Исследование морфо-функциональных изменений мужских половых клеток при сохранении IN VITRO и IN SITU тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.30, кандидат биологических наук Мохаммадзаде Саид Мозбан

• Мохаммадзаде Саид Мозбан
• кандидат биологических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Мохаммадзаде Саид Мозбан

Введение.

Обзор литературы. Механизмы специфической активности сперматозоидов.

Сперматозоиды рыб.

Сперматозоиды млекопитающих.

Материалы и методы.

Получение суспензии сперматозоидов.

Сперматозоиды рыбы.!.

Сперматозоиды м ыши.

Анализ суспензий сперматозоидов.

Протокол опыта по выживанию сперматозоидов мыши в трупе.

Статистическая обработка и приемы формального анализа результатов исследования.

Результаты исследования

Выживание сперматозоидов вьюна in vitro.

Динамика численности элементов суспензии тестикулярных сперматозоидов вьюна.

Двигательная активность сперматозоидов вьюна.

Изменение численности способных к активации движения сперматозоидов.

Изменение средней скорости движенияи пробега сперматозоидов.

Изменение количества движения сперматозоидов.

Динамика метящихся эозином сперматозоидов.

Динамика метки йодистым пропидием.

Динамика внутриклеточной концентрации АТФ в переживающих при различных температурах сперматозоидах.

Динамика внутриклеточной концентрации АТФ после активации движения сперматозоидов.

Динамика активности митохондрии сперматозоидов.

Выживание сперматозоидов мыши in vitro

Морфологические структуры в суспензии содержимого семенного канальца мышей.

Сперматозоиды мыши in vitro, 37° С.

Динамика форм суспензии.

Динамика функциональных показателей.

Сперматозоиды мыши in vitro, 6° С.

Динамика форм суспензии.

Выживание сперматозоидов мыши в мертвом теле.

Выживание сперматозоидов in vitro после извлечения из трупа.

Обсуждение результатов

Об аномальных формах сперматозоидов теплокровных.

Динамика показателей жизнеспособности сперматозоидов мыши in vitro.

Динамика показателей жизнеспособности сперматозоидов рыбы in vitro.

Стареют ли сперматозоиды?.

Как гибнут сперматозоиды?.

Постмортальное переживание сперматозоидов in situ.

Выводы.

Заключение диссертации по теме «Биология развития, эмбриология», Мохаммадзаде Саид Мозбан

Выводы

1. Двигательная активность переживающих in vitro тестикулярных сперматозоидов вьюна изменяется фазически: периоды ослабления движения сменяются периодами его интенсификации. Двигательная активность на протяжении таких периодов может превосходить таковую сперматозоидов из свежеполученной суспензии. Это явление свидетельствует о самопроизвольном «дозревании» характерных функций клетки в лишенной нутриентов минеральной среде.

2. Потеря способности сперматозоидов к движению сопровождается повышением сорбции к витальным красителям и существенным падением внутриклеточной концентрации АТФ, но не может служить свидетельством гибели клетка. Содержание АТФ в неподвижных, проницаемых для красителя сперматозоидах, обеспеченное неизменно высокой активностью митохондриальной системы, сохраняется на уровне, характерном для невозбудимых соматических клеток.

3. Сокращение численности и кинетика падения функциональных показателей сперматозоидов по мере их переживания in vitro хорошо описываются сигмоидальными зависимостями. Переходные процессы, кинетика которых соответствует сигмоидальной зависимости Гомпертца (падение численность элементов суспензии, повышение сорбции витальных красителей), возможно рассматривать как кульминацию процесса старения, как целых клеток, так и внутриклеточных структур, обеспечивающих этот переход. Переходные процессы, осуществляющиеся в соответствии с логистический закономерностью (падение концентрации АТФ), напротив, позволяют предполагать существование эндогенных процессов, противодействующих завершению перехода.

