Функционально-морфологическая характеристика гистогематического барьера легких у собак при дирофиляриозе тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.01, кандидат биологических наук Лысенкова, Антонина Сергеевна

• Лысенкова, Антонина Сергеевна
• кандидат биологических наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Лысенкова, Антонина Сергеевна

Оглавление

Стр.

Сокращения

Введение 4 Глава 1. Обзор литературы

1.1. Дирофиляриоз как проблема современной ветеринарной медицины

1.2. Биология и цикл развития

1.3. Поражение органов и тканей при дирофиляриозе

1.4. Новые представления о роли сурфактанта в местной защите

легких

Глава 2.Материал и методы исследования

Глава З.Функциональная и морфологическая характеристика аэрогематического барьера легких у собак с дирофиляриозом 3.1. Диагностическая ценность определения белка - Б (8Р-Б). Концентрация белка-0 у здоровых и больных дирофиляриозом

собак

3.2. Концентрация фактора Виллебранда (WF) у здоровых и больных дирофиляриозом собак

3.3. Концентрация маркеров БР-О и фактора Виллебранда убольных собак в зависимости от характера течения воспалительного процесса в легких

3.4.Морфометрическая и морфологическая характеристика легких

собак с дирофиляриозом

Глава 4. Обсуждение результатов и заключение

Выводы

Практические рекомендации

Литература

Сокращения:

ДПФХ-дипальмитоилфосфотидилхолин; ГГБ-гистогематический барьер; РДСВ-респираторный дистресс-синдром взрослых; Б^оШапа ¡ттШв-БлштШз; ЭР-вигГа^ап! ргс^етв-белки сурфактанта; БР-А-белок -А сурфактанта легких; вР-В-белок -Б сурфактанта легких; вР-С-белок-С сурфактанта легких; вР-Б-белок-Д сурфактанта легких; \\Т-фактор Виллебранда; 1Ь-интерлейкин;

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Функционально-морфологическая характеристика гистогематического барьера легких у собак при дирофиляриозе»

Введение

Актуальность проблемы. Современные данные по эпидемиологии дирофиляриоза позволяют говорить о широком распространении этого заболевания в различных странах мира, включая Россию. Ареал распространенности занимает по климатогеографической зоне широты от 41 до 58 град, северной широты (М.В. Сухова, 2002; В.Б. Ястреб, 2009). В России дирофиляриоз обнаружен в 39 субъектах (М.В. Сухова, 2002; А.Ю. Медведев, 2007; А.Ю. Аракельян, 2008; Ю.Г. Бескровная, 2009; A.C. Журавлев, 2009; В.Б. Ястреб, 2009; Т.Н. Сивкова, 2010; Н.В. Ярошенко, 2010). Распространению заболевания способствуют усиливающиеся миграционные процессы человека и животных, высокая приспособляемость зоонозов к новым условиям обитания, отсутствие должных санитарно-эпидемиологических мероприятий и др. По данным Суховой М.В. (2002), в Волгоградской области ежегодный прирост заболеваемости дирофиляриозом среди животных составляет 16%. Эта ситуация создает риск распространения заболевания как среди животных, так и среди людей. Так, в период с 1999 по 2003 год дирофиляриоз у человека выявлен в 150 случаях (Е.В. Михайлова, 2008; Ю.Г. Бескровная, 2009). Случаи дирофиляриоза зафиксированы у жителей в Московской, Тульской областей, Алтайского края, Тюмени, Нижнего Поволжья, Краснодарского края и других регионов (Т.И. Авдюхина, В.Г. Супряга, В.Ф. Постнова, 1997; H.A. Азарова, В.П. Прейдер, 1999; Л.И. Карпук и др., 2000; В.В. Гуськов и др.. 2001; A.B. Ушаков, Т.Ф. Степанова, A.C. Стругова, 2002; A.M. Бронштейн, В.Г. Супряга и др., 2003; М.В. Григорьев, Е.В. Дворовенко, 2003). К 2004 году в России отмечено уже 300 случаев дирофиляриозной инвазии у человека (В.Г. Супряга и др., 2004; С.А. Нагорный, В.В. Карташов, A.A. Артамонова, Ю.Г. Бескровная, 2005).

Авторы указанных исследований утверждают, что эти данные не отражают настоящей ситуации, так как много случаев остается неучтенными. Вполне очевидно, что при сохранившихся тенденциях заболеваемость

дирофиляриозом будет увеличиваться. В научной литературе про-должают появляться сообщения об обнаружении дирофиляриоза у человека (P.C. Арекельян с соавт., 2011; Н.Е. Белова, 2012; М.Г. Тухбатуллин, Р.Ф. Гайнутдинова, 2012).

Экономическая сторона данной проблемы заключается в том, что заболевание имеет выраженную тенденцию к распространению среди специальных групп собак (питомники силовых структур), на подготовку которых затрачиваются значительные средства (Н.В. Серебрякова, A.M. Ермаков, И.В. Колодий, 2008).

Локализация паразита Dirofilaria immitis в малом круге может проявляться в виде пневмонии либо сопровождаться клиникой тромбоэмболии малого круга кровообращения (П.В. Колесников, 2009; И.В. Колодий, 2009). Проявления могут быть выраженными, а могут протекать бессимптомно. Так, по данным Ястреба В.Б. (2009), тяжелое течение отмечено в 37,7 % случаев, средней степени тяжести - в 29,8%, а бессимтомное - в 32,5 % случаев.

Изучение малого круга кровообращения и легких ранее проводилось

отдельными отечественными учеными (П.В. Колесников, 2009). Была

описана клиническая картина острой эозинофильной пневмонии,

тромбоэмболии легких при дирофиляриозе. Однако, при всей очевидности

патогенеза этих поражений, остается много нерешенных вопросов. В

частности, не изучены более глубокие механизмы поражения легочной

ткани, эндотевлия и сурфактантной системы. Интерес к этим проблемам

обусловлен несколькими причинами. В последнее время стало известно, что

один из компонентов сурфактантной системы, в частности, белок-D (SP-D)

играет существенную роль в местной иммунной защите легких от различного

рода инфекций (А.Е. Абатуров, 2011; 2012; Clark, Reid, 2002; 2003; Whitsett,

2002; Wu, Kuzmenko, Wanetal., 2003). Была выявлена способность данного

белка определять выраженности иммунного ответа и степень активации

воспалительного процесса легочной ткани (Crouch, Wright, 2001; Kishoreetal.,

5

\

2005; Hartl, Griese, 2005). Изучение данного компонента сурфактантной системы легких в условиях заражения дирофиляриозом представляет научный и практический интерес.

В последние годы в генезе многих заболеваний, включая и неинфекционные, большое значение придается поражению или дисфункции эндотелия (O.A. Гомазков, 2001; Т.Ю. Калюта, O.E. Царева, А.Д. Трубецков и др. 2005; А.И. Ковалев, Г.И. Марцинкевич, Т.Е. Суслова, A.A. Соколов, 2004; Р.Г. Оганов, Г.В. Погосова, 2007; О.В. Костенко, 2008; Coats, 2004). С учетом того, что эндотелий представляет собой важнейший компонент аэрогематического барьера легких является актуальной задачей исследование его функций при дирофиляриозе у собак.

Современное состояние данного вопроса и вышеназванные предпосылки определили выбор темы нашего исследования.

Объект исследования: породные и беспородные собаки обоих полов в возрасте от 1 до 12 лет, инвазированные D.immitis собаки, кровь, легкие павших животных.

Предмет исследования- механизмы и маркеры повреждения гистогематического барьера легких собак с дирофиляриозом.

Научная гипотеза. Размножение и развитие дирофилярий в сосудах малого круга кровообращения сопровождается продукцией ими биологически активных соединений, запускающих каскад реакций, характеризующихся повреждением структуры и функции гистогематического барьера легких. Используя современные маркеры, можно показать и предположить роль отдельных факторов в механизме повреждения легких при дирофиляриозе у собак.

Цель исследования: изучить функциональное и морфологическое состояние гистогематического барьера легких и его отдельных компонентов у собак при дирофиляриозе.

Задачи исследования:

1. Изучить функциональное состояние гистогематического барьера легких у здоровых и больных дирофиляриозом собак по отношению к белку-Д сурфактанта легких (8Р-0) в зависимости от возраста, пола и породы собак.

2. Оценить функциональное состояние эндотелия у здоровых и больных дирофиляриозом собак в зависимости от возраста, пола и породы собак.

3. Сопоставить особенности морфологических изменений с функциональным состоянием гистогематического барьера легких у собак с дирофиляриозом.

4. Дать комплексную функционально-морфологическую оценку аэрогематического барьера легких у больных дирофиляриозом собак. Научная новизна. Впервые получена функциональная и

морфологическая характеристика аэрогематического барьера легких у здоровых собак и пораженных дирофиляриозом собак. Впервые при дирофиляриозе получены данные о дисфункции эндотелия, характеризующиеся в уменьшении синтезирующей функции по отношению к фактору Виллебранда при хроническом течении заболевания. Впервые получены данные о резистентности аэрогематического барьера по отношению к белку-Д (БР-О) сурфактанта легких. Выявлены возрастные и половые особенности резистентности аэрогематического барьера легких по отношению к белку-Д сурфактанта легких у здоровых и больных дирофиляриозом собак. Установлено, что при остром и хроническом течении воспаления в легких резистентность барьера по отношению к белку-Д закономерно изменяется. В патоморфозе определены фазы течения воспалительного процесса в легких при дирофиляриозе. Впервые проведены сопоставления морфологической картины легких и их метаболических функций по отношению к белку-Д сурфактанта легких.

Практическая и теоретическая значимость. Полученные данные по концентрации белка-Д и фактора Виллебранда у здоровых собак разного пола и возраста могут служить в качестве нормативных и критериальных показателей в лабораторной диагностике поражения легких.

Имеющиеся доказательства наличия дисфункции эндотелия и ослабления местной иммунной защиты легких диктуют необходимость разработки методов коррекции указанных нарушений.

Дополнительные сведения о патогенезе поражения легких и развитии гипоксии при дирофиляриозе у собак могут быть использованы в научно-педагогической практике ветеринарных факультетов.

Теретическая значимость заключается в обосновании использования маркера белка-Д сурфактанта для оценки состояния гистогематического барьера легких и степени его повреждения. Полученные данные о динамике изменений концентрации белка-Д и фактора Виллебранда являются новыми элементами патогенеза органных повреждений и, в частности, легких при дирофиляриозе.

Материалы исследования доложены и обсуждены: на

Международной конференции « Актуальные вопросы науки и образования» (Москва,2012г); Международной конференции «Фундаментальные исследования» (Израиль,2012); Всероссийской конференции «Инновационные пути развития агропромышленного комплекса: задачи и перспективы» (Зерноград, 2012 г.); XX Всероссийской научно-практической конференции «Образование-наука-технологии» (Майкоп,2012),на межлабораторном совещании Северо-Кавказского зонального научно-исследовательского ветеринарного института (г.Новочеркасск,2012), на Всероссийской научно-практической конференции «Научное обеспечение устойчивого развития отрасли животноводства Российской Федерации»(Новочеркасск,2012).

Личный ШСЛЯДД* Представленные в диссертационной работе

экспериментальные исследования, теоретический и практический анализ

8

полученных результатов проведены автором самостоятельно. В выполнении морфологической части работы консультативную помощь оказывал кандидат медицинских наук, доцент Г.В.Левин.

Научный консультант - доктор биологических наук, профессор Ермаков A.M. оказывал методическую помощь при проведении исследований, анализе полученной информации, обобщении данных и внедрении в клиническую ветеринарную практику и учебный процесс.

Реализация результатов исследований. Полученные показатели концентрации белка-D и фактора Виллебранда у собак внедрены в диагностических лабораториях Научно-исследовательского института Южного федерального университета (г.Ростов-на-Дону), ГБОУ ВПО Адыгейского государственного университета, ГБУ "Бузулукское районное управление ветеринарии",«Медицинский центр профилактической медицины» (г.Астана, Казахстан); в учебный процесс ГБОУ ВПО Адыгейского государственного университета. Полученные данные по механизмам повреждения легких при дирофиляриозе у собак могут использоваться в учебном процессе по специальностям «Биология», «Ветеринария» и «Зоотехния».

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 9 научных статей, из них 2 в рекомендованных ВАК изданиях.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, главы результатов собственных исследований, обсуждения результатов и заключения, выводов, практических рекомендаций и библиографического списка. Материал изложен на 120 страницах, включает в себя 25 рисунков и микрофотографий, 24 таблицы. Библиографический список включает в себя 228 наименований, из них - 75 отечественных и 153 зарубежных авторов.

Положения, выносимые на защиту: 1. Течение дирофиляриоза у собак сопровождается изменениями

функциональных и морфологических характеристик

9

гистогематического барьера легких, нарушением обмена белка-Д в легких, эндотелиальной дисфункцией, уменьшением дыхательной поверхности легких и последующим развитием гипоксии.

2. Резистентность гистогематического барьера легких по отношению к белку-Д сурфактанта легких с возрастом как у здоровых , так и больных дирофиляриозом собак независимо от их породы изменяется фазно и зависит от пола животного.

3. Проницаемость гистогематического барьера легких по отношению к белку-Д и активность фактора Виллебранда зависят от характера и выраженности воспалительной реакции в легких и половой принадлежности животного.

Глава 1. Обзор литературы 1. 1. Дирофиляриоз как проблема современной ветеринарной

медицины

За последние годы, по данным разных авторов, в различных регионах мира был отмечен рост инфекций и инвазий, передающихся человеку через кровососущих насекомых трансмиссивным путем, в том числе и дирофиляриоза. До середины прошлого века были диагностированы лишь несколько десятков случаев дирофиляриоза, в то время как за последние 50 лет их число резко возросло (Raccurt, 1999). С 1995 по 2000 гг.выявлено 372 новых случая в 25 странах мира, а к 2003 году количество выявленных случаев инвазирования достигло 782 (Pampiglione et al., 2001). На сегодняшний день дирофиляриоз выявляется в Италии, Испании, Франции, всего на территории 37 государств (Simon et al., 2001; Pampiglione et al., 2001). Т.И.Авдюхина и др. (1996) проанализировали 110 случаев дирофиляриоза у человека, вызванного D.repens, на территории Российской Федерации и странах СНГ. Авторы пришли к выводу, что почти 50% из всех случаев приходится на дирофиляриоз органов зрения. Поражения проявляются в виде подкожных или субконъюнктивальных узелков, отечностью. Иногда поражаются слезные железы. Дирофилярии могут мигрировать под слизистой оболочкой или кожей на значительные расстояния. Некоторые больные могут видеть дирофилярий под конъюнктивой самостоятельно.

