Фитохимическое изучение и перспективы использования боярышника мягковатого (Crataegus Submollis Sarg.) тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Гусакова Валерия Андреевна

• Гусакова Валерия Андреевна
• кандидат наук
• 2023

Оглавление диссертации кандидат наук Гусакова Валерия Андреевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Ботанико-фармакогностическая характеристика C. submollis

1.2 Распространение и интродукция C. submollis

1.3 Исследование химического состава и биологических свойств 17 интродуцированных видов Crataegus L.

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 2.ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Объекты исследования

2.2 Методы исследования

2.2.1 Определение подлинности сырья

2.2.2 Методы определения товароведческих показателей

2.2.3 Методы фитохимического анализа

2.2.3.1 Методики качественного анализа

2.2.3.2 Методики количественного анализа

2.2.4 Методы исследования биологической активности

2.2.5 Методы статистической обработки результатов 41 исследований

ГЛАВА 3. МОРФОЛОГО-АНАТОМИЧЕСКОЕ 43 ИССЛЕДОВАНИЕ ПОБЕГОВ БОЯРЫШНИКА МЯГКОВАТОГО (CRATAEGUS SUBMOLLIS SARG.)

3.1 Морфологическое исследование побегов C. submollis

3.2 Анатомо-диагностические исследования побегов C. submollis

3.3 Изучение диагностически значимых признаков в побегах C. 51 submollis

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ

ГЛАВА 4. ФИТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ 54 БОЯРЫШНИКА МЯГКОВАТОГО (<CRATAEGUS SUBMOLLIS SARG.)

4.1 Качественный и количественный анализ плодов и цветков C

submollis

4.2 Качественный анализ побегов C. submollis

4.2.1 Качественные реакции

4.2.2 Исследование химического состава методом 59 тонкослойной хроматографии побегов C. submollis

4.2.3 Исследование химического состава методом 64 высокоэффективной жидкостной хроматографии

4.2.4 Исследование липофильной фракции методом газовой 69 хроматографии

4.3 Количественное определение БАВ в побегах C. submollis

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ

ГЛАВА 5. ИССЛЕДОВАНИЯ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ 85 БОЯРЫШНИКА МЯГКОВАТОГО (CRATAEGUS SUBMOLLIS SARG.)

5.1 Разработка методики качественного анализа

5.2 Разработка методики количественного анализа

5.2.1 Выбор метода количественного определения

5.2.2 Оптимизация методики количественного определения

5.2.3 Выбор условий экстракции

5.2.4 Валидация методики количественного определения

5.3 Определение числовых показателей и сроков годности 106 ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 5 1 0 9 ГЛАВА 6. ИССЛЕДОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ 110 СВОЙСТВ БОЯРЫШНИКА МЯГКОВАТОГО (CRATAEGUS SUBMOLLIS SARG.)

6.1 Изучение антиоксидантной активности

6.2 Изучение влияния на систему гемостаза 112 ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 6 1 1 4 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 115 ОБЩИЕ ВЫВОДЫ 1 1 5 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 118 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 119 ПРИЛОЖЕНИЯ

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Фитохимическое изучение и перспективы использования боярышника мягковатого (Crataegus Submollis Sarg.)»

Актуальность темы

Поиск эффективных природных лекарственных средств при сердечнососудистой патологии остается актуальной задачей современной фармации, несмотря на постоянно увеличивающийся ассортимент новых синтетических препаратов и успехов в кардиохирургии, потому что кардиоваскулярные заболевания находятся на первом месте по смертности населения в мире [10]. Поэтому проведение научных исследований с целью создания новых эффективных растительных препаратов для кардиологии является актуальным. Одним из наиболее известных лекарственных растений, используемым в данной области, является боярышник Crataegus L. В мире произрастает более 300 видов рода Crataegus L., из них в России в дикорастущем виде встречаются около 50 видов [69]. Несмотря на такое обилие видов, спрос фармацевтической промышленности превышает предложения. Основная причина заключается в особенности произрастания боярышников, так как диком виде они растут по одиночке и не образуют зарослей. Поэтому изучение интродуцированных видов Crataegus L. для расширения имеющейся сырьевой базы, а также исследование других органов растений рода Crataegus L. для качественной замены или совместного использования является одним из путей решения этой проблемы. Кроме фармакопейных видов сырья боярышника другие виды сырья, такие как побеги и листья также являются официнальными в странах Евросоюза, Америке, Израиле, Китае, Беларуси [16, 94, 97, 98, 126, 142, 143, 145].

Таким образом, фармакогностическое исследование

интродуцированных видов растений рода Crataegus L. является актуальным.