Эпидидимальные сперматозоиды мыши способны переживать in situ при низких положительных температурах в течение 18 суток после умерщвления животного. По истечении этого срока, извлеченные из эпидидимиса сперматозоиды могут сохраняться при той же температуре in vitro от 4 до 21 дня.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Мохаммадзаде Саид Мозбан, 2004 год

1. Виленчик М.М. 1987. Биологические основы старения и долголетия. М., "Знание", 221 сс.

2. Гаврилов JLA., Гаврилова Н.С. 1991. Биология продолжительности жизни. М., Наука,, 280 сс.

3. Доронин Ю.К., Максудов Г.Ю. 2002. Зрелые половые клетки как объект цитогеронтологии. В: "Биологические механизмы старения". V Международный симпозиум. Тезисы докладов. Харьков, с. 35.

4. Максудов Г.Ю., Артюшкова В.А. 1988. Физиологическая консервация семени животных., Пущино ОНТИ НЦБИ, 78 сс.

5. Самуилов В.Д. 2001а. Программируемая клеточная смерть у растений. Соросовский образовательный журнал. 7, №10, с. 12-17.

6. Самуилов В.Д. 20016. Биохимия программируемой клеточной смерти (апоптоза) у животных. Соросовский образовательный журнал. 7, №10, с. 18-25.

7. Самуилов В.Д., Олескин A.B., Лигунова Е.М. 2000. Программируемая клеточная смерть. Биохимия, 65, вып. 8, с.1029-1045.

8. Скулачев В.П. 2001. Явление запрограммированной смерти. Организм. Соросовский образовательный журнал. 7, №10, с.2-6.

9. Турдаков А.Ф. 1972. Воспроизводительная система самцов рыб. «Илим», Фрунзе,. 144 сс.

10. Турдаков А.Ф. 1971. Влияние температурных условий на скорость движения и оплодотворяющую способность спермиев некоторых иссыккульских рыб. Вопросы ихтиологии, 11, № 2, с.258-270.

11. Угарова Н.Н. 1993. Биоаналитические применения люциферазы светляков Прикл. биохимия и микробиол. 29. с. 180-192.

12. Хохлов А.Н. 1988. Пролиферация и старение. В: Итоги науки и техники. Серия «Общие проблемы физико-химической биологии», Т. 9. М., ВИНИТИ, 176 сс.

13. An T.Z., Wada S., Edashige К., Sakurai Т., Kasai M. 1999. Viable spermatozoa can be recovered from refrigerated mice up to 7 days after death. Cryobiology, vol. 38, p. 27-34.

14. Andersen Berg K., Filseth O., Engeland E. 1996. A sperm midpiece defect in a Hereford bull with variable semen quality and freezability Acta Vet. Scand., 37, p.367 373.

15. Babcock D.F., Pfeiffer D.R. 1987. Independent elevation of cytosolic Ca2+. and pH of mammalian sperm by voltage-dependent and pH-sensitive mechanisms. J. Biol. Chem., 262, p. 15041-15047.

16. Baldi E.M., Luconi M., Bonaccorsi L., Krausz C., Forti G. 1996. Human sperm activation during capacitation and acrosome reaction: role of calcium, protein phosphorilation and lipid remodeling pathways. Front. Biosci., 1, p. 189-205.

17. Barrios В., Perez-Pe R., Gallego M., Tato A., Osada J., Muino-Blanco Т., Cebrian-Perez J.A. 2000. Seminal plasma proteins revert the cold-shock damage on ram sperm membrane. Biol. Reprod., 63,p.l531-1537

18. Baynes S.W., Scott A.P., Dowson A.P. 1981. Rainbow trout, Salmo gairdneri Richardson, spermatozoa: Effects of and pH on motility. J Fish Biol., 19, p. 259-267.

19. Beltran C., Darszon A., Labarca P., Lievano A. 1994. A high-conductance voltage-dependent multistate Ca channel found in sea urchin and mouse spermatozoa. FEBS Lett., 338, p. 23 26.

