Фосфонатные аналоги пептидо-нуклеиновых кислот: Синтез и гибридизационные свойства тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.10, кандидат химических наук Чуб, Михаил Викторович

• Чуб, Михаил Викторович
• кандидат химических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат химических наук Чуб, Михаил Викторович

содержание

Страницы

Список сокращений

Введение

I. Аналоги олигонуклеотидов : типы и их гибридизационные свойства.

(обзор литературы)

1.Модифицированные олигонуклеотиды

2. ПНК. Аналоги и гомологи

3. ПНК-содержащие конъюгаты

ii. Обсуждение результатов

III. Экспериментальная часть (материалы и методы)

Выводы

Список литературы

Список сокращений.

Все обозначения функциональных групп, реагентов и методов даются в латинской транскрипции, за исключением тех, для которых

русскоязычное сокращение общеупотребительно. Обозначения

аминокислот, нуклеозидов приводятся в соответствии с правилами IUPAC.

Ас - ацетил

An - анизоил ( 4-метоксибензоил )

Вое - трет-бутоксикарбонил

Вп - бензил

ВОР -гексафторфосфат бензотриазолил-1-окси-

трис-диметиламинофосфония

¡Bu - изобутирил (2-метилпропаноил )

Bz - бензоил

CPG - шарики из пористого стекла

DBU - 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундек-7-ен

DCA - дихлоруксусная кислота

DCC - М.М'-дициклогексилкарбодиимид

DCM - дихлорметан

DEAD - диэтилазодикарбоксилат

DhbtOH - 2,3-дигидро-3-гидрокси-4-оксо-1,2,3-бензотриазин

DIPC - МД-диизопропилкарбодиимид

DIEA - диизопропилэтиламин

DMAP - 4-диметиламинопиридин

DMF - 1М,1М-диметилформамид

DMSO - диметилсульфоксид

Dmt - 4,4'-диметокситрифенилметил

EDA - этилендиамин

EDTA - этилендиаминотетрауксусная кислота

Fmoc - 9-флуоренилметоксикарбонил

FPLC - быстрая жидкостная хроматография

НATU - гексафторфосфат 7-азабензотриазолил-1 - окси- .

N, N, N', N'-тетраметилурония

HBTU - гексафторфосфат 1-бензотриазолилокси-

N,N,N', N'-тетраметилурония

НОВТ -1 -гидроксибензотриазол

lm - N-имидазолил

MEA - моноэтаноламин

MeCN - ацетонитрил

Melm -1-метилимидазол

Mmt - 4-метокситрифенилметил

Moz - 4-метоксибензилоксикарбонил

NEM - N-этилморфолин

NMM - N-метилморфолин

Np - 4-нитрофенил

PFP - пентафторфенил

PicrH - 2,4,6-тринитрофенол

Py - пиридин

PyBroP - гексафторфосфат 6poM-N,N',N"-TpHC-

пирролидинофосфония.

TCA - трихлоруксусная кислота

TDBTU - тетрафторборат 1 -( 3,4-дигидро-4-оксо-1,2,3-

бензотриазинил )okch-N,N,N',N'-тетраметилурония

TEA - триэтиламин

TEAA - триэтиламмоний ацетат

TEAB - триэтиламмоний бикарбонат

TFA - трифторуксусная кислота

TFMSA - трифторметансульфокислота

THF - тетрагидрофуран

TosCI - п-толуолсульфонилхлорид

TOTU - тетрафторборат ( карбоэтоксицианметилен-

имино )okch-N,N,N',N'-тетраметилурония

TPSCI - 2,4,6-триизопропилбензолсульфонилхлорид

TPSNT - 2,4,6-триизопропилбензолсульфонил-З-нитро-

1,2,4-триазол

Z - бензилоксикарбонил

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Фосфонатные аналоги пептидо-нуклеиновых кислот: Синтез и гибридизационные свойства»

введение.

За последнее время синтетические олигонуклеотиды вошли в практику как уникальные инструменты для исследований в области молекулярной биологии и биотехнологии. Они широко применяются в качестве зондов и праймеров, как специфические мутагены в белковой и генетической инженерии, а также при получении искусственных генов и регуляторных фрагментов нуклеиновых кислот.

Одной из сфер применения синтетических олигонуклеотидов и в особенности их аналогов является использование в качестве специфических ингибиторов экспрессии генов и репликации вирусов, что создало предпосылки для разработки на их основе лекарственных средств нового поколения, применение которых осуществляется в рамках сформулированных концепций антисенс- и антиген-терапии. С этой целью было предложено большое количество аналогов нуклеиновых кислот, в том числе новый класс соединений - пептидные (полиамидные) нуклеиновые кислоты (ПНК).

Ввиду высокой аффинности к ДНК и РНК, а также устойчивости к деградации внутриклеточными ферментами, эти соединения привлекли внимание исследователей, как перспективные кандидаты для терапевтического использования. Однако биологическое применение ПНК ограничивается их плохой растворимостью в воде, склонностью к самоагрегации, неспособностью активировать РНКазуН и плохим проникновением сквозь клеточные мембраны. В связи с этим представляется актуальным поиск альтернативных соединений, которые, наряду с сохранением хороших гибридизационных характеристик, были бы лишены этих недостатков.

Настоящая работа посвящена разработке схемы синтеза новых ДНК-миметиков - фосфонатных аналогов ПНК (фПНК), и ряда гибридных олигомеров на их основе, а также оценке их физико-химических свойств.

Диссертационная работа выполнена в лаборатории биоинженерии генов Института биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН.

i. аналоги олигонуклеотидов : типы и их гибридизационные свойства.

( ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ )

За последнее десятилетие было синтезировано и описано огромное количество разнообразных производных природных олигонукпеотидов и их искусственных аналогов [1-5]. Этот интерес объясняется потенциальной возможностью использования подобного рода соединений в качестве терапевтических средств для лечения генетических повреждений, вирусных инфекций, злокачественных опухрлей и т. п. Их применение мыслится прежде всего в рамках концепций антисенс-[2-5] и антиген-терапии [6].

Идея использования антисенс-механизма подразумевает внутриклеточное комплексообразование мРНК с функциональными аналогами олигонукпеотидов (ФАО) с образованием гибридных дуплексов, которые, в идеальном варианте, должны являться субстратом для клеточной РНКазы Н, катализирующей гидролиз РНКового компонента [2,4,5]. Гибридные дуплексы могут также напрямую препятствовать транскрипции за счет блокирования связывания с рибосомой [2] либо задействовать иной механизм (например, рибозимы [1]). Антиген-механизм нацелен на связывание ФАО непосредственно с геномной ДНК с образованием на комплементарной последовательности триплекса [6] или расплетание двойной спирали с образованием гетеродуплекса [7] , что должно привести к ингибированию транскрипции соответствующих генов, сделать участок связывания мишенью для нукпеаз [8] или химически модифицировать целевую ДНК (окисление [9], алкилирование [10-12] гидролиз [13,14]).

Однако, для применения ФАО в качестве лекарственных средств необходимо выполнение еще целого ряда условий, помимо способности давать дуплекс (триплекс), что резко сужает список претендентов для практического использования, а именно:

а) следует добиться достаточной стабильности препарата по отношению к внутренней среде организма и системам инактивации (в основном к эндогенным нуклеазам, которые делают практически невозможным использование природных олигонуклеотидов ) [2-5];

б) необходимо обеспечить эффективную доставку препарата в клетку - в ядро (для антиген-терапии ) или только в цитоплазму (для антисенс- терапии), что может быть достигнуто конъюгацией с мембраноактивными компонентами для увеличения проницаемости через клеточную мембрану [15,16] или использованием клеточных систем транспорта (эндоцитоз [17]);

в) необходимо добиться высокой специфичности действия реагента на строго определенную комплементарную последовательность, так как с повышением общего сродства может возрастать неспецифическое взаимодействие и снижаться, например, дискриминация единичной комплементарной пары [18];

г) следует максимально уменьшить побочное воздействие ФАО на другие системы организма за счет связывания с тканевыми белками, активации иммунной системы, комплексообразования с ионами металлов [3] и т.п.

Кроме того, очень важной является проблема снижения стоимости получаемых ФАО.

Несмотря на большой прогресс, достигнутый в этой области за последние годы, соединений, полностью отвечающих данным требованиям до сих пор не найдено. Поиск этих соединений продолжается в основном в трех направлениях : введение новых модификаций в природные олигонуклеотиды, конструирование и синтез искусственных аналогов олигонуклеотидов, получение конъюгатов олигонуклеотидов обоих типов с молекулами, способными осуществить адресную доставку антисенс- или антиген-олигонуклеотидов к соответствующим мишеням. Рассмотрению работ в этих направлениях и посвящен настоящий литературный обзор.

1.1. Модифицированные олигонуклеотиды.

Одним из основных подходов является модификация природной фосфодиэфирной связи (рис.1) в частности, замещение кислорода гетероатомами: азотом (фосфамиды (1) [19-21] ); серой ( тиофосфаты (2) [3,22]; дитиофосфаты (3) [23-25]); бором ( боранофосфаты (4) [26,27]); водородом (Н-фосфонаты (5) [28]); алкильной группой (6) [29] ( в частности, метилфосфонаты [30-32]); алкоксигруппой (фосфотриэфиры (7) [33];

№ X V Т

1 -0- -Р(0)1ЧНР- -0-

2 -0- -Р(0)в-- -0-

3 -0- -Р(8)8"- -0-

4 -0- -Р(0)ВНз"- -0-

5 -0- -Р(0)Н- -0-

6 -0- -Р(0)А1к- -0-

7 -0- -Р(0)0А1к- -0-

8 -0- -СН2- -0-

9 -в- -сн2- -0-

10 -СН2- -ММе- -0-

11 -СН2- -С(= 0)- -мн-

12 -Р(0)0" -0-

13 -МН- -С(= Ш2)+- -ын-

Р - Н, ОН, ОА1к, Р, Вг К1. - продолжение цепи.

