,т.46, В 2, с.314-325.

14. Нурбеков М.К. ,Судакова Е.С. ,Фаворова 0.0. Существенные дяя активности карбоксильные грузив триптофанил -тРНК / синтетазы. Биоорг. химия, 1982, т.8, $2, с,200-207.

15. Северин Е.С. Изучение ферментов и их активных центров методом химической модификации. Успехи биол.химии, 1974, т.ХУ, с.65-84.

16. Соловьева Г.А.,Ягнятинская A.M. Гетерогенность гликоген-синтазы скелетных мышц кролика. Укр. Б» ох. журнал, 1972, т.44, с.724-727.

17. Соловьева Г.А.,Сахарова И.О. Изучение хода гликогенсинтаз-ной реакции во времени потенциометрическим методом. Вопросы медицинской химии, 1981, т.27, Ж, с.96-99.

18. Arrnamalai A.B. and Colman R.F. Reaction of the adenine nucleotide analogue 5 p-fluorosulfonylbenzoyl adenosine and distinct tyrosine and casteine residues of rabit muscle pyruvate kinase. J.Biol.Chem.,1981,vol.256, N 20, p. 10276-10283.

19. Ariki M. and Fukui T.Inhibition of <x-glucan Phosphorylase by <* -D-glucopyranosyl fluoride. JVBiochem.,1975»vol»78, N 6, p. 1191-1199.

20. Ashok K.S., Waisman D.M.»Bostrom G.O. and Soderling T.R. Stimulation of glycogen synthase phosphorylation by califci-umdependent regulatorh protein.J.Biol.Chem. 1979,vol.254-» U 3, p. 583-586.

21. Assimacopoulos F.D.,Blackmore P.F. and Exton J.H.Studies on сч -adrenergic activation of hepatic glucose output. Studies on. role of calcium in oc-adrenergic activationof Phosphorylase. J.Biol.Chem. 1977, vol.252, N 8,p.2662-2669.

22. Avaeva S,M.»Bakuleva N.P.»Baratova L.A. »Iiazarova T.I. and Fink IT.Yu. The essential activated carboxyl group of inorganic pyrophosphatase. Biochim.et Biophys.acta, 1977,vol.482 IT 9, 1, p. 173-184.

23. Avramovic-Zikic 0.»Bredenbach W.O. and Madsen N.B.Evi-denfor an essential carboxyl group in the glycogen Phosphorylase b. Can.J.Biochem.1974,vol.52, H 2,p.146-148.

24. Balwant S.K. and Soderling T.R. Relationships betwen dephosphorylation and D to I conversion of rabbit skeletal muscle glycogen synthase. J.Biol.Chem.1978,vol.253t H 15,p.5247-5250.

25. Banerjee S.K.»Holler E.,Hess G.P. and Rupley J.A. Reaction of iT-acetylgucosamine oligosacharides with lysozyme. J.Biol.Chem. 1975, vol.250,N 11,p.4355-4367.

26. Banerjee S. and Rupley J.A. Turkey egg white lysozyme. Free energy, enthalpy and steady state kinetics of reaction with H acetylglucosamine oligosaccharides. J.Biol. Chem.1975,vol.250» N 20, p.8267-8274.

27. Banks T.E.»Blossey B.K.»and Shafer J.A. Inactivation of o( chymotrypsinb by water-soluble carbodiimide. J .Biol.

28. Chem.1969, vol.244, N 23, p. 6323-6333.

29. Basu D.K.,Bachawat B,K. Purification of uridine diphos-phoglucose-glycogen transglucosylase from sheep brain. Biochim.et Biophys.acta,1961»vol.50, N 1, p. 123-128.

30. Belacapitow E., Appleman M.IT.and Torres H.H.Factors affecting the activity of muscle glycogen synthase.II.The2+regulation by Ca .J.Biol.Ghem.1965,vol.240,N9,p.3473-3478.