Степень разработанности проблемы. Данные по химическим исследованиям представителей рода Crataegus L. очень широко представлены как в отечественных, так и в зарубежных публикациях. В нашей стране в данной области работали такие отечественные авторы, как Т.Л. Киселева (1988), И.А. Самылина (1990), О.Г. Потанина (2003), Н.Ф. Гончаров (2008), В.А. Куркин (2013) и др. Вопросы по разработке методик стандартизации сырья и фитопрепаратов на их основе отражены в работах таких отечественных авторов, как Т.Л. Киселева (2006), Е.И. Саканян (2011), В.А. Куркин (2013), И.А. Самылина (2016) и др. Фармакологическим исследованиям боярышников посвящены работы Д.Я. Гусейнова (1985), И.А. Самылиной (1990), Н.М. Хаятулла (1990), О.В. Евдокимовой (1999), В.А. Куркина (2017) и др.

Анализ различных монографий и научной литературы по теме диссертации показал, что научные публикации по вопросам исследования интродуцированных видов рода Crataegus L., а именно, боярышника мягковатого - Crataegus submollis Sarg. носят отрывочный характер и не дают получить системно-целостное представление о цели исследования. Таким образом, недостаточный уровень научных изысканий по теме исследования, значительная практическая значимость

для отечественной фармации и медицины определили тему и цель диссертационного исследования.

Цели и задачи. Целью диссертационной работы явилось фитохимическое исследование сырья боярышника мягковатого (Crataegus submollis Sarg.), интродуцированного в Республике Башкортостан.

Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

• Обобщить современные сведения научной литературы изучения химического состава и биологических свойств C. submollis.

• Провести морфологические и анатомические исследования побегов C. submollis и установить диагностически-значимые анатомические признаки данного вида сырья.

• Установить соответствие плодов и цветков C. submollis фармакопейным требованиям.

• Изучить химический состав побегов C. submollis и определить качественный состав и количественное содержание основных групп биологически активных веществ.

• Разработать методики стандартизации побегов C. submollis.

• Изучить биологические свойства C. submollis.

• Установить критерии подлинности и показатели качества побегов C. submollis и составить на их основе проект фармакопейной статьи «Боярышника мягковатого побеги».

Научная новизна. Исследован компонентный состав биологически активных веществ побегов C. submollis с применением современных физико-химических методов анализа (ВЭЖХ/МС, ВЭТСХ, ГХ/МС, УФ-спектроскопия) и идентифицировано 24 соединения различной природы. В побегах боярышника мягковатого впервые идентифицированы рутин, лютеолин, лютеолин-7-гликозид, нарингенин, эсцин методами ВЭЖХ/МС, ВЭТСХ и УФ-спектроскопии. Методом ГХ/МС идентифицированы 17 веществ из них впервые в побегах боярышника мягковатого - 13 (5 из них -соединения фенольной природы: 2,3-дигидро-3,5-дигидрокси-6-метил-4Н-пиран-4-он, пирокатехин, 5-(гидроксиметил)-2-фуранкарбоксиальдегид, 2-гидрокси-3-метил-бензальдегид, хинная кислота). В липофильной фракции побегов C. submollis установлено присутствие высших жирных кислот: пальмитиновой, стеариновой, линолевой и линоленовой, а также фитостеринов (5-ситостерол), в том числе 5-ситостерола впервые. Исследована динамика накопления некоторых групп веществ - флавоноидов,

дубильных веществ и аскорбиновой кислоты в побегах C. submollis в образцах сырья, заготовленных в различные фазы вегетации, также установлен период заготовки и срок годности.

В исследуемом сырье C. submollis было установлено содержание основных групп веществ - флавоноидов, кумаринов, суммы дубильных соединений, сапонинов, аскорбиновой кислоты, полисахаридов, каротиноидов, аминокислот, макро- и микроэлементов.

Впервые исследованы анатомические признаки побегов C. submollis и установлены их диагностически-значимые признаки (ДЗП), которые предложены в качестве числового показателя для стандартизации сырья.

Установлено, что плоды и цветки C. submollis соответствуют параметрам стандартизации, предъявляемым в ФС «Боярышника плоды» и «Боярышника цветки».

Разработаны показатели подлинности и качества побегов C. submollis и проведена их стандартизация.

Изучены биологические свойства побегов C. submollis, впервые установлены их антиоксидантные и антиагрегантные свойства.

Теоретическая и практическая значимость работы. Разработаны параметры подлинности и качества побегов C. submollis для их стандартизации. Разработаны методики анализа: тонкослойная

хроматография для качественного анализа, количественное определение суммы флавоноидов. Данные исследования дают возможность расширения номенклатуры официнального сырья - побегов боярышника мягковатого. Результаты фитохимических исследований подтвердили целесообразность внедрения C. submollis в качестве дополнительного производящего растения для включения в ФС «Боярышника плоды» «Боярышника цветки».

