Исследование роли Src-киназы и фосфатидилинозитол-3-киназы в эндоцитозе рецепторов эпидермального фактора роста тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.25, кандидат биологических наук Железнова, Надежда Николаевна

• Железнова, Надежда Николаевна
• кандидат биологических наук
• 2001

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Железнова, Надежда Николаевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1.Эпидермальный фактор роста и его рецептор.

2.2. Рецептор-опосредованный эндоцитоз.

2.2.1. Белки, регулирущие эндоцитоз.

2.2.2. Внутриклеточная компартментализация ЭФР-рецепторных комплексов.

2.2.3.Теории биогенеза эндосом.

2.3. Рецепторы семейства ЕгЬВ и ихлиганды.

2.4. Сигнальные пути, стимулируемые ЭФР.

2.5. Взаимосвязь между эндоцитозом и передачей сигнала

2.6. Киназы вгс-семейства.

2.6.1. Структурные домены киназ вгс-семейства.

2.6.2. Активация киназ Бгс-семейства.

2.7. Фосфатидилинозитол-З-киназы.

2.7.1. Ингибиторы ФИ-З-киназ

2.7.2. Роль ФИ-З-К в регуляции рецепторопосредованного эндоцитоза.

2.7.2.1. Роль ФИ-З-киназ в регуляции функций ранних эндосом.

2.7.2.2. Роль ФИ-З-киназ в образовании мультивезикулярных тел.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

3.1. Клеточные линии.

3.2.Обработка клеток ингибиторами.

3.3. Получение йодированного ЭФР.

3.4. Эксперименты по стимуляции эндоцитоза.

3.5. Анализ рециклирования.

3.6. Субклеточное фракционирование в градиенте плотности Перколла.

3.7. Константы эндоцитоза.

3.8. Иммунофлуоресцентное окрашивание клеток.

3.9. Получение мембранной и цитоплазматической фракций.

3.10. Электрофоретическое разделение белков.

3.11. Иммуноблоттинг.

3.12. Антитела.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ.

4.1. Исследование роли Src-киназы в регуляции эндоцитоза ЭФР-рецепторных комплексов.

4.1.1. Анализ динамики интернализации ЭФР-рецепторных комплексов в клетках с нокаутом гена Src.

4.1.2. Анализ участия Src-киназы в регуляции деградации 1251-ЭФР.

4.1.3. Анализ динамики рециклирования ЭФР-рецепторных комплексов в клетках WT и PURO.

4.1.4. Исследование влияния ингибитора киназ Src-семейства CGP77675 на эндоцитоз ЭФР-рецепторных комплексов в клетках HER14 и НС11.

4.1.5. Иммунофлуоресцентный анализ распределения ЭФР-рецепторных комплексов при действии CGP

4.1.6. Исследование распределения клатрина после стимуляции эндоцитоза ЭФР в клетках А431, WT и PURO.

4.2. Исследование роли фосфатидилинозитол-3-киназы в эндоцитозе ЭФР-рецепторных комплексов.

4.2.1. Анализ влияния вортманнина на динамику компартментализации рецептора ЭФР в клетках А431.

4.2.2. Сравнение эффекта вортманнина при низких (1 нг/мл) и высоких (200 нг/мл) концентрациях ЭФР.

4.2.3. Исследование эндоцитоза ЭФР-рецепторных комплексов при действии вортманнина с помощью метода

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АР - адапторные белки (adaptor proteins);

ARF - АДФ рибозилирующий фактор (ADP-ribosilation factor);

CSF-1 - колония-стимулирующий фактор (colony-stimulating factor);

DNA-PK -ДНК-зависимая протеинкиназа (DNA-dependent protein kinase);

EEA1 - белок, ассоциированный с ранними эндосомами (early endosome autoantigene);

GAPs - белки, активирующие ГТФазу (GTPase-activating proteins); GDI - ингибитор диссоциации гуанозинин-нуклеотидов (guanine nucleotide dissociation inhibitor);

GEFs - факторы обмена гуанозинин-нуклеотидов (guanosine nucleotide exchange factors);

GFP - зеленый флуоресцирующий белок (green fluorescence protein)

HP-EGF - гепарин-связывающий ЭФР (heparin-binding EGF);

HR - гомологичная область (homology region)

IRS-1 - субстрат рецептора инсулина (insulin receptor substrate-1).

LPA - лизофосфатидная кислота (lysophosphatidic acid);

NSF - N-этилмалеимид-чувствительный фактор (N-ethylmaleimidesensitive factor);

PBS - фосфатно-солевой раствор;

PTB - фосфотирозин-связывающие домены (РТВ);

REP - белок сопровождения для Rab (Rab escort protein);

SH2-flOMeHbi - домены Src-гомологичные (Src-homology domain 2);

SNAP - soluble NSF attachment protei*n;

SNAP - растворимые белки, ассоциированные с NSF;

TGN - сеть транс-Гольджи (trans-Golgi network);

TOR - мишень для рапамицина (target of Rapamycin); t-SNARE - интегральный мембранный белок, мишень для v-SNARE; v-SNARE - интегральный мембранный белок на везикуле;

АО - аминокислотные остатки (aminoacid residues);

БСА - бычий сывороточный альбумин (BSA, bovine serum albumin);

ДАГ - диацилглицерин (DAG);

И-З-Ф - инозитол-3-фосфат (l(3)P, inositol(3)phosphat);

ЛНП - липопротеины низкой плотности (low density lipoproteins);

MAP - mitogen-activated protein;

МВТ - мультивезикулярные тела (MVB; multivesicular bodies);

МВЭ - мультивезикулярные эндосомы (MVEs; multivesicular endosomes);

ОЯ - окаймленные ямки (coated pits);

ПКС - протеинкиназа С (PKC);

ПМ - плазматическая мембрана (РМ, plasma membrane);

САМ-киназа - кальмодулин-зависимая киназа;

TGF-a - трансформирующий фактор роста типа а;

ТК - тирозинкиназа (tyrosine kinase);

ТФ-Р - рецептор трансферрина (Tfr-R);

ТХУ - трихлоруксусная кислота;

ФВК - фосфорно-вольфрамовая кислота;

ФИ - фосфатидилинозитол;

ФИ-3,4,5,-Фз - фосфатидилинозитол-3,4,5-трифосфат;

ФИ-3,4,-Ф2 - фосфатидилинозитол-3,4,-дифосфат;

ФИ-З.Б-Фг - фосфатидилинозитол-3,5-дифосфат;

ФИ-З-К - фосфатидилинозитол-3-киназа (PI-3-K, phosphatidylinositol-3kinase);

ФИ-З-киназа - фосфатидилинозитол-3-киназа;

ФИ-З-Ф - фосфатидилинозитол-3-фосфат;

ФИ-4,5-Ф2- фосфатидилинозитол-4,5-дифосфат Р1-4,5-Р3;

ФЛСу - фосфолипаза Су (PLCy, phospholipasa Су);

ФРВТ - фактор роста, выделяемый тромбоцитами (PDGF, platelet derived factor growth);

ЭПР - эндоплазматический ретикулум (ER, endoplasmic reticulum); ЭФР - эпидермальный фактор роста (EGF, epidermal growth factor); ЭФР-рецептор - рецептор эпидермального фактора роста (EGF-R, receptor of epidermal growth factor);

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование роли Src-киназы и фосфатидилинозитол-3-киназы в эндоцитозе рецепторов эпидермального фактора роста»

Эпидермальный фактор роста (ЭФР) относится к группе полипептидных ростовых факторов, регулирующих пролиферацию, дифференцировку и апоптоз разных типов клеток. Биологическое действие ЭФР на клетки осуществляется через специфический рецептор, обладающий тирозинкиназной активностью и несколькими сайтами автофосфорилирования, находящимися на С-конце рецептора. При связывании ЭФР со своим рецептором на плазматической мембране (ПМ) происходит два ряда событий. Во-первых, инициируются сигнальные каскады, в результате чего происходит активация экспрессии определенных генов (Fantl et al., 1993). В этом процессе ключевую роль играет активация тирозинкиназы (ТК) рецептора: она стимулирует целый ряд сигнальных белков, фосфорилируя их по тирозину. Во-вторых, лиганд-рецепторные комплексы подвергаются эндоцитозу (Beguinot et al., 1984; Никольский и др., 1987; Ullrich, Schiessenger, 1990). К настоящему времени можно считать установленным, что ТК рецептора необходима не только для проведения сигнала, она также участвует в регуляции интернализации рецептора и сортировки его на путь деградации (Благовещенская и др., 1994; Соколова и др., 1995; Kornilova et al., 1996).

