Исследование белкового и ферментативного комплекса бобовых культур Таджикистана тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 05.18.01, кандидат технических наук Асатуллоев, Искандар Анварович

• Асатуллоев, Искандар Анварович
• кандидат технических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат технических наук Асатуллоев, Искандар Анварович

Введение.

1. Обзор литературы.

1.1. История; распространение и значение нута.

1.1.1. Нут - общая характеристика.

1.1.2. Пищевая ценность семян нута.

1.2. Белковые вещества семян бобовых культур.

1.3. Протеолитические ферменты.

1.3.1. Классификация и общая характеристика протеолитических ферментов.

1.3.2. Протеолитические ферменты семян растений.

1.3.3. Протеолитические ферменты семян бобовых культур.

1.4. Белковые ингибиторы протеолитических ферментов, их роль в регуляции активности протеаз.

1.4.1. Белковые ингибиторы пищеварительных протеаз в семенах нута различных сортов.

2. Экспериментальная часть.

2.1. Материалы и методы исследований.

2.1.1. Характеристика объекта исследования и методы исследования физических и химических показателей качества семян нута.

2.1.2. Проращивание семян нута.".

2.1.3. Определение водорастворимого белка по методу Лоури.5 Г

2.1.4. Определение фракционного состава белков.

2.1.5. Определение активности протеаз по методу Ансона.

2.1.6. Определение ингибирующей активности белковых ингибиторов протеаз.

2.1.7. Определение амилозы и амилопектина.

2.1.8. Фракционирование белков методом гель-хроматографии.

2.1.9. Методы оценки свойств сырья для приготовления хлеба.

2.1.10. Методы приготовления теста и хлеба. Бальная оценка качества хлеба.

2.2. Характеристика белкового комплекса семян нута.

2.2.1. Фракционирование белков семян нута по растворимости.

2.2.2. Фракционирование белков семян нута методом гельхроматографии на колонке с TSK - gel Toyopearl HW - 55F.

2.3. Характеристика протеолитических ферментов семян нута.

2.3.1. Выбор условий извлечения протеаз семян нута.

2.3.2. Определение оптимума рН протеаз семян нута.

2.3.3. Выбор условий осаждения протеаз семян нута.

2.3.4. Влияние температуры на активность протеаз семян нута.

2.3.5. Влияние активаторов и ингибиторов на активность протеаз семян нута.

2.41 Очистка протеаз семян нута и характеристика очищенных препаратов.

2.4.1. Осаждение протеаз при подкислении.79'

2.4.2. Гель-хроматография протеаз на колонке с ТБК - gel Тоуореаг

2.4.3. Схема выделения и очистки протеаз семян нута.

2.4.4. Характеристика нейтральной протеазы нута.

2.4.5. Характеристика щелочной протеазы нута.

2.5. Белковые ингибиторы протеаз из семян нута.

2.5.1. Выделение белковых ингибиторов.

2.5.2. Гель-хроматография протеаз на колонке с ТБК - gel Тоуореаг1 Н\\г-55Р.

2.5.3. Схема выделения белковых ингибиторов протеаз из семян нута.

2.6. Действие протеолитических ферментов семян нута на белки нута и пшеницы.

2.6.1. Действие протеолитических ферментов семян нута на белки нута.

2.6.2. Действие протеолитических ферментов семян нута на белки пшеницы.

2.7. Изменение активности протеолитических ферментов и их белковых ингибиторов при прорастании семян нута.

2.8. Влияние нутовой муки на качество хлеба.

Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование белкового и ферментативного комплекса бобовых культур Таджикистана»

Актуальность темы

Нут (Cicer arietinum) - ценнейшая бобовая культура, известная с древнейших времен. Она широко используется в питании населения различных стран, особенно, странах Азии, в том числе и странах Среднеазиатского региона. Пищевая ценность семян нута обусловлена благоприятным сочетанием в семенах белков, жиров и углеводов, макро- и микроэлементов, витаминов и других биологически активных веществ. Зерно в зрелом виде содержит 18-31% белка, 6% жира, 46 - 48% крахмала, 84 — 86% сухих веществ, 19,9% азотистых веществ, 3,8% золы.

