Гидрозольные препараты - бесприборные иммунохимические экспресс-диагностикумы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат химических наук Куклина, Светлана Анатольевна

• Куклина, Светлана Анатольевна
• кандидат химических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат химических наук Куклина, Светлана Анатольевна

СОДЕРЖАНИЕ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ И МОНИТОРИНГА ИНФЕКЦИОННЫХ И СОМАТИЧЕСКИХ ПАТОЛОГИЙ ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ (обзор литературы)

1.1. Иммунохимические методы, их место в системе клинической лабораторной диагностики.

1.1.1 Прямые методы.

1.1.2 Методы пассивной агглютинации.

1.1.3 Индикаторные методы.

1.1.4 Реакции связывания комплемента.

1.2. Современные методы, близкие к иммунохимическим.

1.3. Практические приложения - примеры конкретного применения иммунохгшических методов.

1.4. Особенности ряда диагностических препаратов, применяемых в иммунохимическом анализе.

1.5. Гидрозольные препараты как экспрессные бесприборные диагностикумы.

1.5.1. Особенности адсорбции биолигандов на гидрозольные препараты.

1.5.2 Ионная адсорбция.

1.5.3 Хемосорбция в синтезе гидрозолей.

1.5.4. Возможное влияние среды на протекание иммунохимических реакций.

1.6. Выводы и постановка задач исследования.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1.Материалы исследования.

2.2 Методы исследования.

2.3. Статистическая обработка полученных результатов.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Выбор типа и дозировки твердофазного носителя для реакции гидрозольной агглютинации.

3.1.1. Коллоидный раствор улътрадисперсных алмазов (УДА) в качестве твердой фазы.

3.1.2. Коллоидный раствор на основе органического материала (парафин) в качестве твердой фазы.

3.1.3. Коллоидный раствор гексацианоферрата (II) железа (III) в качестве твердой фазы.

3.2. Выбор типа и дозировки модификатора при хемосорбции биолиганда на основе раствора гексацианоферрата (II) железа(Ш).

3.3. Выбор и оптимизация состава разводящего раствора с учетом pH и ионной силы буфера при постановке реакции иммунохимической гидрозольной агглютинации.

3.4. Выбор носителя для визуализации результатов реакции гидрозольной агглютинации.

3.5. Экспериментальные данные по определению антител к вирусу H5N1 (вирус птичьего гриппа) в сыворотке крови.

3.6. Экспериментальные данные по определению антител к М.

Tuberculosis (туберкулез) в сыворотке крови.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИСПЫТАНИЙ ГИДРОЗОЛЕЙ В КЛИНИЧЕСКИХ

УСЛОВИЯХ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Гидрозольные препараты - бесприборные иммунохимические экспресс-диагностикумы»

Актуальность проблемы. Иммунохимические исследования являются важнейшим этапом в первичной диагностике различных инфекционных и соматических патологий. Идеология лабораторного анализа в медицине основана на понимании любого заболевания как реакции целого организма. Патологическое изменение функции какого-либо органа, ткани, группы клеток вызывает отклонение от нормальных показателей в работе других органов, тканей, систем. Наряду с неспецифическим, то есть свойственным для многих видов патологии проявлением отклонений, в большинстве случаев, наблюдаются особые, характерные лишь для данного заболевания, изменения внутренней среды организма. При инфекционных заболеваниях, а также соматических — это появление во внутренней среде организма возбудителя или его продуктов (токсины, антигены и т.д.) и иммунный ответ на возбудитель [17]. При развитии патологического состояния болезни в организме человека в его биологических жидкостях: крови, моче, слюне -появляются определенные маркеры - специфические вещества сложной, как правило, белковой природы. Эти специфические маркеры, ассоциированные с тем или иным заболеванием (например, антитела к ВИЧ, раковый эмбриональный антиген, НЬбА§ и т.д.), при помощи иммунохимических методов могут выявляться в количествах исчезающе малых: 1 нанограмм в миллилитре и менее, что соответствует очень ранним стадиям начала заболевания. Иммунохимические методы позволяют объективно и адекватно судить о правильности терапевтических либо иных методов лечения. Не менее важны эти методы и в ветеринарии, а также в работе самих биотехнологических производств для адекватного контроля качества выпускаемых препаратов.

В настоящее время во всём мире диагностика как собственно различных инфекционных и соматических патологий, так и мониторинг поствакцинального иммунитета осуществляется при помощи приборных иммунохимических методов (наряду с длительными по времени и ещё более затратными бактериологическими и вирусологическими методами). К наиболее часто применяемым могут быть отнесены методы иммуноферментного анализа (ИФА), радиоиммунного анализа (РИА), иммуноблоттинг и метод полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Для этих методов характерны высокая чувствительность и точность результатов, возможность их автоматизации. Вместе с тем, они отличаются значительной дороговизной (1-3 доллара за 1 анализ ИФА, 2050 долларов за 1 анализ ПЦР), неэкспрессностью - время подготовки образцов, постановки и интерпретации результатов составляет в среднем от 3 часов (ИФА) до 1 суток (ПЦР, иммуноблоттинг).