х" "к

Рисунок 1.

Все эти соединения (за исключением дитиофосфатов) являются оптически активными. Показано, что Рр и Бр изомеры обладают неодинаковым сродством к комплементарной матрице [34,35], при этом оптически чистые (Чр- изомеры ( фосфамиды [20] и метилфосфонаты [35,36]) и Эр- изомеры (тиофосфаты [34,37]), имеющие одинаковое

пространственное расположение заместителей, как правило связываются с большей аффинностью, чем соответствующие стереоизомеры. Помимо различия в сродстве, наличие Р-хиральных звеньев влияет на взаимодействие с ферментами, которые также могут различать стереоизомеры [27,38].

Замена кислорода серой оказалась одной из наиболее удачных. В общем случае, температура плавления ( Тт ) дуплексов тиофосфатных аналогов олигонуклеотидов с ДНК(РНК) несколько ниже природных, что можно скомпенсировать увеличением длины либо содержания гуанина и цитозина [5]. Одно из главных . достоинств тиофосфатных олигонуклеотидов- активация РНКазыН при образовании дуплекса с РНК, что предполагает высокую степень блокирования трансляции при низких концентрациях; кроме того, они устойчивы к действию нуклеаз [3,5].

Чтобы исключить проблемы, связанные с получением стереоизомеров, Карузерс и сотр. [5] получили дитиофосфатные олигонуклеотиды. Эти соединения являются изоэлекгронными аналогами ДНК и не разрушаются нуклеазами. Однако, гибридный комплекс с РНК, по сравнению с комплексом ДНК/РНК, имеет пониженную температуру плавления ( 1-2°С/мод.), а из-за высокого содержания серы дитиофосфаты активно взаимодействуют с белками, как следствие, они более токсичны.РНКазаН активируется слабо [5].

Модификация фосфата увеличивает стабильность олигонуклеотида по отношению к действию нуклеаз, вместе с тем тиофосфатный и дитиофосфатный дуплексы с комплементарной РНК остаются субстратами для РНКазыН [3,5]. Описаны соединения, содержащие более одного гетероатома у фосфора (алкилтиофосфонаты [29]), а также тионотриэфиры [15,16].

Ряд работ посвящен теме замещения анионного кислорода катионогенной группировкой (аминоалкилфосфотриэфиры [39], аминоалкилфосфонаты [40]). Соответствующие олигомеры получают на основе динуклеозидных синтонов, содержащих чистый диастереомер. В некоторых случаях это приводит к возрастанию стабильности дуплексов [40], видимо за счет компенсации электростатического отталкивания цепей

[40,41], в ряде случев при связывании наблюдалась выраженная рН-зависимость [42]. .Летзингер и сотр. [5] показали, что олигомер, содержащий анионные и стереоспецифичные катионные звенья дает дуплекс с РНК с температурой плавления +2,3°С/мод..

Совсем недавно японскими исследователями были получены Н-фосфонатные олигонуклеотиды (5). Описан синтез пурин-пиримидинового тетрамера и тиминсодержащего декамера. Данных по гибридизации не приведено [28].

К неионным аналогам относятся метилфосфонаты. Олигонуклеотиды (6) на их основе полностью устойчивы к действию экзо-и эндонуклеаз. Гибридные комплексы с РНК не являются субстратом для РНКазыН, но "химерные олигомеры", содержащие шесть природных нуклеотидов и два метилфосфонатных (по одному с 3' и 5' концов), вступив во взаимодействие с РНК, способны активировать РНКазуН и проявляют определенную активность in vivo [5] ( в основном это относится к Rp-изомерам).

Следующая ступень модификаций - замена фосфата неким связующим звеном с соответствующим количеством связей. Были предложены формацетальные (8) [43-45] и тиоформацетальные (9) [46-49] производные. Причем, 3-OCH2S-5' оказался неудачным вариантом, видимо, из-за того, что связь C-S имеет большую длину, чем С-0 и в 5'-тиопроизводном дестабилизирована оптимальная гош-конформация двух гетероатомов ( кислорода рибозы и серы ). Олигонуклеотиды, имеющие в своем составе изостеры (9) дают стабильный комплекс с РНК-мишенью (+0,8°С/мод.) [5,49]. Олигомеры такого типа (на основе динуклеозидных синтонов) проявляют антисенсную активность in vitro и имеют повышенную устойчивость к действию нуклеаз.

Описаны метилен(метилимино) "двойки" (MMI) (10) [5,50-52], содержащие вместо фосфата фрагмент М,0-диалкилгидроксиламина. Олигомеры на их основе дают стабильный комплекс с РНК, являющийся вместе с тем субстратом для РНКазыН. ЯМР исследования показали, что З'-метиленовая группа сдвигает равновесие конформаций рибозы в область З'-эндо, таким образом преорганизуя молекулу для образрования

дуплекса А-формы. Особенно перспективными считаются производные рибо- ряда, с метокси- группой при 2' углеродном атоме [5]. Предложен карбоксамидный вариант межнуклеозидной связи (11) [5]. Определенная преорганизация здесь, как и в случае с ММ! аналогами, приводит к увеличению аффинности к комплементарной РНК (+0,1°С/мод.). Олигомер устойчив к экзо- и эндонуклеазам, но РНКазаН активна только в случае блокирования этими производными 3' и 5' концов природного олигонукпеотида.

Максимальная Тщ дуплекса с поли гА ( >30°С при низкой ионной силе раствора, причем речь идет о пентамере Т ) описана для олигомера, у которого фосфатная анионная группировка замещена на катионную гуанидиновую ( "дезоксирибонуклеиновые гуанидины" , ( РМв )), (13) [5356]. Наблюдается именно специфичное связывание, так как с поли г(_1, поли гв, поли гС взаимодействия не наблюдалось [5].

Довольно удачным вариантом оказалась замена мостикового 3' кислородного атома на азот и получение соответствующего олигомерного фосфамида (12) [57-60]. Проведенные исследования показали, что рибозное кольцо при замене 3' кислорода на азот переходит из преимущественно С2' -эндо в СЗ1 -эндо, что приводит к стабильному дуплексу А-типа с комплементарной РНК. Были предложены различные варианты смешанных олигонуклеотидов, содержащих наряду с природными фосфодиэфирными связями фосфамидные М3'-»Р5', включая цвиттерионную последовательность, где анионный кислород через один замещен на остаток 1,1-диметилтриметилендиамина [61]. Замена -ОН при С2' на -Р или -ОМе увеличивает стабильность гетеродуплекса. К сожалению, РНКазаН не активируется [5].

В работе [62] предложен карбоксамидо-фосфонатный вариант олигонукпеотида (14). Полученный декамер давал устойчивый дуплекс с комплементарной ДНК (РНК). Тщ практически совпадала с соответствующими для ДНК/ДНК и ДНК/РНК.

11 /ч

■о—P/XNH

1

OR,

Thy

R

r20

r2o

r1, r2 - продолжение цепи.

(14)

(15)

Суть следующего подхода заключается в том, что при введении заместителей в рибофуранозное кольцо достигается в какой-то степени фиксация СЗ'-эндо конформации, характерной для А-формы ДНК и РНК в отличие от С2'-эндо, характерной для В-формы ДНК. Поскольку ДНК/РНК гетеродуплекс более стабилен, чем ДНК/ДНК, то можно предположить более высокую аффинность олигомеров из таким образом модифицированных нуклеозидов. Получен целый ряд 2'-0-алкилнукпеозидов (метильные [63], этильные [64], аллильные [65] и т. п. ) и 2'-галогенпроизводных (2'-фтор [66,67] и 2'-бромпроизводных [68]). Показано, что соединения, относящиеся к рибо- ряду имеют аффинность выше, чем члены арабино- ряда и определяется полярностью и размером заместителя. Известны также 2',2'- дифторнуклеозиды [69].

В еще большей степени фиксируется СЗ'-эндо конформация у так называемых LNA ( Locked Nucleic Acid ) олигомеров, содержащих 2'-0,4'-С-метиленбициклонуклеозиды. Введение этих производных в олигонуклеотиды приводило к беспрецедентному увеличению Тт комплекса с ДНК(РНК) ( ДТщ = 3-8°С на модификацию) при сохранении специфичности связывания [70,71]. Были также получены 2'-S,4'-C-метиленбициклонуклеозиды [72], 3'-0,4'-С-метиленбициклонуклеозиды [73] и 2',3'-бицикло-производные [74].

Недавно показано, что изомерные природным 3'-олигодезоксинукпеотиды способны к эффективному

комплексообразованию с комплементарной матрицей РНК, но не ДНК [75].

Своеобразную структуру имеют морфолиновые аналоги нуклеозидов, получаемые из рибонуклеозидов через периодатное окисление и восстановительное аминирование; из них известны морфолинофосфамиды [76], морфолинокарбаматы [77] и -тиокарбаматы [78]. Соответствующие олигомеры в состоянии давать дуплекс с РНК [68]. Попытки заменить фуранозный цикл природных нуклеозидов конформационно более подвижным привели к получению ФАО способных селективно узнавать РНК на основе 1,5-ангидрогекситола (15), для которого рассматривается возможное пространственное соответствие пиранозного "кресла" СЗ' -эндо конформации пентозного цикла в олигорибонуклеотидах [79].

Заслуживают внимания также а-аномерные аналоги ФАО, дающие стабильный дуплекс с ДНК и РНК с параллельной ориентацией цепей [80]. Особенно интересны неионные а-аномерные аналоги: а-фосфамиды и а-метилфосфонаты [81], образующие более стабильные комплексы, чем немодифицированные а-аномеры и аналогично модифицированные 0-аномеры [82]. Как чистые а-аномерные олигонуклеотиды, так и олигомеры с чередующимися а- и р- нуклеотидами проявляют высокую устойчивость к действию нукпеаз [80].