31. Belacapitow E.»Garcia Fernandez H.D.C.» Bernbaumer L.and Torres H.N. Factors affecting muscle glycogen synthase activity.IV.Comparative study of the different dependent forms of glycogen synthase.J.Biol.Chem.1967,vol. 242, H 6, p.122T-123U

32. Birnbaum M.J.and Pain J.N. Activation of protein kinase and glycogen phosphorylase in isolated rat liver cell by glucagon and katecholamines. J.Biol.Chem.1977,vol.252,1. H 2, p.528-535.

33. Blatt Ii.M., Semahorm J.O. and Kim K.-H.Mechanism of pu-romycin activation of tadpole liver glycogen synthase. Biochim et Biophys.acta,1969,vol.177, N 3, p. 553-559» '

34. Brown J.H.»Thompson B.and Mayer S»2.Conversion of skeletal muscle glycogen synthase to multiple glucose-6-phos-phate-dependent forms by cyclic adenosine monophosphate dependent and independent protein Kinases. Biochem.1977* vol.16,N25,p.5501-5508.

35. Bruce E.K.»Graves D.F.,Benjamini B.and Krebs E.G.Role of multiple basic residues in determining the substrate spec-cificity iof AMP-dependent protein kinase. J.Biol.Chem. 1977,vol.252,Ii H,p.4888-4894.

36. Byers L.D.and Koshland Jr.D.E.The specificity of induced conformational changes,the case of yeast glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase.Biochem.1975,vol 14»H 16,p.3661-3669.

37. Carraway K.L.and Koshland Jr D.E. Reaction of tyrosine residues in proteins with carbodiiDd.de reagents.Biochim. at Biophys.acta,1968,vol.160,N2,p.272-274.

38. Carraway K.L.and Koshland JrD.E.Carbodiimide modification of proteins.Methods in Enzymology,1972, vol.25,part B,p.616-623.

39. Cerione R.A.and Hammes G.G.Iiucleotide interactions with the dicyclohexylcarbodiiiaide-sensitive adenosinetriphos-phatase from spinasch chloroplasts. Biochem.1981,vol.20,ff 12,p.3359-3365.

40. Chuang H.Y.K.and Bell F.E.Use of thermal inactivation technique to obtain binding constants for Escherichia Co-li valyl-tRJTA-synthetase. Arch.Biochem.and Biophys.1972, vol.1 52, N2, p. 502-514»

41. Craig J.W.,Rall T.W.and Lamer J.The influence of insulin and epinephrine on adenosine 3» 5-phosphate and gly-, cogen tansferase in muscle.Biochim.et Biophys.acta,1969, vol.177, U 2, p. 213-219.

42. Cuatrecasas P. Topography of the active of staphyloco-cal nuclease. Affity labeling with diazonium. substrate analogues.J.Biol.Chem.1970, vol.245>H3,p.574-584.

43. Danfort W,H.Glycogen synthase activity in skeletal muscle. Intercoreversion of two forms and control of glycogen syri-thesis.J.Biol.Chem.1965,vol.240,N2,p.588-593.

44. Dang B.P. ,Roustan C.,Thd Tot N.and Pradel L.-A.Evidence for an essential glutamyl residue in yeast hexokinase. Biochem.1977,vol.16,1120,p.4533-4537.

45. De Paoli-Roach A.A.,Roach P. and Larner J .Rabbit skeletal muscle phosphorylase kinase. Comparision of glycogen synthase and phosphorylase as substrates.J.Biol.Chem.1979, vol.254, it 10, p. 4212-4219.

46. De Paoli-Roach A.A. Roach P.J.,Pham K.,Kramer G.and Har-desty B.Phosphorylation of glycogen synthase and of the fc -subunit of eukaryotic initiation factor two by a common protein kinase.J.Biol.Chem.1981,vol.256, N 17,p.8871-8874.