Внедрение в практику. Проведенные исследования легли в основу разработанного проекта фармакопейной статьи «Боярышника мягковатого побеги».

Результаты диссертации внедрены в работу ООО «Травы Башкирии», в учебный процесс кафедры фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава России.

Методология и методы исследований. Методология диссертационной работы основана на поиске и анализе научных литературных источников по выбору объектов исследования на основе перспективных растительных объектов, степени изученности их химического состава, ресурсов, возможности культивирования, перспективы использования в научной медицине; постановке цели и задач по введению в медицинскую практику нового вида лекарственного растительного сырья; целенаправленном изучении химического состава и биологических свойств; разработке дополнений к имеющимся НД и разработке НД на новый вид ЛРС; формулировку выводов, определяющих теоретическую и практическую значимость материалов диссертационной работы.

Основные методы фитохимических исследований - методы ВЭЖХ/МС, ТСХ, ВЭТСХ, ГХ/МС, УФ-спектрофотометрия, титриметрия, гравиметрия. Анатомические исследования проводились с применением микроскопов «Минимед-501» и «Микровизор» с цифровой камерой. Изучение биологической активности проводили методом хемилюминесценции и методом Борна.

Положения, выносимые на защиту

• результаты морфологических и анатомических исследований побегов

C. submollis;

• результаты изучения химического состава побегов C. submollis;

• результаты исследований об использовании C. submollis в качестве производящего растения для лекарственного растительного сырья -плоды и цветки боярышника.

• результаты по разработке методик стандартизации побегов C.

submollis;

• результаты исследования биологической активности C. submollis;

• результаты по разработке проекта ФС «Боярышника мягковатого побеги».

Степень достоверности. Степень достоверности диссертационных исследований определяется достаточно большим объёмом образцов исследования (75 образцов). Статистическая обработка результатов исследований проводилась с применением методов математической статистики. Для обработки полученных данных использовали стандартные методы вариационной статистики и программу «Statistica 10,0». Проверку на нормальность распределения экспериментальных данных проводили по критерию Шапиро-Уилка. Дисперсионный анализ выборок рассчитывали по критерию Краскела-Уоллиса. Различия между группами считались статистически значимыми при доверительной вероятности 0,05. Достоверность различий между выборками определялась

двум критериям: по t-критерию Стьюдента (параметрический) и U-критерию Манна - Уитни (непараметрический). Разработанные методики для стандартизации были проверены на пригодность. Выводы,

сформулированные в диссертации, аргументированы и логически вытекают из результатов многоуровневого анализа значительного объёма выборок и результатов выполненных фармакогностических, химических и фармакологических исследований.

Апробация результатов. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на научной конференции «Научный и инновационный потенциал развития производства, переработки и применения эфиромасличных и лекарственных растений» (Симферополь,

2019), IV Международной научной конференции «Гаммермановские чтения» (Санкт-Петербург, 2019), 84 Всероссийской научной конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Вопросы теоретической и практической медицины» (Уфа, 2019), 1 Китайско-Российском международном фармацевтическом форуме (Харбин,

2020), III Международной конференции IPharmS (Иран, 2021), Международной научная конференции «90-лет - от растения до лекарственного препарата - достижения и перспективы» (Москва, 2021).

Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научных исследований ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава России по проблеме «Изыскание и изучение новых лекарственных средств». Номер госрегистрации 01200507996.

Публикации. Основные результаты диссертационного исследования отражены в 8 научных работах. Из них 2 статьи в отечественных изданиях, включенных в Перечень ВАК Министерства образования и науки РФ, а также 1 статья в журнале, реферируемом в наукометрических базах данных Scopus и Web of Science, получена справка на приоритет изобретения РФ.

Личный вклад автора. Автор самостоятельно определил научные направления и задач исследования. Автор лично планировал и выполнял экспериментальные исследования. Все результаты автором получены лично. В работах, выполненных в соавторстве, автор лично проводил

научное обоснование, подготовку проб, расчет данных и интерпретацию полученных результаты. Доля автора в сборе, анализе и обобщении результатов является определяющей.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности.

Диссертация соответствует паспорту специальности 3.4.2 -фармацевтическая химия, фармакогнозия пункту 2 «Формулирование и развитие принципов стандартизации и установление нормативов качества, обеспечивающих терапевтическую активность и безопасность лекарственных средств»; 3 пункту «Разработка новых, совершенствование, унификация и валидация существующих методов контроля качества лекарственных средств на этапах их разработки, производства, потребления»; 5 пункту «Изучение вопросов рационального использования ресурсов лекарственного растительного сырья с учетом влияния различных факторов на накопление биологически активных веществ в сырье» и 6 пункту «Изучение химического состава лекарственного растительного сырья, установление строения, идентификация природных соединений, разработка методов выделения, стандартизации и контроля качества лекарственного растительного сырья и лекарственных форм на его основе».