ЭФР-рецепторные комплексы интернализуются в основном через клатрин-окаймленные ямки (ОЯ) и попадают в ранние эндосомы, где и происходит их сортировка: часть лиганд-рецепторных комплексов попадает в поздние эндосомы, и в дальнейшем подвергается лизосомальной деградации, в то время как остальные, так же, как и рецепторы с неактивированной ТК, рециклируют из ранних эндосом обратно в плазматическую мембрану. Известно, что в ранних эндосомах рецептор достаточно долгое время экспонирован в цитоплазму С-концевым участком, содержащим активированную ТК и способен взаимодействовать с различными внутриклеточными субстратами (Kay et al., 1986; Корнилова и др., 1987). Очевидно, что соотношение между рециклированием и деградацией определяет в значительной мере длительность и/или интенсивность генерируемого на ПМ или в ранних эндосомах сигнала. Таким образом, чрезвычайно важное значение приобретают исследования механизмов регуляции таких стадий эндоцитоза, как интернализация и внутриклеточная сортировка рецепторов.

Для эффективной сортировки необходимо наличие активированной ТК и С-концевого домена рецептора (Соколова и др., 1995; Kornilova et al., 1996). Можно предполагать, что ТК в данном случае нужна для активации посредством ЭФР-зависимого фосфорилирования некоего определенного белка (или белков), опосредующего переход рецептора из ранних в поздние эндосомы. В этом смысле можно говорить о существовании рецептор-специфической, ТК-зависимой системы сортировки.

В ряде работ было показано, что ТК-зависимая сортировка является насыщаемой при относительно низких (1-10 нМ) концентрациях интернализованного ЭФР, при которых связывание с поверхностными рецепторами еще далеко от насыщения (Вдовина и др., 1993; French et al., 1994). Однако и при высоких концентрациях ЭФР, т.е. при высокой степени занятости рецепторов, происходит интернализация и сортировка, но параметры эндоцитоза в данном случае отличаются от параметров ТК-зависимого пути. Этот, так называемый ТК-независимый путь, по ряду характеристик схож с процессом эндоцитоза жидкофазных маркеров и лигандов рецепторов, не имеющих ТК активности (таких, как липопротеины низкой плотности (ЛНП), асиалогликопротеины), однако он происходит с эффективностью на порядок ниже (Вдовина и др., 1993). Конкретные механизмы обоих типов сортировки к настоящему моменту неизвестны, но можно предполагать, что в последнем случае переход в поздние эндосомы осуществляется только с помощью универсальной системы белков-регуляторов везикулярного транспорта, без вовлечения рецептор-специфических сортирующих белков. Взаимоотношения между двумя системами абсолютно не исследованы, не известны также и белки-мишени ТК рецептора, вовлеченные в регуляцию сортировки.

Зависимость эффективности интернализации и сортировки рецептора от активности его ТК указывает на то, что белки-регуляторы этих стадий являются ее субстратами. Сейчас известен целый ряд таких субстратов. Это адапторные белки She, GRB2, транскрипционные факторы семейства STAT, фосфолипаза Су (ФЛСу), фосфатидилинозитол-3-киназа (ФИ-З-К) и Src-киназа, а также ряд других белков (Moghal, Sternberg, 1999). Представляется весьма интересным исследовать возможность участия в регуляции эндоцитоза известных сигнальных белков, активируемых рецептором ЭФР, тем более что имеются данные о вовлечении некоторых из них в регуляцию различных транспортных путей. Например, показано, что дрожжевой белок VPS34, обладающий ФИ-З-киназной активностью, регулирует транспорт между поздними эндосомами и вакуолью (Schu et al., 1993). Существуют исследования, посвященные роли ФИ-З-К в регуляции эндоцитоза рецепторов ростовых факторов, однако они малочисленны и исчерпываются двумя работами о влиянии вортманнина (ингибитора ФИ-З-К) на эндоцитоз рецепторов фактора роста, выделяемого тромбоцитами (ФРВТ) (Joly et al., 1995; Shpetner et al., 1996). Однако в литературе нет данных о роли ФИ-З-К в регуляции эндоцитоза рецептора ЭФР.

В последние годы появились также работы, в которых показано, что Src-киназа, активирующаяся ЭФР-зависимым образом, может участвовать в регуляции интернализации рецептора (Ware et al., 1997). Существуют данные о том, что активированная Src-киназа способна фосфорилировать цитоплазматический клатрин (белок, который входит в состав окаймления ямок и везикул, через которые в основном происходит поступление ряда высокомолекулярных веществ в клетку) и вызывать его перемещение к ПМ (Wilde et al., 1999), тем самым увеличивая число ОЯ и ускоряя интернализацию рецептора ЭФР. К тому же, было показано, что активированная Src-киназа способна фосфорилировать динамин - белок, играющий ключевую роль в процессе замыкания ОЯ и превращения ее в окаймленную везикулу (Ahn et al., 1999). Однако, во-первых, упомянутые работы содержат целый ряд внутренних противоречий, во-вторых, совершенно не исследован вопрос о возможном влиянии Src на другие стадии эндоцитоза.

Таким образом, вопрос о роли ФИ-З-киназы и Src-киназы в эндоцитозе рецептора ЭФР остается нерешенным.

Заключение диссертации по теме «Гистология, цитология, клеточная биология», Железнова, Надежда Николаевна

выводы.

1. Отсутствие экспрессии c-Src практически не влияет на скорость интернализации и рециклирования ЭФР-рецепторных комплексов, и лишь в незначительной степени подавляет их деградацию.

2. Действие ингибитора активности Src-киназы CGP77675 приводит к достоверному снижению скорости интернализации, увеличению скорости рециклирования и падению скоростей сортировки и деградации, но эффект не превышает в среднем 20-30 % от контроля. Более выраженное действие CGP77675 может объясняться тем, что этот ингибитор влияет на активность не только самого c-Src, но также и других членов семейства Src-подобных киназ, в частности, Lck и Yes. Таким образом, отсутствие Src-киназы может компенсироваться действием других киназ этого семейства.

3. Показано, что стимуляция интернализации ЭФР-рецепторных комплексов не связана с изменением количества и локализации ОЯ и не приводит к увеличению ассоциации клатрина с ПМ. Этот факт свидетельствует о том, что активированные рецепторы ЭФР не являются сайтами инициации сборки ОЯ.

4. Вортманнин, ингибитор ФИ-З-К, практически полностью блокирует сортировку ЭФР-рецепторных комплексов, т. е. переход из ранних в поздние эндосомы, в клетках эпидермоидной карциномы человека линииА431.