Случаи дирофиляриоза зафиксированы у людей в Московской, Тульской областях и Алтайском крае (Т.И.Авдюхина, В.Г.Супряга, В.Ф.Постнова, 1997). В.Ф.Постнова и соавт. (1997) указывают, что из 25 случаев дирофиляриоза, зарегистрированных за последние годы, 21 случай приходится на Астраханскую область.

Н.А.Азарова, В.П.Прейдер (1999) описывают 5 случаев дирофиляриоза в г. Барнауле (Алтайский край). Все дирофилярии локализовались на лицевой

части головы и при хирургическом удалении идентифицированы как О.гереш.

При хирургическом удалении опухоли у двух женщин в г. Минске (Республика Беларусь) были обнаружены фрагменты самок Б.герепБ (Л.И. Карпук и соавт., 2000).

О случаях дирофиляриоза у человека в Астраханской области сообщали В.В.Гуськов и соавт. (2001), в Тюмени - А.В.Ушаков, Т.Ф.Степанова, А.С.Стругова (2002). За 2000-2002гг. выявлено в Москве и области 11 случаев дирофиляриоза у людей в возрасте 4-72 лет (А.М.Бронштейн, В.Г.Супряга и соавт., 2003). В 3-х случаях дирофилярий В.герепБ локализовались в мужских половых органах у детей (М.В.Григорьев, Е.В.Дворовенко, 2003). К 2004 году в России отмечено уже 300 случаев дирофиляриозной инвазии у человека (В.Г.Супряга и соавт., 2004). Однако, авторы указанных исследований утверждают, что эти данные не отражают истинной ситуации, так как много случаев остается неучтенными. Очевидно, заболеваемость дирофиляриозом будет увеличиваться из-за снижения иммунологического статуса человека в результате загрязнения окружающей среды. В отечественной литературе до последних лет появляются сообщения об обнаружении дирофиляриоза у человека (Р.С.Арекельян с соавт.,2011;Н.Е.Белова,2012; М.Г. Тухбатуллин,Р.Ф.Гайнутдинова,2012)

1.2.Биология и цикл развития.

Домашние собаки и некоторые виды диких псовых являются

дефинитивными хозяевами Игго/Иапа штШз (Элтлитз) и, таким образом,

служат резервуаром инфекции. Так или иначе, даже у менее подходящих для

инвазии видов животных, таких, как, например, кошки и хорьки

диагностируется микрофиляремия. В свою очередь, эти животные способны

служить резервуарами инфекции. В лабораторных условиях было

установлено, что, напитавшиеся кровью кошки с установленной

микрофиляремией комары, продуцируют личинку третьего поколения ЬЗ,

12

которая при попадании в организм собаки развивается в репродуктивную особь (Donahoe, 1975).

Когда ювенильные формы дирофилярий впервые достигают сердца и легких, давление венозной крови проталкивает их в самые маленькие пульмонарные артерии (Rawlings et aL, 1978). По мере того, как паразиты растут и увеличиваются в размерах, они активно мигрируют с восходящим потоком крови во все более и более крупные артерии до тех пор, пока не достигнут половой зрелости. Окончательная локализация половозрелой особи дирофилярии зависит, в основном, от размера собаки и уровня ее паразитарной инвазированности. Так, для собаки средних размеров (такой, как например, бигль) с низким уровнем инвазированости (i.e., < 10), скорее всего, будет характерна локализация дирофилярий в лобарных пульмонарных артериях и главной пульмонарной артерии. Собаки, в организме которых паразитирует около 40 половозрелых особей дирофилярий, более предрасположены к появлению кавального синдрома (caval syndrome), т.к. большинство особей мигрируют в правый желудочек, правое предсердие и нижнюю полую вену, таким образом, оказывая влияние на работу клапанного аппарата и/или на поток крови (Jackson, 1975; Ishihara et al., 1978; Atwell and Buoro, 1988).

Жизненный цикл D. Immitis относительно длителен (примерно 7-9

месяцев). Комар становится заразным после того, как напитается кровью от

дефинитивного хозяина. Микрофилярии (270 нм в длину и 6-8 нм в ширину)

остаются в желудке комара примерно 24 часа прежде чем мигрируют в

большие клетки мальпигиевых труб. Там личинка становится короче и

толще. На пятый день уже хорошо дифференцируется пищеварительная

система, включающая в себя эзофагус, кишечник и прямую кишку. На

шестой-седьмой день личинка покидает большие клетки мальпигиевых

сосудов и продвигается к стенкам мальпигиевых труб. На восьмой-десятый

день после заражения комара, личинка линяет и становится личинкой второй

стадии (L2), а через два или три дня снова линяет и превращается в личинку

13

третьей стадии (L3). Двумя днями позже эта личинка третьей стадии перфорирует дистальный конец мальпигиевых труб и мигрирует через гемоцель (полость тела) в голову и ротовой аппарат, где и становится инфекционной (Taylor, 1960; Abraham, 1988; Cancrini, Kramer, 2001). Время, необходимое для развития заразной личинки третьей стадии из микрофилярии зависит от температуры. При температуре окружающей среды 27С и относительной влажности 80% развитие занимает примерно от 10 до 14 дней (Orihel, 1961; McCall, 1981).

Личинка третьей стадии (L3) попадает в организм дефинитивного хозяина во время укуса комара. В то время, пока комар насыщается кровью, личинка попадает на кожу дефинитивного хозяина с каплей крови комара (гемолимфой). После того, как комар напитался кровью, личинка проникает в тело животного через ранки, оставленные ротовым аппаратом комара (McGreevy et al., 1974). Через три дня после укуса комара большинство личинок можно обнаружить в подкожной клетчатке недалеко от места укуса. На 21 день большинство личинок мигрируют в брюшную полость животного, а к 41 дню они могут быть обнаружены как в брюшной, так и в грудной полостях. Гельминты достигают сердца самое раннее к 70 дню, большинство личинок достигает сердца в промежутке от 90 до 120 дня после укуса комара. Личинки третьей и четвертой стадий перемещаются между мышечными волокнами, перфорируют крупные сосуды, ведущие к сердцу и, таким образом, попадают в его полость (Orihel, 1961; Kume и Itagaki, 1955; Kotani, Powers, 1982). Личинка четвертой стадии линяет до окончательной стадии развития примерно на 50 -70 день. Первый гельминт попадает в полость сердца в промежутке между 70 и 85 днем; при этом в размере он составляет от 2 до 4 см. После того, как гельминты достигают сердца, самки максимально увеличиваются в размерах. Стадии половой зрелости гельминты достигают примерно на 120 день после укуса комара (McCall, 2007). Развитие и миграция D. immitis в организме хорьков схожи с таковыми

в организме собаки (Supakorndej et al., 1994), но, к сожалению, не изучены в организме кошек.

D. immitis обнаружена у 30 видов млекопитающих, как домашних, так и диких псовых, домашних и диких кошачьих, куниц, обезьян, морских млекопитающих, грызунов и копытных (Otto, 1975). При этом собаки поражаются чаще других животных, с наиболее тяжелой степенью заболевания (Genchi et al., 1988). Вопреки усилиям, направленным на профилактику и контроль дирофиляриоза собак, заболевание распространяется на территориях, которые ранее были свободны от этого заболевания (Genchi et al., 2005).

Распространение дирофиляриоза наиболее хорошо изучено у собак. В целом, в высокоэндемичных по данному заболеванию районах не выявляется разницы между полами, породами, длиной шерсти и активностью собак, в то время, как размер, возраст и содержание (комнатное/выгульное) имеют критическое значение, так как риск заболевания значительно выше для собак больших размеров (они более привлекательны для москитов), для собак старше трех лет и для собак выгульного содержания (Genchi et al., 1988; Genchi et al., 1993; Bolio-Gonzalez et al.. 2007). В естественных условиях количество половозрелых паразитов возрастает прямопорпоционально возрасту собаки (до 150 гельминтов на одну особь в районах неблагополучных по дирофиляриозу).

По данным многих исследователей D. immitis была обнаружена у многих диких кошачьих, таких, как оцелот {Leopardus pardalis), горный лев (Felis concolor), леопард (Neofelis neburosa), снежного барс (Uncia uncia), бенгальский тигр{Panthera tigris), лев (Panthera leo) и черный медведь {ursus americanus) как в естественных местах обитания по всему миру, так и в зоопарках с вольерным содержанием и парках типа «сафари» со свободным передвижением животных (Crum et al., 1978; Kennedy, Patton, 1981; Okada et al., 1983; Paul-Murphy et al., 1994; Murata et al ., 2003; Pence et al., 2003; Ruiz de Ybanez et al., 2006).

Дирофиляриоз собак и кошек у обоих видов животных характеризуется острым и хроническим воспалением тканей легких и других органов ввиду присутствия в организме половозрелых гельминтов и циркуляции микрофилярий. Dirofilaria immitis, возбудитель дирофиляриоза собак и кошек, служит хозяином для внутриклеточной бактерии Wolbachia pipientis. В действительности, в ходе ряда исследований было выяснено, что этот микроорганизм является симбионтом многих видов филярий (за исключением всего нескольких видов), и играет неотъемлемую роль в биологии и репродуктивных функциях своих хозяев. Грамнегативная бактерия Wolbachia играет важную роль в патогенезе и иммунном ответе организма дефинитивного хозяина на проникновение дирофилярий.

Было выявлено несколько признаков наличия дирофиляриоза у

животного, которые указывают на развитие защитной иммунной реакции в

ответ на различные стадии развития D. Immitis. Согласно исследованиям

Yoshida и соавт.(1997), далеко не все личинки гельминта способны

полностью завершить миграцию и превратиться в половозрелых особей. Это,

в первую очередь, указывает на то, что иммунная система дефинитивного

хозяина способна выявить мигрирующую личинку. Также, в ходе

исследования было выяснено, что попытки иммунизировать собак от

дирофиляриоза достигли определенного успеха (Grieve et al., 1988; Mejia ,

Carlow, 1994; Yoshida et al., 1997). Mejia и Carlow (1994) сообщили о том, что

у вакцинированных собак были обнаружены несколько антигенов личинок

дирофилярий (14, 20, 30, 34, 39 kDa), антигены половозрелых особей (20 kDa)

и антигены микрофилярий (36, 38, 71, 84 kDa). Frank и Grieve (1996)

идентифицировали и охарактеризовали два специфических для личинок

протеина (L3-L4 стадии личинки) и, что еще более важно, выявили их в

сыворотке крови иммунизированных собак. Совершенно очевидна

успешность процесса разработки вакцины, но, так или иначе, она все еще

находится в экспериментальной стадии. Идентификация

иммунодоминантных антигенов также имеет большой диагностический

16

потенциал. Синтетические пептиды, основанные на последовательности Frank и Grieve, в последнее время были использованы с обнадеживающими результатами для изучения процесса выработки антител у кошек, зараженных дирофиляриозом (Prieto и др., 2002).

Другая особенность дирофиляриоза - это так называемая «оккультная инфекция» - определяемая наличием половозрелых особей в легких/сердце при отстутствии микрофиляремии. Существует несколько определенных типов оккультной инфекции, включая случаи дирофиляриоза, когда в организме дефинитивного хозяина находятся половозрелые гельминты только одного пола, случаи амикрофиляремии, возникающей на фоне антибиотикотерапии или иммунообусловленной амикрофиляремии. Иммунообусловленная оккультная инфекция возникает в результате специфического гуморального ответа на антигены микрофилярий (Rawlings et al., 1982). Микроскопирование световым и электронным микроскопами ткани легких собак с иммунообусловленной оккультной инфекцией обнаруживает картину массированной атаки микрофилярий эозинофилами, нейтрофилами и лимфоцитами, указывая на то, что клеточный иммунитет может играть важную роль в уничтожении микрофилярий (Hayasaki, 2001).

В своих недавних исследованиях Morchon с соавт. (2007) сообщил о том, что у собак с микрофиляремией регистрируется более высокий уровень интерлейкина IL-4 и IL-10 относительно собак с выявленной оккультной инфекцией. Это указывает на то, что наличие циркулирующих микрофилярий связано с иммунной толерантностью по отношению к инфекции (O'Connory et al., 2003). Особи с микрофиляремией проявляют иммуносупрессию к антигенам паразита, которая, в свою очередь, проявляется неспособностью мононуклеарных клеток периферической крови вырабатывать интерферон-гамма (IFN-g) (Lüder et al., 1996; Sartono et al., 1999).B местной иммунной защите большое значение имеет белок-Д (SPD) сурфактанта легких (Crouch, Wright, 2001; McCormack, Whitsett, 2002; Wu, Kuzmenko, Wan et al, 2003).

1.3. Поражение органов и тканей при дирофиляриозе

Высокая летальность собак при дирофиляриозе зачастую обусловлена не столько паразитоносительством, сколько изменениями, возникающими в тканях и органах организма в виду наличия паразитов. Зачастую диагностика этих изменений затруднена, вследствие полиморфизма развивающихся клинических синдромов. Недостаточно хорошо изучены изменения, возникающие в тканях легких при наличии инвазии дирофиляриями.

Ранее множество научных работ были посвящены изучению экологии, эпизоотологии, дианостики D. Immitis у собак (В. Б. Ястреб, 2003, 2004, 2005, 2008; И. А. Архипов, Д. Р. Архипова, 2002; А. Н. Шинкаренко, Ю.Ф.Петров, 2005; С. А. Веденеев, 1999 - 2003; М. В. Сухова, 2004; Д. П. Козлов, 1962). Большое количество исследований патогенеза D. immitis проводилось зарубежными исследователями (Bredal et al, 1998; Tarello, 2000; Jackson et al 1966; Jubb, Kennedy, 1970; Taylor, 1960; Tarello, 2000; Baneth et al., 2002; Nelson, 1962), однако в данных исследованиях были недостаточно изучены легочная патология при дирофиляриозе у собак, в частности, состояние аэрогематического барьера легких.

Данные литературы позволяют утверждать о том, дирофиляриоз у собак влияет на различные функции организма. Микрофилярии, постоянно мигрируя, вызывают повреждения различных органов и тканей, а также могут привести к тромбозу и эмболии сосудов. Механическое повреждение половозрелыми гельминтами внутренней оболочки сердца приводит к эндокардитам и нарушениям работы клапанного аппарата. Гельминты являются препятствием на пути кровотока в легочные артерии, что приводит к недостаточному насыщению организма кислородом и выражается в виде периферического цианоза (Ю.А.Бескровная, 2009; П.В.Колесников,2009).

