Исследования и разработки по инструментальному нейтронно-активационному анализу микроэлементного состава биомакромолекул тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 01.04.16, кандидат физико-математических наук Харабадзе, Нана Езекиевна

• Харабадзе, Нана Езекиевна
• кандидат физико-математических наук
• 1984

Оглавление диссертации кандидат физико-математических наук Харабадзе, Нана Езекиевна

Страницы

В в ед е ни е

ГЛАВА I. Значение микроэлементов для биологических систем и роль нейтронно-активационного анализа в их исследовании

1.1. Жизненно важные микроэлементы

1.2. Влияние ионов металлов на функционирование и физико-химические свойства нуклеиновых кислот и гистонов

1.3. Анализ следовых элементов в биоматериалах

1.4. ИНАА - высокочувствительный метод определения следовых элементов

ГЛАВА П. О новых способах подготовки биологических образцов для массового нейтронно-активационного анализа

2.1. Конденсационно-адсорбционный лиофили-затор для высушивания биообразцов

2.2. Основные характеристики конденса-ционно-адсорбционного лиофилизатора

2.3. Таблетизация биообразцов для нейтронно-активационного анализа

2.4. Выбор материала для пресс-формы и контейнеров

2.5. Испытание таблетированных биологических образцов

2.6. Характеристика стандартных образцов на основе феноло-формальдегидной смолы

2.7. Новые по составу стандартные образцы для массового ИНАА

Страницы

2.8. Результаты аттестации новых стандартных образцов СБС-I и СБС

ГЛАВА Ш. Низкотемпературный канал для облучения биологических образцов

ГЛАВА 1У. Измерение и расшифровка гамма-спектров нуклеиновых кислот и гистонов

4.1. Спектральный состав природного фона

4.2. Гамма-спектры биомакромолекул

ГЛАВА У. Результаты оценки основных параметров усовершенствованного метода ИНАА биологических матриц

5.1. Пределы обнаружения и определения, и чувствительности

5.2. Относительные ошибки определения элементов

ГЛАВА У1. Применение ИНАА для изучения микроэлементного состава биомакромолекул

6.1. Характеристика исследуемых биологических образцов

6.2. Результаты активационного определения нуклеиновых кислот и гистонов

Выводы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследования и разработки по инструментальному нейтронно-активационному анализу микроэлементного состава биомакромолекул»

Актуальность темы. Последнее десятилетие характеризуется возрастающим интересом к проблеме определения следовых элементов на молекулярном уровне. Определяются естественные концентрации следовых элементов в ферментах, витаминах, различного рода белках и белковых комплексах, нуклеиновых кислотах и нуклеопротеи-дах; изучается влияние ионов металлов на физико-химические свойства и функционирование различных биомакромолекул, исследуется метаболизм микроэлементов при патологических процессах.

Макромолекулы представляют собой типичный пример многокомпонентной среды, содержащей химические элементы в широком интервале концентраций, начиная от нескольких процентов до миллионной доли процента. Для определения таких малых количеств первостепенное значение имеет подбор высокочувствительного аналитического метода, позволяющего с высокой точностью определять следовые элементы в миллиграммовых навесках биомакромолекул. Несмотря на расширение арсенала аналитических методик с пределами обнаружения, л п охватывающими диапазон от 10 до 10 %, анализ ультраследовых концентраций элементов (~0,01 мкг/г) в реальных образцах в настоящее время проводится с относительной 30$ ошибкой / I /. Высокая чувствительность определения элементов является недостаточным условием для получения хорошей точности и воспроизводимости результатов. Пределы чувствительности аналитических методик лежат много ниже уровня, на котором обычно проводится определение следовых элементов в реальных образцах. Для исследования возможности использования всего интервала чувствительностей аналитических методик при проведении анализов необходимо оценить и довести до минимума загрязнения и потери, интерференции и помехи, определяющиеся условиями эксперимента, несовершенствами стандартных образцов и калибровочных методик. Одним из современных аналитических методов, обладающих в этом отношении широкими возможностями является инструментальный нейтронный активационный анализ (ИНАА). Высокая чувствительность определения, хорошая точность и воспроизводимость, мультиэлементный характер инструментального нейтрон-но-активационного метода анализа и, что особенно важно, отсутствие предварительной химической обработки образцов позволяют применять его для изучения молекулярных механизмов участия следовых элементов в биологических процессах.

Целью настоящей работы являлась разработка метода мультиэле-ментного нейтронно-активационного анализа для малых навесок препаратов биомакромолекул и его применение для анализа нуклеиновых кислот, гистонов, фракций гистонов и т.д. Разработанная методика позволила повысить чувствительность и точность определения элементов, стандартизировать отдельные этапы анализа, исследовать и расшифровать сложные гамма-спектры биологических образцов, облученных в поле ядерного реактора. Особое внимание уделялось подготовке образцов до облучения, вопросам постоянства геометрии и сохранности проб, повышению производительности, оценке загрязнений, подготовке и аттестации стандартных образцов.

Повышение чувствительности и точности определения элементов достигалось:

- облучением анализируемых образцов в низкотемпературном канале, позволяющем увеличить длительность облучения без риска потери анализируемых элементов за счет их улетучивания в процессе радиационного нагрева;

- созданием конденсационно-адсорбционного лиофилизатора, позволяющего высушивать жидкие и твердые биоматериалы с сохранением их нативных свойств;

- разработкой специальной методики изготовления таблеток из биообразцов, высушенных в этой установке, что позволяет увеличить производительность анализа;

- созданием новых по своему составу стандартных образцов на фенол-формальдегидной основе, позволяющих исключить интерференцию фотопиков анализируемых элементов в гамма-спектрах исследуемых образцов.

Научная новизна. Впервые исследованы и разработаны методические приемы инструментального нейтронно-активационного анализа биомакромолекул. Достигнуты высокие чувствительности определения элементов для реальных биологических образцов. Высокая производительность и надежность результатов инструментального нейтрон-но-активационного анализа биологических объектов определяется созданием комплексных систем и установок оригинальной конструкции, обеспечивающих высушивание и таблетирование, при максимальной сохранности проб, облучением образцов в поле ядерного реактора в условиях низких температур, а также созданием и использованием специальных аттестованных синтетических стандартных образцов на основе фенол-формальдегидной смолы.