Наконец, третий подход состоит в стремлении модифицировать гетероцикп основания (рис.2,3) с тем, чтобы повысить его способность к Уотсон-Криковскому и (или) Хугстиновскому взаимодействию или повлиять на степень участия в стэкинг-взаимодействии. Следует заметить, что модификации гетероциклических оснований в меньшей степени затрудняет распознавание ФАО ферментами, чем перестройка скелета, что является привлекательным фактом с точки зрения антисенс-применения [2-4].

Усиление вклада водородных связей считается ответственным за стабилизирующий эффект в случае триплексов, образованных с участием 5-бромцитозина (17) и 5-бромурацила (19) [83] и влияет на специфичность спаривания в случае 5-фторурацила (18) [84,85]. Прочность Хугстиновских пар увеличивается в случае нуклеозидов 5-метилцитозина (16) [83,84], видимо за счет возрастания основности.

№ X У г

16 =0 -N1Н2 -Ме -Н

17 =0 -Ш2 -Вг -н

18 =0 -ОН -Г -н

19 =0 -ОН -Вг -н

20 =0 -ОН -С^С-Н -он

21 =0 -ОН -С=С-Ме -н

22 =0 -НИ2 -С^С-Ме -н

23 -ОН -Н -он

24 -ОН -Ме -н

у*-

к2б "к

Б1. - продолжение цепи. Рисунок 2.

Увеличение вклада стэкинг-взаимодействия приводит к упрочению связывания с РНК в случае ФАО на основе производных 5-этинилурацила (20) [4], 5-(пропинил-1 )-урацила (21) и 5-(пропинил-1 )-цитозина (22); отмечается активация РНКазыН [86]. При образовании триплекса, стэкинг с участием пропинильных заместителей также положительно влияет на его стабильность [87]. Сходный эффект, проявляющийся в возрастании прочности связывания, дают производные 2-тиоурацила (23) в РНК [88] и соответствующие ему производные 2-тиотимина (24) в ДНК [89]. Описано введение в положение 5 пиримидинового основания катионогенных ©-аминоалкильных заместителей [41 ].

Несколько меньше известно модификаций пуриновых оснований. Возможность образования дополнительной водородной связи увеличивает прочность Уотсон-Криковской пары. Яркий пример - нукпеозиды 2,6 диаминопурина (26,25), [85,90], как дезокси- так и риборяда. К стабилизирующим факторам относится введение имидазола ( 3-(имидазолйл-1 )-пропилгуанин (28), 1Ч2-3-(имидазолил-1 )-пропил-2,6-диаминопурин (27) ) [91]. Точно также введение остатка спермина в

положение 2 (29) сильно увеличивает прочность дуплекса, образуемого соответствующим олигонуклеотидом

(до 7°С / мод.) [92].

№ X У

25 -N142 -н -ОН

26 -МН2 -н -н

27 -N142 -(СН2)3-1-1т -н

28 -ОН -(СН2)3-1-1т -н

29 -он спермин -н

N

1^0

X

■н^Цчну

спермин = -(CH2)ЗNH(CH2)4NH(CH2)ЗNH2 > - продолжение цепи.

Рисунок 3.

В последнее время появились модифицированные нуклеозиды, содержащие вместо традиционных оснований полициклические гетероцикпы, в частности индоло-[4,5-р]-пиримидинон-2 (30) [93]; 3,4 диазафеноксазинон-2 (31) и 3,4-диазафенотиазинон-2 (32) [94].

К2(5" (30)= -- ; (31 )= О; (32)= Б

, Я2 - продолжение цепи.

Олигонукпеотиды на их основе проявляют высокое сродство при выраженной специфичности [93,94], демонстрируя "всплеск" стабилизации

при последовательном расположении 2-3 трициклических нуклеотидов друг за другом. В ряде работ [95-97] предлагается использовать гидрофобные С-нуклеозиды, неспособные к Уотсон-Криковскому или Хугстиновскому взаимодействию, но эффективно участвующие в стэкинге, стабилизируя тем самым дуплекс (триплекс). Причем, преимущественно в 3' ( 5' ) положении [97] или месте "стыка" дуплекса и триплекса [95], где наиболее велик вклад взаимодействия пленарных ароматических я-систем.

Имеющиеся к настоящему времени данные позволяют предположить, что модификации, стабилизирующие комплекс, носят в какой-то степени аддитивный характер; таким образом имеет смысл объединить в одной молекуле целый ряд структурных элементов, положительно влияющих на образование дуплекса (триплекса). Исходя из этого, были предложены тиоформацетальные димеры 5-пропинильных пиримидинов [98], 2'-фторпроизводные М3'-»Р5' фосфамидов [58]. и т. п.

I. 2. ПН К. Аналоги и гомологи.

Предложенные в 1991г. группой П.Нильсена [99,100] "пептидные нуклеиновые кислоты" (ПНК) представляют собой новый класс ФАО, имеющий мало общего с природными олигонуклеотидами. Под ПНК подразумевают олигомер М-2-аминоэтилглицина к которому через ацетильный линкер присоединены гетероциклические основания (рис. 4).

Рисунок 4.

ПНК олигомеры способны взаимодействовать с комплементарной последовательностью ДНК, РНК и ПНК, давая стабильный дуплекс, причем соответствующая Тт располагается в следующий ряд: ПНК/ПНК > ПНК/РНК > ПНК/ДНК > ( РНК/ДНК > ДНК/ДНК) [101]. Причем, стабильность этих дуплексов в известной степени не зависит от ионной силы раствора, по причине нейтральности остова ПНК; кроме того ПНК способны давать как "параллельный", так и несколько более стабильный "антипараллельный" комплекс [102].

Заслуживает внимания уникальная способность полипиримидиновых ПНК образовывать с комплементарной последовательностью ДНК (РНК) очень стабильный триплекс состава (ПНК)г/ДНК [99,102,103]. Предпочтительное образование такого триплекса на двухцепочечной ДНК приводит к внедрению олигомера ПНК с образованием гибридного триплекса и вытеснением полипиримидиновой цепи ДНК ( так называемая "Р-петля" ) [104,105]. Структура дуплексов ПНК/ДНК [106] и ПНК/РНК [107] изучалась методом ЯМР, а ПНК/ПНК и (ПНК/ДНК - методом

рентгеноструктурного анализа [102]. Исследования показали, что комплексы с ПНК реализуют особую Р-форму, существенно отличающуюся от канонических А- и В-форм как по диаметру образующейся спирали, так и по количеству гетероциклических оснований на виток [102].

Помимо этого, проведенная исследовательская работа выявила одну из причин высокой стабильности полиамидного триплекса - наличие водородных связей между -Ь1Н- протонами Хугстиновской цепи ПНК и фосфатами пуринового олигомера, причем конформации Хугстиновской и Уотсон-Криковской цепи ПНК почти одинаковы [102], хотя на основе результатов молекулярного моделирования постулировалось наличие аналогичной системы интра- или интермолекулярных водородных связей между -СО- и -МН- в пределах одной цепи ПНК [108]. Следует отметить, что результаты рентгеноструктурного анализа не противоречат этому, хотя и не удалось обнаружить систему упорядоченных водородных связей в спектре ЯМР октамера ПНК [109]. По всей видимости, существование множественных внутри- и межцепочечных водородных связей, наряду с отсутствием электростатического отталкивания, следует считать ответственным за повышенную прочность комплексов ПНК с ДНК.

Гибридизационные свойства ПНК были также изучены с применением метода флуоресцентного переноса энергии [110]. Использование флуоресциино- и родамино- меченых дуплексов ПНК/ДНК и ПНК/ПНК показало совпадение структур дуплексов с данными ЯМР (ПНК/ДНК) и рентгеноструктурного анализа (ПНК/ПНК). Термодинамические характеристики этих комплексов отличались от немеченых, вероятно, из-за взаимодействия молекул красителей.

Интересные результаты также получены при изучении дуплекса ПНК/ПНК. Было показано, что хиральность С-концевого аминокислотного остатка определяет знак образующейся двойной спирали ПНК/ПНК, при этом играет роль размер и полярность радикала аминокислоты [111].

К сожалению, наряду с изложенными выше преимуществами, олигомерам ПНК свойственны и определенные недостатки. Плохая растворимость в воде и крайне низкая способность ПНК проникать через фосфолипидные мембраны сильно ограничило их возможное использование

в качестве терапевтических средств антисенс-( антиген- )терапии [5,112]. Кроме того, олигомерам ПНК присуща склонность к самоагрегации, что ставит их гибридизационные свойства в зависимость от конкретной последовательности. Комплекс ПНК/РНК не активизирует РНКазуН [5].

Тем не менее, границы использования ПНК постоянно расширяются и не прекращаются попытки улучшить существующую структуру или синтезировать нечто иное, обладающее сходными функциональными возможностями.

Необычные свойства ПНК вызвали появление гипотезы о роли природных соединений близкой структуры в появлении и развитии системы хранения и передачи наследственной информации на заре возникновения жизни [113]. Была сформулирована идея мира "ПНК-РНК", в котором хранителем генетической информации выступали бы соединения ПНК, а синтез РНК осуществлялся бы на матрице ПНК. Подобная возможность была продемонстрирована в работе [114].

Синтез мономеров ПНК включает в себя три основные стадии:

а) получение алкилированых производных защищенных пуринов и пиримидинов;

б) получение \/у-амино- и карбоксизащищенного N-2-аминоэтилглицина;

в) "сборка" собственно мономера.

Предложены несколько способов получения соответствующих производных гетероцикпов. Классический вариант, описанный П. Нильсеным и сотр. представлен на схеме 1. Хотя имелись данные о карбоксиметилировании тимина бромуксусной кислотой в одну стадию с удовлетворительным выходом [115] (позднее была описана более удачная схема алкилирования бромуксусной кислотой с получением требуемой тимин-1-ил-уксусной кислоты с выходом 80% [116]) использовалась двухстадийная процедура: алкилирование метилбромацетатом с последующим омылением сложного эфира [99,117,118]. В случае других гетероциклических оснований необходима защита экзоциклических аминогрупп. В работах Нильсена для этой цели предложена комбинация 2УВпг групп.

