Исследование механизмов активации генов CYP2B в печени крыс при индукции трифенилдиоксаном и фенобарбиталом тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Шварц, Елена Ивановна

• Шварц, Елена Ивановна
• кандидат биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Шварц, Елена Ивановна

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Общее представление о семействе цитохрома Р450.

1.1 Функционирование микросомальной монооксигеназной системы в печени человека и животных.

1.2 Множественные формы цитохрома Р450. Суперсемейство Р450.

1.3 Типы ксенобиотиков.

Глава2. Подсемейство CYP2B.ё:.:;:.

2.1. Характеристика подсемейства CYP2B у разных видов животных и человека.

2.2 Цитохромы 2В1 и 2В2 печени крыс.

2.3. Механизмы активации генов CYP2B под действием фенобарбитала.

Глава 3. Материалы.

Глава 4. Методы.

Глава 5. Результаты исследований.

5.1. Исследование экспрессии генов цитохромов Р4502В в печени крыс при воздействии ксенобиотиков с различной химической структурой.

5.2. Изучение динамики накопления мРНК генов CYP2B крыс при индукции фенобарбиталового типа.

5.3. Связывание участка ДНК (-160/-127 п.н.) гена CYP2B2 с ядерными белковыми экстрактами, выделенными из печени контрольных и индуцированных фенобарбиталом или трифенилдиоксаном животных.

5.4. Связывание фрагмента ДНК (-89/-73 п.н.) гена CYP2B2 с ядерными белковыми экстрактами, выделенными из печени контрольных и индуцированных фенобарбиталом или трифенилдиоксаном животных.

5.5. Влияние индукторов фенобарбиталового-типа на образование ДНК-белковых комплексов участками минимального промоторного элемента и ядерными белковыми факторами.

5.6. Роль трифенилдиоксана в формировании белковых комплексов с участками минимального промоторного элемента.66.

5.7. Влияние индукторов фенобарбиталового-типа на связывание участков Барби-бокса и негативного элемента гена CYP2B2 с белковыми ядерными экстрактами, выделенными из печени фенобарбитал - или трифенилдиоксан - индуцированных животных.

Глава 6. Обсуждение результатов.

6.1. Изучение роли минимального промоторного элемента в индуцируемой фенобарбитал или трифенилдиоксан экспрессии генов CYP2B.

6.2. Влияние индукторов фенобарбиталового типа на формировании белковых комплексов с участками минимального промоторного элемента.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование механизмов активации генов CYP2B в печени крыс при индукции трифенилдиоксаном и фенобарбиталом»

Живые организмы, взаимодействуя с окружающей средой, подвергаются продолжительному воздействию различных химических компонентов биологического и антропогенного происхождения (лекарств, ядов, химических факторов загрязнения окружающей среды, пищевых добавок, гормонов), содержащихся в воде, воздухе, почве, пищевых продуктах. Детоксикацию и последующее выведение из организма этих веществ, как экзогенного, так и эндогенного происхождения, осуществляет микросомальная монооксигеназная система (ММС), локализованная в эндоплазматических мембранах различных органов и тканей. Способность ММС метаболизировать огромное число ксенобиотиков (КС) и эндогенных субстратов обусловлена функционированием множественных форм ее ключевого компонента -цитохрома Р450 (СУР) (Мишин, Ляхович, 1985). Ксенобиотики претерпевают в организме метаболическую активацию, превращаясь в промежуточные электрофильные продукты. Эти метаболиты либо удаляются из организма, либо взаимодействуют с макромолекулами клетки (ДНК, РНК, белки), что приводит, в конечном счете, к развитию процессов канцерогенеза. Например, показано, что активация цитохромов Р450 полициклическими ароматическими углеводородами и ароматическими аминами предшествует токсическому и канцерогенному действию этих соединений на организм человека и животных (МсМапш е1 а1., 1990). Следовательно, микросомальная монооксигеназная система функционирует как по детоксикационному, так и по токсикационному механизмам, поэтому последствия действия многочисленных ксенобиотиков могут быть различными. Известно более 600 ксенобиотиков, обладающих способностью вызывать обратимое увеличение ферментативной активности монооксигеназ. Главным фактором в этих процессах 6 является множественность форм CYP, активность которых и определяет различные эффекты ксенобиотиков. В связи с этим становится очевидной необходимость изучения механизмов, регулирующих активность множественных форм цитохрома Р450.