Работа представляет итог исследований, выполненный автором в творческом сотрудничестве с кафедрами фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии и фармакологии с курсом клинической фармакологии и лабораторией ЦНИЛ ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава России.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 151 странице печатного текста и состоит из введения, обзора литературы,

описания объектов и методов исследования, 4 экспериментальных глав, общих выводов, списка литературы и приложений. В работе содержатся 30 таблиц, 38 рисунков и 2 схемы. Список цитируемой литературы включает 146 библиографических источников, из которых 64 на иностранных языках.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Ботанико-фармакогностическая характеристика C. submollis

Crataegus L. - родовое название боярышника, произошедшее от греческих слов cratatos - крепкий, сильный; agein - вести, действовать. Такое название Crataegus получил за долговечность, стойкость к неблагоприятным условиям и за твердую древесину, из-за которой когда-то боярышник применяли как оружие. Боярышник известен и под другими названиями, которые использовались в народе, например боярка, барыня-дерево, боярыня, глёд, глод [37, 38]. Видовое название от лат. sub - под и mollis - мягкий, произошло от структуры плодов [23, 40, 78].

Вид Crataegus submollis Sarg. входит в серию Mollis секцию Coccineae подрод Americanae род Crataegus трибы Pyrea подсемейства Spiraeoideae семейства Rosaceae порядка Rosales [50, 53, 69, 77].

Crataegus submollis Sarg. - боярышник мягковатый (рисунок 1.1.1) представляет собой дерево высотой от 6 до 8 м, диаметр ствола до 30 см, нередко многоствольное или растущее кустообразно. Ветви восходящие или распростёртые, пепельно-серого цвета. Крона деревьев имеет довольно симметричную широкую, шатровидную форму. Ветки блестящие, светлые красно-коричневого цвета; побеги тёмно-зелёные, густо серо-войлочные. Колючки у C. submollis тонкие, прямые или слегка изогнутые, блестящие, ярко-коричневые, длиной от 3 до 9 см [31, 50].

Соцветия состоят 10 - 15 цветков, обычно войлочно-опушённые. Цветки на длинных тонких цветоножках, диаметр которых равен 2,5 см. Лепестки цветков белые, с чашелистиками по краю, которые имеют многочисленные желёзки. Цветки содержат 10 тычинок с бледно - жёлтыми пыльниками; количество столбиков составляет от 3 до 5.

Листья расположены спирально, по форме они яйцевидные, с острой вершиной, широко - клиновидным или усечённым основанием и 3 - 4 парами коротких острых лопастей, края зубчатые или двоякозубчатые, длиной от 4 до 9 см, шириной от 3 до 6,5 см, тёмно - зелёные, осенью тёмно - красно -бурые, сверху шероховатые. На длинных побегах листья широко -яйцевидные, основание слабо сердцевидное, длина составляет до 11 см, а ширина 9 см. Длина черешков от 2,5 до 5 см; Прилистники рано опадают, форма прилистников серповидная, по краю пильчатые, длиной до 2,5 см.

Плоды у С. 8иЪтвШ8 ярко-оранжево-красные, с рассеянными бледными точками, многочисленные, длиной около 20 мм, с жёлтой мучнистой мякотью. Косточки бороздчатые со спинной стороны, длиной 8 мм, их количество составляет 5, реже 3 - 4 [50].

Цветёт С. 8иЪтвШ8 обычно в мае, а плодоносит в конце августа -сентябре [50].

Рисунок 1.1.1- Боярышник мягковатый (Crataegus submollis Sarg.)

1.2 Распространение и интродукция C. submollis

Род Crataegus L. не однороден, является одним из самых сложных в морфологическом плане родов семейства Rosaceae и делится на три подрода и каждый из них делится еще на несколько секций [50, 53, 69]. За несколько столетий предлагалось несколько вариантов. Сейчас многие ботаники придерживаются классификации, в которой идет деление данного рода на три основных подрода - Crataegus, Sanguineae и Americanae, которые в русской интерпретации называются европейскими, азиатскими и североамериканскими соответственно. Согласно литературным данным, данные подроды отличаются не только по морфологическим признакам и ареалу произрастания, но и в генетическом плане [69].

