Иммуногенные свойства бактериальных рибосом тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат биологических наук Сиюхова, Фатима Шумафовна

• Сиюхова, Фатима Шумафовна
• кандидат биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Сиюхова, Фатима Шумафовна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. Литературный обзор.

1.1 .Рибосома и рибосомный аппарат бактерий.

1.1.1. Физико-химическая и структурная характеристика бактериальных рибосом.

1.1.2. Рибосомный аппарат бактерий.

1.2. РИБОСОМНЫЕ ВАКЦИНЫ И СОВРЕМЕННАЯ ВАКЦИНОЛОГИЯ.

1.2.1. Протективные свойства рибосом микроорганизмов

1.2.2. Бактериальные рибосомы и иммунный ответ.

1.2.2.1. Бактериальные рибосомы и клеточный иммунитет

1.2.2.2. Бактериальные рибосомы и процесс антителогенеза

1.2.2.3. Бактериальные рибосомы и фагоцитоз.

1.2.2.4. Бактериальные рибосомы и факторы неспецифической резистентности

1.2.3. Преимущества рибосомных вакцин.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Штаммы бактерий и их культивирование.

2.1.1. Штаммы бактерий.

2.1.2. Получение биомассы.

2.2. Получение 70S рибосом.

2.2.1. Буферные системы.

2.2.2. Дезинтеграция клеток.

2.2.3. Выделение рибосомного материала.

2.2.4. Хранение рибосомного материала.

2.3. Контроль качества полученного рибосомного материала

2.3.1. Спектрофотометрический анализ.

2.3.2. Седиментационный анализ.

2.3.3. Электрофоретический анализ.

2.3.3.1. Электрофорез рибосомных белков.

2.3.3.2. Электрофорез рибосомной РНК.

2.4. Лабораторные животные и их иммунизация.

2.5. Иммунологические исследования.

2.5.1. Выделение чистой взвеси лимфоцитов и нейтрофилов с помощью фиколл-верографинового градиента.

2.5.2. Выделение лейкоцитарной взвеси с помощью гемолитической жидкости.

2.5.3. Экспресс-микрометод определения спонтанного розеткообразования лимфоцитов (Е-РОК), нейтрофильных гранулоцитов (ранние, поздние Е-РОН).

2.5.4. Постановка реакции комплементарного розеткообразования (ЕАС-РОК и ЕАС-РОН).

2.5.5. Реакция бактериального фагоцитоза нейтрофилов с определением степени завершенности.

2.5.6. Методы изучения микробицидных систем нейтрофилъных гранулоцитов.

2.5.6.1. Спонтанный и стимулированный NBT-тест.

2.5.6.3. Катионные белки.

2.5.6.4. Щелочная фосфатаза.

2.5.7. Оценка гуморального звена иммунитета.

Глава 3. Характеристика препаратов 70S рибосом Staphylococcus aureus 209Р и Escherichia coli MRE600.

Глава 4. Иммуногенная активность 70S рибосом Staphylococcus aureus 209Р.

4.1. Динамика популяционного состава лейкоцитов.

4.1.1. Динамика уровня лимфоцитов, участвующих в спонтанном и комплементарном розеткообразовании.

4.1.2. Динамика уровня нейтрофилъных гранулоцитов крови, участвующих в реакции спонтанного и комплементарного розеткообразования.

4.2. Влияние рибосом Staphylococcus aureus 209Р на образование антирибосомных антител.

4.3. Влияние рибосом Staphylococcus aureus 209Р ha фагоцитарную активность нейтрофилъных гранулоцитов.

4.4. Антимикробный потенциал нейтрофилъных гранулоцитов в условиях иммунизации рибосомами Staphylococcus aureus 209Р.

4.4.1. Влияние рибосом Staphylococcus aureus 209Р на компоненты кислородзависимой системы биоцидности нейтрофилъных гранулоцитов.

4.4.2. Влияние рибосом Staphylococcus aureus 209Р на компоненты кислороднезависимой системы биоцидности нейтрофилъных гранулоцитов.

Глава 5. Иммуногенная активность 70S рибосом Escherichia coli MRE600.

5.1. Динамика популяционного состава лейкоцитов.

5.1.1. Динамика уровня лимфоцитов, участвующих в спонтанном и комплементарном розеткообразовании.

5.1.2. Динамика уровня нейтрофилъных гранулоцитов крови, участвующих в реакции спонтанного и комплементарного розеткообразования.

5.2. Влияние рибосом Escherichia coli MRE600 на образование антирибосомных антител.

5.3. Влияние рибосом Escherichia coli MRE600 на фагоцитарную активность нейтрофильных гранулоцитов

5.4. Антимикробный потенциал нейтрофильных гранулоцитов в условиях иммунизации рибосомами Escherichia coli MRE600.

5.4.1. Влияние рибосом Escherichia coli MRE600 на компонеты кислородзависимой системы биоцидности нейтрофильных гранулоцитов.

5.4.2. Влияние рибосом Staphylococcus aureus 209Р на комнен-ты кислороднезависимой системы биоцидности нейтрофильных гранулоцитов.

Глава 6. Различия в иммуногенной активности рибосом грамположительных и грамотрицательных бактерий.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Иммуногенные свойства бактериальных рибосом»

Актуальность темы. К середине XX века была окончательно выяснена роль рибосом в биосинтезе белка. Совершенствование молекулярно-биологических и иммунологических методов исследования позволило изучить строение рибосом и их функции. Среди свойств рибосом прокариотов и грибов особое место занимает феномен рибо-сомной протекции, который заключается в способности рибосом, выделенных из патогенных микроорганизмов и введенных в восприимчивый макроорганизм, защищать его от соответствующей гомологичной, а в некоторых случаях и гетерологичной инфекции. Изучение иммунопро-тективных свойств рибосом прокариотов за последние 35 лет оформилось в самостоятельное направление современной вакцинологии (Jle-венсон В.И., Хазанова В.В., 1991; Youmans A.S., Youmans G.P., 1965; Eisenstein Т.К. et al., 1976; Dussourd d'Hinterland L. et al., 1980; Gregory R.L., 1986; Nicolaeva L.V., Savel'ev E.P., 1991; Normier G. et al., 1992 и др.). Препараты на основе бактериальных рибосом в настоящее время вышли за рамки классических вакцин, широко применяются в качестве иммуномодуляторов и демонстрируют свою эффективность (Хаитов P.M. и др., 1994; 1995; Гордиенко С.М. и др., 1995 и др.). Поэтому разработка новых иммунотропных препаратов на основе бактериальных рибосом и изучение механизмов их действия является перспективным направлением современной вакцинологии и клинической иммунологии. Однако до настоящего времени остается спорным вопрос о природе феномена рибосомной протекции. Важным аспектом данной проблемы, существенно тормозящим расшифровку возможных механизмов имму-нопротективного действия рибосом прокариотов, являются методические подходы при получении рибосомного материала. Данная экспериментальная работа представляет собой попытку комплексного анализа иммуногенных свойств бактериальных рибосом с сохраненной структурной организацией (принцип интактности рибосом) (Крылов В.П.,1996; Орлов В.Г. и др., 1998).

Цель и задачи исследования, основные экспериментальные подходы

Целью данной работы являлось проведение комплексной оценки иммуногенных свойств интактных 70S рибосом бактерий в эксперименте на различных видах лабораторных животных.

Задачи исследования:

1. Получить в соответствии с принципом интактности фракции тотальных 70S рибосом стафилококка и кишечной палочки.

2. Охарактеризовать иммунный ответ различных лабораторных животных (мышей, морских свинок, кроликов) на однократное парентеральное введение тотальных 70S рибосом грамположительных и грамотрицательных бактерий в зависимости от присутствия полного адъюванта Фрейнда.

3. Сравнить иммуногенную активность низких и высоких доз тотальных 70S рибосом грамположительных и грамотрицательных бактерий при парентеральном введении различным видам животных.

4. Выявить различия в иммунном ответе лабораторных животных на парентеральное введение тотальных 70S рибосом грамположительных и грамотрицательных бактерий в зависимости от кратности и способа иммунизации.

5. Выявить различия в иммуногенных свойствах тотальных 70S рибосом грамположительных и грамотрицательных бактерий.

Основные экспериментальные подходы, применяемые для решения поставленных задач, заключались в:

• выделении рибосомных фракций из исследуемых бактерий: Staphylococcus aureus 209Р и Escherichia coli MRE600;

• получении спектрофотометрических, седиментационных и электро-форетических характеристик исследуемого рибосомного материала;

• изучении влияния однократного парентерального введения 70S рибосом S. aureus 209Р и Е. coli MRE600 без адъюванта и с полным адъювантом Фрейнда мышам, морским свинкам и кроликам на динамику популяционного состава лимфоцитов и нейтрофилов, синтез антирибосомных антител, фагоцитарную активность нейтрофилов и состояние их микробицидной системы;

• сравнительном изучении иммуногенной активности рибосом грам-положительного стафилококка и грамотрицательной кишечной палочки;

• исследование зависимости иммунного ответа от схемы иммунизации (одно-, двух-, трехкратное введение препарата) на мышах и морских свинках.

Новизна результатов

Впервые изучена зависимость иммуногенной активности тотальных 70S рибосом Staphylococcus aureus 209Р и Escherichia coli MRE600 от типа биологической модели (вида лабораторного животного), кратности введения рибосом и применения адъюванта. Предложены наиболее эффективные схемы иммунизации рибосомами стафилококка и кишечной палочки для экспериментального изучения влияния рибосом на иммунитет мышей и морских свинок.

Впервые проведено комплексное сравнение и обнаружены различия в иммуногенной активности рибосом грамположительного стафилококка и грамотрицательной кишечной палочки на мышах, морских свинках и кроликах.

Впервые изучено влияние рибосом S. aureus 209Р и Е. coli MRE600 in vivo на фагоцитарную активность нейтрофильных грануло-цитов и компоненты их кислородзависимой микробицидной системы. Выявлено выраженное стимулирующее действие препаратов на данные функции нейтрофильных гранулоцитов мышей. У морских свинок и кроликов введение препаратов вызывает менее выраженные и разнонаправленные изменения фагоцитарной и компонентов кислородзависимой биоцидной активности нейтрофилов.

Впервые изучено действие рибосомных препаратов на компоненты кислороднезависимой микробицидной системы нейтрофилов (интра-лейкоцитарный уровень щелочной фосфатазы и катионных белков), выявлено выраженное влияние препаратов на гранулоцитопоэз в красном костном мозге.

Основные положения, выносимые на защиту

- Выявленная способность тотальных 70S рибосом Staphylococcus aureus 209Р и Escherichia coli MRE600, выделенных в соответствии с принципом интактности, вызывать иммунный ответ у различных видов лабораторных животных позволяет рассматривать данные препараты как эффективные иммуногены, которые при введении их в низких дозах вызывают выраженное действие, в основном, на клеточную форму иммунитета.

- Обнаруженные отдаленные иммунотропные эффекты рибосом S. aureus 209Р и Е. coli MRE600 в отношении нейтрофильных гранулоцитов в системе in vivo позволяют считать эти препараты, оказывающими опосредованное воздействие на основные функции клеток гранулоци-тарного ряда. Изменения уровня катионных белков и щелочной фосфа-тазы в нейтрофилах свидетельствуют о действии препаратов на грану-лоцитопоэз в красном костном мозге.

- Выявленные различия в иммунологических эффектах при реализации разных схем иммунизации рибосомными фракциями позволяют рассматривать возможность создания схем не только для корректной специфической профилактики и лечения инфекций, но и неспецифической иммунотерапии.