5. Эффект токсина проявляется преимущественно при низких концентрациях ЭФР, когда функционирует в основном ЭФР-специфическая, ТК-зависимая система сортировки. Сравнение действия вортманнина на эндоцитоз рецептора ЭФР при низких и высоких концентрациях лиганда позволяют говорить о ФИ-З-киназе как о специфическом элементе ТК-зависимой сортирующей системы.

104

6. Вортманнин вызывает изменение морфологии ЭФР-рецептор-содержащих ранних эндосом, а именно, увеличение их размера и уменьшение числа. При этом, происходит накопление ЭФР-рецепторных комплексов в околоядерной области, которую рассматривают как область поздних эндосом. Однако, по данным субклеточного фракционирования органелл в градиенте Перколла, ЭФР-рецепторные комплексы локализуются преимущественно в ранних эндосомах и перехода в поздние практически не происходит. Таким образом, ранние эндосомы могут иметь околоядерную локализацию.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Железнова, Надежда Николаевна, 2001 год

1. Авров К.О., Благовещенская АД., Корнилова Е.С., Никольский H.H. 1996. Зависимость типа эндоцитоза от базального уровня активности тирозинкиназы рецептора эпидермального фактора роста. Цитология. 38(10): 1084-1091.

2. Благовещенская А.Д., Соколова И.П., Корнилова Е.С., Никольский H.H. 1994. Зависимость эндоцитоза эпидермального фактора роста от степени занятости рецепторов. Цитология. 36(7): 664-674.

3. Вдовина И.Б., Бурова Е.Б., Корнилова Е.С., Никольский H.H. 1993. Сравнительный анализ раннего и позднего эндоцитоза эпидермального фактора роста в клетках А431. Цитология. 35(2): 60-67.

4. Железнова H.H., Никольский H.H., Корнилова Е.С. 20016. Влияние вортманнина на эндоцитоз рецепторов эпидермального фактора роста. 43(2): 156-165.

5. Корнилова Е.С., Соркин АД., Никольский H.H. 1987. Динамика компартментализации эпидермального фактора роста в клетках А431. Цитология. 29(8): 904-910.

6. Никольский Н.Н., Соркин А.Д., Сорокин А.Б. 1987. Эпидермальный фактор роста. Л.: Наука. 200 с.

7. Ahn S., Maudsley S., Luttrell L, Lefkowitz R., Daaka Y. 1999. Scr-mediated tyrosine phosphorylation of dynamin is required for (^-adrenergic receptor internalization and mitogen-activated protein kinase signaling. J. Biol. Chem. 274: 1185-1188.

8. Alimandi M., Romano A., Curia M.C., Muraro R., Fedi P., Aaronson S.A., Di Fiore P.P., Kraus M.H. 1995. Cooperative signaling of ЕгЬВЗ and ErbB2 in neoplastic transformation and human mammary carcinomas. Oncogene. 10(9): 1813-1821.

9. Aniento F., Emans N., Griffiths G., Gruenberg J. 1993. Cytoplasmic dynein-dependent vesicular transport from early to late endosomes. J. Cell Biol. 123: 1373-1387.

10. Arcaro F., Wymann M.P. 1993. Wortmannin is a potent phosphoinositol 3-kinase: the role of phosphatidylinositol 3,4 phosphate in neutrophyl responses. Biochem. J. 296: 297-301.

11. Auger K.R., Serunian L.A., SoltoffS.P., Libby P., Cantley L.C. 1989. PDGF-dependent tyrosine phosphorylation stimulates production of novel polyphosphoinositides in intact cells. Cell. 57: 167-175.

12. Bastiaens P., Majoul I., Verveer P., Soling H.-D., Jovin T. 1996. Imaging the intracellular trafficking and state of the AB5 quaternary structure of cholera toxin. EMBO J. 15: 4246-4253.

13. Basu M., Biswas R., Das M. 1984. 42000 molecular weight EGF receptor has protein kinase activity. Nature. 311: 477-480.

14. Beguinot L., Liall R., Willingham M.C., Pastan I. 1984. Down-regulation of the epidermal growth factor receptor in KB cells is due to receptor internalization and subsequent degradation in lysosomes. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 110: 2384-2388.

15. Bondeva T., Pirola L., Bulgarelli-Leva G., Rubio I., Wetzker R., Wymann M.P. 1988. Bifurcation of lipid and protein kinase signals of PI3Kgamma to the protein kinases PKB and MAPK. Science. 282(5387): 293-296.

16. Bourne H.R., Sanders D.A., McCormick F. 1990. The GTPase superfamily: a conserved switch for diverse cell functions. Nature. 348: 125-132.

17. Bridges K., Harford J., Ashwell G., Klausner R.D. 1982. Fate of receptor and ligand during endocytosis of asialoglycoproteins by isolated hepatocytes. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 79: 350-354.

18. Brown M.T, Cooper J.A. 1996. Regulation, substrates and functions of src. Biochem. Biophys. Acta. 1287(2-3): 121-149.

19. Brown R.A., Domin J., Arcaro A., Waterfield M.D., Shepherd P.R. 1999. Insulin activates the a isoform of class II phosphoinositide 3-kinase. J. Biol. Chem. 274: 14529-14532.

20. Brugge J.S., Erikson R.L. 1977. Identification of a transformation-specific antigen induced by an avian sarcoma virus. Nature. 269: 346-348.

21. Burd C.G., Peterson M., Cowles C.R., Emr S.D. 1997. A novel Sec18p/NSF-dependent complex required for Golgi-to-endosome transport in yeast. Mol. Biol. Cell. 8: 1089-1104.

22. Callaghan J., Simonsen A., Gaullier J.M., Toh B.H., Stenmark H. 1999. The endosome fusion regulator early-endosomal autoantigen 1 (EEA1) is a dimer. Biochem J. 338: 539-543.

23. Carpenter C.L., Auger K.R., Chanudhuri M., Yoakim M., Schaffhausen B., Shoelson S., Cantley L.C. 1993. Phosphoinositide 3-kinase is activated by phosphopeptides that bind to the SH2 domains of the 85-kDa subunit. J. Biol. Chem. 268: 9478-9483.

24. Carpenter G. 1992. Receptor tyrosine kinase substrates: src homology domains and signal transduction. FASEB J. 6: 3283-3289.

25. Carpenter G., Cohen S. 1979. Epidermal growth factor. Ann. Rev. Biochem. 48: 193-216.

26. Carpentier J.-L., White M„ Orci L, Kahn R. 1987. Direct visualization of EGF-R. J. Cell Biol. 105: 2751-2762.

27. Chang H., Riese D.J., Gilbert W., Stern D.F., McMahan U.J. 1997. Ligands for ErbB family receptors encoded by a newly-characterized neuregulin-like gene. Nature. 387: 509-512.

28. Chavrier P., Parton R.G., Hauri H.P., Simons K., Zerial M. 1990. Localization of low molecular weight GTP binding proteins to exocytic and endocytic compartments. Cell. 62: 317-329.

29. Chen W.S., Lazar C.S., Poenie M., Tsien R.Y., CHI G.N., Rosenfeld M.G. 1987. Requirement for intrinsic protein tyrosine kinase in the immediate and late action of the EGF-receptor. Nature. 328: 820-823.

30. Christoforidis S., McBride H.M., Burgoyne R.D., Zerial M. 1999. The Rab5 effector EEA1 is a core component of endosome docking. Nature. 397: 621625.

