Исследование механизмов индукции цитохрома Р450 подсемейства 2В в печени экспериментальных животных тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Пустыльняк, Владимир Олегович

• Пустыльняк, Владимир Олегович
• кандидат биологических наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Пустыльняк, Владимир Олегович

Введение.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Цитохром Р450 - ключевой фермент микросомальной монооксигеназной системы. 12 ® 1.1.1 Способность цитохромов Р450 к индукции.

1.2 Цитохромы Р450 подсемейства 2В.

1.3 Индукция генов CYP2B под действием фенобарбитала.

1.3.1 Механизм активации генов CYP2B под действием фенобарбитала.

1.3.2 Характеристика дистального промотора генов CYP2B.

1.3.3 CAR и другие белки, взаимодействующие с элементами дистального промотора генов СУР2В.

1.3.4 CAR рецептор-опосредованная сигнальная трансдукция и индукция генов CYP2B.

1.3.5 Участие коактиваторов в CAR-опосредованной активации экспрессии генов

CYP2B.

1.3.6 Характеристика проксимального промотора генов CYP2B.

Ф 1.3.7 Белок, взаимодействующий с проксимальным промотором генов CYP102 и

CYP106 Bacillus megaterium.

1.3.8 Белки, взаимодействующие с проксимальным промотором генов CYP2B млекопитающих.

1.3.9 Вклад проксимального и дистального промоторов в общий механизм индукции генов CYP2B.

1.3.10 Другие регуляторные элементы генов CYP2B. ft 1.4 Индукция активности CYP2B под действием индукторов ФБ-типа.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование механизмов индукции цитохрома Р450 подсемейства 2В в печени экспериментальных животных»

Цитохром Р450 (CYP), представленный мультигенным суперсемейством, является одним из ключевых ферментов микросомальной монооксигеназной системы, ответственной за метаболизм ксенобиотиков и эндогенных соединений в живых организмах (Ляхович, Цырлов, 1978). Важнейшим свойством множественных форм цитохрома Р450 является их способность к индукции, то есть к усилению ферментативной активности фермента при воздействии соответствующего ксенобиотика. В целом, индукция активности цитохрома Р450 представляет собой механизм защиты клетки от чужеродных соединений, обычно приводящий к детоксификации ксенобиотиков (Poster, Coon, 1991). Однако существует и другой результат такого процесса. Так, метаболизм лекарств, а также многих эндогенных соединений, включая простагландины, жирные кислоты и гормоны, может драматично меняться из-за индукции аюпвности различных форм цитохрома Р450.

В настоящее время изучение механизмов индукции аетивности молекулярных форм CYP является одним из аетивно развивающихся направлений в современной молекулярной биологии, биохимии, токсикологии и фармакологии. Однако знания, касающиеся механизмов индукции, ограничены несколькими членами суперсемейства цитохрома Р450, хотя транскрипционный механизм агапвации показан для большинства подсемейств (Whitlock, 1990). Известно, что гены этих ферментов активируются с участием различных ядерных рецепторов, которые под действием ксенобиотика-лиганда, как правило, либо транслоцируются из цитоплазмы в ядро, либо агаивируются в ядре, где они, образуя гетеродимеры со своими ядерными партнерами, взаимодействуют с генами-мишенями (Handschin, Meyer, 2003).

Среди множества форм этого фермента выделяют подсемейство CYP2B, которое участвует в биотрансформации лекарств, таких как циклофосфамиды (Chang et al., 1997), а также в метаболизме пестицида метоксихлора (Dehal, Kupfer, 1994) и некоторых промутагенов, в том числе афлатоксина В1 и специфичных для табака нитрозоаминов (Code et al., 1997). Большинство проведенных исследований свидетельствует о том, что индукция CYP2B преимущественно регулируется на транскрипционном уровне (Waxman, 1999; Honkakoski, Negishi, 2000), хотя показана возможность постгрансляционной модификации белковой молекулы, вызванной воздействием индуктора (Bartlomowicz et al., 1989; Oesch-Bartlomowicz et al., 2001). Известно, что регуляция транскрипции осуществляется за счет взаимодействия специфичных ядерных белков с различными регуляторными зонами генов CYP2B. В составе регуляторных последовательностей генов CYP2B были идентифицированы так называемые проксимальный и дисталыгый промоторы, участвующие в индукции экспрессии этих генов под действием фенобарбитала (ФБ), классического индуктора этого подсемейства (Czekaj, 2000).

Значительный прогресс в понимании механизмов активации генов CYP2B был достигнут с идентификацией конститутивного андростанового рецептора (CAR). Так, при исследовании механизма индукции активности CYP2B фенобарбиталом было показано, что в цитоплазме гепатоцитов происходит активация рецептора CAR, после чего он транслоцируется в ядро, где связывается с ядерным белком RXR (ретиноидный X рецептор). Сформировавшийся гетеродимерный комплекс взаимодействует с элементом PBREM дистального промотора, что является необходимым для инициации транскрипции (Pascussi et al., 2004). Такой механизм индукции экспрессии генов CYP2B фенобарбиталом является на сегодняшний день общепринятым. Однако, несмотря на интенсивные исследования, детально механизм, по которому индукторы инициируют транслокацию CAR в ядро, на сегодняшний день до конца не ясен, хотя показано, что прямое связывание рецептора с лигандом не является необходимым для транслокации рецептора в ядро (Moore et al., 2000). Было выдвинуто предположение, что транслокация рецептора в ядро контролируется запуском процессов фосфорилирования/ дефосфорилирования белков, но единой картины о роли этих процессов пока не сложилось (Corcos, Lagadic-Gossman, 2001). Наряду с этим, в литературе есть данные о вовлечении в механизм индукции проксимального промотора через активацию не идентифицированных пока ядерных белков (Honkakoski, Negishi, 1998).

