Изучение антимикобактериального действия комплекса природных цитокинов и противомикробных пептидов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.09, кандидат медицинских наук Гвоздева, Юлия Викторовна

• Гвоздева, Юлия Викторовна
• кандидат медицинских наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Гвоздева, Юлия Викторовна

СПИСОК СОКРАЩЕНРШЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ВРОЖДЕННЫЙ ИММУНИТЕТ И MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS

1.1. Возбудитель туберкулеза — Mycobacterium tuberculosis.

1.2. Антимикобактериальная активность макрофагов.

1.3. Антимикобактериальные эффекты цитокинов.

1.4. Противомикробные пептиды в защите от M.tuberculosis.

1.5. Пути уклонения M.tuberculosis от иммунной системы.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Получение суперлимфа и его характеристика.

2.2. Микобактериальные штаммы.

2.3. Линейные мыши.

2.4. Получение суспензии одиночных клеток микобактерий туберкулеза.

2.5. Получение перитонеальных макрофагов мышей.

2.6. Оценка антимикобактериального действия комплекса природных цитокинов и противомикробных пептидов

2.6.1. Оценка роста M.tuberculosis нитратредуктазным методом на агаризированной среде Дюбо.

2.6.2. Оценка роста M.tuberculosis в жидкой питательной среде RPMI 1640.

2.6.3. Оценка цитопатогенного действия M.tuberculosis на Макрофаги.

2.7. Статистическая обработка результатов.

ГЛАВА 3. ИЗУЧЕНИЕ АНТИМИКОБАКТЕРИАЛЬНОГО ДЕЙСТВИЯ КОМПЛЕКСА ПРИРОДНЫХ ЦИТОКИНОВ И ПРОТИВОМИКРОБНЫХ ПЕПТИДОВ НА РОСТ М. TUBERCULOSIS in vitro.

3.1. Влияние суперлимфа на рост М. tuberculosis H37Rv на агаризированной среде Дюбо.

3.2. Влияние суперлимфа на рост M.tuberculosis H37Rv в жидкой питательной среде in vitro.

3.3. Влияние суперлимфа на рост M.tuberculosis с МЛУ в жидкой питательной среде in vitro.

ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ КОМПЛЕКСА ПРИРОДНЫХ ЦИТОКИНОВ И ПРОТИВОМИКРОБНЫХ ПЕПТИДОВ В МОДЕЛИ ex vivo НА МАКРОФАГИ, ИНФИЦИРОВАННЫЕ М. TUBERCULOSIS.

4.1. Влияние суперлимфа на рост M.tuberculosis H37R.V и M.tuberculosis с МЛУ, фагоцитированных макрофагами.

4.2. Оценка предварительной инкубации макрофагов с суперлимфом на рост M.tuberculosis H37Rv и M.tuberculosis с МЛУ, фагоцитированных макрофагами.

ГЛАВА 5. ИЗУЧЕНИЕ ПРОТЕКТИВНОГО ДЕЙСТВИЯ КОМПЛЕКСА ПРИРОДНЫХ ЦИТОКИНОВ И ПРОТИВОМИКРОБНЫХ ПЕПТИДОВ НА МАКРОФАГИ, ИНФИЦИРОВАННЫЕ M.TUBERCULOSIS ex vivo.

5.1. Оценка цитотоксического эффекта суперлимфа на интактные макрофаги.

5.2. Протективное действие суперлимфа на макрофаги, инфицированные М.tuberculosis H37Rv и M.tuberculosis с МЛУ.

5.3. Усиление протективного эффекта суперлимфа на макрофаги, инфицированные M.tuberculosis H37Rv к M.tuberculosis с МЛУ.

ГЛАВА 6. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение антимикобактериального действия комплекса природных цитокинов и противомикробных пептидов»

АКТУАЛЬНОСТЬ РАБОТЫ.

В настоящее время туберкулез приобретает все большее значение среди инфекционных1 заболеваний, приводящих к летальному исходу, что во многом связано с увеличением лекарственно устойчивых штаммов.

Туберкулез вызывают патогенные бактерии Mycobacterium tuberculosis при определенных условиях, прежде всего, при снижении эффективности функционирования иммунной системы. Кроме того, M.tuberculosis, как внутриклеточные патогены, способны выживать и размножаться в фаголизосомах фагоцитов, уклоняясь от защитных иммунных механизмов. Появление устойчивости микобактерий туберкулеза к основным противотуберкулезным препаратам является* острой проблемой диктующей необходимость разработки новых подходов к лечению туберкулеза, заключающихся как в прямом воздействии на возбудителя, так и опосредованном, через активацию внутриклеточного механизма подавления микобактерии туберкулеза.

