Исследование механизма адаптации злокачественных опухолей к гипоксии: роль мембранных фосфолипидов и фосфоинозитид-зависимых киназ тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.25, кандидат биологических наук Павличенко, Оксана Викторовна

• Павличенко, Оксана Викторовна
• кандидат биологических наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Павличенко, Оксана Викторовна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Гипоксический синдром in vivo и in vitro.

1.1.1. Классификация гипоксических состояний.

1.1.2. Тканевая гипоксия.

1.1.3. Клеточная гипоксия.

1.1.4. Компенсаторно-приспособительные реакции при гипоксии.

1.2. Регуляция клеточного метаболизма в условиях гипоксии.

1.2.1. Регулятор кислородного гомеостаза.

1.2.2. Кислород-зависимая регуляция HIF-1.

1.2.3. Кислород-независимая регуляция HIF-1.

1.2.4. Экспрессия HIF-1 в злокачественных опухолях человека.

1.3. VEGF и его роль в выживаемости клеток в условиях гипоксии.

1.3.1. Участие VEGF в регуляции ангиогенеза.

1.3.2. Факторы роста клеток эндотелия сосудов.

1.3.3. Фактор роста эндотелия сосудов VEGF-A.

1.3.4. Изоформы фактора роста VEGF-A.

1.3.5. Рецепторы, взаимодействующие с фактором роста VEGF-A (VEGFR1 и VEGFR2).

1.3.6. Сигнальные пути, в которых участвуют рецепторы семейства VEGFR. а) Сигнальные пути с участием рецептора VEGFR1. б) Сигнальные пути с участием рецептора VEGFR2.

1.4. Современные представления о механизме адаптации опухолевых клеток к гипоксии.

1.4.1. Регуляция выживаемости опухолевых клеток в условиях гипоксии in vivo и in vitro. Сигнальные пути, активируемые в опухолевых клетках в условиях гипоксии и их значение в адаптации клеток к гипоксии.

1.4.2. Роль стероидных гормонов в регуляции активности гипоксия-зависимых сигнальных путей.

ГЛАВА П. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Культивирование клеток.

2.2. Окраска клеток на морфологию гематоксилин-эозином.

2.3. Определение скорости роста клеток.

2.4. Приготовление клеточных экстрактов и SDS-электрофорез в полиакриламидном геле.

2.5. Иммуноблоттинг (вестерн-блоттинг).

2.6. Транзиторная трансфекция и определение активности гена-репортера.

2.7. Иммуноцитохимическое определение экспрессии Flk-1 в клеточных линиях опухолей.

2.8. Выделение РНК из культивируемых клеток.

2.9. Определение экспрессии гена VEGF-R2 и VEGF-A методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции (RT-PCR).

Список использованных растворов.

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ.

3.1. Влияние гипоксии на динамику роста культивируемых in vitro клеток аденокарциномы яичника CaOv.

3.1.1. Влияние индуктора гипоксии C0CI2 на динамику роста клеток CaOv.

3.1.2. Влияние индуктора гипоксии C0CI2 на уровень внутриклеточного VEGF в клетках CaOv.

3.2. Развитие адаптации клеток CaOv к гипоксии в условиях длительного воздействия на клетки гипоксических факторов.

Морфофункциональные изменения клеток в процессе адаптации к гипоксии.

3.2.1. Развитие резистентности к гипоксии in vitro.

3.2.2. Морфофункциональные изменения клеток в процессе адаптации к гипоксии.

3.3. Анализ экспрессии фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K) и Р13К-зависимых белков (STAT3) при адаптации клеток CaOv к гипоксии.

3.3.1. Влияние гипоксии на синтез PI3K и STAT3.

3.4. Влияние трансфекции в клетки PI3K и 8ТАТЗ-содержащих плазмид на чувствительность клеток к гипоксии. Развитие резистентности клеток CaOv к гипоксии в условиях постоянной активации PI3K и STAT3 под действием дексаметазона.

3.4.1. Трансфекция каталитической субъединицы PI3K приводит к увеличению синтеза VEGF и развитию резистентности клеток к гипоксии.

3.4.2. Трансфекция в клетки CaOv STAT3-содержащей плазмиды приводит к развитию резистентности клеток к гипоксии.

3.4.3. Влияние дексаметазона на рост клеток CaOv. Получение гормон-резистентной сублинии клеток.

3.4.4. Влияние дексаметазона на синтез PI3K в клетках CaOv. Конститутивное повышение уровня PI3K и STAT3 в гормон-резистентной сублинии клеток.

3.4.5. Повышенная устойчивость гормон-резистентной сублинии клеток CaOv к гипоксии. Уровень VEGF в гормон-чувствительной и резистентной линиях клеток.

3.5. Эффект перекрестной резистентности клеток, устойчивых к гипоксии, к действию гормональных цитостатиков. Значение координированной активации PI3K и STAT3 в развитии перекрестной резистентности клеток CaOv к гипоксии и дексаметазону.

3.5.1. Роль гипоксии в развитии гормональной резистентности опухолевых клеток.

3.5.2. Значение координированной активации PI3K и STAT3 в развитии перекрестной резистентности клеток CaOv к гипоксии и дексаметазону. Роль PI3K в регуляции STAT3.

3.6. Чувствительность клеток CaOv, CaOv/D и CaOv/H к действию апоптотических агентов.

3.6.1. Чувствительность родительских и резистентных клеток CaOv к УФ облучению и адриамицину.

3.6.2. Уровень РКВ, p21WAFl и p27Kipl в клетках CaOv, CaOv/D и CaOv/H.;.

3.7. Роль VEGF-A в аутокринной регуляции роста и выживаемости клеток CaOv в условиях гипоксии.

3.7.1. Продукция VEGF-A и уровень VEGFR2 в клетках CaOv.

3.7.2. Роль VEGF-A в регуляции пролиферации клеток CaOv.

ГЛАВА IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование механизма адаптации злокачественных опухолей к гипоксии: роль мембранных фосфолипидов и фосфоинозитид-зависимых киназ»

Как известно, опухолевая трансформация зачастую сопровождается повышением устойчивости клеток к разного рода стрессорным и токсическим воздействиям, в том числе и к гипоксии. Одной из основных проблем в исследовании ответа клеток на гипоксию является установление биохимических путей, ответственных за активацию защитных механизмов опухолевой клетки.

Ключевое значение в регуляции защитных механизмов опухолевой клетки имеют сигнальные пути, контролируемые фосфатидилинозитол-3-киназой (phosphatidylinositol-3kinase, PI3K) - ферментом, фосфорилирующим фосфатидилинозитол (Ptdlns) в 3-ОН положении инозитольного кольца. Установлено, что PI3K играет важную роль в регуляции роста и выживаемости опухолевых клеток, во многом определяя их устойчивость к действию повреждающих факторов. Отдельным вопросом является участие PI3K в ответе опухолевых клеток на гипоксию. Известно, что к ранним проявлениям реакции опухолевых клеток на гипоксию относится активация гипоксия-индуцируемого фактора 1 (hipoxia inducible factor-1, HIF-1), регулирующего экспрессию фактора роста эндотелия сосудов (vascular edothelial growth factor, VEGF) и некоторых других генов, ответственных за выживание опухоли в условиях гипоксии. Сравнительно недавно было обнаружено, что в активации HIF-1 и VEGF могут принимать участие PI3K и такие эффекторы PI3K как протеинкиназа В (РКВ), обладающая выраженной антиапоптотической активностью. Но во многом схема сигнальных путей инициируемых PI3K и РКВ, до конца не исследована, как остается неясной и роль PI3K-зависимого сигнального пути в регуляции выживаемости клеток в условиях гипоксии. Каковы те биохимические механизмы, которые определяют уровень чувствительности опухолевых клеток к гипоксии и способность клеток адаптироваться к условиям гипоксии - на решение этих вопросов направлена данная работа.