При дирофиляриозе собак в Волгоградской области (П.В.Колесников, 2009), статистика осложнений определялась следующая: тромбоэмболия легочной артерии 54,2 %, эозинофильная пневмония 21%, интерстициальная

пневмония 8%, отек легких 6%, респираторный дистресс-синдром 0,2%.

18

Наиболее часто встречающиеся осложнения: ТЭЛА, эозинофильная и интерстициальная пневмонии, формируют кардиопульмонарную недостаточность у собак.

Клинические признаки тромбоэмболии (П.В.Колесников, 2009) при дирофиляриозе проявились бледностью (71,4%) и цианозом слизистых оболочек (28,6%), одышкой (85,7%), кашлем (21,4%), жестким или бронхиальным дыханием (42,8%), акцентом II тона над легочной артерией (66,6%), синусовой тахикардией (69,0%), мерцанием предсердий (4,76%), экстрасистолией (11,9%), блокадой правой ножки пучка Гиса (4,76%), статической атаксией (26,0%), локальным просветлением легочного рисунка (50,0%) с дисковидными ателектазами (19,0%) на рентгенограмме. Эти признаки расцениваются как эозинофильная пневмония.

В литературе имеются единичные сообщения, в которых представлены результаты исследования морфо-функциональных характеристик легких у собак при дирофиляриозе. Клинически при эозинофильной пневмонии (П.В.Колесников,2009).отмечалась субфебрильная лихорадка (73,6%), минимальные респираторные нарушения с быстрым разрешением, в виде умеренного кашля (63,1%), болезненность в области трахеи (42,1%), реже вязкая или кровянистая мокрота (31,6%), бледность слизистых оболочек (73,6%), тахипноэ (68,4%). Аускультативно выявлено: жесткое дыхание, реже бронхиальное, выдох удлинен, рассеянные сухие хрипы над обеими легочными полями, над зонами притупления (при перкуссии) звука -ослабленное дыхание, мелкопузырчатые хрипы, при аускультации сердца на 1-й, 2-й, 4-й точках аускультации - 1-й тон ослаблен, акцент 2-го тона на легочном стволе. Пульс учащен, ритмичный, среднего наполнения.

На рентгенограмме при острой эозинофильной пневмонии, по данным

того же автора (П.В.Колесников, 2009)., определялись нечеткие пятна в виде

ограниченных затемнений (88,2%), которые локализовались в области

бронхоэктазов, диффузные или отдельные узелковые инфильтраты (47%).

При хронической форме появлялась сеть диффузных узелковых

19

инфильтратов (60%), наблюдалось наличие четко определенных затемнений (80%), которые имели выраженный характер.

По результатам морфологических и биохимических исследований крови, для эозинофильной пневмонии характерен лейкоцитоз, эозинофилия, повышение скорости оседания эритроцитов (СОЭ), гиперхромная анемия, незначительная тромбоцитопения, увеличение общего белка, повышение альбуминовой фракции, увеличение общего количества глобулинов, появление белков острой фазы (С-реактивный белок).

Исходя из результатов цитологического исследования (П.В.Колесников, 2009) бронхоальвеолярного лаважа, при острой и хронической формах эозинофильной пневмонии в сравнении с контрольной группой животных, количество эозинофилов увеличивается в 56 раз,а при хронической форме-в 61 раза.

По результатм цитологического исследования бронхоальвеолярного лаважа при интерстициальной пневмонии, было отмечено наличие изменений в соотношении воспалительных клеточных элементов с преобладанием нейтрофилов (58-66%) и лимфоцитов (увеличение в 2,8 раза).

При рентгенографии легких у больных собак при острой интерстициальной пневмонии наблюдались двусторонние пятнистые ретикулонодулярные тени, распространяющиеся практически на все легочные поля и плотные инфильтраты (консолидация). Легочные поля были уменьшены в размерах, в 30% случаев имелся небольшой плевральный выпот. В типичных случаях это ретикулярная, нодулярная или ретикуло-нодулярная диссеминация. На ранних стадиях патологического процесса обнаруживались ацинарные тенеобразования, носящие распространенный характер, но, как правило, тяготеющие к диафрагмальным и средним отделам легких (Колесников П.В., 2009).

Являются ли описанные изменения результатом микроэмболии

дирофиляриями, либо проявлением органной реакции легких на антигенную

нагрузку остается невыясненным. Разнообразие рентгенологических

20

признаков (ателектаз, эмфизема, усиление интерстициального рисунка и др.) позволяют предполагать нарушения функции эндотелия и синтеза сурфактанта. Эндотелий по современным представлениям является мощной эндокринной железой (О.А.Гомазков,2СЮО), синтезирующей более 20 биологически активных соединений. Эндотелий обеспечивает главную функцию-это соответствие реологических свойств крови и просвета сосуда (3. А. Лупинская, 2003). В условиях инвазии дирофиляриями возможно поражение эндотелия различными патологическими факторами, сопровождающими пребывание дирофилярий в сосудистом русле (О.В.Костенко,2003).В первую очередь поражение эндотелия сказывается на его синтезирующей функции. Таким маркером может служить фактор Виллебранда, по концентрации которого можно судить о метаболической функции эндотелия и его дисфункции (3. С. Баркаган, 2000; В. В. Долгов; П. В. Свирин, 2005; А. А. Козлов и соавт., 2007). Однако, данный вопрос в условиях инвазии дирофиляриями у собак совершенно не изучен.

Следует отметить, что патофизиологический ответ организма на

паразитарную инвазию D. immitis, главным образом, возникает при миграции

половозрелых особей в пульмонарные артерии. Первичные повреждения,

характерные для этого заболевания, возникают в пульмонарных артериях и

паренхиме легких. Данные органы являются наиболее привлекательным

(благоприятным) местом локализации для внутрисосудистых паразитов.

Наличие дирофилярий в пульмонарных артериях служит причиной

пульмонарной гипертензии и, при отсутствии лечения, приводит к

несовместимой с жизнью остановке сердца ввиду закупорки его камер

паразитами. Другие синдромы связаны с нарушением потока крови по

причине локализации паразитов в правом предсердии на уровне

трикуспидального клапана. Это явление служит причиной массового

гемолиза и как следствие, гемоглобинурии, что влечет за собой развитие

кавального синдрома (vena caval syndrome) (Ishihara et al., 1978; Kitagawa et

al., 1987). Судя по всему, микрофилярии играют второстепенную

21

патогенетическую роль, но, тем не менее, способны провоцировать возникновение пневмонии и гломерулонефрита. У некоторых особей, в рамках индивидуальной реакции организма, развивается гиперсенситивность к микрофиляриям, которая со временем проходит. В некоторых случаях, микрофилярии оказываются в неспецифичных для них местах локализации, таких как, например, передняя камера глаза (Weiner et al., 1980) или системные артерии (Liu et al., 1966, Slonka et al., 1977). Существуют результаты недавних исследований, указывающие на то, что в ответ на повреждение тканей, связанных с паразитарной инвазией дирофиляриями, совершенно определенную патогенетическую роль выполняют цитокины, провоспалительные медиаторы и клеточные компоненты иммунной системы (Grandi et al., 2005). Также, следует отметить, что спектр патологий, связанных с хроническим паразитоносительством очень широк, но, тем не менее, главным клиническим признаком у собак остается «congestive heart failure (corpulmonale)».

Дирофилярии способны вызывать как банальную обструкцию и/или нарушения потока крови, так и явиться причиной появления клинических признаков, характерных для течения сосудистого заболевания. Для сосудов, в которые мигрировали живые дирофилярии, либо были эмболизированы фрагментами погибших паразитов, характерна пролиферация внутреннего слоя (интимы), что в свою очередь, приводит к возникновению тромбозов и может вызывать полную обструкцию отдельных сегментов пульмонарных артерий. Предполагается, что все эти явления обусловливают возникновение пульмонарной гипертензии и напрямую скоррелированны с уровнем паразитарной инвазированности животного, что, в свою очередь, влияет на степень распространения паразитов в паренхиме легких (Knight, 1987).

На момент достижения ими венозной системы кровообращения,

ювенильные формы дирофилярий достигают размера 2,5 см в длину. Они

пассивно эмболизируют пульмонарные артерии и, таким образом, влияют на

поток крови в пульмонарных лобарных артериях. Отмечено, что правая

22

каудальная лобарная артерия более подвержена локализации дирофилярий, чем левая (Atwell and Rezakhani, 1986). Контакт между паразитом и интимой пульмонарных артерий является обязательным инициирующим моментом в формировании эндоваскулярных изменений. Первичные повреждения ограничиваются небольшими периферическими сосудами, в которые паразиты попадают вначале. По мере того, как паразит растет, сосудистые повреждения возникают в проксимальных сегментах пульмонарных артерий. Утолщение интимы и сужение просвета сосудов в небольших периферических ответвлениях пульмонарных артерий являются главной причиной обструкции потока крови и пульмонарной гипертензии. Пролиферация интимы обусловлена миграцией медиальных клеток гладкой мускулатуры через внутреннюю эластическую пластину (Munnel et al., 1980; Schaubetal., 1981).

Патогенез воспалительного процесса сосудов, в которых паразитируют

дирофилярии, все еще остается предметом споров по сей день.

Характерными признаками первичных повреждений сосудов всего через

несколько дней после проникновения паразитов в сосуды являются

разрушение эндотелиального слоя клеток и обнажение поверхности интимы

сосудов. Совершенно очевидно, что повреждение эндотелия возникает

непосредственно после появления паразита и не может возникать столь

быстро в качестве иммунного ответа в конкретном месте без

предварительной сенсибилизации. Более того, исчезновение эндотелиального

слоя клеток возникает без дегенеративных признаков и характеризуется

агрессивным восстановлением клеточного слоя и структурных элементов.

Это указывает на то, что клетки были удалены, либо уничтожены in situ.

Макрофаги и гранулоциты сконцентрированны, и покрывают места

повреждений эндотелия, защищая фрагменты обнажившегося

субэндотелиального слоя. Вскоре после их появления, васкулярные гладко-

мышечные клетки мигрируют в интиму и принимают участие в очень

активном процессе пролиферации миоинтимального слоя сосуда. Подобные

23

повреждения приводят к возникновению пролиферативных утолщений слоя интимы и провоцируют появление очагов грубой внутренней поверхности сосуда. При этом, крупные распределяющие сосуды подвергаются дилятации, когда пульмонарная гипертензия достигает значительного уровня. Пульмонарное кровообращение нарушается, в первую очередь, за счет уменьшения сосудистой площади легких в результате воспалительной закупорки мелких периферических сосудов легких. Последние исследования показали, что у инвазированных дирофиляриями собак отмечается значительное повышение в плазме крови уровня эндотелина-1, медиатора, вызывающего острую вазоконстрикцию и провоцирующего хронические изменения в строении сосудов. Возможно, оба этих события играют свою роль в развитии пульмонарной гипертензии (Uchide and Saida, 2005). Тромбоз и тромбоэмболия также влияют на дальнейшее нарушение пульмонарного кровообращения. По мере того, как в легких скапливаются дирофилярии, повреждения появляются и в крупных артериях, которые подвергаются дилятации и теряют свою эластичность по мере того, как растет пульмонарное давление. Увеличение просвета крупных пульмонарных сосудов значительно повышает нагрузку на сердце и влияет, в первую очередь, на камеру правого желудочка, т.к. именно он вынужден преодолевать сопротивление обструктированных периферических пульмонарных сосудов. В такой ситуации компенсаторная гипертрофия правого желудочка является характерной реакцией в ответ на повышающееся пульмонарное давление. По мере того, как все большее и большее количество сосудов легких подвергается обструкции, сосудистые резервы уже не способны компенсировать нарастающие изменения. На практике пульмонарное артериальное древо достигает определенной точки обструкции. С этого момента, давление в сосудах и правом желудочке начинает увеличиваться прямопропорционально силе тока крови. Как следствие, чем выше стадия заболевания, и чем большей физической

нагрузке подвержено животное, тем большая нагрузка приходится на сердце.

24

В запущенных случаях заболевания, постепенная остановка сердца наступает в результате того, что желудочек уже не способен генерировать достаточное перфузионное давление для того, чтобы прогнать кровь через легочный круг (Wang et al., 2005). Зачастую животные погибают от остановки сердца именно в момент резкого увеличения нагрузки. Наиболее характерными признаками поздней стадии заболевания являются асцит, гепатомегалия и кахексия, что в совокупности только ускоряет процесс при наличии картины острой пульмонарной тромбоэмболии.

По данным исследований П.В.Колесникова (2009) дирофиляриоз, вызываемый Dirofilaria immitis, протекает как в осложненной, так и в неосложненной формах. Из осложнений зарегистрированы тромбоэмболия легочной артерии 54,2%, эозинофильная пневмония 21,0%, интерстициальная пневмония 8,0%, острая и хроническая почечная недостаточность 4, 3%, асцит 4,3%, отек легких 6,0%, респираторный дистресс-синдром 0,2%, кардиогенный шок 2,0%.

Согласно данных В. Б. Ястреба (2008), М. А. Фисько (2005), Н. В. Серебрякова (2008), М. В. Суховой (2004), А. М. Ермакова (2007), Г. Г. Онищенко (2003), И. В. Колодий (2008) при дирофиляриозе наблюдаются следующие клинические признаки: повышенная температура, одышка, кашель, анемичность слизистых оболочек и кожи, систолическая пульсация шейных вен, отек конечностей и подкожной клетчатки. При перкуссии наблюдается увеличение границ относительной тупости сердца. При аускультации сердца прослушивается систолический шум, который усиливается на вдохе.

А. И. Мазуркевич (2001) в зависимости от течения заболевания выделяет 4 синдрома при дирофиляриозе: интоксикационный, кожный, псевдоопухолевый синдром и правожелудочковая недостаточность. Интоксикационный синдром характеризуется повышенной утомляемостью, снижением аппетита, кашлем и наличием шумов при аускультации сердца.

При кожном синдроме прежде всего поражается кожа различных частей тела. Просматриваются участки облысения с образованием пустул и язв. Для псевдоопухолевого синдрома характерно образование опухолеподобных разрастаний в межпальцевом пространстве на грудных конечностях и т.д. Правожелудочковая недостаточность проявляется в виде тахикардии, анемичности слизистых оболочек, слабости, асцита, нарушением работы почек.