В последнее время большое внимание уделяется изучению подсемейства генов CYP2B. Ферменты этого подсемейства участвуют в метаболизме лекарственных препаратов, а также осуществляют детоксикацию многих ксенобиотиков с самой разнообразной химической структурой (Nelson & Strobel, 1987; Nebert et al., 1991). Эти же CYP могут активировать некоторые опасные токсины такие, как афлатоксин Bi, с образованием, генотоксичных канцерогенных аддуктов с ДНК и белками (Ramersaud et al., 1983). Подсемейство CYP2B индуцируется большой группой структурно неродственных индукторов (органические растворители, пестициды, хлорированные бифенилы и лекарства). Прототипом этой группы является фенобарбитал (ФБ), применяемый с 1912 года как снотворное и противосудорожное лекарство при лечении эпилепсии. К этой группе также относится трифенилдиоксан (ТФД) (Mishin et al., 1990). Механизм активации генов CYP2B в печени крыс во время индукции ФБ-типа до конца не ясен и широко дискутируется в специальной литературе (Waxman & Azaroff, 1992; Waxman, 1994). Кроме этого, неизвестно, является ли действие индукторов ФБ-типа универсальным, как это описано для полициклических ароматических углеводородов (ПАУ), которые имеют планарное строение, или каждый индуктор запускает особенный механизм активации генов CYP2B. В настоящее время происходит накопление экспериментальных данных о регуляторных элементах, участвующих в транскрипции генов CYP2B под действием индукторов ФБ-типа (Не & Fulco, 1991; Liang & Fulco, 1995; Liang et al., 1995; Trottier et al., 1995; Upadhya et al., 1992; Ram et al., 1995; Park et al., 1996; Park & Kemper, 1996; Shaw et al., 1997). Достаточно большой прогресс достигнут в исследовании цис-активных элементов как в дистальных, так и в 7 проксимальных районах 5'-фланкирующей области генов CYP2B. В районе, локализованном между -199/-45, названном группой Падманабана минимальным промотором, выявлены два участка, с которыми связываются факторы транскрипции. По своим функциям эти участки были названы негативным (-160/-127) и позитивным (-98/-69) регуляторными элементами, НЭ и ПЭ соответственно. В состав ПЭ входит последовательность -89/-73, названная Барби-боксом, встречающаяся у большинства прокариот и эукариот (Не and Fulko, 1991, Upadhya et al., 1992; Ram et al., 1995). В литературе описаны гель-ретардационные эксперименты по изучению взаимодействия позитивных или негативных элементов с ядерными экстрактами из печени контрольных и индуцированных крыс. При этом выделение ядерных экстрактов из печени индуцированных крыс осуществляют в первые часы после введения индуктора (Не and Fulko, 1991, Upadhya et al., 1992 ). К настоящему моменту нет данных о динамике связывания ПЭ и НЭ с ядерными экстрактами, выделенными в разное время от начала введения индукторов. Кроме этого, в последнее время роль как всего минимального промоторного элемента, так и собственно Барби-бокса в регуляции транскрипции генов CYP2B1/2B2 была поставлена под сомнение. Так, в работе Рамсдена с соавт. обнаружено, что в трансгенных мышах проксимальный участок -800 п.н. гена CYP2B2 не является ФБ-чувствительным (Ramsden et al., 1993). В лаборатории Андерсона показано, что введение в Барби-бокс 3 нуклеотидных замен не оказывает влияния на активируемую индукторами экспрессию гена CYP2B2 (Stoltz et al., 1998).