Мы предполагаем, что в условиях длительного воздействия гипоксии на опухолевые клетки и цитотоксических соединений, а именно: в процессе медикаментозной терапии, постоянная активация PI3K и РБК-зависимых транскрипционных факторов может приводить к существенной перестройке внутриклеточной сигнальной сети. В свою очередь это может приводить к конститутивной активации Р13К-сигнального пути и увеличению выживаемости клеток при действии как токсических, так и гипоксических факторов.

Цель работы:

Целью работы является исследование механизма адаптации клеток злокачественных опухолей к гипоксии и изучение внутриклеточных сигнальных путей, регулирующих выживаемость опухолевых клеток при действии гипоксических факторов.

Задачи исследования:

1. Исследовать влияние гипоксии на динамику роста культивируемых in vitro клеток карциномы яичника линии CaOv и уровень экспрессии VEGF-A.

2. Исследовать возможный механизм адаптации клеток к гипоксии в условиях длительного воздействия на клетки гипоксических факторов; изучить изменение морфофункционального состояния клеток в процессе их адаптации к гипоксии.

3. Исследовать влияние гипоксии на синтез PI3K и Р13К-зависимых сигнальных белков в клетках CaOv; провести сравнительный анализ основных анти-апоптотических путей в исходной популяции клеток и клетках, адаптированных к действию гипоксии.

4. Провести сравнительный анализ чувствительности родительских клеток и клеток, резистентных к гипоксии, к действию цитостатических и апоптотических соединений.

5. Исследовать уровень VEGF-A и рецептора VEGF в . клетках, чувствительных и резистентных к гипоксии. Изучить значение VEGF-сигнального пути в аутокринной регуляции роста и выживаемости клеток CaOv. i

Научная новизна работы.

Известно, что к ранним проявлениям реакции злокачественных опухолей на гипоксию относится активация гипоксия-индуцируемого фактора 1, регулирующего экспрессию фактора роста эндотелия сосудов и некоторых других генов, ответственных за выживание опухоли в условиях гипоксии. Установлено, что в активации HIF-1 и VEGF могут принимать участие PI3K и ферменты ИЗК-зависимого сигнального пути, в частности -протеинкиназа В, однако их значение в регуляции ответа опухолей на гипоксию остается неясным. В настоящей работе впервые исследовалась роль ферментов фосфатидилинозитольного сигнального пути - PI3K, РКВ, STAT-3 в регуляции ответа клеток на гипоксию и их значение в развитии резистентности опухолевых клеток к гипоксии. В предварительных исследованиях на модели клеток карциномы яичника, отличающихся по чувствительности к гипоксии, нами было продемонстрировано, что активация Р13К-зависимого сигнального пути может являться одним из факторов, обеспечивающих адаптацию опухолевых клеток к гипоксии in vitro.

Научно-практ^ейШ? :ШЧШЗШ?ь1х сокращений

Исследования носят экспериментальный характер и направлены на изучение природы биохимических путей, поддерживающих рост злокачественных опухолей в условиях гипоксии. Представленные данные демонстрируют возможность адаптации культивируемых in vitro опухолевых клеток к гипоксии, развивающейся на фоне координированной активации PI3K и STAT3, и повышенной продукции клетками VEGF. При этом адаптация клеток к гипоксии не сопровождается увеличением устойчивости опухолевых клеток к действию апоптотических факторов. Взятые вместе, полученные результаты могут послужить основой для развития и совершенствования методов адьювантной терапии опухолей, в том числе комбинированной терапии с использованием антиангиогенных и химиопрепаратов.

Заключение диссертации по теме «Гистология, цитология, клеточная биология», Павличенко, Оксана Викторовна

выводы.

1. Длительное культивирование in vitro клеток аденокарциномы яичника CaOv в присутствии индуктора гипоксии СоСЬ приводит к формированию субпопуляции клеток, характеризующейся устойчивым ростом в условиях гипоксии и низкой чувствительностью к действию гормональных цитостатиков.

2. Сравнительный анализ морфологии клеток выявил положительную корреляцию между развитием резистентности к гипоксии и изменением некоторых морфологических характеристик клеток, в том числе - способности клеток к образованию монослоя.

3. В устойчивой к гипоксии сублинии клеток выявлена конститутивная активация фосфатидилинозитол-3 киназы (PI3K), PI3K-зависимого транскрипционного фактора STAT3 и VEGF-A - гипоксия-зависимого ангиогенного пептида, действие которого частично реализуется через Р13К-сигнальный путь, и продемонстрировано их участие в поддержании клеточного роста в условиях гипоксии.

4. Описан феномен перекрестной резистентности клеток к действию гипоксических (СоСЬ) и цитостатических (дексаметазон) факторов, в основе которого лежит координированная активация PI3K и STAT3.

5. Адаптация клеток к гипоксии не сопровождается увеличением устойчивости клеток к действию апоптотических факторов и развивается на фоне конститутивного усиления экспрессии одного из проапоптотических белков - ингибитора циклин-зависимых киназ P27Kipl.

6. В целом полученные данные демонстрируют возможность адаптации культивируемых in vitro опухолевых клеток к гипоксии, основанную на усилении аутокринной регуляции роста при сохранении высокого апоптотического потенциала, что может послужить основой для развития и совершенствования методов комбинированной адьювантной терапии опухолей.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

В настоящее время фосфатидилинозитол 3-киназа рассматривается как один из важнейших регуляторных белков, контролирующий ключевые функции клеток, такие как рост, выживаемость, устойчивость к повреждающим воздействиям. Отдельным вопросом является исследование адаптации клеток злокачественных опухолей к гипоксии и участие в этом процессе PI3K. Известно, что к ранним проявлениям реакции опухолевых клеток на гипоксию относится активация гипоксия-индуцируемого фактора 1 (hypoxia inducible factor-1, HIF-1), регулирующего экспрессию фактора роста эндотелия сосудов (vascular endothelial growth factor, VEGF) и некоторых других генов, ответственных за выживание опухоли в условиях гипоксии. Митогенный эффект VEGF опосредован через аутофосфорилирование рецепторов VEGF (Flk-1/KDR и Fit-1) с последующей активацией Ras/MAP и PI3K/PKB сигнальных путей [4,5]. Но во многом схема сигнальных путей, инициируемых VEGF, до конца не исследована, как остается неясной и роль Р13К-сигнального пути в аутокринной регуляции роста и выживаемости опухолевых клеток в условиях гипоксии.