В лаборатории молекулярных механизмов канцерогенеза ИМББ СО РАМН (г. Новосибирск) ведутся исследования индуцирующего действия 2,4,6трифенилдиоксана-1,3 (ТФД). Преимущество этого соединения состоит в том, что его эффективная доза на порядок меньше, чем у фенобарбитала. В экспериментах in vitro было показано, что 2,4,6-трифенилдиоксан-1,3 и фенобарбитал активируют разные ядерные белки, способные взаимодействовать с последовательностью Барби-бокс проксимального промотора (Grigorieva et al., 2002). Однако значение и взаимное влияние различных ядерных белков, активирующихся под действием индукторов ФБ-типа in vivo, на данный момент не известны. Кроме того, эффект ТФД видоспецифичен: он активирует CYP2B у крыс, но не у мышей (Мишин и др., 1990). Причина видоспецифичных различий в индукции активности этого цитохрома Р450 остается неизвестной.

Изложенное выше определило цель работы: исследовать молекулярные механизмы индукции CYP2B в печени экспериментальных животных, обработанных индукторами фенобарбиталового типа.

Для достижения цели решались следующие задачи:

1. Изучить индуцирующее действие ТФД на монооксигеназную систему печени крыс и кроликов.

2. Определить относительное содержание мРНК CYP2B и сур2Ь в печени крыс и мышей, обработанных индукторами ФБ-типа: ФБ, ТФД и ТСРОВОР

3. Исследовать образование комплексов ядерных белков с элементом NR1 регуляторной последовательности PBREM гена CYP2B в печени крыс и мышей при индукции ФБ, ТФД и ТСРОВОР.

4. Исследовать динамику образования комплексов ядерных белков с последовательностью Барби-бокс проксимального промотора и относительное содержание мРНК CYP2B в печени крыс при индукции 2,4,6-трифенилдиоксаном-1,3 и фенобарбиталом in vivo (40 мин, Зч, 6ч, 18ч).

5. Исследовать влияние ингибиторов Ser/Thr протеинкиназ и протеинфосфатаз на ферментативную активность и содержание белков CYP2B в печени крыс при индукции 2,4,6-трифенилдиоксаном-1,3 и фенобарбиталом.

6. Определить относительное содержание мРНК CYP2B, CAR и исследовать образование комплексов ядерных белков с элементом NR1 регуляторной последовательности PBREM в печени крыс при совместном и раздельном введении ингибиторов и индукторов.

Научная новизна работы

Показаны видоспецифичные различия в индукции ТФД CYP2B у крыс и кроликов. ТФД является высокоспецифичным индуктором CYP2B изоформы у крыс и CYP2C изоформы у кроликов.

Показано, что основой межвидовых особенностей в индукции CYP2B являются различия в механизмах активации транскрипции у крыс и мышей.

Показано, что на ранних этапах индукции происходит активация ядерных белков, способных связываться с элементом Барби-бокс проксимального промотора генов CYP2B в печени крыс. В течение первых 6-ти часов индукции наблюдаются различия в динамике образования ДНК-белковых комплексов для каждого соединения. К 18-ти часам картина интенсивности комплексов становится одинаковой как при индукции ФБ, так и ТФД. Несмотря на то, что индукторы различной химической структуры по-разному активируют такое связывание, этот процесс сопровождается включением транскрипции генов.

В результате данного исследования показано существование зависимых от индуктора путей активации генов CYP2B в печени экспериментальных животных. Впервые показано, что ингибирование Са2+/кальмодулин-зависимого сигнального пути существенно усиливает ферментативную активность и содержание белков CYP2B при индукции ТФД, но не ФБ в печени крыс, причем этот эффект реализуется на уровне транскрипции генов.

Научно-практическая значимость

По своему содержанию работа носит преимущественно фундаментальный характер и представляет собой исследование молекулярных механизмов индукции CYP2B в печени экспериментальных животных под действием индукторов ФБ-типа. Полученные результаты показали, что при исследовании механизмов активации генов важно рассматривать не только рецепторный механизм, но и участие специфических сигнальных путей. Этот вывод имеет фундаментальное значение для понимания механизмов активации экспрессии генов у эукариот.

Основные положения, выносимые на защиту

1. ТФД является высокоспецифичным индуктором CYP2B изоформы в печени крыс и CYP2C изоформы в печени кроликов.

2. В основе межвидовых особенностей индукции CYP2B лежат различия в механизмах активации транскрипции генов у крыс и мышей.