Впервые исследуется микроэлементный состав ядерных белков гистонов и фракций гистонов. Определены в них концентрации селена, ртути, хрома, сурьмы, серебра, скандия, рубидия, железа, цинка и кобальта.

Впервые изучается микроэлементное содержание нуклеиновых кислот и гистонов, выделенных из человеческих лейкозных клеточных культур.Показано,что аргинин-богатая фракция гистонов содержит более высокие концентрации тяжелых металлов,и что именно эта фракция более эффективно ингибирует синтез РНК в лимфоцитах человека.

На защиту выносятся следующие положения и результаты:

1. Разработка высокочувствительного метода многоэлементного нейтронно-активационного анализа макромолекулярных препаратов -белков и нуклеиновых кислот.

2. Экспериментальные результаты созданных методов экспрессной лиофильной сушки биологических образцов, их таблетизации и низкотемпературного облучения.

3. Результаты изучения и расшифровки гамма-спектров активированных проб биомакромолекул: ДНК, РНК, ядерных белков гисто-нов.

4. Результаты создания, испытания и аттестации новых по композиционному составу синтетических стандартных образцов на фенол-формальдегидной основе.

Практическая значимость работы. Усовершенствованный метод инструментального нейтронно-активационного анализа применяется для решения специальных задач молекулярной биофизики и биохимии, а также в медико-биологических исследованиях, проводимых на субклеточном и молекулярном уровнях.

Испытано и находится в постоянном пользовании конденсацион-но-адсорбционное устройство для массового высушивания биологических образцов. Высушенные в этой установке биологические препараты сохраняют нативные свойства и могут быть успешно использованы для дальнейших биохимических исследований. Поэтому конден-сационно-адсорбционное устройство можно применить для лиофилиза-ции препаратов в молекулярной биологии, биохимии и медицине.

Способ подготовки образцов в виде таблеток находит постоянное применение при активационном определении микроэлементного состава цельной крови, тканей, белков и нуклеиновых кислот.

Предлагаемый в работе способ таблетирования и облучения образцов может быть использован в биологии, медицине и сельском хозяйстве при изучении элементного состава различных объектов с помощью инструментального нейтронно-активационного анализа.

Предлагаемые в работе, новые по составу, стандартные образцы на фенол-формальдегидной основе также находят постоянное применение при проведении массового анализа биологических объектов в отделе спектральных исследований биополимеров Института физики АН Грузинской ССР.

На устройство для лиофилизации жидких и твердых биоматериалов и способ подготовки биологических образцов для актива-ционного анализа получены авторские свидетельства ГК СССР по делам изобретений и открытий.

Апробация работы: Основные результаты диссертации были доложены на П совещании по применению методов ядерной физики в смежных областях (г. Дубна, 1976), на Юбилейной конференции Тбилисского государственного университета (г. Тбилиси, 1981), на Ш Всесоюзном совещании по ядерно-физическим методам анализа в контроле окружающей среды (г. Рига, 1982), на П и Ш Международных совещаниях по ядерно-физическим методам (г. Дрезден, ГДР, 1979, 1983).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 14 работ. Среди них 2 авторских свидетельства, 9 статей и 3 работы в виде тезисов.

Объем и структура. Диссертация состоит из введения, шести глав и выводов, а также библиографии из 192 наименований. Содержание изложено на 148 страницах, иллюстрировано 28 рисунками и 28 таблицами.

Заключение диссертации по теме «Физика атомного ядра и элементарных частиц», Харабадзе, Нана Езекиевна

ВЫВОДЫ

1. С целью разработки высокочувствительной мультиэлемент-ной методики инструментального активационного анализа детально исследованы спектры гамма-излучения активированных проб биомакромолекул (ДНК, РНК, гистонов и фракций гистонов). На основе расшифровки сложных гамма-спектров этих образцов были одновременно определены интенсивности восемнадцати аналитических фотопиков для радионуклидов индуцированных в основном по ( п. , $ ) реакциям в потоке нейтронов ядерного реактора.

2. Исследован спектральный состав внешнего фона. Показано, что основные фотопики в фоновом гамма-спектре обусловлены излучением радионуклидов и -238 ц Т^ -232, входящих в состав земной коры, строительного материала, и космическим излучением.

3. Показана возможность повышения производительности (одновременно можно облучить 60 образцов) и надежности анализа путем таблетирования проб. Впервые в практике ИНАА разработаны способы стандартизации биологических образцов в виде таблеток, строго определенной геометрической формы; исследовано возможное загрязнение проб при таблетировании.

4. Показана возможность повышения производительности и надежности анализа путем использования созданного нами конденса-ционно-адсорбционного лиофилизатора, позволяющего одновременно обезвоживать большое количество биообразцов за счет создания вакуума глубокоохлаждаемым адсорбером. Этот прибор позволяет высушивать биологические образцы без риска их загрязнения микроэлементами внешней среды и с сохранением нативных свойств, что особенно важно для последующей таблетизации образцов.

5. Показано, что при высокотемпературном облучении образцов происходят неконтролируемые потери элементов за счет их радиационного нагрева (что увеличивает погрешность анализа), в связи с чем предложено облучение проб в специальном низкотемпературном канале ядерного реактора, позволяющем поддерживать заданную температуру.

6. С целью повышения точности анализа изготовлены, испытаны и внедрены в практику ИНАА биологических материалов новые по композиции синтетические стандартные образцы на основе фенол-формальдегидной смолы, позволяющие проводить многоэлементные нейтронно-активационные определения состава биологических матриц с минимальными возможными постоянными систематическими погрешностями.

7. На основе проведенных исследований разработаны методики определения восемнадцати элементов в миллиграммовых навесках биомакромолекул с пределами обнаружения в интервале от микрограммов (для кальция и натрия) до сотых нанограммов (для золота и скандия).

8. Проведена метрологическая и технико-экономическая оценка разработанной методики: предлагаемый в работе метод высушивания и таблетирования биологических образцов дает качественно новые результаты, а стоимость анализа уменьшается на порядок за счет одновременного облучения в потоке нейтронов большого числа проб.

