Биохимическая характеристика ингибиторов протеиназ подсолнечника в связи с необходимостью повышения биологической ценности подсолнечного белка тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат технических наук Москвич, Ирина Анатольевна

• Москвич, Ирина Анатольевна
• кандидат технических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат технических наук Москвич, Ирина Анатольевна

Введение.

1. Обзор литературы.

1.1 Растительные белки.

1.2 Протеолитические ферменты растений.

1.3 Роль протеолитических ферментов в растениях.

1.4 Ингибиторы протеолитических ферментов растений.

1.5 Классификация ингибиторов протеаз отдельных ботанических семейств и их характеристика.

1.6 Роль ингибиторов протеолитических ферментов в растений.

1.7 Характеристика исследуемого объекта.

1.8 Технология переработки семян подсолнечника.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биохимическая характеристика ингибиторов протеиназ подсолнечника в связи с необходимостью повышения биологической ценности подсолнечного белка»

Все основные свойства и функции организма обусловлены свойствами и функциями белков. Свойства белка определяют молекулярную организацию протоплазмы, обмен веществ, реакцию организма на внешние воздействия. Через белки реализуется генетическая функция нуклеиновых кислот и морфогенетических процессов. Уже почти два столетия белки находятся в центре внимания биологов. В последнее время особенно возрос интерес к проблеме растительного белка. Это вызвано тем, что растения осуществляют его первичный синтез из неорганических элементов и являются основным источником белкового питания человека и животных.

Одна из вечных проблем человечества - обеспечение пищей, самой дефицитной частью которой является белковая. До сих пор более половины населения мира испытывают недостаток в белке и проблема увеличения его производства остается самой актуальной. Увеличение ресурсов белка за счет животноводства и рыбного промысла имеет свои пределы, которые уже практически достигнуты. Поэтому главным источником пищевого и кормового белка являются растения.

С проблемой пищевой ценности растительных белков связаны также вопросы безвредности растительного белка для организма человека. В растительном сырье присутствуют различные антипитательные или антиалиментарные вещества. К ним относятся, в частности, ингибиторы протеолитических ферментов, присутствующие в семенах зерновых, бобовых и других растений. Присутствуя в белковых продуктах, белки-ингибиторы протеиназ пищеварительного тракта могут существенно снизить усвояемость растительного белка.

Протеолитические ферменты и их ингибиторы играют важную роль в жизнедеятельности организмов.

Протеиназы и их технические препараты широко применяются в пищевой промышленности, в медицине, используются в виде кормовых добавок в животноводстве. Соевый ингибитор типа Баумана-Бирк является средством, которое эффективно применяется при лечении злокачественных новообразований. В настоящее время широко ведется поиск ингибиторов растительного происхождения, пригодных для использования в медицине.

В то же время высокое содержание ингибиторов в некоторых растениях приводит к значительному снижению пищевой ценности белковых продуктов. Так, в сое содержится пять ингибиторов трипсина в количестве 5 - 10 % от общей суммы белков. Присутствие ингибиторов протеиназ в рационе питания животных и человека приводит в ряде случаев к отрицательным физиологическим явлениям.

Многие ингибиторы обладают высокой устойчивостью к повышению температуры и не разрушаются даже после кипячения. Ряд растительных продуктов употребляется в пищу в сыром виде. В результате ингибиторы протеиназ могут в существенной степени затруднять усвоение белков, несмотря на содержащиеся в растениях активные протеиназы, способные стимулировать процесс гидролиза и усвоения белков пищи.

В связи с этим изучение растительных протеиназ и их ингибиторов в исходном сырье и белковых пищевых продуктах приобретает особое значение, определяя их биологическую ценность и безвредность для живого организма.

Данные о содержании протеиназ и их ингибиторов в растениях касаются в основном представителей ботанических семейств - бобовых, злаковых, пасленовых и тыквенных, реже - сельдерейных и капустных. Исследования последних десятилетий свидетельствуют об участии белков-ингибиторов во многих метаболических процессах растений - в процессах органического протеолиза белков и синтеза ферментов в прорастающих семенах, в создании механизмов защиты растения от повреждения микроорганизмами и насекомыми-вредителями. Эти работы дают основание полагать, что белки-ингибиторы ферментов являются обязательным компонентом белкового комплекса многих растений, во всяком случае тех из них, в которых белки в созревающих семенах откладываются в запас.

К сожалению, сведения о протеиназах и их белковых растительных ингибиторах семян подсолнечника, основной и традиционной масличной культуры юга России, крайне ограничены, получены на семенах подсолнечника старых сортов и выполнены методами, уже не применяемыми в современных биохимических исследованиях.

Отсутствуют также исследования протеаз и их ингибиторов в продуктах технологической переработки семян подсолнечника. Жмыхи и шроты, получаемые после удаления из семян растительного масла, представляют собой высокобелковые продукты и могут служить перспективным источником получения белковых концентратов и изолятов, применяемых в пищевой промышленности в качестве белковых обогатителей и функциональных добавок.

В связи с этим изучение биохимических характеристик протеиназ и их ингибиторов в хранящихся, покоящихся и прорастающих семенах подсолнечника и их изменений при технологической переработке семян представляют теоретический интерес для биохимии растений и химии белка и имеют прикладное значение для масложировой промышленности, перерабатывающей семена подсолнечника, при получении растительного масла и белка.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с НТП Минобразования РФ «Научные исследования высшей школы по приоритетным направлениям науки и техники» (№ госрегистрации 01200004219) и в соответствии с тематикой НИР кафедры биохимии и технической микробиологии КубГТУ (№ госрегистраци 2.14.09 и 2.14.005.6).