Таким образом, ряд вопросов, касающихся регуляции экспрессии генов CYP2B, к настоящему моменту не выяснен. Не определена до конца роль ПЭ и НЭ в инициации транскрипции соответствующих генов, не показано, как осуществляются ДНК-белковые взаимодействия на всем этапе: от начала транскрипции генов CYP2B до ее завершения. Открытым остается также вопрос о специфичности действия 8 индукторов ФБ-типа.

В связи с вышеизложенным была определена цель работы. Целью настоящей работы являлось изучение механизмов активации генов CYP2B1/2B2 в печени крыс при индукции трифенилдиоксаном и фенобарбиталом.

В соответствии с этим были поставлены следующие задачи:

1. Оценить активность цитохромов Р4502В1 в метаболизме специфичного субстрата пентоксирезоруфина в печени крыс, индуцированных фенобарбиталом или трифенилдиоксаном.

2. Определить динамику накопления мРНК генов CYP2B во время индукции фенобарбиталом и трифенилдиоксаном.

3. С помощью гель-ретардационного анализа исследовать взаимодействие позитивных и негативных участков проксимального участка промоторной области генов CYP2B1/2 с ядерными белками, изолированными из печени крыс индуцированных фенобарбиталом или трифенилдиоксаном, от начала транскрипции до ее завершения (от 6 до 72 часов от введения индукторов).

4. Провести анализ ДНК-белковых взаимодействий позитивных и негативных участков проксимального промотора генов CYP2B1/2 с ядерными белками, изолированными из печени неиндуцированных животных при добавлении индукторов ФБ-типа в системе in vitro.

Научная новизна работы

В результате проведенного исследования в области гена CYP2B2 с помощью гель-ретардационного анализа впервые было проанализировано формирование ДНК/белковых комплексов, образованных позитивным и негативным элементами с ядерными белками, на всем этапе: от старта транскрипции до ее завершения (от 6 до 72 часов от начала введения индукторов). Было показано, что в первые 6-9 часов после индукции оба исследуемых цис-активных элемента ведут себя согласно классической модели активации транскрипции генов СУР2В, описанной группой Падманабана (Rangarajan et al., 1995). В более поздние интервалы времени после индукции ТФД или ФБ (с 18 по 72 час.), когда ген СУР2В транскрибируется, эта картина меняется. 9

Негативный элемент начинает функционировать как позитивный элемент транскрипции. Об этом свидетельствует динамика его взаимодействия с ядерными белками.

Продемонстрировано влияние индукторов ФБ-типа на формирование ДНК/белковых комплексов в системе in vitro. Впервые был зарегистрирован новый комплекс (N1), образованный позитивным элементом транскрипции и ядерными белками.

Впервые выявлено два новых ДНК-белковых комплекса (NH и N111), образованных под влиянием ТФД. Кроме этого, показано, что это соединение может напрямую взаимодействовать с позитивным элементом. На основании экспериментальных данных предложена гипотетическая схема активации гена CYP2B2 при индукции ТФД.

Для генов цитохромов Р450 впервые была продемонстрирована различающаяся динамика накопления мРНК при индукции ФБ и ТФД.

Обнаружены различия в ферментативных активностях цитохромов Р450 подсемейства 2В в печени крыс, индуцированных ФБ и ТФД.

Теоретическая и практическая ценность работы

Полученные в работе результаты являются новой информацией об активации генов CYP2B под действием индукторов ФБ-типа, что способствует дальнейшему развитию представлений о механизмах индукции этого гемопротеида.

Использование в качестве индуктора лекарственного препарата ФБ уточняет представления о механизмах его действия. Обнаруженный факт взаимодействия ТФД с позитивным элементом гена CYP2B открывает новые перспективы для изучения механизмов активации генов.

10

Положения, выносимые на защиту:

1. Активность СУР2В1 в метаболизме пентоксирезоруфина в печени крыс при индукции фенобарбиталом выше, чем при индукции трифенилдиоксаном.

2. Динамики накопления мРНК генов СУР2В при индукции фенобарбиталом и трифенилдиоксаном различается.