Клинические признаки дирофиляриоза зависят от продолжительности инвазии (В. С. Свидерьский, Р. В. Рощина, 2001; И. В. Левченко, С. А. Нагорный, А. М. Ермаков ,1999; А. В. Степанов, 1982; А. А. Вареничева ( 1984), Carlisle (1984) и могут проявляться в виде снижения общей массы тела, утомляемости и слабости. При этом температура тела может быть повышена незначительно. В последующем развивается гипертрофия желудочка, сердечная недостаточность с застоями в малом круге кровообращения. Появляются отеки на тазовых конечностях и в межчелюстном пространстве, прослушиваются шумы в сердце, определяется ритм галопа и наблюдается недостаточность правого отдела сердца с развитием гепатоспленомегалии и асцита. Может появиться хронический сухой кашель, одышка, хрипы в легких, цианоз кожи. На фоне такого состояния, как правило, развиваются тромбоэмболические процессы в легких.

По данным А. И. Поживила (1999), И. В. Колодий (2008), Ю.Г. Бескровной (2009), Р. С. Аракельяна (2004) в 87% случаев при аускультации грудной полости выявляется систолический сердечный шум при недостаточности трехстворчатого клапана, на акцент первого тона приходится до 67%, ритм галопа 20%. Асцит развивается в 29%, желтуха 19%, кровохарканье 6%.

Согласно М. В. Суховой (2002), С. А. Веденееву (2003) дирофиляриоз в

28,25% случаев протекает в бессимптомной форме. Первые клинические

признаки проявляются в виде утомляемости 90,4% случаев, на долю одышки

26

при нагрузке приходится 64,8%, в 100% снижение аппетита, в 77% потеря веса, 100% бледность слизистых, 3,2% слабый пульс. На более поздних сроках течения болезни наблюдается четко выраженная клиническая картина дирофиляриоза: утомляемость, одышка, бледность слизистых, пульс слабого наполнения, систолический шум, недостаточность трехстворчатого клапана, акцент первого тона, ритм галопа, снижение веса, аппетита, в 38,46% сонливость, 2,6% отек подгрудка и асцит, нервные расстройства в 6,4% случаев. Всего лишь в 7,8% случаев выявлены все характерные признаки дирофиляриоза (В.Г. Супряга, 2004; Cristian, 1998).

Как утверждают отдельные авторы (Morpurgo, Schmid, Mandelli ,1988), в большинстве случаев тромбоэмболию легочной артерии (ТЭЛА) сложно диагностировать. Смертность при отсутствии терапии составляет 25-30%, а в случае адекватного лечения антикоагулянтами, уменьшается до 3-8% (Goldhaber, Morpurgo, 1992). При этом у 67% больных с фатальным исходом заболевания смерть наступает в течение первого часа после появления симптомов эмболии (Layish, Tapson, 1997).

Клиническими признаками тромбоэмболии легочной артерии является наличие легочной гипертензии, острого легочного сердца, инфаркта легкого и некоторых гуморальных нарушений. К одному из наиболее частых симптомов тромбоэмболии легочной артерии можно отнести одышку. Выраженность одышки обычно коррелируется с величиной эмболической обструкции легочной артерии. Следует отметить, что иногда при массивной тромбоэмболии легочной артерии одышка может быть незначительной, а острая стадия заболевания проявляется ее тяжелыми гемодинамическими последствиями, такими, как стойкое снижение артериального давления, тахикардия, олигурия, похолодание конечностей и др. Выраженная одышка, коллапс, потеря сознания и цианоз указывают на тяжелую, опасную для жизни форму ТЭЛА и массивное поражение артериального русла, а кровохарканье чаще является симптомами небольшой эмболии

периферической ветви легочной артерии (В.Б. Яковлев, М.В. Яковлева, 2002; B.C. Савельев, 1990; Koehn, 1987).

Согласно классификации Европейского общества кардиологов - ЕОК, принято разделять тромбоэмболию легочной артерии на массивную и немассивную. При массивной тромбоэмболии легочной артерии можно наблюдать развитие шока или устойчивой артериальной гипотензии при отсутствии других причин для их появления (таких, как аритмия, гиповолемия и т.д.). Одним из основных критериев диагностики массивной эмболии легочной артерии является наличие по данным ЭхоКГ дисфункции миокарда правого желудочка. Тромбоэмболия обычно двусторонняя, и обструкция артериального легочного русла составляет более 50%. При немассивной тромбоэмболии легочной артерии происходит снижение АД и не изменяется сократительная функция правого желудочка.

1.4. Новые представления о роли сурфактанта в местной защите легких.

При патологии в легких, либо при нарушении кровообращения в малом круге страдает один из наиболее важных компонентов легочной ткани — сурфактант. Сурфактант был впервые описан и выделен J.A. Clements в 1957 году (Clements, 1957). Сурфактант - смесь фосфолипидов, состоящая из двух фаз: поверхностной фазы (опофаза) - мономолекулярная фосфолипидная пленка, обращенная в просвет альвеол, и нижней (гипофаза) - содержащая гликопротеиды и сглаживающая неровности альвеоцитов I -го и И-го порядка. Основные функции сурфактанта заключаются в обеспечении стабильности альвеол в процессе дыхания, противоотечного барьера для плазмы крови и антимикробной и антивирусной защиты.

Биохимический состав сурфактанта у млекопитающих сходен и

представлен на 90% из липидов, 10% - белки апопротеины. Белки

сурфактанта (surfactant proteins - SP) представлены белками SP - А, SP - В,

SP-C, SP-D. Фосфолипиды представлены дипальмитоилфосфотидилхолином

(ДПФХ) - 45%, фосфотидилхолином - 25%, фосфотидилглицеролом - 5% и

28

др. (Lewis, Veldhuizen, 2003). Наиболее представительная фракция ДГТФХ обеспечивает снижение поверхностного натяжения альвеол (Veldhuizen, Nag, Orgeig, Possmayer, 1998). Для нас представляла интерес белковая фракция сурфактанта. Она представлена белками SP-B и SP-C, которые являются гидрофобными и снижают поверхностное натяжение (Weaver, Conkright, 2001); белки SP-A и SP-D регулируют степень увлажнения сурфактанта, но другая очень важная функция, характерная для SP-A и SP-D - это участие в антиинфекционной защите (Clark, Reid, 2002; 2003).

По данным зарубежных авторов (Jeffery, 1987; Madsen et al., 2003) сурфактант синтезируется альвеоцитами II-го типа и клетками Клара, в которых он накапливается в виде осмиофильных телец. В просвет альвеолы сурфактант попадает за счет экзоцитоза. Белки сурфактанта гликолизируются в аппарате Гольджи, а затем соединяются с фосфолипидами. В результате дыхания часть сурфактанта распадается, превращается в везикулы, которые вновь захватываются альвеоцитами II типа и идут на ресинтез сурфактанта, оставшиеся фракции сурфактанта поглощаются альвеолярными макрофагами (Weaver, Na, Stahlman, 2002; Wright, Dobbs, 1991).

Исходя из этих данных компоненты сурфактанта не должны попадать в общий кровоток, либо попадать в незначительных количествах. Как установлено, при нарушениях кровообращения в малом круге кровообращения, происходит быстрое разрушение сурфактанта, а синтез его прекращается (Giuntini, 2001; Goss, Brower, Hudson, Rubenfeld, 2003).

Для белков А и D (семейство коллектинов) важным свойством является опсонизация и последующий фагоцитоз патогенных факторов (Crouch, Wright, 2001; McCormack; Whitsett, 2002; Wu, Kuzmenko, Wan et al, 2003). Эти данные вызывают повышенный интерес в связи с полифункциональными свойствами белков D и А. В свете исследуемой проблемы заболевания дирофиляриозом изучение роли белков D и А представляет особый интерес.

Белки D и А способны связываться с мембранами бактерий, грибов, либо капсидами вирусов, а молекулярными субстратами взаимодействия являются пептидоглико -, олиго- полисахариды, липотейхоевая кислота, в состав которых входит манноза, глюкоза, инозитол, гептоза, остатки N-ацетилманнозамина (Jonblat et al., 2004; Hartl, Griese, 2006; Kishore et al., 2006). Имеются различия между белками по сродству к субстратам. Так, SPD связывается с глюкозой, мальтозой, инозитолом, a SP-A с L-фруктозой и N-ацетилманнозамином (Kerrigan, Brown, 2006).

Антибактериальную активность SP-D и SP-A особенно ярко проявляется в начале инфекционного процесса за счет создания протеиновых мостиков между лигандами отдельных бактерий, либо вирусов (Haagsman, Herias, Van Eijk, 2003; Harston et al., 2006; Benne et al., 1995; Miokotina, Snyder, 2002; Kostina et al., 2005; Kudo et al., 2004; Sanchez-Barbero et al., 2005; Le Vine et al., 2001; Giannoni et al., 2006; Van Rozendaal, Van Spriel, Van de Winkel, Haagsman, 2001; Van de Wetering, Van Golde, Batenburg, 2004).

Результаты взаимодействия белков и бактериальной мембраны проявляются уже через 10-15 минут, в результате чего микроб погибает (Kuzmenko et al., 2003). Такой механизм присущ по отношению к некапсулированным микробам (Kostina et al., 2005). Бактерицидное действие белки SP-D и SP-A оказывают по отношению к грамотрицательным бактериям, а бактериостатическое по отношению к Micoplasma pneumonial (McCormack et al., 2003; Wu et al., 2003). При вирусном инфицировании белки SP-D и SP-A также оказывают противовирусное действие, при этом концентрация этих белков в лаважной жидкости возрастает (Hartshorn et al., 2006; Kneyber, Plötz, Kimpen, 2001; Hawgood et al., 2004; Le Vine et al., 2001; Le Vine et al., 2004).

В отношении стрептококка SP-D проявляет в большей мере опоснирующую роль, однако на фоне низких концентраций кислородных радикалов нейтрофильный киллинг оставался эффективным (Le Vine et al., 2000; Hartshorn, White, Crouch, 2002; Le Vine et al., 1998).

Рядом авторов установлено противогрибковое действие белка-D. В основном оно проявляется по отношению к колониям: Blastomyces dermatitidis, Histoplasma capsulatum, Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigates (Van de Wetering, Van Golde, Batenburg, 2004; Crouch, Wright, 2001).

Важно отметить, что белки SP-D и SP-A выполняют иммуномоделирующую функцию, оказывая как провоспалительный, так и противовоспалительный эффекты (Crouch, Harstorn, Ofek, 2000; Hartl, Griese, 2006; Kishore et al., 2005; Wright, 1997). Направленность воспалительной реакции, особенно это касается легких, обусловлена количеством белков, которые являются для нейтрофилов и моноцитарных клеток хемотаксическим фактором (Crouch, Wright, 2001; Korfhagen, 2001; Cai et al., 1999).

Следует отметить, что белки сурфактанта выступают связующим звеном между неспецифической защитой и специфическим иммунитетом. Это свойство обусловлено усилением антигенпрезентирующей функции дендритных клеток и их модулирующим влиянием на Т-лимфоциты.

В связи с вышеизложенным, представляет интерес исследовать отдельные составляющие местной иммунологической защиты сурфактантной системы легких в условиях инфицирования дирофиляриозом собак. Кроме того, в задачах предполагаемого исследования необходимо было оценить роль эндотелия и отдельных факторов, влияющих на функцию аэро-гематического барьера.

Глава 2. Материал и методы исследования.

Всего обследовано 113 собак из специализированных питомников силовых структур г.Ростова-на-Дону, г. Краснодара и г. Бузулука (табл.1). Из указанного количества прижизненно у 101 собаки (37 здоровых и 64 больных собак) исследовали концентрацию в крови белка Д сурфактанта легких и фактора Виллебранда. Возраст собак составил от 1,5 до 12 лет. Кроме того, 19 собак были эвтаназированы по показаниям и на вскрытии у них обнаружены зрелые дирофилярии в сердце и легочных артериях.

Таблица 1.

Экспериментально-клинический материал и методы исследования

№ п/п Характер исследования Количество животных

1. Изучение морфологической картины легких здоровых собак, погибших от автотравмы 12

2. Изучение морфологической картины легких больных дирофиляриозом собак 19

3. Исследование концентрации белка Д сурфактанта легких у здоровых собак разных пород 37

4. Исследование фактора Виллебранда у здоровых собак разных пород 37

5. Исследование концентрации белка Д сурфактанта легких у больных дирофиляриозом собак разных пород 64

6. Исследование концентрации фактора Виллебранда у больных дирофиляриозом собак разных пород 64

7. Клиническая оценка течения дирофиляриоза 101

8. Идентификация дирофиляриоза методом обогащенной капли по Knott 82

9. Идентификация дирофилярий иммунохромотаграфическим методом 82

Для функциональной характеристики аэрогематического барьера нами выбран белок Д (SP-D) сурфактанта легких. Выбор обусловлен тем, что этот белок обладает двойственными характеристиками. С одной стороны, обладая гидрофильностью, белок обеспечивает адекватную степень увлажнения сурфактанта и ряд других физических характеристик. С другой стороны, белок Д обеспечивает противоинфекционную защиту респираторного тракта от инфекционных агентов (Jounblat et al.,2004; Hartl, Griese,2006; Kishore et al., 2006).

Учитывая, что метаболизм сурфактанта происходит на уровне альвеолярного пространства (Clark, Reid,2003), появление компонентов сурфактанта в крови может свидетельствовать о снижении резистентности аэрогематического барьера легких.

Определение концентрации SP-D осуществляли иммуноферментным методом (анализатор "Alisei", Италия) с использованием тест - наборов для собак фирмы «Cusabio» (КНР). Концентрация белка выражалась в нг/мл.

Мономерный SP-D содержит коллагеноподобный спиральный домен и кальцийзависимый карбогидратный домен.

Принцип метода определения белка Д сурфактанта легких.

Планшет с микролунками, представленный в данном наборе, был предварительно покрыт антителами, специфичными к SP-D. Пробы добавляются в соответствующие лунки вместе с биотинсвязанными антителами, специфичными к SP-D, также в каждую лунку добавляется Авидин, связанный с пероксидазой, затем планшет подвергается инкубации. В последующем в каждую лунку добавляется раствор субстрата ТМБ (3,3', 5,5' тетрамметил-бензидин). Только те лунки, которые содержат SP-D, биотинсвязанное антитело и энзимсвязанный Авидин проявят себя изменением окраски при добавлении плазмы. Энзим-субстратная реакция завершается при добавлении раствора сульфокислоты (Sulphuric acid) и изменение цвета оценивается спектрометрически на длине волны 450 нм ± 2

нм. После этого концентрация SP-D в пробах определяется посредством сравнения с показателями таблицы или калибровочной кривой.