Научно-практическое значение работы.

Динамика популяционного состава лейкоцитов и изменение функциональной активности нейтрофилъных гранулоцитов под влиянием тотальных 70S рибосом стафилококка и кишечной палочки дополняют представления о механизмах лежащих в основе иммунопротективной активности рибосом. Применение стандартизованных препаратов в одинаковых схемах иммунизации позволяет провести адекватное сравнение их иммуногенности и может рассматриваться, как важный методический подход, необходимый для дальнейшего изучения механизмов рибосомной протекции.

Полученные сведения о выраженной иммуногенной активности низких доз препаратов, могут позволить отказаться от применения высоких доз, и, следовательно, существенно снизить антигенную нагрузку на организм. Предложены наиболее эффективные схемы иммунизации низкими дозами рибосом.

Для воздействия на клеточную форму иммунного ответа и повышение функциональной активности нейтрофилъных гранулоцитов применение полного адъюванта Фрейнда (ПАФ) не обязательно. Результаты экспериментального исследования открывают перспективу для создания эффективных и корректных схем профилактики, иммунотерапии и иммунокоррекции рибосомными препаратами.

Внедрение результатов в практику

По материалам выполненной работы опубликовано 9 печатных работ. Основные положения диссертации докладывались на научно-практических конференциях молодых ученых и студентов Кубанской государственной медицинской академии (г. Краснодар, 1997; 1999); II международной конференции "Современная вакцинология" в г. Перми (1998); V краевой научно-практической конференции молодых ученых в г. Анапе (1999); II съезде иммунологов России в г. Сочи (1999).

Результаты исследования влияния тотальных 70S рибосом Staphylococcus aureus 209Р и Escherichia coli MRE600 на динамику по-пуляционного состава лейкоцитов, фагоцитарную активность и микро-бицидную систему нейтрофильных гранулоцитов внедрены в научную работу Северо-Кавказского научно-исследовательского института биотехнологии и химии "СКНИИбиотеххим"; центральной научно-исследовательской лаборатории Кубанской государственной медицинской академии.

Материалы диссертации используются в учебном процессе кафедры микробиологии, иммунологии и вирусологии Кубанской государственной медицинской академии и кафедры микробиологии и генетики Кубанского государственного университета.

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Сиюхова, Фатима Шумафовна

ВЫВОДЫ

1. Рибосомы Staphylococcus aureus 209Р и Escherichia coli MRE600, полученные в соответствии с принципом интактности, обладают выраженной иммуногенной активностью.

2. Сравнительный анализ влияния рибосом грамположительного стафилококка и грамотрицательной кишечной палочки на динамику по-пуляционного состава лимфоцитов и функции нейтрофильных гранулоцитов выявил более высокую иммуногенную активность рибосом стафилококка. Наиболее эффективной схемой иммунизации для рибосом Staphylococcus aureus 209Р было двукратное введение низких доз без ПАФ; для рибосом Escherichia coli MRE600 - трехкратное.

3. Применение низких протективных доз рибосом Staphylococcus aureus 209Р и Escherichia coli MRE600 обнаружило их высокую иммуногенность, что позволяет отказатся от использования высоких доз препарата и существенно снизить антигенную нагрузку на организм. Использование полного адъюванта Фрейнда существенно не приводит к существенному повышению иммуногенной активности рибосом Staphylococcus aureus 209Р и Escherichia coli MRE600.

4. Однократная иммунизация мышей низкими протективными дозами рибосом Staphylococcus aureus 209Р и Escherichia coli MRE600 сопровождается увеличением фагоцитарной активности нейтрофильных гранулоцитов периферической крови. Повышение киллинга в этих клетках связано со стимуляцией кислородзависимых механизмов мик-робицидности. Трехкратное введение препаратов, наряду с повышением фагоцитарной активности нейтрофильных гранулоцитов, стимулирует развитие клеточного иммунитета. Иммунизация рибосомами Staphylococcus aureus 209Р и Escherichia coli MRE600 морских свинок вызывает преимущественное развитие клеточного иммунитета. Однократное вве

207 дение рибосомных препаратов кроликам сопровождается достоверным повышением абсолютного количества спонтанно и комплементарно ро-зеткообразующих лейкоцитов, фагоцитарная активность нейтрофилъных гранулоцитов при этом существенно не изменяется.

5. У мышей, морских свинок и кроликов, иммунизированных рибосомами Staphylococcus aureus 209Р и Escherichia coli MRE600, сывороточные антирибосомные антитела не выявлены. Введение препаратов кроликам по сложной схеме (однократная вакцинация с полным адъю-вантом Фрейнда в лимфоузел с трехкратной внутривенной ревакцинацией без ПАФ) сопровождается появлением сывороточных антирибо-сомных антител, не дающих перекрестной реакции с гетерологичными рибосомами.

6. Иммунизация рибосомами Staphylococcus aureus 209Р и Escherichia coli MRE600 оказывает выраженное влияние на уровень содержания катионных белков и активность щелочной фосфатазы в нейтрофилъных гранулоцитах периферической крови иммунизированных животных, что свидетельствует о влиянии препаратов на гранулоцитопоез в красном костном мозге

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

ПО ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМУ МОДЕЛИРОВАНИЮ ИММУНОГЕННЫХ И ИМММУНОТРОПНЫХ ЭФФЕКТОВ, ВЫЗВАННЫХ БАКТЕРИАЛЬНЫМИ РИБОСОМАМИ

Для получения максимальных иммуногенных эффектов, при парентеральном применении, тотальных 70S рибосом Staphylococcus aureus 209Р и Escherichia coli MRE600 рекомендуем использовать низкие дозы препаратов: для мышей - 10"3 на животное; для морских свинок - 1 мкг на животное для кроликов - 200 мкг на животное. Введение высоких доз 100 мкг на животное (мышам и морским свинкам) и применение полного адъюванта Фрейнда не рационально.

Для получения максимальных иммуногенных эффектов при парентеральном применении соответствующих доз препаратов рекомендуем двукратное введение рибосом Staphylococcus aureus 209Р и трехкратное - рибосом Escherichia coli MRE600. Реализация данных схем иммунизации сопровождается наиболее выраженным стимулирующим эффектом по отношению к клеточной форме иммунного ответа всех изученных видов лабораторных животных, а у мышей - и функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов. Выраженная имму-ногенная активность препаратов наблюдается и после однократной иммунизации кроликов.

Применение низких доз тотальных 70S рибосом Staphylococcus aureus 209Р и Escherichia coli MRE600 с полным адъювантом Фрейнда и без него, появлением антирибосомных антител в сыворотке не сопро

209 вождается. Для получения сывороточных антител, выявляемых в реакции преципетации, необходимо применение более сложных схем и высоких доз, например по Субботиной (1979г) - однократное введение препаратов в подколенный лимфатический узел с ПАФ с последущей трехкратной внутривенной ревакцинацией.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проблема иммуногенной активности рибосом находится в неразрывной связи с методическими подходами к получению данных субклеточных фракций. Мы полагаем, что рибосомной следует считать только ту вакцину, в которой рибосомы находятся в состоянии интактности, то есть, имеют сохраненную структурную организацию. Это весьма важно в связи с тем, что достаточно большое количество сведений об иммуно-тропных эффектах бактериальных рибосом получены при анализе препаратов с вариабельной степенью чистоты и целостности. Полученные нами в соответствии с принципом интактности тотальные 70S рибосомы из Staphylococcus aureus 209Р и Escherichia coli MRE600 были подвергнуты комплексному изучению на предмет эффективной иммуногенной активности.

Основой работы явилось сравнительное изучение влияния одно-, двух-, и трехкратного введения рибосом мышам и морским свинкам в о низких дозах (10" и 1 мкг на животное соответственно) и однократного кроликам (200 мкг). Также нами исследовалось действие однократной иммунизации с ПАФ низкой и повышенной дозой препарата (мышей и морских свинок - 100 мкг на животное), на иммунную реактивность этих животных. Об иммуногенных свойствах препарата судили по изменению общего количества лейкоцитов, абсолютного уровня лимфоцитов и нейтрофильных гранулоцитов (НГ), повышению титра сывороточных антител, динамике популяционного состава лимфоцитов, НГ и показателей функциональной активности НГ.

Введение мышам низкой иммунопротективной дозы рибосом S. aureus 209Р сопровождалось длительно сохраняющимся повышением (регистрировалось на 5-е сутки после окончания иммунизации) общего количества лейкоцитов, абсолютного уровня лимфоцитов и НГ в периферической крови иммунизированных животных. Достоверное повышение данных показателей наблюдается только после трехкратного введения препарата, выраженное повышение абсолютного уровня НГ выявляется как после трехкратной, так и однократной иммунизации. Совместное применение рибосом S. aureus 209Р с ПАФ сопровождается более выраженным увеличением общего количества лейкоцитов и абсолютного уровня лимфоцитов по сравнению со значениями, полученными после однократной иммунизации без ПАФ (р<0,001). Применение повышенной дозы с ПАФ вызывает аналогичный эффект, а уровень данных значений сопоставим со значениями, зарегистрированными после трехкратной иммунизации без ПАФ. В исследовании выявлено, что рибосомы S. aureus 209Р обладают выраженным действием на костный мозг, вызывая "сдвиг влево".

Исследование динамики популяционного состава лимфоцитов и НГ обнаруживает значительное повышение количества лимфоцитов, экспрессирующих Е-рецепторов на поверхности лимфоцитов после двукратной, и в более выраженной степени трехкратной иммунизации (р<0,001). Уровень высокоавидных НГ, выявляемых в реакции ранних Е-РОН, достоверно выше контроля только после трехкратного введения препарата без ПАФ, абсолютный же уровень поздних Е-РОН (р<0,01) увеличивался как после однократного, так и трехкратного введения. Абсолютный уровень В-лимфоцитов изменяется незначительно и находится в пределах 2а-зоны контроля. Количество НГ, участвующих в реакции комплементарного розеткообразования, резко повышается после трехкратного введения препарата (р<0,001). Совместное введение препарата с ПАФ вызывает стимуляцию рецепторной функции лимфоцитов и НГ (р<0,01), повышение вводимой с ПАФ дозы не сопровождается значимыми изменениями по сравнению с показателями, полученными после введения низкой дозы с ПАФ.

Антирибосомные антитела в сыворотке иммунизированных животных не выявлены.

В периферической крови экспериментальных групп мышей, иммуЛ низированных 10" мкг рибосом стафилококка, наблюдается значительное повышение количества активно работающих НГ и их способности к киллингу и перевариванию бактерий (р<0,05). Стимуляция фагоцитарной активности коррелировала с выраженным повышением кислородза-висимых метаболических реакций НГ. В то же время уровень катион-ных белков изменялся незначительно, выраженной взаимосвязи с фагоцитарной активностью не наблюдалось. Иммунизация рибосомами стафилококка с ПАФ не оказывает выраженного влияния на фагоцитарную активность НГ периферической крови мышей. Введение рибосом грамположительных бактерий с ПАФ вызывает стимуляцию оксидазных процессов микробицидности НГ, но потенциал их особенно после введения 100 мкг с ПАФ снижен, активность КБ неотличима от контроля.