В настоящее время рост производства зернобобовых культур в сочетании с улучшением их биохимических показателей и технологических достоинств - одна из. сложных и ответственных задач растениеводства. Изучение сложных физиологических процессов, протекающих в семени на разных этапах его развития позволят найти подходы к направленному формированию биохимических показателей качества семян. Одним из таких важнейших процессов, протекающих в семени является протеолиз запасных белков при прорастании. В нем могут принимать участие как ферменты, содержащиеся в созревших семенах, так и ферменты, синтезирующиеся de novo при прорастании.

Семена нута богаты белком, однако их протеолитические ферменты практически не изучены. В семенах нута показано наличие белковых ингибиторов протеаз, но все они являются ингибиторами экзогенных 4 протеолитических ферментов. Вопрос о взаимодействии белковых ингибиторов протеаз семян нута с собственными протеолитическим ферментами, а, следовательно, и об их роли в регуляции процесса протеолиза запасных белков при прорастании семян нута остается открытым.

Цель и задачи исследования

Целью работы является изучение белкового и протеолитического комплекса семян нута, выращенного в Таджикистане, а также выяснение возможных механизмов регуляции их активности в покое и при прорастании.

В соответствии с целью исследования были поставлены следующие задачи: охарактеризовать белковый комплекс семян нута сортов «Таджикский» и «Джалалабадский», выращенных в условиях Таджикистана;

- выделить и охарактеризовать нейтральные и щелочные протеазы семян нута;

- изучить взаимодействие протеолитических ферментов семян нута с белковыми ингибиторами протеаз;

- исследовать изменение активности протеаз семян нута и их белковых ингибиторов при прорастании.

Научная новизна

Впервые показано наличие в созревших семенах нута протеолитических ферментов разного типа, действующих в нейтральной и щелочной областях рН. Проведена очистка нейтральной протеазы с оптимумом рН действия 7,0, показано, что она является ферментом тиолового типа. Выделен и охарактеризован ранее не описанный в литературе фермент с оптимумом рН действия 10,0. Показано, что щелочная протеаза относится к ферментам серинового типа.

Установлено, что нейтральная и щелочная протеазы семян нута активно гидролизуют запасные белки покоящихся семян.

Впервые показано, что белковые ингибиторы в семенах нута взаимодействуют с эндогенными протеолитическими ферментами и участвуют в регуляции их активности в покоящихся и прорастающих семенах.

Практическая значимость работы

Семена нута имеют многоцелевое использование, и в разных технологических операциях состояние белково-протеиназного комплекса играет весьма существенную роль. Так, нутовая мука используется в хлебопечении и при производстве кондитерских изделий, как компонент, повышающий пищевую ценность и вкусовые качества готового продукта. Выявлена способность нейтральных протеаз семян нута гидролизовать белки пшеницы, что позволит наметить подходы к управлению процессом протеолиза в условиях тестоведения.

Разработана схема выделения нейтральных и щелочных протеаз и их белковых ингибиторов из семян нута. Получены препараты нейтральной и щелочной протеаз со степенью очистки 1132 и 547 раз соответственно.

Полученные данные могут быть использованы в селекции нута для получения семян с заданными особенностями белково-протеиназного комплекса.

Показана возможность замены пшеничной муки на нутовую в количестве 10% при выпечке хлеба, при этом происходит увеличение удельного объема формового хлеба, улучшается окраска и структура корок, сохраняются другие органолептические показатели качества.

Апробация работы

Материалы диссертации были представлены на III Юбилейной международной выставке-конференции «Высокоэффективные пищевые технологии, методы и средства для их реализации» (Москва, 2005); V Ежегодной международной молодежной конференции ИБХФ РАН - ВУЗы «Биохимическая физика» (Москва, 2005); IV Международной конференции-выставке «Высокоэффективные пищевые технологии, методы и средства для их реализации» (Москва, 2006).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 4 печатные работы.

1. Обзор литературы

1.1. История, распространение и значение нута

Заключение диссертации по теме «Технология обработки, хранения и переработки злаковых, бобовых культур, крупяных продуктов, плодоовощной продукции и виноградарства», Асатуллоев, Искандар Анварович

Выводы

1. Проведено сравнительное изучение белкового комплекса семян нута сортов «Таджикский» и «Джалалабадский», выращенных в условиях Таджикистана, урожая 2005г.

2. Показано, что в созревших семенах нута содержатся протеолитические ферменты, различающиеся оптимумом рН действия: нейтральные (рН 7,0) и щелочные (рН 10,0).