31. Christoforidis S., Miaczynska M., Ashman K., Wilm M., Zhao L., Yip S.C., Waterfield M.D., Backer J.M., Zerial M. 1999a. Phosphatidylinositol-3-OH kinases are Rab5 effectors. Nature Cell Biol. 1(4): 249-252.

32. Coffer P.J., Kruijer W. 1995. EGF receptor deletions define a region specifically mediating STAT transcription factor activation. Biochem. Biophys. Res. Commun. 210(1): 74-81.

33. Collett M.S., Erikson R.L. 1978. Protein kinase activity associated with the avian sarcoma virus src gene product. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 75: 20212024.

34. Connoly J., Green S., Greene L. 1984. Comparison of rapid changes in surface morphology and coated pit formation of PC12 cells in response to nerve growth factor, epidermal growth factor and dibutyryl cyclic AMP. J. Cell Biol. 98: 457-465.

35. Corvera S. 1990. Insulin stimulates the assambly of cytosolic clathrin onto adipocyte plasma membrane. J. Biol. Chem. 265: 2413-2416.

36. Cosson P., Dumolleure C., Hennecke S., Duden R., Letourneur F. 1996. Delta- and zeta-COP, two coatomer subunits homologous to clathrin-associated proteins, are involved in ER retrieval. EMBO J. 8: 1792-1798.

37. Couet J., Sargiacomo M., Lisanti M.P. 1997. Interaction of a receptor tyrosine kinase, EGF-R, with caveolins. (Caveolin binding negatively regulates tyrosine and serine/threonine kinase activities). J. Biol. Chem. 272: 30429-30438.

38. Cross M.J, Stewart A., Hodgkin M.N., Kerr D.J., Wakelam M.J.O. 1995. Wortmannin and its structural analog Demethoxyviridin inhibit stimulated phospholypase A2 activity in Swiss 3T3 cells. J. Biol. Chem. 270: 2535225355.

39. Daaka Y., Luttrell L.M., Ahn S., Delia Rocca G.J., Ferguson S.S., Caron M.G., Lefkowitz R.J. 1998. Essential role for G protein-coupled receptor endocytosis in the activation of mitogen-activated protein kinase. J. Biol. Chem. 273: 685-688.

40. Darnell J.E. 1997. STATs and gene regulation. Science. 277: 1630-1635.

41. Davidson H.W. 1995. Wortmannin causes mistargeting of procathepsin D. Evidence for the involvement of a phosphatidylinositol 3-kinase in vesicular transport to lysosomes. J. Cell Biol. 130: 797-805.

42. Davies S.P., Reddy H., Caivano M., Cohen P. 2000. Specificity and mechanism of action of some commonly used protein kinase inhibitors. Biochem. J. 351: 95-105.

43. Davis R.J. 1988. Independent mechanism account for the regulation by PKC of the EGFR affinity and tyrosine kinase activity. J. Biol. Chem. 263: 94629469.

44. De Camilly P., Emr S.D., McPherson P.S., Novick P. 1996. Phosphoinositides as key regulators in membrane traffic. Science. 271: 1533-1539.

45. Di Fiore P.P., Gill G.N. 1999. Endocytosis and mitogenic signaling. Curr. Opin. Cell Biol. 11:483-488.

46. Di Guglielmo G.M., Baass P.C., Ou W.J., Posner B.I., Bergeron J.J. 1994. Compartmentalization of SHC, GRB2 and mSOS, and hyperphosphorylation of Raf-1 by EGF but not insulin in liver parenchyma. EMBO J. 13: 42694277.

47. Diaz E., Schimmuller F., Pfeffer S.R. 1997. A novel Rab9 effector required for endosome-to-TGN transport. J. Cell Biol. 138: 283-290.

48. Domin J., Pages F., Volinia S., Rittenhouse S.E., Zvelebil M.J., Stein R.C., Waterfield M.D. 1997. Cloning of a human phosphoinositide 3-kinase with a C2 domain that displays reduced sensitivity to the inhibitor wortmannin. Biochem J. 326: 139-147.

49. Domin J., Waterfield M.D. 1997. Using structure to define the function of phosphoinositide 3-kinase family members. FEBS Lett. 410(1): 91-95.

50. Downward J., Parker P., Waterfield M.D. 1984. Autophosphorylation sites on the epidermal growth factor receptor. Nature. 311: 483-485.

51. Dunn W., Maxfield F. 1992. Delivery of ligands from sorting to late endosomes occurs by maturation of sorting endosomes. J. Cell Biol. 120: 7783.

52. Fantl W.J., Johnson D.E., Williams L.T. 1993. Signaling by receptor tyrosine kinases. Ann. Rev. Biochem. 62: 453-481.

53. Felder S., Miller K., Moeehren G., Ullrich A., Shclessinger J., Hopkins C.R. 1990. Kinase activity controls the sorting of the epidermal growth factor receptor within the multivesicular body. Cell. 61: 623-634.

54. Feng Y., Press B., Wandinger-Ness A. 1995. Rab7: an important regulator of late endocytic membrane traffic. J. Cell Biol. 131: 1435-1452.

55. Foster-Barber A., Bishop J.M. 1998. Src interacts with dynamin and synapsin in neuronal cells. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 95: 4673-4677.

56. French A.R., Sudlow G.P., Wiley H.S., Lauffenburger D.A. 1994. Postendocytic trafficking of epidermal growth factor-receptor complexes ismediated through saturable and specific endosomal interactions. J. Biol. Chem. 269: 15749-15755.

57. Fruman D.A., Meyers R.E., Cantley L.C. 1998. Phosphoinositide kinases. Ann. Rev. Biochem. 67: 481-507.

58. Fry M.J. 1994. Structure, regulation and function of phosphoinositide-3-kinases. Biochim. Biophys. Acta. 1226: 237-268.

59. FuX.-Y., Zhang J.J. 1993. Transcription factor p91 interact with the epidermal factor receptor and mediates activation of the c-fos gene promoter. Cell. 74:1135-1145.

60. Fukui Y, Hanafusa H. 1991. Requirement of phosphatidylinositol-3 kinase modification for its association with p60src. Mol. Cell. Biol. 11: 1972-1979.

61. Futter C.E., Pearse A., Hewlett L.J., Hopkins C.R. 1996. Multivesicular endosomes containing internalized EGF-EGF receptor complexes mature and then fuse directly with lysosomes. J. Cell Biol. 132: 1011-1023.

62. Gaidarov I., Keen J.H. 1999. Phosphoinositide-AP-2 interactions required for targeting to plasma membrane clathrin-coated pits. J. Cell Biol. 146(4): 755764.

63. Gaidarov /., Santini F., Warren R., Keen J. 1999. Spatial control of coated-pit dynamics in living cells. Nature Cell Biol. 1: 1-7.

64. Gammie A.E., Kurihara L.J., Vallee R.B., Rose M.D. 1995. DNM1, a dynamin-related gene, participates in endosomal trafficking in yeast. J. Cell Biol. 130: 553-566.

65. Garcia-Guzman M., Larsen E., Vuori K. 2000. The proto-oncogene c-Cbl is a positive regulator of Met-induced MAP kinase activation: a role for the adaptor protein Crk. Oncogene. 19: 4058-4065.

66. Gary J.D., Wurmser A.E., Bonangelino C.J., Weisman L.S., Emr S.D. 1998. Fab1 is essential for Ptdlns(3)P 5-kinase activity and the maintenance of vacuolar size and membrane homeostasis. J. Cell Biol. 143: 65-79.

67. Geisow M., Childs J., 1985. Cholinergic stimulation of chromaffin cells induces rapid coating of the plasma membrane. Eur. J. Cell Biol. 38: 51-56.