НИ'

о о

Н

чсо2н

со2н

ix, x

ОВг1

¿Хм>

^со2н

о ВгСНгСОгМс, К2С03, БМР; и) 2н ИаОН, Д, общий выход 62%; ш) 2-С1 Ру, 56%; IV) ВгСНгСОгМс, К2С03) БМР; у) 2н №0Н, обший выход 31%; vi) ВгСНгСОгЕс, ЫаН, ОМБ, 73%; VII) тетрафгорборягг Ы-2-К'-эталимилаюлия, ОСМ/ОМР, 63%; VIII) 2н ЫаОН/МеОН; а) ВгСНгСОгН, К2С03, ЮМР, 45%; х) ВаОН, N3. ОМР. 52%.

Заключение диссертации по теме «Биоорганическая химия», Чуб, Михаил Викторович

выводы.

1. Разработана схема синтеза мономеров нового класса ДНК-миметиков - фосфонатных аналогов ПНК на основе М-(2-гидроксиэтил)- и М-(2-аминоэтил)-фосфоноглицина, содержащих четыре гетероциклических основания ДНК, а также мономеров на основе 4-гидроксипролина и серина. Предложена упрощенная схема синтеза ПНК.

2. Осуществлен автоматический твердофазный синтез олигомеров фПНК с использованием внутримолекулярного О-нуклеофильного катализа.

3. Осуществлен синтез гибридных димерных синтонов фПНК-ПНК, фПНК-ПНКИур и фПНК-ПНК®вг. С использованием этих синтонов получены гибридные олигомеры фПНК с ПНК и гидроксиаминокислотными мономерами.

4. На ряде примеров продемонстрированы перспективные физико-химические и гибридизационные свойства олигомеров фПНК и их гибридов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Чуб, Михаил Викторович, 1999 год

Список литературы

1. J.Marr. Rybozymes as Therapeutic agents.//Drug Discovery Today, 1996, V.1, N.3, pp.94-102.

2. E.Uhlmann, A.Peyman. Antisense Oligonucletides: A New Therapeutic Principle.// Chem.Rev., 1990, V.90, N.4, pp.543-584.

3. J.Cohen. Phosphorothioate oligodeoxynucleotides.//ln: Antisense Research ana Applications, Ed. S.Crookeand B.Lebieu, 1993, CRC Press, inc., pp.205-221.

4. A.De Mesmaeker, R.Haner, P.Martin, H.Mozer. Antisense Oligonucleotides.// Acc.Chem.Res., 1995, V.28, N.9, pp.366-374.

5. Y.Sanghvi. DNA with Altered Backbone in Antisense Applications.// In: DNA and Aspects of Molecular Biology, Ed. E.Kool, 1997, Pergamon Press, pp.214-240.

6. C.Helene, J.Toulme. Specific regulation of gene expression by antisense, sense and antigene nucleic acids.//Biochim. et Biophis. Acta, 1990, V.1049, pp.99-125.

7. N.Schmid, J.Behr. Recognition of DNA Sequences by Strand Replacement with Polyamino-oligonucleotides.// Tetrahedron Lett., 1995, V.36, N.9, pp. 1447-1450.

8. V.Demidov, M.Frank-Kamenetski, M.Egholm, O.Buchardt, P.Nielsen. Sequence selective double strand DNA cleavage by Peptide Nucleic Acid (PNA) targeting using nuclease S1.// Nucl. Acids Res., 1993, V.21, N.9, pp.2103-2107.

9. D.Sergeyev, T.Godovkina.V.Zarytova. Catalytic site-specific cleavage of a DNA target by an oligonucleotide carrying bleomycin A5.// Nucl. Acids Res., 1995, V.23, N.21, pp.4400-4406.

10. T.Povsic, P.Dervan. Sequence-Specific Alkilation of Double-Helical DNA by Oligonucleotide-directed Triple-Helix Formation.// J. Am. Chem. Soc., 1990, V. 112, N. 125, pp.9428-9430.

11. T.Li, S.Rokita. Selective Modification of DNA Controlled by an Ionic Signal.// J. Am. Chem.Soc.,1991, V.113, N.20, pp.7771-7773.

12. E.Lukhtanov, M.Podyminogin, I.Kutyavin, R.Meyer and H.Gamper. Rapid and efficient hybridization-triggered crosslinking withing a DNA duplex by an oligodeoxyribonucleotide bearing a conjugated cyclopropapyrroloindole.// Nucl. Acids Res., 1996, V.24, N.4, pp.683-687.

13. J.Rammo, R.Hettich, A.Roigk, H.Schneider. Catalisys of DNA cleavage by lantanide complexes with nucleophilic or intercalating ligands and their kinetic characterization.// Chem.Comm., 1996, pp. 105-107.

14. K.Ragunathan, H.Schneider. Binuclear Lanthanide Complexes as catalysts for the Hidrolysis of Bis(p-nitrophenyl)-phosphate and Double-Stranded DNA.//Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1996, V.35, N.11, pp. 1219-1220.

15. Z.Zang, J.Tang, J.Y.Tang. Synthesis and properties of novel thiono triester modified antisense oligodeoxyribonucleotide phosphorothioates. II Bioorg. & Med. Chem. Lett., 1995, V.5, N.15, pp. 1735-1740.

16. Z.Zang, J.Smith, A.Smith, W.Eisenberg, G.Pari, J.Tang. Thionotriester modified antisense oligonucleotides for inhibition of human cytomegalovirus in vitro.// Bioorg. & Med. Chem. Lett., 1996, V.6, N.16, pp. 1911-1916.

17. J.Bongartz, A.Aubertin, P.Milhaud, B.Lebleu. Improved biological activity of antisense oligonucleotides conjugated to a fusogenic peptides.// Nucl. Acids Res., 1994, V.22, N.22, pp.4681-4688.

18. М.Красильникова, К.Извольский, О.Крупник, Ю.Лазуркин. Использование специфического связывания пептидно-нуклеиновой кислоты с ДНК в методе "Ахиллесовой пяты".//Докл. Акад. Наук, 1995, т.334, N.4, с.552-555.

19. S.Peyrottes, J.Vasseur, J.lmbach, B.Rayner. Oligodeoxynucletide phosphoramidates: synthesis and thermal stability of duplexes with DNA and RNA targets.// Nucl. Acids Res,. 1996, V.24, N.10, pp. 1841-1848.

20. S.Chaturvedi, T.Horn, R.Letsinger. Stabilization of triple-stranded oligonucleotide complexes: use of probes containing alternating phosphodiester and stereo-uniform cationic phosphoramidate linkages.// Nucl. Acids Res., 1996, V.24, N.12, pp.2318-2323.

21.A.Jager, M.Levy, S.Hetch. Oligonucleotide N-Alkilphosphoramidates: Synthesis and Binding to Polynucleotides.// Biochemistry, 1988, V.27, pp.72377246.

22. W.Stec, G.Zon, W.Egan, B.Stec. Automated Solid-phase Synthesis, Separation and Stereochemistry of Phosphorothioate Analogues of Oligodeoxynucleotides.// J. Am. Chem. Soc., 1984, V.106, N.20, pp.6077-6079.

23. A.Grandas, W.Marshall, J.Nielsen, M.Caruthers. Synthesis of deoxycytidine oligomers containing phosphorodithioate linkages.// Tetrahedron Lett., 1989, V.30, N.5, pp.543-546.

24. W.Brill, J.Tang, Y.Ma, M.Caruthers. Synthesis of Oligodeoxynucleotide Phosphorodithioates via Thioamidites.// J.Am. Chem. Soc., 1989, V.111, N.6, pp.2321-2322.

25. W.Brill, J.Nielsen, M.Caruthers. Synthesis of deoxydinucleoside Phosphorodithioates.// J.Am. Chem. Soc., 1991, V.113, pp.3972-3980.

26. A.Sood, B.Shaw, B.Spielvogel. Boron-containing Nucleic Acids. 2. Synthesis of Oligodeoxynucleoside Boranophosphates.// J. Am. Chem. Soc., 1990, V.112, pp.9000-9001.

27. H.Li, KPorter, F.Huang, B.Shaw. Boron-containing oligodeoxyribonucleotide 14-mer duplexes: enzymatic synthesis and melting studies.// Nucl. Acids Res., 1995, V.23, N.21, pp.4495-4501.

28. T.Wada, F.Honda, Y.Sato and M.Sekine. First Synthesis of H-Phosphonate Oligonucleotides Bearing N-Unmodified Bases.// Tetrahedron Lett., 1999, V.40, pp.915-918.

29. H.Roelen, H.van den Est, C.Dreef, G.van der Marel, J.van Boom. Synthesis of Alkilphosphon(othio)ate Analogue of DNA.//Tetrahedron Lett., 1992, V.33, N.17,.pp.2357-2360.

30. P.Miller, C.Agris, A.Murakami, P.Reddy, S.Spits, P.O.P. Ts'o. Preparation of oligodeoxyribonucleoside methilphosphonates on a polystyrene support.// Nucl. Acids Res., 1983, V.11, N.18, pp.6225-6242.

31. L.Wozniak, J.Pyzowski, W.Stec. New Approach to the Synthesis of Oligo(nucleoside methanephosphonate)s.// J. Org. Chem., 1996, V.61, N.3, pp.879-881.

32. I.Habus, T.Devlin, R.Iyer, S.Agrawal. Improved synthesis of oligonucleotide methilphosphonate analogs.//Bioorg. &Med. Chem. Lett., 1996, V.6, N.I2, pp. 1393-1398.

33. L.Koole, H.Moody, N.Broeders, P.Quaedflieg, W.Kuijpers, A.Coenen, S. van der Wal, H.Buck. Synthesis of Phosphate-Metilated DNA Fragments Using 9-Fluorenilmethoxycarbonyl as Transient Base Protecting Group.//J. Org. Chem., 1989, V.54, N.7, pp.1657-1664.

