Иммуногенетические аспекты функциональной активности макрофагов при экспериментальном туберкулезе тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат биологических наук Майоров, Константин Борисович

• Майоров, Константин Борисович
• кандидат биологических наук
• 2001

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Майоров, Константин Борисович

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Первичное заражение М. tuberculosis.

2.Проникновение М. tuberculosis в моноциты и макрофаги.

3.Судьба М. tuberculosis после фагоцитоза: подавление роста макрофагами.

4. Генетические аспекты антимикобактериальной резистентности. 21 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 25 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

1. Введение.

2. Антимикобактериальная активность макрофагов мышей, отличающихся по гену чувствительности к туберкулезу ТЪс-1.

2.1. Антимикобактериальная активность перитонеальных макрофагов мышей I/St и A/Sn.

2.2. Антимикобактериальная активность макрофагов легких мышей I/St и A/Sn 40 2.3 .Цитопатогенное действие микобактерий на макрофаги в культуре.

3. Влияние генов комплекса Нна антимикобактериальную активность макрофагов.

3.1.Сравнение антимикобактериальной активности перитонеальных макрофагов мышей, конгенных по комплексу Н-2.

3.2. Эффекторная активность макрофагальных клеточных линий, конгенных по комплексу Н-2.

4. Влияние Т-клеток, специфичных к микобактериям, на антимикобактериальную функцию макрофагов.

4.1. Влияние собственно Т-клеток.

4.2. Способность Т-клеточных клонов оказывать антимикобактериальное действие опосредована синтезом ими ШИ-у.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Иммуногенетические аспекты функциональной активности макрофагов при экспериментальном туберкулезе»

Актуальность проблемы.

Сравнительный анализ противоинфекционного иммунитета у организмов с различной генетически-детерминированной чувствительностью к возбудителю заболевания является одним из наиболее перспективных направлений в иммунологии инфекций, поскольку позволяет выявить физиологически значимые механизмы противоинфекционной резистентности.

Генетически обусловленные различия по устойчивости к микобактериальным инфекциям, в частности к авирулентному штамму Mycobacterium bovis (ВCG), у экспериментальных животных были обнаружены одними из первых (Gros et al., 1981). Данный фенотип проявляется в виде различной динамики персистенции BCG при экспериментальном заражении инбредных мышей разных линий (Forget et al., 1981). Было показано, что, во-первых, фенотипическое проявление этого признака сильнее всего зависит от одного менделирующего двухаллельного гена Beg (современное название - Nramp (Skamene et al., 1998)), расположенного в первой хромосоме мыши, и, во-вторых, аллель гена, детерминирующий резистентность (Begг), является доминантным по отношению ко второму аллелю (Bcgs), обуславливающему в гомозиготе чувствительность мышей к BCG-инфекции (Skamene et al., 1982). Вместе с тем, на чувствительность мышей к BCG влияют и другие гены, в частности гены комплекса Н-2, контролирующие Т-клеточный иммунный ответ и продукцию цитокинов при BCG-инфекции (Huygen et al., 1993; Kramnik et al., 1994).

К настоящему времени установлен ряд иммунологических феноменов, от которых могут зависеть обнаруженные межлинейные различия в чувствительности мышей к BCG-инфекции. Показано, в частности, что экспрессия генетических различий по аллелям гена Nramp проявляется на уровне антимикобактериальных эффекторных реакций макрофагов (Stach et al., 1984), в частности - транспорта оксида азота после фагоцитоза (Barrera et al., 1994).

По крайней мере некоторые гены, контролирующие различную резистентность линейных мышей к заражению вирулентными Mycobacterium tuberculosis, не совпадают с генами, контролирующими BCG-инфекцию (Никоненко и соавт., 1990). Таким образом генетический контроль и, вероятно, фенотипическое проявление генетических отличий между резистентными и чувствительными животными при экспериментальном туберкулезе и BCG-инфекции различны. Хотя иммуногенетика экспериментального туберкулеза исследована сравнительно подробно (McLeod et al., 1995; Авербах и соавт., 1985), контроль эффекторных функций макрофагов, от которых во многом зависит проявление фенотипов резистентности и чувствительности, остается мало изученным, хотя ведущая роль этих клеток в защите от туберкулеза хорошо известна (Mackaness, 1969). Принимая во внимание роль макрофагов, как основных клеток, ответственных за непосредственное уничтожение и элиминацию туберкулезных бактерий из организма, нам представлялось актуальным исследовать состояние системы мононуклеарных фагоцитов у линий мышей с разной генетически-обусловленной устойчивостью к экспериментальному туберкулезу.

Цель и задачи исследования.

Целью данной работы является сравнительная характеристика функциональной активности макрофагов с различной тканевой локализацией, полученных от мышей с высокой и низкой генетической чувствительностью к туберкулезу при взаимодействии их in vitro с М. tuberculosis. Для ее решения в работе поставлены следующие задачи: 1. Исследовать эффекторные функции макрофагов легких и перитонеального экссудата при фагоцитозе вирулентных Mycobacterium tuberculosis H37Rv in vitro.