Кроме того, эти методы возможно реализовать исключительно с использованием специальных и дорогих приборов, часто импортных. Наличие этого оборудования в составе специализированных лабораторий, особенно в райцентрах и сельской местности, проблематично и попросту экономически неоправданно. Более того, сами наборы реактивов для ИФА, РИА, иммуноблоттинга и ПЦР часто являются импортными, и это ставит Российскую Федерацию в опасное положение импортозависимости по проблеме, имеющей общефедеральное значение. Нельзя также сбрасывать со счетов «капризность» ферментных меток, необходимость специальных условий их хранения, малодоступных в сельской местности, опасность радиоактивных меток, необходимость соблюдения специальных мер по их условиям хранения и технике безопасности. В источниках по данному вопросу неоднократно также отмечались канцерогенность и токсичность компонентов этих наборов, что приводит к необходимости соблюдения ряда мер по специальной технике безопасности работающих [26, 27, 31, 48, 73, 83].

Всё вышесказанное подтверждает тот факт, что методы ИФА, РИА, иммуноблоттинг и ПЦР применяются, прежде всего, как верифицирующие тесты, но не как скриннинговые анализы. На транспортировку и постановку анализа ПЦР уходит примерно двое суток, что позволяет распространиться вирусу птичьего гриппа на домашнюю птицу и человека, вызывая последующее развитие полномасштабной эпидемии с катастрофическими последствиями.

На сегодняшний день необходимо внедрять в практическую деятельность врача новые экспрессные методы ранней диагностики. В распоряжении любого врача-клинициста должны быть диагностические препараты, позволяющие осуществить первичную диагностику (по принципу «да» - «нет») с последующим более полным исследованием в случае «да» конкретной патологии, соответствующей его специальности, то есть осуществлять скриннинговые исследования.

Препараты для экспресс - диагностики должны быть дешевыми, а постановка реакции и считывание результатов занимать не более 1-2 минут. Кроме того, экспресс-диагностика не должна требовать дополнительных приборов, должна давать возможность ставить реакции с малыми объемами препарата и биоматериала, взятого от больного (10-20 мкл) и иметь стабильные и воспроизводимые иммунохимические свойства, то есть выявлять маркеры того или иного заболевания в самом широком спектре биологических жидкостей (в моче, слюне, сыворотке крови и т.д.) в минимальных концентрациях.

Для установления первичного диагноза в поликлиническом лечебном заведении, для анализа образцов в лаборатории СЭС, для массового скрининга необходимы простые, но надежные и чувствительные методы, позволяющие проводить десятки и сотни анализов в сутки. В настоящее время иммунохимические методы далеки от сформулированных выше требований. Большинство из них требуют длительного времени и дорогостоящего оборудования, а стоимость одного анализа составляет в зависимости от метода от 3 до 10 долларов и более.

В последнее время предложено решение данной задачи -использование в качестве дйагностикумов гидрозольных препаратов. Гидрозольные препараты представляют собой коллоидные растворы на основе неорганических объектов, в частности, комплексного соединения — гексацианоферрата (И) железа (III), более известного под тривиальным названием «берлинская лазурь». Данный вид иммунологического анализа является полуколичественным, основан на методе гидрозольной агглютинации [40]. Антитела оценивается по предельным титрам (концентрациям), а антигены - путём постановки параллельной реакции с референсным препаратом. Реакция происходит в лунках планшета, куда закапывают разведённую гидрозоль и затем разведённый биоматериал. Результат считывается визуально. Общее время постановки 10-15 минут [47].

В настоящее время имеются данные о гидрозольных препаратах на основе неорганических объектов - это золь гексацианоферрата (II) железа (III), в качестве оптимальной твёрдой фазы, предназначенного для определения туберкулёзных антител в сыворотке крови больных в постановке на стекле [47], а также золь оксида железа (III) в качестве оптимальной твёрдой фазы, предназначенного для определения антител к вирусу сальмонеллеза в сыворотке крови больных [34]. Данные препараты могут служить основой для разработки большого количества бесприборных диагностических систем и могут использоваться там, где требуется выявить феномен взаимодействия антигена с антителом.

Однако ряд вопросов, связанных с оптимизацией свойств гидрозольных препаратов: содержание и тип модификатора, pH разводящего раствора, оптимальный способ постановки и визуализации результатов, остается до конца нерешенным. Также возникают вопросы о возможности синтеза гидрозольных препаратов на основе органических объектов, изучение их свойств и о новых способах фиксации результатов.

Изучение потери агрегативной устойчивости коллоидных растворов, нагруженных системой «антиген - антитело» являлось объектом наших исследований, причем эта потеря агрегативной устойчивости приводила к практическому результату - фактической постановке диагноза.

Данные факты и предопределяют актуальность проводимых нами научных исследований. Таким образом, основным предметом нашего исследования стали разработка и создание экспрессных иммунохимических коллоидных препаратов на основе ультрадисперсных частиц неорганической и органической природы.