9. Разработанная методика была использована для решения практических задач, связанных с определением элементного состава ДНК РНК, гистонов и фракций гистонов. Было показано: а) наличие восемнадцати элементов в препаратах нуклеиновых кислот, выделенных из клеточных культур и опухолей, индуцированных у новорожденных хомячков различными штаммами клеток человеческих лейкозных культур; б) наличие эндогенносвязанных элементов в ядерных белках, гистонах и их фракциях; с) корреляция между содержанием металлических ионов в фракциях гистонов и Рг опухолевых клеток и эффектом подавления синтеза РНК нормальных фибробластов этими фракциями гистонов; фракция гистонов опухолевых клеток подавляет синтез

РНК нормальных фибробластов интенсивнее, чем фракция Р4 и фракция гистонов ^ оказалась более богатой связанными металлическими ионами чем фракция .

Автор приносит глубокую благодарность академику АН ГССР Элевтеру Луарсабовичу Андроникашвили, определившему направление настоящих исследований, за руководство и высокую требовательность в процессе выполнения представляемой работы.

Большинство приведенных в диссертационной работе исследований было выполнено под руководством Л.М.Мосулишвили, за что автор выражает ему свою благодарность.

Автор считает своим приятным долгом поблагодарить сотрудников отдела спектральных исследований биополимеров Института физики АН Грузинской ССР А.И.Белокобыльского, Е.Ю.Ефремову, Н.И. Шония и Э.Н.Гинтури за совместно выполненные работы.

Автор признателен сотрудникам ядерного реактора и криогенной станции, от работы которых зависело своевременное проведение экспериментов.

- 129

Список литературы диссертационного исследования кандидат физико-математических наук Харабадзе, Нана Езекиевна, 1984 год

1. Mitchell J.W. State-of-the-Art Contamination Control Techniques for Ultratrace Elemental Analysis.- Radioanal.Chem. 1982, v.69, No 12, p.47-105.

2. Вернадский В.И. Биогеохимические очерки. М., АН СССР, 1940.

3. Вернадский В.И. Избранные сочинения. М., АН СССР, 1954.

4. Underwood E.J. Trace Elements in Human and Animal Nutrition. Acad.Press, New York and London, 1977.

5. Mertz V. The Essential Trace Elements.- Science, 1981, v.213, No 4514, p.1332-1338.

6. Бруке P.P. Загрязнения микроэлементами. В кн.: Химия окружающей среды, под ред. Дж.О.М.Бокриса. М., Химия, 1982.

7. Morrison G.H. Elemental Trace Analysis of Biological Materials.- Crit.Rev.Anal.Chem.(CRC), 1979, v.8, No 3, p.287-320.

8. Венчиков А.И. Биотики. M., Медицина, 1962.

9. Eichhorn G.L. Metal Ions as Stabilizers or Destabilizers of the Deoxyribonucleic Acid Structure.- Nature, 1962, v.194, No 4827, p.474-475.

10. Eichhorn G.L., Clark P., Tarien E. The Interaction of Metal Ions with Polynucleotides and Related Compounds.- Biol.Chem. 1969, v.244, No 4, p.937-942.

11. Daune M. Interactions des Ions Metalliques avec le DNA. I.Com-portement de Polyelectrolyte et Liaison des Ions Compensateur. Biopolymers, 1969, v.7, p.659-670.

12. Zimmer Ch., Luck G., Holy A. CD Studies of the Conformation of Oligonucleotides Complexed with Divalent Metal Ions: Interaction of Zn2+ with Guanine Favours Syn Conformation.- Nucleic Acids Research, 1976, v.3, No 10, p.2757-2765.

13. Эйхгорн Г.Н. Взаимодействие ионов металлов с нуклеиновымикислотами. Сб. под ред. Г.Н.Эйхгорна. Неорганическая био- 130 химия, М., Мир, 1978, т. II, с. 662-713.

14. Springgate С.P., Mildvan A.S., Abramson R., Engle I.L., Loeb L.A. Escherichia coli Deoxyribonucleic Acid Polymerase, a Zinc Metalloenzyme.- Journal of Biolog.Chem. 1973, v.248, No 17, p. 5987-5993.

15. Auld D.S., Kawaguchi H., Livingston D.M., Vallee B.L. Reverse Transcriptase from Avian Myeloblastosis Virus: A Zinc Metalloenzyme.- Biophys.Res.Commun.,1974, v.57, p.967-972.

16. Auld D.S., Kawaguchi H., Livingston D.M., Vallee B.L. RNA-De-pendent DNA Polymerase (Reverse Transcriptase) from Avian Myeloblastosis Virus: A Zinc Metalloenzyme.- Proc.Nat.Acad.Sei. USA, 1974, V.71, p.2091-2097.

17. Scrutton M.C., Wu C.W., Goldthwait P.A. The Presence and Possible Role of Zinc in RNA Polymerase Obtained from Escherichia coli.- Proc.Nat.Acad.Sei., USA, 1971, v. 68, No 197, p.2497-2509.

18. Wacker W.E.C., Vallee B.L. Nucleic Acids and Metals.- Journal of Biological Chem.,1959, v.234, No 12, p.3257-3262.

19. Puwa K., Wacker W.E.C., Druym K., Bartholomay A.F., Vallee B.L. Nucleic Acids and Metals. II. Transition Metals as Determinants of the Conformation of Ribonucleic Acids.- Proc.Nat. Acad.Sei., USA, I960, v.46, No 10, p.1238-1307.

20. Loring H.S., Waritz R.S. Occurrence of Iron, Copper, Calcium and Magnesium in Tobacco Mosaic Virus.- Science, 1957, v.125, No 3249, p.646-648.

21. Stehlik G., Altman H. Die Anwendung der Neutronenaktivierungsanalyse auf Spureneleraentuntersuchungen in Nuklein Säuren.-Monatshafte für Chemie, 1963, v.97, No 6, p.1163-1177.

22. Белокобыльский А.И., Гинтури Э.Н., Мосулишвили Л.М., Хара-бадзе Н.Е. Исследование следовых количеств атомов некоторых тяжелых металлов в ДНК и РНК методом активационного анализа.- Биофизика, 1968, т. 13, 1> 6, с. 950-954.

23. A.c. 232588 (СССР). Способ определения металлов в нуклеиновых кислотах. / Белокобыльский А.И., Гинтури Э.Н., Мосулишвили Л.М., Харабадзе Н.Е.