2. Изучить цитотоксическое действие микобактерий на макрофаги в процессе фагоцитоза.

3. Исследовать влияние экзогенного гамма-интерферона на антимикобактериальную активность макрофагов.

4. Оценить интенсивность образования макрофагами активных форм азота при фагоцитозе вирулентных микобактерий.

5. Оценить эффекторную активность макрофагальных клеточных линий, полученных от линейных мышей с различной чувствительностью к туберкулезу.

6. Исследовать in vitro антимикобактериальную активность макрофагов в присутствии Т-клеток, специфичных к антигенам микобактерий.

Научная новизна.

1. Впервые показана взаимосвязь между низким уровнем антимикобактериальной активности макрофагов и скоростью их гибели под влиянием размножающихся микобактерий.

2. Впервые установлено избирательное нарушение противомикобактериальных свойств легочных макрофагов у сверхчувствительной к туберкулезу линии мышей I/St.

3. Впервые исследованы особенности образования активных форм азота макрофагами различной тканевой специфичности при фагоцитозе вирулентных микобактерий у линейных мышей с оппозитной чувствительностью к туберкулезу.

4. Установлены различия в активирующем действии экзогенного интерферона-гамма на противомикобактериальную активность макрофагов в зависимости от их тканевой локализации. 7

5. Оценена пригодность макрофагальных линий, полученных от конгенных по комплексу Н-2 мышей с различной чувствительностью к заражению МЛиЬегси1оз1$ Н371Ъ/, для изучения генетического контроля противотуберкулезной реактивности макрофагов.

6. Впервые установлено, что способностью активировать антимикобактериальную активность макрофагов обладают только клоны Т-клеток, синтезирующих гамма-интерферон, но не ИЛ-4 и ИЛ-10.

Практическая значимость.

Генетический контроль чувствительности и резистентности к микобактериям осуществляется у человека и мыши гомологичными генами. Это уже доказано для генов МНС и Ыгатр. Сходство генетического контроля чувствительности к туберкулезу делает высокой вероятность сходства механизмов противотуберкулезной защиты. Хотя исследования проводились на экспериментальных моделях, полученные данные позволяют выделить среди известных эффекторных реакций макрофагов физиологически значимые для противотуберкулезной резистентности. Это является необходимым условием для разработки новых методов выявления групп высокого риска по туберкулезу, а также лечения и мониторинга лечения туберкулеза.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Майоров, Константин Борисович

ВЫВОДЫ

1. Генетический контроль естественной антимикобактериальной резистентности проявляется на ткане-специфическом уровне: чувствительность и резистентность мышей к туберкулезу коррелирует с активностью легочных, но не перитонеальных макрофагов.

2. Существует жесткая обратная зависимость между способностью макрофагов подавлять размножение вирулентных микобактерий и сохранять собственную жизнеспособность после заражения ими.

3.У мышей, конгенных по комплексу Н-2 и различающихся по чувствительности к экспериментальному туберкулезу, бактерицидная активность перитонеальных макрофагов, очищенных от неприлипающих к пластику клеток ПЭ, в отношении М. tuberculosis H37Rv одинакова.

4. Неприлипающие к пластику и сами по себе не бактерицидные для микобактерий клетки ПЭ по-разному модулируют противотуберкулезную активность сингенных перитонеальных макрофагов, в результате чего проявляется разный уровень Я-2-зависимой антимикобактериальной активности КПЭ: у более резистентных мышей В10.А и В10.М размножение микобактерий подавляется сильнее, чем у чувствительной линии BIO.

5. Использование иммортализированных макрофагальных линий не всегда адекватно моделирует закономерности генетического контроля противомикобактериальной активности макрофагов, полученных ex vivo.

6. Продукция Т-клетками IFN-y активирует взаимодействующие с этими Т-клетками перитонеальные макрофаги, усиливая их способность подавлять рост микобактерий. Легочные макрофаги, напротив, не активируются экзогенным IFN-y.

7. Фенотипическое проявление гена ТЬс-1, регулирующего чувствительность мышей к

65 туберкулезу сильнее, чем гены МНС и ген Ыгатр, по-видимому, специфически реализуется на уровне тканевых легочных макрофагов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Картирование и последующее клонирование генов, контролирующих восприимчивость к туберкулезу, чрезвычайно важно для установления генетически предрасположенных групп риска, нуждающихся, во-первых, в особо тщательном наблюдении и профилактике до развития каких-либо клинических симтомов заболевания и, во-вторых, в особом подходе при лечении в связи с возможной неэффективностью традиционных схем. Высокий уровень гомологии больших участков генома и ортологичность многих локусов человека и мыши (McLeod et al., 1995; Skamene et al., 1998) позволяет применять методы «межвидовой генетики» - в частности, типирование ДНК человека олигонуклетидными ДНК-зондами мыши - для поиска «клинически важных» генов и последующего анализа их мутаций, ведущих к экспрессии неблагоприятных фенотипов (Hill, 1996). Поэтому очень важен поиск и определение последовательностей таких генов на экспериментальных моделях. Однако эта работа наталкивается на значительные трудности, связанные с точным и надежным выявлением истиных фенотипов, контролируемых аллелями чувствительности и резистентности.