3. Интенсивность связывания позитивного и негативного элементов генов СУР2В с ядерными белками печени крыс, обработанных как ФБ, так и ТФД, не зависит от применяемого индуктора.

4. В течение длительного времени (с 9 до 72 часов после введения индукторов) интенсивность связывания негативного элемента с ядерными белками падает, затем возрастает, а к 72 часам достигает исходного уровня.

5. При индукции ТФД регистрируется пять ДНК/белковых комплексов, тогда как при ФБ - индукции только три.

6. ТФД инициирует образование ДНК/белковых комплексов, взаимодействуя с позитивным элементом.

11

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Шварц, Елена Ивановна

ВЫВОДЫ

1. Показано, что ферментативная активность цитохрома Р4502В1 в метаболизме пентоксирезоруфина в печени крыс при индукции фенобарбиталом в 1,5 раза выше, чем при индукции трифенилдиоксаном.

2. При индукции фенобарбиталом максимальное количество мРНК генов CYP2BJ/2B2 регистрируется к 18 часам от начала введения индуктора, а при индукции трифенилдиаксаном - к 48 часам.

3. Интенсивность связывания негативного элемента с белками ядерного экстракта через 6-9 часов от начала введения индукторов уменьшается, к 48-56 часам увеличивается, а к 72 часам возвращается к исходному состоянию.

4. Интенсивность связывания Барби-бокса с ядерными белками при индукции крыс трифенилдиоксаном или фенобарбиталом максимальна к 18 часам, затем снижается, возвращаясь к 72 часам на исходный контрольный уровень.

5. Введение индукторов фенобарбиталового-типа in vitro инициирует образование трех комплексов Барби-бокс-ядерные белки, один из которых (N1) выявлен впервые, что свидетельствует о вовлечении позитивного элемента в процесс регуляции транскрипции генов CYP2B .

6. Трифенилдиоксан, в отличие от фенобарбитала, инициирует образование пяти ДНК-белковых комплексов, в два из которых (N11 и NIII) входит сам индуктор.

84

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Шварц, Елена Ивановна, 2000 год

1. Ляхович В В., Цырлов И.Б. Индукция ферментов метаболизма ксенобиотиков // Новосибирск: Наука. Сиб. отд-ние, 1981, 240 с.

2. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Д. Методы генетической инженерии // М.: Мир, 1984

3. Мазин А.В., Кузнеделов К.Д., Краев А.С. и др. Методы молекулярной генетики и генной инженерии. Новосибирск, Наука, 1990, 247 с.

4. Мишин В.М., Ляхович ВВ. Множественные формы цитохрома Р450 // Новосибирск: Наука. Сиб. отд-ние, 1985, 180 с.

5. Цырлов И.Б. Хлорированные диоксины: биологические и медицинские аспекты // Аналит. Обзор. Новосибирск: Наука. Сиб. отд-ние, 1990, 210 с.

6. Ariyoshi N., Oguri К., Koga N., Yoshimura H and Funae Y. Metabolism of highly persistent PCP congener, 2,4,5,2',4',5'-hexachlorobiphenyl, by human CYP2B6 // Biochem. and Biophys. res. com., 1995, v.212, n.2, p.455-460.

7. Atchison M., Adesnik M. A cytochrome P-450 multigene family. Characterization Of a gene activated by phénobarbital administration // J. Biol. Chem., 1983, v. 258. p. 1128511295

8. Bandiera S., Safe S., Okey A.B. Binding of polychlorinated biphenyls classified as either phenobarbitone-, 3-methylcholanthrene or mixed-type inducers to cytosolic Ah receptor // Chem. Biol. Interact., 1982, v.39, p.259-277.

9. Boobis A.R., Sesardic D., Murray BP. Species variation in the response of the cytochrome P450 dependent monooxygenase system to inducers and inhibitors // Xenobiotica. 1990. v.20, p.l 139-1161.