В наших экспериментах мы показали, что Р13К-зависимая защитная система активируется при действии на клетки C0CI2 - соединения, моделирующего эффект гипоксии in vitro. Адаптация клеток к C0CI2-индуцированной гипоксии сопровождается конститутивным увеличением экспрессии PI3K и накоплением транскрипционного фактора STAT3, одного из позитивных регуляторов PI3K. К аналогичному эффекту - развитию устойчивости к гипоксии, приводит трансфекция в родительские клетки плазмид, содержащих кДНК PI3K или STAT3, что свидетельствует о важном значении этих белков в поддержании клеточного роста в условиях гипоксии. В дальнейших экспериментах нами был продемонстрирован феномен перекрестной резистентности клеток к действию гипоксических (СоС12) и цито статических (дексаметазон) факторов, в основе которого лежит координированная активация PI3K и STAT3. Учитывая известные данные о взаимной позитивной регуляции, существующей между STAT3 и PI3K, мы предположили, что при развитии резистентного фенотипа может происходить активизация положительных обратных связей между STAT3 и РБК, способствующая повышению активности этих белков в клетках. Действительно, полученные результаты показали, что в резистентных клетках регуляция STAT3 переключается, частично или полностью, на РБК-зависимый путь. В итоге в клетке активируется система взаимной позитивной регуляции между STAT3 и РБК, основанная, с одной стороны, на способности STAT3 регулировать РБК и, с другой стороны, на усилении влияния РБК-сигнального пути на активность STAT3.

Одновременно в резистентных клетках усиливается экспрессия VEGF-А - гипоксия-зависимого ангиогенного пептида, действие которого частично реализуется через РБК-сигнальный путь. Мы установили, что подавление активности VEGF-A приводит к заметному снижению скорости роста клеток, свидетельствуя об участии VEGF-A в поддержании клеточного роста в условиях гипоксии.

Вместе с тем оказалось, что конститутивная активация STAT3 и РБК в резистентных клетках не приводит к снижению чувствительности клеток к действию проапоптотических факторов - облучению, химическим индукторам апоптоза. Сохранение высокого апоптотического потенциала в этих клетках коррелирует с повышением экспрессии одного из проапоптотических белков - ингибитора циклин-зависимых киназ р27Кф1 и может быть связано с активацией некоторых из апоптотических сигнальных путей в процессе формирования резистентного фенотипа.

В целом, представленные в настоящей работе данные демонстрируют возможность адаптации культивируемых in vitro опухолевых клеток к условиям гипоксии, развивающейся на фоне координированной активации РБК и STAT3, и повышенной продукции клетками VEGF. Несмотря на то, что VEGF относится к специфическим ангиогенным пептидам, гиперсекреция VEGF может играть важную роль в аутокринной регуляции пролиферации опухолевых клеток, поддерживая их рост в условиях гипоксии. В то же время адаптация клеток к гипоксии не сопровождается увеличением устойчивости клеток к действию апоптотических факторов. Взятые вместе, полученные результаты могут послужить основой для развития и совершенствования методов адьювантной терапии опухолей, в том числе комбинированной терапии с использованием антиангиогенных и химиопрепаратов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Павличенко, Оксана Викторовна, 2006 год

1. Адо А.Д., Адо М.А., Пыцкий В.И., Порядина Г.В., Владимирова Ю.А. патологическая физиология. М.: Триада-Х, 2000.

2. Добрынин Я.В., Монатова Т.И., Мирзоян Е.Е. Характеристика линии клеток рака человека. Вопросы онкологии, 1974; 20(3): 4453.

3. Зенина Т.А., Голубева Л.Ю., Салтыкова В.А. и др. Изв. РАН, 1998; 4: 506-512.

4. Красильников М.А. Сигнальные пути, регулируемые фосфатидилинозит-3-киназой и их значение для роста, выживаемости и злокачественной трансформации клеток. Биохимия, 2000; 65(1): 68-78.

5. Лукьянова Л.Д. Биоэнергетическая гипоксия: понятие, механизмы и способы коррекции. Бюл. экспер. биол.,1997; 124(9): 244-254.

6. Лукьянова Л.Д., Дудченко A.M., Чернобаева Г.Н. Прерывистая нормобарическая гипоксия. М., 1999; 3: 139- 153.

7. Лукьянова Л.Д. Фармакологическая коррекция гипоксических состояний. М., 1989: 5 44.

8. Реутов В.П., Сорокина Е.Г., Охотин В.Е., Косицын Н.С. Циклические превращения оксида азота в организме млекопитающих. М., 1998.

9. Семиглазов В.Ф. Современные подходы к гормональной терапии рака груди как отражение патогенеза заболевания. Вопр. онкол., 2001; 47(2): 195-199.

10. Стокле Ж.-К., Мюлле Б., Андрианцитохайна Р., Клещев А. Гиперпродукция оксида азота в патофизиологии кровеносных сосудов. Биохимия, 1998; 63(7): 976 983.

11. Ahn CS, Kang JY, Rho JS. Angiogenesis in squamous epithelial lesions of the uterine cervix. J. Clin. Oncol., 1997; 16: 552.

12. Albina JE, Cui S, Mateo RB, Reichner JS. Nitric oxide-mediated apoptosis in murine peritoneal macrophages. J. Immunol., 1993; 150(11): 5080-5085.

13. Alessi D, Deak M, Casamayor A, Caudwell F, Morrice N, Norman D, Gaffney P. 3-Phosphoinositide-dependent protein kinase-1 (PDK1): structural and functional homology with the Drosophila DSTPK61 kinase. Curr. Biol, 1997; 7(10): 776-789.

14. Arikarcrona M, Dypbukt JM, Brune B, Nicotera P. Interleukin-1 beta-induced nitric oxide production activates apoptosis in pancreatic RINm5F cells. Exp. Cell Res, 1994; 213(1): 172 177.

15. Bachelder RE, Crago A, Chung J. Vascular endothelial growth factor is an autocrine survival factor for neuropilin-expressing breast carcinoma cells. Cancer Res, 2001; 61(15): 5736-5740.

16. Banasiak KJ, Cronin T, Haddad GG. bcl-2 prolongs neuronal survival during hypoxia-induced apoptosis. Brain Res. Mol. Brain Res, 1999; 72(2): 214-225.

17. Bartoli M, Gu X, Tsai NT. Vascular endothelial growth factor activates STAT proteins in aortic endothelial cells. Biol. Chem, 2000; 275(43): 33189-33192

18. Bernatchez PN., Soker S, Sirois MG. Vascular endothelial growth factor effect on endothelial cell proliferation, migration, and platelet-activating factor aynthesis is Flk-1-dependent. J. Biol. Chem., 1999; 274(43): 31047-31054.

19. Berstein LM, Zheng H, Yue W, Wang JP, Lykkesfeldt AE, Naftolin F, Harada H, Shanabrough M, Santen RJ. New approaches to the understanding of tamoxifen action and resistance. Endocrine-related Cancer., 2003; 10(2): 267-277.

20. Birner P, Schindl M, Obermair A, Breitenecker G, Oberhuber G. Expression of hypoxia-inducible factor 1 in epithelial ovarian tumors: its impact on prognosis and on response to chemotherapy. Clin. Cancer Res., 2001; 7(6): 1661-1668.

21. Blanco FJ, Ochs RL, Schwarz H, Lotz M. Chondrocyte apoptosis induced by nitric oxide. Am. J. Pathol., 1995; 146(1): 75 85.