Цель исследования.

1. Изучение особенностей синтеза и состава гидрозольных диагностикумов на основе ультрадисперсных частиц неорганической и органической природы, на поверхность которых сорбированы специфические белки - антигены.

2. Получение и апробация диагностических препаратов на выявление маркеров таких заболеваний, как туберкулез, сифилис, птичий грипп.

Задачи исследования.

1. Выбор типа твердофазного носителя для реакции гидрозольной агглютинации.

2. Установление типа и дозировки модификатора при хемосорбции биолиганда на коллоидные частицы гексацианоферрата (II) железа (III) («берлинской лазури»).

3. Выбор типа разводящего раствора с учетом pH и процентной концентрации раствора соли при постановке реакции иммунохимической гидрозольной агглютинации.

4. Исследование объективного способа постановки и фиксации результатов реакции гидрозольной агглютинации.

5. Получение и апробация диагностических препаратов на выявление маркеров таких заболеваний, как туберкулез, сифилис, птичий грипп.

Научная новизна.

Впервые проведено комплексное исследование органического (парафин) и неорганического материала (ультрадисперсные алмазы) в качестве твердой фазы для последующего изготовления гидрозольных диагностических препаратов.

Установлено, что малодиссоциирующие соли d-переходных металлов являются лучшими модификаторами, обеспечивающими наиболее эффективное ковалентное связывание белка с неорганическим носителем — коллоидным раствором гексацианоферрата (И) железа (III) с целью создания стабильных конъюгатов с воспроизводимыми иммунохимическими свойствами.

Впервые оптимизирован состав разводящего раствора для реакции гидрозольной агглютинации для гидрозоля - гексацианоферрата (И) железа (III). Впервые получены гидрозольные иммунохимические диагностикумы на выявление маркеров таких заболеваний, как сифилис и птичий грипп.

Положения, выносимые на защиту.

1. Гидрозольные препараты могут быть получены не только на основе неорганических коллоидных растворов, но и коллоидных растворов ультрадисперсных алмазов (УДА), а также на основе органического вещества - коллоидного раствора парафина.

2. Для адсорбции биолигандов на поверхность золя гексацианоферрата (II) железа (III) необходим химический модификатор, оптимальными следует признать катионы тяжелых металлов: Hg2+, Pb2+ в виде малодиссоциирующих солей в водном растворе.

3. Разводящим раствором, обеспечивающим высокое значение константы аффинитета и авидности реагирующих между собой антигена и антитела следует признать 0,9 - 1% раствор KCl, приготовленный на фосфатном буферном растворе.

Практическая значимость.

Ранее на кафедре общей химии была разработана методика для получения гидрозольных препаратов на основе гексацианоферрата (И) железа (III), так называемой «берлинской лазури». Однако данные препараты имели недостаток: при попытках пассивной адсорбции биолиганда на гидрозоль гексацианоферрата (II) железа (III) не наблюдали адсорбции белка на поверхность твердой фазы. Это выражалось в том, что агглютинационный анализ не происходил во всем диапазоне разведений «+» и «-» сывороток с антителами, комплементарными определенным антигенам. Поэтому необходимо было осуществить комплекс работ по «пришивке» специфических антигенов — белков через определенный модификатор.

В ходе работы была установлена связь между дозировками химических модификаторов на поверхности ультрадисперсных частиц и свойствами получающихся продуктов - иммунохимических гидрозолей, а также связь между pH разводящего раствора и агрегативной устойчивостью гидрозольных препаратов.

В данной работе были впервые исследованы новые носители (коллоидные растворы парафина и ультрадисперсных алмазов) в качестве твердой фазы для создания диагностических препаратов, производящих адсорбцию биолиганда без применения модификатора.

Реализация в практическом здравоохранении.

В ходе работы получены и в последующем апробированы в лабораторно - клинических условиях гидрозольные диагностикумы, предназначенные для выявления маркеров таких заболеваний, как туберкулез, сифилис, птичий грипп.

Испытания производились на базе клинической лаборатории больницы ФГУ ЛИУ — 12 УФСИН России по Кировской обл., на базе лаборатории Биотехнологии диагностических препаратов НИИ гриппа РАМН г. Санкт -Петербурга, в лаборатории диагностического центра ОАО Hi 111 «АВИВАК» г. Санкт - Петербурга. Получены положительные акты испытаний данных диагностикумов в НИИ гриппа РАМН (г. Санкт — Петербург).

Гидрозоли были синтезированы ранее заведующим кафедрой общей химий Кировской ГМА Мешандиным АХ. по оригинальной запатентованной авторской методике.

Объем и структура диссертации.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», Куклина, Светлана Анатольевна

ВЫВОДЫ

Таким образом, в ходе проведенных исследований были выявлены: тип и содержание модификатора, состав разводящего раствора, объективный способ постановки реакции гидрозольной агглютинации и визуализации результатов.