Целью работы являлось изучение биохимических характеристик протеиназ и их ингибиторов в семенах подсолнечника современных типов и выяснение возможности повышения эффективности использования подсолнечных белков в пищевых и кормовых продуктах путем направленной термической инактивации присутствующих в семенах ингибиторов протеиназ.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Москвич, Ирина Анатольевна

Выводы

Выполнено экспериментальное исследование белкового комплекса семян подсолнечника новых сортов, позволяющее выявить особенности физико-химических свойств их биологически активных веществ (протеиназ и их белковых ингибиторов) при технологической переработке семян в производстве и обосновать способ повышения биологической ценности получаемых продуктов.

1. Впервые количественно оценена разнокачественность сортов подсолнечника по активности протеиназ и их эндогенных ингибиторов, выявлена положительная корреляция с величиной массой доли в семенах запасных белков.

2. Показано распределение протеолитической и ингибиторной активности в белковом комплексе семян, установлена преимущественная локализация биологически активных белков в водорастворимой фракции запасных белков семян.

3. Впервые показана обратная зависимость активности протеиназ и их ингибиторов в прорастающих подсолнечных семенах. Возрастание активности протеиназ и снижение активности их эндогенных ингибиторов может являться следствием выхода ингибиторов протеиназ из прорастающих семян в окружающую среду.

4. Впервые предложена гипотеза о формировании вокруг проростков семян «защитной зоны» из ингибиторов, препятствующей повреждению его микроорганизмами почвы, подтвержденная экспериментально установленным подавлением роста микроорганизмов ингибиторами протеиназ, выделенными из подсолнечных семян. Эти результаты позволяют предполагать, что в прорастающих семенах биологическая роль ингибиторов протеиназ заключается в подавлении протеолитической активности почвенных микроорганизмов, не исключая возможности расходования ингибиторов в качестве запасных белков при прорастании семян.

5. Денатурационным изменениям под действием технологических факторов переработки подсолнечных семян подвергаются в первую очередь и в большей степени водорастворимые белки. Наибольшее денатурирующее воздействие оказывают операции влаготепловой обработки измельченных семян, отжим масла на шнековых прессах и операция отгонки растворителя из шрота в тостерах. Под действием этих операций электрофоретические спектры всех групп белков упрощаются, растворимость и физико-химические характеристики белков изменяются от снижения растворимости до появления пластических свойств по мере углубления тепловой денатурации. Белки теряют биологическую ценность, снижается массовая доля незаменимых аминокислот, активность ингибиторов приближается к нулевой.

6. Определены основные технологические параметры, обеспечивающие снижение трипсинингибирующей акивности шротов, получаемых из семян подсолнечника высокобелковых (кондитерских) сортов, позволяющие вырабатывать высокобелковые продукты для моногастрических сельскохозяйственных животных.

7. Предложены рекомендации для селекции сортов подсолнечника на высокую трипсинингибирующую активность для производства на их основе лечебных препаратов.

8. Ожидаемый экономический эффект от реализации результатов диссертационной работы в технологии переработки семян и селекции подсолнечника основывается на повышении биологической ценности подсолнечных шротов и создании источников получения ингибиторов протеиназ из растительного сырья.

Заключение

Как следует из анализа литературных данных, несмотря на обилие информации об ингибиторах протеолитических ферментов растений, сведения о них противоречивы и во многих отношениях не отличаются полнотой.

Это в полной мере относится к ингибиторам протеаз подсолнечника, характеристика которых неполна. Изучение изменения их активности под влиянием технологических воздействий на семена в процессе их переработки отсутствует. Немаловажно и то, что ограниченные сведения об ингибиторах ферментов семян подсолнечника получены на семенах сортов уже длительное время снятых с производства. Сведения об ингибиторах семян подсолнечника новых и перспективных сортов и гибридов отсутствуют.

В связи с изложенным целью нашего исследования являлось:

1. определение активности протеаз перспективных сортов и гибридов подсолнечника селекции ВНИИМК;

2. изучение влияния различных параметров технологической обработки, применяемой при получении из семян масла и белка, на активность ингибиторов протеаз;

3. выяснение влияния активности ингибиторов протеаз на биологическую ценность пищевых белковых продуктов, полученных при переработке семян с помощью тест-организма (Tethrachymena pyriphormis);

4. поиск возможных путей модификации (совершенствования) технологического процесса переработки семян подсолнечника и получения на их основе белковых продуктов - концентратов, изолятов - с целью возможно более полной инактивации ингибиторов протеаз и повышения биологической ценности белковых продуктов из семян;

5. рекомендация направлений и возможных методов повышения биологической ценности белков шрота при технологической переработке семян подсолнечника на действующем в масложировой промышленности оборудовании;

6. выяснить изменение активности ингибиторов протеаз при прорастании подсолнечных семян и оценить их биологическую роль в растении.

2. Экспериментальная часть

2.1. Исходный материал, условия и методы эксперимента

Объектом исследования служили семена высокомасличного подсолнечника сортов Круиз, Юбилейный 60, Фаворит, выращенных в одинаковых почвенно-климатических условиях на опытных полях НПО «Масличные культуры» ВНИИМК (г. Краснодар) в сезоны 1999, 2000, 2001, 2002 гг.