22. Blume-Jensen P., Hunter T. Oncogenic kinase signalling. Nature, 2001; 411(68935): 355-365.

23. Bochner BH, Cote RJ, Weidner N, Groshen S, Chen SC, Skinner DG, Nichols PW. Angiogenesis in bladder cancer: relationship between microvessel density and tumor prognosis. J. Natl. Cancer Inst., 1995; 87(21): 1603-1612.

24. Boocock CA, Charnock-Jones DS, Sharkey AM. Expression of vascular endothelial growth factor and its receptors fit and KDR in ovarian carcinoma. J. Natl. Cancer Inst., 1985; 87Q: 506-516.

25. Brand KA., Hermfisse U. Aerobic glycolysis by proliferating cells: a protective strategy against reactive oxygen species. FASEB J., 1997; 11(5): 388-395.

26. Bredt DS. Endogenous nitric oxide synthesis: biological functions and pathophysiology.Free Radic. Res., 1999; 31(6): 577 596.

27. Bruick RK., McKnight SL. A conserved family of prolyl-4-hydroxylases that modify HIF. Science, 2001; 294(5545): 1337-1340.

28. Brusselmans K, Bono F, Maxwell P, Dor Y, Dewerchin M, Collen D, Herbert JM, Carmeliet P. Hypoxia-inducible factor-2 (HIF-2) is involved in the apoptotic response to hypoglycemia but not to hypoxia. J. Biol. Chem., 2001; 276(42): 39192-39196.

29. Busam KJ, Berwick M, Blessing K, Fandrey K, Kang S, Karaoli T, Fine J, Cochran AJ, White WL, Rivers J. Tumor vascularity is not a prognostic factor for malignant melanoma of the skin. Am. J. Pathol., 1995; 147(4): 1049-1056.

30. Campbell RA, Bhat-Nakshatri P, Patel NM, Constantinidou D, Ali S, Nakshatri H. Phosphatidylinositol 3-kinase/AKT-mediated activation of estrogen receptor alpha: a new model for anti-estrogen resistance. J. Biol. Chem., 2001; 276(13): 9817-9824.

31. Cantley LC., Auger KR, Carpenter C, Duckworth B, Graziani A, Kapeller R, Soltoff S. Oncogenes and signal transduction. Cell, 1991: 64(2): 281-302.

32. Carmeliet P, Collen D. Molecular analysis of blood vessel formation and disease. Am. J. Physiol., 1997; 273(5 Pt 2): H2091-H2104.

33. Carnochan P, Briggs JC, Westbury G, Davies AJ. The vascularity of cutaneous melanoma: a quantitative histological study of lesions 0.85125 mm thickness. Br. J. Cancer, 1991; 64(1): 102-107.

34. Dames SA, Martinez-Yamout M, De Guzman RN, Dyson HJ, Wright PE. Structural basis for HIF-1 /СВР recognition in the cellular hypoxic response. Proc. Natl Acad. Sci. USA, 2002; 99(8): 52715276.

35. Datta SR, Brunet A, Greenberg ME. Cellular survival: a play in three Akts. Cenes Dev., 1999; 13(22): 2905-2927.

36. Dawson VL, Dawson TM. Nitric oxide in neurodegeneration. Progr. Brain Res., 1998; 118:215-229.

37. De Vries C, Escobedo JA, Ueno H, Houck K, Ferrara N, Williams LT. The fms-like tyrosine kinase, a receptor for vascular endothelial growth factor. Science, 1992; 255(5047): 989-991.

38. Dickinson AJ, Fox SB, Persad RA, Hollyer J, Sibley GN, Harris AL. Quantification of angiogenesis as an independent predictor of prognosis in invasive bladder carcinomas. Br. J. Urol., 1994; 74: 762766.

39. Dimmeler S, Zeiher AM. Nitric oxide and apoptosis: another paradigm for the double-edged role of nitric oxide. Nitric Oxide, 1997; 1(4): 275-281.

40. Dougher-Vermazen M, Hulmes JD, Bohlen P, Terman BI. Biological activity and phosphorylation sites of the bacterially expressed cytosolic domain of the KDR VEGF-receptor. Biochem. Biophys. Res. Communs, 1994; 205(1): 728-738.

41. Eliceiri BP, Paul R, Schwartzberg PL, Hood JD, Leng J, Cheresh DA. Selective requirement for Src kinases during VEGF-induced angiogenesis and vascular permeability. Mol. Cell, 1999; 4(6): 915924.

42. Encarnacion CA, Ciocca DR, McGuire WL, Clark GM, Fuqua SA, Osborne CK. Measurement of steroid hormone receptors in breast cancer patients on tamoxifen. Breast Cancer Res.Treat, 1993; 26(3): 237-246.

43. Feldser D, Agani F, Iyer NV, Рак В, Ferreira G, Semenza GL. Reciprocal positive regulation of hypoxia-inducible factor 1 and insulin-like growth factor 2. Cancer Res., 1999; 59(16): 3915-3918.

44. Ferrara N, Henzel WJ. Pituitary follicular cells secrete a novel heparin-binding growth factor specific for vascular endothelial cells. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1989; 161(2): 851-858.

45. Folkman J. Tumor angiogenesis: therapeutic implications. N. Engl. J. Med., 1971; 285(21): 1182-1186.

46. Folkman J, Klagsbrun M. Angiogenic factors. Science, 1987; 235(4787): 442-447.

47. Fong GH, Rossant J, Gertsenstein M, Breitman ML. Role of the Flt-1 receptor tyrosine kinase in regulating the assembly of vascular endothelium. Nature, 1995; 376(6535): 66-70.

48. Fontanini G, Bigini D, Vignati S, Basolo F, Mussi A. Lucchi M, Chine S, Angeletti CA, Harris AL, Bevilacqua G. Microvessel count predicts metastatic disease and survival in non-small cell lung cancer. J. Pathol., 1995; 177(1): 57-63.

49. Fox SB, Leek RD, Weekes MP, Whitehouse RM, Gatter КС., Harris AL. Quantitation and prognostic value of breast cancer angiogenesis:comparison of microvassel density. Chalkley count and computer image analysis. J. Pathol., 1995; 177(3): 275-283.

50. Franke TF, Kaplan DR, Cantley LC, Toker A. Direct regulation of the Akt proto-oncogene product by phosphatidylinositol-3,4-bisphosphate. Science, 1997; 275(5300): 665-668.

51. Frater-Schroder M, Risau W, Hallmann R, Gautschi P, Bohlen P. Tumor necrosis factor type alpha, a potent inhibitor of endothelial cell growth in vitro, is angiogenic in vivo. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1987; 84(15): 5277-5281.

52. Freedman SJ, Sun ZY, Poy F, Kung AL, Livingston DM, Wagner G, Eck MJ. Structural basis for recruitment of CBP/p300 by hypoxia-inducible factor-1 . Proc. Natl Acad. Sci. USA, 2002; 99(8): 53675372.

53. Fruchart JC, Duriez P. Free Radicals Damage and its Control. Amsterdam, 1994; 257 280.

54. Fukuda R, Kelly B, Semenza GL. Vascular endothelial growth factor gene expression in colon cancer cells exposed to prostaglandin E 2 is mediated by hypoxia-inducible factor 1. Cancer Res., 2003; 63(9): 2330-2334.