34. H.Kanehara, T.Wada, M.Mizuguchi, K.Makino. Influence of a thiophosphate linkage on the duplex stability - does Sp configuration always lead to higher stability then Rp? // Nucleosides & Nucleotides, 1996, V.15, N.6, pp.11691178.

35. M.Reynolds, R.Hogrefe, J.Jaeger, D.Schwarts, W.Marvin, W.Daily, T.Beck, R.KIem, L.Arnold Jr. Synthesis and Thermodynamics of oligonucleotides containing chirally pure Rp methilphosphonate linkages.// Nucl. Acids Res., 1996, V.24, N.22, pp.4584-4591.

36. C. Le Bee, E.Wickstrom. Stereospecific Grignard-Activated Solid Phase Synthesis of DNA Methilphosphonate Dinners.// J. Org. Chem., 1996, V.61, N.2, pp.510-513.

37. A.Wilk, W.Stec. Analysis of oligo(deoxynucleoside phosphorothioate)s and their diastereomeric composition.// Nucl. Acids Res., 1995, V.23, N.3,

pp.530-534.

38. T.Lanio, U.Selent, C.Wenz, A.Schulz, M.Adiraj, S.Katti, A.Pingoud. EcoRV-T94V: a mutant restriction endonuclease with an altered substrate

specificity towards modified oligodeoxynucleotides.//Protein Eng., 1996, V.9, N.11, pp. 1005-1010.

39. V.Bodepudi, M.Hogan, M.Eggers. Aminoalkyl phosphoramidites: a new class of intermediates forcationic backbone.// In: XII International Roundtable Nucleosides, Nucleotides and Their Applications "Making Drugs out of Nucleosides and Oligonucleotides", Sept. 15-19, 1996, La Jolla, CA, USA, Abstracts, pp.162.

40. A.Cook, R.Fathi, Q.Huang, G.Coppola, W.Delaney, J.Syi. Synthesis and properties of oligonucleotide (2-aminoethy!)phosphonates.// Nucleosides & Nucleotides, 1995, V.14, N.3-5, pp. 1005-1008.

41. H.Hashimoto, M.Nelson, C.Switzer. Zwitterionic DNA.//J. Am. Chem. Soc., 1993, V.115, N.16, pp.7128-7134.

42. R.Letsinger, C.Singman, G.Histand, M.Salunkhe. Cationic Oligonucleotides.// J. Am. Chem. Soc., 1988, V.110, pp.4470-4471.

43. M.Matteucci. Deoxyoligonucleotide Analogs Based on Formacetal Linkages.//Tetrahedron Lett., 1990, V.31, N.17, pp.2385-2388.

44. G.Veenman,G.Van Der Marel, H.Van Den Elst, J.Van Boom. An Efficient Approach to the Synthesis of Thimidine Derivatives Containing PhosphateIsosteric Methylenacetal Linkages.// Tetrahedron, 1991, V.47, N.8,pp.1547-1562.

45. H.Gao, F.Brown, P.Jeffs, N.Bischofberger, K.Lin, A.Pipe, S.Noble. Probing Structural Factors Stabilizing Antisense Oligonucleotide Duplexes: NMR Studies of a DNA-DNA Duplex Containing a Formacetal Linkage.// Biochemistry, 1992, V.31, pp.6228-6236.

46. M.Matteucci, K.Lin, S.Butcher, C.Moulds. Deoxyoligonucleotides Bearing Neutral Analogues of Phosphodiester Linkages Recognize Duplex DNA via Triple-Helix Formation.// J. Am. Chem. Soc., 1991, V.113, pp.7767-7768.

47. R.Jones, K.Lin, J.Milligan, S.Wadwani, M.Matteucci. Synthesis and Binding Properties of Pyrimidine Oligodeoxynucleoside Analogs Containing

Neutral Phosphodiester Replasements: The Formacetal and 3'-Thioformacetal Internucleotide Linkages.// J. Org. Chem., 1993, V.58, N.11, pp.2983-2991.

48. J.Zhang, M.Matteucci. A Mild Method for the Synthesis of 3'-Thioformacetal Dinucleotides: The Development of Diphenilphosphinate as a Glicosyl Donor.// Tetrahedron Lett., 1995, V.36, N.46, pp.8375-8378.

49. J.Zhang, J.Shaw and M.Matteucci. Synthesis and hybridization property of an oligonucleotide containing a 3'-thioformacetal linked pentathymidylate.// Bioorg. & Med. Chem. Lett., 1999, V.9, pp.319-322.

50. J.Vasseur, F.Debart,Y.Sanghvi,P.Dan Cook. Oligonucleotides: Synthesis of a Novel Methylhydroxylamine-Linke Nucleoside Dimer and its Incorporation into Antisense Sequences.// J. Am. Chem. Soc., 1992, V.114, pp.4006-4007.

51. M.Perbost, T.Hoshiko, F.Morvan, E.Swayse, R.Griffey, Y.Sanghvi. Synthesis of 5'-0-Amino-2'-deoxypyrimidine and Purine Nucleosides: BuildingBlocks for Antisense Oligonucleotides.//J. Org. Chem., 1995, V.60, N.16, pp.5150-5156.

52. F.Morvan, Y.Sanghvi, M.Perbost, J.Vasseur, L.Bellon. Oligonucleotide Mimics for Antisense Therapeutics: Solution Phase and Automated SolidSupport Synthesis of MMI Linked Oligomers.//J. Am. Chem. Soc., 1996, V. 118, N.1, pp.255-256.

53. R.Dempcy, O.AImarsson, T.Bruice. Design and synthesis of deoxynucleic guanidine: A polycation analogue of DNA.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1994, V.91, pp.7864-7868.

54. R.Dempcy, K.Browne, T.Bruice. Synthesis of the Polycation Thymidyl DNG, Its Fidelity in Binding Polyanionic DNA/RNA, and the Stability and Nature of the Hybrid Complexes.// J. Am. Chem. Soc., 1995, V.117, N.22, pp.6140-6141.

55. R.Dempcy, K. Browne, T.Bruice. Synthesis of a thymidyl pentamer of deoxyribonucleic guanidine and binding studies with DNA homopolynucleotides.//Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1995, V.92, pp.6097-6101.

56. K.Browne, R.Dempcy, T.Bruice. Binding Studies of cationic thymidyl deoxyribonucleic guanidine to RNA homopolynucleotides.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1995, V.92, pp.7051-7055.

57. J.Chen, R.Schultz, D.Lloyd, S.Gryaznov. Synthesis of oligodeoxyribonucleotide N3'-P5' phosphoramidite.// Nucl. Acids Res., 1995, V.23, N.I4, pp.2661-2668.

58. R.Schultz, S.Gryaznov. Oligo-2'-fluoro-2'-deoxynucleotide N3'-P5' phosphoramidates: synthesis and properties.//Nucl. Acids Res., 1996, V.24, N.15, pp.2966-2973.

59. K.Fearon, B.Hirschbein, J.Nelson, M.Nguyen, A.Okruszek, S.McCurdy, L.DeDionisio, A.Raible, E.Neil Cagle and V.Boyd. An improved synthesis of oligonucleotide N3'-P5' phosphoramidites and their chimera using hindered phoshoramidite monomers and a novel handle for reverse phase purification.// Nucl. Acids Res., 1998, V.26, N.16, pp.3813-3824.

60. J.Baraniak, D.Korczynski, R.Kaczmarek and E.Wasilewska. New approach to the solid phase synthesis of N3'-P5' phosphoramidite oligonucleotides.// Nucleosides & Nucleotides, 1998, V.17, N.8, pp. 13471353.

61. N.Mignet and S.Gryaznov. Zwitterionic oligodeoxyribonucleotide N3'-P5' phosphoramidites: synthesis and properties.//Nucl. Acids Res., 1998, V.26, N.2, pp.431-438.

62. V.Efimov,M.Choob,A.Kalinkina,O.Chahmacheva. Synthesis and properties of novel oligonucleotides analogues.// In: XII International Roundtable Nucleosides, Nucleotides and Their Applications "Making Drugs out of Nucleosides and Oligonucleotides", Sept. 15-19, 1996, La Jolla, USA, p. 178.

63. B.Sproat, B.Beijer, A.lribarren. New synthetic routes to protected purine 2'-0-methyl-riboside-3'-0-phosphoramidites using a novel alkilation procedure.//Nucl. Acids Res., 1990, V.18, N.1, pp.41-49.

64. M.Cotten, B.Oberhauser, H.Brunar, A.Holzner, G.Schaffner, E.Wagner M.Birnstiel. 2'-0-Methyl, 2'-0-ethyloligoribonucleotides and phosphorothioate oligodeoxyribonucleotides as inhibitors of the in vitro U7 snRNP-dependent mPNA processing event.// Nucl. Acids Res., 1991, V. 19, N.10, pp.2629-2635.

65. B.Sproat, A.lribarren, R.Garcia, B.Beijer. New synthetic routes to synthones suitable for 2'-0-allyloligoribonucleotide assembly.// Nucl. Acids Res., 1991, V.19, N.4, pp.733-738.

66. A.Kawasaki, M.Casper, S.Freier, E.Lesnik, L.Cummins, C.Gonzales, P.Dan Cook. Uniformly Modified 2'-Deoxy-2'-fluoro Phosphorothioate Oligonucleotides as Nuclease-Resistant Antisense Compounds with High Affinity and Specificity for RNA Target.//J. Med. Chem., 1993, V.36, N.7, pp.831-841.

67. D.OIsen, F.Benseler, H.Aurup, W.Pieken, F.Eckstein. Study of a Hammerhead Ribozyme Containing 2'-Modified Adenosine Residues.// Biochemistry, 1991, V.30, N.40, pp.9735-9741.

68. M.Aoyagi, Y.Ueno, A.Matsuda. Effects of 2'-a- and 2'-Bromo-2'-deoxyadenosine on Oligonucleotide Hybridization and Nuclease Stability.// Bioorg. & Med. Chem. Lett., 1996, V.6, N.13, pp. 1573-1576.