3. На ранних этапах индукции ТФД и ФБ наблюдаются различия в активации ядерных белков, способных связываться с элементом Барби-бокс проксимального промотора генов CYP2B в печени крыс.

4. Активность CYP2B в печени крыс, обработанных ТФД и ФБ, меняется под воздействием ингибиторов путей сигнальной трансдукции.

5. Ингибирование Са2+/кальмодулин-зависимого сигнального пути усиливает экспрессию генов CYP2B и приводит к усилению интенсивности комплекса ядерных белков с элементом NR1 при индукции ТФД. Этот эффект не наблюдается при индукции ФБ.

Апробация работы

Результаты работы были представленны и обсуждены на VIII Европейской конференции общества изучения чужеродных соединений (ISSX), Dijon, France, 2003; на VII Международной конференции общества изучения чужеродных соединений (ISSX), Vancouver, Canada, 2004; на VIII Международной Пущинской школе-конференции молодых ученых "Биология -наука XXI века" (Пущино, Россия, 2004); на XIII Североамериканской конференции общества изучения чужеродных соединений (ISSX), Maui, Hawaii, 2005.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Пустыльняк, Владимир Олегович

выводы

1. 2,4,6-Трифенилдиоксан-1,3 индуцирует специфичные активности CYP2B в печени крыс (в 12 раз) и CYP2C в печени кроликов (15,5 раз).

2. Межвидовые особенности в индукции CYP2B печени крыс и мышей ТФД, ФБ и ТСРОВОР обусловлены различиями в активации транскрипции генов с участием NR1-элемента дистального промотора.

3. На ранних этапах индукции крыс (от 40 мин до 18 ч) формируются специфичные ДНК-белковые комплексы с элементом Барби-бокс проксимального промотора генов CYP2B, различающиеся по электрофоретической подвижности в зависимости от применяемого индуктора. Формирование таких комплексов сопровождалось увеличением относительного содержания мРНК CYP2B.

4. Ингибиторы протеинкиназы С и фосфатидилинозитол-3-киназы не оказывают влияния на индукцию CYP2B ТФД. Ингибитор Са2+/кальмодулин-зависимой протеинкиназы II значительно усиливает О-деалкилазную активность цитохрома Р450 2В в микросомах печени крыс, обработанных 2,4,6-трифенилдиоксаном-1,3, но не фенобарбиталом, что говорит в пользу существования зависимого от индуктора механизма активации генов CYP2B.

5. Усиление индуцирующего эффекта 2,4,6-трифенилдиоксана-1,3 на активность цитохрома Р450 2В под действием ингибитора W-7 сопровождается увеличением относительного содержания мРНК, что говорит о вовлечении Са2+/кальмодулин-зависимого протеинкиназного пути в индукцию.

6. Окадаевая кислота вызывает снижение индуцирующего эффекта как 2,4,6-трифенилдиоксана-1,3, так и фенобарбитала на экспрессию генов CYP2B, что свидетельствует о вовлечении протеинфосфатаз РР1 и РР2А в процесс активации этих генов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Исследование видоспецифичных особенностей индукции активности CYP2B показало, что ТФД является высокоспецифичным индуктором CYP2B в печени крыс, однако его эффект отличен от действия ФБ - классического индуктора микросомальной монооксигеназной системы. Несмотря на то, что транскрипционный механизм индукции CYP2B показан для обоих индукторов, были зарегистрированы различающиеся сигнальные пути активации экспрессии генов CYP2B. Так, ингибирование Са2+/кальмодулин-зависимого сигнального пути специфично активирует лишь индукцию CYP2B ТФД. В пользу этого вывода говорят и результаты активации этим соединением специфичных ядерных белков, способных связываться с последовательностью Барби-бокс проксимального промотора. Что касается ФБ-зависимой индукции CYP2B, то данных о вовлечении каких-либо специфичных сигнальных путей пока не получено. Чтобы ответить на этот вопрос необходимо исследование других сигнальных путей активации исследуемых генов. В тоже время, процессы дефосфорилирования белков являются общими для ТФД и ФБ. В целом, результаты говорят в пользу существования специфических сигнальных путей активации экспрессии генов CYP2B для каждого индуктора с различной химической структурой. Таким образом, при исследовании механизма индукции CYP2B выявлены индуктор- и видоспецифичные особенности. Эти особенности обусловлены изменениями в транскрипции генов CYP2B, что, скорее всего, контролируется процессами фосфорилирования/ дефосфорилирования белков.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Пустыльняк, Владимир Олегович, 2006 год

1. Ляхович В.В., Цырлов И.Б. Структурные аспекты биохимии монооксигеназ. Новосибирск: Наука. Сиб. отделение, 1978.-238 с.

2. Мишин В. М., Гуткина Н. И., Ляхович В.В., Поспелова Л. Н., Чистяков В.В. Сравнение индуцирующего действия трифенилдиоксана, бис* (дихлорпиридилокси)бензола и фенобарбитала на монооксигеназу печени. //

3. Биохимия. 1990. - Т. 55. - С. 29-36. ® 4. Мишин В. М., Гуткина Н. И., Ляхович В.В., Поспелова Л. Н., Чистяков В.В.