68. Gilboa L., Ben-Levy R., Yarden Y., Henis Y. 1995. Roles for a cytoplasmic tyrosine and tyrosine kinase activity in the interaction of neu receptors with coated pits. J. Biol. Chem. 270: 7061-7067.

69. Glenney J.R., Zokas L. 1989. Novel tyrosine kinase substrates from Rous sarcoma virus-transformed cells are present in the membrane skeleton. J. Cell Biol. 108:2401-2408.

70. Goldstein J.L., Brown M.S., Anderson R.G. W., Russell D. W., Schneider W.J. 1985. Receptor-mediated endocytosis: concepts emerging from the LDL receptor system. Ann. Rev. Cell Biol. 1: 1-39.

71. Gorvell J.P., Chavrier P., Zerial M., Gruenberg J. 1991. Rab5 controls early endosomes fusion in vitro. Cell. 64: 915-925.

72. Goud B., Huet C., Louvard D. 1985. Assembled and unassembled pools of clathrin: a quantitative study using an enzyme immunoassay. J. Cell Biol. 100: 521-527.

73. Gout I., Dhand R., Hiles I., Fry M., Panayotou G., Das P., Truong O., Totty N., Hsuan J., Booker G. 1993. The GTPase dynamin binds to and is activated by a subset of SH3 domains. Cell. 75: 25-36.

74. Graus-Porta D., Beerli R.R., Daly J.M., Hynes N.E. 1997. ErbB-2, the preferred heterodimerization partner of all ErbB receptors, is a mediator of lateral signaling. EMBO J. 16(7): 1647-1655.

75. Griffiths G. 1992. Compartments of the endocytic pathway. Heidelberg; Berlin, Springer-Verlag. H62: 73-83.

76. Griffiths G., Gruenberg J. 1991. The arguments for pre-existing early and late endosomes. Trends Cell Biol. 1: 5-9.

77. Grishin A. 2000. Involvement of She and Cbl-PI-3-kinase in Lyn-dependent proliferative signaling pathways forG-CSF. Oncogene. 19: 4058-4065.

78. Guglielmo G.M., Baass P.C., Ou W.J., Posner B.I., Bergeron J.J. 1994. Compartmentalization of SHC, GRB2 and mSOS, and hyperphosphorylation of Raf-1 by EGF but not insulin in liver parenchyma. EMBO J. 13: 42694277.

79. Haigler H.T., McCanna J.A., Cohen S. 1979. Direct visualization of the binding and internalization of a ferritin conjugates of the epidermal growth factor in human carcinoma cells A431. J. Cell Biol. 81: 392-395.

80. Herman P.K., Emr S.D. 1990. Characterization of VPS34, a gene required for vacuolar protein sorting and vacuole segregation in Saccharomyces cerevisiae. Mol. Cell Biol. 10: 6742-6754.

81. Honneger A., Szapary D., Schmid A., Lyall R., Van Obberghen E., Dull T., lacopetta B., Rothenberger S., Kuhn L. 1988. A role for the cytoplasmic domain in transferrin receptor sorting and coated pit formation during endocytosis. Cell. 54: 485-489.

82. Hopkins C.R., Gibsom A., Shipman M., Miller K. 1990. Movement of internalized ligand-receptor complexes along a continuous endosomal reticulum. Nature. 346: 335-340.

83. Hynes N.E., Stern D.F. 1994. The biology of erbB-2/neu/HER-2 and its role in cancer. Biochim. Biophys. Acta. 1198(2-3): 165-184.

84. Imamoto A., Soriano P. 1993. Disruption of the csk gene, encoding a negative regulator of Src family tyrosine kinase, leads to neural tube defects and embryonic lethality in mice. Cell. 73: 1117-1124.

85. Joly M., Kazlauskas A., Corvera S. 1995. Phosphatidylinositol 3-kinase activity is required at a postendocytic step in platelet-derived growth factor receptor trafficking. J. Biol. Chem. 270: 13225-13230.

86. Jones A.T., Clague M.J. 1995. Phosphatidylinositol 3-kinase activity is required for early endosome fusion. Biochem J. 311: 31-34.

87. Jones A.T., Mills I.G., Scheidig A.J., Alexandrov K., Clague M.J. 1998. Inhibition of endosome fusion by wortmannin persists in the presence of activated Rab5. Mol. Biol. Cell. 9: 323-332.

88. Kanner S.B., Reynolds A.B., Vines R.R., Parsons J.T. 1990. Monoclonal antibodies to individual tyrosine-phosphorylated protein substrates ofoncogene-encoded tyrosine kinases. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 87: 33283332.

89. Kashles O., Szapary D., Bellot F., Ullrich A., Schlessinger J., Schmidt A. 1988. Ligand-induced stimulation of EGF-receptor mutants with altered trans-membrane region. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 85: 9567-9571.

90. Kasuga M., lick Y., Blith D.L., Karlsson F., Haring H.U., Kahn C.R. 1982. Insulin stimulation of phosphorylation of the a-subunit of the insulin receptor. Formation of both phosphoserine and phosphotyrosine. J. Biol. Chem. 257: 9891-9894.

91. Kay D.G., Lai W.H., Uchihashi M., Khan M.N., Posner B.I., Bergeron J.J. 1986. Epidermal growth factor receptor kinase translocation and activation in vivo. J. Biol. Chem. 261: 8473-8480.

92. Kazlauskas A., Cooper J.A. 1990. Phosphorylation of the PDGF receptor beta subunit creates a tight binding site for phosphatidylinositol 3 kinase. EMBO J. 9(10): 3279-3286.

93. Khan M.N., Savoie S., Bergeron J.J., Posner B.I. 1986. Characterization of rat liver endosomal fractions. In vivo activation of insulin-stimulable receptor kinase in these structures. J. Biol. Chem. 261: 8462-8472.

94. Kirchhausen T. 2000. Clathrin. Ann. Rev. Biochem. 69: 699-727.

95. Klausner R.D., Ashwell G., van Renswoude J., Harford J.B., Bridges K.R. 1983. Binding of apotransferrin to K562 cells: explanation of the transferrin cycle. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 80: 2263-2266.

96. Klemm J.D., Schreiber S.L., Crabtree G.R. 1998. Dimerization as a regulatory mechanism in signal transduction. Ann. Rev. Immunol. 16: 569592.

97. Kornilova £., Sorkina T., Beguinot L, Sorkin A. 1996. Carboxyl-terminal receptor domain 1022-1123 is responsible for the lysosomal targeting of EGF receptors. J. Biol. Chem. 271: 30340-30346.

98. Kornilova E.S., Taverna D., Hoeck W., Hynes N.E. 1992. Surface expression of erbB-2 protein is post-transcriptionally regulated in mammary epithelial cells by epidermal growth factor and by the culture density. Oncogene. 7: 511-519.

99. Kundra R., Kornfield S. 1998. Wortmannin retards the movement of the mannose 6-phosphate/insulin-like growth factor II receptor and its ligand out of endosomes.J. Biol. Chem. 273: 3848-3853.

100. Kypta R.M., Goldberg Y., Ulug E.T., Courtneidge S.A. 1990. Association between the PDGF receptor and members of the src family of tyrosine kinases. Cell. 62: 481-492.

101. Laemmli U. 1970. Cleavage of structural proteins during assambly of the head of the bacteriophage T4. Nature. 227: 280-285.

102. Lauffenburger D.A., Linderman J.J. 1993. Receptors: Models for binding, trafficking and signalling. Oxford University Press, New York. 73-132.