Внутриклеточное персистирование патогенных бактерий - одна из самых сложных форм инфекционного процесса, и это в полной мере относится к такой инфекции как туберкулез. Тот факт, что клиническая форма заболевания развивается лишь у небольшого процента инфицированных людей (Kaufmann, 2000), как и сама длительность инфекционного процесса, принимающего зачастую хронический характер, указывает на сложный, многокомпонентный характер взаимодействия между М. tuberculosis и организмом-хозяином. В соответствии с этим, множество генов микобактерий, контролирующих, в частности, факторы вирулентности, биосинтез клеточной стенки и липидный метаболизм, обеспечивает их выживание в макрофагах хозяина (Cole et al., 1998). С другой стороны, генетический контроль чувствительности и резистентности к микобактериальным инфекциям у человека и животных также носит полигенный характер (Shaw et al., 1997; Bellamy et al., 1998; Abel et al., 1998; Lavebratt et al., 1999) и затрагивает различные механизмы естественной резистентности и адаптивного иммунного ответа. В этой связи, анализируя связь между генетическими различиями по восприимчивости к инфекции на уровне организма с различиями по эффективности антимикобактериальной защиты на клеточном и субклеточном уровнях, необходимо очень четко определить условия, в которых можно зарегестрировать физиологическую значимость того или иного механизма протекции.

Какого рода ограничение данное положение накладывает на экспериментальную иммуногенетику туберкулеза легко проиллюстрировать многочисленными примерами. Так, ген мыши ~Nram.pl, первый из картированных, а затем и клонированных генов, регулирующих выживание микобактерий в макрофагах (Vidal et al., 1995; Skamene et al., 1998), и его аналог у человека NRAMP1, долгое время был основным кандидатом на роль главного генетического фактора естетственной резистентности при туберкулезе (Vidal et al., 1995; Blackwell et al., 1994). Однако основной массив данных был получен на модели инфицирования мышей вакцинным штаммом BCG или сравнительно низковирулентным М. avium. На модели же истинной туберкулезной инфекции, вызванной М. tuberculosis, связь между уровнем чувствительности и аллелями гена ~Nram.pl либо отсутствовала (Medina, North, 1998), либо слабо проявлялась только при низких дозах заражения (Nikonenko et al., 1996), так что ген Nrampl скорее всего служит лишь модификатором более "сильных" генов, контролирующих резистентность хозяина, таких как недавно картированные локусы sst-1 (Kramnik et al., 2000) и Tbc-1 (Lavebratt et al., 1999).

Примером неполного количественного соответствия фенотипических различий между оппозитными линиями мышей на системном и клеточном уровне могут служить данные, недавно полученные в нашей лаборатории на тех же линиях мышей I/St и A/Sn, которые анализировались в нашей работе. При сильнейших различиях между этими мышами по срокам выживания после заражения, количеству микобактерий в органах и темпам кахексии (Nikonenko et al., 2000), различия в уровне накопления и активации Т клеток в легких после заражения, а также продукции ими большинства цитокинов были умеренными (Lyadova et al., 2000). При этом пролиферативный ответ Т клеток легких на микобактериальные антигены отличался очень сильно.

В продолжение этих рассуждений следует отметить два важных аспекта изложенной выше работы. Во-первых, при попытке обнаружить межлинейные различия по антимикобактериальной активности макрофагов, взятых от мышей конгенных по комплексу Н-2 линий, оказалось, что в чистых популяциях макрофагов они не выявляются. Обязательным условием фенотипического проявления контролируемых генами МНС различий, реализуемых через макрофагальную активность, было присутствие в системе Т клеток, которые, в свою очередь, не влияли на размножение микобактерий в отсутствие макрофагов. Поскольку основная биологическая функция продуктов МНС, экспрессированных на макрофагах - это презентация антигенов Т клеткам, наши данные служат дополнительной иллюстрацией того, что для анализа регуляции любого фенотипа необходимо выполнить все основные условия его экспрессии, иначе можно сделать неверный вывод о неучастии того или иного элемента в реализации сложного признака.

63

Во-вторых, когда из общих соображений сам тип генетического контроля инфекции не требовал обязательного присутствия Т клеток (локусы, не сцепленные ни с МНС, ни с генами Т-рецептора, такие как sst-1 (Kramnik et al., 2000) и Tbc-1 (Lavebratt et al., 1999)), фенотипы "чувтвительность" и "резистентность" хорошо проявлялись в чистых популяциях макрофагов. Здесь, однако, вступало в силу другое ограничение -клеточный фенотип, полностью соответствующий фенотипу на уровне организма, был строго органо-специфичен. Только анализ макрофагов легких позволил определить, какой же клеточный элемент несет дефект антимикобактериальной защиты, и какой именно материал следует использовать для дальнейшего анализа генной экспрессии.