Иммуногенные свойства рибосом Е. coli MRE600 в исследованиях на мышах менее выражены в сравнении с иммуногенной активностью рибосом S. aureus 209Р. Так трехкратное введение рибосом кишечной палочки сопровождается выраженным повышением только уровня лимфоцитов в абсолютном содержании (р<0,001) в сравнении с фоновыми значениями. Однократная иммунизация препаратом с ПАФ обнаруживает аналогичное влиянию рибосом стафилококка на исследуемые показатели стимулирующее действие на общее количество лейкоцитов (р<0,001), абсолютный уровень лимфоцитов (р<0,001) и НГ (р<0,001). Введение повышенной дозы (100 мкг) с ПАФ вызывает более значимое увеличение абсолютного уровня НГ по сравнению с фоном и показателями, регистрируемыми после однократного введения рибосом Е. coli MRE600 в дозе 10"3 мкг с ПАФ (р<0,001) и без ПАФ (р<0,02). В периферической крови экспериментальных групп животных, иммунизированных препаратом с ПАФ, наблюдается появление незрелых форм НГ.

70S рибосомы Е. coli MRE600 оказывали более низкое стимулирующее влияние на уровень лимфоцитов и НГ, несущих Е-рецептор, в сравнении с рибосомами S. aureus 209Р. Абсолютный уровень активированных Т-лимфоцитов достоверно увеличивается только после трехкратной иммунизации (р<0,001).Количество НГ, участвующих в реакции спонтанного розеткообразования на 5-е сутки после реализации всех схем иммунизации без ПАФ, неотличимо от фоновых значений. Иммунизация рибосомами Е. coli MRE600 с ПАФ сопровождается значительным повышением уровня Т- и В-лимфоцитов по сравнению с фоном (р<0,001). Рецепторная функция НГ в этой группе животных также повышается (р<0,001), применение повышенной дозы (100 мкг) с ПАФ вызывает достоверно более выраженную стимуляцию НГ.

Рибосомы Е. coli MRE600 оказывают выраженное стимулирующее пролонгированное влияние на фагоцитарную активность НГ. Однако показатели поглотительной функции НГ после однократного и двукратного введения препарата достоверно ниже уровня значений в группах, иммунизированных рибосомами S. aureus 209Р.

Анализ влияния препарата на биоцидные системы НГ выявил выраженную корреляцию изменений кислородзависимого метаболизма НГ и их фагоцитарной активности, прежде всего переваривающей активности НГ у мышей, иммунизированных 10"3 мкг рибосом кишечной палочки независимо от присутствия адъюванта (р<0,05). Введение 100 мкг препарата с ПАФ вызывает резкое увеличение ФПК и СЦИ по сравнению с остальными группами. Однако потенциал этих клеток значительно снижен (КМ - 0,209 ± 0,021). Активность катионных белков в НГ выражено возрастала после трехкратного введения препарата и достоверно снижалась после введения 100 мкг рибосом с ПАФ.

Проведенное на мышах исследование иммуногенной активности рибосом грамположительного стафилококка и грамотрицательной кишечной палочки позволяет сделать ряд обобщений:

1. Рибосомы S. aureus 209Р и Е. coli MRE600 обладают выраженной иммуногенной активностью. Антигенный репертуар рибосом возможно представлен тимусзависимыми антигенами.

2. Иммуногенная активность рибосом стафилококка и кишечной палочки не связана с образованием антирибосомных антител.

3. Введение низких доз рибосом стафилококка сопровождается более выраженной иммуногенностью по сравнению с рибосомами кишечной палочки.

4. Иммуногенная активность рибосом прямо пропорциональна кратности иммунизации. Двукратной иммунизации рибосомами стафилококка достаточно для достоверного повышения всех изучаемых показателей.

5. Применение препаратов с адъювантом (однократное введение) обнаружило ряд особенностей:

1) наблюдался достоверный рост абсолютного уровня В-лимфоцитов.

2) отсутствовала стимуляция фагоцитарной активности НГ. В то же время введение рибосом Е. coli MRE600 с ПАФ выражено стимулировала только переваривающую способность НГ.

3) введение высоких доз рибосом снимало различия в иммуноген-ных эффектах грамположительного стафилококка и грамотрицательной кишечной палочки.

4) введение 100 мкг препаратов с ПАФ оказывало аналогичное трехкратной иммунизации без ПАФ стимулирующее действие на количество лимфоцитов и НГ, участвующих в реакцях спонтанного и комплементарного розеткообразования.

6. Иммунизация низкой дозой мышей не сопровождается выраженным повышением уровня В-лимфоцитов в крови, в сыворотке специфических антител к антигенам рибосом не обнаружено, в то же время выражено увеличивается уровень Е-РОК к которым, как известно, относятся Т-лимфоциты и NK-клетки, что позволяет предположить, что доминирующей формой является клеточная. Большое значение, если не основное, в обеспечении иммунопротекции у данных животных играет повышение фагоцитарной активности НГ, а основным биоцидным фактором, вызывающим киллинг микробов в НГ - "окислительный взрыв". Иммунизация препаратами с ПАФ, по-видимому, более выражено активирует гуморальную форму иммунного ответа, но выраженного повышения титра преципитинов и опсонинов не наблюдается.

Исследование иммуногенной активности рибосом S. aureus 209Р и Е. coli MRE600, проведенное на морских свинках, выявило выраженное влияние препаратов на формирование специфической резистентности у иммунизированных животных. Наиболее выраженное и стабильное (регистрировалось на 7-е, 14-е,21-е сутки) повышение общего количества лейкоцитов, абсолютного уровня лимфоцитов и НГ наблюдается после двукратного введения рибосом стафилококка, затем трехкратного подкожного. Ведение препарата с ПАФ существенных изменений данных показателей не вызывает. Исключение составляют значения абсолютного уровня НГ, зарегистрированные после введения 100 мкг препарата с ПАФ, которые значительно выше фона (р<0,02)."Сдвиг влево" наблюдается после двукратной, трехкратной иммунизации и введении препарата с ПАФ.

Уровень высокоавидных (активных) Т-лимфоцитов и NK-клеток в периферической крови иммунизированных рибосомами стафилококка морских свинок резко повышается. Максимальные значения регистрируются на 14-е сутки, однако, уже на 7-е сутки количество лимфоцитов, участвующих в спонтанном розеткообразовании, после реализации всех схем иммунизации достоверно выше фоновых значений. Достоверное и длительно сохраняющееся повышение уровня Е-РОК (регистрировалось и на 21-е сутки) отмечалось после двух- и трехкратной подкожной иммунизации. Повышение дозы в 100 раз и использование адъюванта Не усиливало эффекта, достигнутого с помощью низких доз препарата без ПАФ.

Изучение влияния рибосом S. aureus 209Р на экспрессию Е-рецептора на поверхности НГ, также выявило выраженное стимулирующее влияние препарата. Количество НГ, участвующих в реакции раннего розеткообразования было максимальным на 14-е сутки после окончания иммунизации. Абсолютный уровень поздних Е-РОН значительно выше уровня ранних Е-РОН, максимальные результаты регистрируются на 7-е сутки. Наиболее выраженное стимулирующее влияние оказывает двукратное введение препарата, затем трехкратное подкожное. Уровень данных значений практически не зависел от способа иммунизации (р>0,05). Совместное применение 1 мкг рибосом S. aureus 209Р с ПАФ не вызывает выраженных изменений по сравнению со значениями, полученными после иммунизации препаратом без ПАФ. Введение 100 мкг препарата с ПАФ сопровождается значительной стимуляцией уровня ранних и поздних Е-РОН относительно фоновых значений (р<0,05) и результатов, регистрируемых после однократного введения 1 мкг препарата с ПАФ и без ПАФ (р<0,05).

Исследование влияния рибосом S. aureus 209Р на количество СЗ-рецептор-несущих лейкоцитов выявило отсутствие достоверных изменений абсолютного количества лимфоцитов, участвующих в реакции комплементарного розеткообразования во всех экспериментальных группах. Количество НГ с данным рецептором на поверхности значительно повышается на 7-е сутки после двух-, трех, и трехкратной подкожной иммунизации, а на 14-е и 21-е сутки только после двукратного введения (р<0,01, р<0,05 соответственно). На 7-е сутки после однократного введения 1 мкг и 100 мкг рибосом S. aureus 209Р с ПАФ, количество В-лимфоцитов практически не изменяется, а уровень ЕАС-РОН достоверно повышается после введения 100 мкг препарата с ПАФ.

Реализация всех схем иммунизации морских свинок, не сопровождалась существенным изменением пула сывороточных антирибосомных антител, реакция преципитации была отрицательной.

Анализ влияния рибосом S. aureus 209Р на фагоцитарную активность НГ морских свинок существенных изменений данной функции НГ под действием препарата не выявил, лишь отдельные значения достоверно отличались от фона. В частности, показатели поглотительной способности значительно повышаются на 14-е сутки после однократной иммунизации (ФИ - р<0,02) и 21-е сутки (ФЧ - р<0,05) в сравнении с фоном. Снижение функций захвата у НГ наблюдается на 7-е сутки после трехкратного подкожного введения препарата (ФИ - р<0,02) и на 21-е сутки после трехкратного введения в подушечку лапки (ФЧ -р<0,05). На 7-е сутки после однократной иммунизации 1мкг рибосом S. aureus 209Р с ПАФ выражено снижается ФИ и % П. (р<0,05), введение 100 мкг препарата с ПАФ сопровождается снижением ФЧ (р<0,02).

Исследование влияния рибосом S. aureus 209Р на показатели ки-слородзависимой микробицидности НГ морских свинок выявило незначительное воздействие препарата. При этом наблюдается выраженная взаимосвязь между характером изменения показателей поглотительной функции (% ФАН, ФИ, ФЧ) и значениями СЦИ у НГ в NBT-спонтанном. Наиболее эффективным, при действии на данную функцию НГ, является однократное введение препарата без ПАФ.

Изучение уровня КБ и ЩФ в НГ морских свинок обнаруживает выраженное влияние рибосом S. aureus 209Р на синтез этих ферментов. Максимальные показатели содержания КБ и ЩФ в НГ регистрируются на 14-е и 21-е сутки. Наиболее выраженное повышение уровня КБ выявляются после трехкратного подкожного введения, ЩФ после двукратного. Исследование действия иммунизации препаратом с ПАФ, выявило не целесообразность применения адъюванта. Изменения уровня компонентов системы НГ, под действием препарата, коррелировали с фагоцитарной активностью этих клеток: на 7-е сутки изменение поглотительной функции НГ коррелирует с изменением активности ЩФ, на 14-е сутки с уровнем КБ и ЩФ, на 21-е сутки выраженной взаимосвязи не выявлено.

Таким образом, рибосомы S. aureus 209Р, при введении их в дозе 1 мкг с ПАФ и без ПАФ и 100 мкг с ПАФ, обладают слабо выраженным влиянием на пролонгированное (7-, 14-,21-е сутки) изменение фагоцитарной активности НГ. В связи с тем, что максимальные значения показателей фагоцитоза регистрируются на 14-е сутки, на фоне существенного повышения абсолютного количества высокоавидных (активированных) лимфоцитов, участвующих в спонтанном розеткообразовании можно предположить, что именно Т-лимфоциты, выделяя лимфокины, обеспечивают опосредованное стимулирующее действие препарата на фагоцитарную функцию НГ, причем повышение компонентов кисло-роднезависмой системы НГ свидетельствует о влиянии на костный мозг.