24. Wacker W.E.C. Nucleic Acids and Metals. III. Changes in Nucleic Acid Protein and Metal Content as a Consequence of Zinc Deficiency in Euglena gracilis.- Biochemistry, 1962, v.1, No 5, p.858-865.

25. Guille E., Grisvard J., Sissoeff I. Structure and Function of Metallo-DNA in the Living Cell.- Biocompatibility, C.R.C. Press, Palm Beach, USA, 1979, v.5, p.1-45.

26. Sissoeff I., Grivard J., Guille E. Studies on Metal Ions-DNA Interactions: Specific Behaviour of Reiterative DNA Sequences.- Prog, in Biophysics and Molecular Biology, 1976, v.31, No 2, p.165-199.

27. Weser U. Reaction of Some Transition Metals with Nucleic Acids and their Constituents.- Structure and Bonding, 1968, v.5, p. 41-67.

28. Eichhorn G.L., Shin I.A. Interaction of Metal Ions with Poly-nucleotidös and Related Compounds.- J.Amer.Chemie.Society, 1968, v.90, No 26, p.7323-7328.

29. Butzow I.I., Eichhorn G.L. Interaction of Metal Ions with

30. Nucleic Acids and Related Compounds. XVII. On the Mechanismof Degradation of Polyribonucleotides and Oligoribonucleoti-des by Zinc (II) Ions.- Biochemistry, 1971, v.10, No 11, p.2019-2027.

31. Hiai S. Effect of Cupric Ions on Thermal Denaturation of Nucleic Acids.- J.Mol.Biol., 1965, v.11, No 4, p.672-691.

32. Thomas C.A. The Interaction of HgCl2 with Sodium Chemonucle-ate.- J.Amer.Chem.Soc. 1954, v.76, No 24, p.6032-6034.

33. Katz S. The Reversible Reaction of Hg(II) and Double-Stranded Polynucleotides. A Step-Function Theory and its Significance.-Biochem. et Biophys. Acta, 1963, v.68, No 2, p.24-253.

34. Jamane T., Davidson N. On the Gomplexing of Desoxyribonucleic Acid (DNA) by Mercury Ion.- J.Amer.Chem.Soc. 1961, v.83, No 12, p.2599-2607.

35. Zimmer Ch. Interaction of Zinc (II) Ions with Native DNA.-Studia Biophysica, 1973, v.35, No 2, p.115-121.

36. Lieberman I., Ove P.I. Deoxyribonucleic Acid Synthesis and its Inhibition in Mammalian Cells Cultured from the Animal.-J.Biol.Chem. 1962, v.237, No 5, p.1634-1642.

37. Fujioka M., Lieberman I. A Zinc++ Requirement for Synthesis of Deoxyribonucleic Acid by Rat Liver.- J.Biol.Chem. 1964, v.239, No 4, p.1164-1167.

38. Weser U., Scelr S., Warnecke P. Reactivity of Zn++ on Nuclear DNA and RNA Biosynthesis of Regenerating Rat Liver.- Bioch. Biophys. Acta, 1969, v.179, No 2, p.422-428.

39. Rubin H. Inhibition of DNA Synthesis in Animal Cells by Ethylene Diamine Tetraacetate and its Reversal by Zinc.-vProc. Nat.Acad.Sei., USA, 1972, v.69, No 3, p.712-716.

40. Sandstead H.H., Rinaldi R.A. Impairment of Deoxyribonucleic

41. Acid Synthesis Ъу Dietary Zinc Deficiency in the Rat.- Cell Physiol. 1979, v.73, p.81-88.

42. Swenerston H., Shraged R., Hurley L.S. Zinc-Deficient Embryo-sys Reduced Thymidine Incorporation.- Science, 1969, v.166, No 3908, p.88-89.

43. Школьник M.Я., Маевская А.H. Значение бора в нуклеиновом обмене.- Физиология растения, 1962, т.9, № 3, с. 270-278.

44. Школьник M.Я. Микроэлементы и нуклеиновые кислоты. Успехи современной биологии, 1969, т. 67, № I, с. 3-23.

45. Рамм Е.И., Бирштейн Т.М., Болотина И.А., Волькенштейн М.В., Воробьев В.И., Дмитренко Л.В., Некрасова Т.Н. Исследования структуры гистонов. Мол. биология, 1970, т. 4, № I,с. II8-129.

46. Буш Г. Гистоны и другие ядерные белки. М., Мир, 1967.

47. Рамм Е.И., Болотина И.А., Волькенштейн В.М., Воробьев В.И. Исследование конформации гистонов методом оптической вращательной дисперсии. Мол. биология, 1968, т. 2, с.818-825.

48. Лимборская С.А. О роли гистона FA в ингибировании транскрипции повторяющихся нуклеотидных последовательностей ДНК. -Мол. биология, 1973, т. 7, с. 124-139.

49. Поспелов В.А., К.Норре B.I., Салганик Р.И. Действие гистонов на транскрипции полирибо- и полидезоксирибонуклеотиды. -Мол. биология, 1971, т. 5, с. 840-845.

50. Варшавский А.Ю. Структурная организация хроматина. Успехисовременной биологии, 1976, т. 81, с. 209-222.

51. Kornberg R.D. Chromatin Structure: Unit of Histones and DNA.

52. Science, 1974, v.184, No 4, p.868-871.

53. Kornberg R.D., Thomas I.Q. Chromatin Structure: Oligomers of the Histones.- Science, 1974, v.184, No 4, p.865-868.

54. Kornberg R.D. Structure of Chromatin.- Ann.Rev.Biochem. 1977, v.46, p.931-954.

55. McGhee I.D., Rar G.R., Charney E., Felsenfeit G. Orientation of the Nucleosome within the Higher Order Structure of Chromatin.- Cell, 1980, v.22, p.87-96.

56. Pinch I.I., Klug A. Solenoidal Model for Superstructure in Chromatin.- Proc.N.A.C., P.N.A.S. USA, 1976, v.73, p.1891-1901

57. Felsenfeld G. Chromatin.- Nature, 1978, v.271, p.115-122.

58. Thoma F., Koller Т., Klug A. Involvement of Histone H1 in the Organization of the Nucleosome and of the Salt-Dependent Superstructure of Chromatin.- Cell Biol., 1979, v.83, p.403-427.