2.1.1. Характеристика объектов исследования

Современные сорта и гибриды подсолнечника обладают высокой потенциальной продуктивностью и при оптимальном сочетании всех факторов жизни (вода, питательные элементы, тепло, свет и др.) обеспечивают урожайность семян 3,5-4,0 т/га и более. Подсолнечник - основная масличная культура Кубани. В Краснодарском крае рекомендованы к использованию 14 гибридов и 16 сортов отечественной селекции и 23 гибрида иностранной. В семянках таких сортов содержится в среднем 50-54% масла.

Сорт Круиз включен в Государственный реестр селекционных достижений и допущен к использованию с 1998 года. Скороспелый сорт подсолнечника, от всходов до физиологической спелости 81 - 83 дня, устойчивый к заразихе, подсолнечной моли, средневосприимчивый к фомопсису (24%). Масличность абсолютно сухих семянок 47 - 49%, высокоурожайный, среднерослый. Его урожайность на госсортоучастках составляет 1,76 т/га. Отличительной особенностью сорта Круиз является высокое содержание в масле (более 71%) триацилглицеролов олеиновой кислоты, которых в обычных сортах содержится не более 30%. Масло, полученное из семян высокоолеинового сорта подсолнечника Круиз, аналогично оливковому и может быть использовано для диетического питания.

В отличие от старого высокоолеинового сорта Первенец, новый сорт при переопылении с другими сортами и гибридами не теряет высокоолеиновости семян. Рекомендуется для всех зон возделывания подсолнечника.

Сорт Фаворит является новым среднеспелым сортом. Он обладает уникальными качественными характеристиками. Внесен в список сортов, рекомендованных к возделыванию с 1997 года. Отличительной особенностью сорта подсолнечника Фаворит является устойчивость к гидролитическому распаду масла. Благодаря применению новых методов оценки и отбора, удалось снизить активность фермента липазы в семенах этого сорта, что позволяет получать сырье с низким кислотным числом при перестое растений на корню и даже при кратковременном увлажнении бурта. Производственное испытание, проведенное в Ставропольском крае в 1994 году показало, что при уборке 27 ноября кислотное число в семенах контрольного сорта Юбилейный 60 составило 5,3 мг КОН, а в семенах сорта Фаворит - всего 1,3 мг КОН. Помимо этого, Фаворит обладает устойчивостью к ложной мучнистой росе, заразихе и подсолнечной моли, высокотолерантный к фомопсису (36%). По урожаю маслосемян с единицы площади он не уступает сорту Юбилейный 60, превышая по этому показателю такие сорта, как ВНИИМК 8883, Березанский и Родник. Масличность абсолютно сухих семянок колеблется от 50 до 51,5%, сбор масла от 12 до 13 ц/га. Рекомендуется к возделыванию в южных районах российской Федерации, а в Центральной полосе - с применением десикации.

В качестве сорта-контроля использовали сорт Юбилейный 60. Это первый в мировой практике сорт подсолнечника, полученный на основе межвидовых гибридов, обладающий устойчивостью к ложной мучнистой росе и комплексу рас заразихи. Районирован с 1981 года. Сорт среднеспелый, высокорослый - высота растений 190-210 см. Высокомасличный, масличность абсолютно сухих семянок 51 - 53%. Хорошо приспособлен к механизированной уборке, дружно цветет и одновременно созревает. Благодаря хорошим физико-механическим свойствам семян при переработке дает высокий выход масла. Урожайность колеблется от 28 до 33 ц/га. Хорошие результаты показывает при возделывании в Ростовской и Волгоградской областях, Ставропольском крае. Положительно отзывается на внесение минеральных удобрений. Хороший медонос. Фомопсисом и белой гнилью поражается в средней степени (48, 89).

Список литературы диссертационного исследования кандидат технических наук Москвич, Ирина Анатольевна, 2003 год

1. Абрамова Е.П. Протеолитические ингибиторы фасоли, их получение и свойства. —Автореф. дис. канд. биол. наук. -М., 1967.-18с.

2. Александров С.Л., Антонов В.К. Эффективность протеолитических ферментов. -В кн.: Тезисы 3 симпозиума «Химия протеолитических ферментов». -М., 1993,- с.12-13.

3. Алексеева М.В. Белки алейроновых семян некоторых бобовых и тыквенных. В кн. «Растительные белки их биосинтез» АН СССР, М.: Наука, 1975. -с.136-141.

4. Андреева Н.С. Внутримолекулярная подвижность аспартатных протеиназ и ее роль в их функциях. -В кн.: Тезисы 3 симпозиума «Химия протеолитических ферментов». -М.-1993, -с. 14.

5. Антонов В.К. Химия протеолиза.-М.: Наука, 1983. -с.367.

6. Балабушевич Н.Г., Донецкий И.А., Гладышева И.П. Природные ингибиторы как основа для создания лекарственных средств. -В кн. Тезисы 3 симпозиума «Химия протеолитических ферментов». -М., 1993. -с. 115-117.

7. Белозерский М.А., Емцева И.Б., Курсанова Т.А. Выделение и свойства протеиназы из семян гречихи. -В кн.: Тезисы симпозиума «Химия протеолитических ферментов». —Вильнюс, 1973. -с.99.

8. Белозерский М.А. выделение и свойства 11S глобулина семян гречихи. -В кн.: Растительные белки и их биосинтез. -М.: Наука, 1975.-е. 152-156.

9. Белозерский М.А., Дунаевский Я.Е. Начальные превращения главного запасного белка в прорастающих семенах гречихи //Биохимия. -1984. -Т.49, №3. -с.479-485.

10. Белозерский М.А., Дунаевский Я.Е., Руденская Г.Н. Регуляция активности протеаз, осуществляющих гидролиз запасных белков у растений. В.кн.: Тезисы 3 симпозиума «Химия протеолитических ферментов. М., 1993. -с.37.