Исследование влияния рибосом Е. coli MRE600 на иммунную реактивность морских свинок обнаружило ряд отличий от иммуногенной активности рибосом S. aureus 209Р. На 7-е сутки после двух- и трехкратной иммунизации и на 14-е сутки после одно- и трехкратного введения общее количество лейкоцитов и абсолютный уровень лимфоцитов значительно ниже в группах иммунизированных рибосомами Е. coli MRE600. На 21-е сутки, данные показатели в группе животных, подвергшихся иммунизации рибосомами грамотрицательных бактерий значительно возрастают и становятся сопоставимыми с уровнем значений в группе морских свинок, иммунизированных рибосомами грамположительных бактерий. Распределение значений количества НГ в зависимости от кратности иммунизации не зависело от источника рибосом. Введение рибосом Е. coli MRE600 с ПАФ сопровождалось повышением только уровня НГ при иммунизации 100 мкг препарата. "Сдвиг влево" регистрировался после двух и трехкратной иммунизации и введения 100 мкг рибосом Е. coli MRE600 с ПАФ.

Введение рибосом Е. coli MRE600 оказывает выраженное стимулирующее влияние на абсолютный уровень высокоавидных Е-РОК-лимфоцитов (на 7-, 14-е сутки в меньшей степени на 21-е) и ЕАС-РОК-лимфоцитов (на 7-е сутки). Наиболее значительное влияние оказывали двух-, трех- и трехкратная подкожная иммунизация. На 7-е сутки уровень Е-РОК после однократного и трехкратного введения, на 14-е сутки после двукратного введения, на 21-е сутки после трехкратного введения достоверно выше фоновых, а также значений, полученных в соответствующих группах животных, иммунизированных рибосомами S. aureus 209Р. Введение рибосом грамотрицательных бактерий в дозе 1 мкг и 100 мкг с ПАФ выраженных изменений уровня Е-РОК и ЕАС-РОК не вызывает.

Наиболее выраженное достоверное длительно сохраняющееся повышение рецепторной функции НГ регистрируется после трехкратного подкожного введения, затем двукратного введения в подушечку лапки. Однократное введение препарата с ПАФ значительно повышает уровень ранних и поздних Е-РОН. Абсолютное количество ЕАС-РОН достоверно выше фона только в случае введения 100 мкг препарата с ПАФ.

Иммунизация рибосомами Е. coli MRE600 вызывает слабо выраженные изменения фагоцитарной функции НГ. Наиболее стабильное длительно сохраняющиеся изменение регистрируется после трехкратной иммунизации и выражается в достоверном снижении показателей поглотительной активности НГ. Динамика активности микробицидной системы НГ изменяется более выражено. При этом кислородзависимые механизмы и уровень содержания ЩФ в НГ на 7-е, 14-е сутки коррелируют с поглотительной активностью НГ, на 21-е сутки эта взаимосвязь менее выражена. Введение рибосом Е. coli MRE600 с ПАФ выявило взаимосвязь между достоверным снижением переваривающей способности НГ и резким снижением содержания КБ в НГ.

Исследование иммуногенной активности рибосом S. aureus 209Р и Е. coli MRE600, проведенное на морских свинках позволяет сделать ряд обобщений.

1. Рибосомы данных бактерий обладают выраженной иммуноген-ностью.

2. Антигены рибосом S. aureus 209Р и Е. coli MRE600, по-видимому, являются тимусзависимыми и обладают миеломиметической активностью.

3. Доминирующей формой специфической резистентности является, по-видимому, клеточная, так как с одной стороны антирибосомных антител в сыворотке иммунизированных животных нами не обнаружено, с другой - динамика высокоавидных Т-лимфоцитов и NK-клеток обнаруживает более выраженное повышение под действием препарата, чем изменения уровня В-лимфоцитов.

4. Наиболее выраженное стимулирующее влияние на количество активированных Т-лимфоцитов оказывает двукратное введение рибосом S. aureus 209Р, затем однократное введение. Уровень лимфоцитов, участвующих в комплементарном розеткообразовании в крови этих животных остается практически неизменным. Аналогичное действие оказывает двух и трехкратная подкожная иммунизация рибосомами Е. coli MRE600, но в этих экспериментальных группах на 7-е и 14-е сутки регистрируются достоверная стимуляция абсолютного уровня высоко-авидных В-лимфоцитов.

5. Применение адъюванта существенных преимуществ в действии на абсолютный уровень активированных лимфоцитов не выявило.

6. Наиболее выраженное стимулирующее влияние на рецепторную функцию НГ оказывает двукратное введение рибосом S. aureus 209Р и трехкратное подкожное введение рибосом Е. coli MRE600. Применение ПАФ значительно повышает рецепторную активность НГ в сравнении с влиянием однократной иммунизации препаратами без ПАФ.

7. Фагоцитарная функция НГ иммунизированных морских свинок изменяется незначительно и в основном выражается в изменении поглотительной функции НГ, при этом большинство значений достоверно ниже фоновых.

8. Динамика показателей кислородзависимой системы НГ соответствует изменениям фагоцитарной активности НГ. Наиболее эффективное влияние на данную функцию НГ оказывает однократное введение препаратов.

9. Исследование иммуногенной активности рибосом грамположи-тельных и грамотрицательных бактерий выявило выраженное прямое или опосредованное действие препаратов на костномозговые предшественники НГ на стадиях гранулогенеза (промиелоцита и миелоцита).

Изучение иммуногенной активности рибосом грамположительных и грамотрицательных бактерий, проведенное на кроликах, выявило выраженное стимулирующее влияние на клеточную и гуморальную формы иммунного ответа. Введение препаратов независимо от присутствия адъюванта сопровождалось достоверным повышением общего количества лейкоцитов в крови всех иммунизированных животных. Абсолютное количество лимфоцитов значительно увеличивается только после введения препаратов с ПАФ. Уровень НГ выражено возрастает лишь при иммунизации рибосомами Е. coli MRE600 (р<0,05) в сравнении с фоном. Во всех экспериментальных группах наблюдался "сдвиг влево".

Рибосомы S. aureus 209Р и Е. coli MRE600 вызывают достоверное повышение абсолютного уровня активных спонтанно и комплементарно розеткообразующих лимфоцитов. Иммунизация рибосомами Е. coli MRE600 с ПАФ вызывает значительное повышение уровня ЕАС-РОК, количество же Е-РОК и количество Е-РОК и ЕАС-РОК в группах, иммунизированных рибосомами S. aureus 209Р с ПАФ, не отличаются от таковых в группе иммунизированных без ПАФ.

Анализ влияния рибосом этих грамположительных и грамотрицательных бактерий на функции НГ выявил выраженное стимулирующее влияние на рецепторную активность данной популяции клеток кроликов, при этом поглотительная и переваривающая функция фагоцитов оставалась неизменной или достоверно снижалась (% ФАН после иммунизации рибосомами S. aureus 209Р). Показатели кислородзависимой микробицидной системы после однократного введения препарата без ПАФ достоверно повышаются. Содержание КБ в НГ достоверно увеличивается только в группе иммунизированных препаратами с ПАФ.

В сыворотках иммунизированных кроликов антирибосомных антител не обнаружено. Однако в многочисленных исследованиях имуно-генных свойств рибосом других грамотрицательных бактерии, относящихся к семейству Enterobacteriaceae, авторы отмечали развитие гуморальной формы ответа, сопровождающегося выраженным повышением сывороточных и секреторных антител. В связи с этим, а так же учитывая, что абсолютный уровень В-лимфоцитов достоверно повышался и в наших экспериментальных группах, а использованная нами для выявления антител реакция преципитации не является высокочувствительной, мы применили более сложную схему иммунизации по Ю.Л. Субботиной с соавторами (1979). Реакция преципитации с сыворотками этих животных была положительной в титрах 1:32. При этом сыворотки реагировали только с гомологичными рибосомами.

В исследованиях, проведенных на кроликах, рибосомы стафилококка и кишечной палочки проявляли одинаковую иммуногенность. Характер количественных изменений лимфоцитов, участвующих в спонтанном розеткообразовании, позволяет предположить, что антигенный репертуар рибосом в основном представлен тимусзависимыми антигенами. На фоне стимулирующего действия препаратов на уровень Е-РОК, наблюдается выраженное повышение уровня ЕАС-РОК.

Таким образом, исследования иммуногенных свойств рибосом S. aureus 209Р и Е. coli MRE600, проведенные на трех видах лабораторных животных позволяет сделать ряд обобщений:

1. Экспериментальные рибосомные вакцины, полученные в соответствии с принципом интактности и использованные в нашей работе, обладают выраженной иммуногенной активностью. На основе стимулирующего влияния препарата на уровень Е-РОК лимфоцитов, к которым относятся и Т-лимфоциты, а также многочисленных литературных данных можно предположить, что антигенный репертуар рибосом, отвечающих за иммуногенность, в основном представлен тимусзависимыми антигенами.

3. Сравнительный анализ иммуногенности рибосом грамположи-тельного стафилококка и грамотрицательной кишечной палочки показал более высокую активность рибосом стафилококка. Рибосомы S. aureus 209Р оказывают максимальный эффект при двукратном, а Е. coli MRE600 - при трехкратном введении препарата.

4. У мышей, иммунизированных низкими дозами препарата, основное значение в формирующейся иммунопротекции, по-видимому, принадлежит фагоцитозу. У морских свинок доминирует клеточная форма иммунитета. У кроликов и животных, иммунизированных препаратом с адъювантом, наряду с клеточным иммунным ответом, увеличивается количество В-лимфоцитов.

5. После реализации всех схем иммунизации у мышей и морских свинок антирибосомные антитела в сыворотках не обнаружены. Иммунизация кроликов по сложной схеме с ПАФ приводит к появлению сывороточных антирибосомных антител, не дающих перекрестной реакции с гетерологичными рибосомами.

6. Основное значение в повышении бактерицидных свойств НГ играет кислородзависимая система биоцидности НГ.

7. Рибосомы S. aureus 209Р и Е. coli MRE600 (в экспериментах на морских свинках и кроликах) стимулируют гранулогенез в костномозговых предшественниках НГ на стадии миелоцита, а, возможно, и про-миелоцита.

Анализ полученных результатов позволяет сделать вывод о том, что рибосомы S. aureus 209Р и Е. coli MRE600 являются высокоиммуно-генными препаратами и могут рассматриваться в качестве основы для вакцин. Полученные в нашей работе данные открывают широкую перспективу для дальнейших исследований возможности применения препаратов бактериальных рибосом в качестве иммунокорректоров. В тоже

205 время обнаруженная депрессия фагоцитарной активности при реализации ряда схем иммунизации морских свинок и кроликов требует дополнительных исследований. В связи с этим возникает вопрос о целесообразности длительного применения рибосомных вакцин с терапевтическими целями. Исследование показало, что для активации большинства иммунологических показателей применение адъюванта нерационально. Использование низких доз препарата высокоэффективно, что позволяет отказаться от высоких доз, а это, в свою очередь ^существенно снижает антигенную нагрузку на организм и удешевляет вакцинацию.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Сиюхова, Фатима Шумафовна, 2000 год

1.1. Влияние рибосом Escherichia coli MRE600 на кислородзави-симые системы биоцидности нейтрофильных гранулоцитов

2. Авдеева З.И., Евсеев В.А. Иммунобиологические свойства цитоплазматической фракции стрептококка группы А. 1. Повышенная чувствительность немедленного типа к цитоплазме стрептококка // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.-1972.- №6.- С.79-75.

3. Алексеева О.А., Волкова А.П. Изучение фагоцитарной реакции нейтрофилов крови в токсикологических экспериментах. // Гигиена и санитария.- 1966. №8. - С.70-74.

4. Альберте Б., Брей Д., Льюис Дж., Рэфф М., Роберте К., Уотсон Дж. Молекулярная биология клетки,- М.: Мир.- 1994 Т. 1.-515с.