69. V.Patel, J.Hardin, G.Grindey, R.Schultz. Tritylate oncolytics as prodrugs.//Bioorg. & Med. Chem., 1995, V.5, N.5, pp.513-518.

70. A.Koshkin, S.Singh, P.Nielsen, R.Kumar, M.Meldgaard, C.OIsen and J.Wengel. LNA (Locked Nucleic Acids): Synthesis of the Adenine, Cytosine, Guanine, 5-Methylcytosine, Thymine and Uracil Bicyclonucleoside Monomers, Oligomerisation, and Unprecedent Nucleic Acid Recognition.// Tetrahedron, 1998, V.54, N.14, pp.3607-3630.

71. S.Obika, D.Nanbu, Y.Hari, J.Andon, KMorio, T.Doi, and T.lmanishi. Stability and structural features of the duplexes containing nucleoside

analogues with a fixed N-type conformation, 2'-0,4'-C-methyleneribonucleosides.//Tetrahedron Lett., 1998, V.39, N.30, pp.5401-5404.

72. R.Kumar, S.Singh, A.Koshkin, V.Raiwanshi, M.Meldgaard, and J.Wengel. The first analogues of LNA (Locked Nucleic Acids): phosphorothioate-LNA and 2-thio-LNA.11 Bioorg. & Med. Chem. Lett., 1998, V.8, pp.2219-2222.

73. S.Obika, K.Morio, Y.Hari, and T.lmanishi. Preparation and properties of 2',5'-linked oligonucleotide analogues containing 3'-0,4'-C-methylene ribonucleotides.// Bioorg. & Med. Chem. Lett., 1999, V.9, pp.515-518.

74. A.Koshkin and J.Wengel. Synthesis of Novel 2',3'-Linked Bicyclic Thymine Ribonucleosides.// J. Org. Chem., 1998, V.63, pp.2778-2781.

75. T.Prakash, K.Jung, C.Switzer. RNA recognition by the 2'-structural isomer of DNA.// Chem. Commun., 1996, pp. 1793-1794.

76. D.Weller. Properties of morpholino oligomers.// In: XII International Roundtable Nucleosides, Nucleotides and Their Applications "Making Drugs out of Nucleosides and Oligonucleotides", Sept. 15-19, 1996, La Jolla, CA.

USA.Abstracts, p. 16.

77. E.Stirchak, J.Summerton, D.Weller. Uncharged stereoregular nucleic acid analogs: 2. Morpholino nucleoside oligomers with carbamate internucleoside linkages.// Nucl. Acids Res., 1989, V.17, N.15, pp.6129-6141.

78. T.Ohgi, K.lshiama, H.Tomi, J.Yano. Synthesis and it's properties of oligonucleotide analogue containing thiocarbamate interlinkages.// Nucl. Acids Res., Symp.Ser., 1991, pp. 17-18.

79. A.Van Aershot, I.Verheggen, P.Herdewijn. Synthesis of nucleoside analogues with a 1,5-anhydrohexitol moiety.// Bioorg. & Med. Chem. Lett., 1993, V.3, N.6, pp.1013-1018.

80. F.Debart, G.Tosquellas, B.Rayner, J.lmbach. Optimization of hybridizing abilities and nuclease resistance in the design of chimeric a-anomeric oligodeoxynucleotides containing 3-anomeric gaps.// Bioorg. & Med. Chem. Lett., 1994, V.4, N.8, pp. 1041-1046.

81. S.Peyrottes, F.Debart-Vasseur, J.Vasseur, J.lmbach, B.Rayner. Effect of the anomeric configuration on the thermal stability of hybrids formed between phosphate-modified oligonucleotides and complementary DNA or RNA strands.// In: XII International Roundtable Nucleosides, Nucleotides and Their Applications "Making Drugs out of Nucleosides and Oligonucleotides, Sept. 15-19,1996, La Jolla, CA, USA. Abstracts, p.51.

82. F.Debart-Vasseur, J.Vasseur, B.Rayner, J.lmbach. Unusual hybridization properties of a new class of oligonucleotides: a-methylphosphonate derivatives.// In: XII International Roundtable Nucleosides, Nucleotides and Their Applications "Making Drugs out of Nucleosides' and Oligonucleotides, Sept. 1519, 1996, La Jolla, CA, USA. Abstracts, p. 174.

83. T.Povsic, P.Dervin. Triple Helix Formation by Oligonucleotides on DNA Extended to the Physiological pH Range.// J. Am. Chem. Soc., 1989, V.111, N.8, pp.3059-3061.

84. S.Beacauge, R.Iyer. The Synthesis of Modified Oligonucleotides by the Phosphoramidite Approach and Their Applications.// Tetrahedron, 1993, V.49, N.28, pp.6123-6194.

85. R.Durland, T.Rao, G.Revancar, J.Tinsley, D.Seth, P.Singh, KJayaraman. Binding of T and T analogs to CG base pairs in antiparallel triplexes.// Nucl. Acids Res., 1994, V.22, N.15, pp.3233-3240.

86. B.Froehler, S.Wadwani, T.Terhorst, S.Gerrard. Oligonucleotides Containing C-5 Propyne Analogs of 2'-Deoxyuridine and 2'-Deoxycytidine.// Tetrahedron Lett., 1992, V.33, N.37, pp.5307-5310.

87. N.Colocci, P.Dervan. Cooperative Binding of 8-mer Oligonucleotides Containing 5-(1-Propynyl)-2'-deoxyuridine to Adjacent DNA Sites by Triple-Helix Formation.// J. Am. Chem. Soc., 1994, V.116, N.2, pp.785-786.

88. D.Davis, R.Kumar. Structural studies of 2-thiouridine in RNA.// In: XII International Roundtable Nucleosides & Nucleotides and Their Application "Making Drugs out of Nucleosides and Oligonucleotides", Sept. 15-19, 1996, La Jolla, CA, USA.Abstracts, p. 173.

89. T.lshakawa, F.Yoneda, KTanaka, K.Fuji. Synthesis and properties of oligothymidylate containing sulfur-modified thymidine: effect of thiation of pyrimidine ring on the thermostability and conformation of the duplex.// Bioorg. & Med. Chem. Lett., 1991, V.1, N.10, pp.523-526.

90. Y.Lebedev, N.Akopyants, T.Azhikina, Y.Shevchenko, V.Potapov, D.Stetsenko, D.Berg, E.Sverdlov. Oligonucleotides containing 2-aminoadenine and 5-methylcytosine are more effective as primers for PCR amplification then their nonmodified counterparts.//Genetic Analysis: Biomol. Eng., 1996, V.13, pp. 15-21.

91. K.Ramasamy, M.Zounes, C.Gonzales, S.Freier, R.Griffey, B.Monia, P.Dan Cook. Remarkable Enhancement of Binding Affinity of Heterocycle-Modified DNA to DNA and RNA. Synthesis, Characterization and Biophysical Evaluation of N-lmidazolyl propylguanine and N-lmidazolylpropyl-2-aminoadenine Modified Oligonucleotides.//Tetrahedron Lett., 1994, V.35, N.2, pp.215-218.

92. N.Schmid, J.Behr. Recognition of DNA Sequences by Strand Replacement with Poliamino-oligonucleotides.// Tetrahedron Lett., 1995, V.36, N.9, pp. 1447-1450.

93. M.Matteucci, U.von Krosigk. Hybridization Properties of Oligonucleotides Bearing a Tricyclic 2'-Deoxycytidine Analog Based on a Carbasole Ring System.//Tetrahedron Lett., 1996, V.37, N.29, pp.5057-5060.

94. K.Lin, R.Jones, M.Matteucci. Tricyclic 2'-Deoxycytidine Analogs: Synthesis and Incorporation into Oligodeoxynucleotides Which Have Enhanced Binding to Complementary RNA.//J. Am. Chem. Soc., 1995, V.117, N.13, pp.3873-3874.

95. X.Ren, B.Schweitzer, C.Sheils, E.Kool. Formation of Stable DNA Loops by Incorporation of Nonpolar, Non-Hydrogen-Bonding Nucleoside Isosteres.// Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1996, V.35, N.7, pp.743-745.

96. X.Ren, N.Chaudhuri, P.Paris, S.Rumney, E.Kool. Naphtalene, Phenantrene and Pyrene as DNA Base Analogues: Synthesis, Structure and Fluorescence in DNA.//J. Am. Chem. Soc., 1996, V.118, N.33, pp.7671-7678.

97. K.Guckian, B.Schweitzer, X.Ren, P.Paris, E.Kool. Experimental Measurement of Aromatic Stacking Affinites in the context of Duplex DNA.// J. Am. Chem. Soc., 1996, V.118, N.34, pp.8182-8183.

98. K.Lin, J.Pudlo, R.Jones, N.Bischofberger, M.Matteucci, B.Froehler. Oligodeoxynucleotides containing 5-(1-propynyl)-2'-deoxyuridine formacetal and thioformacetai dimer syntons.//' Bioorg. & Med. Chem. Lett., 1994, V.4, N.8, pp. 1061-1064.

99. P.Nielsen, M.Egholm, R.Berg, O.Buchardt. Sequence Selective Recognition of DNA by Strand Displacement with a Thymine Substituted Polyamide.// Science, 1991, V.254,1497-1500.

100.M.Egholm, O.Buchardt, P.Nielsen, R.Berg. Peptide Nucleic Acids (PNA). Oligonucleotide Analogues with an Achiral Peptide Backbone.// J. Am. Chem. Soc., 1992, V.114, N.5, pp. 1895-1897.

101.M.Egholm, O.Burghardt, L.Christensen, C.Behrens, R.Berg, S.Kim, B.Norden, P.Nielsen. PNA hybridizes to complementary oligonucleotides obeying the Watson-Crick hydrogen-bonding rules.// Nature, 1993, V.365, pp.566568.

102.P.Nielsen, G.Haaima. Peptide nucleic acid (PNA).A DNA mimic with a pseudopeptide backbone.//Chem. Soc. Rev., 1997, pp.73-77.