В последние годы большое внимание уделяют роли противомикробных пептидов (ПМП) в реакциях врожденного иммунитета. Известно, что ПМП служат первичной защитой от патогенов и задействованы в системе врожденного иммунитета. На сегодняшний день охарактеризовано более 1000 таких пептидов. Они включают в себя молекулы многих тканей и типов клеток позвоночных, беспозвоночных, растений и грибов. У млекопитающих охарактеризованы такие ПМП, как дефенсины, кателицидины и другие. Особое место среди кателицидинов занимают катионные ПМП свиньи нейтрофильного происхождения -протегрины. Протегрины впервые были открыты отечественными учеными во главе с Кокряковым В.Н [8, 9]. ПМП вызывают прямое ингибирование метаболических процессов и нарушение целостности клеточной мембраны [31]. В работах зарубежных исследователей продемонстрировано антимикобактериальное действие ПМП. P. Jlepep показал угнетение роста M.tuberculosis при воздействии ПМП (дефенсинов человека и кролика, протегринов свиньи) [85]. Другие ученые исследовали прямое действия а-дефенсина человека (HNP 1) на M.tuberculosis H37Rv и опосредованное в культуре зараженных макрофагов (МФ) крысы. Результаты выявили бактерицидное действие в отношении M.tuberculosis [110].

В связи с этим нам представилось важным изучение прямого антимикобактериального действия комплекса природных цитокинов и противомикробных пептидов (препарата суперлимф), а также опосредованного макрофагами действия после их обработки препаратом ех vivo.

Препарат суперлимф (молекулярная масса до 35 кД) представляет собой комплекс природных цитокинов: интерлейкинов (ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-6), фактора некроза опухоли а (ФНО-а), фактора, ингибирующего миграцию , макрофагов (МИФ), трансформирующего фактора роста (ТФР(3). Наряду с цитокинами, в низкомолекулярной фракции суперлимфа идентифицированы пептиды, подобные катионным противомикробным пептидам — протегринам, с прямым противовирусным и противомикробным действиями. В экспериментах in vitro было показано прямое антибактериальное действие препарата в отношении Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Streptococcus pyogenes [5,6], а также противовирусное действие в отношении вируса простого герпеса [7].

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Целью работы явилось изучение действия комплекса природных цитокинов и противомикробных пептидов (препарат суперлимф) на M.tuberculosis и на макрофаги, инфицированные M.tuberculosis.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Выбор модели для изучения активности комплекса природных цитокинов и противомикробных пептидов.

2. Изучение действия комплекса природных цитокинов и противомикробных пептидов на рост штаммов М. tuberculosis с различной чувствительностью к противотуберкулезным препаратам в модели in vitro.

3. Оценка in vitro цитотоксического действия комплекса природных цитокинов и противомикробных пептидов на интактные макрофаги мыши.

4. Изучение влияния комплекса природных цитокинов и противомикробных пептидов на рост M.tuberculosis H37Rv, фагоцитированных макрофагами, в модели ex vivo.

5. Изучение влияния комплекса природных цитокинов и противомикробных пептидов на рост лекарственно-устойчивых

M.tuberculosis, фагоцитированных макрофагами, в модели ex vivo.

6. Оценка протективной активности комплекса природных цитокинов и противомикробных пептидов в отношении макрофагов, инфицированных M.tuberculosis ex vivo.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА.

В работе впервые в одной модели проведено изучение влияния комплекса природных цитокинов и противомикробных пептидов (препарат суперлимф) на рост M.tuberculosis с различной чувствительностью к противотуберкулезным препаратам и на макрофаги, инфицированные M.tuberculosis. Впервые показано ингибирующее действие препарата суперлимф на рост in vitro лабораторного вирулентного штамма M.tuberculosis H37Rv. Впервые выявлено, что обработка макрофагов суперлимфом до инфицирования микобактериями туберкулеза, приводит к снижению роста чувствительного штамма М. tuberculosis H37Rv и штамма M.tuberculosis с множественной лекарственной устойчивостью, фагоцитированных макрофагами, а также уменьшает цитопатогенный эффект, оказываемый M.tuberculosis на макрофаги.

Действие КПЦ и ПМП на микобактерии туберкулеза опосредуется двумя путями. Прямой антимикобактериальный эффект обусловлен низкомолекулярной фракцией, содержащей протегрин-подобные пептиды. Основой другого механизма является регуляция функции макрофагов, фагоцитировавших микобактерии туберкулеза. В этом случае бактерицидная активность фагоцитов стимулируется цитокинами, что приводит к усилению выработки ими активных форм кислорода и азота, продукции аутологичных цитокинов, способствуя, таким образом, разрушению патогенов. "

Полученные результаты расширяют представления о механизмах врожденного иммунного ответа на микобактерии туберкулеза. Что может служить основой для разработки новых методов иммунокоррекции на основе противомикробных пептидов и цитокинов.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

1. Сочетание экспериментов in vitro и ex vivo позволяет оценить активность препарата не только в отношении возбудителя туберкулеза, но и определить действие, оказываемое им на эффекторные клетки, играющие центральную роль в противотуберкулезной защите.

2. Комплекс природных цитокинов и противомикробных пептидов при воздействии in vitro и ex vivo ингибирует рост M.tuberculosis H37Rv. Степень угнетения роста зависит от дозы препарата. Максимальный эффект оказывает препарат в концентрации 5 мкг/мл.