10. Burke M., Tooles L., Senik C. Ethoxy-, pentoxy-, benzyloxy-, phenoxazones and homologues: a series of substrates to distinguish between different induced cytochrome P-450//Biochem. Pharmacol. 1985. v. 34. p. 3337-3346.

11. Christou M. Selective potent restriction of P450b- but not P450e- dependent 7,12-dimethylbenza.antracene metabolism by the microsomal environment. // Arch. Biochem. Biopys., 1989, v. 270, p. 162-172.

12. Christou M., Dodot L. Selective potent restriction of P450b- but not P450e- dependent 7,12- dimethylbenza.antracene metabolism by the microsomal environment. // Arch. Biochem. Biopys., 1989, v.270, p. 162-172.

13. Conney A.H. Pharmacological implications of microsomal enzyme induction // Pharmacol. Rev., 1967, v. 19, p.317-266.85

14. Fujii-Kuriyama Y., Mizukami Y., Kawajiri K., Sogawa K., Muramatsu M. Primary structure of a cytochrome P-450 cDNA from rat liver // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1982, v.79, p. 2793-2797.

15. Gonzalez F.J. The molecular biology of cytochrome P450s // Pharmacol. Rev., 1989, v.40, p.243-288.

16. Gorski K., Carneiro M and Schilber U. Tissue-specific in vitro transcription from the mouse albumin promoter//Cell. 1986, v.47, p.767-776.

17. Hashimoto T., Matsumoto T., Nishizawa M„ Kawabata S., Morohashu K., Honda S., and Omura T. A mutant rat strain defficient in induction of phenobarbital-inducible form of cytochrome P-450 in liver microsomes. // J.Biochem. 1988, v. 103, p.487-492.

18. Haugen D.A., Coon M.J. Properties of electrophoretically homogenous phenobarbital-inducible and b-naphtoflavone-inducible forms of liver microsomal cytochrome P-450 // J. Biol. Chem., 1985, v.251, p.7929-7939; 71,

19. He J. S., and Fulco A. J. A Barbiturate-regulated protein binding to a common seguence in the cytochrome P450 genes of rodents and bacteria // J. Biol. Chem., 1991. v.226 (12), p. 7864-7869.

20. Hoffmam M., Mager W.H., Scholte B.J., Civil A., Planta R.Y. Analysisi of the promoter of the cytochrome P450 2B2 gene in the rat // Gene Expr., 1992. v. 2 (4), p. 353-63.

21. Honkakoski P. and Negishi M. Regulatory DNA elements of Phenobarbital-responsive cytochrome P450 CYP2B genes // J. Biochem. molec. toxicol., 1998, v. 12, n.l, 3-9.

22. Honkakoski P. and Negishi N. Characterization of a phenobarbital-responsive enhancer86module in mouse P450 Cyp2bl0 gene.// J. Biol. Chem., 1997, v. 272, p. 14943-14949.

23. Honkakoski P., Moore R., Gynther J and Negishi M. Characterization of phénobarbital -inducible mouse Cyp2bl0 gene transcription in primary hepatocyted. // J. Biol. Chem., 1996, v. 271, p. 9746-9753.

24. Imaoka S., Okuda K., Nebert D.W. Expression of four phenobarbital-inducible cytochrome P450s in liver, kidney and lung of rats. // J. Biochem., 1989, v. 105, p.939-945.

25. Ingelman-Sunberg M., Eliasson E., Johansson I. Genetic polymorphism of cytochromes P450: interethic differences and relationship to incidence of lung cancer // Pharmacogenetics. 1992, v.2, p.264-271.

26. Ingelman-Sunberg M., Eliasson E., Johansson I. The adaptability of the hepetic cytochrome P450 system to the environment // Stockholm: Karolinska Institute, 1990, p.l-12.

27. Kawajiri K., Hasemann C., Ravichandran K. Identification of genetically high risk individuals to lung cancer by DNA polymorphisms of the cytochrome P450IA1 gene // FEBS Lett. 1990, v.263, p.131-133.