20. Billard R., Cosson M.P. 1988. Sperm motility in rainbow trout Parasalmo mykiss; effect of pH and temperature. In: "Reproduction in Fish . Basic and Aspects in Endocrinologie and Genetics" (ed. B.Breton, B.Zohar), p. 161-167. INRA, Paris.

21. Billard R., Cosson M.P. 1990. The energetics of fish sperm motility. In: "Controls of Sperm Motility: Biological and Clinical Aspects" (ed. C.Gagnon), p. 153-173. CRC Press, Boston.

22. Billard R., Cosson M.P. 1992. Some problems related to the assessment of sperm motility in freshwater fish. J. Exp. Zool., 261, p. 122 131.

23. Bishop M.W. 1970. Ageing and reproduction in male. J. Reprod. Fértil., 12, p. 65-87.

24. Blom E. 1966. A new sterilizing and hereditary defect (the "Dag defect") located in the bull sperm tail // Nature, 209, p. 739 740.

25. Blom E., Wolstrup C. 1976. Zinc as a possible causal factor in the sterilizing sperm tail defec? The "Dag-defect", in Jersey bull. Nord. Vet. Med., 28, p.515 518.

26. Boatman D.E., Robbins R.S. 1991. Bicarbonate: carbon-dioxide regulation of sperm capacitation, hyperactivated motility and acrosome reactions. Biol. Reprod., 44, p. 806 813.

27. Boitano S., Omoto C.K. 1988. Ionic requirements for the initiation of trout sperm motility. J. Cell Biol., 107, p. 168.

28. Boitano S., Omoto C.K. 1991. Membrane hyperpolarization activates trout sperm without an increase in intercellular pH. J. Cell Sci., 98, p. 343-349.

29. Boitano S., Omoto C.K. 1992. Trout sperm swimming pattern and role of intracellular Ca^. Cell Motil. Cytoskel., 21, p. 74 82.

30. Bujan L., Mieusset R., Mondinat C., Mansat A., Pontonnier F. 1988. Sperm morphology in fertile men and its age related variation. Andrologia, 20, p.121 128.

31. Calvete J.J., Mann K., Sanz L., Raida M., Topfer-Petersen E. 1996. The primary structure of BSP-30K, a major lipid-, gelatin-, and heparin-binding glycoprotein of bovine seminal plasma. FEBS Lett., 399, p. 147-152.

32. Christen R., Gatty J. L., Billard R., 1987. Trout sperm motility, the transient movement of trout sperm is related to changes in content of ATP following the activation of flagellar movement. Eur. J. Biochem., 166. p. 667-671.

33. Clark E.N., Corron M.E., Florman H.M. 1993. Clatrin, the calcium transport regulatory peptide of spermatozoa, modulates acrosome axocytosis in the response to the egg's zona pellucida. J. Biol. Chem., 268, p. 5309 5316.

34. Cohen-Dayag A., Tur-Kaspa I., Dor J., Mashiash S., Eisenbach M. 1995. Sperm capacitation in humans is transient and correlates with chemotactic responsiveness to follicular factors. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92, p. 11039- 11043.

35. Cordoba M., Santa-Coloma T.A., Beorlegui N.B., Beconi M.T. 1997. Intracellular calcium variation in heparin-capacitated bovine sperm. Biochem. Mol. Biol. Int., 41, p. 725 733.

36. Cornwall G.A., Smyth T.B., Vindivich D., Harter C., Robinson J., Chang T.S. 1986. Induction and enhancement of progressive motility in hamster caput epididymal spermatozoa Bio.Reprod. 35, p. 1065-1074.

37. Cornwall G.A., Vindivich D., Tillman S., Chang T.S. 1988. The effect of sulfhydryl oxidation on the morphology of immature hamster epididymal spermatozoa induced to acquire motility in vitro. Biol Reprod. 39, p. 141155.