1. В работе изучены диагностические препараты на основе гидрозольных растворов гексацианоферрата (III) железа, ультрадисперсных алмазов, парафина для получения экспрессных иммунохимических диагностикумов. Ультрадисперсные алмазы детонационного синтеза могут использоваться в реакциях типа пассивной гемагглютинации в качестве твердой фазы, однако по скорости прохождения реакции они уступают коллоидному раствору гексацианоферрата (II) железа (III). Коллоидный раствор парафина возможен к рассмотрению в последующем в качестве твердофазного носителя. Наилучшим вариантом является диагностикум на основе коллоидного раствора гексацианоферрата (II) железа (III).

2. Исследован состав компонентов гидрозольных диагностикумов. Доказано: наиболее лучшим модификатором является катион Hg в виде малодиссоциирующей соли HgCl2 в водном растворе. Оптимальным вариантом концентрации модификатора при проведении реакции гидрозольной агглютинации оказалась - 2,0% на 1 мл. гидрозоля, обеспечивающая четкую дифференциацию «+» и «-» сывороток.

3. Определен состав разводящего раствора - раствор KCl, приготовленный на фосфатном буферном растворе, обеспечивающий наилучшую дифференциацию «+» и «-» сывороток. Оптимальным вариантом при проведении иммунохимического анализа оказались концентрации 0,9% и 1,0% раствора KCl, приготовленного на фосфатном буферном растворе.

4. Наилучший способ визуализации полученных результатов на фильтровальной бумаге. Такая визуализация результатов на фильтровальной бумаге показывает четкую дифференциацию «+» и «-» сывороток, а также дает возможность длительного хранения результатов.

5. В результате получены акты испытаний гидрозольных препаратов в сторонних организациях исходя из методик и рекомендаций по синтезу и оптимальному применению гидрозолей в настоящей диссертационной работе.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

1. Диагностика туберкулёза в России в настоящее время становится всё более сложной проблемой. Это связано в первую очередь с нарушением системы выявления туберкулёза из-за недостаточного финансирования. В связи с этим необходимой является разработка новых более доступных и дешевых способов массового скрининга населения на туберкулёз.

2. Реакция гидрозольной агглютинации с антигенным туберкулёзным и сифилисным диагностикумом характеризуется экономичностью, простотой постановки, достаточной специфичностью и чувствительностью, что позволяет рекомендовать её для диагностики туберкулёза и сифилиса.

3. Известно, что техника постановки реакции гидрозольной агглютинации почти полностью совпадает с техникой постановки реакции пассивной гемагглютинации. В связи с этим стоимость анализов будет различаться лишь по стоимости применяемых диагностикумов. Так стоимость эритроцитарного диагностикума, необходимого для постановки одного анализа РПГА, составляла 20 рублей или 0,70 доллара США, тогда как стоимость гидрозольного антигенного диагностикума, полученного нами в экспериментальных условиях и необходимого для постановки одного анализа - 5 рублей или 0,17 доллара США. Стоимость одного анализа методом ИФА - 30 рублей. Серийный выпуск в промышленных условиях позволит сократить затраты на его производство и приведёт к еще большему экономическому эффекту.

4. Целенаправленный мониторинг иностранной прессы и интернет-ресурсов, посвященных данной теме, а также поиск в российских и зарубежных патентных базах данных, показал, что результаты работы в направлении разработки технологий диагностики птичьего гриппа и оценки поствакцинального иммунитета производятся лишь при помощи приборных методов типа ИФА, РИА, ИФЛА и ПЦР -диагностики. Экспрессные и бесприборные тесты на этот вид нозологии отсутствуют, хотя наличие проблемы и её крайняя важность источниками признаётся. Проблема эта является, на самом деле, особо важной и первостепенной именно для Российской Федерации, поскольку именно через её территорию проходят ежегодно огромные миграции перелётных стай диких пернатых, являющихся разносчиками вируса птичьего гриппа.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Куклина С.А. Способ диагностики инфекционных заболеваний / С.А. Куклина, А.Г Мешандин., A.A. Малыцукова // Информационный листок № 24-025-06. - Киров: ЦНТИ, 2006, - с. 1-4

2. Куклина С.А. Гидрозольные препараты как экспрессные бесприборные диагностикумы в медицине, ветеринарии и биотехнологии/ С.А.Куклина, А.Г. Мешандин // Тезисы 2-й пром. выставки «Науки. Инвестиции. Производство. Вятский Левша». -Киров, 2006. - с. 36 - 37

3. Куклина С.А. Гидрозольные препараты для экспресс-диагностики биомаркеров/ С.А.Куклина, А.Г. Мешандин // Материалы IV Республиканской научно-практической конференции «Перспективные направления и новые технологии в здравоохранении». - Йошкар - Ола, 2006. - с. 68 - 69

4. Куклина С.А. Оптимизация компонентов гидрозольных препаратов для экспрессной диагностики/ С.А.Куклина А.Г. Мешандин // Вятский медицинский вестник. Киров, № 3, 2006. - с. 30 - 34