4. Сравнение индуцирующего действия трифенилдиоксана, бис-(дихлорпиридилокси)бензола и фенобарбитала на монооксигеназу печени. // Биохимия. 1990. - Т. 55. - С. 29-36.

5. Мишин В. М., Ляхович В. В. Множественные формы цитохрома Р450. Н.:• Наука. Сиб. отделение, 1985. 181 с

6. Чистяков В. В., Поспелова Л. Н. Трифенилдиоксан новый мощный индуктор цитохрома Р-450. // Доклады Академии наук СССР. - 1987. - Т. 296. - С. 467-469.

7. Baes M., Gulick Т., Choi H. S., Martinoli M. G., Simha D., Moore D. D. A new orphan member of the nuclear hormone superfamily that interacts with a subset of retinoic acid response elements. // Mol. Cell. Biol. 1994. - V. 14. - P. 15441551.

8. Biola A, Pallardy M. Mode of action of glucocorticoids. // Press. Med. 2000. -V. 29.-P. 215-23.

9. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilazing the principle of protein-dye binding. // Anal. Biochem. 1976. - V. 72. - P. 248-254.

10. Carey D. J., Rafferty С. M., Schramm M. M. Association of heparan sulfate proteoglycan and laminin with the cytoskeleton in rat liver. // J. Biol. Chem. -1987. V. 262. - P. 3376-3381.

11. Chawla A., Repa J. J., Evans R. M., Mangelsdorf D. J. Nuclear resceptors and Lipid physiology: opening the X-files. // Science. 2001. V. - 294. - P. 18661870.

12. Chiralli, V., Longo, V., Marini, S., Mazzaccaro, A., Fiorio, R., Gervasi, P.G. CAR and PXR expression and inducibility of CYP2B and CYP3A activities in rat and rabbit lungs. // Life Sciences. 2005. V. 76. - P. 2535-2546.

13. Choi H.S., Chung M., Tzameli I., Simha D., Lee Y.-K., Seol W., Moore D.D. Differential transactivation by two isoforms of the orphan nuclear hormone receptor CAR // J. Biol. Chem. 1997. - V. 272. - P. 23565-23571.

14. Code E.L., Crespi C.L., Penman B.W., Gonzalez F.J., Chang Т., Waxman D.J. Human cytochrome P450 2B6. Interindividual hepatic expression, substrate specificity and role in procarcinogen activation. // Drug Metab. Dispos. 1997. -V. 25.-P. 985-993.

15. Conney A.H. Induction of microcomal enzymes by foreign chemicals and carcinogenesis by polycyclic aromatic hydrocarbons. // Cancer Res. 1982. - V. 42.-P. 4875-4917.

16. Corcos L., Lagadic-Gossman D. Gene induction by phenobarbital: an update on an old question that receieves key novel answers. // Pharmacol. Toxicol. 2001. -V. 89.-P. 113-122.

17. Czekaj P. Phenobarbital-induced expression of cytochrome P450 genes // Acta Biochem. Polonica. 2000. - V. 47. - P. 1093-1105.

18. DeFranco D.B. Regulation of steroid receptor subcellular trafficking. // Cell Biochem. Biophys. 1999. - V. 30. - P. 1-24.

19. Dehal S.S., Kupfer D. Metabolism of the proestrogenic pesticide methoxychlor by hepatic P450 monooxygenases in rat and humans. Dual pathways involving novel orthoring-hydroxylation by CYP2B. // Drug Metab. Dispos. 1994. - V. 22. - P. 937-946.

20. Denison M., Whitlock J. Xenobiotic-inducible transcription of cytochrome P450 genes. // J. Biol. Chem. 1995. - V. 270. - P. 18175-18178.

21. Dunn T.J., Koleske A.J., Lindahl R., Pitot H.C. Phenobarbital-inducible aldehyde dehydrogenase in the rat. cDNA sequence and regulation of the mRNA by phenobarbital in responsive rats. // J. Biol. Chem. 1989. - V. 264. - P. 1305713065.

22. Dusso A.S., Brown A.J. Mechanism of vitamin D action and its regulation. // Am. J. Kidney Dis. 1998. - V. 32. - P. 13-24.

23. Estabrook R.W., Hildebrandt A., Ullrich V. Oxygen interaction with reduced ф cytochrome P-450. // Hoppe Seyler's Z. Physiol. Chem. 1968. - V. 349. - P.1605-1608.

24. Forman B.M., Tzameli I., Choi H.S., Chen J., Simha D., Seol W., Evans R.M., Moor D.D. Androstane metabolites bind to and deactivate the nuclear receptor CAR-p. // Nature. 1998. - V. 395. - P. 612-615.

25. Fruech F.W., Zanger U.A., Meyer U.A. Extent and character of phenobarbital-mediated changes in gene expression in the liver. // Mol. Pharmacol. 1997. - V.51.-P. 363-369.

26. Gerbal-Chaloin S., Pascussi J.M., Pichard-Garcia L., Daujat M., Waechter F., ® Fabre J. M., Carrere N., Maurel P. Induction of CYP2C genes in humanhepatocytes in primary culture. // Drug Metab. Dispos. 2001. - V. 29. - P. 242251.