3. Разработана схема выделения и очистки нейтральной и щелочной протеаз с применением гель-хроматографии на колонке с колонке с Т8К -§е1 Тоуореаг1 Н^^ - 55Б.

4. Проведена очистка нейтральной протеазы с увеличением удельной активности в 1130 раз. Установлено, что нейтральная протеаза является тиоловым ферментом с молекулярной массой 70000 Дальтон.

5. Проведена очистка щелочной протеазы с увеличением удельной активности в 540 раз. Установлено, что щелочная протеаза является сериновой протеазой с молекулярной массой 35000 Дальтон.

6. Разработана схема выделения белковых ингибиторов протеаз из семян нута, специфичных по отношению к собственным протеолитическим ферментам и к трипсину.

7. Показана способность нейтральной и щелочной протеаз семян нута гидролизовать собственные белки.

8. Установлено, что белковые ингибиторы протеаз участвуют в регуляции активности протеаз в покое и при прорастании. Устойчивость белкового комплекса семян нута в покое обусловлена тем, что активность протеаз подавляется белковыми ингибиторами. При прорастании семян наблюдается разрушение ингибиторов и высвобождение активных протеолитических ферментов, осуществляющих активный протеолиз белков.

9. Показана возможность замены пшеничной муки на нутовую в количестве 10% при выпечке хлеба, при этом происходит увеличение удельного объема формового хлеба, улучшается окраска и структура корок, сохраняются другие органолептические показатели качества.

Список литературы диссертационного исследования кандидат технических наук Асатуллоев, Искандар Анварович, 2008 год

1. Абдрахманова A.M. Использование нетрадиционных наполнителей в производстве средне- и низкокалорийных майонезов / В кн.: Совершенствование технологий и переработки с.-х. продукции в современных условиях. -Волгоград, 1999, с. 161 - 163.

2. Абрамова Е.П., Черникова М.П. Содержание ингибиторов- протеаз в семенах некоторых бобовых // Вопросы питания, 1964, т. 23, с. 13-18.

3. Аникеева Н.В. Биологическая ценность белков нута / В сб. «Качинские чтения». — Волгоград: Царица, 2003, с. 12 13.

4. Аникеева Н.В. Научные основы новых технологий белковых препаратов и диетических продуктов с использованием нута. Автореф. дисс. на соискание уч. ст. докт. техн. наук. Воронеж, 2004, — 48 с.

5. Антонов К.В. Химия протеолиза. М.: Наука, 1983, - 386 с.

6. Балашов В.В1., Балашов A.B., Патрин М.Т. Нут зерно здоровья. -Волгоград: Изд. «Перемена», 2002, - 88 с.

7. Белозерский^ М:А. Свойства, и физиологическая роль протеиназ и их ингибиторов в семенах некоторых высших растений. Автореф. дисс. на-соискание уч. ст. докт. биол. наук. М.: 1983, - 44 с.

8. Бенкен И.И. Изменчивость содержания ингибиторов трипсина в семенах фасоли / В'кн.: Селекция, семеноводство и приемы возделывания фасоли. -Орел, 1975, с. 137- 143.

9. Бенкен И.И., Буданова В.И. Ингибиторы трипсина в семенах фасоли / В кн.: Труды по прикладной ботанике, генетике и селекции, 1976, т. 56, № 3, с. 67-73.

10. Ю.Бенкен И.И., Волузнева Т. А., Мирошниченко И.И. Активность ингибиторов трипсина и содержание белка в семенах чечевицы и чины / Бюл. ВИР, 1977, № 73, с. 29 34.

11. Бенкен И.И., Демина Р.Б. Комендантова Т.А. Белок и белковые ингибиторы протеиназ1 в семенах различных сортов нута (Cicer arietinum1.) II Труды по прикладной ботанике, генетике, селекции, 1981, т. 70, № 3, с. 3 9.

12. Бенкен И.И., Кузнецова Е.А. Активность протеолитических ферментов и ингибиторов протеиназ в прорастающих семенах чины / В кн.: Труды по прикладной ботанике, генетике и селекции, 1981, т. 70, № 3, с. 11-19.

13. Бенкен И.И., Макашев Р.Х. Некоторые показатели питательной ценности кормового гороха. JL: Бюл. ВИР, 1977, вып. 73, с. 7 - 11.

14. Бенкен И.Иг, Мосолов В:В., Федуркина Н.В. Влияние ингибитора протеиназ из фасоли на фитопатогенные грибы // Микробиология и фитопатология, 1976, т. 10 № 3, с. 198-201.