Важно отметить, что анализ перитонеальных макрофагов (и предварительные данные по макрофагам костномозгового происхождения) не просто не дали ожидаемого результата, а дали прямо противоположный. Таким образом, выбор адекватной модели in vitro при фенотипическом анализе комплексного генетического контроля заболевания должен учитывать и предварительные данные (если имеются) о природе вовлеченных генов, и тонкие патофизиологические характеристики самой болезни.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Майоров, Константин Борисович, 2001 год

1. Авербах М.М., Мороз A.M., Апт А.С., Никоненко Б.В. Иммуногенетика инфекционных заболеваний. М. Медицина, 1985,256 с.

2. Апт А.С., Никоненко Б.В., Мороз A.M., Авербах М.М. Генетический анализ факторов, детерминирующих восприимчивость мышей к туберкулезу. Бюлл. Эксп. Биол. Мед., 1982,12:83-85.

3. Бландова З.К., Душкин В.А., Малашенко A.M., Шмидт Е.Ф. Линии лабораторных животных для медико-биологических исследований. М.: Наука, 1983.

4. Никоненко Б.В., Апт А.С., Межлумова М.Б., Мороз A.M. Гены Beg и ТЬс-1, взаимосвязь. Генетика. 1990,26: 2254-2257.

5. Хоулт Дж.(ред.). Краткий определитель бактерий Берги. М.: Мир, 1981.

6. Abel L., Sanchez F.O., Oberti J., Thuc N.V., Hoa L.V., Lap V.D., Skamene E., Lagrange P.H., Schurr E. Susceptibility to leprosy is linked to the human NRAMP1 gene. J.Infect.Dis, 1998,177: 133-145.

7. Aliprantis AO, Yang RB, Mark MR, et al. Cell activation and apoptosis by bacterial lipoproteins through Toll-like receptor-2. Science, 1999,285:736-739.

8. Allen J, Brieger E and Rees R. Electron microscopy of the host-parasite relation in murine leprosy. J.Pathol.Bacteriol., 1965, 89:301-306.

9. Apt A., Avdienko V., Nikonenko B. et al. Distinct H-2 complex control of mortality, and immune responses to tuberculosis infection in virgin and BCG-vaccinated mice. Clin. Exp. Immunol. 1993, 94: 322-329.

10. Barnes P, Modlin RL and Ellner J J. T cell responses and cytokines. In B. Bloom, ed. Tuberculosis: Pathogenesis, Protection, and Control. ASM Press, Washington, DC. 1994, 417-435.

11. Barrera L.F., Rramnik I., Skamene E., Radzioch D. Nitrite production by macrophages derived from BCG-resistant and -susceptible congenic mouse strains in response to IFN-gamma and infection with BCG. Immunology., 1994, 82: 457-464.

12. Belardelli F. Role of inerferons and other cytokines in the regulation of the immune response. APMIS, 1995, 103:161-179.

13. Bellamy R., Ruwende C., Corrah T., McAdam K., Whittle H.C., Hill A.V.S. Variations in the NRAMP1 gene and susceptibility to tuberculosis in West Africans. N.Engl J.Med, 1998, 338: 640-644.

14. Blackwell JM, Barton CH, White JK, et al. Genetic regulation of leishmanial and mycobacterial infections: the Bcg/Ity/Lsh gene story continues. Immunol.Lett., 1994, 43(l-2):99-107.

15. Blackwell JM, Barton CH, White JK, et al. Genomic organization and sequence of the human NRAMP gene: identification and mapping of a promoter region polymorphism. Mol.Med., 1995,1:194-205.

16. Blackwell JM, Searle S. Genetic regulation of macrophage activation: understanding the function of Nramp 1 (=Ity/Lsh/Bcg). Immunol.Lett., 1999, 65:73-80.

17. Blasi E., Radzioch D., Durum S., Varesio L. A murine macrophage cell line immortalized by v-raf and v-myc oncogenes exibits normal macrophage function. Eur.J.Immunol., 1987,17: 1491-1498.

18. Brightbill HD and Modlin RL. Toll-like receptors: molecular mechanisms of the mammalian immune response. Immunology, 2000, 101:1-10.

19. Brightbill HD, Libraty DH, Krutzik SR, et al. Host defense mechanisms triggered bymicrobial lipoproteins through Toll-like receptors. Science, 1999,285:732-736.

20. Cellier M, Govoni G, Vidal S, et al. Human natural resistance-associated macrophage protein: cDNA cloning, chromosomal mapping, genomic organization, and tissue-specific expression. J.Exp.Med., 1994,180:1741-1752.