27. Gonzalez F.J. The molecular biology of cytochrome P450s. // Pharmacol. Rev. -1988. V. 40.-P. 243-285.

28. Gonzelez F.J., Liu S.Y., Yano M. Regulation of cytochrome P-450 genes:molecular mechanisms. // Pharmacogenetics. 1993. - V. 3. - P. 51-57.

29. Goodwin В., Moore J.T. CAR: detailing new models. // TRENDS in Pharmacological Sciences. 2004. - V. 25. - P. 437-441.

30. Gorski K., Carniero M., Schilber U. Tissue-specific in vitro transcription from the• mouse albumen promoter. // Cell. 1986. - V. 47. - P. 767-776.

31. Grigorieva E., Soshilov A., Surovtseva Y., Schwartz E.L., Duzhak T.G., Gulyaeva L.F., Lyakhovich V.V. Induction of the CYP2B genes by• triphenyldioxane treatment in the rat liver. // Toxicol, in Vitro. 2002. - V. 16. P. -467-473.

32. Handschin C., Meyer U.A. Induction of Drug Metabolism: The role of nuclear receptors. // Phamacol. Rev. 2003. - V. 55. - P. 649-673.

33. He J. S., Fulco A. J. A barbiturate-regulated protein binding to a common sequences in in the cytochrome P-450 genes of rodents and bacteria. // J. Biol. Chem. 1991. -V. 266. - P. 7864-7869.

34. Honkakoski P., Moore R., Gynther J., Negishi M. Characterization of phenobarbital-inducible mouse Cyp2bl0 gene transcription in primary hepatocytes. // J. Biol. Chem. 1996. - V. 271. - P. 9746-9753.

35. Honkakoski P., Negishi M. Protein serine/threonine phosphatase inhibitors suppress phenobarbital-induced Cyp2bl0 gene transcription in mouse primary hepatocytes. // Biochem. J. 1998a. - V. 330. - P. 889-895.

36. Honkakoski P., Negishi M. Regulatory DNA elements of phenobarbital-responsive cytochrome P-450 CYP2B genes. // J. Biochem. Mol. Toxicol. 1998. -V. 12.-P. 3-9.

37. Honkakoski P., Negishi M. Regulatory DNA elements of phenobarbital-responsive cytochrome P-450 CYP2B genes. // J. Biochem. Mol. Toxicol. -1998b.-V. 12.-P. 3-9.

38. Honkakoski P., Zelko I., Sueyoshi Т., Negishi M. The nuclear orphan receptor CAR-retinoid X receptor heterodimer activates the phenobarbital-responsive enhancer module of the CYP2B gene. // Mol. Cell. Biol. 1998. - V. 18. - P. 5652-5658.

39. Honkakoski P., Zelko I., Sueyoshi Т., Negishi M. The nuclear orphan receptor CAR-retinoid X receptor heterodimer activates the phenobarbital-responsive enhancer module of the CYP2B gene. // Mol. Cell. Biol. 1998. - V. 18. - P. 5652-5658.

40. Honkakoski, P Negishi, M. Regulation of cytochrome P450 (CYP) genes by nuclear receptors. // Biochem. J. 2000. - V. 347. - P. 321-337.

41. Jones C. R., Lubet R. A. Induction of a pleiotropic response by phenobarbital and related compounds. // Biochem. Pharmacol. 1992. - V. 44. - P. 1651-1660.

42. Kakizaki S., Karami S., Negishi M. Retinoic acid repress constitutive active receptor-mediated induction by l,4-bis2-(3,5-dichloropyridyloxy).benzene of the Cyp2blO gene in mouse primary hepatocytes. // Drug Metab. Dispos. 2002. -V.30.-P. 208-211.

43. Kawamoto Т., Sueyoshi Т., Zelko I., Moore R., Washburn K., Negishi M. Phenobarbital-responsive nuclear translocation of the receptor CAR in induction of the CYP2B2 gene. // Mol. Cell. Biol. 1999. - V. 19. - P. 6318-6322.

44. Kim J., Kemper B. Phenobarbital alters protein binding to the CYP2B1/2 phenobarbital-responsive unit in native chromatin. // J. Biol. Chem. 1997. - V. 272.-P. 29423-29425.

45. Kim J., Rivera-Rivera I., Kemper B. Tissue-specific chromatin structure of the phenobarbital-responsive unit and proximal promoter of CYP2B1/2 and modulation by phenobarbital. // Nucl. Acids Res. 2000. - V. 28. - P. 11261132.

46. Ф McKee D. D., Oliver В. В., Willson Т. M., Zetterstrom R. H., Perlmann Т.,1.hmann J. M. An orphan nuclear receptor activated by pregnanes defines a novel steroid signaling pathway. // Cell. 1998. - V. 92. - P. 73-82.

47. Kocarek T. A., Reddy A. B. Negative regulation by dexamethasone of fluvastatin-inducible CYP2B expression in primary cultures of rat hepatocytes: role of CYP3A. II Biochem. Pharmacol. 1998. - V. 55. - P. 1435-1443.