11. Белозерский М.А. Свойства и физиологическая роль протеиназ и их ингибиторов в семенах некоторых высших растений. -Автореф. дисс.канд.биол. наук. -М., 1983. -44с.

12. Бенкен И.И., Томилина Т.Б. Антипитательные вещества белковой природы в семенах сои. Научно-технический бюллетень ВИР. 1985. Вып.149. -с. 3-10.

13. Бейли Дж. Методы химии белков. -М.: Мир, 1965. -с.284.

14. Береш И.Д., Вакар А.Б., Соседов Н.И. Некоторые кинетичесие свойства потеолитических ферментов прорастающего зерна пшеницы // Докл. АН СССР. -1972. т.203, №2. -с.473-476.

15. Бжесюк С, Межвинская Т. Ферментативная активность как возможный показатель жизнеспособности семян // Wiss Beitz — Martin — Zather — Vailer — Wittenberg. -1976 -№6. -c.168-201.

16. Биохимия растительного сырья /В.Г. Щербаков, В.Г. Лобанов, Т.Н. Прудникова и др.; Под. ред. В.Г. Щербакова. М.: Колос, 1999. -376 с.

17. Вайнтрауб И.А., Шутов А.Ф. Протеиназы семян. -В кн.: Тезисы симпозиума "Химия протеолитических ферментов". Углич, 1979.-с. 196-23.

18. Вайсблай И.М. Состав ингибиторов трипсина семян гороха// Вопр. питания. -1979. -№ 2. -с. 76-77.

19. Валуева Т.А., Валуев Л.И. Особенности взаимодействия многоцентровых белков-ингибиторов сериновых протеиназ с ферментами. В. кн.: Тезисы 3 симпозиума «Химия протеолитических ферментов. М., 1993. -с.30.

20. Веремеенко К.Н. Протеолитические ферменты и их применение в медицине // Здоровье. -Киев. -1971. -159 с.

21. Вовчук С.В., Левицкий А.П., Чарский И.С. Выделение и очистка. Биохимические свойства трипсиноподобных ферментов ячменя. В кн.: Тезисы симпозиума "Химия протеолитических ферментов". Углич, 1969. с. 65-66.

22. Вовчук С.В., Лукьянюк С.Ф., Игнатова С.А. Динамика изменения активности протеиназ и ингибитора трипсина в зерне ячменя при созревании // Физиология и биохимия культурных растений. -1987. -т.15. №3 с.262-266.

23. Вовчук С.В., Волчевская Е.А., Левицкий А.П., Адамовская В.Г. Выделение и свойства ингибитора пшеницы // Прикладная биохимия и микробиология. -1993. -т.29, вып. 1. —с. 91.

24. Воскобойникова Т.В. Физиолого-биохимические характеристики сортов сои в целях создания новых и совершенствования существующих методов селекции. -Автореф. дисс.канд.биол. наук. -Краснодар, 1994. -19с.

25. Высоцкий В.Г., Зилова И.С. Роль соевых белков в питании человека // Вопр. питания. 1995. -№ 5. с. 20-27.

26. Гладышева И.П., Дунаевский Я.Е., Белозерский М.А., Гладышев А.П. Паписова А.И., Ларионова Н.И. Ингибирование экзогенных сериновых протеиназ ингибитором трипсина из гречихи ИТ-1

27. Биохимия. -1996. -т. 60, вып.9. -с.1530-1535.

28. Гребинский С.О. Биохимия растений. -Изд. Львовского университета. — 1967.-c.8-ll.

29. Гудвин Т., Мерсер Э. Введение в биохимию растений: пер. с англ. :В 2 т.-М.: Мир, 1986.-Т. 1. -С.393.

30. Диксон М., Уэбб Э. Ферменты: пер. с англ. М.: Мир, 1964. 816 с.

31. Досон Р., Эллиот Д., Эллиот У., Джонс К. Справочник биохимика: пер. с англ. -М.: Мир, 1991.-е 263-282.

32. Домаш. В.И., Буснюк О.В., Забрейко С.А., Ермолицкая JI.B. Белковые ингибиторы эндогенных протеиназ растений. В.кн.: Тезисы 4 симпозиума «Химия протеолитических ферментов. М., 1997. -с. 89.

33. Дунаевский Я.Е., Белозерский М.А. Сульфгидрильная протеаза в эндосперме прорастающих семян ржи. В кн.: Тезисы симпозиума "Химия протеолитических ферментов". Углич, 1979. с.70-71.33.

34. Дунаевский Я.Е., Белозерский М.А. Протеолиз и запасание белка семян пшеницы на ранней стадии прорастания // Физиология растений.- 1989. -т.75. №3. -с. 425-428.

35. Дунаевский Я.Е., Павлюкова Е.Б., Белякова Г.А., Белозерский М.А. Ингибиторы трипсина и внеклеточных сериновых протеиназ микромицетов из семян гречихи. В.кн.: Тезисы 3 симпозиума «Химия протеолитических ферментов. М., 1993. -с.96.

36. Ермаков А.И. Методы биохимического исследования растений. Л.: Колос, 1972.-456 с.

37. Жуковский П.М. Культурные растения и их сородичи. Л. : Колос, 1964. -С. 366-380.

38. Зимачева А.В., Иевлева В.В., Мосолов В.В. Выделение и характеристика ингибиторов цистеиновых протеиназ из клубней картофеля //Биохимия. -1984. -т.49, №7. -с.1153-1158.