103. Levkowitz G., Klapper L.N., Tzahar E., Freywald A., Sela M., Yarden Y. 1996. Coupling of the c-Cbl protooncogene product to Erb-1/EGF-receptor but not to other ErbB proteins. Oncogene. 12: 1117-1125.

104. Li G., D'Souza-Schorey C., Barbieri M.A., Roberts R.L., Klippel A., Williams L.T., Stahl P.D. 1995. Evidence for phosphatidylinositol 3-kinase as a regulator of endocytosis via activation of Rab5. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 92: 10207-10211.

105. Lian J.P., Stone S., Jiang Y., Lyons P., Ferro-Novick S. 1994. Yptlp implicated in v-SNARE activation. Nature. 372: 698-701.

106. Liebenhoff U., Brockmeier D., Presek P. 1993. Substrate affinity of the protein tyrosine kinase pp60c"src is increased on thrombin stimulation of human platelets. Biochem. J. 295:41-48.

107. Liu X., Marengere L.E.M., Koch A., Pawson T. 1993. The v-Src SH3 domain binds phosphatidylinositol 3 -kinase. Mol. Cell. Biol. 13(9): 52255232.

108. Lund K.A., Opresko L.K., Starbuck C., Walsh B.J., Wiley H.S. 1990. Quantitative analysis of the endocytic system involved in hormone-induced receptor internalization. J. Biol. Chem. 265: 15713-15723.

109. Luttrell D.K., Luttrell L.M., Parsons S.J. 1988. Augmented mitogenic responsiveness to epidermal growth factor in murine fibroblastes that overexpress pp60°"src. Mol. Cell. Biol. 8: 497-501.

110. Margolis B., Rhee S.G., Felder S., Mervic M., Lyall R., Levitzki A., Ullrich A., Zilberstein A., Schlessinger J. 1989. EGF induces tyrosine phosphorylation of phospholipase C-ll: a potential mechanism for EGF receptor signaling. Cell. 57: 1101-1107.

111. Martinez O., Schmidt A., Salamero J., Hoflack B., Roa M., Goud B. 1994. The small GTP-binding protein rab6 functions in intra-Golgi transport. J. Cell Biol. 127: 1603-1616.

112. Martys J.L., Wjasow C., Gangi D.M., Kielian M.C., McGraw T.E., Backer J.M. 1996. Wortmannin-sensitive trafficking pathways in Chinese hamster ovary cells. J. Biol. Chem. 271: 10953-10962.

113. Mastick C.C., Saltiel A.R. 1997. Insulin-stimulated tyrosine phosphorylation of caveolin is specific for the differentiated adipocyte phenotype in 3T3-L1 cells. J. Biol. Chem. 272: 20706-20714.

114. Maxfield F.R., Willingham M.C., Haigler H., Dragsten P., Pastan I. 1981. Binding, surface mobility, internalization and degradation of rodaminelabeled macroglobulin. Biochemistry. 22: 5353-5358.

115. Mayer B.J., Baltimore D. 1993. Signaling through SH2 and SH3 domains. Trends Cell Biol. 3: 8-13.

116. Mayor S., Presley J.F., Maxfield F.R. 1993. Sorting of membrane components from endosomes and subsequent recycling to the cells surface occurs by a Bulk flow process. J. Cell Biol. 121:1257-1269.

117. McBride H.M., Rybin V., Murphy C., Giner A., Teasdale R., Zerial M. 1999. Oligomeric complexes link Rab5 effectors with NSF and drive membrane fusion via interactions between EEA1 and syntaxin 13. Cell. 98: 377-386.

118. McCormick. 1993. How receptors turn Ras on. Nature. 363: 15-16.

119. Meng F., Lowell C.A. 1998. A pi integrin signaling pathway involved Src-family kinases, Cbl and PI-3 kinase is required for macrophage spreading and migration. EMBO J. 17: 4391-4403.

120. Miki H., Miura K., Matuoka K., Nakata T., Hirokawa N., Orita S., Kaibuchi K., Takai Y., Takenawa T. 1994. Association of Ash/Grb2 with dynamin through the Src homology 3 domain. J. Biol. Chem. 269: 5489-5492.

121. Miller K., Beard more J., Kanety H., Schlessinger J., Hopkins C.R. 1986. Localization of the epidermal growth factor (EGF) receptor within the endosome of EGF-stimulated epidermoid carcinoma (A431) cells. J. Cell Biol. 102: 500-509.

122. Miller K., Shipman M., Trowbridge I., Hopkins C. 1991. Transferrin receptors promote the formation of clathrin lattices. Cell. 65: 621-632.

123. Moghal N., Sternberg P.W. 1999. Multiple positive and negative regulators of signaling by the EGF-receptor. Curr. Opin. Cell Biol. 11: 190-196.

124. Mostov K.E., Freidlander M., Blobel G. 1984. The receptor of transepithelial transport of IgA and IgM contains multiple immunoglobuline-like domains. Nature. 308: 37-43.

125. Murthy R.F. 1991. Maturation models for endosome and lysosome biogenesis. Trends Cell Biol. 1: 77-82.

126. Nada S., Yagi T., Takeda H., Tokunaga T., Nakagawa H., Ikawa Y., Okada M., Aizawa S. 1993. Constitutive activation of Src family kinases in mouse embryonic lethality in mice. Cell. 73: 1125-1135.

127. Nemoto Y., Arribas M., Haffner C., DeCamilli P. 1997. Synaptojanin 2, a novel synaptojanin isoform with a distinct targeting domain and expression pattern. J. Biol. Chem. 272: 30817-30821.

128. NesterovA., Kurten R., Gill G. 1995. Association of epidermal growth factor receptors with coated pit adaptins via a tyrosine phosphorylation-regulated mechanism. J. Biol. Chem. 270: 6320-6327.

129. Nielsen E., Severin F., Backer J.M., Hyman A.A., Zerial M. 1999. Rab5 regulates motility of early enosomes on microtubules. Nature Cell Biol. 1: 376-382.

130. Olayioye M., Beuvink I., Horsch K., Daly J., Hynes N. 1999. ErbB receptor-induced activation of Stat transcription factors is mediated by Src tyrosine kinase. J. Biol. Chem. 274: 17209-17218.

131. Olsnes S., Sandvig K. 1985. Toxins. Endocytosis. Plenum Press, New-York. P. 195-234.

132. Osherov N., Levitzki A. 1994. Epidermal growth factor dependent activation of the Src family kinases. Eur. J. Biochem. 225: 1047-1053.

133. Paschal B.M., King S.M., Moss A.G., Collins C.A., Vallee R.B., Witman G.B. 1987. Isolated flagellar outer arm dynein translocates brain microtubules in vitro. Nature. 330: 672-674.

134. Patki V., Lawe D.C., Corvera S., Virbasius J.V., Chawla A. 1998. A functional Ptdlns(3)P-binding motif. Nature. 394: 433-434.

135. Pearse B.M. 1988. Receptors compete for adaptors found in plasma membrane coated pits. EMBO J. 7: 3331-3336.

136. Peterson M.R., Burd C.G., Emr S.D. 1999. Vaclp coordinates Rab and phosphatidylinositol 3-kinase signaling in VPS45p-dependent vesicle docking/fusion at the endosome. Curr. Biol. 9(3): 159-162.

137. Powis G., Bonjouklian R., Berggren M.M., Gallegos A., Abraham R., Ashendel C., Zalkow L, Matter W.F., Dodge J., Grindey G. 1994. Wortmannin, a potent and selective inhibitor of phosphatidylinositol-3-kinase. Cancer Res. 54: 2419-2243.