5. Куклина С.А. Ультрадисперсные алмазы в качестве гидрозолей для экспрессной иммунодиагностики / С.А.Куклина, А.Г. Мешандин, И.В.Шугал ей, В.В. Тофтунова // IX Вишняковские чтения «Вузовская наука - образованию и промышленности» материалы международной научной конференции / под ред. проф. В.Н.Скворцова. - Бокситогорск, 2006. - с. 201 - 202

6. Куклина С.А. Гидрозольные препараты как иммунохимические диагностикумы для определения качества воды / С.А.Куклина, А.Г. Мешандин // Материалы I Всероссийской молодежной научной конференции « Молодежь и наука Севера». - Сыктывкар, 2008. с. 204 - 205

7. Куклина С.А. Гидрозольные препараты для экспресс-диагностики биомаркеров / С.А.Куклина, А.Г. Мешандин // Вестник новых медицинских технологий (периодический теоретический и научно-практический журнал, рекомендованный ВАК). Тула. - 2007, T. XIV, №2, с. 135 - 136

8. Куклина С.А. Гидрозольные препараты, изготовленные по принципам нанотехнологии в качестве экспрессных бесприборных тестов для бесприборной диагностики инфекционных и соматических патологий / С.А.Куклина, А.Г. Мешандин, A.A. Малыцукова // Вестник Российской военно-медицинской академии (научно - практическое издание. Журнал включен в Реферативный журнал и Базы данных ВИНИТИ). С.- Петербург. - 2008, Т.23, №3, с. 488 - 490

9. Куклина С.А. Гидрозольные препараты как иммунохимические диагностикумы для определения качества воды / С.А.Куклина, А.Г. Мешандин, О.Ю. Орлова // Теоретическая и прикладная экология. Общественно - научный журнал. Киров. - 2009, №2, с. 21

10. Куклина С.А., Мешандин А.Г., Попова C.B. Применение метода гидрозольной агглютинации в диагностике туберкулёзной инфекции // Российский Биомедицинский журнал (периодический теоретический и научно-практический журнал, рекомендованный ВАК) С.- Петербург. - 2009, Т. 10, с.478-491.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Куклина, Светлана Анатольевна, 2011 год

1. Адсорбционные свойства ультрадисперсных углеродных материалов / Г.М.Губаревич, Н.М.Костюкова, И.С.Ларионова, Л.И.Полева // Доклад 5 Всесоюзного совещания по детонации. Красноярск. 1991.- Т. 1. - с. 112-И 6.

2. Амброзиус X., Фибих Г. Иммунологические методы / под ред. Г.Фримеля, пер. с нем. А.П.Тарасова.- М.: Медицина, 1987.- 472 с.

3. Амброзиус X. Иммунология: Справочник / под ред. Г. Бундау; пер.с нем.- 2-е изд. Киев.: Наукова думка, 1981.- 480 с.

4. Ахметов A.C. Радиоиммунологический анализ в клинической практике / Журнал Всесоюзного хим. об-ва им. Д.И.Менделеева. -1982.- Т. 27. №4. М.: Химия,- с.76-80.

5. Ашмарин И.П., Воробьев A.A. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л.: Медицина, 1962. - 80 с.

6. Березин И.В. Иммобилизованные ферменты: Современное состояние и перспективы / В.К. Антонов, С.Д.Варфоломеев, Л.И.Воробъёва. М.: МГУ, Т.1. -1976.- 296 с.

7. Беленький Е.Ф., Рискин И.Ф. Химия и технология пигментов / под ред. Л.Ф. Корсунского.- 4-е изд., Л.: Химия, 1974.- 656 с.

8. Вербо, В.Н. Иммуноферментный анализ // Труды Лен. НИИ им. Пастера Л. - 1989. - с. 3-28.

9. Влияние состава поверхности на свойства алмазных поликристаллов / Н.В.Новиков, В.Г Алешин и др. // ДАН СССР. 1988. -Т.300.-№5.-с. 1122-1126.

10. Воюцкий С.С. Курс коллоидной химии / 2-е. изд.,- М.: Химия. -1975. -512 с.

11. И. Гаврилова Е.М., Гомогенный иммуноферментный анализ -новое направление иммунохимии // Журн. Всесоюзного хим. об-ва им. Д.И. Менделеева. -1982.- Т.27. № 4. М.: Химия. с. 90-96.

12. Гнутова P.B. Серология и иммунохимия вирусов растений. М., Наука, 1993, - с.102-104.

13. Гурвич А.Е., Кузовлева O.E. Получение белково-целлюлозных компонентов (иммуносорбентов) в виде суспензий, способных присоединять большие количества антител./ Журн. Биохимия. 1961.Т. 26. №5. М.: изд. Академии наук СССР. - с.934-942.

14. Дзантиев Б.Б., Егоров А.Н. Современное состояние и перспективы развития иммуноферментного анализа / журн. Всесоюзного хим. об-ва им. Д.И. Менделеева,- 1982.- Т.27. № 4. М.: Химия, - с.82-89.