5. Ашмарин И.П., Ждан-Пушкина С.М., Кокряков В.И., Самедов А.Ш., Антонова С.Н. Антибактериальные и антивирусные функции основных белков клетки и перспективы практического их использования. // Извест. Академ. Наук СССР., серия биол.-1972.-№4.- С 502-508.

6. Ашмарин И.П., Кокряков В.Н., Пигаревский В.Е. Катионные белки лизосом лейкоцитов, деградация и возможности загрязнения гистонами при выделении. // Вопр. мед. химии.-1973.- №4.-С.381-386.

7. Бакулин И.Н., Сергеева Т.И. Получение рибосомальной фракции Clostridium perfrindens типа "А" и оценка ее протективной активности. //Журн.микробиол.,эпидемиол. и иммунобиол.- 1990.-№4,- С. 80-83.

8. Барсуков B.C. Феномен тахифилаксии в патогенезе экспериментального инфекционного процесса //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.-1992.- №5-6.- С. 17-21.

9. Белкин З.П., Левенсон В.И., Егорова Т.П. Действие рибосомальных препаратов на неспецифическую резистентность к бактериальной инфекции и раннюю толерантность к эндотоксическому шоку //Журн.микробиол.,эпидемиол. и иммунобиол.-1991.- №4.- С.47-50.

10. Бережная Н.М., Кшевецкая С.М., Слинчак С.М., Безверхий В.Д. Функциональные и гистохимические параметры оценки состояния нейтрофилов больных злокачественными новообразованиями.// Эксперим. онкология.- 1984.- Т4, №6.- С.49-52.

11. Бережная Н.М. Нейтрофилы и иммунологический гомеостаз.-Киев: Науков. Думка.-1988.-189с.

12. Бережная Н.М., Пинчук В.Г. Возможности иммунотерапии злокачественного роста. // Биохимия человека и животных. Киев: Наук. Думка, 1987.-Вып. 10. - С49-52.

13. Болотников И.А. Словарь иммунологических терминов. М.: Росагропромиздат.-1991.- 125с.

14. Введенская О.И., Станиславский Е.С., Ермольева З.В. Иммунохимический анализ цитоплазматической фракции холероподобного вибриона.//Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1975.- №1.- С.8-13.

15. Венглинская Е.А. Нейтрофильные гранулоциты и естественный иммунитет при аллергическом воспалении. // Аллергол. и клин, иммунология,- 1994.-№1.-С.28-36.

16. Виксман М.Е. Маянский А.Н. Применение реакции нитросинего тетразолия для оценки функционального состояния нейтрофилов человека. // Казанский мед. журнал.-1977.- №5.- С.99-100.

17. Воробьев Е.И., Петров Р.В., Покровский В.И., Михайленко А.А., Городицкий Б.В. Программа иммунологического обследования всистеме массовых медицинских осмотров населения. // Иммунология.- 1985.- № 5 .-С.5-7.

18. Гаврилов А.Ф., Грачева Н.М., Федосова В.Г., Рухадзе Э.З., Левенсон В.И. Рибосомальная дизентерийная вакцина. Изучение реактоген-ности и антигенной активности на здоровых добровольцах. //Журн.микробиол.,эпидемиол. и иммунобиол. 1985.-№9.- С.12-15.

19. Гистология (введение в патологию). Учебник. / Под ред. Улумбекова Э.Г., Челышева Ю.А.- М.: Гэотар.- 1997.- 947 с.

20. Гордиенко С.М., Ласица О.И., Мишарина Ж.А., Федорчук А.Г. Коррекция иммунной системы с помощью иммуностимулятора рибомунила у больных с рецидивирующими инфекциями респираторного тракта. // Терапевтический архив.- 1995.- т.67.- №6.-С.32-38.

21. Гордиенко С.М., Ласица О.И., Федорчук А.Г. Лечение и профилактика респираторных инфекций у иммунодефицитных больных с помощью рибомунила. // Клиническая фармакология и терапия.- 1995.- №4.- С.88-92.

22. Григорович Ю.А. Фосфодиэстераза циклических нуклеотидов. // Успехи биол. химии.- М. -1976. -Т.17.- С.102-126.

23. Гущин И.С., Васильева Е.В., Матвеева Г.П. ЕАС-розеткообразование с эритроцитами фиксированными глютаральдегидом. // Иммунология.- 1981. №5. - С. 85.

24. Джикидзе Э.К., Стасилевич З.К., Саламатова С.А. Стимуляция секреторной IgA-системы обезьян при парентеральной иммунизации рибосомальной дизентерийной вакциной Зонне. //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1988,- №9.- С.66-70.

25. Дзадзиева М.Ф., Быстрова А.Н., Кузнецова Т.А., Сергиенко А.К. Протективные свойства мембранно-рибосомальной фракции возбудителя псевдотуберкулеза // Современные аспекты изучения иммунологической безвредности и эффективности вакцин.-М.: 1988.-С.189-195.

26. Блинов Н.П. Химическая микробиология: Учеб.для студентов химико-технол., технол., фармац. и др.ин-тов, аспирантов и практ. работников. М.:Высшая шк.- 1989.- 448с.

27. Ефимова М.Г. Физико-химические и иммунобиологические свойства рибосомных препаратов Clostridium perfringens типа А. // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1998.- №2.- С.46-49.

28. Иммунологические методы / Под ред. Г.Фримеля.- Пер.с нем.А.П.Тарасова.-М.: Медицина,- 1987.- 472с.

29. Исследование системы крови в клинической практике. / Под ред. Козинца Г.И., Макарова В.А.- М.: Триада-Х.- 1997.- 480с.

30. Каладский Ю.М., Агеева О.Г., Васильев В.Д. Фагоциты переферической крови человека как адекватная тест-система для исследования в области фармакологии и иммунологии. Тез. докл.1 Съезда иммунологов России.-Новосибирск.-1992.-С.198.

31. Каральник Б.В., Лещинская Л.Ц. Приготовление стабильного эритроцитарного реагента для выявления Е-розеткобразующих клеток человека. // Иммунология.- 1981.- №6.- С.79-82.

32. Ковальчук JI.В., Чередеев А.Н. Концептуальные проблемы в клинической иммунологии. Тез. докл. Первого Всес. съезда иммунологов.- Сочи.- 1989.- Т.2.- С.219.

33. Кокряков В.Н. Катионные белки ядра и лизосом нейтрофилов кролика. Автореф. дисс. .канд. биол. наук. Л., 1973.

34. Кокряков В.Н., Толыбеков А.С., Ашмарин И.П., Пигаревский В.Е. О влиянии in vitro катионных белков лейкоцитов на активность возбудителя менингопневмонии. // Журн. микробиол., эпидемиол.и иммунобиол.-1977.- №6.-С.94-96.

35. Коротяев А.И., Лищенко Н.Н. Молекулярная биология и медицина. М.: Медицина.- 1987.- 288с

36. Коровина Н.А.,Чебуркин А.В., Заплатников А.Л., ЗахароваН.И. Иммунокоррегирующая терапия часто и длительно болеющих детей : Руководство для врачей.- М.: Медицина.- 1998.-44с.

37. Крылов В.П., Лищенко Н.Н., Орлов В.Г. Рибосомы как иммуногенный компонент стафилококковой вакцины (аутовакцины) // Актуальные эколого-гигиенические проблемы Северного Кавказа.-Краснодар.- 1995.-С.136-137.

38. Крылов В.П. Сравнение иммунопротективных свойств различных антигенных комплексов золотистого стафилококка. //Материалы международной конференции студентов и молодых ученых по актуальным вопросам медицины,-Бишкек.- 1994.-С.70-71.

39. Крылов В.П. Анализ зависимости иммунопротективного эффекта от дозы рибосом клебсиеллы Фридлендера. // Материалы 55-й науч.студ.конф. с участием молодых ученых.- Краснодар.-1994,-С.84-85.

40. Крылов В.П. Иммунопротективные свойства бактериальных рибосом и их субъединиц: Дис. . кандид. мед. наук. Краснодар,-1996.-183с.

41. Кузьмина JI.A., Козлова Н.Н. Экспериментальное изучение гуморальных факторов иммунитета при иммунизации бесклеточной стафилококковой вакциной. // Журн.микробиол.,эпидемиол. и иммунобиол.- 1995.- №6.- С44-45.

42. Кузнецова Т.А., Быстрова А.Н., Дзадзиева М.Ф. Неспецифические изменения в иммунной системе при введении мембрано-рибосомальной фракции возбудителя псевдотуберкулеза. //Журн.микробиол.,эпидемиол. и иммунобиол.- 1991.- №1.- С.43-46.

43. Лакин Г.Ф. Биометрия: Учеб.пособие для биол.спец. вузов.- 4-е изд., перераб. и доп. -М.: Высш.шк., 1990.-352с.:ил.

44. Левенсон В.И., Хазанова В.В. Рибосомальные вакцины в стоматологии.- // Стоматология.- 1991.- №3.- С.83-86.

45. Левенсон.В.И., Белкин З.П., Егорова Т.П. Протективные свойства белка эндотоксина // Журн.микробиол.,эпидемиол. и иммунобиол.-1991.- №8.- С.5-9.

46. Левенсон В.И., Рухадзе Э.З., Егорова Т.П., Белкин З.П., Федосова В.Г. Протективный фактор рибосомальной шигеллезной вакцины. //Журн.микробиол.,эпидемиол. и иммунобиол. 1988.- №7,- С.50-54.

47. Левенсон В.И., Рухадзе Э.З., Белкин З.П., Эссаулова М.Э. Специфичность протективного действия рибосомальной шигеллезной вакцины и отсутствие активности у рибосом из R-мутантов. //Журн.микробиол.,эпидемиол. и иммунобиол.- 1988.-№10.- С.55-59.

48. Левенсон В.И., Субботина Ю.Л., Гофман И.Л., Яровая Л.М. Рибосомальная дизентерийная вакцина. Сообщение 1. Методы получения, физические и химические свойства. //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1978.- №7.- С.60-65.

49. Левенсон В.И., Субботина Ю.Л. Рибосомальная дизентерийная вакцина. Сообщение II. Биологические испытания в опытах активной защиты морских свинок и мышей //Журн.микробиол.,эпидемиол. и иммунобиол.- 1978.- №7.- С.81-86.

50. Логинский В.Е., Короткий В.В. Тест восстановления нитросинего тетразолия у здоровых людей и больных острым лейкозом. // Лаб. дело.-1978.- №1.- С. 3-6.

51. Лойд 3., Госсрау Р., Шиблер Т. Гистохимия ферментов. Лабораторные методы. М.: Мир.-1982.-272с.

52. Любинская М.М., Рухадзе Е.З., Чернохвостова Е.В., Левенсон В.И. Местный иммунитет при парентеральной иммунизации морских свинок рибосомальной дизентерийной вакциной. //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. -1985,- №7.- С.55-59.

53. Лямперт И.М. Некоторые новые подходы и перспективы создания эффективных и безвредных вакцин в будущем. //Иммунология.-1983.-№3.-С.11-16.

54. Ляшенко В.А., Воробьев А.А. Молекулярные основы иммуногенности антигенов. М., Медицина, -1982.- 272с.

55. Мазинг Ю.А. Нейтрофильные гранулоциты и система защиты организма. // Вопр. мед. химии.-1990.- №6.- С.8-11.