39. Зимачева А.В., Мосолов В.В. Ингибиторы цистеиновых протеиназиз семян сои// Биохимия. -1995. -т.60, №1. -с.118-123.

40. Золотая книга народной медицины. Энциклопедия. Сост. В.А. Миронов. -М.: «Звонница-МГ», «РИПОЛ КЛАССИК», 1999. -с. 225-226.

41. Иевлева В.В., Зимачева А.В., Мосолов В.В. Новая протеиназа из прорастающего зерна ячменя. В.кн.: Тезисы 3 симпозиума «Химия . протеолитических ферментов. М., 1993. -с.44-45.

42. Иевлева В.В., Руденская Ю.А., Дунаевский Я.Е., Мосолов В.В. 7,5 кДа ингибитор цистеновых протеиназ из семян тыквы. В.кн.: Тезисы 4 симпозиума «Химия протеолитических ферментов. М., 1997. -с. 91.

43. Казаков Е.Д. Методы оценки качества зерна. М.: Агропромиздат, 1987. -215 с.

44. Касымова Т.Д., Петросян Л.Г., Кученкова М.А., Юлдашев П.Х. Протеазы хлопчатника. В кн.: Тезисы симпозиума "Химия протеолитических ферментов". Углич, 1979. с.51.

45. Каталог сортов и гибридов масличных культур ВНИИМК. Краснодар, 2000. -с.6-7.

46. Кашпаров И.В., Попов М.Е., Попов Е.М., Структурно-функциональная организация ферментов. В.кн.: Тезисы 4 симпозиума «Химия протеолитических ферментов. М.,1997. -c.l 1.

47. Кладницкая г.В., Валуева Т.А., Ревина Т.А., Мосолов В.В. Накопление ингибиторов химотрипсина в клубнях картофеля при инфицировании возбудителем фитофтороза. В.кн.: Тезисы 4 симпозиума «Химия протеолитических ферментов. М., 1997. -с.87.

48. Классификация и номенклотура ферментов. -Под ред. Браунштейна. -М.: ИЛ, 1962. -198 с.

49. Клименко В.Г. Белки семян бобвых растений. В кн. «Растительные белки их биосинтез» АН СССР, М.: Наука, 1975. -с.97-116.

50. Ковалева О.В. Протеолитические ферменты и ингибиторы протеиназ из растений и их влияние на пищеварительные протеиназы позвоночных животных. Автореф. дисс.канд. техн. наук. -Краснодар, 1998.

51. Конарев З.Г. Проблема пищевой и кормовой ценности растительных белков. В кн. «Растительные белки их биосинтез» АН СССР, М.: Наука, 1975. -с. 5-20.

52. Кольман Я., Рем К.-Г. Наглядная биохимия: пер. с нем. JI.B. Козлова, Е.Д. Левицкой, П.Д. Решетова. М.: Мир, 2000. -470 с.

53. Кочетов М.С. Практическое руководство по энзимологии. -М.: Высшая школа, 1980.-с.5-63.

54. Красильников В.Н., Гаврилюк И.П. Перспективы производства белковых нутрицевтиков. В кн.: Растительный белок: новые перспективы / Под ред. Е.Е. Браудо. М.: Пищепромиздат, 2000. -с. 24-39.

55. Кретович В.Л. Биохимия растений. М.: Высшая школа, 1986. -с.137-155.

56. Лобанов В.Г., Шаззо А.Ю., Щербаков В.Г. Теоретические основы хранения и переработки семян подсолнечника. М.: Колос, 2002. - 592 с.

57. Ливенская О.А. Ингибиторы сериновых протеиназ из семян кукурузы. -Автореф. дисс.канд. биол.наук. -М.,1985. -20с.

58. Марх А.Ф., Фельдман А.Л., Юрченко С.И., Загибалов А.Ф. Белковые вещества овощных культур. В кн. «Растительные белки их биосинтез» АН СССР, М.: Наука. 1975. -с.162-166.

59. Мецлер Д. Биохимия: пер с англ.: В 2 т. М.: Мир,1980. -Т.1. -с.87-105.

60. Метлицкий А.В., Ахвледиани К.С. Некоторые вопросы эволюции паразитизма и иммунитета растений. В кн. «Биохимические основы защиты растений. М.: Наука, 1966.

61. Мосолов В.В. Протеолитические ферменты. -М.: Наука, 1971.-144 с. 65. Мосолов В.В., Шульмина А.И., Малова Е.Л. Выделение из клубнейкартофеля ингибитора трипсина и химотрипсина //Биохимия. -1974. -т.29,№5.-с.656-963.

62. Мосолов В.В. Растительные белки-ингибиторы ферментов. В кн. «Растительные белки их биосинтез» АН СССР, М.: Наука, 1975. -с. 172-184.

63. Мосолов В.В. Природные ингибиторы протеолитических ферментов. -В кн. Успехи биологической химии. -М.: Наука, 1982. -т.22. -с. 100-104.

64. Мосолов В.В. Белковые ингибиторы как регуляторы процесса протеолиза. -М.: Наука, 1983.-40 с.

65. Мосолов В.В., Валуева Т.А. Растительные белковые ингибиторы протеолитических ферментов. -М.: Наука, 1983. -207 с.

66. Мосолов В.В. Ингибиторы протеолитических ферментов белковой природы . В. кн.: Тезисы 3 симпозиума «Химия протеолитических ферментов. М., 1993. -с. 28-29.

67. Мосолов В.В. Ингибиторы протеолитических ферментов. В.кн.: Тезисы 4 симпозиума «Химия протеолитических ферментов. М., 1997. -с. 12.