15. Бенкен И.И1. Волузнева Т. А., Мирошниченко И.И. Активность ингибиторов трипсина и содержание белка в семенах чечевицы и чины. -Л.: Бюл. ВИР, 1977, вып. 73, с. 29 34.

16. Буткевич B.C. Регрессивный метаморфоз белковых веществ в высших растениях и участием в нем протеолитического фермента // Изв. Московского сельскохозяйственного института, 1904,т. 10, с. 1.

17. Витол И.С. Протеолитические ферменты семян фасоли. Дисс. на соискание уч. степ. канд. биол. наук. М., 1986, - 188 с.

18. Вишнякова М.А. Яньков И.И., Булынцев C.B. Горох, фасоль, бобы. — СПб.: Диамант, 2001, 224 с.

19. ГОСТ 8758 76. Нут. Технические условия. - М.: Изд-во стандартов, 2003, с. 16-19.

20. Детерман Г. Гель-хроматография. М.: Мир, 1970, - 602 с.

21. Дюкянджиев С.Б., Саянова О.В., Вайнтрауб И.А., Шутов А.Д. Распад запасных белков и протеолитическая активность в прорастающих семенахфасоли // Изв.- АН Молд. ССР, серия биол. и хим. наук, 1980, № 2, с. 48 -53.

22. КарпиленкоГ.П., Попов М.П. Свойства кислой протеиназы-ячменя // Прикладная биохимия и микробиология, 1975, т. 11, №5, с 757 758.

23. Княгиничев М.И., Гросман В.Ю. Биохимия нута / В кн.: Биохимия культурных растений. JL, 1938, т. 2, - 248 с.

24. Колеснов А.Ю. Протеолитические ферменты ячменя. Дисс. на соискание уч. ст. канд. биол. наук. М., 1987. - 186 с.

25. Коренев Г.В., Подгорный П.И., Щербак С.Н. Растениеводство с основами селекции и семеноводства: -М.: Агропромиздат, 1990, 575 с.

26. Кочетов Г.А. Практическое руководство по энзимологии. М.: Высшая школа, 1980,-272 с.

27. Коэн Ф. Регуляция ферментативной активности. М.: Мир,1986; -144 с.

28. ЗБ.Кретович B.JI. Биохимия растений. М.: Высшая школа, 1986, - 502 с.

29. Локшина JI.A. Реакции ограниченного протеолиза и их регуляторноезначение / В кн.: Успехи биологической химии. — М.: Наука, 1977, т. 18, с. 162-184.

30. Локшина JI.A. Регуляторная роль протеолитических ферментов // Молекулярная биология, 1979, т. 13, № 6, с. 1205 1229.

31. Милов В.М. Количественный и качественный состав белка и его изменения в семенах гороха и нута. Дис. на соискание уч. ст. канд. биол. наук. JL, 1953.-23 с.

32. Мирошниченко И.И., Павлова A.M. Нут. М.: Сельхозгиз, 1953, - 112 с.

33. Мосолов В.В. Белковые ингибиторы как регуляторы, процессов протеолиза / В"кн.: 36-е Баховские чтения. М.: Наука, 1983, - 40 с.

34. Мосолов В.В. Природные ингибиторы протеолитических ферментов / В кн.: Успехи биологической химии. М.: Наука, 1982, т. 22, с. 100 - 118:

35. Мосолов В.В. Протеолитические ферменты. М.: Наука, 1971, - 414 с.

36. Плешков В.Н. Биохимия сельскохозяйственных растений. М.: Колос, 1980,-495 с.

37. Попов М.П., Карпиленко Г.П. Исследование кислых протеаз ячменя и ячменного солода // Прикладная биохимия и микробиология, 1974, т. 10, №2, с: 301 -303.

38. Попов М.П.", Карпиленко Г.П., Глинская,E.H. Исследование продуктов протеолиза альбумина и белков эндосперма ячменя кислой протеиназой ячменя // Прикладная биохимия и микробиология, 1976, т. 12, № 3, с. 438 -441.

39. Пучкова Л.И. Лабораторный практикум по технологии хлебопекарного производства. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1982, - 232 с.

40. Саранчук И.С., Арсений A.A. Изменение химического состава зерна нута в. зависимости от агротехнических приемов / В кн.: Интенсификация производства техш и корм.» культур. Кишинев, 1990,- с. 35 - 40.