56. Мазинг Ю.А. Роль нейтрофильных гранулоцитов в поддержании иммунного гомеостаза. //Клиническая морфология нейтрофильных гранулоцитов.- Л.-1988.- С.102-137.

57. Маянский А.Н., Галиуллин А.Н. Реактивность нейтрофила.-Казань : Издат. Казанский университет-1984.-158с.

58. Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге.- Новосибирск : Наука.-1983.-256с.

59. Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге.- Новосибирск : Наука. Сиб. отделение,-1989.-344с.

60. Маянский А.Н. Патогенетические аспекты нейтрофилзависимых реакций. // Патол. физиология и эксперим. терапия.- 1989.- №6.-С.66-72.

61. Маянский Д.Н., Щербаков В.И., Макарова О.П. Комплексная оценка функций фагоцитов при воспалительных заболеваниях. // Методические рекомендации . Новосибирск,-1985.-18с.

62. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. Учебник / Л.Б. Борисов, A.M. Смирнова, И.С. Фрейдлин и др.: Под ред. Л.Б. Борисова, A.M. Смирновой. М.: Медицина, 1994. -528 с.

63. Медуницын Н.В. Антиинфекционный иммунитет, вакцинация и антигены гистосовместимости: обзор. //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. -1990.- №8.-С.107-112.

64. Медуницын Н.В. Проблемы безопасности новых вакцин. //Современная вакцинология. Пермь. - 1998.-С. 138-139.

65. Медуницын Н.В. Участие 1а-антигенов в иммунных реакциях //Иммунология. 1982.- №4.- С.19.

66. Мерков A.M. Общие теории и методика санитарно-статистического исследования.- М.:Медицина. 1970. - 111 с.

67. Мерков A.M., Поляков Л.Е. Санитарная статистика. Л.: Медицина. - 1974. - 284 с.

68. Мерфи Ф. А.Условия разработки современных вакцин // Журн.микробиол.,эпидемиол. и иммунобиол.- 1990.-№11.-С.83-90.

69. Нагоев Б.С. Модификация цитохимического метода восстановления нитросинего тетразолия. //Лаб. дело.-1983.- №8.-С.7-11.

70. Нагоев Б.С. Цитохимия и цитофлюориметрия лизосомных катионных белков нейтрофильных гранулоцитов здоровых людей и больных вирусным гепатитом. //Лаб. дело.-1983.- №4.-С.18-20.

71. Нестерова И.В. Интралекоцитарная микробицидная система нейтрофильных гранулоцитов у здоровых детей и при гнойно-септических заболеваниях: Дисс. . канд. мед. наук.- М.-1990.-249с.

72. Нестерова И.В., Колесникова Н.В., Чудилова Г.А. Методы оценки функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов. //Методические рекомендации. Краснодар,- 1992.- 20с.

73. Нестерова И.В., Тараканов В.А., Слынько JI.JI. Тестирование состояния микробицидной системы нейтрофильных гранулоцитов в диагностике синдрома иммунного дефицита. Методические рекомендации. Краснодар,- 1992.- 25с.

74. Нестерова И.В., Тараканов В.А. Сравнительное изучение фагоцитарной активности и состояния микробицидной системы нейтрофилов у детей с гнойно-септическими заболеваниями. Тез. докл. Научн. конфер. КМИ по результатам НИР.- Краснодар.-1990.-С.183-184.

75. Нестерова И.В. Формирование интралейкоцитарной микробицидной системы нейтрофильных гранулоцитов у детей в возрастном аспекте. // Наследственные и приобретённые болезни у детей.-М.-1979.- С.40-46.

76. Николаева Т.Н., Белая Ю.А. Влияние рибосомальной вакцины Shigella sonnei на клеточные иммунные реакции. // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. -1992.- №7-8.- С.34-37.

77. Николаева Л.В., Восканян Н.А., Джикидзе Э.К., Савельев Е.П. Биохимическая характеристика и изучение антигенности рибосом стрептококка группы А в эксперименте на обезьянах //Иммунология.-1990.-№1.-С.39-41.

78. Николаева Л.В., Савельев Е.П., Петров Г.И. Выделение и изучение рибосом Streptococcus pyogenes. // Мол.биология,- 1983.- Т. 17. -вып.5. С. 1068-1076.

79. Новиков Д.К., Новикова В.И. Оценка иммунного статуса.М.Витебск : Медицина.- 1996.-281с.

80. Носова Т.В. Протективная активность рибосомальных фракций микроорганизмов (обзор). // Биохимия и биофизика микроорганизмов Межвуз. сб. Горький, -1978.-С.З-10.

81. Оветчин П.В., Цыганенко А .Я. Протективные свойства рибосомальной протейной вакцины. // Журн.микробиол.,эпидемиол. и иммунобиол. -1984.- №1.- С.19-23.

82. Орлов В.Г., Крылов В.П., Качанова О.А., Сиюхова Ф.Ш. Методические основы разработки рибосомных вакцин и изучение механизма их действия. // Современная вакцинология.- Пермь.-1998.-С.138-139.

83. Орлов В.Г., Лищенко Н.Н., Крылов В.П. Рибосомные вакцины -новая тенденция в современной вакцинологии. // Куб. науч. мед. вестн. 1995.- №5-6.- С.71-73.

84. Орлов В.Г. Мембраны и их роль в процессах компартментализации и ассоциации рибосом у бактерий. :Дис. .док. биол.наук. Краснодар,- 1992.- 331с.

85. Орлов В.Г., Наумов Г.Н. Белки, ассоциированные с 50S-рибосомными субъединицами Е. coli MRE600. //Мол. генетика, микробиол., вирусол. 1992. - №1.- С.3-7.

86. Орлов В.Г. Рибосомы и клеточный цикл кишечной палочки: Дис.канд.биол.наук.-Краснодар, -1971.-197с.

87. Остерман JI.А. Исследование биологических макромолекул электрофокусированием, иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами М.: Наука,- 1983.-304с.

88. Перельман Е.В., Темпер P.M., Табачник А.А. Иммунологическая активность фракций, осажденных сульфатом дигидрострептомицина из бесклеточных лизатов энтеробактерий. //Журн.микробиол.,эпидемиол. и иммунобиол. -1974.- №6.- С. 134135.

89. Петров Р.В. Иммунология: Учебник.-2-е изд.стереотип.- М.: Медицина.- 1987.- 416с.

90. Петров Р.В. Иммунология и иммуногенетика.- М.: Медицина.-1976.-200с.

91. Петров Р.В., Хаитов P.M. Искусственные антигены и вакцины. М., Медицина. -1988.

92. Петров Р.В., Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Иммунодиагностика иммунодефицитов. // Иммунология.-1997.- №4.- С. 47-52.

93. Петров Р.В., Хаитов P.M., Пинегин Б.В., Орадовская И.В., Еремина О.Ф., Саидов М.З. Оценка иммунного статуса человека при массовых обследованиях: Методология и методические рекомендации. -М.:Минздрав СССР.-1989. -39с.

94. Пигаревский В.Е. Зернистые лейкоциты и их свойства. М.: Медицина.-1978.-128с.

95. Пигаревский В.Е. Лизосомально катионный тест. // Пат. физиология.-1975.- №3.-С.86-88.

96. Питерман М. Физические и химические свойства рибосом. М., Мир, -1967.-304с.

97. Подопригора Г.И. , Андреев В.Н. Современные методы изучения фагоцитарной активности лейкоцитов in vitro. // Журн. микробиол.,эпидемиол. и иммунобиол.- 1976.-№1.-С.19-25.

98. Попов В.Г. Анализ параметров иммунореактивной кривой. //Журн.микробиол.,эпидемиол. и иммунобиол.- 1982.- №8.-С.84-88.

99. Проскуров В.А. Клиника и лечение стафилококковых заболеваний. М., Медицина, 1974.-159с.

100. Покровский В.И., Болотовский В.М., Майская JI.M. Аналитический обзор наиболее важных достижений по программе "Тактика вакцинопрофилактики инф.забол." за 1979-1985гг. //Журн.микробиол.,эпидемиол. и иммунобиол. -1987. -№6.- С.84-90.

101. Покровский В.И., Литвинов С.К., Болотовский В.М. Современные проблемы вакцинопрофилактики инф. Болезней и пути их решения. //Тер. арх. -1990.- Т.62.- №11.-С.З-7.

102. Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных. //Приказ МЗ СССР №755 от 12 августа 1977г.

103. Пыльщин А.А. Некоторые вопросы современного учения о полиморфноядерных лейкоцитах. // Арх. патологии.-1988.-Т.50, вып.8.-С. 85-90.

104. Рокицкий П.Ф. Биологическая статистика. Минск: Вышэйшая школа. - 1973. - 319с.

105. Ройт А. Основы иммунологии. Пер.с англ. М., "Мир". -1991.-328с.

106. Руководство по эпидемиологии инфекционных болезней. В 2 т. TI. В.М.Болотовский, А.М.Зарицкий, А.И.Кондрусев и др. Под ред.

107. B.И.Покровского. М., Медицина, -1993.-464с.

108. Рухадзе Э.З.,Левенсон В.И. Повышенная иммуногенность О-специфического компонента рибосомальных препаратов из S.sonnei для морских свинок.//Иммунология.-1984.-№3.-С.60-65.

109. Саламатова С.А., Сухорослова Л.И., Чернохвостова Е.В., Левенсон В.И. Определение в слюне IgA-антител к рибосомам шигелл для диагностики дизентерии. // Журн.микробиол.,эпидемиол. и иммунобиол.-1991.- №6.- С.59-62.

110. Саламатова С.А. Изотипическая характеристика антител к липополисахариду и рибосомам шигелл при вакцинации и инфекции. Автореф.дис.канд.мед.наук: 14.00.36 /МНИИЭ им.Г.Н.Габричевского.- М.-1989.- 19с.

111. Сочнев А.И., Бурштейн A.M., Качалова Т.Н. Метод розеткообразования Т- и В-лимфоцитов в планшетах Терасаки. // Лаб.дело.-1980,- №1.- С.39-40.

112. Спирин А.С., Гаврилова Л.П. Рибосома. М. "Наука", 1968. — 199 с.

113. Спирин А.С. Молекулярная биология: Структура рибосомы и биосинтез белка /Учебное пособие для студ. биоло. спец. вузов. М., Высшая школа,-1986.-303с.

114. Спирин А.С., Киселев Н.А., Шакулов Р.С. и др. Изучение структуры рибосом: обратимое разворачивание рибосомных частиц в рибонуклеотидные тяжи и модель укладки. //Биохимия. -1963.-Т.28.1. C. 920-930.

115. Спирин А.С. Спектрофотометрическое определение суммарного количества нуклеиновых кислот. //Биохимия. -1958. -Т.23.- С.656-662.

116. Станиславский Е.С., Введенская О.И. Протективная и иммунодепрессивная активность клеточных фракций холероподобного вибриона. //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.-1976.-№1.-С.108-110.

117. Субботина Ю.Л., Левенсон В.И., Гофман И.Л. Рибосомальная Дизентерийная вакцина. Сообщение III. Иммунохимическое и серологическое изучение. //Журн.микробиол.,эпидемиол. и иммунобиол. -1979.- №5.- С.44-52.

118. Толовская К.Р., Прохоров В.Я., Акатов А.К. Получение рибосомальной фракции золотистого стафилококка и его физико-химическая характеристика. //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1982.- №8.- С.69-72.

119. УрбахВ.Ю. Биометрия.- М.- 1975.- 216с.

120. Фримель X., Брок Й. Основы иммунологии. М.: Мир. - 1986. -254с.