103.N.Preffer, J.Hanvey, J.Bisi, C.Hassman, S.Noble, L.Babiss. Strandinvasion of duplex DNA by peptide nucleic acid oligomers.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, V.90, pp. 10648-10652.

104.M.Footer, M.Egholm, J.Coull, P.Matsudaria. Biochemical evidance That a D-Loop Is Part of a Four-Stranded PNA-DNA Bundle. Nickel-Mediated Cleavage of Duplex DNA by a Gly-Gly-His Bis-PNA.//Biochemistry, 1996, V.35, N.33,

pp. 10673-10679.

105. B.Hyrup, P.Nielsen. Peptide nucleic acid (PNA): Synthesys, Properties and Potential Application.// Bioorg. & Med. Chem., 1998, V.4, N.1, pp.5-23.

106.M.Eriksson, P.Nielsen. Solution structure of a peptide nucleic acid -DNA duplex.// Nature Struct. Biol., 1996, V.3, N.5, pp.410-413.

107.S.Brown, S.Thomson, D.Davis. NMR Solution Structure of a Peptide Nucleic Acid Complexed with RNA.// Science, 1994, V.265, pp.777-778.

108.0.Almarsson, T.Bruice, J.Kerr, R.Zuckermann. Molecular mechanics calculations of the structures of polyamide nucleic acid DNA duplexes and triple helical hybrids.//Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, V.90, N.16, dd.751 87522.

109. S.Chen, V.Mohan, J.Kiely, R.Griffey. Molecular Dynamics and NMR Studies of Single-Stranded PNAs.// Tetrahedron Lett., 1994, V.35, N.29, pp.51055108.

110. T.Ratilainen, A.Holmen, G.Haaima, L.Christensen, E.Tuite, P.Nielsen, B.Norden. Hybridization of peptide nucleic acid.// Biochemistry, 1998, V.37, N.35, pp. 12331-12342.

111. P.Wittung, M.Eriksson, R.Lyng, P.Nielsen, B.Norden. Induced Chirality in PNA-PNA Duplexes.// J. Am. Chem. Soc., 1995, V.117, N.41, pp. 10167-10173.

112. P.Wittung, J.Kajanus, K.Edwards, P.Nielsen, B.Malmstrom. Phospholipid membrane permeability of peptide nucleic acid.// FEBS Lett., 1995, V.365, pp.27-29.

113. S.Miller. Peptide nucleic acids and prebiotic chemistry.// Nature Str. Biol., 1997, V.4, N.3, pp. 167-169.

114. J.Schmidt, P.Nielsen and L.Orgel. Information transfer from peptide nucleic acids to RNA by template-directed syntheses.// Nucl.Acids Res., 1997, V.25, N.23, pp.4797-4802.

115. A.Jones, P.Lewis, S.Withers. The synthesis of carboxymethyl derivatives of purines and pyrimidines and their condensation with naturally occuring macromolecules.//Tetrahedron, 1973, V.29, N.15, pp.2293-2296.

116. L.Kosynkina, W.Wang, T.Liang. A Convenient Synthesis Of Chiral Peptide Nucleic Acid (PNA) Monomers.//Tetrahedron Lett., 1994, V.35, N.29, pp.5173-5176.

117. M.Egholm.O.Buchardt,P.Nielsen, R.Berg. Peptide Nucleic Acids (PNA). Oligonucleotide Analogues with an Achiral Peptide Backbone.// J. Am. Chem. Soc., 1992, V.114, N.5, pp. 1895-1897.

118. KDueholm, M.Egholm, C.Behrens, H.Hansen, K.Petersen, R.Berg, P.Nielsen, O.Buchardt. Synthesis of Peptide Nucleic Acids Monomers Containing the Four Natural Nucleobasesi Thymine, Cytosine, Adenine and Guanine and Their Oligomerization.//J. Org. Chem., 1994, V.59, N.19, pp.57675773.

119. M.Egholm, P.Nielsen, O.Buchardt, R.Berg. Recognition of Guanine and Adenine in DNA by Cytosine and Thymine Containing Peptide Nucleic Acids (PNA).//J. Am. Chem. Soc., 1992, V.114, N.24, pp.9677-9678.

120. M.Egholm, C.Behrens, L.Christensen, R.Berg, P.Nielsen, O.Buchardt. Peptide Nucleic Acids containing Adenine or Guanine recognize Thymine and Cytosine in Complementary DNA Sequences.//J. Chem. Soc., Chem. Commun.,

1993, pp.800-801.

121. L.Christensen, R.Fitzpatrik, B.Gildea, B.Warren, J.Ccull. Improved Synthesis, Purification, and Characterization of PNA Oligomers.// Presented at the 3rd Solid-Phase Symposium, Oxford, UK, Aug.31-Sept.4,

1994.

122. A.Coul. Peptide Nucleic Acids (PNAs). Expanding the Role of Synthetic DNA Analogues.//Int. Biotechnol. Laboratory, 1994, p. 193.

123. P.Finn, N.Gibson, R.Fallon, A.Hamilton, T.Brown. Synthesis and properties of DNA-PNA chimeric oligomers.//Nucl. Acids Res., 1996, V.24, N.17, pp.3357-3363.

124. E.Atherton, L.Cameron, M.Meldal, R.Sheppard. Self-indicating Activated Esters for Use in Solid Phase Peptide Synthesis. Fluorenylmethoxy carbonylamino Acids Derivatives of 3-Hydroxy-4-oxodihydrobenzotriazine.//

J. Chem. Soc., Chem. Commun., 1986, pp. 1763-1765.

125. O.Buchardt, M.Egholm, P.Nielsen, R.Berg. Patent WO 92/20702, 92/20703, 26.11.92.

126. D.Will, G.Breipohl, D.Langner, J.Knolle, E.Uhlmann. The Synthesis of Polyamide Nucleic Acids using a Novel Monomethoxytrityl Protecting-Group Strategy.//Tetrahedron, 1995, V.51, N.44, pp. 12069-12082.

127. E.Uhlmann, D.Will, G.Breipohl, D.Langer, A.Ryte. Synthesis and Properties of PNA/DNA Chimeras.//Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1996, V.35, N.22, pp.2632-2635.

128. S.Thomson, J.Josey, R.Cadilla, M.Gaul, C.Hassman, A.Pipe, K.Reed, D.Ricca, R.Wiethe, S.Noble. Fmoc-Mediated Synthesis of Peptide Nucleic Acids.// Tetrahedron, 1995, V.51, N.22, pp.6179-6194.

129. S.Thomson, S.Noble, D.Ricca. Patent WO 93/12129, 24.06.93.

130. G.Fields, R.Noble. Solid Phase peptide synthesis utilizing 9-fluorenylmethoxycarbonyl aminoacids.//Int. J. Peptide Protein Res., 1990, V.35, N.3, pp. 161-214.

131. G.Briepohl, J.Knolle, D.Langner, G.O'Malley, E.Uhlmann. Synthesis of Polyamide Nucleic Acids (PNAs) using a Novel Fmoc/Mmt Protecting Group combination.// Bioorg. & Med. Chem. Lett., 1996, V.6, N.6, 665-670.

132. P.Meitzer, A.Liang, P.Matsudaira. Peptide Nucleic Acids: Synthesis of Thymine, Adenine, Guanine and Cytosine Nucleobases.//J. Org. Chem., 1995, V.60, N.13, pp.4305-4308.

133. KJensen, E.Bardaji, F.Albericio, J.Coull, G.Barany. Synthesis of peptide nucleic acid (PNA) oligomers from N-dithiasuccinoyl (Dts) protected monomers.// In: Peptides 1994. Proceedings of the Twenty-Third European Peptide Symposium. Sept.4-10, 1994, Praga, Portugal.//H.L.S. Maia ed., 1995, ESCOM, Leiden, pp.757-758.

134. L.Richter, R.Zuckermann. Synthesis of peptide nucleic acids (PNA) by submonomer solid-phase.//Bioorg. & Med. Chem. Lett., 1995, V.5, N.11,

pp.1159-1162.

135. G.AIdrian-Herrada, A.Rabie, R.Wintersteiger and J.Brugidou. Solidphase Synthesis of Peptide Nucleic Acid (PNA) Monomers and Their Oligomerization Using Disulphide Anchoring Linkers.// J. of Pept. Sci., 1998, N.4, pp.266-281.

136. M.Egholm, L.Christensen, K.Dueholm, O.Buchardt, J.Coull, P.Nielsen. Efficient pH-independent sequence-specific DNA binding by pseudoisocytosine-containing bis-PNA.// Nucl. Acids Res., 1995, V.23, N.2, pp.217-222.

137. S.Thomson, S.Noble, D.Ricca. Patent WO 93/12129,24.06.93.

138. G.Haaima, H.Hansen, L.Christensen, O.Dahl, P.Nielsen. Increased DNA binding and sequence discrimination of PNA oligomers containing 2,6-diaminopurine.// Nucl. Acids Res., 1997, V.25, N.22, pp.4639-4643.

139. L.Christensen, H.Hansen, T.Koch and P.Nielsen. Inhibition of PNA triplex formation by N(4)-benzoylated cytosine.// Nucl. Acids Res., 1998, V.26, N.11, pp.2735-2739.

140. L.Dueholm, K.Petersen, D.Jensen, M.Egholm, P.Nielsen, O.Buchardt. Peptide nucleic acid (PNA) with chiral backbone based on alanine.// Bioorg. & Med. Chem. Lett., 1994, V.4, N.8, pp. 1077-1080.

141. G.Haaima, A.Lohse, O.Buchardt, P.Nielsen. Peptide Nucleic Acids (PNAs) Containing Thymine Monomers Derived from Chiral Amino Acids: Hybridization and Solubility Properties of D-Lysine PNA.// Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1996, V.35, N.17, pp.1939-1942.