C. submollis относится к представителям североамериканских видов боярышников. Ареал североамериканских представителей рода Crataegus занимает восточную часть Северной Америки. Большинство видов североамериканских представителей рода Crataegus растет в восточной части и в основном на Аллеганских горах, вдоль р. Миссисипи, по берегам Великих озер, а также восточнее и юго-восточнее и доходят до берегов Атлантики. Их ареалы располагаются между 30 и 50-й параллелями 13 и 75 и 100-м меридианами. Если рассматривать особенности местообитания данных видов рода Crataegus, то они предпочитают расти в подлесках и на опушках светлых широколиственных или смешанных или светлохвойных лесов, например березовых, сосновых, дубово-гикорековых; также встречаются в пойменных лесах и зарослях кустарников, любят расти на светлых каменистых склонах холмов и берегах речных долин, по берегам болот. В восточной части США боярышники растут в основном в предгорьях и на вершинах, на высоте от 200 до 500 м над уровнем моря.

Некоторые виды могут произрастать и выше, на высоте 850-1000 (1700) м над уровнем моря [46].

С. 8иЪтвШ8 - типичный представитель флоры Северной Америки. Ареал произрастания данного вида боярышника расположен от северо-востока берегов Атлантического океана до юго-запада, в который включены центральные штаты США и Канады. Он предпочитает светлые лесные опушки и склоны, преимущественно с влажным грунтом.

В Россию С. 8иЪтвШ8 был ввезен еще в 18 веке, сейчас широко культивируется, его можно встретить по всей европейской части. Выращивают С. 8иЪтвШ8 в южной, центральной, центрально-черноземной зоне и широко используют в садово-парковом строительстве, также используется в качестве плодовой культуры во многих странах Европы за счет съедобных, крупных и мясистых плодов [20, 50, 57].

Если рассматривать вопросы культивирования, то С. 8иЪтвШ8 может произрастать практически на любом грунте, не требователен к поливу, зимостоек. Не боится весенних заморозков во время цветения, спокойно реагирует на разницу ночной и дневной температуры. С. 8иЪтвШ8 легко размножается, саженцы хорошо и быстро приживаются. Взрослое дерево при переносе быстро укореняется. Выбор времени года для саженцев С. 8иЪтвШ8 не принципиален. Цвести С. 8иЪтвШ8 начинает обычно на 3 - 4 год. Если сажают культуру старше 5-летнего возраста, лучше это делать осенью. Так растение лучше адаптируется на новом месте и весной зацветет. Если посадить в начале весны, то плодоносить растение будет только на следующий год. Сроки посадки зависят от региона, весной почва должна прогреться до +5 0С. Осенью на укоренение оставляют 1 месяц (до наступления морозов). В средней полосе России наиболее благоприятные сроки посадки - это апрель или сентябрь.

Размножают С. 8иЪтвШ8 двумя способами: отводками и черенками. Для черенкования необходимо получить образцы 10-12 см длиной. Их

прикапывают ранней весной или осенью в теплице. А когда черенки окрепнут и тронуться в рост, пересаживают их на постоянное место. В качестве отростков можно использовать отростки растения, у которых имеется корневая система [7, 8, 45, 46].

C. submollis редко болеет. При неблагоприятных погодных условиях (высокая влажность и низкая температура) возможно поражение мучнистой росой. Больные участкичасти растений вырезают и удаляют с участка, C. submollis обрабатывают специальными дезинфицирующими средствами. Основные болезни C. submollis: ржавчина, мучнистая роса, гниль. Негативное влияние на C. submollis оказывают и вредители, такие как почковый клещ, червец, ложнощитовка, пилильщик, долгоносик, щитовка, яблонная тля. Весной для профилактики грибковой инфекции опрыскивают C. submollis средством на основе меди [45, 46].

C. submollis используется отечественными агрономами для выведения высокоурожайных сортов. Урожайность C. submollis составляет в среднем 10-12 кг и относят его к видам Crataegus L. с высокой урожайностью [45, 46].

1.3 Исследование химического состава и биологических свойств интродуцированных видов Сrataegus L.

Род Crataegus L. насчитывает более 380 видов. Так как боярышники часто скрещиваются между собой, образуя природные гибриды и новые формы, то некоторые из ботаников присваивают гибридам статус вида, таким образом, доводя количество видов боярышника до 1500 или 2000. В России произрастает около 50 дикорастущих видов, кроме того, свыше 100 видов интродуцировано [50, 53].