59. Bryan S.E., Hardy I., Simons S. Intranuclear Localization of Mercury in vivo.- Science, 1974, v.186, p.832-833.

60. Johns E.W., Butler I.A.V. Further Fractionations of Histones from Calf Thymus.- The Biochemical J., 1962, v.82, No 1, p. 15-18.

61. Johns E.W., Phillips D.M.P., Simson P., Butler I.A.V. Improved Fractionations of Arginine-Rich Histones from Calf Thymus.-The Biochemical J. 1961, v.77, No 3, p.227-232.

62. Серебров А.И., Донецкая О.Л. Профессиональные новообразования. Л., Медицина, 1976.

63. Sirover М.А., Loeb L.A. On the Fidelity of DNA Replication. Effect of Metal Activator during Synthesis with ДШГ DNA Polymerase. JrBiol.Chem., 1977, v.252, N.ll, p.3605-3610.

64. Андроникашвили Э.Л., Мосулишвили Л Л., Белокобыльский А.И., Манджгаладзе Б.П., Харабадзе Н.Е., Ефремова Е.Ю., Связывание следовых количеств некоторых элементов нуклеиновыми кислотами злокачественных опухолей. ДАН СССР, 1970, т. 195, № 4, е., 979-982.

65. Flessel С.Р., Fürst А., Radding S.B. A Comparison of Carcinogenic Metals.- In: Metal Ions in Biological Systems. Marcel Dekker Inc., New York and Basel, 1980, v.10, p.23-54.

66. Andronikashvili E.L., Mosulishvili L.M. Human Leukemia and

67. Trace Elements. In: Metal Ions in Biological Systems. Marcel Dekker Inc., New York and Basel, 1980, v.10, p.167-207.

68. Hrgovcic M., Tessmer O.P., Thomas P.В., Ong P.S., Gauble G.P., Shullenberger E.G. Serum Copper Observations in Patients with Malignant Lymphoma.- Cancer, 1973, v.32, No 6, p.1512-1524.

69. Hrgovcic M,, Tessmer C.P., Minckler T.M., Mosier В., Taylor G. H. Serum Copper Levels in Lymphoma and Leukemia.- Cancer, 1968, v.91, p.743-755.

70. Бала Ю.М., Лифшиц В.M. Хром при лейкозах животных и человека. Труды Воронежского мед. ин-та, 1975, т. 75, с. 6-12.

71. Сорока В.Р., Коган И.А. Содержание некоторых микроэлементов в крови при хроническом лимфолейкозе. Пробл. гематологии и переливания крови, 1969, № 4.

72. Сыркин A.M., Тимакин Н.П. Содержание марганца, никеля и цинка в плазме крови у больных различными формами лейкоза. Сб.: Вопросы радиобиологического и биологического действия цито-статистических препаратов. Томск, Томский у-т, 1969.

73. Бала Ю.М., Лифшиц В.М. Клиническое значение микроэлементов при лейкозах и анемиях. Пробл. гематологии и переливания крови, 1965, JS 5.

74. Бала Ю.М., Лифшиц В.М. Содержание микроэлементов в крови при лейкозах и анемиях. Пробл. гематологии и переливания крови, 1965, $ 6.

75. Попова Л.В., Мазуха C.B. Микроэлементы и нуклеиновые кислоты в лейкоцитах при различных формах лейкоза. Труды Воронежского мед. ин-та, 1975, т. 96, с. 6.

76. Бала Ю.М., Лифшиц В.М., Козырев A.A., Мазуха C.B. Нуклеиновые кислоты и содержание металлов в субклеточных структурах. Пробл. гематологии и переливания крови, 1976, Л II, с.236-239.

77. Андроникашвили Э.Л. О возможном механизме терапевтическогодействия ионизирующей радиации. Сообщ. АН ГССР, т. 68, № 2, с. 313-316.7 6. Виноградов А.П. Микроэлементы в жизни растений и животных. М., 1952.

78. Вернандский В.И. Химический состав живого вещества. М., 1962.

79. Войнар А.И. Микроэлементы в живой природе. М., Высшая школа. 1962.

80. Венчиков А.И. Микроэлементы и их роль в норме и патологии. Клиническая медицина, I960, т. 38, I? 6, с. 6-II.

81. Бала Ю.М., Лифшиц В.М. Микроэлементы в клинике внутренних болезней, ВГУ, Воронеж, 1973.

82. Коломийцева М.Г., Габович Р.Д. Микроэлементы в медицине, М., Медицина, 1970.

83. Бабенко Г.А. Микроэлементы в медицине.Киев,"Здоров'я",1974.

84. Боуэн Г., Гиббоне Д. Радиоактивационный анализ. М., Атом-издат, 1968.

85. Bowen H.J.M. Trace Elements in Biochemistry. Acad.Press, London and New York, 1966.

86. Kharasch N. Trace Elements in Health and Disease. Raven Press, New York, 1979.

87. Кист А.А. Биологическая роль химических элементов и периодический закон, Ташкент, ФАН Узб. ССР, 1973.

88. Ноздрюхина Л.Р. Биологическая роль микроэлементов в организме животных и человека. М., Наука, 1977.

89. Шустов В.А. Микроэлементы в гематологии. М., Медицина, 1967.

90. Meinke W.W. The Ultimate Contribution of Nuclear Activation to Analysis.- Radioanal.Chem. 1973, v.15, No 2, p.419-433.

91. Meinke W.W. Trace-Element Sensitivity: Comparison of Activation Analysis with Other Methods.- Science, 1955, v.121, No 2, p.177-184.

92. Meinke W.W. Sensitivity Charts for Neutron Activation Analysis.- J.Anal.Chem., 1959, v.31, No 5, p.792-795.

93. Яковлев Ю.В., Кулак А.И., Рябухин В.А., Рычков P.C. Определение малых количеств примесей в чистых веществах методом ра-диоактивационного анализа. В кн.: П МК МИАЭ, Женева, М., 1959, т. 4, с. 280-296.

94. Алишарин И.П., Яковлев Ю.В. В кн.: Ядерно-физические методы анализа веществ., М., Атомиздаг, 1971, с. 5-14.