15. Долматов В.Ю. Ультрадисперсные алмазы детонационного синтеза. Получение, свойства, применение. С-Пб.: Изд-во СПбГПУ. -2003.-254 с.

16. Думанский А. В. Учение о коллоидах / 3-е изд., М. JI. Госхимиздат. - 1948. - 416 с.

17. Думпес Ю. Я. Диагностические экспресс-тесты на твердофазных носителях для медицинских биохимических анализов // Рига.: Медицина.- 1986. 198 с.

18. Егоров A.M., Диков М.М. Структура и механизм действия антител // Журн. Всесоюзного хим. об-ва им. Д.И. Менделеева. 1982.-Т.24. №4. М.: Химия. - с.21-28.

19. Егоров A.M. Теория и практика иммуноферментного анализа / Ф.П. Осипов, Б.Б. Дзантиев, Е.М. Гаврилова,- М. Высшая школа. -1991.-271с.

20. Жуков И.И. Коллоидная химия, ч. 1. JL - изд. ЛГУ им. A.A. Жданова. - 1949.-324 с.

21. Заикина H.A. и др. Иммунобиотехнология. Учебное пособие / Н.А.Заикина, В.А.Галынкин, A.B. Гарабаджиу СПб: Изд-во «Менделеев», 2005.- 155 с.

22. Иванов A.M. Оптимизация серологической диагностики сифилиса: дис. д-ра мед. наук: 14.00.11, 03.00.07. С-Пб. - 2005.-216 с.

23. Иммунология. Методы исследований / под ред. И. Лефковитса; пер. с англ. А.И. Маца.-М.: Мир. 1983.-348 с.

24. Иммунохимический анализ / под ред. действ, чл. АМН СССР проф. Л.А. Зильбера. М.: Медицина. 1968.- 300 с.

25. Иммуноферментный анализ / под ред. Т.Т.Нго и Г.Ленхоффа, пер. с англ. C.B. Калугера М.: Мир. - 1988.-444 с.

26. Иммунохимия в клинической лабораторной практике / под ред. А.М.Уорда, Дж.Т.Уичера. пер.с англ. A.M. Авербаха.- М.: Медицина. -1981.- с.59-69.

27. Карякин Ю.В. Ангелов И.И. Чистые химические вещества / 4-е изд. М.: Химия. 1974.-409 с.

28. Коллинз У .П. Новые методы иммуноанализа / М.Тертон, Д.Балангхем, под ред. У.П. Коллинза, пер. с англ. М.: Мир, 1991.-с.151-154.

29. Кройт Г.Р. Наука о коллоидах / Под ред. Г. Р. Кройта, пер. с англ. И.А. Плетневой. Т. 1.- М., изд. иностр. лит. 1955.- 538 с.

30. Маскет М. Физические основы технологии добычи нефти.- М.-И. 2004. - 608 с.

31. Мешандин А.Г. и др. Серологическая диагностика сальмонеллезов / А.Г.Мешандин, Ю.В.Золотарев Л.В.Золотарева // Клиническая лабораторная диагностика. М.: Медицина. - 2001.- № 1,-с. 52-53.

32. Мешандин А.Г, Ванеева Л.И. Проблемы потери активности сорбированных лигандов в гетерогенном иммуноферментном анализе / Журн. Микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.- 1994,- №4.-М.: С-инфо.- с. 52-55.

33. Мешандин А.Г. Возможность применения гидрозольных препаратов в практике гематологии и трансфузиологии //Актуальные вопросы трансфузионной и клинической медицины. Материалы науч. конф. Киров.- 1997. - с.56-57.

34. Мешандин А.Г., Матвеев А.Г. О возможности бесприборной экспресс диагностики инфекционных заболеваний // Труды VI Всерос. Съезда микробиологов, эпидемиологов, паразитологов — Н. Новгород.-1991. Т.2. -с.226 .

35. Мешандин А.Г., Матвеев А.Г. Латексные тест-системы- основа для создания бесприборных диагностикумов // Труды раб. совещ. Состояние диагностики бактериальных инфекций. Оболенск. 1989.-с.143.

36. Мешандин А.Г., Малыцукова A.A. Постановка реакции гидролизной агглютинации по тестированию вирусных нозологий нанетканом материале // Вятский медицинский вестник. 2003. - №3. -с.87-90.

37. Мешандин А.Г. Гидрозольные препараты в диагностике различных инфекционных и соматических патологий / Паллиативная медицина и реабилитация. 1997. - №1.- М.: фонд Паллиативная медицина и реабилитация больных. - с.21-23.

38. Мешандин А.Г. Физико-химические аспекты сорбционных процессов при синтезе биолигандов: дис. д-ра тех. наук: 03.00.23.- М., -1994.-216.С.

39. Некрасов В.В. Руководство к малому практикуму по органической химии. М.: Госхимиздат, 1954. - 295 с.