68. Нестеренко М.В., Мосин В.А., Шемякин М.Ф. Изучение белков, индуцируемых поранением в растениях картофеля и ингибирующих активность экзогенных сериновых протеиназ // Биохимия. -1992. -т. 52, вып.4 -с. 566.

69. Нортроп Д., Кунитц М., Херриот Р. Кристаллические ферменты. М: ИЛ. -1950.-346.

70. Оглоблина О.Г., Арефьева Т.И. Роль протеолитических ферментов и их ингибиторов в инвазии злокачественных опухолей // Биохимия. -1994. -т.59, вып.З. -с. 340-352.

71. Онивоги О.П. Протеолитические ферменты и их ингибиторы в традиционных пищевых продуктах Гвинеи. Автореф. дисс.канд. биол. наук. -Краснодар, 1983. - 21 с.

72. Петибская B.C., Кочегура А.В., Зеленцов С.В., Шабалта О.М., Каленов П.А. О перспективах повышения питательной ценности сои при селекции на низкую трипсинингибирующую активность. Сельскохозяйственная биология, 1998. № 1. —с. 63-66.

73. Петибская B.C., Шабалта О.М., Кочегура А.В., Зеленцов С.В. Повышение биологической ценности семян сои пищевого назначения. Известия ВУЗов. «Пищевая технология». 1997., №2-3., -с. 19-22.

74. Пивненко Т.Н., Эпштейн Л.М. Субстратная специфичность панкреатических сериновых протеиназ различного происхождения. В. кн.: Тезисы 4 симпозиума «Химия протеолитических ферментов. М., 1997. -с. 78.

75. Проскуряков М.Т. Биохимия. Краткий курс. Краснодар, КубГТУ, 2002. -199 с.

76. Погорлецкая В.Б. Ингибиторы протеиназ серой гнили из семян подсолнечника. Бюллетень НТИ ВНИИМК. 1985. Вып. 1 (88). -с.17-21.

77. Подсолнечник, под ред. B.C. Пустовойта. М. : Колос, 1975. -592 с.

78. Попов М.П., Витол И.С. Металлозависимые протеазы из семян фасоли // Прикладная биохимия и микробиология. 1990. № 4. -с.474-478.

79. Попов Е.М. Принципы структурно-функциональной организации ферментов. В. кн.: Тезисы 3 симпозиума «Химия протеолитических ферментов. М., 1993.-с. 15.

80. Попов Е.М., Кашпаров И.В., Попов М.Е. Механизм действия аспартатных протеиназ. В.кн.: Тезисы 4 симпозиума «Химия протеолитических ферментов. М., 1997.-с. 69.

81. Производство и применение ферментных препаратов в пищевой промышленности. Под. ред. Фениксовой Р.В. -М.: Пищепромиздат, 1963.-с.92 -117.

82. Пятницкий Н.П., Проскуряков М.Т. Определение активности химотрипсина по скорости створаживания мол очно-ацетатной смеси. — В кн. : Материалы 17 научной конференции физиологов юга РСФСР. -Ставрополь, 1969. -т.2. -с.80-82.

83. Ревина Т.А., Валуева Т.А., Ермолова Н.В., Кладницкая Г.В., Мосолов В.В. Выделение и характеристика нового ингибитора трипсина и химотрипсина из клубней картофеля //Биохимия. -1995. -№ 11.-е. 1844 -1852.

84. Ревина Т.А., Валуева Т.А., Кладницкая Г.В., Мосолов В.В., Менделе Р. Ингибитор сериновых протеиназ из клубней картофеля. В.кн.: Тезисы 4 симпозиума «Химия протеолитических ферментов. М., 1997. -с.86.

85. Рекомендации по технологии возделывания подсолнечника в Краснодарском крае. Краснодар, 2000. -26 с.

86. Ротарь В.И., Сенюк В.И., Хорстман К., Вайнтрауб И.А. Цистеиновые протеиназы прорастающих семян фасоли. В.кн.: Тезисы 4 симпозиума «Химия протеолитических ферментов. М., 1997. -с.50.

87. Руденская Г.Н., Степанов В.М., Богданова Е.А., Ревина Л.П., Головкин Б.Н. Сериновая протеиназа плодов Maclura pomifera. В. кн.: Тезисы 3 симпозиума «Химия протеолитических ферментов. М., 1993. -с.54.

88. Румш Л.Д. Химия протеолиза. В. кн.: Тезисы 3 симпозиума «Химия протеолитических ферментов. М., 1993. -с. 5-6.

89. Сарбаканова Ш.Т., Белозерский Я.Е., Заиров С.З. О наличии аспартильной протеиназы в семенах пшеницы. Выделение и характеристика фермента // Биохимия. -1988. -т. 53, № 5. 768-775.

90. Суринов Б.П. О методах определения активности протеолитических ферментов // Прикладная биохимия и микробиология. 1970. Т. 6, вып. 2. -с. 226-233.

91. Соболев A.M., Суворов В.И. О некоторых особенностях белков алейроновых зерен. В кн. «Растительные белки их биосинтез» АН СССР, М.: Наука, 1975. -с.126-136.

92. Соболев A.M. Запасание белка в семенах растений. М.: Наука, -1983. - с. 112.

93. Современная фитотерапия. Под ред. Веселина Петкова. София, Медицина и физкультура, 1988.-504с.

94. Степанов В.М. Протеиназы как катализаторы пептидного синтеза. В. кн.: Тезисы 3 симпозиума «Химия протеолитических ферментов. М., 1993. -с. 16.