95. Пелекис З.Э., Пелекис Л.Л. Примененные спектрометра для определения селена в тканях и органах животных. В кн.: Активационный анализ, Рига, "Зинатне", 1976, с. 149-154.

96. Гунне Х.Э., Пелекис Л.Л. Роль статистического характера излучения в выборе критерия чувствительности нейтронно-актива-ционного анализа. В кн.: Нейтронно-активационный анализ, Рига, "Зинатне", 1966, с. 5-14.

97. Тустановский В.Т. Оценка точности и чувствительности акти-вационного анализа, М., Атомиздат, 1976.

98. Булатов Б.П. Состояние и перспективы развития современных полупроводниковых детекторов ионизирующих излучений. -Атомная энергия, 1971, т. 30, № 3, с. 285-295.

99. Рыбкин С.М. Полупроводниковые счетчики спектрометры ядерных излучений. - Физика и техника полупроводников, 1967.

100. Hollander I.M., Perlman I. The Semiconductor Revolution in Nuclear Radiation Counting.- Science, 1966, v.154, p.84-89.

101. Girardi F., Guzzi G., Pauly I. Application of Lithium-Drifted Germanium Solid-State Detectors to the Determination of Hafnium in Zirconium Oxide by Activation Analysis.- Radiochem. Acta, 1965, v.4, No 2, p.109-115.

102. ЬатЪ I.P., Prussin S.G., Harris I.A. Application of Lithium-Drifted Germanium Gamma Ray Detectors to Neutron Activation Analysis.- Analytical Chem., 1966, v.38, No 7, p.813-818.

103. Сухов E.B., Фирсов В.И. Количественный радиоактивационныйанализ с германий-литиевым счетчиком. Тезисы докл. II Всесоюзного совещания по активационному анализу. Ташкент,1968, с. 34-35.

104. Guinn V.P. Activation Analysis of Biological Samples for Trace Elements.- Trans.Amer.Nucl.Soc.,1969, v.12, p.457-462.

105. Yule H.P. Reactor Neutron Activation Analysis.- Analytical Chem.,1966, v.38, No 7, p.818-821.

106. Nadkarni R.A., Plieder D.E., Elmann N.D. Instrumental Neutron Activation Analysis of Biological Materials.- Radiochem.Acta,1969, v.11, p.97-108.

107. Nadkarni R.A. Role of Neutron Activation Analysis in Biomedical and Environmental Studies.- Radioanal. Letters, 1974, v. 19, p.17-28.

108. Nadkarni R.A., Morrison G.M. Multielement Instrumental Neutron Activation Analysis of Biological Materials.- Anal.Chem. 1973, v.45, p.1957-1969.

109. Кист А.А., Лобанов E.M. Радиоактивационный метод в биологии и медицине. В кн.: Активационный анализ биологических объектов, ФАН Узб. ССР, Ташкент, 1967, с. 130-159.

110. Кист А.А., Жук Л.И. Применение активационного анализа в медицине в ИЯФ АН Узб.ССР. Сб.: Ядерно-физические методы элемент, анализа в биологии и медицине.Обнинск,1980,с. 17-25.

111. Kostadinov I.,Djingova R. Trace Element Analysis of Biological Materials Ъу Thermal and Epithermal Neutron Activation Analysis.- Radioanal.Chem.,1981, v.63, No 1, p.5-12.

112. Bernhard U., Kaaperek K., Hock A., Vyska K., Preindlieb Ch., Peinendegen L.E. Changes in Trace Element Concentrations in Human Serum after Parenteral Application of Amino Acids.- Radioanal. Chem.,v.37, No 1-2, p.381-391.

113. Лобанов Е.Я., Маликов P.M. Определение микроколичеств марганца в цельной крови человека методом радиоактивационногоанализа. Сб.:Активационный анализ биологических объектов, Ташкент, ФАН Узб.ССР, с. 53-56.

114. ИЗ. Кист А.А., Крыжевникова Н.А., Лобанов Е.М., Солодовникова Н.И. О суточном постоянстве элементного состава крови человека (I хлор, фосфор). Сб.: Активационный анализ биологических объектов. Ташкент, ФАН Узб. ССР, с. 73-78.

115. Heller W.A., Filby R.H., Rancitelly L.A. The Determination of Elemental Concentrations in Blood by Neutron Activation Analysis.- Nucl.Appl.,1969, v. 6, p.365-368.

116. Versieck I., Van Lallenbergne L., Lemey G., Barbier P., Cornells R., De Rudder I. Determination of Molybdenum of Serum. -Trace Elem.Anal.Chem.Med. and Biol.Proc. 1st Int. Workshop, Neurberg, 1981, p.273-283.

117. Cornelis R., Versieck I., Mees L., Hoste I., Barbier P. Determination of Vanadium in Human Serum by Neutron Activation Analysis.- Radioanal.Chem.,1980, v.55, No 1, p.35-45.

118. Nakahara H., Nagame Y., Yoshizava I., Oda H., Goton S., Mara-kami Y. Trace Element Analysis of Human Blood Serum "by Neutron Activation Analysis.- 1979, v.54, No 1-2, p.183-191.

119. Pösick U. Non-Destructive Neutron Activation Analysis of Copper in Liver Samples and Other Biological Materials.- Klin. Chem. and Klin.Biochem. 1977, v.11, No 15, p.615-619.

120. Sato T., Kato T. Determination of Trace Elements in Various Organs of Rats by Thermal Neutron Activation Analysis.- Radio-anal.Chem., 1979, v.53, No 1-2, p.181-189.

121. Spreque S.M., Carrick I.T., Welkinson S.W., Mayor G.H. Determination of Nanogram Quantities by Nondestructive Neutron Activation Analysis,- Radioanal.Chem. 1979, v.52, No 2, p.421--427.

122. Renan C., Albrecht C., Jones D.T.L. Influence of Neoplasia on Zinc and Copper Levels in Murine Liver Cells.- Radioanal.Chem. 1982, v.70, No 1-2, p.9-21.

123. Turkstra I. The Multielement Analysis of Teeth and Other Biological Material by Instrumental Neutron Activation Analysis.-Anal.Biol.Mater.Proc.Conf., Pretoria, Oct. 1977, Oxford e.a., 1979, p.49-56.