Специфичность реакции. Используемый набор определяет рекомбинантный и натуральный SP-D только у собак. Минимальная определяемая концентрация SP-D собак обычно меньше, чем 0, 78 нг/мл. Для практических целей концентрация 0,78 нг/мл принимается как минимальная, а все что ниже трактуется как нулевое значение. Для научных целей и точного определения концентрации белка можно использовать полученные значения между нулем и НТО.

Другой маркер - фактор Виллебранда (WF) нами выбран по следующим соображениям. Указанный фактор синтезируется мегакариоцитами и эндотелием (А.И.Грицюк, Е.Н. Амосова, И.А.Грицюк, 1995; В.В.Долгов, П.В.Свирин,2005). С учетом этого, интенсивность синтеза данного фактора в основном определяется функциональным состоянием мегакариоцитов и эндотелия. Повышение WF может быть связано с повреждением эндотелия и появлением соединительнотканного матрикса сосудов (В.В.Долгов, П.В.Свирин,2005), что в свою очередь вызывает активацию плазменного фактора свертывания крови VIII, который циркулирует в крови в виде комплекса WF+ VIII.Для фактора VIII фактор Виллебранда является ингибитором и предотвращает его расщепление протеазами в крови. За счет этого фактор VIII доставляется к поврежденному участку сосуда и адсорбируя тромбоциты приоизводит «ремонт» поврежденного участка сосуда. В этом случае указанные факторы и тромбоциты обеспечивают трофическую функцию (З.С.Баркаган, 2000; Ф.Дж. Шиффман, 2000).

Для определения фактора Виллебранда использовался иммуноферментный метод и тест наборы для собак фирмы «Cusabio» (КНР). Для определения концентраций используется стандартная кривая концентраций ELISa с отметками 200 нг/мл, 100 нг/мл, 50 нг/мл, 25 нг/мл, 12, 5 нг/мл, 6, 25 нг/мл, 3,12 нг/мл.

Клиническое обследование здоровых и больных животных проводили по общепринятой методике с последующим занесением результатов в соответствующие протоколы и истории болезни. У всех животных из подкожной вены предплечья, латеральной вены сафены утром натощак брали кровь, которую затем исследовали на наличие микрофилярий методом насыщенного (обогащенного) мазка по Knott и иммунохроматографическим методом (Canine SNAP 4Dx, IDEXX) для качественного выявления специфических антигенов Dirofilaria immitis. В этих пробах крови определяли белок Д и фактор Виллебранда. Определение белкаД и фактора Виллебранда проводили в аккредитованной лаборатории НИИ биологии Южного федерального университета (г. Ростов-на-Дону).

Для гистоморфологического исследования кусочки легких фиксировали в нейтральном формалине и заливали в парафин (Б.Рамейс,1954), после чего изготавливались микросрезы толщиной 5-6 мкм. Срезы окрашивали гематоксилин и эозином (Г.И. Роскин,1957). В качестве контроля служили легкие 12 здоровых собак, погибших от автотравмы.

Для количественной оценки выраженности патологического процесса использовалась морфометрическая методика Г.Г.Автандилова (1990). Для оценки дыхательной поверхности легких был введен индекс А/МА-соотношение площадей альвеол к площади межальвеолярного пространства. Такой подход позволил количественно подтверждать изменения различных отделов легких и оценивать динамику дыхательной поверхности. Из каждого кусочка было взято по 2 среза, а в каждом срезе исследовали не менее 30 полей зрения.

Статистическую обработку проводили с помощью методов вариационной статистики, корреляционного анализа по Спирмену, точного критерия Фишера и Хи-квадрат с использованием стандартной компьютерной программы «Biostat» версия 3.03. Различия считались достоверными при р<0,05.

Заключение диссертации по теме «Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных», Лысенкова, Антонина Сергеевна

ВЫВОДЫ:

1. Дирофиляриоз сопровождается нарушением морфофункциональных характеристик гистогематического барьера легких, нарушением синтеза компонентов сурфактанта и его утилизации, развитием эндотелиальной дисфункции, уменьшением дыхательной поверхности легких с последующим развитием дыхательной недостаточности и гипоксии.

2. Резистентность аэрогематического барьера для белка-Б с возрастом снижается, что подтверждается наличием достоверной прямой корреляционной связи между концентрацией маркера в плазме крови и возрастом как у здоровых (г=0,66; р<0,01), так и у больных собак (г=0,74; р<0,008), при этом, наиболее выраженное снижение резистентности отмечено у больных собак в возрасте до 2-х лет, а белоксинтезирующей функции легких по отношению к белку-Б в возрасте от 2-х до 8 лет.

3. Половые различия функционального состояния гистогематического барьера легких для белка-Б в условиях инвазирования дирофиляриями характеризуются более высокой проницаемостью аэрогематического барьера независимо от породы собак у особей мужского пола и умеренной у особей женского пола.

4. В острой стадии воспаления в легких у больных дирофиляриозом собак резистентность аэрогематического барьера снижена, что характеризуется повышением концентрации белка-Б в плазме крови, при этом уровень белка-Б в значительной степени превосходит уровень белка-Б у собак с хроническим процессом в легких.

5. Острое течение воспалительного процесса в легких характеризуется значительным увеличением концентрации фактора Виллебранда, а при хроническом - снижением, при этом как в условиях нормы, так и в

94 условиях патологии концентрация фактора Виллебранда у особей женского пола превосходит аналогичные показатели особей мужского пола, особенно в возрастной группе от 2-х до 8 лет независимо от породы собак.

6. Морфологическая картина легких у собак, больных дирофиляриозом, свидетельствует о наличии неспецифического воспаления с фазным течением, характеризующимся в острой фазе нарушением проницаемости аэрогематического барьера, развитием отека интерстиция, кровоизлияниями в интерстиций и альвеолы, а в хронической фазе-склеротическими изменениями в сосудах и интерстиции с последующим развитием эмфиземы и ателектазов.

Практические рекомендации:

1. В научно-педагогической практике преподавания курса патологической физиологии при изложении патогенеза поражения малого круга кровообращения при дирофиляриозе целесообразно внести полученные автором сведения и схему поражения аэрогематического барьера легких.

2. С целью оптимизации лечения и профилактики поражений малого круга кровообращения целесообразно провести клиническое исследование и изучить влияние ингибиторов ангиотензинпревращающего фермента (АПФ), либо блокаторов рецепторов-1 (АТ-1 рецепторов) ангиотензина-II, имеющих минимальные побочные эффекты.

3. Данные по содержанию фактора Виллебранда и белка-Е> сурфактанта легких у здоровых собак разных пород рекомендуется использовать в качестве нормативных показателей.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Лысенкова, Антонина Сергеевна, 2013 год

Литература:

1. Абатуров А.Е. Катионные антимикробные пептиды системы неспецифической защиты респираторного тракта:дифензины и кателицидины. Ч. 4. Дефензины-молекулы,переживающие ренессанс.-URL: http://pediatric.mif-ua.com/archive/issue-27242/article-27287/

2. Абатуров А.Е. Опсонирующая сеть протеинов системы неспецифической защиты респираторного тракта З.Коллектины: белки сурфактанта- URL: http://pediatric.mif-ua.com/archive/issue-16524/article-20675/

3. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия / Г.Г. Автандилов. - М.: Медицина, 1990. - С. 58-102.

4. Арабидзе Г.Г. Гипотензивная терапия / Арабидзе Г.Г., Арабидзе Гр.Г. // Кардиология. - 1997. - №3. - С. 88-95.

5. Аракельян P.C. Эпидемиолого-эпизотологические особенности дирофиляриоза на территории Астраханской области: дис. ... канд. биол. наук / Аракельян P.C. - М., 2008. -140 с.

6. Атеросклероз і ішемічна хвороба серця: сучасний стан проблеми. Артеріальна гіпертензія як фактор ризику ІХС, профілактика ускладнень (Київ, 24-26 червня, 2003) // Український кардіологічний журнал. — 2003. — No 6. — С. 146-150.

7. Баркаган З.С. Очерки антитромботической фармакопрофилактики и терапии / З.С. Баркаган. - Москва: Ньюдиамед, 2000. - 142 с.

8. Белова Н.Е. Дирофиляриоз на территории нижегородской области / Н.Е. Белова // Медицинская паразитология и паразитарные болезни.- 2012.-№2.-С. 18-20.

9. Бескровная Ю.Г. Дирофиляриоз на юге России: распространение и диагностика : дис. ... канд. биол. наук / Ю.Г. Бескровная. - Ростов-на-Дону, 2009. - 140 с.

10. Ближайший и отдаленный прогноз у пациентов с нестабильной стенокардией и анемией / Т.Ю. Калюта [и др.] // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. - 2005. - №2.-С. 46-51.

11. Ватутин Н.Т. Инфекция как фактор развития атеросклероза и его осложнений / Ватутин Н.Т., Чупина В.А. // Кардиология. — 2000. — №2. —С. 13-22.

12. Ваулин E.JI. Маркеры воспаления и атеросклероз: значение С-реактивного белка / E.JI. Ваулин // Кардиология. — 1999. — № 2. — С. 81-86.

13. Гомазков O.A. Физиологически активные пептиды / O.A. Гомазков. -Москва: ИПГМ, 1995.- 144 с.

14. Гомазков O.A. Эндотелии в кардиологии: молекулярные, физиологические и патологические аспекты / O.A. Гомазков // Кардиология. - 2001. - №2. - С. 50-58.

15. Грацианский H.A. Предупреждение обострений коронарной болезни сердца. Вмешательства недоказанным клиническим эффектам: ингибиторы ангиотензинпревращающего фермента и антиоксиданты / H.A. Грацианский // Кардиология. - 1998. - №6. - С. 4-19.

16. Грацианский H.A. Связь реакции коронарных артерий на внутрикоронарное введение ацетилхолина с факторами риска ишемической болезни сердца / H.A. Грацианский, Д.В. Качалков, С.А. Давыдов // Кардиология. - 1999. - Т.39, №1. - С. 25-30.

17. Грибкова И.В. NO активирует Са2+ - активируемый К+ ток гладкомышечных клеток хвостовой артерии крысы через GMP -зависимый механизм / И.В. Грибкова, Р. Шуберт, В.П. Серебряков // Кардиология. - 2002. - №8. - С.34-37.

18. Грицюк А.И. Практическая гемостазиология / А.И. Грицюк, E.H. Амосова, И.А. Грицюк.- Киев: Здороье,1994. - 256 с.

19. Дедов И.И. Сахарный диабет и артериальная гипертензия / И.И. Дедов, М.В. Шестаков.- Москва: МИА, 2006. - 346 с.

20. Дисфункция эндотелия у лиц с отягощенной по атеросклерозу наследственностью / Ковалев А.И. [и др.] // Кардиология. - 2004. - №1. -С. 39-42.

21. Долгов В.В. Лабораторная диагностика нарушений гемостаза / В.В. Долгов, П.В. Свирин. - Тверь: Триада, 2005. - 227с.

22. Дроздова Г.А. Клеточные механизмы артериальной гипертензии / Г.А. Дроздова // Патологическая физиология. - 2000. - №3. - С. 26-31.

23. Журавлев A.C. Фауна гельминтов собак Кабардино-Балкарской Республики и усовершенствование мер борьбы с опасными зоонозами: дис. канд. ветеринар, наук: 03.00.19 / Журавлев Александр Сергеевич.-Ставрополь, 2009. - 118 с.

24. Зотова И.В. Синтез оксида азота и развитие атеросклероза / И.В. Зотова, Д.А. Затейщиков, Б.А. Сидоренко // Кардиология. - №4. - С. 58-67.

25. Карпов Ю.А. Блокаторы ангиотензиновых рецепторов: применение при артериальной гипертензии / Ю.А. Карпов // Русский медицинский журнал.- 2000. - № 5. - С. 214-217.

26. Колесников П.В. Диагностика и терапия кардиопульмональной недостаточности при дирофиляриозе у собак: дис. ... канд. ветеринар, наук: 16.00.01, 03.00.19 / Колесников Павел Викторович.- Волгоград, 2009. -145с.

27. Колодий И.В. Особенности ремоделирования правого желудочка собак при дирофиляриозе, вызванном Dirofilaria immitis: дис. канд. биол. наук: 16.00.02, 03.00.19 / Колодий Ирина Владимировна.- Новочеркасск, 2009. -106 с.

28. Костенко О.В. Особенности эндотелиальной дисфункции, состояния сонных артерий и ремоделирования сердца при нестабильной стенокардии: дис. ... канд. мед. наук: 14.00.05, 14.00.06 / Костенко Ольга Вячеславовна.- Смоленск, 2008. -116 с.

29. Кудряшева О.В. Эндотелиальный гемостаз: система тромбомодулина и

её роль в развитии атеросклероза и его осложнений / Кудряшева О.В.,

99

Затейщиков Д.А., Сидоренко Б.А. // Кардиология. - 2000. - Т. 40, №8. -С. 65-70.

30. Левченко Н.В., Ермаков А.М, Дерезина Т.Н., Нагорный С.А. Эпизоотология, диагностика и лечение дирофиляриоза у собак // Тез. докл. 7-й международной конф. по проблемам вет. мед. мелких домашних животных 3-5 марта 1999 г., Москва. М., 1999. С. 148 - 150.

31. Лупинская З.А. Эндотелий сосудов-основной регулятор местного кровотока / З.А. Лупинская // Вестник Кыргызско-Российского Славянского университета. - 2003. - №7. - С. 134-137.

32. Лысенков С.П. Нейрогормональные механизмы нарушений водно-солевого обмена в легких: автореф. дис. ... д-ра мед. наук: 14.00.16 / Лысенков Сергей Петрович. - Челябинск, 1993.- 38с.

33. Мазур H.A. Дисфункция эндотелия, монооксид азота и ишемическая болезнь сердца / H.A. Мазур // Терапевтический архив.— 2003.— №3. —С. 84-86.

34. Маянский А.Н. Современная эволюция идеи И.И. Мечникова о внутрисосудистом воспалении / А.Н. Маянский // Иммунология. — 1995. —№4. —С. 8-13.

35. Медведев А.Ю. Распространение дирофиляриоза собак в Краснодарском крае и разработка его диагностики иммуноферментной реакцией: дис. ... канд. ветеринар, наук: 03.00.19/ Медведев Андрей Юрьевич. - Москва, 2007.- 141с.