47. De Paoli-Roach A.A.,Zafer A.and Roach P.Characterization of a rabbit skeletal muscle protein kinase PC0j. able to phosphorylate glycogen synthase and phosvitin. J.Biol. Chem. 1981 ,vol.256, IT 17, p. 8955-8962.

48. Dietz M.R.,Chiasson J.L.Soderling Т.Н.,and Exton J.H. Epi-nephrin regulation of skeletal muscle glycogen metabolism. Studies utilizing the rat lindlimb preparation.J.Biol.Chem. 1980,vol.255,N6,p.2301-2307.

49. Di Petro A.,Godinot C.,Iiartin J.-P.and Gautheron D.C. Affinity labeling of catalytic and regulatory sites, of pig heart mitochondrial -ATPase by 5-p-(fluorosulfonyl) ben-zoyladenosine.Biochem.,1979, vol.18»H9,p.1738-1745.

50. Embi li.,RyIatt D.B.and Cohen P.Glycogen synthase kinase-3 from rabbit skeletal muscle. Separation from cecIic-AMP-dependent pibotein kinase and phosphorylase kinase and phos-phorylase kinase .Eur .J.Biochem. 1980, vol. 107 ,H2, p.519-527.

51. Engers H.D.Bridger W.A.and Madsen 1T.B.Kinetic mechanism of phosphorylase b.Rates of initial velocities and exchange at equilibrium.J.Biol.Chem.1969, vol.244,N21,p.5936-5942.

52. Ernest M.J.and Kim K.-H.Regulation of rat liver glycogen synthased.Role of glucose-6-phosphate and enzyme SH groups in activity and glycogen binding.J.Biol.Chem.,1974,vol. 249, li 16, p. 5011-5018.

53. Ernest M.J.and Kim K.-H.Regulation of rate liver glycogen synthase D by sulfhydryldisulfide reagents exchange.J.Biol. Chem. , 1973, vol.248,li5,p.1550-1555.

54. Ernest M.J.and Kim K.-H.Regulation of rat liver glycogen synthase.Evidence for lysyl residue for glucoses-phosphate activation.J.Biol.Chem.,1974,vol.249,N21,p.6770-6778.

55. Esch F.S.and Allison W.S.Identification of a tyrosine residue at a nucleotide binding site in the £ -subunt of the mitochondrial ATPase with p-fluorosulfonyl '''C. -benzoyls-adenosine .J .Biol.Chem., 1978, vol. 253 17 ,p . 6100-6106.

56. Exton. J.H.Robinson G.H.,Sutherland E.W.and Park C.R.Stuv dies on the *role of adenosine -3» 5-monophosphate in the heatic actions of glucagon and catecholamines.J♦Biol.Chem. ,1971?! vol.246, N 20, p. 6166-6177.

57. Eyl A.and Inagami T.Modification of carboxyl groups in the active site of trypsrm.Biochem.Biophys.Res.Comraun. » 1970,vol.38, 11, p. 149-155.

58. Friedman D.L.,Larner J.Interconversion of two forms of muscle UDPG— -glucan transglucosylase by a phosphoryla-tion-dephosphorylation reaction sequence.Biochim.et Biop-hys. acta,1962,vol.64,H1,p.185-186.V

59. Friedman D.L.and Lamer J.Studies on UDPG- -glucan transglucosylase by a phosphorylation-dephosphorylation reaction sequence.BIochem.,1963»vol.2,H4,p.669-675.

60. Garrisson J.C.and Haynes JrR.C.The hormonal control of glueoneogenesis by regulation of mitochondrial pyruvate carboxylation in isolated rat liver cells.J.Biol.Chem., 1975,vol.250,IT8,p.2769-2777.

61. Garrisson J.C.The effects of glucagon,catecholamines and the calcium ionophore A23187 on the phosphorylation of rat liver hepatocyte cjrtosolic proteins.J.Biol.Chem., 1978, vol.253, N 19, p. 7091-7100.