55. Gagliardini V, Fernandez PA, Lee RK, Drexler HC, Rotello RJ, Fishman MC, Yuan J. Prevention of vertebrate neuronal death by the crmA gene. Science, 1994; 263(5148): 826 828.

56. Giatromanolaki A, Koukourakis M, O'Byrne KM, Fox S, Whitehouse R, Talbot DC, Harris AL, Gatter КС. Prognostic value of angiogenesis in operable non-small cell lung cancer. J. Pathol., 1996; 179(1): 80-88.

57. Gospodarowicz D, Abraham JA, Schilling J. Isolation and characterization of a vascular endothelial cell mitogen produced by pituitary-derived folliculo stellate cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989; 86(19): 7311-7315.

58. Greenlund LJ, Deckwerth TL, Jonson EM Jr. Superoxide dismutase delays neuronal apoptosis: a role for reactive oxygen species in programmed neuronal death. Neurons, 1995; 14(2): 303 -315.

59. Haddad GG, Jiang C. 02 deprivation in the central nervous system: on mechanisms of neuronal response, differential sensitivity and injury.Progr. Neurobiol., 1993; 40(3): 277 318.

60. Hampl V, Cornfield DN, Cowan NJ, Archer SL. Hypoxia potentiates nitric oxide synthesis and transiently increases cytosolic calcium levels in pulmonary artery endothelial cells. Eur. Resp. J., 1995; 8(4): 515-522.

61. Hampton MB, Fadeel B, Orrenius S. Redox regulation of the caspases during apoptosis. Ann. N. Y. Acad. Sci., 1998; 854: 328 -335.

62. Hanahan D, Folkman J. Patterns and emerging mechanisms of the angiogenic switch during tumorigenesis. Cell, 1996; 86(3): 353-364.

63. Hellwig-Burgel T, Stiehl DP, Jelkmann W. In Oxygen Sensing: Responses and Adaptation to Hypoxia. Marcel Dekker, Inc., New York, 2003: 95-108.

64. Hiratsuka S, Minowa O, Kuno J, Noda T, Shibuya M. Flt-1 lacking the tyrosine kinase domain is sufficient for normal development and angiogenesis in mice. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1998; 95(16): 9349-9354.

65. Hon WC, Wilson MI, Harlos K, Claridge TD, Schofield CJ, Pugh CW, Maxwell PH, Ratcliffe PJ, Stuart DI, Jones EY. Structural basis for the recognition of hydroxyproline in HIF-1 by pVHL. Nature, 2002; 417(6892): 975-978.

66. Hortelano S, Dallaporta B, Zamzami N, Hirsch T, Susin SA, Marzo I, Bosca L, Kroemer G. Nitric oxide induces apoptosis via triggering mitochondrial permeability transition. FEBS Lett., 1997; 410(2-3): 373-377.

67. Houck KA, Ferrara N, Winer J, Cachianes G, Li B, Leung DW. The vascular endothelial growth factor family: identification of a fourth molecular species and characterization of alternative splicing of RNA. Mol. Endocrinol, 1991; 5(12): 1806-1814.

68. Houck KA, Leung DW, Rowland AM, Winer J, Ferrara N. Dual regulation of vascular endothelial growth factor bioavailability by genetic and proteolytic mechanisms. J. Biol. Chem, 1992; 267(36): 26031-26037.

69. Hudson CC, Liu M, Chiang GG, Otterness DM, Loomis DC, Kaper F, Giaccia AJ, Abraham RT. Regulation of hypoxia-inducible factor 1 alpha expression and function by the mammalian target of rapamycin. Mol. Cell Biol, 2002; 22(20): 7004-7014.

70. Ito N, Wernstedt C, Engstrom U, Claesson-Welsh L. Identification of vascular endothelial growth factor receptor-1 tyrosine phosphorylation sites and binding of SH2 domain-containing molecules. J. Biol. Chem., 1998; 273(36): 23410-23418.

71. Ivan M, Kondo K, Yang H, Kim W, Valiando J, Ohh M, Salic A, Asara JM, Lane WS, Kaelin WG Jr. HIF targeted for VHL-mediated destruction by proline hydroxylation: implications for О 2 sensing. Science, 2001; 292(5516): 464-468.

72. Iyer NV, Kotch LE, Agani F, Leung SW, Laughner E, Wenger RH. Gassmann M, Gearhart JD, Lawler AM., Yu AY, Semenza GL. Cellular and developmental control of О 2 homeostasis by hypoxia-inducible factor 1 . Genes Dev., 1998; 12(2): 149-162.

73. Jeong JW, Bae MK, Ahn MY, Kim SH, Sohn TK, Bae MH, Yoo MA, Song EJ, Lee KJ, Kim KW. Regulation and destabilization of HIF-1 by ARD1-mediated acetylation. Cell, 2002; 111(5): 709-720.

74. Jiang BH, Semenza GL, Bauer C, Marti HH. Hypoxia-inducible factor1 levels vary exponentially over a physiologically relevant range of02 tension. Am. J. Physiol., 1996; 271(4 Pt 1 ): 1172-C1180.

75. Jiang BH, Zheng JZ, Leung SW, Roe R, Semenza GL. Transactivation and inhibitory domains of hypoxia-inducible factor 1 : modulation of transcriptional activity by oxygen tension. J Biol. Chem., 1997; 272(31): 19253-19260.

76. Jin KL, Mao XO, Greenberg DA. Vascular endothelial growth factor: direct neuroprotective effect in in vitro ischemia. PNAS USA, 2000; 97(18): 10242-10247.

77. Jurgensmeier JM, Xie Z, Deveraux Q, Ellerby L, Bredesen D, Reed JC. Bax directly induces release of cytochrome с from isolated mitochondria. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1998; 95(9): 4997- 5002.

78. Kamura T, Sato S, Iwai K, Czyzyk-Krzeska M, Conaway RC, Conaway JW. Activation of HIF1 ubiquitination by a reconstituted von Hippel-Lindau (VHL) tumor suppressor complex. Proc. Natl Acad. Sci. USA, 2000; 97(19): 10430-10435.

79. Kapeller R, Cantley LC. Phosphatidylinositol 3-kinase. BioEssays, 1994; 16(8): 565-576.

80. Keck PJ, Hauser SD, Krivi G, Sanzo K, Warren T, Feder J, Connolly DT. Vascular permeability factor, an endothelial cell mitogen related toPDGF. Science, 1989; 246(4935): 1309-1312.

81. Kendall RL, Thomas KA. Inhibition of vascular endothelial cell growth factor activity by an endogenously encoded soluble receptor. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993; 90(22): 10705-10709.

82. Kim YM, de Vera ME, Watkins SC, Billiar TR. Nitric oxide protects cultured rat hepatocytes from tumor necrosis factor-alpha-induced apoptosis by inducing heat shock protein 70 expression. J. Biol. Chem., 1997; 272(2): 1402- 1411.

83. Klippel A, Kavanaugh W, Pot D, Williams LT. A specific product of phosphatidylinositol 3-kinase directly activates the protein kinase Akt through its pleckstrin homology domain. Mol.Cell. Biol., 1997; 17(1): 338-345.