124. Draskovic R.I., Iacimovic L.J., Draskovic R.S. Some Applications of Activation Analysis in Medicine.- Trace Elem.Anal. Chem.Med. and Biol.Proc. 1st Int. Workshop, Neurberg, Berlin -New York, p.179-181.

125. Damsgaard E., Ostergaard K., Heydorn K. Concentration of Selenium and Zinc in Human Kidneys.- Radioanal.Chem. 1982, v.70, No 1-2, p.67-76.

126. Draskovic R.I., Iacimovic L., Stojikevic M., Pajic M.,Filipo-vic V. Investigations of Some Elements Distribution in Dental Tissues by INAA as a Function of Ecological and Some Other Parameters, 1982, v.70, No 1-2, p.117-133.

127. Калашников B.M., Зайчик B.E. Инструментальное определение скандия, хрома, железа кобальта, цинка, селена, рубидия, серебра, сурьмы и ртути в костной ткани активацией нейтронами. Анал. химия, 1980, т. 35, № 3, с. 530-534.

128. Gibson R.S. The Trace Metal Status of Some Canadian Full Term and Low Birthweight Infants at One Year of Age.- Radioanal. Chem., 1982, v.70, No 1-2, p.175-189.

129. Houtman I.P.W., Bos A., Vis R., Cookson I.A., Tjioe P.S. Short Length Trace Element Fluctuations in Hair as Measured by NAA and PIXE.- Radioanal.Chem., 1982, v.70, No 1-2, p.191--209.

130. Obrusnik I., Starkov В., Blazek I., Bencko V. Instrumental Neutron Activation Analysis of Ply Ash Acrisols and Hair.-Radioanal.Chem. 1979, v.45, No1-2, p.311-325.

131. Imahori A., Fukushima I., Shiobara S., Yanagida I., Tomura K. Multielement Neutron Activation Analysis of Human Scalp Hair.-Radioanal.Chem.,1979, v.52, No 1, p.167-175.

132. Andronikashvili E.L., Mosulishvili L.M., Belokobilsky A.I. Analyse Instrumentale par Activation d'Albumines et d'Acides Nucleiques.- Radioanal.Chem. 1974, v.19, No 1, p.299-307.

133. Мосулишвили Л.М. Активационный анализ белков и нуклеиновых кислот перспективное направление в биологии и медицине. В кн.: Ядерно-физические методы элементного анализа в биологии и медицине. Обнинск, 1980, с. 26-32.

134. Andronikashvili E.L., Tkeshelashvili L.K., Mosulishvili L.M., Ginturi E.N., Shonia N.I. Metals in Ribonucleic Acids.- Abstracts of 5th Intern. Biophysics Congress, Copenhagen, 1975, p.297.

135. Girardi F., Marafonte E., Pietra R., Sabbioni E., Marchesini A. Application of Neutron Activation Analysis to Metallobiochemistry.- Radioanal.Chem. 1977, v.37, No 1-2, p.427-431.

136. Sabbioni E., Pietra R. Marafonte E. Metal Metabolism in Laboratory Animals and Human Tissues аз Investigated, by Neutron Activation Analysis: Current State and Perspectives.- Radioanal. Chem. 1982, v.69, Ho 1-2, p.381-397.

137. Terai M., Akabane A., Ohivo K., Sakurai S., Tsunoda F., Hashimoto K., Nishida G. An Application of Neutron Activation Analysis to Biological Materials.- Radioanal.Chem. 1979, v. 52, No 1, p.143-152.

138. Andronikashvili E.L., Mosulishvili L.M., Belokobilskiy A.I., Kharabadze N.E., Shonia N.I., Desai L., Foley G.E. Determination of Trace Elements in Nucleic Acids and Histones by Neutron Activation Analysis.- Biochem. 1976, v.157, p.529-533.

139. Murray R., Offord R.E. Use of Neutron Activation in the Characterization of Small Quantities of Nucleic Acids.- Nature, 1966, v.211, p.376-378.

140. Nadkarni R.A. Multielement Analysis of Biological Standards by Neutron Activation Analyses.- Radiochem. and Radioanal. Lett.,1977, v.30, No 5-6, p.329-340.

141. Rook H.L.The Determination of Iodine in Biological and Environmental Standard Reference Materials.- Radioanal.Chem. 1977,- 144 -v.39, No 1-2, p.351-358.

142. Becker R.R., Veglia A., Schmid E.R. Instrumental Neutron Activation Analysis of Standard Biological Materials.- Radio-chem.Radioanal.Lett., 1974, v.19, p.343-351.

143. Guzzi G., Pietra R., Sabbioni E. Determination of 25 Elements in Biological Standard Reference Materials by Neutron Activation Analysis.- Radioanal.Ghem.,1976, v.34, No 1, p.35-37.

144. Donev I.Y., Marichkova L.M. Determination of Elements in Standard Material (Bovine Liver SRM-1577).- NBS Special Publication 422, August, 1976, p.1293-1304.

145. McClendon L.T. Determination of Chromium in Biological Matrices by Neutron Activation of Standard Reference Materials.-Radioanal.Chem.,1978, v.42, p.85-91.

146. Iyengar G.V., Kasperek K., Feinendegen L.E. Determination of Certain Selected Bulk and Trace Elements in the Bovine Liver Matrix Using Neutron Activation Analysis.- Phys.Med.Biol., 1978, v.23, No 1, p.66-76.

147. Bowen H.I.M. Problems in Elementary Analysis of Standard Biological Materials.- Radioanal.Chem. , 1 974, v.19, p.215-226.

148. Murphy T.I. Sample Preparation.- U.S.Dep.Commer.Nat.Bur. Stand.Spec.Publ.,1977, p.5-8.

149. Harrison S.H., Lafleur P.O., Zollen S.H. Evaluation of Lio-philization for the Preconcentration of Natural Water Samples Prior to Neutron Activation Analysis.- Anal.Chem.,1975, v.47, p.1685-1690.

150. Koirtyohann S.R., Hopkins C.A. Losses of Trace Metals during the Ashing of Biological Materials.- Analyst, 1977, v.101, No 1208, p.870-875.