48. Kolch W. Meaningful relationships: the regulation of the Ras/Raf/MEK/ERKpathway by protein interactions. // Biochem. J. 2000. - V. 351. - P. 289-305

49. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head ofbacteriophage T4. // Nature. 1970. - V. 227. - P. 680-685.

50. Lee S. H., Wang X., DeJong J. Functional interaction between atypical NF-kB site from the rat CYP 2B1 promotor and the transcriptional repressor RBP-Jk/CBFI. // Nucl. Acids Res. 2000. - V. 28. - P. 2091-2098.

51. Biol.- 1995. V.- 15.-P. 3012-3022.

52. Leighton J.K., Kemper B. Differential induction and tissue-specific expression of closely related members of the phenobarbital-inducible rabbit cytochrome P-450 gene family. // J Biol Chem. 1984. - V. 259. - P. 11165-11168.

53. Liang Q., He J.S., Fulco A.J. The role of barbie box sequences as cis-acting elements involved in the barbiturate-mediated induction of cytochromes

54. Р450ВМ-1 and P450BM-3 in Bacillus Megaterium. II J. Biol. Chem. 1995. - V. 270.-P. 4438-4450.

55. Longo V., Mazzaccaro A., Naldi F., Gervasi P.G. Drug metabolizing enzymes in ф liver olfactory and respiratory epithelium of cattle. // J. Biochem. Toxicol. 1991.-V. 6.-P. 123-128.

56. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent. // J. Biol. Chem. 1951. - V. 193. - P. 265-275.

57. Luc P.-V.T., Adesnik M., Ganguly S., Shaw P.M. Transcriptional regulation of the CYP2B1 and CYP2B2 genes by C/EBP-related proteins. // Biochem. Parmacol. 1996. - V. 51. - P. 345-356.ц

58. Mangelsdorf D.J., Thummel C., Beato M., Herrlich P., Schutz G., Umesono K., Blumberg В., Kasner P., Mark M., Chambon P., Evans R.M. The nuclear receptor• superfamily: the second decade. // Cell. 1995. - V. 83. - P. 835-839.

59. Min G., Kemper J.K., Kemper B. Glucocorticoid receptor- interacting protein 1 mediates ligand-independent nuclear translocation and activation of constitutive androstane receptor in vivo. // J. Biol. Chem. 2002. - V. 277. - P. 26356-26363.

60. Moore L.B., Parks D.J., Jones S.A., Bledsoe R.K., Consler T.G., Stimmel J.B.,

61. Goodwin В., Liddle C., Blanchard S.G., Willson T.M., Collins J., Kliewer S.A. Orphan nuclear receptors CAR and PXR share xenobiotic and steroid ligands. // J. Biol. Chem.-2000.-V. 275.- P. 15122-15127.

62. Moore L.B., Parks D.J., Jones S.A., Bledsoe R.K., Consler T.G., Stimmel J.B., Goodwin В., Liddle C., Blanchard S.G., Willson T.M., Collins J.L., Kliewer S.A.

63. Orphan nuclear receptors CAR and PXR share xenobiotic and steroid ligands. // J.

64. Biol. Chem.-2000.- V.275.-P. 15122-15127.

65. Nash T. The colorimetric estimation of formaldehyde by means of the Hantzsch reaction. // Biochem. J. 1953. - V. 55. - P. 416-421.

66. Nebert D.W., Nelson D.R., Coon M.J., Estabrook R.W., Feyereisen R. et al. The P-450 superfamily: update of new sequences, gene mapping and recommended nomenclature. // DNA Cell Biol. 1991.-V. 10.-P. 1-14.

67. Nelson D.R., Strobel H.W. Evolution of cytochrome P-450 proteins. // Mol. Biol. Evol. 1987. - V. 4. - P. 572-593.

68. Nishimura M., Naito S., Yokoi T. Tissue-specific mRNA expression profiles of human nuclear receptor subfamilies. // Drug. Metab. Pharmacokin. 2004. - V. 19.-P. 135-149.

69. Park Y., Kemper B. The CYP2B1 proxymal promoter contains a functional C/EBP regulatory element. // DNA Cell Biol. 1996. - V. 15. - P. 693-701.

70. Park Y., Li H., Kemper B. Phenobarbital induction mediated by a distal CYP2B2 sequence in rat liver transiently transfected in situ. // J. Biol. Chem. 1996. - V. 271.-P. 23725-23736.

71. Patel N.V., Omer C.A. Phenobarbital and sulfonilurea-inducible operons incoding herbicide-metabolizing cytochromes P450 in Streptomyces griseolus. II Gene. -1992.-V. 112.-P. 67-76.

72. Pickett C.B, Lu A.Y. Glutathione S-transferases: gene structure, regulation, and biological function. // Annu. Rev. Biochem. 1989. - V. 58. - P. 743-746.

73. Poland А., Мак I., Glover E., Boatman R. J., Ebetino F.H., Kende A.S. 1,4-Bis2-(3,5-dichloropyridyloxy.-benzene, a potent phenobarbital-like inducer of microsomal monooxigenase activity. // Mol. Pharmacol. 1980. - V. 18. - P. 571-580.

74. Poster T.D., Coon M.J. Cytochrom P450. Multiplicity of isoforms, substrates and catalytic and regulatory mechanisms. // J. Biol. Chem. 1991. - V. 266. - P. 13469-13472.