38. Cosson J., Linhart O. 1996. Paddlefish (Polyodon spathula) spermatozoa: effects of potassium and pH on motility. Folia Zoologica, 45, p. 361 370.

39. Cosson J., Linhart O., Mims S.D., Shelton W.L., Rodina M. 2000. Analysis of motility parameters from paddlefish (Polyodon spathula) and shovelnose sturgeon (Scaphirhynchus platorynchus) spermatozoa. J. Fish Biol., 56, p. 1348- 1367.

40. Cosson M.P., Billard R., Letellier L. 1989. Rise of internal Ca++ accompanies the initiation of trout sperm motility. Cell Motil. Cytoskel., 14, p. 424 434.

41. CossonM.P., Cosson J., Andre F., Billard R. 1995. cAMP/ATP relationship in activation of trout sperm motility: their interaction in membrane-deprived models and in live spermatozoa. Cell Motil. Cytoskeleton, 31, p. 159 -176.

42. Cox T., Peterson R.N. 1989. Identification of calcium conducting channels in isolated boar sperm plasma membranes. Biochem. Biophys. Res. Commun., 161, p.162 168.

43. Cross N.L., Razy-Faulkner P. 1997. Control of human sperm intracellular pH by cholesterol and relationship to the response of the acrosome to progesterone. Biol. Reprod., 56,p.ll69 1174.

44. Cummins J.M., Jequier A.M., Kan R. 1994. Molecular biology of the human male infertility: links with aging, mitochondrial genetics and oxidative stress. Mol. Reprod. Dev. 37,p. 345-362.

45. Darszon A., Labarca P., Nishigaki T., Espinosa F. 1999. Ion channels in sperm physiology. Phisiol. Rev., 79, p. 481 510.

46. Davis B.K., Byrne R., Bedigian K. 1979. Studies on the mechanism of capatitation: albumin-mediated changes in plasma membrane lipids during in vitro incubation of rat sperm. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 68, p. 257 -266.

47. Donnelly E.T., O'Connell M., MeClure N., Lewis S.E. 2000. Differences in nuclear DNA fragmentation and mitochondrial integrity of semen and prepared human spermatozoa. Human Reprod., 15, p. 1552-1561.

48. Flechon J.E., Hunter R.F. 1981. Distribution of spermatozoa in the utero-tubal junction and isthmus of pigs, and their relationship with the luminal epithelium after mating: a scanning electron microscope study. Tissue Cell, 13:p.l27-139.

49. Florman H.M., Corron M.E., Kim T.D.-H., Babcock D.F. 1992. Activation of voltage-dependent calcium channels of mammalian sperm is required for zona pellucida-induced acrosomal exocytosis. Dev. Biol., 152:p.304-314.

50. Garner D.L., Thomas C.A., Gravance C.G., Marshall C.E., DeJarnette J.M., Allen C.H. 2001. Seminal plasma addition attenuates the dilution effect in bovine sperm. Theriogenology, 56:p.31-40.

51. Gatti J.L., Billard R., Christen R. 1990. Ionic regulation of the plasma membrane potential of rainbow trout (Salmo gairdneri) spermatozoa: role in the initiation of sperm motility. J. Cell. Physiol., 143: p.546 554.

52. Ginsburg A.S. 1963. Sperm-egg assotiation and its relationship to the activation of the egg in salmoid fishes. J. Embriol. And Exp. Morphol.,11: p.13-33

53. Go K.J., Wolf D.P. 1985. Albumin-mediated changes in sperm sterol content during capacitation. Biol. Reprod., 32, p. 145 153.

54. Hellander J.C., Samper J.C., Carbo B.G.1991. Fertility of a stallion with low sperm motility and a high incidence of an unusual sperm tail defect. Vet. Rec., 128, 449-451.