Согласно многочисленным исследованиям фармакологически активными группами веществ, которые содержатся и обуславливают фармакологическую активность боярышников, являются такие соединения,

как дубильные вещества, флавоноиды, оксикоричные кислоты и тритерпеновые сапонины [14, 32, 38, 55, 60, 61]. В побегах видов Crataegus L. из группы флавоноидов содержатся гиперозид, рутин, витексин, витексин-2-рамнозид, ацетилвитексин-2-рамнозид и также

проантоцианидины [118, 130]. В цветках присутствуют флавонолгликозиды (гиперозид, спиреозид, рутин). В листьях содержатся эпикатехин и/или катехин и их производные в виде процианидинов, образующиеся при конденсации 2-8 мономерных звеньев вышеуказанных катехинов вместе с олигомерными процианидинами [106, 117, 118, 130]. Из оксикоричных кислот в сырье боярышника содержатся хлорогеновая и кофейная кислоты. Из не фенольных соединений к числу характерных компонентов относятся пентациклические тритерпены (например, урсоловая и олеаноловая кислоты) и 2-а-гидроксипроизводное олеаноловой кислоты - кратеголовая кислота [133] .

Однако химический состав большинства видов рода Crataegus L., особенно интродуцированных, недостаточно изучен.

Так, в листьях и цветках некоторых интродуцированных видов (C uniflora, C. rotundifolia, C. coccinea C. Crus-Galli L., C. punctata, C. Douglasii и C. tomentosa) установлено наличие и выделены различные процианидины [107, 116].

В плодах Crataegus pinnatifida Bunge идентифицированы различные классы летучих соединений, таких как цис-3-гексенол, цис-3-гексенил ацетат, а-терпинеол, фурфурал и др. [111].

В семенах Crataegus pinnatifida установлено присутствие таких соединений, как эскулин, витексин, органические кислоты, проантоцианиды, диметоксибензальдегид, баланофонин, буддленол, а также сесквинеолигнаны - хавторнсесквиины K и L и лигнаны - хавторнины A-H [103,114, 141].

И.А. Самылиной с соавторами было проведено исследование химического состава плодов 13 нефармакопейных интродуцированных видов Crataegus L., в том числе C. submollis. Авторами было установлено, что доминирующим флавоноидом в исследованных видах является гиперозид. Также была определена его концентрация в сырье [31, 32, 61, 62].

Н.Ф. Гончаровым с соавторами проведены обширные химические исследования химического состава различных североамериканских боярышников. Так, в плодах 9 североамериканских видов установлено присутствие таких оксикоричных кислот, как хлорогеновая, неохлорогеновая и кофейная. Также в данных исследованиях было определено, что исследуемые виды содержат кумарины, флавоноиды, дубильные вещества, сапонины, липофильные соединения, аминокислоты. Из флавоноидов установлено присутствие гиперозида, кверцетина и витексина [12, 13, 14, 28].

Также этой группой авторов проведена сравнительный анализ содержания флавоноидов и оксикоричных кислот, таких как хлорогеновая, неохлорогеновая, феруловая и кофейная в плодах двух интродуцированных видов - боярышника желтого и боярышника круглолистного [14].

Ими же был исследован химический состав эфирного масла цветков боярышников канадского и мягковатого. Авторами было установлено, что в состав эфирного масла данных видов в основном входят монотерпены и ароматические соединения. Оказалось, что дигидроэдулан явялется специфическим компонентом в цветках боярышника мягковатого, а эвгенол, цисжасмон, ментол, дигидрокарвеол - отличительные компоненты для боярышника канадского [15].

Изучение химического состава C. submollis проводилось небольшим количеством ученых и в основном были исследованы цветки и плоды данного вида. Так, в плодах данного вида были установлены соединения, являющиеся общими для рода Crataegus L. флавоноиды - гиперозид, кверцетин, витексин; оксикоричные кислоты - хлорогеновая,

неохлорогеновая и кофейная кислота; тритерпеновые сапонины, дубильные вещества, кумарины и аминокислоты [14, 29, 32, 78, 79].

В эфирном масле цветков данного вида идентифицированы и установлена концентрация различных монотерпенов, таких как линалоол, гераниол, и др.; ароматических компонентов - тимол и карвакрол; а также бензальдегида, метоксибензальдегида, дигидроэдулана и др. [15, 28].

Учеными из Самарского государственного медицинского университета выделены из плодов C. submollis такие соединения, как 3"-О-п-кумариол-изокверцетин, изокверцетин, гиперозид, авикулярин, витексин, олеаноловая кислота, бетулин, 3-О-О-глюкопиранозид стигматсерин и хлорогеновая кислота [78, 79].