95. Степанов В.М. Молекулярная биология. Структура и функции. -М.: Высшая школа, 1996. -с. 203-233.

96. Степанов В.М. Эволюция протеиназ. Аналогии и параллели. В.кн.: Тезисы 4 симпозиума «Химия протеолитических ферментов. М., 1997. -с.5.

97. Туманьян Н.Г., Бухтоярова З.Г., Вишнякова И.А. Активаторы и ингибиторы протеолитических ферментов семян риса // Прикладная биохимия и микробиология. -1986. -т. 22, №4. -с. 486-491.

98. Туманьян Н.Г., Проскуряков М.Т. Активность и свойства протеолитических ферментов в прорастающих семенах риса // физиология растений. 1989. -т.36, № 37. -с.520-525.

99. Флауменбаум Б.Л., Левицкий А.П., Беленькая И.Р. Кинетика инактивации соевого ингибитора трипсина при тепловой обработке // Укр. биохим. журнал. -1992. -вып.64, № 6. -с. 94-98.

100. Фурсов О.В., Перуанский Ю.В. Длительность хранения семян кукурузы и активность гидролитических ферментов // Вестник с/х наук Казахстана. -1974. № 12.-с. 103.

101. Хлуднев ДВ., Пивненко Н.В., Мосолов В.В. Ингибитор химотрипсина/субтилизина из эндосперма зерновок пшеницы // Биохимия. — 1992. т. 52, вып. 12.-е. 1874.

102. Хавкин Э.Е. Обмен веществ прорастающих семян. М.: Наука, -1982. -с.318.

103. Цыбина Т.А., Белозерский М.А., Дунаевский Я.Е. Катионные ингибиторы протеианз из семян гречихи. В.кн.: Тезисы 4 симпозиума «Химия протеолитических ферментов. М., 1997. -с.88.

104. Чабан А.Н. Множественность форм ингибиторов сериновых протеиназ в семенах фасоли. Автореф. дисс. канд. биол. наук. -М., 1983. 23 с.

105. Шутов А.Д. Протеолиз запасных белков в прорастающих семенах бобовых. Автореф. дисс. д. биол. наук. -М.: Ин-т биохимии им. А.Н. Баха АН СССР, 1983.-40 с.

106. Шутов А.Д., Белтей Н.К., Вайнтрауб И.А. Цистеиновая протеиназа из прорастающих семян пшеницы: частичная очистка и гидролиз клейковины // Биохимия. 1984. -т.49, № 7, -с. 1171 -1177.

107. Щербаков В.Г. Биохимия и товароведение масличного сырья. М. : Пищевая промышленность, 1969.- 456 с.

108. Щербаков В.Г. Технология получения растительных масел. 3-е изд., перераб. и доп. М. :Колос, 1992. - 207с.

109. Щербаков В.Г., Иваницкий С.Б., Лобанов В. Лабораторный практикум по биохимии итовароведению масличного сырья. 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Колос, 1999.- 128 с.

110. Эллиот В., Эллиот Д. Биохимия и молекулярная биологгия. Пер. с англ. под ред. А.И. Аргапова и др. М., изд-во НИИ биомед. хим. РАМН, 1999/2000. -372с.

111. Ambe K.S., Sohonie К. Studies in trypsin inhibitors in indian food-stuffs: Part III.-Trypsin inhibitor in germination double-bean and field-bean their growing plants //Sci. Industr. Res. -1956. Vol.15, -p. 136-140.

112. Anderson R.L., Rackis J.J., Tallent W.H. Biologically active substuns in soy product. In.: Proc. Keystone Conf. Soy Protein and Human Nutr. - New York.: Academic Press. -1980. -p. 209-233

113. Anson M.L. The estimation of pepsin, trypsin, papain and cathepsin with gemoglobin // J. Gen. Physiol. -1938. -Vol. 22. №1/ -p. 79 -89.

114. Ashton F.M. Mobilization of storage protein of seeds // Annu. Rev. Plant Physiol. -1976. -Vol.27 -p. 95-117.

115. Baumgartner В., Chrispeels M. Partial characterisation of a protease inhibitor of mund beans // Plant Physiol. -1976. -Vol.58 -p. 1-6.

116. Birk Y. Purification and same properties of a highly active inhibitor of trypsin and @-chimotrypsin from soybeans // Biochem. Biopys. Acta. —1961. -Vol. 54. -p. 378.

117. Birk Y., Gertler A., Khalef S. A pure trypsin inhibitor from soy beans // Biochem. 1963. -Vol. 87. -p. 281.

118. Birk Y. Proteinase inhibitor frome plant sourse // Metods of enzymology. -N.Y. -L. Academic Press. -1976. -Vol. 45. -p. 695-736.

119. Birk Y. Trypsin inhibitor from Garden Bean (Phaseolus vulgaris). N.Y. - S.F.— L. - Academic Press. -1976. -Vol. 45. -p. 710-715.

120. Birk Y. Trypsin and chimotrypsin inhibitors from Graundnuts (Arachis hypogaea). N.Y. S.F -L. - Academic Press. -1976. -Vol. 45. -p. 716-722.

121. Birk Y. Proteinase inhibitors from potatoes. N.Y. S.F.-L. — Academic Press. — 1976.-Vol. 45.-p. 728-736.

122. Birk Y. Trypsin and chimotrypsin inhibitors from soybean. N.Y. — S.F.-L. — Academic Press. -1976. -Vol. 45. -p.700-707.

123. Chabala J., Reseday A., Walsh M. Inhibitor of trypsin and chimotrypsin in winged bean // Agr. and food chem. -1981. -Vol. 242. p. 4274.