21. Chan J, Xing Y, Magliozo RS and Bloom BR. Killing of virulent Mycobacterium tuberculosis by reactive nitrogen itermediates produced by activated murine macrophages. J.Exp.Med., 1992, 175:1111-1122.

22. Cole S.T., Brosch R., Parkhill J. et al. Deciphering the biology of Mycobacterium tuberculosis from the complete genome sequence. Nature, 1998, 537-544.

23. Condos R, Rom WN and Schluger NW. Treatment of multi-drug-resistant pulmonary tuberculosis with interferon-gamma via aerosol. Lancet, 1997, 349:1513-1515.

24. Cooper A.M., Dalton D.K., Stewart T.A. Bloom B. An essential role for IFN-y in resistance to M.tuberculosis infection. J.Exp.Med., 1993,178: 2249-2255.

25. Czop J and Kay J. Isolation and characterization of P-glucan receptors on human macrophages. J.Exp.Med., 1991, 173:1511-1520.

26. Dalton DK, Pitts-Meek S, Keshav S, et al. Multiple defects of immune cell function in mice with disrupted interferon-gamma genes. Science, 1993, 259:1739-1742.

27. Dannenberg AM, Jr. Roles of cytotoxic delayed-type hypersensitivity and macrophage-activating cell-mediated immunity in the pathogenesis of tuberculosis. Immunobiology, 1994,191:461-473.

28. Denis M. Killing of Mycobacterium tuberculosis within human monocytes: activationby cytokines and calcitriol. Clin.Exp.Immunol., 1991, 84:200-206.

29. Diamond G, Zasloff M, Eck H et al. Tracheal antimicrobial peptide, a cystein-rich peptide from mammalian tracheal mucosa: peptide isolation and cloning of a cDNA. Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A., 1991, 88:3952-3956.

30. Douvas GS, Looker DL, Vatter AE and Crowle A J. Gamma interferon activates human macrophages to become tumoricidal and leishmanicidal but enhances replication of macrophage-associated mycobacteria. Infect.Immun., 1985, 50:1-8.

31. Downing J, Pasula R, Wright J et al. Surfactant protein A promotes attachment of Mycobacterium tuberculosis to alveolar macrophages during infection with human immunodeficiency virus. Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A., 1995,92:4848-4852.

32. Falk A and Fuchs GF. Prophylaxis with isoniazid in inactive tuberculosis: a Veteran Administration Cooperative Study XII. Chest, 1978,73:44-48.

33. Flesch I and Kaufmann SH. Mycobacterial growth inhibition by interferon-gamma-activated bone marrow macrophages and differential susceptibility among strains of Mycobacterium tuberculosis. J.Immunol., 1987, 138:4408-4413.

34. Flynn JL, Goldstein MM, Chan J, et al. Tumor necrosis factor-alpha is required in the protective immune response against Mycobacterium tuberculosis in mice. Immunity, 1995,2:561-572.

35. Forget A., Skamene E., Gros P., Miailhe A.C., Turcotte R. Differences in response among inbred mouse strains to infection with small doses of Mycobacterium bovis (BCG). Infect.Immun., 1981, 46: 135-140.

36. Gaynor C, McCormack F, Voelker D et al. Pulmonary surfactant protein A madiates enhanced phagocytosis of Mycobacterium tuberculosis by a direct interaction with human macrophages. J.Immunol., 1995,155:5343-5351.

37. Gordon AH, D'Arcy Hart P, Young MR. Ammonia inhibits phagosome-lysosomefusion in macrophages. Nature, 1980, 286:79-80.

38. Goren M, D'Arcy Hart P, Young MR and Armstrong JA. Prevention of phagosome-lysosome fusion in cultured macrophages by sulphatides of Mycobacterium tuberculosis. Proc.Natl.Acad.Sci. U.S.A., 1976, 73:2510-2514.

39. Gros P.,Skamene E.,Forget A. Genetic control of natural resistance to Mycobacterium bovis (BCG) in mice. J.Immun., 1981,127: 2417-2421.

40. Hill A.V.S. Genetics of infectious disease resistance. Curr.Opin.Genet.Dev, 1996, 6: 348-353.

41. Hirsch CS, Hussain R, Toosi Z, et al. Cross-modulation by transforming growth factor beta in human tuberculosis: supression of antigen-driven blastogenesis and interferon gamma production. Proc. Natl.Acad.Sci. U.S.A., 1996,93:3193-3198.

42. Hirsch CS, Yoneda T, Averiii L, et al. Enhancement of intracellular growth of Mycobacterium tuberculosis in human monocytes by transforming growth factor-beta 1. J.Infect.Dis., 1994,170:1229-1237.

43. Hoheisel G, Zheng L, Teschler H et al. Increased soluble CD 14 levels in BAL fluid inpulmonary tuberculosis. Chest, 1995, 108:1614-1616.

44. Holland SM, Eisenstein EM, Kuhns DB, et al. Treatment of refractory disseminated nontuberculous mycobacterial infection with interferon gamma: a preliminary report. N.Engl.J.Med., 1994,330:1348-1355.