84. Koch CA, Anderson D, Moran MF, Ellis C, Pawson T. SH2 and SH3 domains: elements that control interactions of cytoplasmic signaling proteins. Science, 1991; 252(5006): 668-674.

85. Krishnamachary B, Berg-Dixon S, Kelly B, Agani F, Feldser D, Ferreira G, Iyer N, LaRusch J, Рак В, Taghavi P, Semenza GL. Regulation of colon carcinoma cell invasion by hypoxia-inducible factor 1.-Cancer Res., 2003; 63(5): 1138-1143.

86. Kroemer G, Zamzami N, Susin SA. Mitochondrial control of apoptosis. Immunol. Today, 1997; 18(1): 44-51.

87. Kroll J, Waltenberger J. The vascular endothelial growth factor receptor KDR activates multiple signal transduction pathways in porcrine aortic endothelial cells. J. Biol. Chem., 1997; 272(51): 32521-32527.

88. Kurokawa H, Arteaga CL. Inhibition of erbB receptor (HER) tyrosine kinases as a strategy to abrogate antiestrogen resistance in human breast cancer. Clin. Cancer Res., 2001; 7(12): 4436s-4442s.

89. Lando D, Peet DJ, Gorman JJ, Whelan DA, Whitelaw ML, Bruick RK. FIH-1 is an asparaginyl hydroxylase enzyme that regulates the transcriptional activity of hypoxia-inducible factor. Genes Dev., 2002; 16(12): 1466-1471.

90. Lando D, Peet DJ, Whelan DA, Gorman JJ, Whitelaw ML. Asparagine hydroxylation of the HIF transactivation domain a hypoxic switch. Science, 2002; 295(5556): 858-861.

91. Lee AH, Dublin EA, Bobrow LG, Poulsom R. Invasive lobular and invasive ductal carcinoma of the breast show distinct patters of vascular-endothelial-growth-factor expression and angiogenesis. J. Pathol, 1998; 185(4): 394-401.

92. Leung DW, Cachianes G, Kuang WJ, Goeddel DV, Ferrara N. Vascular endothelial growth factor is a secreted angiogenic mitogen. Science, 1989; 246(): 1306-1309.

93. Li P, Nijhawan D, Budihardjo I, Srinivasula SM, Ahmad M, Alnemri ES, Wang X. Cytochrome с and dATP-dependent formation of Apaf-l/caspase-9 complex initiates an apoptotic protease cascade. Cell, 1997; 91(4): 479-489.

94. Locopo N, Fanelli M, Gasparini G. Clinical significance of angiogenic factors in breast cancer. Breast Cancer Res. Treat., 1998; 52(1-3): 159-173.

95. Lopez-Graniel CM, Tamez de Leon D, Meneses-Garcia A, Gomez-Ruiz C, Frias-Mendivil M, Granados-Garcia M, Barrera-Franco .L. Tumor angiogenesis as a prognostic factor in oral cavity carcinomas. J. Exp. Clin. Cancer Res., 2001; 20(4): 463-468.

96. Lukjanova L.D. // Adaptation Biology and Medicine/ Eds B.K. Sharma et al. 1996. - Vol. 1. - P. 261 -279.

97. Lukjanova L.D., Dudchenko A.M. // Adaptation biolog. Medi./ Eds K.B. Pandolf et al. 1999. -Vol. 2. - P. 139 - 150.

98. Macchiarini P, Fontanini G, Hardin MJ, Squartini F, Angeletti CA. Relation of neovascularisation to metastasis of non-small-cell lung cancer. Lancet, 1992; 340(8812): 145-146.

99. Mahon PC., Hirota K, Semenza GL. FIH-1: a novel protein that interacts with HIF-1 and VHL to mediate repression of HIF-1 transcriptional activity. Genes Dev., 2001; 15(20): 2675-2686.

100. Makino Y, Kanopka A, Wilson WJ, Tanaka H, Poellinger L. Inhibitory PAS domain protein (IPAS) is a hypoxia-inducible splicing variant of thehypoxia-inducible factor-3 locus. J. Biol. Chem., 2002; 277(36): 32405-32408.

101. Malyshev IY, Zenina ТА, Golubeva LY, Saltykova VA, Manukhina EB, Mikoyan VD, Kubrina LN, Vanin AF. NO-dependent mechanisms of adaptation to hypoxia. Nitric Oxide, 1999; 3(2): 105113.

102. Massague J. The transforming growth factor J3 family. Ann. Rev. Cell. Biol., 1990; 6: 597-641.

103. Masson N, Willam C, Maxwell PH, Pugh CW, Ratcliffe PJ. Independent function of two destruction domains in hypoxia-induciblefactor-alpha chains activated by prolyl hydroxylation. EMBO J., 2001; 20(18): 5197-5206.

104. Mattern J, Koomagi R, Volm M. Association of vasculat endothelial growth factor expression with intratumoral microvessel density and tumour cell proliferation in human epidermoid lung carcinoma. Br. J. Cancer, 1996; 73(7): 931-934.

105. Maxwell PH, Wiesener MS, Chang GW, Clifford SC, Vaux EC, Cockman ME, Wykoff CC, Pugh CW, Maher ER, Ratcliffe PJ. The tumour suppressor protein VHL targets hypoxia-inducible factors for oxygen-dependent proteolysis. Nature, 1999; 399(6733): 271-275.

106. McAuslan BR, Bender V, Reilly W, Moss BA. New functions of epidermal growth factor: stimulation of capillary endothelial cell migration and matrix dependent proliferation. Cell. Biol. Int. Rep., 1985; 9(2): 175-182.

107. Migone TS, Rodig S, Cacalano NA, Berg M, Schreiber RD, Leonard WJ. Functional cooperation of the interleukin-2 receptor beta chain and Jakl in phosphatidylinositol 3-kinase recruitment and phosphorylation. Mol. Cell Biol., 1998; 18(11): 6416-22.

108. Millauer B, Shawver LK, Plate KH, Risau W, Ullrich A. Glioblastoma growth inhibited in vivo by a dominant-negative Flk-1 mutant. Nature, 1994; 367(6463): 576-579.

109. Min JH, Yang H, Ivan M, Gertler F, Kaelin WG Jr, Pavletich NP. Structure of an HIF-1 -pVHL complex: hydroxyproline recognition in signaling. Science, 2002; 296(5574): 1886-1889.

110. Mirochnitchenko О, Inouye M. Effect of overexpression of human Cu,Zn superoxide dismutase in transgenic mice on macrophage functions. J. Immunol., 1996; 156(4): 1578-1586.

111. Muhl H, Nitsch D, Sandau K, Brune B, Varga Z, Pfeilschifter J. Apoptosis is triggered by the cyclic AMP signalling pathway in renal mesangial cells. FEBS Lett., 1996; 382(3): 271-275.

112. Nagornev VA, Maltseva SV. The phenotype of macrophages which are not transformed into foam cells in atherogenesis. Atherosclerosis, 1996; 121(2): 245-251.

113. NiCotera P, Ankarcrona M, Bonfoco E, Orrenius S, Lipton SA. Neuronal necrosis and apoptosis: two distinct events induced by exposure to glutamate or oxidative stress. Adv. Neurol., 1997; 72: 95101.