40. Орлова О.Ю. Мешандин А.Г. Гидрозоли: принципиально новый класс диагностических препаратов для выявления и мониторинга инфекционных и соматических патологий // Вятский медицинский вестник. -1999.-№1.- Киров.: КГМА.- с. 37-42.

41. Орлова О.Ю., Мешандин А.Г. Возможность применения гидрозольных препаратов в лабораторной практике./Клиническая лабораторная диагностика. 2000.- №10.- М.: Медицина.- с.5.

42. Орлова О.Ю., Мешандин А.Г. Применение нового метода гидрозольной агглютинации для оценки поствакцинального противодифтерийного иммунитета / Идеи Пастера в борьбе с инфекциями. Материалы II международной конференции. СПб. - 1998.-с. 193.

43. Орлова О.Ю., Мешандин А.Г. Сопоставление различных видов твердых фаз при синтезе гидрозольных иммунохимическихдиагностикумов / Вятский медицинский вестник. 2000.-№ 3.- Киров.: КГМА. - с. 53-58.

44. Орлова О.Ю. Исследование конъюгатов белков и нерастворимых соединений d-элементов в бесприборном иммунохимическом анализе: дис. канд. хим. наук.- С-Пб.- 2005.- 102 с.

45. Падюков JI.H., Харитоненков И.Г. Иммунодиагностика инфекций / Руководство: "Иммунология инфекционного процесса", М.: Медицина. 1994.- с. 63-68.

46. Пасынский А. Г., Коллоидная химия / под ред. акад. В.А.Каргина. 3-е изд., М.: Высшая школа. 1968. - 232с.

47. Пастер Е.У. Практикум по иммунологии / Учебное пос. для вузов-Киев.: Выща школа. 1989.-302 с.

48. Su №883053 Al, ЕР 1839560 Физико- химические аспекты сорбционных процессов при синтезе твердофазных биолигандов / Мешандин А.Г. (заявитель и патентообладатель Мешандин А.Г.). №883053. заявл. 30.12.88; // Изобретения (Заявки и патенты). - 1989.

49. Песков Н.П. Курс коллоидной химии. М., - JL: Госхимиздат. -1940. - 76с.

50. Писаренко А.Г. Курс коллоидной химии / 3-е изд. М.: Высшая школа. - 1969.- 249 с.

51. Полетаева О.А., Мешандин А.Г. Иммуноагглютинационный диагностикум на основе моноклональных антител для скрининга эпителиального опухолевого маркера в цельной крови онкологических больных / Журн. Биотехнология. 1995.- №3-4.- М. - с. 46-47.

52. Получение алмазов из взрывчатых веществ / А.И.Лямкин, Е.А.Петров, А.П.Ершов и др. // ДАН СССР. 1988. - Т. 302. - с. 611-613.

53. Попечителев Е.А., Старцева О.Н. Методы иммунохимических исследований. СПб. : СГбГЭТУ. - 1993.-е. 32-35.

54. Практическая иммунология / Под ред. П.Н. Бургасова и И.С. Безденежных. М.: Медицина. - 1969. - 414 с.

55. Привалов П.JI. //Биофизика. 1968 Т. 13., №1., с. 163-177

56. Равич- Щербо М.И. Физическая и коллоидная химия /2-е изд., М.: Высшая школа. 1968.- с. 150-153.

57. Ребиндер П. А. Избранные труды: Поверхностные явления в дисперсных системах / Коллоидная химия, М.: Наука. 1968.- 239 с.

58. Реми Г. Курс неорганической химии / Пер. с нем. к.х.н. А.И.Григорьева. Т. 2. - М.: Мир. - 1974.- 888 с.

59. Роберте Д.Д., Касерио М. Основы органической химии / Пер. с англ. Ю.Г.Бунделя. 2-е изд. М.: Мир. - 1978.- Т.2. - 775 с.

60. Руководство по иммунологии / Под. ред. О.Е.Вязова и Ш.Х.Ходжаева. М.: Медицина,- 1973. -316 с.

61. Сорокина З.А. Состояние калия, натрия и воды в цитоплазме клеток. Киев. 1978. С.214с

62. Сошникова Л.А., Тамашевич В.Н. Многомерный статистический анализ. М.: Юнита-Дана, 1999. С. 350.

63. Степанов Б.Н. Введение в химию и технологию органических красителей / 3-е изд. М.: Химия. - 1984.- 589 с.

64. Строев Е.А. Биологическая химия, М.: Высшая школа. 1986 .500 с.

65. Теплова H.H. Рабдомиолиз у хирургических больных в клинике неотложных состояний: дис. канд. мед. наук: 14.00.37. Пермь. -2000.- 137.с.

66. Фримель Г. , Брок И. Основы иммунологии /пер. с нем. А.П. Тарасова; под ред. А.И. Маца. М.: Мир. - 1986. - 254 с.

67. Харитоненков И.Г., Христова M.JI. Использование иммуноферментных методов в вирусологии / Молекулярная генетика, микробиология, вирусология. 1985.- №.6 .- с. 3-15

68. Хитров B.C., Алехин P.M. Справочник по ветеринарным биологическим препаратам. М.: Высшая школа. — 1973. — 315 с.