62. Garrisson J.C.and Borland K.Regulation of mitochondrial ^ pyruvate carboxylation and gluconeogenesis in rat hepato-cytes via of-adrenergic,adenosine 3,5-monophosphate-depen-dent mechanism.J.Biol.Chem.,1979,vol.254, F 4,p.1129-1133.

63. Gething M.J.H.,Davidson B.E.The molar absorption coefficient of reduced Ellman s reagent:3-carboxylato-4-nitro-thiophenolate.Eur.J.Biochem.,1972»vol.30,N2,p.352-353.

64. Gold A.M.»Johnson R.M.and Tseng K.Kinetic mechanism of rabbit muscle glycogen phosphorylase a.J.Biol.Chem.^1970» vol.245,N10,p.2564-2572.

65. Gol A.II.,Legramd E.and Sanchez R.Inhibition of muscle phosphorylase a by 5-gluconolactone.J.Biol.Chem.,1971» vol.246, IT 18» p. 5700-5706.

66. Goldemberg S.H.Specificity of uridine diphosphate glucose-glycogen glucosyltransferase. Biochim.et Biophys.acta, 1962,vol.56, N 2, p. 357-359.

67. Hank R.,Brown D.H.Preparation and properties of uridine -diphosphoglucose-glycogen transgerase from rabbit muscle. Biochim.et Biophys.acta>1959»vol.33>K2»p.556-559.

68. Hill R.J.and Davis R.W.The pKa of specific p groups of proteins.J.Biol.Chem.»1967»vol.242j H 9,p.2005-2012.

69. Hiromi K.,Takahashi K.Hamaufcu Z.-I.and Ono S.Kinetic studies on gluc-amylase.The influence of pH on the rates of hydrolysis of maltose and pentose.JJ3iochem.1966,vol.59. N 5» p.469-475.

70. Hixon C.S.»Krebs E.G.Affinity labeling of catalytic subunit of bmvine heart muscle cyclic-AMP-dependent protein1kinase by 5-p-fluorosulfonylbenzoyladenosine.J.Biol.Chem.,1979,vol.,254» H 16, p. 7509-7514.

71. Hoare D.G.and Koshland Jr D.E.A method for the quantitative modification and estimation of carboxylic groups in proteins.J.Biol.Chem.»1967,vol.242, If 10, p. 2447-2453.

72. Huang IC.P.and Cabib E.Yeast glycogen synthetase in the glucose-6-phosphate-dependent form.I.Purification and properties.J.Biol.Chem.,1974»vol.249iN12»p.3851-3857.

73. Huang K.P.and Cabib E.Yeast glycogen synthase in the glucose-6-phos phate-dependent form.il.The effect of proteolysis.J .Biol.Chem.,1974, vol.249, Ii12,p.3858~3861.

74. Huang K.P.and Huang F.L.Dephosphorylation of rabbit skeletal muscle glycogen synthase by phosphoprotein phosphatase and human placental alkaline phosphatase. Biochem. Biophys.Res.Commun.,1980,vol.92, If 2, p.682-687.

75. Huang K.P.,Huang F.L.,Glinsmann W.H.and Robinson J.C.Ef--fect of limited proteolysis on activity and phosphorylation of rabbit muscle glycogen synthetase. Arch.Biochem. and Biophys.,1976,vol.173, if 1,p.162-170.

76. Huang K.P.jHunag F.L.,Glinsmann W.H.and Robinson J.C.Regulation of glycogen synthase activity by two kinases. Biochem.Biophys .Res . Commun., 1975, vol. 6 5, M, p . 1163-1169 .

77. Huang K.P.and Huang P.L.Phosphorylation of rabbit skeletal muscle glycogen synthase by cAMP-dependent kinase and dephosphorylation of the synthase by phosphatase.J.Biol. Chem.1980,vol.255, If 7,p.3H1-3H7.

78. Huang T.S.and Krebs E.G.Amino acid sequence of a phosphorylation site in skeletal muscle glycogen synthase.Biochem.Biophys .Res.Commun.,1977,vol.75, N3»p.643-650.