114. Nicotera P, Bellomo G, Orrenius S. Calcium-mediated mechanisms in chemically induced cell death. Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol., 1992; 32: 449-470.

115. O'Brien T, Cranston D, Fuggle S, Bicknell R, Harris AL. Different angiogenic pathways characterize superficial and invasive bladder cancer. Cancer Res., 1995; 55(3): 510-513.

116. Obermair A, Kurz C, Czerwenka K, Thoma M, Kaider A, Wagner T, Gitsch G, Sevelda P. Microvessel density and vessel invasion in lymph-node-negative breast cancer: effect on recurrence-free survival. Int. J. Cancer, 1995; 62(2): 126-131.

117. Ohh M, Park CW, Ivan M, Hoffman MA, Kim TY, Huang LE, Pavletich N, Chau V, Kaelin WG. Ubiquitination of hypoxia-inducible factor requires direct binding to the beta-domain of the von Hippel-Lindau protein. Nature Cell Biol., 2000; 2(7): 423^27.

118. Ohta Y, Endo Y, Tanaka M, Shimizu J, Oda M, Hayashi Y, Watanabe Y, Sasaki T. Significance of vascular endothelial growth factormessenger RNA expression in primary lung cancer. Clin. Cancer Res., 1996; 2(8): 1411-1416.

119. Olson ТА, Mohanraj D, Carson LF, Ramakrishnan S. Vascular permeability factor gene expression in normal and neoplastic human ovaries. Cancer Res., 1993; 54(1): 276-280.

120. Paley PJ, Staskus KA, Gebhard K, Mohanraj D, Twiggs LB, Carson LF, Ramakrishnan S. Vascular endothelial growth factor expression in early stage ovarian carcinoma. Cancer, 1997; 80(1): 98-106.

121. Pelicci G, Lanfrancone L, Grignani F, McGlade J, Cavallo F, Forni G, Nicoletti I, Grignani F, Pawson T, Pelicci PG. A novel transforming protein (SHC) with an SH2 domain is implicated in mitogenic signal transduction. Cell, 1992; 70(1): 93-104.

122. Peng HB, Libby P, Liao JK. Induction and stabilization of I kappa В alpha by nitric oxide mediates inhibition of NF-kappa B. J. Biol. Chem., 1995; 270(23): 14214-14219.

123. Pennacchietti S, Michieli P, Galluzzo M, Mazzone M, Giordano S, Comoglio PM. Hypoxia promotes invasive growth by transcriptional activation of the met protooncogene. Cancer Cell, 2003; 3(4): 347361.

124. Peunova N, Enikolopov G. Amplification of calcium-induced gene transcription by nitric oxide in neuronal cells. Nature, 1993; 364(6445): 450-453.

125. Pfeffer LM, Mullersman JE, Pfeffer SR, Murti A, Shi W, Yang CH. STAT3 as an adapter to couple phosphatidylinositol 3-kinase to the IFNAR1 chain of the type I interferon receptor. Science, 1997; 276(5317): 1418-1420.

126. Plate KH, Breier G, Weich HA, Risau W. Vascular endothelial growth gactor is a potential tumor angiogenesis factor in human gliomas in vivo. Nature, 1992; 359(6398): 845-848.

127. Pugh CW, O'Rourke JF, Nagao M, Gleadle JM, Ratcliffe PJ. Activation of hypoxia-inducible factor-1; definition of regulatory domains within the alpha subunit. J Biol. Chem., 1997; 272(17): 11205-11214.

128. Richard DE, Berra E, Gothie E, Roux D, Pouyssegur J. p42/p44 mitogen-activated protein kinases phosphorylate hypoxia-inducible factor 1 (HIF-1 ) and enhance the transcriptional activity of HIF-1. J. Biol. Chem., 1999; 274(46): 32631-32637.

129. Risau W. Mechanisms of angiogenesis. Nature, 1997; 386(6626): 671-674.

130. Rosa Santos SC, Dumon S, Mayeux P, Gisselbrecht S, Gouilleux F. Cooperation between STAT5 and phosphatidylinositol 3-kinase in the IL-3-dependent survival of a bone marrow derived cell line. Oncogene, 2000; 19(9): 1164-1172.

131. Rosen EM, Grant DS, Kleinman HK, Goldberg ID, Bhargava MM, Nickoloff BJ, Kinsella JL, Polverini P. Scatter factor (hepatocyte growth factor) is a potent angiogenic factor in vivo. Symp. Soc. Exp. Biol., 1993; 47: 227-234.

132. Ryan HE, Lo J, Johnson RS. HIF-1 is required for solid tumor formation and embryonic vascularization. EMBO J., 1998; 17(11): 3005-3015.

133. Saaristo A, Karpanen T, Alitalo K. Mechanisms of angiogenesis and their use in the inhibition of tumor growth and metastasis. Oncogene, 2000; 19(53): 6122-6129.

134. Salven P, Ruotsalainen T, Mattson K, Joensuu H. High pretreatment serum level of vascular endothelial growth factor (VEGF) is associated with poor outcome in small-cell lung cancer. Int. J. Cancer, 1998; 79(2): 144-146.

135. Sandau K, Brune B. The dual role of S-nitrosoglutathione (GSNO) during thymocyte apoptosis. Cell Signal, 1996; 8(3): 173 177.

136. Sang N, Stiehl DP, Bohensky J, Leshchinsky I, Srinivas V, Caro J. МАРК signaling up-regulates the activity of hypoxia-inducible factors by its effects on p300. J. Biol. Chem, 2003; 278(16): 1401314019.

137. Sato K, Terada K, Sugiyama T, Takahashi S, Saito M, Moriyama M, Kakinuma H, Suzuki Y, Kato M, Kato T. Frequent overexpression of vascular endothelial growth factor gene in human renal cell carcinoma. J. Exp. Med, 1994; 173(3): 355-360.

138. Seagroves TN, Ryan HE, Lu H, Wouters BG, Knapp M, Thibault P, Laderoute K, Johnson RS. Transcription factor HIF-1 is a necessary mediator of the pasteur effect in mammalian cells. Mol. Cell. Biol, 2001; 21(10): 3436-3444.

139. Seetharam L, Gotoh N, Maru Y, Neufeld G, Yamaguchi S, Shibuya M. A unique signal transduction from FLT tyrosine kinase, a receptor for vascular endothelial growth factor VEGF. Oncogene, 1995; 10(1): 135-147.

140. Semenza GL, Wang GL. A nuclear factor induced by hypoxia via de novo protein synthesis binds to the human erythropoietin gene enhancer at a site required for transcriptional activation. Mol. Cell. Biol, 1992; 12(12): 5447-5454.

141. Senger DR, Perruzzi CA, Feder J, Dvorak HF. A highly conserved vascular permeability factor secreted by a variety of human and rodent tumor cell lines. Cancer Res, 1986; 46(11): 5629-5632.

142. Shalaby F, Ho J, Stanford W, Fisher K, Schuh A, Schwartz L, Bernstein A, Rossant JA. A requirement for Flk-1 in primitive and definitive hematopoiesis and vasculogenesis. Cell, 1997; 89: 981-990.