121. Хаитов P.M., Борисова A.M., Хорошилова Н.В., Кулаков А.В., Еремина О.Ф, Голубева Н.М., Пинегин Б.В. Рибомунил: коррекция иммунной системы больных хроническим бронхитом. //Практический врач (приложение к "Medical Market Journal").-1995.-№1.-С.18-19.

122. Хаитов P.M., Борисова A.M., Хорошилова Н.В., Кулаков А.В., Еремина О.Ф, Голубева Н.М., Пинегин Б.В. Применение рибосомального препарата рибомунила для корреции иммунной системы у больных хроническим бронхитом. //Иммунология -1994.-№1.-С.36-43.

123. Хаитов P.M., Пинегин Б.В., Истамов Х.И. Экологическая иммунология. -М.: ВНИРО,- 1995.- 218с.

124. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Основные задачи клинической иммунологии по изучению функциональной активности фагоцитарных клеток. // Иммунология.-1995.- №3.- С.6-10.

125. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Оценка основных этапов фагоцитарного процесса: современные подходы и перспективы развития исследований. //Патолог.физиол. и эксперим. терапия.-1995.-№3.-С. 3-9.

126. Хейхоу Ф.Г.Дж., Кваглино Д. Гематологическая цитохимия.-М. .-Медицина.-1983.-319с.

127. Шакулов Р.С., Богданов А.А., Спирин А.С. Реконструкция рибосомоподобных частиц из "хлормицетиновых" РНП-частиц и белка in vitro. //ДАН СССР.-1963.- Т.153.- С. 223-228.

128. Шихман А.Р. Иммунодиагностика проявлений стрептококковой инфекции на основе рибосом стрептококка группы А. Автореф.дис. .канд.мед.наук: 14.00.36 /I МГМИ им.И.М.Сеченова.- М.: 1987.-18с.

129. Шихман А.Р. Использование иммуноферментного анализа для оценки специфичности распознавания антителами антигенных детерминант рибосом стрептококка группы А //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. -1985.- №7.-С.52-55.

130. Шпак С.И., Проценко В.А. Влияние ингибиторов протеолиза на содержание катионных белков и миелопероксидазы в нейтрофилах переферической крови при экспериментальном перитоните у мышей. // Патол. физиол. и эксперим. терапия.-1982.- №5.- С.45-48.

131. Шубич М.Г. К цитохимии белков лейкоцитов. // Арх. анатом.-1965.-Т.48., №4.- С.53-57.

132. Шубич М.Г., Нагоев Б.С. Щелочная фосфатаза лейкоцитов в норме и патологии. М.-Медицина.-1980.-223с.

133. Шубич М.Г., Нестерова И.В., Старченко В.М. Тест с нитросиним тетразолием в оценке иммунологического статуса детей с гнойно-септическими заболеваниями. //Лаб. дело.-1980.- №6.-С. 342-345.

134. Ющук Н.Д., Жогова М.А., Бушуева В.В., Колесова ВН. Эпидемиология: Учебное пособие. М., Медицина, -1993.-336с.

135. Acker G., Bitter-Suermann D., Meier-Dieter U., Peters H., Mayer H. Immunocytochemical localization of enterbacteria common antigen in Escherichia coli and Yersinia enterocolitica cells. // J.Bacteriol. -1986.-V.168.- №1.-p.348-356.

136. Akatov A.K., Prokhorov V.Ya., Tolovskaja K.R. Protective properties of certain isolated structures from the microbial cell of Staphylococcus aureus. // Padiatr. Grenzgeb. -1981.- V.20. p.5-11.

137. Angerman С., Eisenstein Т. Correlation of the deration and magnitude of protection against Salmonella infection afforded by various vaccines with antibody titres. // Infect. A Immun. 1980. -V.27. - p. 432-443.

138. Angerman C.R., Eisenstein Т.К. Comparative efficacy and toxicity of a ribosomal vaccine, acetone-killed cells, lipopolysaccharide and a live cell vaccine prepared from Salmonella typhimurium. //Infect.and Immun. 1978. - V.19, №2.-p.575-582.

139. Araujo F.G., Remington J.S. Protection against Toxoplasma gondii in mice immunized with Toxoplasma cell fractions, RNA and synthetic polyribonucleotides. //Immunology. -1974. V.27, №4. - p.711-721.

140. Baba T. Immunogenic activity of a ribosomal fraction obtained from Pasteurella multocida. //Infect.and Immun. -1977. V.15, №1. - p.1-6.

141. Bainton D.F., Farguhar M.G. Origin of granules in polymorphonuclear leukocytes; two types derived from opposite faces of the Golgi complex in developing granulocytes. //J. Cell. Biol.-1966.-V.28.-p.277-301.

142. Bene M.C., Faure G.C. From Peyer's patches to tonsils. Specific stimulation with ribosomal immunotherapy. //Drugs. 1997. - 54. Suppl 1.- 24-28.

143. Butler R.C.,Friedman H., Specter S.C., Eisenstein Т.К. Induction of immunoenhacing factors for murine splenocyte cultures by Salmonella typhimurium ribosome and ribonucleic acid extracts. //Infect, and Im-mun.-V.32, №3.-p.l 123-1127.

144. Chernokhvostova E.V., Lyubinskaya M.M., Belkin Z.P., Levenson V.I. Protective milk-O-antibodies induced in guinea pigs by parenteral Shigella ribosomal vaccine //Int. Arch. Allergy. Appl. Immunol. 1990. -V.90, ?3. - p.265-267.

145. Clot J. Pharmacology of ribosomal immunotherapy. //Drugs. 1997. -54. Suppl 1.- p.33-36.

146. Corbel M.J. The immunological properties of Brucella ribosomal preparations //Dev.Biol.Stand. 1976. - V.31. - p.l 15-122.

147. Dima V.F., Radu J., Persu A., Muntiu V., Palade R., Petcovici M., Dragomirescu E., Coman R. Immunogenicity of the ribosomal vaccine extrated from Escherichia coli. //Arch. Roum. Pathol. Exp. Microbiol. -1984. V.43, ?2. - p.127-136.

148. Dussourd d'Hinterland L. Ribosomal vaccines: introduction to the study of ribosomal vaccines. //Arzneimittelforrschung. 1980. - ?la, V.30.-p.122-125.

149. Dussourd d'Hinterland L., Pinel A.M., Rey G. Ribosomal vaccines: immunological study. //Arzneimittelforrschung. 1980. - ?la, V.30. -p.132-141.

150. Dussourd d'Hinterland L., Serre H., Normier G. Preparation de vaccins a base de fractions ribosomales antigeniques. Brevet Pierre Fabre S.A. depose le 10. 12. 1973. nO 73-43957.

151. Dussourd d'Hinterland L., Normier G., Pinel A.M.,Serre H. Preparation de vaccins a base d'acides nucleiques ARN associes. Brevet Pierre Fabre S.A. depose le 02.04. 1975. nO 75-10252.

152. Dussourd d'Hinterland L., Normier G., Pinel A.M., Durand J. Nou-veaux vaccins perfectionnes a base de fractions ribosoma les. Brevet Pierre Fabre S.A. depose le 06.08. 1976. nO 76-24126.

153. Dussourd d'Hinterland L., Pinel A.M., Normier G., Durand J. Adjuvants d'immunite non specifique. Brevet Pierre Fabre S.A. depose le 21.12.1976. П076-38566.

154. Dussourd d'Hinterland L., Pinel A.M., Normier G., Durand J. Vaccins acellularies perfectionnes contenunt des polysaccharides capsulaires. Brevet Pierre Fabre S.A. depose le 29.04.1977. n077-13009.

155. Elad D., Segal E. Fungal Ribosomal vaccines. II. Dermatophyte vaccine-initial studies on the antigenicity of a crude ribosomal fraction from Microsporum canis. //Mycopathologia. -1989. V.105, ? 1. - p.49-51.

156. Everchart D.L., Miglietta L.M., Maresca V.A., Rtlly Chatfield P. A Streptococcus mutans immunogen that reacts equally with S. Mutans antibody of all serotypes. //Med. Microbiol. Immunol. - 1984. - 172(4). -p.215-222.

157. Fairbanks J., Steek Т., Wallach D. Electrophoretic analysis of the polypeptides of the human erythrocyte membrane.//Biochemistry. 1971.- V.10.-p.2606-2617.

158. Farewell A., Neidhardt F.C. Effect of temperature on in vivo protein synthetic capacity in Escherichia coli. //J. Bacteriol. — 1998. — V.180 .17.— p. 4704-4710.

159. Gonggrijp R., Mullers W.J., Lemmens P.J., van Boven C.P. Ribonu-clease-sensitive ribosomal vaccine of Pseudomonas aeruginisa. //Infect.a.Immun. 1980. - V.27, №1. - p.204-210.

160. Gonggrijp R., Volleberg M.P., Lemmens P.J., van Boven C.P. Evidence for the presence of lipopolysaccharidi in a ribonuclease-sensitive ribosomal vaccine of Pseudomonas aeruginosa. //Infect.a.Immun. 1981. - V.31, №3. -p.896-905.

161. Green B.a., Johnson W. Immunogenicity of ribosomes from enzymati-cally lysed Strptococcus pyogenes. //Infect.a.Immun. -1980. V.27. -p.424-430.

162. Gregori Richard L., Shechmeister Isaac L. Humoral and cell-mediated reponses to a ribosomal preparation from Streptococcus mutans. //Infec.a.Immun. 1982. - V.38, №3. - p.1094-1101.

163. Grymberg N., Guimares F.N.,De Castro F.T., Lima A.O. Effect of the injection of ribosomes and RNA from Crithidia fasciulata on the experimental infection of mice by Trypanosoma *cruzi. // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 1977. -V.77, №1. -p.35-36.

164. Hinman Alan R., Orenstein Walter A. Immunisation practice in developed countries. //Lancet. 1990. - №8691. - p.707-710.

165. Janoff A., Zweifach B. Productions of inflammatory changes on the micro circulation by cationic proteins extracted from lysosomes. // J. Exp. Med.-1964. V.120. -p.747-762.

166. Johnson W. Ribosomal vaccines. I. Immunogenicity of ribosomal fractions isolated from Salmonella typhimurium and Yrsinia pestis. //Infec.a.Immun. 1972. - V.5, №6. - p.947-952.

167. Jnsen R., Gregory В., Naylor J., Actor P. Isolation of protective somatic antigen from Vibrio cholerae (Ogawa) ribosomal preparations //Infec.a.Immun. 1972. - V.6, №2. - p.156-161.

168. Kaplow L.S. A histochemical procedure for localising and enaluating leucocyte alkaline phosphatase activity in sneares of blood and marrow. //Blood.-1955.-10, №10.- p.1023-1029.

169. Katz M.A., Solotorovsky M., Lynn M. Opsonization and phagocytosis of Haemophilus influenzae type В organism by mouse polymorphonuclear leucocytes and antiribosomal serum //Br.J.Txp.Pathol. -1983. -V.64, №3. p.268-276.

170. Kita E., Kashiba Sh. Analysis of immune responses in genital tracts of mice immunised with purified ribosomal fractions of Neisseria gonorrhoeae //Br.J.Vener.Dis. 1984. - V.60, №4. - p.219-225.

171. Kita E., Kashiba Sh. Analysis of immune responses in genital tracts of mice immunised with purified ribosomal fractions of Neisseria gonorrhoeae //J.clin.Microbiol. 1982. - V.15. - p.668-676.