45. Holt P.G., Degebrodt A., O'Leary C., Krska K., Plozza T. T cell activation by antigen-presenting cells from lung tissue digest: suppression by endogenous macrophages. Clin.Exp.Immunol. 1985, 63: 261-270.

46. Huygen K., Drowart A., Harboe M. et al. Influence of genes from the MHC on the antibody repertoire against culture filtrate antigens in mice infected with live Mycobacterium bovis BCG. Infect. Immun. 1993, 61: 2687-2693.

47. Israel H, Hetherington H and Ord J. A study of tuberculosis among students of nursing. J.A.M.A. 1941,117:461-473.

48. Jackett PS, Aber VR, Lowrie DB. Virulence and resistance to superoxide, low pH and hydrogen peroxide among strains of Mycobacterium tuberculosis. J.Gen.Microbiol., 1978,104:37-45.

49. Jouanguy E, Altare F, Lamhamedi S, et al. Interferon-gamma-receptor deficiency in an infant with fatal bacille Calmette-Guerin infection. N.Engl.J.Med., 1996, 335:156-1961.

50. Kamijo R, Le J, Shapiro D, et al. Mice that lack interferon-gamma reseptor have profoundly altered responses to infection with bacillus Calmette-Guerin and subsequent challenge with lipopolysaccharide. J.Exp.Med., 1993,178:1435-1440.

51. Kamijo R, Shapiro D, Gerecitano J et al. Mycobacterium bovis infection of mice lacking receptors for interferon-gamma or for transcription factor IRF-1. J.Interferon Res., 1994, 14:281-282.

52. Kaufmann S.H.E. Immunity to intracellular microbial pathogens. Immun.Today, 1995, 16:338-342.

53. Kaufmann S.H.E. Is the development of a new tuberculosis vaccine possible?. Nature Med., 2000, 6: 955-960.

54. Kindler V, Sappino AP, Grau GE, et al. The inducing role of tumor necrosis factor in the development of bactericidal granulomas during BCG infection. Cell, 1989, 56:731740.

55. Klinger K, Tchou-Wong K.-M., Brandi O, et al. Effects of mycobacteria on regulation of apoptosis in mononuclear phagocytes. Infect.Immun., 1997,65:5272-5278.

56. Kramnik I., Deitrich W.F., Demant P., Bloom B.R. Genetic control of resistance to experimental infection with virulent Mycobacterium tuberculosis. PNAS, 2000, 97: 85608565.

57. Kramnik I., Radzioch D., Skamene E. T-helper 1 -like subset selection in Mycobacterium bovis bacillus Calmette-Guerin-infected resistant and susceptible mice. Immunology, 1994, 81:618-625.

58. Kuo HP, Ho TC, Wang CH, et al. Increased production of hydrogen peroxide and expression of CDllb/CD18 on alveolar macrophages in patients with active pulmonary tuberculosis. Tuber.Lung.Dis., 1996, 77:468-475.

59. Lavebratt C., Apt A., Nickonenko B., Schalling M., Schurr E. Severity of tuberculosis in mice is linked to distal chromosome 3 and proximal chromosome 9. J.Inf.Dis., 1999, 180: 150-155.

60. Mackaness G.B. The influence of immunologically committed lymphoid cells on macrophage activity in vivo. J.Exp.Med., 1969,129: 973-979.

61. MacMicking, J.D., North R.J., LaCourse R., Mudgett J.S., Shah S.K., Nathan C.F. Identification of nitric oxide synthase as a protective locus against tuberculosis. Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 1997, 94: 5243-5248.

62. McDonough KA and Kress Y. Cytotoxicity for lung epithelial cells is a virulence-associated phenotype of Mycobacterium tuberculosis. Infect. Immun. 1995, 63:48024811.

63. McLeod R., Buschman E., Arbuckle L.D., Skamene E. Immunogenetics in the analysis of resistance to intracellular pathogens. Curr.Opin.ImmunoL, 1995, 7: 539-552.

64. Means TK, Lien E, Yoshimura A, et al. The CD14 ligands lipoarabinomannan and lipopolysaccharide differ in their requirement for Toll-like receptors. J.Immunol., 1999, 163:6748-6755.

65. Means TK, Wang S, Lien E, et al. Human toll-like receptors mediate cellular activation by Mycobacterium tuberculosis. J.Immunol., 1999,163:3920-3927.

66. Medina E and North RJ. Evidence inconsistant with a role for the Beg gene (Nrampl) in resistance of mice to infection with virulent Mycobacterium tuberculosis. J.Exp.Med., 1996, 183:1045-1051.

67. Medina E, North R. Resistance ranking of some common inbred mouse strains to Mycobacterium tuberculosis and relationship to MHC and Nrampl genotype. Immunology, 1998, 83 :270-274.