36. Мелкумянц A.M. Регуляция просвета магистральных артерий в соответствии с напряжением сдвига на эндотелии / A.M. Мелкумянц, С.А. Балашов, В.М. Хаютин // Физиологический журнал. - 1992. - №6. -С.70-78.

37. Михайлова Е.В. Ультразвуковая диагностика опухолей яичка у детей: дис. ... канд. мед. наук: 14.00.14 / Михайлова Елена Владимировна. -Москва, 2008. -163 с.

38. Нагорный С.А. Дирофиляриоз у людей в Ростовской области/ С.А.Нагорный, В.В.Карташов, А.А.Артамонова, Ю.Г.Бескровная // Матер, докл. науч. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». М., 2005. - С. 244 - 246.

39. Новая стратегия управления иммунным ответом при заболеваниях легких-роль сурфактантного белка D как бивалентного фактора репрограммирования макрофагов / Лямина C.B. [и др.] // Фундаментальные исследования.- 2011.- №1.- С. 90-98.

40. Оганов Р.Г. Современные стратегии профилактики и лечения сердечнососудистых заболеваний / Оганов Р.Г., Погосова Г.В. // Кардиология. -2007.-№12.-С. 4-9.

41. Определение чувствительности плечевой артерии к напряжению сдвига на эндотелий как метод оценки состояния эндотелий-зависимой вазодилятации с помощью ультразвука высокого разрешения у больных с артериальной гипертонией / Т.В. Балахонова [и др.] // Кардиология. -1998. - Т.38, №3. - С. 37.

42. Отрицательные обратные связи в патогенезе первичной артериальной гипертонии: механочувствительность эндотелия / В.М. Хаютин [и др.] // Физиологический журнал. - 1993. - №8. - С. 1-12.

43. Парахонский А.П. Значение оксида азота в развитии пкатологии /А.П. Парахонский // Фундаментальные исследования. - 2007. - № 5 - С. 8889.

44. Поливода С.Н. Оценка вазоактивного пула азота оксида у больных гипертонической болезнью и его изменений при медикаментозной терапии / Поливода С.Н., Черепок A.A. // Серце і судини. — 2006. — № 1. —С. 58-62.

45. Поляков А.Е. С-реактивный белок как прогностический фактор у больных с ишемической болезнью сердца / Поляков А.Е., Шишкин В.В. // Український кардіологічний журнал. — 2006. — № 1. — С. 14-17.

46. Пособие для врачей-лаборантов по методам исследования плазменного гемостаза. Факторы свертывания крови / A.A. Козлов [и др.].- Москва: РЕНАМ, 2007. - 28с.

47. Применение аторвастатина у женщин с артериальной гипертензией и гиперлипидемией в период менопаузы / В.А. Бобров [и др.] // Український кардіологічний журнал. — 2006. — № 4. — С. 18-22.

48. Применение препарата «Диронет» с профилактической целью в отношении служебных собак, инвазированных Dirofilaria immitis, на территории Астраханской области / P.C. Аракельян [и др.] // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2011. - №4.- С. 41-42.

49. Ребров А.П. Эндотелиальная дисфункция и особенности изменения уровня цитокинов и С-реактивного белка у больных хронической сердечной недостаточностью / А.П. Ребров, Е.Ю. Сажина, М.И. Тома // Российский кардиологический журнал. — 2005. — № 2 (52). — С. 26-31.

50. Рівень С-реактивного протеїну та розчинних клітинних молекул адгезії у хворих на стабільну стенокардію / Т.І. Гавриленко [і др.] // Український кардіологічний журнал. — 2005. — № 5. — С. 25-26.

51. Роль дисфункции эндотелия в развитии ишемии миокарда у больных ишемической болезнью сердца с неизменными и малоизмененными коронарными артериями / Сергиенко В.Б. [и др.] // Кардиология. - 1999. - Т.39, №1. - С. 25-30.

52. Ромейс Б. Микроскопическая техника / Б. Ромейс. - Москва, 1954. - 718с.

53. Роскин Г.И. Микроскопическая техника / Роскин Г.И., Левинсон Л.Б.Москва, 1957.- 510 с.

54. Рудик Ю.С. Роль бактеріальної і вірусної інфекції в маніфестації та прогресуванні атеросклерозу: автореф. дис. ... д-ра мед. наук / Рудик Юрій Степанович. — Харків, 2003. — 284 с.

55. Серебрякова Н.В.Экономическая эффективность лечебно-профилактических мероприятий при дирофиляриозе служебных собак/

Н.В.Серебрякова, А.М.Ермаков, И.В.Колодий //Российский ветеринарный журнал.-2008.-№3.-С.20-21.

56. Серик С.А. Про- и противовоспалительные цитокины у больных с ишемической болезнью сердца при прогрессировании хронической сердечной недостаточности / С.А. Серик, C.B. Степанова, В.И. Волков // Український кардіологічний журнал. — 2004. — № 4. — С. 18-21.

57. Сивкова Т.Н. Кариопатические и патоморфологические изменения под действием продуктов метаболизма паразитов и влияние на репродуктивную функцию домашних плотоядных: дис. ... д-ра биол. наук / Т.Н. Сивкова. - Москва, 2010.- 251 с.

58. Симбирцев С.А. Микроэмболии легких / С.А. Симбирцев, H.A. Беляков.- М.: Медицина, 1986. - 216 с.

59. Системное воспаление у пациентов с ишемической болезнью сердца: взаимосвязь с клиническим течением и наличием факторов риска / М.И. Лутай [и др.] // Український медичний часопис. — 2006. — № 2 (52). — С. 80-83.

60. Состояние вазоактивных факторов у больных с сочетанной травмой / П.П. Голиков [и др.] // Патологическая физиология. - 2000. - Т.40, №8. -С. 65-70.

61. Сочетанное развитие проатерогенных нарушений обмена липидов, липопротеинов и углеводов, обусловленное системным воспалением и оксидантным стрессом / Талаева Т.В. [и др.] // Український кардіологічний журнал. — 2003. — № 6. — С. 98-107.

62. SP-D контролирует баланс Thl и Th2 цитокинов и обладает признаками эндогенно фактора репрограммирования макрофагов / E.H. Вассерман [ и др.] // Фундаментальные исследования. - 2010. - № 6. - С. 28-36.

63. Сухова М.В. Эпизоотологический надзор при дирофиляриозе плотоядных в условиях Среднего и Нижнего Поволжья: дис. ... канд. ветеринар, наук: 16.00.03, 03.00.19 / Мария Владимировна Сухова. -Нижний Новгород, 2002. - 179 с.

64. Сыромятникова H.B. Метаболическая активность легких / Н.В. Сыромятникова, Т.В. Кошенко, В.А. Гончарова. - Санкт-Петербург: Интермедика, 1997. - С. 35-47.

65. Титов В.Н. Общность атеросклероза и воспаления: специфичность атеросклероза как воспалительного процесса (гипотеза) / В.Н. Титов // Биохимия. — 2000. — № 4. — С. 3-10.

66. Тухбатуллин М.Г. Лучевые методы исследования в диагностике дирофиляриоза орбиты / М.Г. Тухбатуллин, Р.Ф. Гайнутдинова // Медицинская визуализация.- 2012.- № 2. - С. 30-34.

67. Хадарцев A.A. Биофизико-химические процессы в управлении биологическими системами / A.A. Хадарцев // Вестник новых медицинских технологий. - 1999. - Т. IV, №2. - С. 34-37.

68. Хайдаров К.А. Иммунохимическая характеристика антигенов DirofilariaimmitisuSetarialabiato-papillosa, их эффективность в диагностике дирофиляриоза: дис. ... канд. биол. наук: 03.02.11 / Хайдаров Камил Абдурахманович .- Москва, 2011.- 141 с.

69. Характер та механізми порушень обміну ліпопротеїнів крові при відтворенні системного запалення в умовах експерименту / Т.В. Талаева [и др.] // Український кардіологічний журнал. — 2006. — № 4. — С. 1519.

70. Чувствительность малой артерии мышечного типа к скорости кровотока: реакция самоприспособления просвета артерии / Семченко В. [и др.] // Физиологический журнал СССР. - 1979. - №2. - С. 291-298.

71. Шафер М.Ж. Роль ингибиторов ангиотензинпревращающего фермента в лечении больных ишемической болезнью сердца, стабильной стенокардией, с сохранением функции левого желудочка / М.Ж. Шафер, В.Ю. Мареев // Кардиология. - 1999. - Т. 39. - С.75-84.

72. Шиффман Ф.Дж. Патофизиология крови: пер. с англ. / Ф.Дж. Шиффман. - Москва ; Санкт-Петербург: БИНОМ-Невский Диалект, 2000. - 448 с.

73. Ярошенко Н.В. Морфофункциональные особенности ассоциативного течения пироплазмоза и дирофиляриоза у собак: дис. ... канд. ветеринар, наук / Н.В. Ярошенко. - Новочеркасск, 2010.-155 с.

74. Ястреб В. Б. Рекомендации по диагностике, лечению и профилактике дирофиляриоза собак в московском регионе / В.Б. Ястреб, И.А. Архипов // Российский паразитологический журнал. - 2008. - №4 - С. 109-114.

75. Ястреб В.Б. Гельминтозооназы: Эхинококкоз и дирофиляриоз: дис. ... д-ра ветеринар, наук / В.Б. Ястреб.- Москва, 2009.- 252 с.

76. A seroepidemiologic survey of human dirofilariosis in Western Spain / F. Simon [etc.] // Trop. Med. Parasitol. -1991. -N.42. - P.106-108.

77. Abraham D. Biology of Dirofilaria immitis // Dirofilariasis / P.F.L. Boreham [edc.]. -Boca Raton, Florida: CRC Press, 1988.- P. 29-46.

78. Adult Dirofilaria repens in a subcutaneous granuloma on the chest of a dog / Bredal W.P. [etc] // Journal of Small Animal Practice.- 1998.- Vol. 39. - P. 595-597.

79. Aggiornamento epidemiológico sulla filariosi del cane e del gatto / Genchi C. [etc.] // Veterinaria.- 1993.- N7 (suppl. 2).- P. 5-11.

80. Albrit M.A. Effect of statin therapy on C-reactive protein the paravastatin inflammatory . CRP Evaluation (PRINCE): a randomized trial study / Albrit M.A., Danialson E., Rifai N. // JAMA. — 2001. — Vol. 286. — P. 64-70.

81. An enduring association? Microfilariae and immunosupression in lymphatic filariasis / O'Connor R.A. [etc.] // Trends in Parasitology.- 2003.- Vol. 19.- P. 565-570.

82. Binding and Agglutination of Streptococcus pneumoniae by Human Surfactant Protein D (SP-D) Vary between Strains, but SP-D Fails To Enhance Killing by Neutrophils / Jounblat R. [etc.] // Infect. Immunity. -2004. - Vol. 72, № 2. - P. 709-716.

83. Binding and Agglutination of Streptococcus pneumoniae by Human Surfactant Protein D (SP-D) Vary between Strains, but SP-D Fails To

Enhance Killing by Neutrophils / Jounblat R. [etc.] // Infect. Immunity. -2004. - Vol. 72, № 2. - P. 709-716.

84. Brinker K.G. Surfactant protein A modulates the differentiation of murine bone marrow-derived dendritic cells / Brinker K.G., Garner H., Wright J.R. // Am. J. Physiol. - 2003. -Vol. 284, №1. - P. L232-L241.

85. Cancrini G. Insect vectors of Dirofilaria spp. / Cancrini G., Kramer L.H. // Heartworm Infection in Humans and Animals / F. Simon [etc.].- Salamanca, Spain: University of Salamanca, 2001.- P. 63-82.

86. Cannon R.O. Does coronary endothelial dysfunction cause myocardial ischemia in the absence of obstructive coronary artery disease? / Cannon R.O. // Cirulation. - 1997. - Vol. 96. - P. 3251-3254.

87. Caval syndrome. In: Dirofilariasis / Atwell R.B. [etc.] .- Boca Raton, Florida: CRC Press, Inc., 1988.- P. 191-203.

88. Characteristics of surfactant protein A and D binding to lipoteichoic acid and peptidoglycan, 2 major cell wall components of gram-positive bacteria / van de Wetering J. K. [etc.] // J. Infect. Dis. - 2001. - Vol. 184, №9. - P. 11431151.

89. Chlamydia pneumoniae, cytomegalovirus and Herpes simplex virus / Chui B. [etc.] // Circulation. — 1997. — Vol. 96. — P. 2144-2148.

90. Chronic subclinical inflammation as part of the insulin resistance syndrome — The Insulin Resistance Atherosclerosis Study (IRAS) / Fesfa A. [etc.] // Circulation. — 2000. — Vol. 102. — P. 42-47.

91. Clark H. Structural requirements for SP-D function in vitro and in vivo: therapeutic potential of recombinant SP-D / Clark H., Reid K.B. // Immunobiology.- 2002.- Sep.- Vol. 205, №4-5.- P. 619-631.

92. Clark H. The potential of recombinant surfactant protein D therapy to reduce inflammation in neonatal chronic lung disease, cystic fibrosis, and emphysema / Clark H., Reid K. // Arch. Dis. Child. - 2003. -Vol. 88, №11. -P. 981-984.

* *

93. Clements J.A. Surface tension of lung extracts / Clements J.A. // Proc Soc Exp Biol Med.- 1957.- May.- Vol. 95, №1.- P. 170-172.

94. Clinicopathological studies on canine dirofilarial hemoglobinuria / Ishihara K. [etc.] // Journal of Veterinary Science.- 1978.-Vol. 40.- P.525-530.

95. Coats A.J.S. SENIORS: Study of Effects of Nebivolol Intervention on Outcomes and Rehospitalisation in Seniors with heart failure: program and ab stracts from the European Society of Cardiology Congress 2004 / Coats A.J.S. // Circulation.- 2004.- Vol. 47.- P. 496-498.

96. Crouch E. Collectins and pulmonary innate immunity / Crouch E., Hartshorn K., Ofek I. // Immunol. Rev. - 2000. - Vol. 173. - P. 52-65.

97. Crouch E.C. Collectins and pulmonary host defense / Crouch E.C. // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. - 1998. - Vol. 19, № 2. - P. 177-201.

98. Crouch E. Surfactant proteins A and D and pulmonary host defense / Crouch E., Wright J.R. // Annu. Rev. Physiol. - 2001. - Vol. 63. - P. 521-554.