55. Hishinuma A., Suzuki K., 2003.Sekine J. Recovery and cryopreservation of Sika-Deer (Cervus-Nippon) spermatozoa from epididymides stored at 4-degrees-C. Theriogenology, vol. 59, p. 813-820.

56. Jenkins A.D., Lechene C.P.,Howard S.S. 1980. Concentration of seven elements in the intraluminal fluids of the rat seminiferous tubules, rat testis, and epididymis. Biol. Reprod. 23,p.981-987.

57. Kaabi M., Paz P., Alvarez M., Anel E., Boixo J.C., Rouissi H., Herraez P., Anel L. 2003. Effect of epididymis handling conditions on the quality of ram spermatozoa recovered post-mortem. Theriogenology, , vol. 60, p. 12491259.

58. Kelso K.A., Redpath A., Noble R.C., Speake B.K. 1997. Lipid and antioxidant change in spermatozoa and seminal plasma throughout the reproductive period of bulls. J. Reprod. Fertil. 109, 1-6.

59. Khokhlov A.N. 2000. Cell aging studies at the junction of millennia. In: "Recent Advancement of Aging Mechanism". Program and Proceedings of the 2nd International Aging Symposium, p 23-31.

60. Kishikawa H., Tateno H., YanagimachiR 1999. Fertility of mouse spermatozoa retrieved from cadavers and maintained at 4 degrees C. J.Repr. Fert.,, vol. 116, p. 217-222.

61. Kusakabe H, Szczygiel M.A., Whittingham D.G., Yanagimachi R. 2001. Maintenance of genetic integrity in frozen and freeze-dried mouse spermatozoa. Proc Natl Acad Sci U S ANov 20,98, p. 13501-13506.

62. Marian T., Krasznai Z., Balkay L., Balazs M., Emri M., Bene L., Tron L. 1993. Hypo-osmotic shock induces an osmolality-dependent permeabilization and structural changes in the membrane of carp sperm. J. Histochem. Cytochem. 41, p. 291 297.

63. Marian T., Krasznai Z., Balkay L., Emri M., Tron L. 1997. Role of extracellular and intracellular pH in carp sperm motility and modification by hyperosmosis of regulation of the Na+/H+ exchanger. Cytometry, 27, p.374 382.

64. Mims S.D. 1991. Evaluation of activator solutions, motility duration and short-term storage of paddlefish spermatozoa. World Aquacult. Society, 22, p. 224 229.

65. Molnar A., Sarlos P., Fancsi G., Ratky J., Nagy S., Kovacs A. 2001. A sperm tail defect associated with on fertility in goat case report. Acta Vet. Hung., 49, p.341-348.

66. Morisawa M., Suzuki K. 1980. Osmolality and potassium ion, their roles in initiation of sperm motility in teleost. Science, 210, p. 1145 1147.

67. Morisawa M., Suzuki K., Shimizu H., Morisawa S., Yasuda K. 1983. Effects of osmolality and potassium on motility of spermatozoa from freshwater cyprinid fishes. J. Exp., Biol., 107, p. 95 103.

68. Nakamura M., Moriya M., Baba T., Michikawa Y., Yamanobe T., Arai K., Okinaga S., Kobayashi T. 1993. An endoplasmic reticulum protein, calreticulin, is transported into the acrosome of rat sperm. Exp. Cell Res., 205,p.l01-110.

69. Neil J.M., Olds-Clarke P. 1987. A computer-assisted assay for mouse sperm hyperactivation demonstrates that bicarbonate but not bovine serum albumin is required. Garnet Res., 18, p. 121 140.

70. Oda S., Morisawa M. 1993. Rises of intracellular Ca2+ and pH mediate the initiation of sperm motility by hyperosmolality in marine teleosts. Cell Motil. Cytoskeleton, 25, p. 171 178.

71. Parrish J., Susko-Parrish J.L., First N.L. 1989. Capacitation of bovine sperm by heparin: inhibitory effect of glucose and role of intracellular pH. Biol. Reprod., 41 ,p. 683-699.