68. Meng X, Khanuja BS, Ip YT. Toll receptor-mediated Drosophila immune responserequires Dif, anNF-KB factor. Genes Dev., 1999, 13:792-797.

69. Migliorini P., Corradin G., Corradin S.B. Macrophage NC>2~~ production as a sensitive and rapid assay for quantitation of murine IFN-y. J.Immunol.Meth., 1991, 139: 107-114.

70. Molloy A, Laochumroonvorapong P and Kaplan G. Apoptosis, but not necrosis, of infected monocytes is coupled with killing of intracellular bacillus Calmette-Guerin. J.Exp.Med., 1994,180:1499-1509.

71. Mor N. Intracellular location of Mycobacterium leprae in macrophages of normal and immune-deficient mice and effect of rifampin. Infect.Immun., 1983,42:802-811.

72. Moreira AL, Wang J, Tsenova-Berkova L, et al. Sequestration of Mycobacterium tuberculosis in tight vacuoles in vivo in lung macrophages of mice infected by the respiratory route. Infect.Immun., 1997, 65:305-308.

73. Newport M, Levin M, Blackwell J, et al, Evidence for exclusion of a mutation in NRAMP as the cause of familial disseminated atypical mycobacterial infection in a Maltese kindred. J.Med.Genet., 1995, 32:904-906.

74. Nicholson S, Bonecini-Almeida MDG, Lapa e Silva JR, et al. Inducible nitric oxide synthase in pulmonary alveolar macrophages from patients with tuberculosis. J.Exp.Med., 1996,183:2293-2302.

75. Nikonenko B.V., Apt A.S., Moroz A.M, Averbakh M.M. Genetic analysis of susceptibility of mice to H37Rv tuberculosis infection: sensitivity versus relative resistance. Prog. Leukocyte Biol. 1985, 3: 291 -299.

76. Nikonenko B.V., Averbakh M.M., Lavebratt C., Schurr E., Apt A.S. Comparativeanalysis of mycobacterial infections in susceptible I/St and resistant A/Sn inbred mice. Tuber. Lung. Dis. 2000, 80: 15-25.

77. Orme I.M., Andersen P., Boom W.H. T cell response to Mycobacterium tuberculosis. J.Inf.Dis., 1993,167:1481-1495.

78. Perera PY, Vogel SN, Detore GR, et al. CD14-dependant and CD14-independant signaling pathways in murine macrophages from normal and CD 14 knockout mice stimulated with lipopolysaccharide or taxol. J.Immunol., 1997, 158:4422-4429.

79. Pichugin A.V., Khaidukov S.V., Moroz A.M., Apt A.S. Capacity of murine T cells to retain long-term responsiveness to mycobacterial antigens is controlled by the H-2 complex. Clin. Exp. Immunol., 1998, 111: 316-324.

80. Placido R, Mancino G, Amendola A, et al. Apoptosis of human monocytes/macrophages in Mycobacterium tuberculosis infection. J.Pathol., 1997, 181:31-38.

81. Riley L. Phagocytosis of M. tuberculosis. In W.Rom and S.Garay, eds. Tuberculosis. Little, Brown, Boston, MA. 1996,281-289.

82. Riley RL, Mills CC, Nyka W et al. Aerial dissemination of pulmonary tuberculosis: a two year study of contagion in a tuberculous ward, 1959. Am.J.Epidemiol., 1995, 142:314.

83. Roberts LJ, Baldwin TM, Curtis JM, et al. Resistance to Leishmania major is linked to the H2 region on chromosome 17 and to chromosome 9. J. Exp. Med., 1997, 185:17051710.

84. Rock FL, Hardiman G, Timans JC, et al. A family of human receptors structurally related to Drosophila Toll. Proc.Natl.Acad.Sci. USA, 1998, 95:588-593.

85. Rojas M., Barrera L.F., Garcia L.F. Induction of apoptosis in murine macrophages by Mycobacterium tuberculosis is reactive oxygen intermediates-independent. Biochem.

86. Biophys. Res. Commun. 1998,247:436-442.

87. Rook GA, Steele J, Fraher L, et al. Vitamin D3, gamma interferon, and control of proliferation of Mycobacterium tuberculosis by human monocytes. Immunology, 1986, 57:159-163.

88. Ruscetti F, Varesio L, Ochoa A and Ortaldo J. Pleiotropic effects of transforming growth factor-beta on cells of the immune system. Ann.N.Y.Acad.Sci., 1993, 685:488500.

89. Schaible U.E., Collins H., Kaufmann H.C. Confrontation between intracellular bacteria and the immune system. Adv.Immunol., 1999, 71: 267-377.

90. Schlesinger LS, Bellinger-Kawahar C, Payne N and Horwitz M. Phagocytosis of Mycobacterium tuberculosis is mediated by human monocyte complement receptors and complement component C3. J.Immunol., 1990,144:477-495.

91. Schlesinger LS, Hull S and Kaufman T. Binding of the terminal mannosyl units of lipoarabinomannan from a virulent strain of Mycobacterium tuberculosis to human macrophages. J.Immunol., 1994,152:4070-4079.