3. На рост штамма M.tuberculosis с МЛУ комплекс природных цитокинов и противомикробных пептидов оказывает ингибирующее влияние только на микобактерии, фагоцитированные макрофагами в модели ex vivo.

4. Комплекс природных цитокинов и противомикробных пептидов не оказывает цитотоксического действия на интактные макрофаги и проявляет протективный эффект в отношении макрофагов, инфицированных M.tuberculosis, снижая цитопатогенный эффект микобактерий на макрофаги.

5. Антимикобактериальная активность макрофагов повышается при предварительной 24-часовой инкубации (до инфицирования) с комплексом природных цитокинов и противомикробных пептидов, что подтверждается снижением подавляющей рост концентрации препарата до 1 мкг/мл в отношении чувствительного штамма M.tuberculosis H37Rv и появлением ингибирующего эффекта на рост М. tuberculosis с МЛУ.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ.

Туберкулез представляет одну из важнейших проблем, поскольку на сегодняшний день его распространенность составляет 190,5 случая на 100 тысяч населения, заболеваемость 85,1 на 100 тысяч населения, смертность 17,9 на 100 тысяч. Практическая значимость работы определяется важностью поиска новых лекарственных средств на основе биотехнологических продуктов для лечения туберкулезной инфекции. Изучение влияния КПЦ и ПМП на модели макрофагов, инфицированных микобактериями туберкулеза, позволит лучше понять механизмы протективного иммунного ответа на возбудителя болезни. Полученные данные об антимикобактериальном эффекте препарата суперлимф обосновывают клиническую перспективность этого лекарственного средства.

Заключение диссертации по теме «Клиническая иммунология, аллергология», Гвоздева, Юлия Викторовна

ВЫВОДЫ.

1. Комплекс природных цитокинов и противомикробных пептидов в концентрации 5 мкг/мл подавлял рост лабораторного вирулентного штамма M.tuberculosis H37Rv in vitro.

2. Комплекс природных цитокинов и противомикробных пептидов в концентрациях 0,1 мкг/мл, 1 мкг/мл, 5 мкг/мл не оказывал цитотоксического действия на интактные макрофаги мыши.

3. Культивирование комплекса природных цитокинов и противомикробных пептидов в концентрации 5мкг/мл с макрофагами, инфицированными M.tuberculosis H37Rv, приводило к подавлению роста микобактерий и снижению цитопатогенного эффекта микобактерий на макрофаги мыши.

4. Культивирование комплекса природных цитокинов и противомикробных пептидов ' с макрофагами, инфицированными M.tuberculosis с множественной лекарственной устойчивостью, не оказывало влияния на жизнеспособность микобактерий, однако уменьшало цитопатогенный эффект микобактерий на макрофаги.

5. Предварительная обработка интактных макрофагов мыши в течение 24 часов комплексом природных цитокинов и противомикробных пептидов усиливала антимикобактериальный эффект, который проявлялся в отношении фагоцитированных микобактерий (чувствительного штамма M.tuberculosis H37Rv при концентрациях 5 мкг/мл и 1 мкг/мл и M.tuberculosis с МЛУ при концентрации 5 мкг/мл).

6. Предварительная обработка интактных макрофагов мыши комплексом природных цитокинов и противомикробных пептидов в течение 24 часов усиливала протективное действие препарата на макрофаги при их последующем инфицировании M.tuberculosis H37Rv и M.tuberculosis с МЛУ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

Использованная модель для изучения влияния комплекса природных цитокинов и противомикробных пептидов in vitro и ex vivo позволила оценить активность препарата, как в отношении возбудителя туберкулеза, так и макрофагов мыши, инфицированных M.tuberculosis. Предложенный методический подход может быть рекомендован в качестве модели для комплексной оценки влияния вновь создаваемых препаратов на макрофаги человека и внутриклеточные патогены.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Гвоздева, Юлия Викторовна, 2010 год

1. Авербах М.М. Иммунология и иммунопатология туберкулеза // М. Медицина. 1976. - С.312.

2. Андреевская С.Н., Черноусова Л.Н., Смирнова Т.Г. Ларионова Е.Е., Кузьмин А.В. Изучение ex vivo роста в макофагах штаммов разных генотипических кластеров // Пробл. туб. 2006. — №12. - С. 43-48.

3. Голышевская В .И., Иртуганова О.А., Смирнова Н.С., Домотенко Л. В. Сравнение нитратредуктазного и автоматизированного ВАСТЕС MGIT 960 AST методов определения лекарственной чувствительности микобактерий туберкулёза // Пробл. туб. 2003. - №8. - С.34-37.

4. Еремеев В.В., Майоров К.Б. Взаимодействие макрофаг-микобактерия в процессе реакции микроорганизма на туберкулезную инфекцию // Пробл. туберкулеза. 2002. - №3 - С.54-58.

5. Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В., Мороз А.Ф. и др. \1

6. Противостафилококковое действие комплекса природных цитокинов // Журн. микробиол. 2004. - №15 - С.5-59.

7. Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В., Аведова Т.А. и др. Бактерицидное действие комплекса природных цитокинов на Streptococus pyogenes in vitro II Журн. микробиол. 2006. - №3 - С.67-71.

8. Ковальчук Л.В., Лавров В.Ф., Ганковская Л.В. и др. Подавление цитопатического действия вируса герпеса простого 1 типа комплексом природных цитокинов (препаратом Суперлимф) in vitro II Журн. микробиол. 2005. - № 1 - С.57-60.

9. Кокряков В.Н. 1999. Биология антибиотиков животного происхождения //Монография. «Наука», Санкт-Петербург. 1999.

10. Кокряков В.Н. Ковальчук JI.B, Алешина Г.М, и др. Катионные противомикробные пептиды как молекулярные факторы иммунитета: мультифункциональность // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 2006. №2 - С.98-105.

11. Кокряков В.Н., Ротова В.Е., Мазинг Ю.А. Морфобиохимические основы функциональной активности нейтрофилов млекопитающих // Морфофункциональные аспекты несиецифической резистентности и демиелинизирующих заболеваний. J1. — 1981. — С.31-45.

12. Тунгусова О.С., Марьяндышев А.О. Молекулярные механизмы формирования лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза // Пробл. туберкулеза. 2001. - №6 - С.48-49.

13. Abel В., Thieblemont N., Quesniaux V.J. et al. Toll-like receptor 4 expression is required to control chronic Mycobacterium tuberculosis infection in mice // J. Immunol. 2002. - Vol. 169(6) - P.3155-3162.

14. Aderem, A. and Ulevith. R. Toll-like receptors in the induction of the innate immune response // Nature. 2000. - Vol. 406 - P.782-787.

15. Akaki Т., Sato K., Shimizu Т., Tomioka H. Changes in antibacterial activity of murine peritoneal macrophages against Mycobacterium tuberculosis after prolonged in vitro precultivation // Kekkaku. 2000. - Vol. 75(7) - P.477-482.

16. Akira S, Takeda K, Kaisho T. Toll-like receptors: critical proteins linking innate and acquired immunity //Nat. Immunol. 2001. - Vol.2 - P.675-680.

17. D'Arcy Hart, M.R. Young, M.M. Jordan Chemical inhibitors of phagosome-lysosome fusion in cultured macrophages // J.Exp.Med. 1989. - Vol.158 -P.477-492.

18. Ashitani J., Mukae H., Hiratsuka T. et al. Elevated levels of alpha-defensins in plasma and BAL fluid of patients with active pulmonary tuberculosis // Chest. -2002.-Vol. 121(2)-P.519-26.

19. Allen M.J., A. Laederach, PJ. Reilly, Mason R.J. Polysaccharide recognition by surfactant protein D: novel interactions of a C-type lectin with nonterminal glucosyl residues // Biochemistry. 2001. - Vol.40 - P.7789-7798.

20. Bafica A, Scanga CA, Feng CG, Leifer C, Cheever A, Sher A. TLR9 regulates Thl responses and cooperates with TLR2 in mediating optimal resistance to Mycobacterium tuberculosis // J. Exp. Med. 2005. - Vol.202 - P. 17151724.

21. Bals R., Wang X., Wu Z., Baftia V., Zasloff M. and Wilson J.M. Humman p-defensin 2 is a salt- sensitive peptide antibiotic expressed in hummah luhg // J. Clin. Invest. 1998. - Vol.l02 -P.874-880.

22. Bals, R., and J. M. Wilson. Cathelicidins—a family of multifunctional antimicrobial peptides // Cell. Mol. Life Sci. -2003. Vol.60 - P.711-720.

23. Barne.s P.P., LLI S., Abrams J.S., Wang E., Yamaniura M. Modlin R.I. Cytokine production at the site of disease in human tuberculosis // Infect. Immun. -1993 Vol.61 -P:3482-3489.

24. Berrington WR, Hawn TR. Mycobacterium tuberculosis, macrophages, and the innate immune response: does common variation matter // Immunol. Rev. 2007 - Vol.219 - P. 167-86.

25. Beutler B, et al. Genetic analysis of host resistance: Toll-like receptor signaling and immunity at large // Annu Rev. Immunol. -2006 Vol.24 -P.353-389.

26. Blackwell J.M., Searle S., Mohamed H., White J.K. Divalent cation transport and susceptibility to infectious and autoimmune disease: continuation of the1.y/Lsh/Bcg/Nramp 1 /Sic 1 lal gene story II Immunol. Lett. 2003. - Vol.85(2) -P. 197-203.

27. Boneca, I. G. The role of peptidoglycan in pathogenesis // Curr. Opin. Microbiol. 2005. - Vol.8 - P.46-53.

28. Branger J., Leemans J.C., Florquin S. et al. Toll-like receptor 4 plays a protective role in pulmonary tuberculosis in mice // Int. Immunol. 2004 — Vol. 16(3) -P.509-516.