72. Perchec G., Jenlin C., Cosson J., Andre F., Billard R. 1995. Relationship between sperm ATP content and motility of carp spermatozoa. J. Cell Sci., 108, p.747-753.

73. Perchec P.G., Gatti J.L., Cosson J., Jeulin C., Fierville F., Billard R. 1997. Effects of extracellular environment on the ocmotic signal transduction involved in activation of motility of carp spermatozoa. J. Reprod. Fertil., 110, p.315-327.

74. Ponce A.A. Airies V.A., Carrascosa R., Fiol de Cuneo M., Ruiz R.D., Lacuara J.L. 1998. Functional activity of epididymal Chinchilla laniger spermatozoa cryopreserved in different extenders. Res. Vet. Sei. vol. 64, p. 239-243.

75. Rait D.M., Goldenberg M., Fetterolf P., Thompson D., Dor J., Mashiach S., Garbers D.L., Eisenbach M. 1991. Sperm attraction to a follicular factor(s) correlates with human egg fertilizability. Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 88 , p.2840-2844.

76. Redondo-Muller C., Cosson M.P., Cosson J., Billard R. 1991. In vitro maturation of the potential for movement of caep spermatozoa. Mol. Rep. Dev., 29, p. 259 270.

77. Ricci G., Perticarari S., Fragonas E., Giolo E. et al. 2002. Apoptosis in human sperm: its correlation with semen quality and the presence of leukocytes. Human Reprod., 17, p.2665-2672.

78. Robitalle P.M., Munford K., Brown G. 1987.31P nuclear magnetic study of trout spermatozoa at rest, after motility, and during short-term storage. Biochem. Cell. Biol., 65, p. 474 485.

79. Rufo G.A., Singh J.P., Babcock D.F., Lardy H.A. 1982. Purification and characterization of a calcium transport inhibitor protein from bovine seminal plasma.J. Biol. Chem., 257, p. 4627 4632.

80. Sankai T., Tsuchiya H., Ogonuki N. 2001. Short-term nonfrozen storage of mouse epididymal spermatozoa Theriogenology, 55, p. 1759-1768.

81. Schwartz D., Mayaux M.J., Guihard-Moscato M.L., Spira A, et al. 1984. Study of sperm morphologic characteristics in group of 833 fertile men Andrologia, 16, p.423-428.

82. Scott F.P., Baynes S.M. 1980. A review of the biology, banding storage of salmonid spermatozoa. J. Fish. Biol., 17, p. 707 739.r127

83. Shi Q.X., Roldan E.R.S. 1995. Evidence that a GABAA-like receptor is involved in progesterone-induced acrosomal exocytosis in mouse spermatozoa. Biol. Reprod., 52 ,p.373-381.

84. Simeon F.A., Young W.C. 1930.A study of the function of the epididymis. IV. The fate of non-ejaculated spermatozoa in the genital tract of the male guinea-pig., p. 163 175.

85. Soler A.J., Perezguzman M.D., Garde J.J. 2003. Storage of Red Deer epididymides for 4 days at 5-degrees-C effects on sperm motility, viability, and morphological integrity. J. Exp. Zool. vol. 295A, p. 188199.

86. Songsasen N., Tong J., Leibo S.P. 1998. Birth of mice derived by in vitro fertilization with spermatozoa retrieved up to the twenty-four hours after death. J. Exp. Zool. vol. 280, p. 189-196.

87. Stephens R.E., Prior G. 1992. Dynein from serotonin-activated cilia and flagellar extraction characteristics and distinct sites for cAMP-dependent protein phosphorilation. J.Cell Sci., 103, p. 999 1012.

88. Storey B.T. 1995. Interaction between gametes leading to fertilization: the sperm's eye view. Reprod. Fertil. Dev., 7, p. 927-942.