79. Hutson IT.J.»Balwant S.K.and Soderling T.E.Regulation of glycogen synthase .Dephosphorylation of the skeletal muscle enzyme,J.Biol.Chem.,1978,vol.253» N 8,p.254Q2545.

80. Imoto T., Johns on L.N.Iiorth A. G.T., Philips B.C.and Rupleyrd

81. J.A.Vertebrate lysozyme.The enzymes 3 ed.,1972,vol.7» p.665-868.

82. Imoto T.,Andrews L.J., Banerjee S.K.»Shrake A.»Poster L.S. and Rupley J.A.Optical properties of lysozyme; pH and sacharide binding difference spectra.J.Biol.Chem.,1975>vol. 250, IT 250, p. 8275-8282.

83. Inokuchi li.,Iwana M.,Tokahashi T.and Irie la.Iilodification of a glutamylase from Aspergillus soitoi with I- cyclo-hexyl-3(2-morpholinyl-(4)ethyl) carbodiimide.J.Biochem., 1982,vol.91,N21,p.123—133»i

84. Issa H.A.,Mendicino J.Role of enzyme-enzyme interactions in the regulation of glycolisis and gluconeogenesis.Properties of glycogen synthetase isolated from swine kidney. J.Biol.Chem.»1973,vol.248, N 685-696.

85. Itarte E.,Robinson J.G.and Huang K.P.Total conversion of glycogen synthase from the I to the D form by a cyclic AMP independent protein kinase from rabbit skeletal muscle. J.Biol.Chem.,1977,vol.252, N 4, p. 1231-1234.

86. Kaslow H.P.,Eichner R.D.and Mayer S .E. Interconversion betwen multiple glucose-6-phosphate-dependent forms of glycogen synthase in intact adipose tissue. J.Biol.Chem., 1979,vol.254, N 11, p.4674-4677.

87. Khandewal R.L.,Vanderheede R.J.and Krebs E.G.Purification,properties and subtrate specificities of phosphopro*-teln phosphatases from rabbit liver.J.Biol.Chem.,1976, vol.251, If 16, p. 4850-4858.

88. Killea D.and Whelan W.Purification and properties, of rabbit liver glycogen synthase.Biochem.,1976,vol.15, If 16, p.1349-1356.

89. Kitz R.and Wilson I.B.Esters of methanesulfonic acid as irreversible inhibitors of acetylcholinesterase.J.Biol. Ghem.,1962,vol.237, N 10,p.3245-3249.

90. Kornfeld R.and Brown D.H.Preparation and properties of uridine diphosphate glucose-glycogentransglucosylase. J. Biol.Ghem.,1962,vol.237, If 6, p. 1772-1777.

91. Koshland D.E.The molecular basis for enzymes regulation.rd

92. The enzymes,3 ed.,vol.I,p.341-395.

93. Lacombe G.,Thiem If.V.and Swynghedauw B.Modification of myosin subfragment I by carbodiimide in the presence of nucleophile.Effect on adenosinetriphosphatase activities. Biochem., 1981, vol.20,If12,p.3648-3653.

94. Larner J.and DSanger F.The amino acid sequence of the phosphorylation site of muscle uridine diph&sphoglucose-1,4-glucan <K-4-giucisyl transferase.J.IIol.Biol., 1965, vol.11, If 3, p. 491-500.

95. Lamer J.,Villar-Palasi C.and Brown If .E.Uridine diphosphate glucose: -1,4-glucan o( -4-glucosyltranspherase in

96. Larner J.»Benjamin D.and Rossini L.Effects of group-selective reagents on rabbit muscle glycogen synthase.Hoi. Cell.Biochem.,1975,vol.6, N 1,p.65-70.

97. Lamer J.,Takeda Y.,Hizukuri S.The influence of chain size and molecular weight on the kinetie constants for the span glucose to polysacharide for rabbit muscle glycogen synthase.Mol.Cell.Biochem.,1976,vol.12,p.131-135.