151. Maziere В., Gandry A., Gros I., Comar D. Biological Sample Contamination due to Quartz Container in Neutron Activation Analysis.- Radiochem.and Radioanal.Lett.,1977, v.28, No 2, p.155.163.

152. Зайчик В.Е., Цисляк Ю.В. Простое устройство для лиофилиза-ции биоматериалов. Лаб. дело, 1978, të 2, с. 104-105.

153. Budinger T.P., Farwell I.R., Smith A.R., Bichse L.H. Human Tissue Trace Element Detection by Neutron Activation without Chemical Separation.- Applied Radiation and Isotopes, 1972, v.23, No 2, p.49-56.

154. A.c. 397801 (СССР). Способ подготовки сыпучих образцов для активационного анализа / Амбарданишвили Т.С., Коломийцев M.А.

155. А.с. 800794 (СССР). Способ изготовления биологических образцов / Мосулишвили Л.М., Харабацзе Н.Е., Белокобыльский А.И.

156. Bowen H.I.M. The Production of Homogeneous Biological Material for Interlaboratory Comparison of Elementary Analysis.-In: "Modern Trends in Activation Analysis", Proceedings of 1965 International Conference, College Station, Texas, 1966, p.58-60.

157. Cali I.P. NBS, Certificate of Analysis of Standard Reference Material 1577 Bovine Liver, Washington, D.C. 20234, April 15, 197

158. Nadkarni R.A., Morrison G.H., Use of Standard Reference Materials as Multielement Irradiation Standards in Neutron Activation Analysis.- Radioanal.Chem.,1978, v.43, p.347-369.

159. A.c. 469367 (СССР). Эталоны для нейтронного активационного анализа / Коломийцев М.А., Дундуа В.Ю., Пачулия Н.В.

160. Mosulishvili L.M., Koloiytsev M.A., Dundua V.I., Shonia N.I., Danilova O.A. Multielement Standards for Instrumental Neutron Activation Analysis of Biological Materials.- Radioanal. Chem. 1975, v.26, No 1, p.175-188.

161. A.c. 526246 (СССР). Способ изготовления стандартов для горных пород / Коломийцев М.А.

162. А.с. 530220 (СССР). Способ изготовления стандартного образца для активационного анализа / Коломийцев М.А.

163. А.с. 602001 (СССР). Способ изготовления эталонов для нейт-ронно-активационного анализа / Коломийцев М.А., Дундуа В.Ю., Пачулия Н.В.

164. А.с. 786497 (СССР). Способ изготовления имитатора элементного состава костной ткани / Коломийцев М.А., Дундуа В.Ю.

165. А.с. 902593 (СССР). Способ изготовления эталона для нейт-ронно-активационного анализа / Коломийцев М.А., Дундуа В.Ю.

166. А.с. (Получено положительное решение). Способ изготовления эталона для НАА / Дундуа В.Ю., Чихладзе Н.В., Магдалянов С.И.

167. Brune D., Sansahl К., Wester P.O. A Comparison between the Amounts of As, Au, Br, Cu, Fe, Mo, Se and Zn in Normal and Uremic Human Whole Blood by Means of Neutron Activation Analysis.- Clin.Chim.Acta, 1966, v.13, No 3, p.258.

168. Brune D. , Jirlow K. Determination of Mercury in Aqueous Samples Ъу Means of Neutron Activation Analysis with an Account of Flux Disturbances.- J.Radiochem.Acta, 1967, v.8, No 3, p. 161-167.

169. Brune D. Aspects of Low Temperature Irradiation in Neutron Activation Analysis. "Modern Trends in Activation Analysis.У NBS Special Publication, 312, U.S. Governm. Printing Office, Washington D.С. 1969, No 1, p.203-206.

170. Brune D., Were H. Application of a Liquid Helium Cryostat in Neutron Activation Analysis of Fluids.- Anal.Chem.,1970, v. 42, No 4, p.511-514.

171. Мосулишвили JI.M., Кучава Н.Е. Некоторые аспекты использования холодного облучения в нейтронно-активационном анализе биологических материалов. Атомная энергия, 1979, т. 47, И, с. 392-393.

172. Андроникашвили Э.Л., Буда Б.Г., Девнозашвили Д.С., Кикнадзе Г.И., Кинцурашвили Э.С., Топчян Л.С., Чантурия В.М. Низкотемпературная петля ИРТ-2000. Сообщения АН ГССР, 1964, В 4, с. 45-52.

173. Вадачкория Н.А., Кацитадзе Д.Г., Мумладзе Ш.А., Наскидашвили И.А., Тавхелидзе Г.П., Топчян Л.С., Чипашвили А.А. Низкотемпературные вертикальные каналы реактора ИРТ-2000. Инженерно-физический журнал, 1973, № 3, с. 430-435.

174. Мосулишвили Л.М., Харабадзе Н.Е., Тевзиева Т.К. Спектральный состав излучения природного фона измеренного детектором высокого разрешения.-Атомн.энергия,т.35. Jf 4,1973.

175. Das Н.А., Faanhof A., van der Slot H.A. Errors in Instrumental Neutron Activation Analysis, I.- Radioanal.Chem.,1979, v. 54, No 1-2, p.289-302.

176. Das H.A., Faanhof A., van der Sloot. Errors in Instrumental Neutron Activation Analysis, II.- Radioanal.Chem.,1979, v.54, No 1-2, p.303-311.

177. Foley G.E., Lazarus H., Farber S., Uzman B.G., Boune B.A., Mc Carthy R.E. Continuous Culture of Human Lymphoblasts from Peripheral Blood of a Child with Acute Leukemia.- Cancer, 1965, v.18, No 4, p.522-529.

178. Adams R.A., Foley G.E., Uzman B.G., Färber S., Lazarus H. , Kleinman L. Leukemia: Serial Transplantation of Human Leukemic Lyraphoblasts in the Newborn Syrian Hamster.- Cancer Research, 1967, v.27, No 4, p.722-783.

179. Desai L.S., Adams R.A., Foley G.E. Solubilization and Characterization of Membrane Proteins.- Protides Biol. Fluids Proc. Colloq. 21 st, 1973, p.79-84.

180. Desai L.S., Foley G.E. Human Leukemic Cells: Inhibitory Effects of Isologous and Homologous Histones.- Experimental Cell Research, 1971, v.66, p.1-4.