75. Poster T.D., Coon M.J. Cytochrom P450. Multiplicity of isoforms, substrates and catalytic and regulatory mechanisms. // J. Biol. Chem. 1991. - V. 266. - P. 13469-13472.

76. Posti K., Leinonen S., Tetri S., Viitala P., Pelkonen O., Raunio H. Modulation of murine phenobarbital-inducible CYP2A5, CYP2B10 and CYP1A enzymes by inhibitors of protein kinases and phosphatases. // Eur. J. Biochem. 1999. - V. 264.-P. 19-26.

77. Pratt W.B., Silverstein A.M., Galigniana M.D. A model for the cytoplasmic trafficking of signalling proteins involving the hsp90-binding immunophilins andp 50cdc37 Ц Cell gignal 1999 ул j p 839.851.

78. Ram N., Rao M.V., Prabhu I., Nirodi C.S., Sultana S., Vatsala P.G., Padmanaban G. Characterization of a negative cis-acting DNA element regulating the transcription of CYP2B1/2B2 gene in rat liver. // Arch. Biochem. Biophys. -1995.-V. 317.-P. 39-45.

79. Ramsden R., Beck N.B., Sommer K.M., Omiesinski C.J. Phenobarbital responsiveness, conferred by the 5'-flanking region of the rat CYP2B2 gene in transgenic mice. // Gene. 1999. - V. 228. - P. 169-179.

80. Ramsden R., Sommer K.M., Omiesinski C.J. Phenobarbital induction and tissue-specific expression of the rat CYP2B2 gene in transgenic mice. // J. Biol. Chem. 1993. -V. 268. - P. 21722-21726.

81. Robinson-Rechavi M., Carpentier A., Duffraisse M., Laudet V. How many nuclear hormone receptors are there in the human genome? // Trends. Genet. -2001.-V. 17.-P. 554-556.

82. Roe A.L., Blouin R.A., Howard G. In vivo phenobarbital treatment increases protein binding to a putative API site in the CYP2B2 promoter. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1996. - V. 228. - P. 110-114.

83. Rosenfeld M.C., Glass C.K. Coregulator codes of transcriptional regulation by nuclear receptor. // J. Biol. Chem. 2001. - V. 276. P. 36865-36868.

84. Ryan D.E., Levin W. Purification and characterization of hepatic microsomal cytochrome P-450. // Pharmacol. Ther. 1990. - V. 45. - P. 153-239.

85. Schlichting I., Berendzen J., Chu K., Stock A. M., Maves S.A., Benson D.E., Sweet R.M., Ringe D., Petsko G.A., Sligar S.G. The catalytic pathway of cytochrome P450cam at atomic resolution. // Science. 2000. - V. 287. - P. 1615-1622.

86. Schuetz E.G., Wrighton S.A, Safe S.H., Guzelian P.S. Regulation of cytochrome P-450 by phenobarbital and phenobarbital-like inducers in adult rat hepatocytes in primary monolayer culture and in vivo. II Biochemistry. 1986. -V. 25. - P. 1124-1233.

87. Sidhu J.S., Omiecinski C.J. An okadaic acid-sensitive pathway involved in the phenobarbital-mediated induction of CYP2B gene expression in primary rat hepatocyte cultures. // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997. - V. 282. - P. 11221129.

88. Sidhu J.S., Omiecinski C.J. cAMP associated inhibition of phenobarbital-inducible cytochrome P450 gene expression in primary rat hepatocyte cultures. // J. Biol. Chem. 1995. - V. 270. - P. 12762-12773.

89. Smirlis D., Muangmoonchai R., Edwards M., Phillips I. R., Shephard E. A. Orphan receptor promiscuity in the induction of cytochromes P450 by xenobiotics. // J. Biol. Chem. 2001. - V. 276. - P. 12822-12826.

90. Smith G., Henderson C.J., Parker M.G., White R., Bars R.G., Wolf R. 1,4-Bis2-(3,5-dichloropyridyloxy.-benzene, an extremely potent modulator of mouse hepatic cytochrome P-450 gene expression. // Biochem. J. 1993. - V. 289. P. 807-813.

91. Sogawa К, Fujii-Kuriyama Y. Ah receptor, a novel ligand-activated transcription factor. // J. Biochem (Tokyo). 1997. - V. 122. - P. 1075-1079.

92. Sommer K.M., Ramsden R., Sidhu J., Costa P., Omiecinski C.J. Promoter region analysis of the rat CYP2B1 and CYP2B2 genes. // Pharmacogenetics. -1996.-V. 6.- P. 369-374.

93. Sueyoshi Т., Kawamoto Т., Zelko I., Honkakoski P., Negishi M. The repressed nuclear receptor CAR responds to phenobarbital in activating the human CYP2B6 gene. // J. Biol. Chem. 1999. - V. 274. - P. 6043-6046.

94. Sueyoshi Т., Negishi M. Phenobarbital response elements of cytochrome P-450 genes and nuclear receptors. // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 2001. - V. 41. -P. 123-143.