41. Сельскохозяйственная биотехнология / под ред. акад. РАСХН B.C. Шевелухи, М.: Изд. МСХА, 1995, - 310 с.

42. Сеферова И.В. Анализ географического распространения i разновидностей культурного нута Cicer arietinum L. II Научн.-техн. бюл. ВНИИ растениеводства, 1994, № 233, с. 95 - 99.

43. Сеферова И.В. Типы семян культурного нута (Cicer arietinum L.) и их географическое распространение // Научн.-техн. бюл. ВНИИ растениеводства, 1992, № 223, с. 43 46.

44. Сеферова И.В. Эколого-географическая дифференциация нута Cicer arietinum L. 11 Научн.-техн. бюл. ВНИИ растениеводства, 1993, № 230, с. 34-35.

45. Скоупс Р. Методы очистки белков. М.: Мир, 1995, - 310 с.

46. Степанов В.М. Протеолитические ферменты структура, функциональные особенности, эволюция. / В кн.: Химия протеоли-тических ферментов. - Углич, 1979, с. 5 - 11.

47. Столяров О.В., Федоров В. А., Демченко Н.И. Нут (Cicer arietinum L.). — Воронеж: Изд. ВГУ, 2004, 256 с.

48. Тер-Мовсесян А.Ж. Нейтральные протеазы зерна ржи и их белковые ингибиторы. Автореф. дис. на соискание уч. степ. канд. биол. наук. — М., 1981,-24 с.

49. Тимман К.В. Вступительная глава / В кн.: Физиология и биохимия покоя и прорастания семян. -М.: Колос, 1982, с. 13 16.

50. Типисева И.А. Протеолитические ферменты семян сои. Автореф. дис. на • соискание уч. степ. канд. биол. наук. М., 1984, - 21 с.

51. Федотов В.А. Зернобобовые культуры /под ред. Г.В. Коренева. -Воронеж: Центр.-Ченозем. кн. изд., 1986, с. 142 169.

52. Фершт Э. Структура и механизм действия ферментов. М.: Мир, 1980, -432 с.

53. Фомина О.Н. Левин A.M. Нарсеев A.B. Зерно. Контроль качества и безопасности по международным стандартам, (под ред. В:М. Кантере). -М.: Протектор, 2001,-368 с.

54. Химия и биохимия бобовых растений / под ред. М.Н. Запрометова. М.: Агропромиздат, 1986, - 336 с.

55. Шаненко Е.Ф. Нейтральные протеазы зерна пшеницы и их белковые ингибиторы. Автореф. дис. на соискание уч. степ. канд. биол. наук. М., 1980, - 24 с.

56. Шаненко Е.Ф., Попов М.П. Кретович В.Л. Нейтральные протеазы зерна пшеницы / Прикладная биохимия и микробиология, 1985, т.21, № 2, с. 173- 175.

57. Шпаар Д., Элмер Ф., Постников А., Тарануко Г. Зернобобовые культуры. Минск: ФАУинформ, 2000, - 264 с.

58. Шульц Г., Ширмер Р. Принципы структурной'организации белков М.: Мир, 1982,-354 с.74:Шутов А.Д. Протеолиз запасных белков в прорастающих семенах бобовых. Автореф. дис. на соискание уч. степ, доктора^биол. наук. — М., 1983,-34 с.

59. Шутов А.Д., Белтей Н.К., Вайнтрауб И.А. Цистеиновая протеиназа из прорастающих семян пшеницы: частичная очистка и гидролиз клейковины // Биохимия, 1984, т. 49, № 7, с. 1171 1177.

60. Шутов А.Д., Бульмага В:П., Поло Р.Э. Протеиназа А прорастающих семян вики и ее роль в мобилизации запасных белков / В кн.: Биохимия нуклеиновых кислот и метаболизм белка. Минск, 1981, с. 73 - 74.

61. Шутов А.Д., Вайнтрауб И.А. О разложении белков семян сои и вики при прорастании / В кн.: Растительные белки. Кишинев: Штиица, 1972, с. 38 -42.

62. Шутов А.Д., Вайнтрауб И.А. Протеолиз запасных белков при прорастании семян / В кн.: Биохимические- и физиологические исследования семян. Иркутск, 1979, с. 136 - 146.