124. Chen I., Mitchell H.L. Trypsin inhibitor in plants // Phytochemistry. -1973. — Vol. 12.-p. 327-330.

125. Doell H.B., Ebden C.J., Smith C.A. Trypsin inhibitor activity of conventional food wich are part of the British diet and some soy products // Plant foods for human nutrition. -1981. -Vol. 31. № 2 p. 139-150.

126. Dryjanski Marek, Otlewski Jacek, Wilusz Tadeusz Serin proteinase from Cucurbita ficifolia seeds // Acta biochim. Pol. -1990. -Vol. 37. № 1-p. 169-172.

127. Evers A.D., Redman D.G. The location of proteolytic enzymes in developing grains of whit // Chem. Ind. -1973. -Vol. 1, № 2. -p. 90-91.

128. Feeney R.E., Means G.E., Bigler J.C. Inhibitor of human trypsin, plasmin and trombin by naturally occurity inhibitors of proteolytic enzymes // Biol. Chem. -1969. -Vol. 244, № 8. -p. 1957 1960.

129. Graham J., Ryan C. Accumulation of a metall-carboxipeptidase inhibitors in leaves of wounded plant potato // Biochem. and Biophys. 1981. - Vol. 4. — p. 11641169.

130. Нага I., Matsubara H. Pumpkin (Cucurbita sp.) seed globulin // Plant and cell Physiol. -1980. -Vol. 21. -p. 219-232.

131. Harris N., Chrispeels M. Hystochemical and biochemical observations on storage protein metabolism and protein body autolysis in cotyledons of germinating Mund bean // Plant Physiol. -1975. -Vol.75, -p. 292-299.

132. Harvey B.M.R., Daks A. The hydrolysis of endosperm protein in Zea mays // Plant Physiol. -1974. Vol. 53, № 3. -p. 453-457.

133. Haynes R., Osuga D.T., Freeney R.E. Modification of aminogroups in inhibitors of proteolytic enzymes // Biochemistry. 1968. Vol.7-p. 541.

134. Ikenaka Т., Odani S., Koide T Chemical structure and inhibitory activity of soybean proteinase inhibitors. In. : Proc. 2nd Int. Res. Conf. «Proteinase inhibitjrs.»Springer-Verlag, Berlin, Heidelberg, New York. -1974. -p. 326-330.

135. Knypl J., Radziwonowska-Jozwiak A. Electrophoregramm patterns of embryo axis and protein body of soybean seeds // Biochem. und Physiol. Pflauz. -1979. Bd. 174.-s. 641-645.

136. Kunitz M. Crystalline soybean trypsin inhibitor // Gen. Physiol. -1947. Vol. 30. p. 291-310.

137. Micola J., Suolinna E. Purification and properties of a trypsin inhibitor from barley // Europ. J. of Biochem. -1969. Vol. 9, № 4. -p. 555-560.

138. Mossor G., Skupin J., Romanowska B. Plant inhibitors of proteolytic enzymes // Nabrung. -1984. Vol. 28, № 1. -p. 93-112.

139. Mutambo F., Raman A., Theobalt A.E. Isolation and purification of trypsin inhibitors from pumpkin seeds (Cucurbita maxima) // J. Pharm. and Pharmacol. -1995. Vol. 43, Suppl. -p. 17.

140. Otlewski J., Polanowski A., Leluk J., Wilusz T. Trypsin inhibitors in summer squash (Cucurbita pepo) seeds. Isolation, purification and partial characterization of three inhibitors // Acta biochim. Pol. -1984. -Vol. 31. № 3- p. 267-278.

141. Otlewski J., Zhykyt Т., Krokoszynska I.,Wilusz T. Inhibition of serin proteinases by squash inhibitors // Biol. Chem. Hoppe Seyler. 1990. Vol. 371. № 7-p. 589-594.

142. Pearse G., Jihnson S., Ryan C.A. Purification and characterization from tabacco (Nicotiana Tabaccum) leaves of six smoll, wound-inducible proteinase isoinhibitors of the potato inhibitor family I // Plant Physiol. -1993. Vol. 102, № 2. -p. 639-644.

143. Pham T.C., Leluk J., Polanowski A., Wilusz T. Purification and characterization of trypsin inhibitors from Cucurbita pepo var patissona fruts // Biol. Chem. Hoppe Seyler. 1985. Vol. 366. № 10-p. 939-944.

144. Polanowski A. Inhibitors of trypsin from seeds of rye // Acta biochim. Pol. -1964. -Vol. 14. № 4-p. 390-395.

145. Richardson M. The proteinase inhibitors from plants and microorganisms // Am. Biol. Chem. Soc. -1974. -Vol. 51. -p. 159-169.t 151. Ryan C.A. Proteolytic enzymes and their inhibitors in plants // Ann.Rev. Plant

146. Physiol. -1973. Vol. 24.-p.l73-196.

147. Sakato S.K., Tanaka T.N/. Misawa M.M. Isolation and characterization of a proteinase inhibitor from Scopolia // EuropeanJ. Biochemistry. -1975. Vol. 55. -p. 211-215.

148. Shain Y., Maiyer A.M. Proteolytic enzymes and Endogenous Trypsin Inhibitor in Germination Lettuce Seeds // Physiol. Plant-1965. Vol. 18.-p.853- 589.

149. Shinbu S., Emi s., Tsuneo W., Tadashi F. Isolation and characterization of a proteinase inhibitor from spinash leaves // Phytochemistry. -1995. -Vol. 24. n. 3 -p. 419-423.147.