142. APuschl, G.Haaima, O.Dahl and P.Nielsen. Peptide Nucleic Acids (PNAs) with a Functional Backbone.//Tetrahedron Lett., 1998, N.39, pp.47074710.

143. B.Hyrup, M.Egholm, P.Nielsen, P.Wittung, B.Norden, O.Buchardt. Structure-Activity Studies of the Binding of Modified Peptide Nucleic Acids (PNA) to DNA.// J. Am. Chem. Soc., 1994, V.116, N.18, pp.7964-7970.

144. O.AImarsson, T.Bruice, J.Kerr, R.Zuckermann. Molecular mechanics calculations of the structures of polyamide nucleic acid DNA duplexes and

triple helical hybrids.//Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, V.90, N.16, pp.75187522.

145. B.Hirup, M.Egholm, O.Buchardt, P.Nielsen. A flexible and positively charged PNA analogue with an ethylene-linker to the nucleobase: synthesis and hybridization properties.// Bioorg. & Med. Chem. Lett., 1995, V.6, N.10, pp. 1083-1088.

146. A.Krotz, O.Burhardt, P.Nielsen. Synthesis of'Retro-Inverso'Peptide Nucleic Acids: 1. Characterization of the Monomers.// Tetrahedron Lett., 1995, V.36, N.38, pp.6937-6940.

147. A.Krotz, O.Burhardt, P.Nielsen. Synthesis of'Retro-Inverso'Peptide Nucleic Acids: 2. Oligomerization and Stability.//Tetrahedron Lett., 1995, V.36, N.38, pp.6941-6944.

148. A.Krotz, S.Larsen, O.Buchardt, M.Eriksson, P.Nielsen. A 'retro-inverso' PNA: structural implications for DNA and RNA binding.// Bioorg. Med. Chem., 1998, V.6, N.11, 1983-1992.

149. K.Petersen, O.Burhardt, P.Nielsen. Synthesis and oligomerization of N6-Boc-N-(thymin-1-ylacetyl) ornitine.//Bioorg. &Med. Chem. Lett., 1996, V.6, N.7, pp.793-796.

150. G.Ceulmans, K.Khan, A.Van Schepdael, P.Herdewijn. Peptide analogues of DNA consisting of L-2-amino-4-thymine butyric acid

and L-valine subunits.//Nucleosides & Nucleotides, 1995, V.14, N.3-5, pp.813816.

151. P.Lagriffoul, M.Egholm, P.Nielsen, R.Berg, O.Buchardt. The synthesis, co-oligomerization and hybridization of a thymine-thymine heterodimer containing PNA.//Bioorg. & Med. Chem. Lett., 1994, V.4, N.8, pp.10811082.

152. H.Umemiya, H.Kageshika, Y.Hashimoto, K.Shudo. Synthesis of oligopeptides as polynucleotide analogs.//Nucleosides & Nucleotides, 1996, V.15, N.1-3, pp.465-475.

153. Y.lnaki, M.Miyata, N.Tohnai. New synthetic nucleic acid analogs and interaction with polynucleotides.// Nucl. Acids Res. Symp. Ser., 1996, N.35, pp.2526.

154. В.А.Ефимов, ААБурякова, М.В.Чуб, О.Г.Чахмахчева. Пептидо-нуклеиновые кислоты и их фосфонатные аналоги: синтез и гибридизационные свойства.// Биоорганическая химия, 1998, т.24, N.9, с.696-709.

155. H.Challa and S.Woski. Solution Phase Synthesis of Potential DNA-Binding Molecules Based on the PNA Backbone.//Tetrahedron Lett., 1999, V.40, pp.419-422.

156. B.Gildea, S.Casey, J.MacNeil, D.Sorensen and J.Coull. PNA Solubility Enhancers.//Tetrahedron Lett., 1998, V.39, N.40, pp.7255-7258.

157. C.DiGiorgio, S.Pariot, C.Schwergold, N.Patino, R.Condom and R.Guedj. Liquid-Phase Synthesis of Polyamide Nucleic Acids (PNA).// Tetrahedron, 1999, V.55, pp. 1937-1958.

158. N.Hebert, P.Davis, E.DeBaets, O.Acevedo. Synthesis of N-Substituted Hydroxyprolinol Phosphoramidites for the Preparation of Combinatorial Libraries.// Tetrahedron Lett., 1994, V.35, N.51, pp.9509-9512.

159. G.Ceulemans, A.Van Aerschot, P.Herdewijn. Nucleosides and oligonucleotides derived from trans-4-hydroxy-N-acetylprolinol.// Collect. Czech. Chem. Commun., 1996, V.61, S234-S237.

160. G.Ceulemans, A.Van Aerchot, B.Wroblowski, J.Rozenski, C.Hendrix, P.Herdewijn. Oligonucleotide Analogues with 4-Hydroxy-N-acetylprolinol as Sugar Substitute.//Chem. Eur. J., 1997, 3, N.12, pp.1997-2010.

161. S.Jordan, C.Schwemler, W.Kosch, A.Kretschmer, E.Schwenner, U.Stropp, B.Mielke. Synthesis of new building blocks for peptide nucleic acids containing monomers with variations in the backbone.// Bioorg. & Med. Chem. Lett., 1997, V.7, N.6, pp.681-686.

162. S.Jordan, C.Schwemler, W.Kosch, A.Kretschmer, E.Schwenner, U.Stropp, B.Mielke. New heterooligomeric peptide nucleic acids with

improved binding properties to complementary DNA.// Bioorg. & Med. Chem. Lett., 1997, V.7, N.6, pp.687-690.

163 B.Gangamani, V.Kumar and K.Ganesh. Chiral analogues of Peptide Nucleic Acids: Synthesis of 4-aminoprolyl-nucleic acids and DNA complementation studies using UV/CD spectroscopy.//Tetrahedron, 1999, V.55, pp.177-192.

164 A.Peyman, E.Uhlmann, K.Wagner, S.Augustin, G.Breipohl, D.Will,

A.Schafer and H.Wallmeier. Phoshonic Ester Nucleic Acids (PHONAs): Oligonucleotide Analogues with an Achiral Phosphonic Acid Ester Backbone.// Angew. Chem. int. Ed. Engi., 1996, V.35, N.22, pp.2636-2638.

165. V.Efimov, M.Choob, A.Buryakova, A.Kalinkina and O.Chakhmakhcheva. Synthesis and evaluation of some properties of chimeric oligomers containing PNA

and phosphono-PNA residues.// Nucl.Acids Res., 1998 V.26, N.2, pp.566-575.

166. J.Kehler, U.Henriksen, H.Vejbjerg and O.Dahl. Synthesis and Hybridization Properties of an Acyclic Achiral Phosphonate DNA Analogue.//Bioorg. & Med. Chem., 1998, N.6, pp.315-322.

167. A.Peyman, E.Uhlmann, K.Wagner, S.Augustin, D.Will and G.Breipohl. PHONA-PNA Co-Oigomers: Nucleic Acid Mimetics with Intresting Properties.// Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1997, V.36, N.24, pp.2809-2812.

168. T.Koch, M.Naesby, P.Wittung, C.Larsson, O.Buchardt, C.Stanley,

B.Norden, P.Nielsen, H.Orum. PNA-Peptide Chimerae.// Tetrahedron Lett., 1995, V.36, N.38, pp.6933-6936.

169. M.Leijon, A.Graslund, P.Nielsen, O.Buchardt, B.Norden, M.Eriksson. Structural Characterization of PNA-DNA duplexes by NMR.Evidance for DNA in a B-like Conformation.// Biochemistry, 1994, V.33, N.33, pp.9820-9825.

170. E.Uhlmann, D.Will, G.Breipohl, D.Langer, A.Ryte. Synthesis and Properties of PNA/DNA Chimeras.// Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1996, V.35, N.22, pp.2632-2635.

171. E.Uhlmann. Peptide nucleic acids (PNA) and PNA-DNA chimeras: from high binding affinity towards biological function.// Biol.Chem., 1998, V.389, N.8-9, pp. 1045-1052.

172. F.Bergmann, W.Bannwarth, S.Tam. Solid Phase synthesis of directly linked PNA-DNA hybrids.// Tetrahedron Lett., 1995, V.36, N.38, pp.6823-6826.

173. K.Petersen, D.Jensen, M.Egholm, P.Nielsen, O.Buchardt. A PNA-DNA linker. Synthesis of N-((4,4'-dimethoxytrityl) oxyethyl)-N-(thymin-l-ylacetyl)-glycine.//Bioorg. & Med. Chem. Lett., 1995, V.5, N.11, pp. 1119-1124.

174. A.van der Laan, P.Havenaar, R.Costing, E.Kuyl-Yeheskiely, E.Uhlmann, J.van Boom. Optimization of the Binding Properties of PNA-(5')-DNA Chimerae.// Bioorg. & Med. Chem. Lett., 1998, V.8, pp.663-668.

175 V.Efimov, A.Buryakova, I.Dubey, N.Polushin, O.Chakhmakhcheva and Y.Ovchinnikov. Application of new catalitic phosphate protecting groups for the highly efficient phosphotriester oligonucleotide synthesis.//Nucl. Acids Res., 1986, V.14, N.16, pp. 6525-6540.

176: T.Szabo, A.Kers, J.Stawinski. A new approach to the synthesis of the S'-deoxy-S'-methylphosphonate linked thymidine oligonucleotide analogues.// Nucl. Acids Res., 1995, V.23, pp.893-900.

177. Э.Е.Нифантьев. Химия гидрофосфорильных соединений.// М., 1983, с.55-59.

178. P.Finn, N.Gibson, R.Fallon, A.Hamilton and T.Brown. Synthesis and properties of PNA-DNA chimeric oligomers.// Nucl. Acids Res., 1996, V.24, pp.3357-3364.

179. X.Jorba, F.AIbericio, AGrandas, W.Bannwarth, E.Giralt. Arenesulfonyltriazolides as condensing reagents in solid phase peptide synthesis.// Tetrahedron Lett., 1990, V.31, N.13, pp. 1915-1918.