Н.Ф. Сидорой с соавторами было проведено исследование химического состава липофильного комплекса листьев C. submollis, в результате были идентифицированы 44 липофильных соединения различной химической природы: терпеноиды - транс-линалооксид, цис-линалооксид, линалоол, нерол, гераниол, эвгенол, Р-дамаскенон, геранилацетон, а-фарнезен, нероледол, сквален; ароматические соединения - бензальдегид, сиреневый альдегид, 4-винил-2-метоксифенол, бензофенон, фитол; жирные кислоты - каприновая, лауриновая, миристиновая, пентадекановая, пальмитолевая, пальмитиновая, линоленовая, линолевая, олеиновая, стеариновая; высшие алканы и их производные [137]. Основные соединения C. submollis представлены в таблице 1.3.1.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Гусакова Валерия Андреевна, 2023 год

Список литературы

1. Аврач, А.С. Хромато-масс-спектрометрическое определение флавоноидов в плодах боярышника / А.С. Аврач, Е.В. Сергунова, И.А. Самылина // Фармация. - 2013. - № 3. - С. 14-16.

2. Антидепрессивная активность экстрактов боярышника кроваво-красного/ Т.В. Морозова, В.А. Куркин, Е.Н. Зайцева [и др.] // Фармация. - 2017. - Т.66, № 4. - С. 37-39.

3. Ахрем, А.А. Тонкослойная хроматография / А.А. Ахрем, А.И. Кузнецова. -М.: Изд-во «Наука», 1995. - 175 с.

4. Беляков, К.В. Методологические подходы к определению биологически активных веществ в лекарственном растительном сырье спектрофотометрическим методом / К.В. Беляков. - М., 2004. - 188 с.

5. Биологическая активность льняного масла как источника омега-3 альфа-линоленовой кислоты / О.М. Ипатова, Н.Н. Прозоровская, В.С. Баранова, Д.А. Гусева // Биомедицинская химия. - 2004. - Т. 50, №1. - С.25-43.

6. Большой энциклопедический словарь лекарственных растений / под ред. Г.П. Яковлева. - 3-е изд., испр. и доп. - СПб.: СпецЛит, 2015. - 759 с.

7. Васюков, В.М. Обзор дикорастущих и дичающих боярышников (Crataegus L., Rosaceae) Среднего и Нижнего Поволжья / В.М. Васюков, С.В. Саксонов // Вестник Мордовского университета. - 2013. - № 3. - С. 9-13.

8. Вафин, Р. В. Боярышники. Интродукция и биологические особенности / Р. В. Вафин, В. П. Путенихин. - М., 2003. - 240 с.

9. Влияние некоторых видов лекарственного растительного сырья на систему гемостаза in vitro / Н.В. Кудашкина, С.Р. Хасанова, В.А. Гусакова [и др.] // Традиционная медицина. - 2021. - Т.64, № 1. - С. 38-42.

10. Всемирная организация здравоохранения [Электронный ресурс]. - Женева, 2021. - URL: http://www.who.int.ru. (дата обращения 21.02.2021).

11. Георгиевский, В. П. Биологически активные вещества лекарственных растений / В.П. Георгиевский, П.Ф. Комиссаренко, С.Е. Дмитрук. -Новосибирск: Наука, Сиб. отд-ние, 1990.- 333 с.

12. Гончаров, Н.Ф. Гидроксикоричные кислоты Crataegus chlorocarpa Lenne et C. Koch., Crataegus rotundofolia Medic / Н.Ф. Гончаров // Кубанский научный медицинский вестник. - 2009. - №3. - С. 42-43.

13. Гончаров, Н.Ф. Фенольные соединения североамериканских видов рода боярышник / Н.Ф. Гончаров, А.М. Ковалева, А.Н. Комиссаренко // Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова. -2008. - №3. - С. 150-154.

14. Гончаров, Н.Ф. Сравнительное изучение гидроксикоричных кислот и флавоноидных соединений плодов некоторых видов Crataegus L. / Н.Ф. Гончаров // Кубанский научный медицинский вестник. - 2008. - №5. - С. 49-52.

15. Гончаров, Н.Ф. Изучение эфирных масел цветков североамериканских видов боярышников / Н.Ф. Гончаров // Кубанский научный медицинский вестник. - 2008. - №5. - С. 52-55.

16. Государственная фармакопея Республики Беларусь: в 3 т. / под общ. ред. А. А. Шерякова. - Молодечно: Победа, 2008. - Т. 2. - 472 с.

17. Государственная Фармакопея Российской Федерации [Электронный ресурс]. XIV издание. - Москва, 2018. - Т.1. - 1814 с. - URL: http: //resource.rucml .ru/feml/pharmacopia/14_1/HTML/index.html (дата обращения 23.01.2020).

18. Государственная Фармакопея Российской Федерации [Электронный ресурс]. XIV издание. - Москва, 2018. - Т.2. - 1448 с. -URL: http: //resource.rucml .ru/feml/pharmacopia/14_2/HTML/index.html (дата обращения 22.12.2020).