143. Shalaby F, Rossant J, Yamaguchi TP, Gertsenstein M, Wu XF, Breitman ML, Schuh AC. Failure of blood-island formation and vasculogenesis in Flk-1-deficient mice. Nature, 1995; 376(6535): 6266.

144. Shweiki D, Itin A, Soffer D, Keshet E. Vascular endothelial growth factor induced by hypoxia may mediate hypoxia-initiated angiogenesis. Nature, 1992; 359(6398): 843-845.

145. Slavin J. Fibroblast growth factors: at the heart of angiogenesis. Cell Biol. Int., 1995; 19(5): 431-444.

146. Soker S, Sirois MG. Vascular endothelial growth factor effect on endothelial cell proliferation, migration, and platelet-activating factor aynthesis is Flk-1-dependent. J. Biol. Chem., 1999; 274(43): 3104731054.

147. Srivastava A, Laidler P, Davies RP, Horgan K, Hughes LE. The prognostic significance of tumor vascularity in intermediate-thickness (0.76-4.0 mm thick) skin melanoma. Am. J. Pathol., 1988; 133(2): 419-423.

148. Szatkowski M, Attwell D. Triggering and execution of neuronal death in brain ischaemia: two phases of glutamate release by different mechanisms. Trends inNeurosci, 1994; 17(9): 359 — 365.

149. Tabuchi A, Sano K, Oh E, Tsuchiya T, Tsuda M. Modulation of AP-1 activity by nitric oxide (NO) in vitro: NO-mediated modulation of AP-1. FEBS Lett, 1994; 351(1): 123 127.

150. Takahashi Y, Kitadai Y, Bucana CD, Cleary KR, Ellis LM. Expression of vascular endothelial growth factor and its receptor, KDR, correlates with vascularity, metastasis, and proliferation of human colon cancer. Cancer Res, 1995; 55(18): 3964-3968.

151. Takeda Y, Tashima M, Takahashi A, Uchiyama T, Okazaki T. Ceramide generation in nitric oxide-induced apoptosis. Activation of magnesium-dependent neutral sphingomyelinase via caspase-3. J. Biol. Chem, 1999; 274(15): 10654-10660.

152. Tamatani M, Ogawa S, Niitsu Y, Tohyama M. Involvement of Bcl-2 family and caspase-3-like protease in NO-mediated neuronal apoptosis. J. Neurochem, 1998; 71(4): 1588-1596.

153. Tanaka S, Ouchi T, Hanafusa H. Downstream of Crk adaptor signaling pathway: Activation of Jun kinase by v-Crk through the guanine nucleotide exchange protein C3G. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1997; 94(6): 2356-2361.

154. Tanimoto К, Makino Y, Pereira, T, Poellinger L. Mechanism of regulation of the hypoxia-inducible factor-1 by the von Hippel-Lindau tumor protein. EMBO J., 2000; 19: 4298^309.

155. Thakker GD, Hajjar DP, Muller WA, Rosengart TK. The role of phosphatidylinositol 3-kinase in vascular growth factor signaling. J. Biol. Chem., 1999; 274(15): 10002-10007.

156. Tian H, McKnight SL, Russell DW. Endothelial PAS domain protein 1 (EPAS1), a transcription factor selectively expressed in endothelial cells. Genes Dev., 1997; 11(1): 72-82.

157. Tischer E, Mitchell R, Hartman T, Silva M, Gospodarowicz D, Fiddes JC, Abraham JA. The human gene for vascular endothelial growth factor. J. Biol. Chem., 1991; 266(18): 11947-11954.

158. Toi M, Hoshina S, Takayanagi T, Tominaga T. Association of vascular endothelial growth factor expression with tumor angiogenesis and with early relapse in primary breast cancer. Jpn. J. Cancer Res., 1994; 85(10): 1045-1049.

159. Toi M, Inada K, Suzuki H, Tominaga T. Tumor angiogenesis in breast cancer: Its importance as a prognostic indicator and the association with vascular endothelial growth factor expression. Breast Cancer Res. Treat., 1995; 36(2): 193-204.

160. Trump BF, Berezesky IK. The role of altered Ca2+.i regulation in apoptosis, oncosis, and necrosis. Biochim. Biophys. Acta., 1996; 1313(3): 173-178.

161. Vanhaesebroeck B, Alessi DR. The PI3K-PDK1 connection: more than just a road to PKB. Biochem. J. 2000. V. 346(3 Pt). P. 561-576.

162. Volm M, Koomagi R. Hypoxia-inducible factor (HIF-1) and its relationship to apoptosis and proliferation in lung cancer. Anticancer Res., 2000; 20(3A): 1527-1533.

163. Wakui S, Furusato M, Itoh T, Sasaki H, Akiyama A, Kinoshita I, Asano K, Tokuda T, Aizawa S, Ushigome S. Tumour angiogenesis in prostatic carcinoma with and without bone marrow metastasis: a morphometric study. Am. J. Pathol., 1992; 168(3): 257-262.

164. Waltenberger J, Claesson-Welsh L, Siegbahn A, Shibuya M, Heldin CH. Different signal transduction properties of KDR and FLT1, two receptors for vascular endothelial growth factor. J. Biol. Chem., 1994; 269(43): 26988-26995.

165. Weidner N, Carroll PR, Flax J, Blumenfeld W, Folkman J. Tumor angiogenesis correlates with metastasis in invasive prostate carcinoma. Am. J. Pathol., 1991; 143: 401-409.

166. Weidner N, Semple JP, Welch WR, Folkman J. Tumor angiogenesis and metastasis correlation in invasive breast carcinoma. N. Engl. J. Med., 1991; 324(1): 1-8.

167. Weitzberg E, Lundberg JO. Nonenzymatic nitric oxide production in humans. Nitric oxide, 1998; 2(1): 1-7.

168. Yu F, White SB, Zhao Q, Lee FS. HIF-1 binding to VHL is regulated by stimulus-sensitive proline hydroxylation. Proc. Natl Acad. Sci. USA, 2001; 98(17): 9630-9635.

169. Yu J, Zhang L, Hwang PM, Rago C, Kinzler KW, Vogelstein B. Identification and classification of p53-regulated genes. Proc. Natl Acad. Sci. USA, 1999; 96(25): 14517-14522.

170. Yun JK, McCormick TS, Judware R, Lapetina EG. Cellular adaptive responses to low oxygen tension: apoptosis and resistance. Neurochem. Res., 1997; 22(4): 517-521.

171. Zhang Z, Jones S, Hagood JS, Fuentes NL, Fuller GM. STAT3 acts as a co-activator of glucocorticoid receptor signaling. J. Biol. Chem., 1997; 272(49): 30607-30610.

172. Zhong H, De Marzo AM, Laughner E, Lim M, Hilton DA, Zagzag D, Buechler P, Isaacs WB, Semenza GL, Simons JW. Overexpression of hypoxia-inducible factor 1 in common human cancers and their metastases. Cancer Res., 1999; 59(22): 5830-5835.

173. Zundel W, Schindler C, Haas-Kogan D, Koong A, Kaper F, Chen E, Gottschalk AR, Ryan HE, Johnson RS, Jefferson AB, Stokoe D, Giaccia AJ. Loss of PTEN facilitates HIF-1-mediated gene expression. Genes Dev., 2000; 14(4): 391-396.