98. Chem.,1978,vol.253» N7,p.2104-2113.

99. Leaback D.H.On the inhibition of -ii-acetyl-D-glucosami-dase by 2-acetamido-2-deoxy-D-glucono-(I-5)-lactone.Bio-chem.Biophys .Res. Commun., 1968, vol. 32., If 6 » p . 102 5-1030 .

100. Lin C.,Segal H.L.Homogeneous glycogen synthase b from rat liver.J.Biol.Chem.,1973»vol.248, N 20, p. 7007-7011.

101. Lowry O.H. ,Rosebrough N.J.,Farr A.L.,Randall R.J.Protein measurement with the folin phenol reagent.J.Biol.Chem., 1951, vol.193, 17 1, p. 265-275.

102. Mayer F.C.and Larner J.Substrate cleavage point of the o(- amylases.J.Amer.Chem.Soc., 1959,vol.81 ,1*1,p.188-193.

103. MC Yerry P.H.and Kim K.-H.Purification and kinetic mechanism of rat liver glycogen synthase.Biochem., 1974,vol. 13, H 17» p. 3505-3511.

104. Ninimo H.G.,Proud C.D.,and Cohen P.The purification and properties of rabbit skeletal muscle glycogen synthase. Eur.J.Biochem.,1976,vol.68, li 1, p. 21-30.

105. Mmmo H.G.Proud C.G.and Cohen P.The phosphorylation of rabbit skeletal muscle glycogen synthase by glycogen synthase by glycogen synthase kinase-2 and adenosine-3'5-raono-phosphate-dependent protein kinase. Eur.J.Biochem., 1976, vol.68, №1, p.31-44-.

106. Pal P.K., Reicher R.I., Wecher W.I. and Colman R.F. A new affinity label for guanosine nucleotide sites in proteins. J.Biol.Chem., 1978, vol.253, №19, p.6644-6646.

107. Payne M.E. and Soderling T.R. Caimodulin-dependent glycogen synthase kinase. J.Biol.Chem., 1980, vol.255, №17, P.8054-8B56.

108. Pettigrew D.W. and Frieden C. Rabbit muscle phosphofructo-kinase. Modification of molecular and regulatory kinetic properties with the affinity label 5-P-(fluorosulfonyl) benzoyl adenosine. J.Biol.Chem., 1978, vol.253, №10,p.3623-3627.

109. Piras R., Rothman L.B., Cabib E. Regulation of muscle glycogen synthase by metabolits. Differential effects of the I and D forms. Biochem., 1968, vol.7, № 1, p. 56-66.

110. Piras M.M.,Bindstein E.,Piras R.Regulation of glycogen metabolism in the adrenal gland.Kinetic and regulatory proper1. У*ties of glycogen synthase.Arch.Biochem.and Biophys.»1970, vol.139, I 1, p. 121-129.

111. Plesner L.,Plesner I.Y/.and Esman V.Kinetic mechanism of glycogen synthase D from human polymorphonuclear leukocy-tes.J.Biol.Chem.,1974,vol.249, N 4, p.1119-1125.

112. Ramachandran N.and Colman R.F.Evidence for a critical glutamyl and aspartyl residues in the function of pig heart diphosphopyridine nucleotide dependent isocitrate dehyd-rogenase,Biochem., 1977,vol.16, N 8, p. 1564-15731.

113. Ray W.J.and Koshland D.E.Method for characterising the type and numbers of groups involved in enzyme action.J.

114. Biol.Chem.,1961,vol.236, FT, p. 1973-1980.

115. Riordan J.P.and Hayshida H.Chemical evidence for a functional carboxyl group in carboxypeptidase A.Biochem.Biop-hys.Res.Commun,»1970,vol.41, Ii 1, p. 122-127.