29. Brennan, P. J. und Nikaido, H.: The envelope of mycobacteria // Annu Rev.Biochem. 1995. - Vol.64 -P.29-63.

30. Brightbill HD, et al. Host defense mechanisms triggered by microbial lipoproteins through toll-like receptors // Science. 1999 - Vol.285 - P.732-736.

31. Brogden K.A. Antimicrobial peptides: pore formers or metabolic inhibitors in bacteria // Nat. Rev. Microbiol. 2005 - Vol.3 - P.238-250.

32. Brown GD. Dectin-1: a signalling non-TLR pattern-recognition receptor // Nat. Rev. Immunol. 2006 - Vol.6 - P.33-43.

33. Buwitt-Beckmann U, et al. Toll-like receptor 6-independent signaling by diacylated lipopeptides // Eur. J. Immunol. 2005. - Vol.35 - P.282-289.

34. Chertov O., Michiel D.F., Xu L., Wang J.M., Wooters J. et. al. Identification of defensin-1, defensin-2 and CAP37 / azurocidin as T-cells chemoattractant proteins released from IL-8-stimulated neutrophils // Chem. Biol. 1996. -Vol.271 -P.2935-2940.

35. Chertov О, Yang D, Howard OM, Oppenheim JJ. Leukocyte granule proteins mobilize innate host defenses and adaptive immune responses // Immunol. Rev. 2000. - Vol. 177 - P.68-78.

36. Cooper AM. Cell-mediated immune responses in tuberculosis // Annu. Rev. Immunol. 2009. - Vol.27 - P.393-^22.

37. Dao, D. N., L. Kremer, Y. Guerardel, A. Molano, W. R. Jacobs, Jr, S. A. Porcelli, V. Briken. Mycobacterium tuberculosis lipomannan induces apoptosis and interleukin-12 production in macrophages // Infect. Immun. -2004. Vol.72 - P.2067-2074.

38. Eckman L. Defence molecules in intestinal innate immunity against bacterial infections // Current Opinion Gastoenterology. 2005. - Vol. 2 - P. 147-149.

39. Ellis S.M. The spectrum of tuberculosis and non-tuberculous mycobacterial infection // Eur. Radiol. 2004. - Vol. 14 - P.34-42.

40. Fenhalls G, Wong A, Bezuidenhout J, van Helden P, Bardin P, Lukey PT. In situ production of gamma interferon, interleukin-4 and tumour necrosis factor alpha mRNA in human lung tuberculous granulomas // Infect. Immun 2000.- Vol.68 P.2827-36.

41. Flesch IE, Hess JH, Oswald IP, Kaufmann SH. Growth inhibition of Mycobacterium bovis by IFN-gamma stimulated macrophages: regulation by endogenous tumor necrosis factor-alpha and by IL-10 // Int. Immunol. 1994.- Vol.6 P.693—700.

42. Flynn JL, et al. Tumor necrosis factor-alpha is required in the protective immune response against Mycobacterium tuberculosis in mice // Immunity. — 1995.-Vol.2-P.561-572.

43. Flynn JL, Chan J. Immunology of tuberculosis // Annu Rev. Immunol. 2001. - Vol.19-P.93-129.

44. Flynn JL, Chan J. What's good for the host is good for the bug // Trends Microbiol. 2005. - Vol.13 - P. 98-102.

45. Flynn JL. Lessons from experimental Mycobacterium tuberculosis infections // Microbes Infect. 2006. - Vol.8 - P. 1179-1188.

46. Fortsch D, Rollinghoff M, Stenger S. IL-10 converts human dendritic cells into macrophage-like cells with increased antibacterial activity against virulent Mycobacterium tuberculosis // J. Immunol. 2000. - Vol.165 -P.978-87.

47. Fremond C.M., Yeremeev V., Nicolle D.M. et al. Fatal Mycobacterium tuberculosis infection despite adaptive immune response in the absence of MyD88 // J. Clin. Invest. 2004. - Vol.114(12) - P.1790-1799.

48. Fu LM. The potential of human neutrophil peptides in tuberculosis therapy // Tuberc. Lung Dis. 2003. - Vol.7(l 1) - P.l027-1032.

49. Gagneux S, DeRiemer K, Van T, Kato-Maeda M, de Jong ВС, Narayanan S, et al. Variable host-pathogen compatibility in Mycobacterium tuberculosis // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 2006. Vol.l03(8) -P.2869-2873.

50. Ganz T. Defensins: antimicrobial peptides of innate immunity // Nat. Rev. Immunol. 2003. - Vol.3 - P.710-720.

51. Ganz, Т., M. E. Selsted, and R. I. Lehrer. Defensins // Eur. J. Haematol. -1990.-Vol.44-P. 1-8.

52. Gilleron, M,. L. Bala, T. Brando, A. Vercellone, and G. Puzo Mycobacterium tuberculosis H37Rv parietal and cellular lipoarabinomannans.