63. Шутов А.Д., До Нгок Лань, Вайнтрауб И.А. Очистка и частичная характеристика протеазы В из прорастающих семян вики // Биохимия, 1982, т. 47, №5, с. 814-821.

64. Шутов А.Д., Королева Т.Н., Вайнтрауб И.А. Об участии протеаз покоящихся семян вики в распаде запасных белков при прорастании // Физиология растений, 1978, т. 25, № 4, с. 735 742.

65. Шутов А.Д., Поло Р.Э. Об участии фенилаланин-п-нитроанилидазы в распаде запасных белков вики // Биохимия, 1983, т. 48, № 5, с. 870 874.

66. Янцен С.П. Результаты испытания нута в лесостепной зоне Алтайского края / Научно.техн. бюл. СО ВАСХНИЛ, 1987, № 6, с. 38 42.

67. Abu-Shakra S., Mirza S., Tannous R. Chemical composition and amino acid content of chickpea seeds at different stages of development // J.jf Sci/ os Food and Agriculture, 1970, v. 21, p. 91 93.

68. Adams S. A., Novelle L., Liebernberg W. Biochemical properties, and ultrastucture of protein bodies isolated from selected1 cereals // Sereal Chemistry, 1976; v. 53, № 1, с. 1 1-2.

69. Ainouz I.L., Benevides N. В., Freitas A.L.P. Proteolytic activities in seeds of Vigna unguiculata (L.) Walp. // Biol. Plant., 1981, v. 23, № 2, p. 133 140.

70. Amen R.D. A model of seed dormancy // Botanical Review, 1968, v. 34, № 1, p. 1-31.

71. Anson M.L'. The estimation of pepsin, trypsin, papain and catepsin with hemoglobin // J!. Gen. Physiol., 1938, v. 22, p. 79 82.

72. Aschton F. M. Mobilization of storage proteins of seeds // Ann. Rev. Plant. Physiol., 1976, v. 27, p. 95 117.

73. Baker B.E., Papaconstantinou J.A., Cross С/КУ, Khan N.A. Protein and lipid constitution of some Pacistani puises // J. Sci. Food Agric., 1961, v. 12, № 3, p. 205-207.

74. Belew M., Porath J., Sundberg L. The tripsin and chymotripsin inhibitors in chick peas (Cicer arietinum L.\ purification and properties of inhibitors // Eur. J. Biochem., 1975, v. 60, № 1, p. 247 258.

75. Bennett R.E. The study and evaluation of proteins from chickpea, (Cicer arietinum L.) and horse bean (Vicia faba L.) flours // Dissertatijn Abstracts International, B.37. S.3331.

76. Belitz H. D. Lymen F., Weder J.K.P. Comparative studies on the inhibitors action of some legume seeds, potato tubers and bran against human and bovine proteases // Zeitschrift fur Lebensmittel Untersuchung' und Forschung, 1982, B. 174, S. 442-446.

77. Bhatty R. S. Albumin* proteins of eight edible grain- legume species: Electrophoretic patterns and amino acid composition // J. of Agr. and Food Chemistry, 1982, v. 30, p. 620 622.

78. Bond H.Mi, Bowles D.I. Characterization of soybeans endopeptidase activity using exogenous and endogenous substrates // Plant. Physiol., 1983, v. 72, № 2, pi 345-350.

79. Boulter D. The ultrastructure and composition of legume cotyledon protein bodies I I Abh. Akadem. Wiss. DDR Abt. Math., Naturwiss., Techn., 1981, H: 5, S. 95-101.

80. Chandra S., Arora S. -K. An estimation of protein, ascorbic acid and.mineral matter content in some indigenous and exotic varieties of gram (Cicer arietinum L.) II Current Sci., 1968, v. 37, № 8, p. 237 238.

81. Chrispeels M.I., Baumgartner B., Harris H. Regulations of reserve protein metabolism in the cotyledons of mung bean seedlings // Proc. Nat. Acad. Sci., 1976, v. 73, № 8, p. 3168 3172.

82. Chrispeels M.I:, Bollini R., Harris H. Biosynthesis, accumulation and catabolism of reserve proteins in legume seeds // Ber. Bot. Ges., 1980, Bd.92, H: 2-3, S. 535-551.

83. Chrispeels M.I., Boulter D. Control of storage protein,metabolism in the cotyledons of germinating mung beans: role of endopeptidase // Plant. Physiol., 1975, v. 55, № 6, p. 1031 1037.