92. Schlesinger LS. Entry of Mycobacterium tuberculosis into mononuclear phagocytes. Curr.Top.Mycrobiol.Immunol., 1996,215:71-96.

93. Schlesinger LS. Macrophage phagocytosis of virulent but not attenuated strains of Mycobacterium tuberculosis is mediated by mannose receptors in addition to complement receptors. J.Immunol., 1993,150:2920-2930.

94. Schlesinger LS. Role of mononuclear phagocytes in M. tuberculosis pathogenesis.

95. J.Ivestig.Med., 1996,44:312-323.

96. Selwyn PA, Hartel D, Lewis VA et al. A prospective study of the risk of tuberculosis among intravenous drug users with human immunodeficiency virus infection. N. Engl. J. Med. 1989, 320:545-550.

97. Skamene E, Schurr E, Gros P. Infection genomics: Nrampl as a major determinant of natural resistance to intracellular infections. Ann.Rev.Med, 1998, 49: 275-287.

98. Skamene E. The Beg gene story. Immunobiology, 1994, 191(4-5):451-460.

99. Skamene E., Gros P., Forget A., Kongshavn P.A.L., St-Charles C., Taylor A. Genetic regulation of resistance to intracellular pathogens. Nature, 1982, 297: 506-510.

100. Stach J.L., Gros P., Skamene E., Forget A. Phenotypic expression of genetically controlled natural resistance to Mycobacterium bovis (BCG). J.Immunol., 1984, 132: 888892.

101. Stead WW. Genetics and resistance to tuberculosis: could resistance be enhanced by genetic engineering? Ann.Intern.Med., 1992, 116:937-941.

102. Stead WW. The origin and erratic global spread of tuberculosis: how the past explains the present and is the key to the future. Clin.Chest Med., 1997, 18:65-77.

103. Steinman RM, Witmer-Pack M, Inaba K. Dendritic cells: antigen presentation, accessory function and clinical relevance. Adv.Exp.Med.Biol. 1993, 329:1-9.

104. Sturgill-Koszycki S, Schlesinger PH, Chakraborty P et al. Lack of acidification in Mycobacterium phagosomes produced by exclusion of the vesicular proton-ATPase.

105. Science, 1994,263:678-681.

106. Toosi Z, Gogate P, Shiratsuchi H, et al. Enhanced production of TGF-beta by blood monocytes from patients with active tuberculosis and presence of TGF-beta in tuberculous granulomatous lung lesions. J.Immunol., 1995,154:465-473.

107. Toosi Z, Young TG, Averill LE, et al. Induction of transforming growth factor beta by purified protein derivative of Mycobacterium tuberculosis. Infect.Immun., 1995, 63:224228.

108. Tramontana JM, Utaipat U, Molloy A, et al. Thalidomide treatment reduces tumor necrosis factor alpha production and enhances weight gain in patients with pulmonary tuberculosis. Mol. Med., 1995,1:384-397.

109. Via LE, Deretic D, Ulner RJ, et al. Arrest of mycobacterial phagosome maturation is caused by a block in vesicle fusion between stages controlled by rab5 and rab7. J.Biol.Chem., 1997,272:13326-13331.

110. Vidal S., Gros P., Skamene E. Natural resistance to infection with intracellular parasites: molecular genetics identifies Nrampl as the Bcg/Ity/Lsh locus. J.Leukoc.Biol., 1995, 58: 382-390.

111. Walker L and Lowrie DB. Killing of Mycobacterium microti by immunologically activated macrophages. Nature, 1981,293:69-11.

112. Wayne LG. Dormancy of Mycobacterium tuberculosis and latency of disease. Eur.J.Clin.Microbiol.Infect.Dis., 1994,13:908-914.

113. Wright S, Detmers P, Jong M and Meyer B. Interferon-y depresses binding of ligand by79

114. C3b and C3bi receptors on cultured human monocytes, an effect reversed by fibronectin. J.Exp.Med., 1986,163:1245-1259.

115. Zhang M, Gong J, Iyer DV, et al. T cell cytokine responses in persons with tuberculosis and human immunodeficiency virus infection. J.Clinlnvest., 1994,94:2435-2442.

116. Zhang M, Lin Y, Iyer DY, et al. T cell cytokine responses in human infection with Mycobacterium tuberculosis. Infect.Immun., 1995, 63:3221-3234.

117. Zhang Y, Doerfler M, Lee T et al. Mechanisms of stimulation of interleukin-1 beta and tumor necrosis factor-alha by Mycobacterium tuberculosis components. J.Clin.Invest., 1993,91:2076-2083.

118. Zimmerli S, Edwards S and Ernst J. Selective receptor blokade during phagocytosis does not alter the survival and growth of Mycobacterium tuberculosis in human macrophages. Am.J.Respir.Cell.Mol.Biol., 1996, 15:760-770.