138. Purchio A.F., Erikson E., Brugge J.S., Erikson R.L. 1978. Identification of a polypeptide encoded by the Avian sarcoma virus src gene. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 75: 1567-1571.

139. Ralston R., Bishop J.M. 1985. The product of the proto-oncogene c-src is modified during the cellular response to platelet derived growth factor. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 82: 7845-7849.

140. Rapoport I., Miyazaki M, Boll W., Duckworth B., Cantley L.C., Shoelson S., Kirchhausen T. 1997. Regulatory interactions in the recognition of endocytic sorting signals by AP-2 complexes. EMBO J. 16: 2240-2250.

141. Resh M.D. 1993. Interaction of tyrosine kinase oncoproteins with cellular membranes. Biochem. Biophys. Acta. 1155: 307-322.

142. Riese D.J., Stern D.F. 1998. Specificity within the EGF family/ErbB receptor family signaling network. Bioessays. 20: 41-48.

143. Robinson M. 1994. The role of clathrin, adaptors and dynamin in endocytosis. Curr. Opin. Cell Biol. 6: 538-544.

144. Roshe S., Koegl M., Barone V.M., Roussel M„ Courtneidge S.A. 1995. DNA synthesis induced by some, but not all, growth factors, requires Src family protein tyrosine kinases. Mol. Cell. Biol. 15:1102-1109.

145. Rothman J.E., Orci L. 1992. Molecular dissection of the secretory pathway. Nature. 355:409-415.

146. Rothman J.E., Raymond C.K., Gilbert T., O'Hara P. J., Stevens T.H. 1990. A putative GTP-binding protein homologous to interferon-inducible Mx proteins performs an essential function in yeast protein sorting. Cell. 61: 1063-1074.

147. Rothman J.E., Warren G. 1994. Implications of the SNARE hypothesis for intracellular membrane topology and dynamics. Curr. Opin. Cell Biol. 3: 220-233.

148. Rothman J.E., Wieland F. 1996. Protein sorting by transport vesicles. Science. 272: 227-234.

149. Rubio I., Rodriguez-Viclana P., Downward J., Wetzker R. 1997. Interaction of Ras with phosphoinositide 3-kinase gamma. Biochem J. 326: 891-895.

150. Sakai R., Iwamatsu A., Hirano N., Ogawa S., Tanaka T., Mano H., Yazaki Y., Hirai H.A. 1994. A novel signaling molecule, p130, forms stable complexes in vivo with v-Crk and v-Src in a tyrosine phosphorylation-dependent manner. EMBO J. 13: 3748-3756.

151. Santini F., Keen J. 1996. Endocytosis of activated receptors and clathrin-coated pit formation deciphering the chicken or egg relationship. J. Cell Biol. 132: 1025-1036.

152. Sato K., Wickner W. 1998. Functional reconstitute of Ypt7p GTPase and a purified vacuole SNARE complex. Science. 281: 700-702.

153. Savage C.R., Cohen S. 1972. Epidermal growth factor and a new derivative: rapid isolation procedures and biological and chemical characterization. J. Biol. Chem. 247: 7609-7611.

154. Savage C.R., Inagami T., Cohen S. 1972. The primary structure of epidermal growth factor. J. Biol. Chem. 247: 7612-7621.

155. Scaife R., Margolis R.L. 1990. Biochemical and immunochemical analysis of rat brain dynamin interaction with microtubules and organelles in vivo and in vitro. J. Cell Biol. 111: 3023-3033.

156. Schaller M.D., Borgman C.A., Cobb B.S., Vines R.R., Reynolds A.B., Parsons J.T. 1992. pp125FAK a structurally distinctive protein-tyrosine kinase associated with focal adhesions. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 89: 5192-5196.

157. Schaller M.D., Parsons J.T. 1994. Focal adhesion kinase and associated proteins. Curr. Opin. Cell. Biol. 6: 705-710.

158. Schlessinger J. 2000. Cell signaling by receptor tyrosine kinases. Cell. 103: 211-225.

159. Schmidt A., Hall M.N. 1998. Signaling to the actin cytoskeleton. Ann. Rev. Cell Dev. Biol. 14: 305-338.

160. Schpetner H.S., Vallee R.B. 1989. Dynamin is a GTPase stimulated to high levels of activity by microtubules. Nature. 355: 733-735.

161. Schu P.V., Takegawa K., Fry M.J., Stack J.H., Waterfield M.D., Emr S.D. 1993. Phosphatidylinositol 3-kinase encoded by yeast VPS34 gene essential for protein sorting. Science. 260: 88-91.

162. Segev N., Mulholland J., Botstein D. 1988. The yeast GTP-binding YPT1 protein and a mammalian counterpart are associated with the secretion machinery. Cell. 52: 915-924.

163. Sever S., Damke H., Schmid L. 2000. Dynamin:GTP controls the formation of constricted coated pits, the rate limiting step in clathrin-mediated endocytosis. J. Cell Biol. 150(5): 1137-1148.

164. Shepherd P.R., Reaves B.J., Davidson H.W. 1996. Phosphoinositide 3-kinases and membrane traffic. Trends in Cell Biol. 6: 92-97.

165. Shpetner H., Joly M., Hartley D., Corvera S. 1996. Potential sites of PI-3 kinase function in the endocytic pathway revealed by the PI-3 kinase inhibitor, wortmannin. J. Cell Biol. 132: 595-605.

166. Siddhanta U., Mcllroy J., Shah A., Zhang Y., Backer J.M. 1998. Distinct roles for the p110alpha and hVPS34 phosphatidylinositol 3'-kinases in vesicular trafficking, regulation of the actin cytoskeleton, and mitogenesis. J. Cell Biol. 143: 1647-1659.

167. Simonsen A., Lippe R., Christoforidis S., Gaullier J.M., Brech A., Callaghan J., Toh B.H., Murphy C„ Zerial M., Stenmark H. 1998. EEA1 links P!(3)K function to Rab5 regulation of endosome fusion. Nature. 394: 494-498.

168. Smith R.M., Jarret L 1987. Ultrastructural evidence for the accumulation of insulin in nuclear of intact 3T3-U adipocytes by insulin-receptor mediated process. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 84: 459-463.

169. Smythe E., Warren G. 1991. The mechanism of receptor-mediated endocytosis. Europ. J. Biochem. 202: 689-699.

170. Soderquist A.M., Carpenter G. 1984. Glycosylation of the epidermal growth factor receptor in A-431 cells. The contribution of carbohydrate to receptor function. J. Biol. Chem. 259: 12586-12594.

171. Sorkin A., Carpenter G. 1991. Dimerization of internalized EGF receptor. J. Biol. Chem. 266: 23453-23460.

172. Sorkin A., Kornilova E., Teslenko L., Sorokin A., Nikolsky N. 1988. Recycling of epidermal growth factor-receptor complexes in A431 cells. Biochem. Biophys. Acta. 1011: 88-96.

173. Sorkin A., Krolenko S., Kudrijavtseva N., Lazebnik J., Teslenko L., Soderquist A.M., Nikolsky N. 1991. Recycling of epidermal growth factorreceptor complexes in A431 cells: identification of dual pathway. J. Cell Biol. 112: 55-63.

174. Sorkin A., McKinsey T., Shih W., Kirchhausen T„ Carpenter G. 1995. Stoichiometric interaction of epidermal growth factor receptor with the clathrin-associated protein complex AP-2. J. Biol. Chem. 270: 619-625.

175. Stack J.H., Herman P.K., Schu P.V., Emr S.D. 1993. A membrane-associated complex containing the VPS 15 protein kinase and the VPS34 PI 3-kinase is essential for protein sorting to the yeast lysosome-like vacuole. EMBO J. 12: 2195-2204.