116. Roach P.J.,Takeda Y.and Larner J.Rabbit skeletal muscle glycogen synthase.I.Relationship betwen phosphorylation state and kinetic properties.J .Biol.Chem.,1976,vol.251, H7, p.1913-1919.

117. Roach P.J.and Larner J.Rabbit skeletal muscle glycogen synthase.Il.Enzyme phosphorylation state and effector concentrations as interacting control parameters.J.Biol.Chem., 1976, vol.251, U7, p. 1920-1925.

118. Roach P.J.and Lamer J.Covalent phosphorylation in the regulation of glycogen synthase activity.Mol.Cell^Biochem.,1977,vol. 15, IT 3,P-179-200.

119. Robyt J .P.and Dexter P.The action pattern of porcine pancreatic o(-amylase in relatioship to the substrate binding site.J.Biol.Chem.,1970,vol.245, H 15,p.3917-3927,

120. Rosell-Perez M.and Lamer J.Studies on UDP,G °< -glucan transglucisylase.IV.Purification and characterization of two forms from rabbit skeletal muscle.Biochem., 1964,vol. 3,N 1» p. 75-80.

121. Rosell-Perez M.and Lamer J.Studies on UDPG-glucan trans-glucosylase.V.Two forms of the enzyme in dog skeletal muscle and their :Laterconversion.Biochem.,1964>vol.3»1. H I,p.81—88.

122. Sakai K.,ï:ïatsumura S.,0kimura Y.,Yamanriira H.,and ITishizu-ka Y.Liver glycogen phosphorylàse kinase.Partial purification and characterisation.J.Biol.Chem.,1979,vol.254, U 14, p.6631-6637.

123. Sakharava I.S.and Solovyeva G.A.Chemical modification of the arginine residues of rabbit skeletal muscle glycogen synthase .Biochem.Intern., 1982, vol. 5,H1, p .111 -119 .

124. Sakharova I.S.,Khropov Yu.V.and Sololvyeva G.A.Affinity labelling of rabbit skeletal muscle glycogen synthase I by a 2,3-dialdehyde derivative of uridine-5-diphosphate. Biochem.Intern.,1982,vol.5,ÏÏ 2, p. 271-279.

125. Salsas E.and Larner J.Kinetic studies on muscle glycogensynthase.J.Biol.Chem.,1975»vol.250, N 9, p. 3471-3475. '

126. Sanders S.S.and Kixir K.-H.Regulation of hepatic glycogen synthase of Rama Castebeiana.Studies of ATP inhibition with reference to insulin activation of glycogen synthase. J.Biol.Chem.,1971,vol.246, N 9* p. 2959-2964.

127. Shikama H.,Chiasson J.-L.and Exton J.H.Studies on the interaction between insulin and epinephrine in the control of skeletal muscle glycogen metabolism.J.Biol.Chem.»1981» vol.256, H 9, p.4450-4454.

128. Shyh-Long C.and Kim K.-H.Identification of the cyclic AUPv . * « ^and ATP binding sites of acetyl coenzyme A by use of 5-p-fluorosulfonyladenosine.J .Biol.Chem.,1982,vol.257, E 17, p.9953-9957.

129. Smith C.H.»Brown N.E.and Larner J.Molecular characteristics of glycogen synthase of t rabbit skeletal muscle.Some chemical characteristies of the enzyme protein and its change on interconversion.Biochim.et Biophys.acta,1971 » vol.242, H 1, p. 81-88.

130. Smith C.H.,Lamer J.»Thomas A.M.and Kupchan S.M.Inactiva-tion of glycogen synthase b by the tumor inhibitor verno-lepin.Biochim.et Biophys.acta, 1972,vol.276, N.1,p.94-104.

131. Soderling T.R .Régulât ion of glycogen synthase.Specificity and stoichiometry of phosphorylation of the skeletal muscle enzyme by ceclic 3:5-AMP-dependent protein kinase.J. Biol.Ohem.,1975,vol.250, IT 14,p.5407-5412.