99. Crum J.M. Studies on endoparasites of the black bear (Ursus americanus) in the southeastern United States / Crum J.M., Nettles V.F., Davidson W.R. // Journal of Wildlife Diseases.- 1978.-Vol. 14.- P. 178-186.

100. Cyclic GMP - dependent protein kinase activates cloned BKCa channes expressed in mammain cells by direct phosphorylation at serine / Fukao M. [etc.] // Biol. Chem. - 1999. - V. 274. - P.10927-10935.

101. Davi G. Enhanced lipid peroxidation and platelet activation in the early phase of type 1 diabetes mellitus / Davi G., Chiarelli F., Santilli F. // Circulation. — 2003. — Vol. 107, № 25. — P. 3199-3203.

102. Davis B.R. Antihypertensive and Lipid-Lowering treatment to prevent Heart Attack (ALLHAT) / Davis B.R. // JAMA. — 2000. — Vol. 283. — P. 19671975.

103. Dirofilaria immitis and the endosymbiont Wolbachia: inflammation and immune response in heartworm disease / Grandi G. [etc.] // Japanese Journal of Veterinary Parasitology.- 2005.-№ 4.- P. 11-16.

104. Dirofilaria immitis in an African lion (Panthera leo) / Ruiz de Ybanez M.R. [etc.] // The Veterinary Record.- 2006.- Vol.158.- P. 240-242.

105. Dirofilaria immitis infection of a snow leopard (Uncia uncia) in a Japanese zoo with mitochondrial DNA analysis / Murata K. [etc.] // Journal of Veterinary Medical Science.- 2003. -Vol. 65. -P. 945-947.

106. Dirofilaria repens infection in a dog: diagnosis and treatment with melarsomine and doramectin / Beneth G. [etc] // Veterinary Parasitology.-2002.-Vol.105.-P. 173-178.

107. Dirofilariasis due to Dirofilaria repens in Italy, an emergent zoonosis: report of 60 new cases / S. Pampiglione [etc.] // Histopathology. - 2001. - Vol.38, N4.-P. 344-354.

108. Distinct Effects of Surfactant Protein A or D Deficiency During Bacterial Infection on the Lung / LeVine A. M. [etc.] // J. Immunol. - 2000. - Vol. 165, №7.-P. 3934-3940.

109. Dogs with patent Dirofilaria immitis infection have higher expression of circulating IL-4, IL-10 and iNOS mRNA than those with occult infectio / Morchon R. [etc.] // Veterinary Immunology and Immunopathology.- 2007. Vol. 115.- P. 184-188.

110. Donahoe J.M. Experimental infection of cats with Dirofilaria immitis / Donahoe J.M. //Journal of Parasitology.- 1975.- Vol. 61.- P. 599-605.

111. Doyle I.R. Surfactant proteins-A and -B are elevated in plasma of patients with acute respiratory failure / Doyle I.R., Bersten A.D., Nicholas TE. // Am J Respir Crit Care Med.- 1997.- Oct. 156 (4 Pt 1).- P. 1217-1229.

112. Dyslipidemia and Coronary Heart Disease // The ILIB Lipid Handbook for clinical Practice.- 3 rd Edition. — ILIB, New York's, 2003. — P. 242.

113. Enderle M.D. Preserved endothelial function in IDDM patients, but not in NIDDM patients, compared with healthy subjects / Enderle M.D., Benda N., Schmuelling R.M. // Diabet. Care. — 1998. — Vol. 21, № 2. — P. 271-280.

114. Endotheliale dysfunction und stiekstoffmoxid (NO, Nitric Oxide) / Luscher T.E. [etc.] // Internist. — 1997. — Vol. 38. — P. 411-419.

115. Epidemiological aspects of canine heartworm disease in Italy / Genchi C. [etc.] // Atti del IV Seminario.- Filariosi, Cremona, Italy: SCIVAC, 1988.- P. 53-64.

116. Expression and localization of lung surfactant protein A in human tissues / Madsen J. [etc.] // Am J Respir Cell Mol Biol.- 2003.- Vol. 29, №5.- P. 591597.

117. Ezekowitz R.A. Local opsonization for apoptosis? / Ezekowitz R.A. // Nat. Immunol. - 2002. - Vol. 3, № 6. - P. 510-512.

118. Feline dirofilariosis: antibody response to antigenic fractions containing specific 20 to 30 kDa polypeptides from the adult Dirofilaria immitis somatic antigen / Prieto G. [ etc.] // Veterinary Parasitology.- 2002.- Vol.103.- P. 34153.

119. Frank G.R. Purification and characterization of three larval excretory-secretory proteins of Dirofilaria immitis / Frank G.R., Grieve R.B. // Molecular and Biochemical Parasitology.- 1996.- Vol. 75.- P. 221-229.

120. Furchgott R.E. Nutrie oxide as a signaling molecule in the cardiovasenlar system / Furchgott R.E., Ignore L.S., Murad F. // Press Releause: The 1998 Nobel Prize in Physiology of Medicine. - Webmaster.

121. Giuntini C. Ventilation/perfusion scan and dead space in pulmonary embolism: are they useful for the diagnosis? / Giuntini C. // Q J Nucl Med.-2001.- Dec. - Vol. 45, №4.- P. 281-286.

122. Gotto A.M. Contemporary Diagnosis and Management of Lipid Disorders / Gotto A.M.- Pennsylvania, 2001. — P. 238. (Handbooks in Health Care Co).

123. Grayston J.T. Background and current knowledge of Chlamydia pneumoniae and atherosclerosis / Grayston J.T. // J. Infect. Dis. — 2000. — Vol. 181 (Suppl. 3).—P. S402-S410.

124. Guidelines for the diagnosis, prevention and management of heartworm (Dirofilaria immitis) infection in dogs / Nelson C.T. [etc.] // Veterinary Parasitology.- 2005.- Vol.133.- P. 255-266.

125. Guidelines for the diagnosis, prevention and management of heartworm (Dirofilaria immitis) infection in cats / Nelson C.T. [etc.] // Veterinary Parasitology.- 2005.- Vol. 133.- P. 267-275.

126. Guidelines for the diagnosis, treatment and prevention of heartworm (Dirofilaria immitis) in cats / Nelson C.T. [etc.].-URL: http: www.heartwormsociety.org.

127. Gupta S. Elevated Chlamydia pneumoniae antibodies, cardiovascular events and azithro-mycin in male survivors of myocardial infarction / Gupta S., Leatham E.W., Carrington D. // Circulation. — 1997. — Vol. 96. — P. 404407.

128. Haagsman H.P. Surfactant phospholipids and proteins lung defence / Haagsman H.P., Herias V., Van Eijk M. // Acta Pharmacol. Sin. - 2003. -Vol. 24, № 12.-P. 1301-1303.

129. Haffner S.M. Mortality from coronary disease in subjects with type 2 diabetes and in nondiabetic subjects with and without prior myocardial infarction / Haffner S.M., Lehto S., Ronnemaa T. // N. Engl. J. Med. — 1998. — Vol. 339. —P. 229-234.

130. Haitsma J.J. Surfactant therapy for acute lung injury/acute respiratory distress syndrome / Haitsma J.J., Papadakos P.J., Lachmann B. // Curr Opin Crit Care.- 2004.- Feb.- Vol.10.- P. 18-22.

131. Hansen S. Lung surfactant protein D (SP-D) and the molecular diverted descendants: conglutinin, CL-43 and CL-46 / Hansen S., Holmskov U. // Immunobiology. - 2002. - Vol. 205, № 4-5. - P. 498-517.

132. Harrison G.G. Cellular and molecular mechanisms of endothelial cell dysfunction / Harrison G.G. // J. Clin. Invest. — 1997. — Vol. 19. — P. 2327.

133. Hartl D. Surfactant protein D in human lung diseases / Hartl D., Griese M. // Eur. J. Clin. Invest. - 2006. - Vol. 36, № 6. - P. 423-435.

134. Hartshorn K.L. Contributions of the N- and C-terminal domains of surfactant

protein D to the binding, aggregation, and phagocytic uptake of bacteria /

110

Hartshorn K.L., White M.R., Crouch E.C. // Infect. Immun. - 2002. - Vol. 70.-P. 6129-6139.

135. Hayasaki M. Immunological analysis of agglutination in Dirofllaria immitis microfilariae / Hayasaki M. //Japanese Veterinary Medical Science.- 2001.-Vol.63.-P. 903-907.

136. Heartworm Disease in Animals and Humans / McCall John W. [etc.] // Advances in Parasitology.- 2008.- Vol. 66.- P. 193-285.

137. Immunologic protection against canine heartworm infection / Yoshida M. [etc.] // Journal of Veterinary Medical Science.- 1997.- Vol. 59.- P. 11151121.

138. Incidence of acute lung injury in the United States / Goss C.H. [etc.] // Crit Care Med.- 2003.- Jun.- Vol. 31, №6.- P. 1607-1611.

139. Induction of macrophage matrix metalloproteinase biosynthesis by surfactant protein D / Malone M.J. [etc.] // J. Biol. Chem. - 2001. - Vol. 276, № 41. -P. 37846-37852.

140. Induction of protective immunity in dogs to infection with Dirofllaria immitis using chemically abbreviated infections / Grieve R.B. [etc.] // American Journal of Tropical Medicine and Hygiene.- 1988.- Vol. 39.- P. 373-379.

141. Inhibitory effect of pulmonary surfactant proteins A and D on allergen-induced lymphocyte proliferation and histamine release in children with asthma/ Wang J. Y. [etc.] // Am. J. Respir. Crit. Care Med. - 1998. - Vol. 158, №2.-P. 510-518.

142. Innate Defense against Influenza A Virus: Activity of Human Neutrophil Defensins and Interactions of Defensins with Surfactant Protein D / Hartshorn K.L. [etc.] // J. Immunol. - 2006. - Vol. 176, №. 11. - p. 6962 -6972.

143. Interactions of surfactant protein A with influenza A viruses: binding and neutralization / Benne C.A. [etc] // J. Infect. Dis. - 1995. - Vol. 171, № 2. -P. 335-341.

144. Intimal lesions of the pulmonary artery in dogs with experimental dirofilariasis / Munnel J.F. [etc.] // American Journal of Veterinary.- 1980.-Research 41.- P. 108-1112.

145. Is heartworm really spreading in Europe? / Genchi C. [etc.] // Veterinary Parasitology.- 2005.- Vol. 133.-P. 137-148.

146. Jackson R.F. The venae cavae syndrome / Jackson R.F. // Proceedings of the Heartworm Symposium '74 / ed. H.C. Morgan.- Bonner Springs, Kansas: Veterinary Medicine Publishing, 1975.- P.48-50.

147. Jeffery P.K. The origins of secretions in the lower respiratory tract / Jeffery P.K. // Eur J Respir Dis Suppl.- 1987.- Vol.153.- P.34-42.

148. Kaski J.C. Inflammation, infection and acute coronary plague events / Kaski J.C. , Zouridakis E.G. // Eur. Heart. J. — 2001. — Vol. (Suppl. 1). — P. 1015.

149. Kennedy S. Heartworms in bengala tiger {Panthera tigris) / Kennedy S., Patton S. // Journal of Zoo Animal Medicine.- 1981.-Vol.12.-P. 20-22.

150. Kerrigan A. M. C-type lectins and phagocytosis / Kerrigan A. M., Brown G. D. // Immunobiology. - 2009. - Mar 2.

151. Killy D.G. Nitric oxide and Cardiac function / Killy D.G., Baffigand S.L., Smith T.W. // Circulat. Res. - 1996. - Vol.79. - P.363-380.

152. Kneyber M.C.J. Bench-to-bedside review: Paediatric viral lower respiratory tract disease necessitating mechanical ventilation - should we use exogenous surfactant? / Kneyber M.C.J., Plötz F. B., Kimpen J.L. // Crit. Care. - 2005. -Vol. 9, №6. -P. 550-555.

153. Knight D.H. Guidelines for diagnosis and management of heartworm (Dirofilaria immitis) infection / Knight D.H. // Kirk's Current Veterinary Therapy XII, Small Animal Practice / ed. J.D. Bonagura.- Philadelphia, Pennsylvania: WB Saunders Co., 1995.- P. 879-887.

154. Knight D.H. Heartworm infection / Knight D.H. // Veterinary Clinics of North America: Small Animal Practice.- 1987.-Vol.l7.-P.1463-1518.

155. Korfhagen T.R. Surfactant Protein A (SP-A)-Mediated Bacterial Clearance. SP-A and Cystic Fibrosis / KorfhagenT. R. // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. - 2001. - Vol. 25, № 6. - P. 668-672.

156. Kotani T. Developmental stages of Dirofilaria immitis in the dog / Kotani T., Powers K.G. // American Journal of Veterinary Research.- 1982.- Vol. 43.-P. 2199-2206.

157. Kume S. On the life-cycle of Dirofilaria immitis in the dog as the final host / Kume S., Itagaki S. // British Veterinary Journal.- 1955.- Vol. 111.- P. 16-24.

158. Lewis J.F. The role of exogenous surfactant in the treatment of acute lung injury / Lewis J.F., Veldhuizen R. // Annual Review of Physiology.- 2003.-Vol. 65(March).- P. 613-642.

159. Liu S.K. Adult Dirofilaria immitis in the arterial system of a dog / Liu S.K., Das K.M., Tashjian, R.J. // Journal of the American Veterinary Medical Association.- 1966.- Vol.148.- P. 1501-1507.

160. Lung and hormons / Teel L.Z. [etc.] // Experimental Biology(San Diego, 2005, april 2-6): abstracts.- San Diego, 2005.

161. Lung fluid balance after pulmonary embolization: effects of thrombin vs. fibrin aggregates / Johnson F. [etc.] // J. Appl. Physiol.-1982.-Vol.52, №6.-P.1565-1570.

162. Lymphocyte activation in the lungs of SP-D null mice / Fisher J. H. [etc.] // Amer. J. Respir. Cell Molec. Biol. - 2002. - Vol. 27, № 1. - P. 24-33.

163. Macrophage activation and polarization / Martinez F.O. [etc.] // Front Biosci.- 2008.- Vol. 13.- P.453-461.

164. Macrophage-independent fungicidal action of the pulmonary collectins / McCormack F.X. [etc.] // J. Biol. Chem. - 2003. - Vol. 278, № 38. - P. 36250-36256.

165. McCall J.W. Heartworm and Wolbachia: Therapeutic implications // State of the Heartworm '07 Symposium. 12th Triennial Symposium of the American Heartworm Society held 13-14 July 2007 in Washington, DC: abstract Book.-Batavia, Illinois: American Heartworm Society, 2007.- P. 18.