53. Characterization of the acyl- and glyco-forms // Biol. Chem. 2000. - Vol.l -P.677-684.

54. Gordon, A.H., P.D'Arcy Hart, and M.R Young. Ammonia inhibits phagosome-lysosome fusion in macrophages // Nature (London). -1980. — Vol.286-P.79-81.

55. Gray D, Gray M, Barr T. Innate responses // Eur. J. Immunol. -2007. Vol.37 -P.33 04-3310.

56. Hanekom WA, Abel B, Scriba TJ. Immunological protection against tuberculosis // S. Afr. Med. J. 2007. - Vol.97 - P.973-978.

57. Hancock R. E., Diamond G. The role of cationic antimicrobial peptides in innate host defences // Trends Microbiol. 2000. - Vol.8 - P.402—410.

58. Hazlett L, Wu M. Defensins and cathelicidins in lung immunity // Innate Immun. 2010. - Vol. 16(3) -P.l51-159.

59. Herr C., Shaykhiev R., Bals R. The role of cathelicidin and defensins in pulmonary inflammatory diseases // Expert Opin. Biol. Ther. 2007. -Vol.7(9) — P. 1449-1461.

60. Hill C.P., Yee J., Selsted M. E., Eisenberg D. С rystal structure of defensin HNP-3 ,an amphiphilic dimmer: mechanisms of membrane permeabilization // Science. 1991.-Vol. 251 -P. 1481-1485.

61. Hirsch CS, Ellner JJ, Russell DG et al. Complement receptor-mediated uptake and tumor necrosis factor-alpha-mediated growth inhibition of Mycobacterium tuberculosis by human alveolar macrophages // J. Immunol. -1994. Vol.152 - P.743-753.

62. Heldwein KA, Fenton MJ. The role of Toll-like receptors in immunity against mycobacterial infection // Microbes Infect. 2002. - Vol.4 -937-944.

63. Jenssen H, Hamill P, Hancock RE. Peptide antimicrobial agents // Clin. Microbiol. Rev. 2006. - Vol.19 - P.491-511.

64. Kamanaka M, Kim ST, Wan YY, Sutterwala FS, Lara-Tejero M, Galan JE, Harhaj E, Flavell RA. Expression of interleukin-10 in intestinal lymphocytes detected by an interleukin-10 reporter knockin tiger mouse // Immunity. -2006. Vol.25 - P.941—952.

65. Kang PB, Azad AK, Torrelles JB et al. The human macrophage mannose receptor directs Mycobacterium tuberculosis lipoarabinomannan-mediated phagosome biogenesis // J. Exp. Med. 2005. - Vol. 202 - P.987-99.

66. Kaufmann SHE. Protection against tuberculosis: cytokines, T cells, and macrophages // Ann. Rheum. Dis. 2002. - Vol.61 - P.54-58.

67. Kaufmann SH, Cole ST, Mizrahi V, Rubin E, Nathan C. Mycobacterium tuberculosis and the host response // J. Exp. Med. 2005. - Vol.201(ll) -P.l 693-1697.

68. Kaufmann SH, Schaible UE. Antigen presentation and recognition in bacterial infections // Curr. Opin. Immunol. 2005. - Vol.17 - P.79-87.

69. Keertan Dheda, Stephan K. Schwander, Bingdong Zhu, Richard N.The immunology of tuberculosis: From bench to bedside // Respirology. 2010. -Vol.15-P.433-450.

70. Kokryakov V.N., Harwig S.S., Panyutich E.A. et al. Protegrins. Leukocyte antimivrobial peptides that combine features of corticostatic defensins and tachyplesins // FEBS Lett. 1993. - Vol.8 - P.327-331.

71. Lehrer R. I., Lichtenstein A. K., Ganz T. Defensins: antimicrobial;and cytotoxic peptides of mammalian cells // Annu. Rev.Immunol. -1993. -Vol.l 1 — P.105—128.

72. Lehrer R.I., The fungicidal mechanisms of human monocites. Evidence for myeloperoxidase-linked and myeloperoxidase-independet candidicidal mechanism // J. Clin. Invest. -1997. -Vol.55 P. 338-346.

73. Lehrer R. I., Ganz T. Defensins of vertebrate animals. // Curr. Opin. Immunol. 2002. - Vol.14 - P.96-102.

74. Lichtenstein A.K., Ganz Т., Selsted M. E., Lehrer R.I. In vitro tumor cell cytolysis mediated by peptide defensins of human and rabbit granucytes // Blood. 1986. - Vol.68 -P.l407—1410.

75. Lichtenstein A.K., Ganz Т.,Nguyen T.M. et al Mechanism of target cytolysis by peptide defensins // J. Immun. 1988. - Vol.140 - P.2686-2694.

76. Liu PT, Modlin RL. Human macrophage host defense against Mycobacterium tuberculosis // Curr. Opin. Immunol. 2008. - Vol.20 - P.371-376.