95. Sultana S., Nirodi C., Ram N., Prabhu L., Padmanaban G. A 65-kDa protein mediated the positive role of heme in regulating the transcription of CYP2B1/B2 gene in rat liver. // J. Biol. Chem. 1997. - V. 272. - P. 8895 - 8900.

96. Swales K., Negishi M. CAR, driving into the future. // Mol. Endocrinol. 2004. -V. 18.-P. 1589-1598.

97. Trottier E., Belzil A., Stoltz C., Anderson A. Localization of a phenobarbital-responsive element (PBRE) in the 5'-flanking region of the rat CYP2B2 gene. // Gene. 1995. - V. 158. - P. 265-268.

98. Tu Y.Y., Yang C.S. High-affinity nitrosamine dealkylase system in rat liver microsomes and its induction by fasting. // Cancer Res. 1983. - V. 43. - P. 623629.

99. Tzameli I., Pissios P., Schuetz E.G., Moore D.D. The xenobiotic compound 1,4-bis2(3,5-dichloropyridylloxy).benzene is an agonist ligand for the nuclear receptor CAR. // Mol. Cell. Biol. 2000. - V. 20. - P. 2951-2958.

100. Ueda A., Hamadeh H. K., Webb H. K., Yamamoto Y., Sueyoshi Т., Afshari C.A., Lehmann J.M., Negishi M. Diverse roles of the nuclear orphan receptor CAR in regulating hepatic genes in response to phenobarbital. // Mol. Pharmacol. -2002.- V. 61.- P. 1-6.

101. Upadhya P., Venkateswara Rao M., Venkateswara V., Ranjarajan P. N., Padmanaban G. Identification and functional characterization of a c/.s-acting

102. DNA element regulating CYP2B1/2B2 gene transcription in rat liver. // Nucl. Acids Res. 1992. - V. 20. - P. 557-562.

103. Waxman D.J. Interactions of hepatic cytochromes P-450 with steroid hormones. Regioselectivity and stereospecificity of steroid metabolism and hormonal regulation of rat P-450 enzyme expression. // Biochem. Pharmacol. 1988. - V. 37.-P. 71-84.

104. Waxman D.J. P-450 gene induction by structurally diverse xenochemicals: central role of nuclear receptors CAR, PXR, and PPAR. // Arch. Biochem. Biophys.- 1999.-V. 369.-P. 11-23.

105. Waxman D.J., Azaroff L. Phenobarbital induction of cytochrome P-450 gene expression. // Biochem. J. 1992. -V. 281. - P. 577-592.

106. Waxman D.J., Dannan G.A., Guengerich F.P. Regulation of rat hepatic cytochrome P-450: age-dependent expression, hormonal imprinting, and xenobiotic inducibility of sex-specific isoenzymes. // Biochemistry. 1985. - V. 24,- P. 4409-4417.

107. Waxman D.J., Walsh C. Phenobarbital-induced rat liver cytochrome P-450. Purification and characterization of two closely related isozymic forms. // J. Biol. Chem. 1982. - V. 257. - P. 10446-10457.

108. Wei P., Zhang J., Egan-Hafley M., Liang S., Moore D.D. The nuclear receptor CAR mediates specific xenobiotic induction of drug metabolism. // Nature (Lond). 2000. - V. 407. - P. 920-923.

109. Whitlock J. P. Jr. Genetic and molecular aspects of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin action. // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1990. - V. 30. - P. 251-277.

110. Wong H., Anderson W. D., Cheng Т., Riabowol К. T. Monitoring mRNA expression by polymerase chain reaction: The "primer-dropping" method.// Anal. Biochem. 1994.-V. 223-P. 251-258.

111. Wood A.D., Ryan D.E., Thomas P.E., Levin W. Regio- and stereo selective metabolism of two C-19 steroids by five highly purified and reconstituted rat hepatic cytochrome P-450 isozymes. // J. Biol. Chem. 1983. - V. 158. - P. 8839-8847.

112. Yamamoto Y., Kawamoto Т., Negishi M. The role of the nuclear receptor CAR as coordinate regulator of hepatic gene expression in defense against chemical toxicity. // Arch. Biochem. Biophys. 2003. - V. 409. - P. 207-211.

113. Yamamoto Y., Kawamoto Т., Negishi M. The role of the nuclear receptor CAR as coordinate regulator of hepatic gene expression in defense against chemical toxicity. // Arch. Biochem. Biophys. 2003. - V. 409. - P. 207-211.

114. Yoshinari K., Kobayashi K., Moore R., Kawamoto Т., Negishi M. Identification of the nuclear receptor CAR:HSP90 complex in mouse liver and recruitment of protein posphatase 2A in response to Phenobarbital. // FEBS Lett. 2003. - V. 548. - P. 17-20.

115. Yoshinari K., Sueyoshi Т., Moore R., Negishi M. Nuclear receptor CAR as a regulatory factor induction of CYP2B1 gene by phenobarbital in rat livers. // Mol. Pharmacol. 2001. - V. 59. - P. 278-284.

116. Zelko I., Negishi M. Phenobarbital-elicited activation of nuclear receptor CAR in induction of cytochrome P-450 genes. // Biochem. Biophys. Res. Commun. -2000. V. 277. - P. 1-6.