89. Takai H., Morisawa M. 1995. Change in intracellular K+ concentration caused by external osmolality change regulates sperm motility of marine and freshwater teleosts. J. Cell Sci., 108, p. 1175 1181.

90. Tanimoto S., Morisawa M. 1988. Roles for potassium and calcium channels in the initiation of sperm motility in rainbow trout. Dev. Growth Differ., 30, p.117-124.

91. Tash J.S., Krinks M., Patel J., Means R.L., Klee C.B., Means A.R. 1988. Identification, characterization, and functional correlation of calmodulin-dependent protein phosphotase in sperm. J.Cell Biol., 106, p.1625 1633.

92. Tash J.S., Means A.R. 1983. Cyclic adenosine 3',5' monophosphate, calcium and protein phosphorilation in flagellar motility. Biol. Reprod., 28, p. 75 -104.

93. Toth G.P., Ciereszko A., Christ S.A., Dobrowski K. 1997. Objective analysis of sperm motility in the lake sturgeon (Acipenser fulvescens): activation and inhibition conditions. Aquaculture, 154, p. 337 348.

94. Villanueva-Diaz C., Vadillo-Ortega F., Kably-Ambe A., Diaz-Perez M., Krivitzky S.K. 1990. Evidence that human follicular fluid contains a chemoattractant for spermatozoa. Fertil. Steril., 54, p. 1180-1182.

95. Vines C.A., Yoshida K., Griffin F.J., Pillai M.C., Morisawa M., Yanagimachi R., Cherr G.N. 2002. Motility initiation in herring sperm is regulated by reverse sodium-calcium exchange. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 99, p. 2026-2031.

96. Visconti P.E., Bailey J.L., Moore G.D., Pan D., Olds-Clarke P., Kopf G.S.I995a. Capacitation of mouse spermatozoa. I. Correlation between the capacitation state and protein tyrosine phosphorylation. Development, 121, p.l 129-1137.

97. Visconti P.E., Kopf G.S. 1998. Regulation of protein phosphorylation during sperm capacitation. Biol. Reprod., 59, p. 1 6.

98. Vishwanath R., Shannon P. 1997. Do sperm cells age? A review of physiological changes in sperm during storage at ambient temperature. Reprod. Fertil. Dev. 9,p.321-331.

99. Wakayama T, Yanagimachi R. 1998. Development of normal mice from oocytes injected with freeze-dried spermatozoa. Nat Biotechnol. 16(7),p.639-641.

100. Weil M., Jacobson M.D., Raff M.C. 1998. Are caspases involved in the death of cells with a transcriptionally inactive nucleus? Sperm and chicken erythrocytes. J. Cell Sci., Ill, p.2707-2715.

101. Weng S.L., Taylor S.L., Morshedi M., Schuffner A. et al. 2002. Caspase activity and apoptotic markers in ejaculated human sperm. Mol. Human Reprod., 8,p.984-991.

102. White D.R., Aitken R.J. 1989. Relationship between calcium, cyclic AMP, ATP and intracellular pH and the capacity of hamster apermatozoa to express hyperactivated motility. Garnet Res., 22 p. 163-177.

103. Witman M. 1992. Axonemal dyneins. Curr. Opin. Cell Biol., 4, p. 74 79.

104. Young W.C. 1929a. A study of the function of the epididymis. I. Is the attainment of full spermatozoon maturity attributable to some specific action of the epididymal secretion? J. Morph. Physiol., 47, p. 479 495.

105. Yu I., Leibo S.P. 2002. Recovery of motile, membrane-intact spermatozoa from canine epididymides atored for 8 days at 4 degrees C. Theriogenology, 57 ,p. 1179-1190.

106. Zeng Y., Clark E.N., Florman H.M. 1995. Sperm membrane potential: hyperpolarization during capacitation regulates zona pellucida-dependent acrosomal secretion. Dev. Biol., 171 ,p. 554-563.