28. Klatt P., Schmidt K and Mayer B. Brain nitric oxide synthase is a haemoprotein // Biochem. J., 1992, v.288, p. 15-17.

29. Knovles R.G. and Moncada S. Nitric oxide synthases in mammals // Biochem. J., 1994, v.298, p.249-258.

30. Kocarek T.A., Schuetz E.G., Guzelian P S. Selective induction of cytochrome P450s by kepone (chlordecone) in primary cultures of adult rat hepatocytes // Mol. Pharmacol., 1991, v.40, p.203-210.

31. Liang Q. and Fulco A.J. Transcriptiional regulation of the genes encoding cytochrome P450bm-1 and P450bm-3 in Bacillus megaterium by the binding of Bm3RI repressor to Barbie box elements and operator sites // J.Biol.Chem., 1995, v.270, p. 18606-18614.

32. Luc P., Adesnik M., Ganguly S and Shaw P. Transcriptional regulation of the CYP2B1 and CYP2B2 genes by C/EBP-related proteins. // Biochem. Pharmacol., 1996, v. 51, p. 345-356.

33. McManus M. Metabolism of 2-acetylaminofluorene and benzpyrene and activation of food-derived heterocyclic amine mutagens by human cytochrome P450 // Cancer Research, 1990, V.50, P.3367-3376.

34. Miles J.S., Spurr N.K., Gough A.C., Jowett T., McLaren A.W., Brook J.D and Wolf C.R. A novel human cytochrome P450 gene (P450IIB): chromosomal localization and evidence for alternative splicing//Nucl. Acid.Res., 1998, v. 16, n. 13, p.5783-5795.

35. Nebert D.W. & Gonzalez F.J. P450 genes: structure, evolution, and regulation // Ann.Rev.Biochem., 1987, v.56, p.945-993.

36. Nebert D.W., Nelson D.R., Feyereisen R. Evolution of the cytochrome P450 genes // Xenobiotica, 1989, v. 19, n. 10, p. 1149-1160

37. Nelson D R. and Strobel H.W. Evolution of cytochrome P450 proteins // Mol. Biol. Evol., 1987, v.4, p.572-593.

38. Omiecinski C. Tissue-specific expression of rat mRNAs homologous to cytochromes P450b and P450e. //Nucl.Acid Res. 1986, v. 14, p. 1525-1539.

39. Omura T., Sato R. A new cytochrome in liver microsomes // J. Biol. Chem., 1962, v.237, p.1375-1376.

40. Omura T., Sato R. The carbon monooxide-binding pigment of liver microsomes. Solubilization, purification and properties// J. Biol. Chem., 1964, v.239, p.2370-2785.

41. Palmer G. and Reedijk J. Nomenclature Commitee of the International Union of Biochemistry (NC-IUB0 nomenclature of electron-transfer proteins. Recommendations // Biochem. Biophys. Acta, 1989, v. 1060, p.599-611.88

42. Park Y., Kemper B. The CYP2B1 proximal promoter contains a functional C/EBP regulatory element // DNA Cell Biol., 1996, v.15, n.8, p.693-701.

43. Park Y., Li H., Kemper B. Phénobarbital induction mediated by a distal CYP2B2 sequence in rat liver transiently tranfected in sutu // J. Biol. Chem., 1996, v.271, n.39, p.23725-23728.

44. Patel N.V. and Omer C.A. Phénobarbital and sulfonurea-inducible opérons encoding herbicide metabolizing cytochromes P-450 in Streptomyces griseolus // Gene, 1992, v.112, p.67-76.

45. Plisov S. Y., Merkulova T.I., Seledtsov I.A. Glucocorticoid-receptor binding site at the 5-flanking region of a rat cytochrome CYP2B2 gene predicted with novel computer method // Biochem. Biophys. Acta, 1991, v. 1095, p.114-116.

46. Ram N., Rao V., Prabhu I., Padmanaban G. Characterization of a negative cis-acting DNA-element regulating the transcription of CYP2B1/2B2 gene in rat liver // Arch. Of Biochem. And Biophys., 1995, v.317, p.39-45.