84. Csoma C., Polgar L. Proteinase from germinating bean cotyledons // Biochem. J., 1984, v. 222, № 3, p. 769 777.

85. Dudman W. F. Growth and extracellular polysaccharide production by Rhizobium meliloti in defined medium // J. Bacterid., 1964, v. 88, № 3, p. 640 645.

86. Enari T.-M., Mikola J. Endopeptidases of germinating barley / EBC Congress Proc., 1967, p. 9- 16.

87. Frattali Y., Steiner R.F. Soybean inhibitors. I. Separation and. some properties of three inhibitors from commercial crude soybean trypsin inhibitor // Biochemistry, 1968, v. 7, p. 521'.

88. Gallardo F., Araya H., PakN., Tagle M.A. Toxic factors in Chilean legumes. II. Trypsin inhibitor activity // Archivos Latin de Nutricion, 1974, v. 24, p. 183- 189.

89. Gennis L.S., Cantor C.R. Double-headed protease inhibitors from Black eyed' Peas. L Purification» of two new inhibitors and endogenous protease by affinity chromatography // J. Biol. Chem., 1976, v. 251, p. 734 740.

90. Gennis L.S., Cantor C.R. Double-headed protease inhibitors from Black eyed Peas. II. Structural studies be optical absorption'and circular dichroism // J. Biol. Chem., 1976, v. 251, p. 741- 746.

91. Guardiola L, Suteliffe I. F. Control of protein hydrolysis in the cotyledons of germinating pea seeds (P. sativum) // Ann. Bot., 1971, v. 35, № 142, p. 791 -807.

92. Jaya T.V., Krishnamurthy K.S., Venkataraman L.V. Effect of germination and cooking on the protein efficiency ratio of some legumes // Nutritions Reports International, 1975, v. 12, p. 175 183.

93. Jodha N.S., Subba Rao K. V. Chickpea: world importance and distribution // Indian "J. Biochem. and biophys;v1997, v. 34}№ 1, p. 1 24.

94. Kakade M. L., Simons N., Liener I. An evaluation of natural and synthetic substrates for measuring the the antitryptic activity of soybean samples // Cereal Chem;., 1969, V. 46, p. 518.

95. Khan M. A., Jacobsen I., Eggum B.U. Nutritive value of improved varieties of legumes //J. of Sei. of Food and Agr., 1979, v. 30 p. 395 400.llö.Laskowski M., Kato I. Protein inhibitor of proteinases // Ann. Rev. Biochem., 1980, v. 49, p. 593 626.

96. Liener I. E. A Review: Legume-toxins in-relation to protein digestibility //-J.-of Food Sei., 1976, v. 41, p. 1076 1081.

97. Liener I. E. Protein inhibitors and lectins // Biochemistry of Nutrition, 1979, v. 27, p. 97 122.

98. Lichtenfeld C., Mantenfell L., Müntz K., Scholz G. Protein degradation'in germinating legume seeds // Abh. Akadem. Wiss. DDR Abt. Math:, Naturwiss., Techn., 1981, H. 4, S. 133 152.

99. Lowry O.H., Rosebrougt N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with Folin phenol reagent. // J. Biol. Chem., 1951, v. 193, p. 265.

100. Maesen L. J. G., Cicer L. A monograph of the genus, with special>reference-to the chick pea; its ecology and cultivation. Wageningen. 172, p. 287 292.

101. Mathur K. S., Sharma R.D., Ran N. Chromatographic amino acid patterns of various protein fractions of Bengal gram (Cicer arietinum L.) II Indian J. of Medical Research, 1968, v. 58, p. 863.

102. Matile P. Alerone vacboleos lysosomes // Z. Pflanzen-physiol., 1968, B.58, S. 365-368.

103. Mitsuhashi W., Koshiba T., Minamikawa T. Separation and characterization of two proteinases in germinating Vigna mungo seeds // Plant. Physiol., 1986, v. 80, № 3, p. 628 634.

104. Morris G. F. I., Turman D.A., Boulter D. The extraction and chemical composition of alerone grains (protein bodies) isolated from seeds of Vicia faba II Phytochemistry, 1970, v. 9, p. 1709 1714.

105. Mossor G., Skupin J., Romanovska B. Plant inhibitors of proteolytic enzymes / Die-nahryng-food, 1984, v. 28, № 1, p. 92 113.