166. McCall J.W. The role of arthropods in the development of animal models for filariasis / J.W. McCall // Journal of the Georgia Entomological Society.-1981.- Vol.16.- P. 283-293.

167. McCormack F.X. The pulmonary collectins, SP-A and SP-D, orchestrate innate immunity in the lung. / McCormack F.X., Whitsett J.A. // J Clin Invest.- 2002.- Mar.- Vol.109, №6.- P.707-712.

168. Mejia J.S. An analysis of the humoral immune response of dogs following vaccination with irradiated infective larvae of Dirofilaria immitis / Mejia J.S., Carlow C.K. // Parasite Immunology.- 1994.- Vol. 16.- P. 157-164.

169. Miakotina O.L. TNF-alpha inhibits SP-A gene expression in lung epithelial cells via p38 MAPK / Miakotina O.L., Snyder J.M. // Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. - 2002. - Vol. 283, № 2. - P. L418-L427.

170. Muhlestein J.B. Increased incidence of Chlamydia species within the coronary arteries of patients with symptomatic atherosclerotic versus other forms of cardiovascular disease / Muhlestein J.B., Hammond E.H., Carlquist J.F. //J. Am. Coll. Cardiol. — 1996. — Vol. 27. — P. 1555-1561.

171. Nelson C.T. Incidence of Dirofilaria immitis in shelter cats from Southeast Texas / Nelson C.T. // Proceedings of the American Heartworm Symposium '98 /ed. R.L. Seward.- Batavia, Illinois: American Heartworm Society.-1998.- P. 63-66.

172. Nelson G.S. Dipetalonema reconditum (Grassi, 1889) from the dog with a note on its development in the flea, Ctenocephalides canis and the louse, Heterodoxus spiniger / Nelson G.S. // Journal of Helminthology.- 1962.- Vol. 36.- P.297-308.

173. Nelson T.A. Canine heartworms in coyotes in Illinois / Nelson T.A., Gregory D.G., Laursen J.R. // Journal of Wildlife Diseases.- 2003.- Vol.39.- P. 593599.

174. Non - invasive detection of endothelial dysfunction in children end adults at rick atherosclerosis / Celermajer D.S. [etc.] // Lancet. - 1992. - Vol. 340. - P. 1111-1115.

175. Noncapsulated Klebsiella pneumoniae Bearing Mannose-Containing О Antigens Is Rapidly Eradicated from Mouse Lung and Triggers Cytokine Production by Macrophages following Opsonization with Surfactant Protein D / E. Kostina [etc.] // Infect. Immun. - 2005. - Vol. 73, № 12. - P. 82828290.

176. Okada R. Clouded leopard, Neofelis neburosa, new host for Dirofilaria immitis / Okada R., Imal S., Ishii T. // Japanese Journal of Veterinary Science.- 1983.-Vol. 45.-P. 849-852.

177. O'Keefe J.H. Should an angiotensin-converting enzyme inhibitor be standard therapy for patients with atherosclerotic disease / O'Keefe J.H., Wetzel M., Мое R.R. // JACC. — 2001. — Vol. 37, № 1. — P. 1-8.

178. Orihel T.C. Morphology of the larval stages of Dirofilaria immitis in the dog / Orihel T.C. // Journal of Parasitology.- 1961.-Vol.47.- P. 251-262.

179. Otto G.F. Occurrence of the heartworm in unusual locations and unusual hosts / Otto G.F. // Proceedings of the Heartworm Symposium '74 / ed. H.C. Morgan. - Bonner Springs, KS: VM Publishing Inc., 1975.- P. 6-13.

180. Oxidized phospholipids trigger atherogenic inflammation in murine arteries / Furnkranz A. [etc.] // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. — 2005. — Vol. 25. —P. 633-641.

181. Pasceri V. Direct proinflammatory effect of C-reactive on human endothelial cells / Pasceri V., Willerson J.T., Yeh E.T. // Circulation. — 2000. — Vol. 102. —P. 2165-2168.

182. Paul-Murphy J. Serologic survey and serum biological reference ranges of the free ranging mountain lion (Felis concolor) in California / Paul-Murphy J. [etc.] 11 Journal of Wildlife Diseases.- 1994,-Vol. 30.- P. 205-215.

183. Pence D.B. Helminths of the ocelot from southern Texas / Pence D.B., Tewes M.E., Leack L.L. // Journal of Wildlife Diseases.- 2003.- Vol.39.- P. 683689.

184. Polymorphism in the surfactant protein-B gene, gender, and the risk of direct pulmonary injury and ARDS / Gong MN. [etc.] // Chest.- 2004.- Jan.- Vol. 125, №1.- P. 203-211.

185.PRARy regulates adipocyte cholesterol metabolism via oxidized LDL receptor 1 / Chui P.C. [etc.] // J. Clin. Invest. — 2005.— Vol. 115. — P. 2244-2256.

186. Prevalence of Dirofilaria immitis infection in dogs from Meridia, Yucatan, Mexico / Bolio-Gonzalez M.E. [etc.] // Veterinary Parasitology.- 2007.- Vol. 148.-P. 166-169.

187. Pulmonary Collectins Enhance Phagocytosis of Mycobacterium avium through Increased Activity of Mannose Receptor / Kudo K. [etc.] // J. Immunol. - 2004. - Vol. 172, № 12. - P. 7592 - 7602.

188. Pulmonary Collectins Modulate Strain-Specific Influenza A Virus Infection and Host Responses / Hawgood S. [etc.] // J. Virol. - 2004. - Vol. 78, № 16.-P. 8565-8572.

189. Raccurt C.P. Dirofilariasis, an underestimated emerging zoonosis in France / Raccurt C.P. // Med. Trop.-1999. - Vol. 59, N4. - P.389-400.

190. Rawlings C.A. The response of the canine's heart and lungs to Dirofilaria immitis / Rawlings C.A., McCall J.W., Lewis R.E. // Journal of the American Animal Hospital Association.- 1978.-Vol. 14.-P. 17-32.

191. Recombinant rat surfactant-associated protein D inhibits human T lymphocyte proliferation and IL-2 production / Borron P. J. [etc] // J. Immunol. - 1998. -Vol. 161, №9.-P. 4599-4603.

192. Recombinant SP-D carbohydrate recognition domain is a chemoattractant for human neutrophils / Cai G.J. [etc] // Am. J. Physiol. - 1999. - Vol. 276, № l.-P. L131-L136.

193. Reid K. B. M. Surfactant and lung inflammation / Reid K.B.M., Clark H., Palaniyar N. // Thorax. - 2005. - Vol. 60. - P. 620-622.

194. Role of the degree of oligomerization in the structure and function of human surfactant protein A / Sanchez-Barbero F. [etc.] // J. Biol. Chem. - 2005. -Vol. 280, № 9. - P. 7659-7670.

195. Schagat T.L. Surfactant protein A enhances alveolar macrophage phagocytosis of apoptotic neutrophils / Schagat T.L., Wofford J.A., Wright J.R. // J. Immunol. - 2001. - Vol. 166, № 4. - P. 2727-2733.

196. Schaub R.G. Platelet adhesion and myointimal proliferation in canine pulmonary arteries / Schaub R.G., Rawlings C.A., Keith J.C. // American Journal of Pathology.- 1981.-Vol. 104.-P.13-22.

197. Simon F. Heartworm infection in humans and animals / Simon F., Genchi C.-Ediciones Universidad de Salamanca, 2001. - 210 p.

198. Slonka G.F. Adult heartworms in arteries and veins of a dog / Slonka G.F., Castleman, W., Krum S. // Journal of the American Veterinary Medical Association.- 1977.- Vol.170.- P. 717-719.

199. Studies on filariasis. III. Dirofilaria immitis: emergence of infective larvae from the mouthparts of Aedes aegypti / McGreevy P.B. [etc.]// Journal of Helminthology. - 1974.- Vol.48.- P. 221-224.

200. Supakorndej P. Early migration and development of Dirofilaria immitis in the ferret, Mustela putorius furo / Supakorndej P., McCall J.W., Jun J.J. // The Journal of Parasitology.- 1994.- Vol. 80.- P. 237-244.

201. Surfactant protein A, but not surfactant protein D, is an opsonin for influenza A virus phagocytosis by rat alveolar macrophages / Benne C. A. [etc.] // Eur. J. Immunol. - 1997. - Vol. 27. - P. 886-890.

202. Surfactant protein D alters allergic lung responses in mice and human subjects / Brandt E.B. [etc.] // J. Allergy Clin. Immunol. - 2008. - Vol. 121, № 5.- P. 1140-1147.

203. Surfactant protein D augments bacterial association but attenuates major histocompatibility complex class II presentation of bacterial antigens / Hansen S. [etc.] // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. - 2007. - Vol. 36, № 1. - P. 94-102.

204. Surfactant Protein D Enhances Clearance of Influenza A Virus from the Lung In Vivo / LeVine A. M. [etc.] // J. Immunol.- 2001. - Vol. 167, № 10. - P. 5868-5873.

205. Surfactant Protein D Enhances Phagocytosis and Killing of Unencapsulated Phase Variants of Klebsiella pneumoniaelnfect / Ofek I. [etc.] // Immun. -2001.-Vol. 69, № l.-P. 24-33.

206. Surfactant protein-A-deficient mice are susceptible to Pseudomonas aeruginosa infection / LeVine A. M. [etc.] // Am. J. Respir. CellMol. Biol. -1998. - Vol. 19, № 4. - P. 700-708.

207. Surfactant Protein-D Enhances Phagocytosis and Pulmonary Clearance of Respiratory Syncytial Virus / A.M. LeVine [etc.] // Am. J. Respirat. Cell Mol. Biol. -2004. -Vol. 31, № 2. - P. 193-199.

208. Surfactant Proteins A and D Enhance Pulmonary Clearance of Pseudomonas aeruginosa / Giannoni E. [etc.] // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. - 2006. - Vol. 34, №6. -P. 704-710.

209. Surfactant proteins A and D inhibit the growth of Gram-negative bacteria by increasing membrane permeability / Wu H. [etc.] // J Clin Invest.- 2003.-May.- Vol. 111, № 10.- P. 1589-602.

210. Surfactant proteins SP-A and SP-D in human health and disease / Kishore U. [etc.] // Arch. Immunol. Ther. Exp. [Warsz]. - 2005. - Vol. 53, № 5. - P. 399-417.

211. Surfactant proteins SP-A and SP-D: structure, function and receptors / Kishore U. [etc.] // Mol. Immunol. - 2006. - Vol. 43, № 9. - P. 1293-315.

212. Taylor A.E.R. The development of Dirofilaria immitis in the mosquitoes Aedes aegypti / Taylor A.E.R. // Journal of Helminthology.- I960.- Vol.34.-P. 27-38.

213. The role of lipids in pulmonary surfactant / Veldhuizen R. [etc.] // Biochim Biophys Acta. - 1998.- Nov 19.- Vol.1408, №2-3. P. 90-108.

214. The uptake of LDL-IC by human macrophages: predominant involvement of the Fc gamma RI receptor / Lopes-Virella M.F. [etc.] // Atherosclerosis. — 1997. — Vol. 135, № 7. — P. 161-170.

215. Tino M. J. Surfactant proteins A and D specifically stimulate directed actin-based responses in alveolar macrophages / Tino M. J., Wright J.R. // Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. - 1999. - Vol. 276, № 1 (Pt. 1). - P. L164-L174.

216. Uchide T. Elevated endothelin-1 expression in dogs with heartworm disease / Uchide T., Saida K. // Journal of Veterinary Medical Science.- 2005.- Vol. 67.-P. 1155-1161.

217. Van de Wetering J.K. Collectins: players of the innate immune system / van de Wetering J.K., van Golde L.M., Batenburg J.J. // Eur. J. Biochem. - 2004. - Vol. 271, №7. - P. 1229-1249.

218. Van Rozendaal B.A.W.M. Role of Pulmonary Surfactant Protein D in Innate Defense against Candida albicans / Van Rozendaal Bianca A.W.M. [etc.] // J. Infect. Dis. - 2000. - Vol. 182, № 3. - P. 917-922.

219. Weaver T.E. Biogenesis of lamellar bodies, lysosome-related organelles involved in storage and secretion of pulmonary surfactant / Weaver T.E., Na C.L., Stahlman M. // Semin Cell Dev Biol.- 2002.- Aug.- Vol.13, №4.- P. 263-270.

220. Weaver T.E. Function of surfactant proteins B and C / Weaver T.E, Conkright J.J. // Annu Rev Physiol.- 2001,- Vol. 63.- P. 555-578.

221. Weiner D.J. Ectopic-site filariid infection with immunologic follow-up of the host / Weiner D.J., Aguirre G., Dubielzig R. // Proceedings of the Heartworm Symposium '80 / ed. G.F. Otto.- Bonner Springs, Kansas: American Heartworm Society.- 1980.- P. 51-54.

222. Wert S.E. Genetic Disorders of Surfactant Dysfunction / Wert S.E., Whitsett J.A., Nogee L.M. // Pediatr. Dev. Pathol. - 2009. -Vol. 12, № 4- P. 253-274.

223. Wright J.R. Immunomodulatory functions of surfactant / Wright J.R. // Physiol. Rev. - 1997. - Vol. 77, № 4. - P. 931-962.

224. Wright J.R. Immunomodulatory functions of surfactant proteins / Wright J. R. // Nat. Rev. Immunol. - 2005. - Vol. 5. - P. 58-68.

225. Wright JR, Dobbs L.G. Regulation of pulmonary surfactant secretion and clearance // Annu Rev Physiol.- 1991.- Vol. 53.- P. 395-414.

226. Yoshida M. Surfactant Protein D Regulates NF-kB and Matrix Metalloproteinase Production in Alveolar Macrophages via Oxidant-Sensitive Pathways / Yoshida M., Korfhagen T. R., Whitsett J. A // J. Immunol. - 2001. -Vol. 166.-P. 7514-7519.

227. Yudkin J.S. C-reactive protein in healthy subjects: associations with obesity, insulin resistance, and endothelial dysfunction — a potential role for cytokines originating from adipose tissue? / Yudkin J.S., Stehouwer C.D.A., Emeis J.J. // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. — 1999. — Vol. 19. — P. 97.

228. Zimlichmana R. Hyperinsulinemia induces myocardial infarctions and arteriolar medial hypertrophy in spontaneously hypertensive rats / Zimlichmana R., Zaidela L., Nofech-Mozesa S. // Am. J. Hypertension. — 1997. — Vol. 10, № 6. — P. 646-653.