47. Ramersaud A., Walz F.G. At least six forms of extremely homologous cytochromes P450 in rat liver are encoded at two closely linced genetic loci // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1987. v. 80. p. 6542-6546.

48. Rampersaud A., Walz F. Polimorphisms of four hepatic cytochrome P450 in twenty eight inbred strains of rats. // Biochem. Genet., 1987, v.25, p.527-534.

49. Ramsden R., Sommer K. M. and Omiecinski C. J. Phénobarbital induction and tissue-specific expression of the rat CYP2B2 gene in transgenic mice // J. Biol. Chem., 1993.89v.268, p. 21722-21726.

50. Rangarajan P.N and Padmanaban G. Regulation of cytochrome P450 b/e gene expression by a heme- and phenobarbitone-modulated transcription factor // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, v. 86, p. 3963-3967.

51. Ravishankar H., Padmanaban G. Characterization of the CYP2B1/2B2 clones. // J. Biol. Chem., 1985, v. 260. p. 1588-1593. .

52. Reik L Soomot J. Monoclonal antibodies distinguish among isizymes of the cytochrome P-450b subfamily. // Arch. Biochem. Biophys., 1985, v. 242, p.365-382.

53. Roe A., Blouin and Adesnik M. In vivo phénobarbital treatment increases protein binding to a putative AP-1 site in the CYP2B2 promoter. // Biochem. Biophys., Res. Commun. 1996, v. 288, p. 110-114.

54. Shaw G.C. and Fulko A.J. Inhibition by barbiturates on the binding of Bm3Rl repressor to its operator site on the barbiturate-inducible cytochrome P450bm-3 gene of Bacillus megaterium by Bm3Rl protein // J.Biol. Chem., 1993, v.268, n.4, p.2997-3004.

55. Shaw P., Adesnik M., Weiss M and Corcos L. The phenobarbital-induced transcriptional activation of cytochrome P-450 genes is bloked by the glucocorticoid-progesterone antagonist RU486. // Mol. Pharmacol., 1993, v. 44, p. 775-783.

56. Suwa Y ., Goiter R. Gene structure of a major form of phenobarbital-indusible cytochrome P-450 in rat liver. // Biol. Chem., 1985, v.260, p.7980-7984.

57. Trottier E., Belzil A., Stolz C., Anderson A. Functional analysis of a multicomponent enhancer conferring phénobarbital responsiveness on the rat // Gene, 1995. v. 158, p. 263268.90

58. Waxman D. Cytochrome 2B. // Biochem., 1994, V.5, P. 44-96.

59. Waxman D., Azaroff. Phénobarbital induction of cytochrome gene expression. // Biochem., 1992, v. 281, p.577-592.

60. Waxman D., Ko A., Walsh C. Regioselectivity and stereoselectivity of androgen hydroxylations catalized by cytochrome P-450 isozymes purified from phenobarbital-induced rat liver//J. Biol., Chem., 1983, v.258, p. 11937-11947.

61. Wilson N., Christou M., Jefcoate C. Differential expression and function of three closely related phenobarbital-inducible cytochrome P-450 isozymes in untreated rat liver. // Arch. Biochem. Biophys. 1987, v.256, p.407-402.

62. Yamana S., Nhamburo P.T., Aoyama T., Meyer U.A., Inaba T., Kalow W., Gelboin H.V., McBride O.W. and Gonzalez F.J. // Biochem., 1989, v.28, p.7340-7348.1. От автора

63. Автор искренне признателен всему коллективу института молекулярной биологии и биофизики во главе с директором академиком РАМН Ляховичем Вячеславом Валентиновичем за возможность осуществления этой работы в рамках аспирантуры.

64. Особую благодарность я выражаю зав. лаборатории молекулярных механизмов канцерогенеза ИМБиБ СО РАМН к.б.н. Гуляевой Людмиле Федоровне за активное руководство работой и участие во всех ее этапах.