106. Pak N., Barja I. Composition, content of toxic substances, protein quality and protein value of greenpeas, chickpea and lentils grown in Chile // Ciencia Investigación Agraria, 1974, v. 1, p. 105 — 111.

107. Pushpamma P., Geervani P. Utilization of chickpea. Wallingford: C.A.B. International, 1981, p. 357 - 368.

108. Pusztai A., Duncan I. Changes in proteolytic enzyme activities and transformation of nitrogenous components in the germinating seeds of kidney bean II Planta, 1971, v. 96, № 4, p. 317 325.

109. Rajalakshmi R., Vanaja K. Chemical'and biological evaluation of the effects of fermentation on the nutritive of value of foods prepared from rice and gram // British J. of Nutrition, 1967, v. 11, p. 268 372.

110. Raskis I.I., Anderson R.E. Isolation of four soybean trypsin inhibitors by DEAE-cellulose chromatography//Biochem. Biophys. Res. Communs., 1964, v. 15, p. 230-235.

111. Richardson M. The proteinase inhibitors of enzemes // Food. Chem., 1981, v. 6, №3, p. 235-253.

112. Saxena M.G., Singh K.B: The chickpea. Wallingford: C.A.B. International, 1987,- 409 p.

113. Sing U., Jambunathan R., Subramanyam N., Kherderkar M. S. Studies on the antinutritional factors of desi and kabuli chickpeas cultivars / Presented at the 13th Annual Meeting of the Nutrition Society of India, 1980, p. 56 59.

114. Sing U., Raju S. M., Jambunathan R. Studies on desi and kabuli chickpeas {Cicer arietinum L.) cultivars. II. Seed protein fractions and amino acid composition // J. of Food Sci. and Technology, 1981, v. 18, h. 86 88.

115. Taisuke I., Masayuke K., Kazue M. Partical purification and proerties of proteases from defatted soybean flour // J. Nitr. Sci. Vitaminology, 1979, v. 25, №4, p. 333-342.

116. Tan-Wilson A.L., Cosgriff S.E., Duggan M.C., Obach R.S:, Wilson K.A. Bauman-Birk inhibitor complements of soybean strains // J. Agric. And Food. Chemi, 1985, v. 33, № 3, p. 389 393.

117. Vaintraub I.A., Bulmaga V.P. Soybean seed 2S-globulins are not trypsin inhibitors // Die Nahrung Food, 1985, v. 29, № 8, p. 711 - 714.

118. Vavreinova S., Turkova I. SH-proteinase from bean Phaseolus vulgaris var. Perlicka II Biochem. Et biophys. Acta, 1975, v. 403, № 2, p. 506 513.

119. Warsy A.S., Norton G., Stein M. Protease inhibitors from broad bean. Isolation and purification // Phytochemistiy, 1974, v. 13, № 11, p. 2481 -2486.

120. Whiltaker I.R., Sgarbieri V.C. Purification and composition of trypsin-chymotrypsin inhibitors of Phaseolus vulgaris L. var. Rosinha G2 II J. Food Biolchem., 1981, v. 5, № 3, p. 197 213.

121. Williams P.S., Singh U. Nutritional quality and the evaluation of quality in breeding programmes. Wallingford: C.A.B. International, 1981, p. 329 -342.

122. Willson K.A., Chen I.C. Amino acid sequence of mung bean trypsin inhibitors and its modified forms appearing during germination //Plant. Physiol., 1983, v. 71, № 2, p. 341 349.

123. Willson K.A., Laskowski M. Isolation of three isoinhibitors of trypsin from garden bean, Phaseolus vulgaris, having either lysine or arginine at the reactive site // J. Biol. Chem., 1973, v. 248, № 3, p. 756 762.

124. Willson K.A., Tan-Willson A.L. Proteinases involved in degradation of trypsin inhibitors in germinating mung beans // Acta biochimica polonica, 1983, v. 30, №30, p. 139-148.

125. Yamamoto M., Ikenaka T. Studies on soybean trypsin inhibitors. I. Purification and characterization of the two soybean trypsin inhibitors // J. Biochem., 1967, v. 62, p. 141 149.

126. УТВЕРЖДАЮ» ^Генеральный директорграната № 3 г. Москвы Маркса Л.Н.2007 г.и чиый !0Т1. АКТпроизводственных (предварительных) испытаний