69. Чард Т. Радиоиммунологические методы / пер. с нем. М.С. Морозовой; под ред. JI. М. Варшавского. М.: Мир. - 1981.- 246 с.

70. Шелудко А. Д. Коллоидная химия / пер. с болг. В.М. Мулл ера -М.: Мир. 1984.-319 с.

71. Эллин Р.Д., Макензи Р. Иммунологические аспекты инфекционных заболеваний / под ред, Д.Дика; пер. с англ. А.С. Анта, М.: Медицина, 1982.- 574 с.

72. Adarwai А.То the question of retichal immunosozbent// Experimentia.-1971.-Vol.27.-P.514-515.79. .W.P.Collins ed J.Wiley & Sons Alternative Immunoassays , //Chichester-New York-Brisbane-Toronto-Singapore, 1985.

73. Aizawa M. Immunosensors //Philos. Trans. Royal soc. London., B. Biol. Science.-1987.-Vol.316.-P.-121 -133.

74. Clark R., Engvall E. Enzyme linked immunosorbent assay// (ELISA).Teoreoretical and praktical aspects. Enzyme-Immunoassay (E.T.Maggioed.). Boca Raton, Florida.- 1981.-P.- 167-179.

75. H. R. Kruyt Colloid science .// N. Y.-a. o., 1949.-Vol.-l-2.-P.-52.

76. Crosignani P.G., Nakamusa R.M., A method of sodium phase radioimmunoassay untilizing polypropylene dises. // J. Clin. Endocrinof and Metabol.- 1970.- Vol .-30 .- P. 153-160.

77. Gallo D. Uses of immunofluorescence in diagnostic virology. // Amer. J. Med. Technol.- 1983. Vol.- 49. -P, 157-161.

78. Edswall J.T. Methods of crosslinking. //J. Am. Chem. Soc. 1954.-Vol.-.76.-P.3131-3138.

79. Freundlich H., Kapillarchemie. / / Lpz., 1930.-B. 1 .-P.-32.

80. Guenes Z. Factors, that can influsence of reactions antigen-antibody. //J.Biochem Physiol.-1960.-Vol. .3 8 .-P.-123 5-1243.

81. Ichikawa E, Imagawa M. Enzyme inking of antibodies and their fragments for enzyme immunoassay and immunologicol staining. // J. Immunoassay -1983. -Vol.- 4.-P.- 1399 -1401.

82. Magnusson Karl-Eric, Bartonek Eva. // Immunol. Invest.,.-1987.- №3.- P.-227-240.

83. Goldring O. L. Detergent solubilised antigens in enzyme immunoassay with particular reference to enzyme-linked immunosorbent assey (ELISA) systems.//Immunoassay Technol.- Vol.- 2. Berlin; New York.-1986.- P.189-213.

84. Sever John L. Future perspectives in virology diagnosis, treatment and immunoprophylaxix.// S. Afr. Med. J. 1986.- 70, Suppl.-P. 10-16.

85. Hazen Beth W., Hazen Kevin C. Modification and application of a simple, surface hydrophobicity detection method to immune cells.// J. Immunol. Meth, 1988, 107, №2.-P.- 157-163.

86. Letonen O. Antibody connection in immunoassays//J.Immunol.Meth.-1980.-Vol.-34.-P.-61-70.

87. Olownikow A Diazocrossliking in immunology .//Immunochemistry.-1967.-Vol.-4-P.-77-80.

88. Parsons G. N. Antibodi-coated plastie tubes in radioimmunoassay.// MethEnzymol .-1981.-Vol.-73.- P.-196.

89. Phillips A. P., Martin K. L. Direct and indirect immunofluorescence analysis of bacterial populations by flow cytometry. //J. Immunol.

90. Meth., 1987, № 2, P.-219-228.

91. Pacry R. P., Love C., Detection of rubella antibody using an optical immunosenser.//J. Virol. Meth-1990.-Vol.27.-P.39-48.

92. Stewart- Tull Duncan E.S., Parant Monique. Immunopotentiators in vaccines: a drem to to a reality .//Ann. Immunol. Hung.- 1986,26.-№1.-P.197.223.

93. Newark N. J. Immunomedics inc receives patent on antidody-linking technology.//Appl. Genet. News.- 1987,8.- №1.P.- 8.

94. Stollar B. D., Rashtehian A. Immunochemikal approaches to gene probe assay // Annual. Biochem.-1987.-Vol.-161.-P.- 387-394.

95. Timpl R., Furthmayr H. //Ysolation of pure anti — collagen antibodies using a specific lmmunoadsorbent technigue, L.Ymmunitatsforsch, 1967.- P.-134, 391-396.

96. Werner Georges H. Synthetic immunostimulants(excluding sulur-containing compounds).//Comp. Immunol., Microbiol., and Infect. Dieseases.-1986,9.-№ 2-3.-P.- 131-136.