77. MacMicking J, Xie Q, Nathan C. Nitric oxide and macrophage function // Ann. Rev. Immunol. -1997. Vol.1: - P.323-350.

78. Manca С., Reed M.B., Freeman S. et al. Differential monocyte activation underlies strain-specific Mycobacterium tuberculosis pathogenesis // Infect. Immun. 2004. - Vol. 72(9) - P.5511-5514.

79. Martineau A, Newton S, Wilkinson K, Kampmann D et al, Neutrophil-mediated innate immune resistance to mycobacteria // J. Clin. Invest. -2007. -Vol.117(7) P. 1988-1994.

80. Medzhitov R, Janeway С Jr. The Toll receptor family and microbial recognition // Trends Microbiol. 2000. - Vol.8 - P.452-456.

81. Mendez-Samperio P. Role of antimicrobial peptides in host defense against mycobacterial infections // Peptides. 2008. - Vol.29 - P.l836-1841.

82. Moore KW, de Waal Malefyt R, Coffman RL, O'Garra A. Interleukin-10 and the interleukin-10 receptor // Annu Rev. Immunol. 2001. - Vol.19 - P.683-765.

83. Morr M, Takeuchi O, Akira S, Simon MM, Muhlradt PF. Differential recognition of structural details of bacterial lipopeptides by toll-like receptors // Eur. J. Immunol. 2002. - Vol.32 - P.3337-3347.

84. Murray PJ, Wang L, Onufryk C, Tepper RI, Young RA. T cell-derived IL-10 antagonizes macrophage function in mycobacterial infection // J. Immunol. -1997. -Vol.158 -P.315-321.

85. Nathan, C. und Shiloh, M. U. Reactive oxygen and nitrogen intermediates in the relationship between mammalian hosts and microbial pathogens // Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A. 2000. - Vol.97 (16) - P.8841-8848.

86. Niederweis, M. Mycobacterial porins—new channel proteins in unique outer membranes // Mol. Microbiol. -2003- Vol.49 P. 1167-1177.

87. North R.J., Jung Y.J. Immunity to tuberculosis // Annu. Rev. Immunol. -2004. Vol.22. -P.599-623.

88. Parker L.C., Whyte M.K., Vogel S.N. et al. Toll-like receptor (TLR)2 and TLR4 agonists regulate CCR expression in human monocytic cells // J. Immunol. 2004. - Vol. 172(8) - P.4977-4986.

89. Quesniaux V., Fremond C., Jacobs M. et al. Toll-like receptor pathways in the immune responses to mycobacteria // Microbes Infect. 2004. - Vol.6(10) — P.946-959.

90. Ratledge C. Iron, mycobacteria and tuberculosis // Tuberculosis (Edinb). -2004. Vol.84(l—2). - P. 110-130. ;

91. Reed MB, Domenech P, Manca C, Su H, Barczak AK, Kreiswirth BN, et al. A glycolipid of hypervirulent tuberculosis strains that inhibits the innate immune response // Nature. 2004. - Vol.431(7004) - P.84-87.

92. Reiling N, et al. Cutting edge: Toll-like receptor (TLR)2- and TLR4-mediated pathogen recognition in resistance to air-borne infection with Mycobacterium tuberculosis // J. Immunol. 2002. - Vol.169 - P.3480-3484.

93. Riley L. Eds W. Rom, S. Garay.- II Tuberculosis // Boston. 1996. - P.281-289.

94. Rivas-Santiago, В., E. Sada, V. Tsutsumi, D. Aguilar-Leon, J. L. Contreras, and R. Hernandez-Pando. Beta-defensin gene expression during the course ofexperimental tuberculosis infection // J. Infect. Dis. 2006. - Vol.194 -P.697-701.

95. Rivas-Santiago, В., J. C. Contreras, E. Sada, and R. Hernandez-Pando. The potential role of lung epithelial cells and beta-defensins in experimental latent tuberculosis // Scand. J. Immunol. 2008. - Vol.67 - P.448-452.

96. Rojas M, Olivier M, Gros P, Barrera LF, Garcia LF. TNFa and IL-10 modulate the induction of apoptosis by virulent Mycobacterium tuberculosis in murine macrophages // J. Immunol. 1999. - Vol.162 -P.6122-6131.

97. Sanchez JF, et al. Overexpression and structural study of the cathelicidin motif of the protegrin-3 precursor // Biochemistry. 2002. - Vol.41 - P.21-30.

98. Schnappinger D, Schoolnik GK, Ehrt S. Expression profiling of host pathogen interactions: how Mycobacterium tuberculosis and the macrophage adapt to one another // Microbes Infect. 2006. - Vol.8 - P.l 132-1140.

99. Selsted M. E. Investignation approaches for studyng the structures and biological functios of mysloid antimicrobial peptides // Genetic engineering. -1993.-Vol. 15-P.131-137.