172. Keller R., Hinz G. Effect of an oral polyvalent bacterial lysate (Bron-cho-Vaxom) in chronic bronchitis //Prax.Klin.Pneumol. 1984. - V.38. -p.225.

173. Kurland C.G. Structurre and function of the bacterial ribosome. //Annu.Rev.Biochem. 1977. - У.46. - p. 173-200.

174. Labie C. Study of the teratogenic activity of ribosomal vaccine //Arzneimittelforschung. 1980. - V.30(la). - p.173-181.

175. Laemmli U.K. Cleavage of structural protein during the assembly of the head of bacteriophage T4 //Nature. 1970. - V.227. - p.680-685.

176. Laharrague P.F., Corberand J.X., Gleizes B.J. In vitro effect of a ribosomal extract of Klebsiella pneumoniae on normal human polymorphonuclear neutrophil functions //Int.J.Immunopharmacol. 1984. - V.6(5). -p.503-507.

177. Lauressergues H., Rico A., Labie C. Ribosomal vaccine chronic toxicity in the rat //Arzneimittelforschung. 1980. - V.30 - №la. - p. 182186.

178. Lieberman M.M., Frank W.J. Protective mechanism of the immune response to a ribosomal vaccine from Pseudomonas aeruginosa. I. In vivo protection studies in compromised animal models. //J.Surg.Res. 1988. -V.44, №3. - p.242-250

179. Lieberman M.M., Allen R.C. Opsonic activity of antisera to ribosomal vaccine fractions with live and formalinized Pseudomonas aeruginosa. //Can.J.Microbiol. 1986. - V.32, №6. - p.531-533.

180. Lieberman M.M., Walker H.L., Ayala E., Chapa I. Active and passive immunization with Pseudomonas aeruginosa ribosomal vaccines and anti-sera in the burned rat model.//J.Surg.Res. -1986. -V.40, №2. p. 138-144.

181. Lieberman M.M., Mc Kissock D.C., Wright G.L. Passive immunization against Pseudomonas with a ribosomal vaccine-induced immune serum and immunoglobulin fractions. //Infect.a.Immun. 1979. - V.23, №2. - p.509-521.

182. Lieberman M.M. Pseudomonas ribosomal vaccines: preparation, properties and immunogenicity. //Infect.a.Immun. -1978. V.21, №1. - p.76-86.

183. Lopetegui R., Sosa-Miatello C., La-Via M.I. Ribosomal antigens of Trypanosoma cruzi. Effect of ribonuclease on their antigenic reactivity. //Medicina B.Aires. 1980. - V.40, Suppl.l. - p.91-96.

184. Lynn M., Katz M.A., Santucci T.F.Jr. Naturally occurring antibodies in human sera that react with Haemophilus influenzae type В ribosomal vaccine. //J.clin.Microbiol. 1983. - V.17, №5. - p.844-847.

185. Lynn M., Tewari R.P., Solotorevsky M. Immunoprotective activity of ridosomes from Haemophilus influenzae. //Infect.a.Immun. 1977. -V.15, №2 - p.7453-460.

186. Martin-Gil D., Dieguez I., Oehiing A., Subira M.L. Immunotherapy with bacterial ribosomal antigen. I. Clinical study. //Allergol.Immunopathol.Madr. 1981. - V.9, №6. - p.509-518.

187. Menardo J.L., Bousquet J., Clanel R., Coulet P., Michel F.B. Respiratory-tract-directed immunostimulation by the oral route //Poumon.Coeur. 1982. - V.38(5). - p.297-300.

188. Michel F.B., D'Hinterland L.D., Fumex J.P., Guendon R. Prevention of bacterial respiratory infection by ribosomal vaccines. //Bronchopneumologie. 1979. - V.29. - p.337-342.

189. Michel F.B., Dussourd d'Hinterland L., Bousquet J., Pinel A.M., Normier G Immuno-stimulation by a ribosomal vaccine associated with abacterial cells wall adjuvant in humans. //Infect.a.Immun. 1978. - V.20, №3 - p.760-769.

190. Molinari J.L., Cabrera R. Immunity induced through a ribosomal preparation obtained from Salmonella typhi Ty2.//Rev. Latinoam. Microbiol. 1974. - V.16, №4. - p.199-204.

191. Morris J.A., Orr H.S. Immunity induced in hamsters vaccinated with a ribosome extract of Leptospira interrogans serogroup Icterohaemorrha-giae. //J.Biol.Stand. 1979. - V.7, №1. - p.81-87.

192. Nicolaeva L.Y., Savel'ev E.P. Molecular-biological and immunological properties of ribosomal vaccines. //Biomed.Sci. 1991. - V.2, №1. -p. 1-10.

193. Nickol A.D., Bonventre P.F. Acquired immunity against mouse typhoid: genetic restriction and comparative efficacy of ribosomal and conventional vaccines. //J. Med. Microbiol. — 1981. — Nov. — 14(4). — p.419-433.

194. Nomura M., Erdmann V. Reconstitution of 50S ribosomal subunits from dissociated molecular components. //Nature. 1970. - V.228, -p.744-748.

195. Normier G., Pinel A.M., Dussourd d'Hinterland L., Wigzell H., Binz H. Ribosomes as carriers for antigenic determinants of the surfase of microorganisms. //Dev.Biol.Stand. -1992. V.77. - p.79-85.

196. Orlov V.G., Krilov V.P. Some methodologic principles of immuno-protective and immunomodulating features of bacterial ribosomes. //Intern.J.Immunorehabilitation. 1994. - V.l. - p.261-262.

197. Pancholi Preeti ,Vinayak V.K., Khuller G.K. Immunobiological studies wit mycobacterial ribonucleic acid protein complex. // Indian J. Exp. Biol. - 1990.- V.28, №2. - p.119-133.

198. Park B.H., Fikrig S.M., Smithwiek E.M. Infection and NBT reduction of neutrophils. // Lancet.-1968.- №2.-p.532-534.

199. Parker C.D., Field L.H., Berry L.J., Manclark C. Subcellular fraction for immunizing against B. pertussis. //Dev.Biol.Stand. 1978.- V.41. -p23-29.

200. Podleski W.K. Immunomodulation of allergic autocytotoxicity in bronchial asthma by a bacterial lysate Broncho-Vaxom. //Int. J. Immuno-pharmac. 1985. - V.l, №5. - p.713.

201. Preston P.M., Dumonde D.C. Immunogenicity of a ribosomal antigen of Leishmania enriettii. //Trans.R.Soc.Trop.Med.Hyg. 1971. - V.65. -p.18-19.

202. Pugh G.M Jr., Phillips M., Mc Donald T.G.,Kopecky .K.E. Isolation of Moraxella bovis ribosomes and their subsequent use in a vaccine against infections bovine keratoconjunctivitis. //Am.J.Vet.Res. -1981.-V.42, №3.-p516-520.

203. Riottot M.M., Fournier J.M., Pillot J. Capsular serotypic specificity of the protection conferred on mice by Klebsiella pneumoniae ribosomal prepapreparations. //Infect, a. Immun. 1979. - V.24, №2. - p.476-482.

204. Robert D., Michel S., Ivanoff В., Cozzone A.J., Fontanges R. On the immunogenicity of ribosomes and ribosomal proteins isolated from Klebsiella pneumoniae and Streptococcus pneumoniae. //Microbiol.a.Immunol. 1981. - V.25, №2. - p. 183-194.

205. Ronadive N.S., Cochrane C.G. Isolation and characterization of permeability factors from rabbit neutrophils. //J. exp. Med.-1968.-V. 128.-p.605-622.

206. Ruiz Conteras J. Avances en vacunaciones infantiles. //Bol. Pediat. -1990. V.31. - №137. - p.229-235.

207. Sanchez-Palacios A., Martin-Escudero J.C., San-Jose-Dier J., San-chez-Palacios M.A. Immunotherapy with standard bacterial ribosomal antigens in childhood bronchial asthma. //Allergol.Immunopathol.Madr. -1986. V.14, №5. - p.383-391.

208. Schalla W.O., Johnson W.Immunogenicity of ribosomal vaccines isolated from group A type 14 Streptococcus pyogenes. //Infect, a. Immun. -1973. V.6. - p.1195-1201.

209. Segal E.,Levy R., Eylan E. Antibody formation in experimental immunizations with Candida albicans ribosomal fractions. //Mycopathologia. 1978.- V.64, №2. - pl21-123.

210. Sharma Dian, Chaudnary Subhash, Burt Wayne R., Tewari Ram. P. Characteristics migration hypersensitivity and macrophage migration inhibition factor in mice immunized with ribosomes or live yast cells of Histoplasm capsulatum.

211. Thomas D., Weiss E. Direct evidence for the involvement of capsular polysaccharide in the immunoprotective activity of Klebsiella pneumoniae ribosomal preparations.//Infect.a.Immunal. -1981. V.31. - p.71.

212. Thompson H.C.W., Eisenberg Т.К. Biological properties of a pneumococcal subcellular preparation. Abstr.74th Annu. Mett. Amer. Soc. Microbiol., Chicago, 1974.

213. Thomas D.W., Weiss E. Response of mice to injection of ribosomal fraction from group В Neisseria meningitidis. //Infect.a.Immunol. 1972.- V.6, №3. p.355-363.

214. Venneman M.R., Bigley N.J. Isolation and partial characterization of an immunogenic moiety obtained from Salmonella typhimurium. //J.Bacteriol. 1969. - V.100. - p.140-148.

215. Venturi M.C., Bioichini A., Bardare M. Local immunotherapy prevetion of recurrent respiratory infections in children. //Minerva Pediatr. -1991. V.43, №9. - p.557-561.

216. Winston St.H., Berry L.J. Antibacterial immunity induced by ribosomal vaccines. //J.Reticuloendothel.Soc. 1970. - V.8. - p. 13-24.

217. Winston S.H., Berry L.J. Immunity induced by ribosomal extracts from Staphylococcus aureus. //J.Reticuloendothel.Soc. 1970. - V.8, №1.- p. 66-73.

218. Wisokinska T. Immunogenicity of some Staphylococcus antigenes. 3. Action of protein A, coagulase and ribosomal fraction. //Med. Dosw. Microbiol. 1973. - V.25. - p.21-30.238

219. Wisokinska Т. The immunogenic value of some staphylococcal antigens. //Contrib.Microbiol.a.Immunol. 1973. - V.l. - p.281-282.

220. Wittmann H.G. Structure, function and evolution of ribosomes. //Eur.J. Biochem. -1976.-V.61, №1. -p.1-13/

221. Youmans A.S., Youmans G.P. Immunogenic activity of a ribosomal fraction obtained from Mycobacterium tuberculosis. //J.Bacteriol. 1965. - V.89. -p.1291-1298.

222. Zeya H.J., Spitznagel J.K. Arginine rige proteins of polymorphonuclear leukocyte lysosomes. //J. Exp. Med.-1968.-V.127.-P.927-941.

223. Zeya H.J., Spitznagel J.K. Characterisation of cationic protein bearing granules of polymorphonuclear leurocytes. //Lab. Invest.-1971.-V.24.-P.229-236.

224. Zielen S., Gunther C., Wess A., Ahrens P., Schroder S., Hofmann D. Oral immunization with bacterial ribosomes does not stimulate secretory antibodies. //Schweiz.med.Wochenschr. 1991. - V.121. - Suppl.№40. -p.28.239

225. Выражаю глубокую благодарность за всестороннюю помощь и поддержку своим научным руководителям: профессору доктору биологических наук, профессору В.Г. Орлову и кандидату медицинских наук В.П. Крылову.