176. Stenmark H., Vitale G., Ullrich O., Zerial M. 1995. Rabaptin-5 is a direct effector of the small GTPase Rab5 in endocytic membrane fusion. Cell. 83: 423-432.

177. Stern D.F., Kamps M.P. 1988. EGF-stimulated tyrosine phosphorylation of p185neu: a potential model for receptor interactions. EMBO J. 7(4): 9951001.

178. Stochem W., Wohlfarth-Botterman K.E. 1969. Pinocytosis (Endocytosis). Handbook of Molecular Cytology. Elsevier, North Holland, Ansterdam. P.1373-1400.

179. Stoorvogel W., Strous G.J., Geuze H.J., Oorschot V., Schwartz A. 1991. Late endosomes derive from early endosomes by maturation. Cell. 65: 417427.

180. Stoscheck C.M., Carpenter G. 1984. Characterization of the metabolic turnover of epidermal growth factor receptor protein in A431 cells. J. Cell Physiol. 120: 296-302.

181. Superti-Furga G., Courtneidge S.A. 1995. Structure-function relationships in Src family and related protein tyrosine kinases. Bioessays. 17: 1-10.

182. Sweitzer S.M., Hinshaw J.E. 1998. Dynamin undergoes a GTP-dependent conformational change causing vesiculation. Cell. 93(6): 1021-1029.

183. Taylor S.J., Shalloway D. 1994. An RNA-binding protein associated with Src through its SH2 and SH3 domains in mitosis. Nature. 368: 867-871.

184. Thien C.B.F., Langdon W.Y. 2001. Cbl: many adaptations to regulate protein tyrosine kinases. Mol. Cell Biol. 2: 294-305.

185. Thuveson M., Albrecht D., Zurcher G., Andres A.C., Ziemiecki A. 1995. lyk, a novel intracellular protein tyrosine kinase differentially expressed in the mouse mammary gland and intestine. Biochem. Biophys. Res. Commun. 209: 582-589.

186. Tisdale E.J., Bourne J.R., Khosravi-Far R., Der C.J., Balch W.E. 1992. GTP-binding mutants of rab1 and rab2 are potent inhibitors of the vesicular transport from the endoplasmic reticulum to the Golgi complex. J. Cell Biol. 119: 749-761.

187. Twamley G., Kypta R., Hall B., Courtneidge S.A. 1992. Association of Fyn with the activated PDGF receptor: requirements for binding and phosphorylation. Oncogene. 7: 1893-1901.

188. Twamley-Stein G., Pepperkok R., Ansorge W., Courtneidge S. 1993. The Src family tyrosine kinases are required for platelet-derived growth factor-mediated signal transduction in NIH-3T3 cells. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 90: 7696-7700.

189. Vanhaesebroeck B., Jones G.E., Allen W.E., Zicha D., Hooshmand R., Sawyer C., Wells C., Waterfield M.D., Ribley A.J. 1999a. Distinkt PI(3)Ks mediate mitogenic signaling and cell migration in macrophages. Nature Cell. Biol.1: 69-71.

190. Vanhaesebroeck B., Leevers S.J., Ahmadi K., Timms J., Katso R., Driscoll P.C., Woscholski R., Parker P.J., Waterfield M.D. 2001. Synthesis and function of 3-phosphotylated inositol lipids. Ann. Rev. Biochem. 70: 535602.

191. Vieira A.V., Lamaze C., Schmid S.L. 1996. Control of EGF receptor signaling by clathrin-mediated endocytosis. Science. 274: 2086-2089.

192. Virbasius J.V., Guilherme A., Czech M.P. 1996. Mouse p170 is a novel phosphatidylinositol 3-kinase containing a C2 domain. J. Biol. Chem. 271: 13304-13307.

193. Ward D.M., Perou C.M., Lloyd M„ Kaplan J. 1995. "Synchronized" endocytosis and intracellular sorting in alveolar macrophages: the early sorting endosome in a transient organelle. J. Cell Biol. 129: 1229-1240.

194. Ware M., Tice D., Parsons S., Lauffenburger D. 1997. Overexpression of cellular Src in fibroblasts enhances endocytic internalization of epidermal growth factor receptor. J. Biol. Chem. 272: 30185-30190.

195. Warren G. 1990. Trawling for receptors. Nature. 346: 318-319.

196. Waters C.M., Oberg K.C., Carpenter G., Overholster K.A. 1990. Rate constants for binding, dissociation and internalization of EGF: effect of receptor occupancy and ligand concentration. Biochemistry. 29: 3563-3569.

197. Waters M.G., Griff I.C., Rothman J.E. 1991. Proteins involved in vesicular transport and membrane fusion. Curr. Opin. Cell Biol. 4: 615-620.

198. Weng Z., Thomas S.M., Rickles R.J., Taylor J.A., Brauer A.W. 1994. Identification of Src, Fyn and Lyn SH3-binding proteins: implica-tions for a function of SH3 domains. Mol. Cell. Biol. 14: 4509^521.

199. Wennstrom S., Hawkins P., Cooke F., Hara K., Yonezawa K., Kasuga M., Jackson T., Claesson-Welsh L., Stephens L. 1994. Activation of phosphoinositide 3-kinase is required for PDGF-stimulated membrane ruffling. Curr. Biol. 4: 385-393.

200. White J., Keilian M., Helenius A. 1983. Membrane fusion proteins of enveloped animal viruses. Quart. Rev. Biophys. 16: 151-195.

201. Whitney J.A., Gomez M., SheffD., Kreis T.E., Mellman I. 1995. Cytoplasmic coat proteins involved in endosome function. Cell. 83: 703-713.

202. Wiedemann C., Cockcroft S. 1998. Vesicular transport. Sticky fingers grab a lipid. Nature. 394: 426-427.

203. Wilde A., Beattie E., Lem L., Riethof D., Liu S-H., Mobley W., Soriano P., Brodsky F. 1999. EGF receptor signaling stimulates Src kinase phosphorylation of clathrin, influencing clathrin redistribution and EGF uptake. Cell. 96: 677-687.

204. Wileman T., Harding C., Stahl P. 1985. Receptor-mediated endocytosis. Biochem. J. 232: 1-14.

205. Wiley H.S., Cunningham D.D. 1982. The endocytic rate constant. A cellular parameter for quantitative receptor-mediated endocytosis. J. Biol. Chem. 257: 4222-4229.

206. Wurmser A., Gary J., Emr S. 1999. Phosphoinositide 3-kinases and their FYVE domain-containing effectors as regulators of vacuolar/lysosomal membrane trafficking pathways. J. Biol. Chem. 274: 9129-9132.

207. Xue L., Lucocq J. 1998. ERK2 signaling from internalized epidermal growth factor receptor in broken A431 cells. Cell Signal. 10: 339-348.

208. Yoon Y., Pitts K.R., Dahan S., McNiven M.A. 1998. A novel dynamin-like protein associates with cytoplasmic vesicles and tubules of the endoplasmic reticulum in mammalian cells. J. Cell Biol. 140: 779-793.

209. Zacchi P., Stenmark H., Parton R.G., Orioli D., Lim F., GinerA., Mellman I., Zerial M., Murphy C. 1998. Rab17 regulates membrane trafficking through apical recycling endosomes in polarized epithelial cells. J. Cell Biol. 140: 1039-1053.

210. Zerial M., Stenmark H. 1993. Rab GTPases in vesicular transport. Curr. Opin. Cell Biol. 5: 613-620.