100. Selsted ME, Brown DM, DeLange RJ, Lehrer RI. Primary structures of MCP-1 and MCP-2, natural peptide antibiotics of rabbit lung macrophages // J. Biol. Chem. 1983. - Vol 258 - P.14485-14489.

101. Schlesinger LS, Bellinger-Kawahara CG, Payne NR etal. Phagocytosis of Mycobacterium tuberculosis is mediated by human monocyte complement receptors and complement component C3 // J. Immunol. 1990. - Vol 144 -P.2771-2780.

102. Stenger, S., and R. L. Modlin. Control of Mycobacterium tuberculosis through mammalian Toll-like receptors // Curr. Opin. Immunol. 2002 - Vol 14 -P.452-457.

103. Stewart GR, Robertson BD, Young DB. Tuberculosis: a problem with persistence // Nat. Rev. Microbiol. 2003. - Vol 1 - P.97-105.

104. Storici P, et al.; Purification and structural characterization of bovine cathelicidins, precursors of antimicrobial peptides // Eur. J. Biochem. 1996. -Vol 238 -P.769-776.

105. Tailleux L, Schwartz O, Herrmann JL, Pivert E, Jackson M, Amara A, et al. DC-SIGN is the major Mycobacterium tuberculosis receptor on human dendritic cells // J. Exp. Med. 2003.- Vol 197(1) - P. 121-127.

106. Tapping, R. I., and P. S. Tobias. Mycobacterial lipoarabinomannan mediates physical interactions between TLR1 and TLR2 to induce signaling // Endotoxin Res. 2003. - Vol 4 - P.264-268.

107. Tecle T, Tripathi S, Hartshorn KL. Defensins and cathelicidins in lung immunity// InnateImmun.-2010.-Vol 16(3)-P.151-159.

108. Thoma-Uszynski S, et al. Induction of direct antimicrobial activity through mammalian toll-like receptors // Science. -2001. Vol 291 - P. 1544-1547.

109. Tosi MF. Innate immune responses to infection // J. Allergy Clin. Immunol. -2005.-Vol 116 -P.241-249.

110. Trias, J.; Jarlier, V. und Benz, R.: Porins in the cell wall of mycobacteria // Science. 1992. - Vol 258 - P. 1479-1481.

111. Trinchieri G. Interleukin-12 and the regulation of innate resistance and adaptive immunity // Nat. Rev. Immunol. .2003. - Vol 3 - P. 133-146.

112. Turner J, Frank AA, Brooks JV, Gonzalez-Juarrero M, Orme IM. The progression of chronic tuberculosis in the mouse does not require the participation of В lymphocytes or interleukin-4 // Exp. Gerontol. -2001. Vol 36-P.537-545.

113. Underhill DM, Ozinsky A, Smith KD, Aderem A. Toll-like receptor-2 mediates mycobacteriainduced pro-inflammatory signaling in macrophages // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. - Vol 96 -P.l4459-14463.

114. Vergne I., Chua J., Singh S.B., Deretic V. Cell biology of Mycobacteriumtuberculosis phagosome // Annu. Rev .Cell Dev. Biol. 2004. - Vol.20 1. P.367-394.

115. Wang J.E., A. Warris E.A. Ellingsen P.F. et al. Involvement of CD 14 and tolllike receptors in activation of human monocytes by Aspergillus fumigatus hyphae // Infect. Immun. 2001. - Vol.69 - P.2402-2406.

116. Yamada H, Mizumo S, Horai R, Iwakura Y, Sugawara I. Protective role of interleukin-1 in mycobacterial infection in IL1 alpha/beta double-knockout mice // Lab. Invest. 2000. - Vol 80 - P.759-767.

117. Yang D., Biragyn A., Kwak L.W., Oppenheim J. J. Mammalian defensins in immunity: more than just microbicidal // Trends in Immunol. 2002. - Vol 23 -P.287—291.

118. Yang CS, Shin DM, Kim KH et al; NADPH oxidase 2 interaction with TLR2 is required for efficient innate immune responses to mycobacteria via cathelicidin expression // J. Immunol. 2009. - Vol 182 - P.3696-3705.

119. Yim JJ, Lee HW, Lee HS, Kim YW, Han SK, Shim YS, et al. The association between microsatellite polymorphisms in intron II of the human Toll-like receptor 2 gene and tuberculosis among Koreans // Genes Immun. 2006. — Vol 7(2) — P. 150-155.

120. Zanetti M. Cathelicidins, multifunctional peptides of the innate immunity // J. Leukoc. Biol. 2004. - Vol 75 - Р.39-Ч8.

121. Zasloff M. Antimicrobial peptides of multicellular organism // Nature. 2002. - Vol. 415 -P.389-395.

122. Zasloff, M. Antimicrobial peptides, innate immunity, and the normally sterile urinary tract // J. Am. Soc. Nephrol. 2007. - Vol 18 - P.2810-2816.

123. Zhang P, Summer WR, Bagby GJ, Nelson S. Innate immunity and pulmonary host defense // Immunol. Rev. 2000. - Vol 173 - P.39-51