132. Soderling T.R.Régulâtion of glycogen synthase.Effeet of trypsin on the structure ».activity and phosphorylation of the skeletal muscle enzyme.J.Biol.Chem.,1976, vol. 251» N 14, p.4358-4364.

133. Soderling T.R.,Jett M.P.,Hutson K.J.,Khatra B.S.Regulation of glycogen synthase.Phosphorylation specificities of cAMP-dependent and cAMP-independent kinases gfor skeletal muscle synthase.J.Biol.Chem.,1977,vol.252» IT 21,p.7517~ 7524.

134. Soiling H.Studies on the allosteric properties of glycogen synthase.1.Eur»J.Biochem.,1979»vol.94» H 1, p.231- -242.

135. Spector T.Rfinement of coomassie blue method of protein quantitation.A simple and linear spectrophotometric assay for 0,5 to 50 u of protein.Anal.Biochem.,1978, vol. 86,. IT 1, p. 142-146.

136. Staneloni R.J.,Piras R.Reversible aggrigation of muscle glycogen synthase by metabolites.Bdochem^Biophys.Res. Commun.»1971»vol.42, If 2, p.237-244.

137. Stepanov V.M.,Lobareva L.S.,Maltsev K.I.Colored inhibitors of pepsin.Biochim.et Biophys.acta,1968,vol.1 51, N3» p.719-721.

138. Sugihara A.,Iwai M.and Tsijisalca Y.Modification of car-boxyl groups in geotrichum candidum lipase. J.Bio chem., 1982, vol.91, If 2, p. 507-513.

139. Takeda Y.,Brewer H.B.,Lamer J.Structural studies on rabbit muscle glycogen synthase.I.Subunit composition. J.Biol.Chem.,1975,vol.250, If 23, p. 8943-8950.

140. Takeda Y.and Larner J.Structural studies on rabbit muscle glycogen synthase.II.Limited proteolysis.J.Biol. Chem.,1975, vol.250, If 23, p. 8951-8956.

141. Thomas J .A., Lamer J.Purification and propertes of glycogen synthase I from bovine heart: two kinetic forms. Biochim.et Biophys.acta,1973,vol.293, Fl» p.62-72.

142. Thomas J.A.,Schlender K.K.,Lamer J.Specificity of activation of glycogen synthase I from muscle and heart.Biochim.et Biophys.acta,1973,vol.293» H1,p.84-90.

143. Tolbert M.E.M.,Butcher F.R.and Pain J.If .Lack of carrela-tion between catecholamine effects on cyclic AMP and gluconeegenesis in isolated rat liver cells „J .Biol. Chem.,1973»vol.248, Н 16» p»5686-5692.

144. Tu J.-I.,Jacobson G.R.and Graves D.J.Isotopic effect and inhibition of polysaccharide phosphorylase by 1,5-gluco-nolactone. Relationship to the catalytic mechanise. Bio-chem.,1971, vol. 10, Л 7, p. 1229-1236.

145. Vanderheede J.R.,Khandelwal RIL.and Krebs E.G.Studies on the role of adenosine 3 »^-monophosphate in. the activation, of liver phosphorylase.J.Biol.Chem.,1977,vol.252, Ш21,p.7488-7494.

146. Walsh K.X.,Millikin D.M.,Schlender K.K.and Reimann EJI* Calcium-dependent phosphorylation of glycogen synthase by phosphorylase kinase.J.Biol.Chem., 1979»vol.254» If 14» p.6611-6616.

147. Weber K.,Pringle J.R.and Osborn M.The measurrnent of molecular weights by electrophoresis on SDS-acrylamide gel. Methods in Enzymology,Acad.Press.,IT.Y.,1972, vol.26,p. 1317.

148. Wei-XiT T.and Tson C.-b.Determination of the rate constant of enzyme modification by measuring the substrate reaction in the presence of modifier.Biochem.,1982»vol.2l, II 5» p. 1028-1033.