19. Государственная Фармакопея Российской Федерации [Электронный ресурс]. XIV издание. - Москва, 2018. - Т.4. - 7020 с. -

URL: http: //resource.rucml .ru/feml/pharmacopia/14_2/HTML/index.html. (дата обращения 12.11.2020).

20. Губанов, И.А. Дикорастущие полезные растения СССР / И.А. Губанов, И.Л. Крылова, В.Л. Тихонова. - М.: Мысль, 1976. - 360 с.

21. Гусакова, В.А. Исследование химического состава боярышника мягковатого / В. А. Гусакова, П.А. Андресова, С.Р. Хасанова // Вестник Башкирского государственного медицинского университета. - 2019. - №1. - С. 1185-1189.

22. Гусейнов, Д.Я. Фармакология боярышника / Д.Я. Гусейнов. - Б.: Азернешр, 1985. - 154 с.

23. Деревья и кустарники СССР: в 6 т. - М.: Изд-во АН СССР, 1954. - Т.3. - 872 с.

24. Джафарова, Р.Э. Действие экстракта цветков боярышника на течение сахарного диабета в эксперименте / Р.Э. Джафарова, Г.Ш. Гараев, З.С. Джафаркулиева // Актуальные проблемы гуманитарных и естественных наук. - 2011. - №4. - С. 284-288.

25. Евдокимова, О.В. Фармакологическое действие препаратов боярышника / О.В. Евдокимова // Современные проблемы фармацевтической науки и практики: научные труды ВНИИФ. - М, 1999. - Т. 38,Ч. 2. - С. 205-212.

26. Журавлева, Л.А. Кинетические подходы к проблеме тестирования антиоксидантов. С. 4. Антиоксидантные свойства пирокатехина и его производных / Л.А. Журавлева, Г.А. Усманова, В.Н. Ушкалова // Современные проблемы науки и образования. - 2009. - № 3. - С. 176-181.

27. Изучение различных условий количественного определения на содержание флавоноидов на примере плодов боярышника мягковатого / В. А. Гусакова, П.А. Андресова, С.Р. Хасанова [и др.] // Вестник Башкирского государственного медицинского университета. - 2019. - №1. - С.57-61.

28. Изучение состава липофильных соединений представителей рода боярышник / Н.Н. Гончаров, И.В. Михайлов, Н.Ф. Гончаров, Е.В. Терешонок // Фундаментальные науки. - 2014. - № 11. - С.357-361.

29. Изучение фенольных соединений плодов североамериканских видов боярышников / Н.Ф. Сидора, Н.В. Ковалева, А.М. Комиссаренко, А.Н. Гончаров // Прикладные информационные аспекты медицины. - 2006. - Т.9, № 2. - С. 149-155.

30. Исследование содержания сапонинов в различных видах рода Crataegus L /

B.А. Гусакова, Н.В. Кудашкина, С.Р. Хасанова [и др.] // Сборник материалов юбилейной международной научной конференции. - М., 2021. - С. 499-501.

31. Кашникова, М.В. Фармакогностическое изучение сырья боярышника: автореф. дис. ... канд. фарм. наук: 15.00.02 / Кашникова Мария Владимировна. - М., 1984. - 20 с.

32. Киселева, Т.Л. Изучение химического состава нефармакопейных видов боярышника и разработка показателей качества сырья: автореф. дис. ... канд. фарм. наук: 15.00.02. / Киселева Татьяна Леонидовна. - М., 1988. - 21 с.

33. Клинические аспекты применения хемилюминесцентного анализа / Ю.С. Винник, А.А. Савченко, О.В. Перьянова [и др.] // Сибирское медицинское обозрение. - 2006. - № 4. - С.11-15.

34. Котова, Э.Э. Стандартизация плодов боярышника и лекарственных препаратов на их основе по показателю «Количественное определение» / Э.Э. Котова, А.Г. Котов, Н.П. Хованская // Фармаком. - 2004. - №4. - С.35-41.

35. Круглякова, А.А. Бета-ситостерин: свойства, подходы к количественному определению / А.А. Круглякова, Г.В. Раменская // Вестник Национального медико-хирургического Центра им. Н.И. Пирогова. - 2016. - Т. 11, № 4. -

C.35-38.

36. Кудашкина, Н.В. Фитохимический анализ: учеб. пособие по фармакогнозии для студентов / Н.В. Кудашкина, С.Р. Хасанова, С.А. Мещерякова. - Уфа: Издательство ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава России, 2019. - 124 с.

37. Куркин, В.А. Основы фитотерапии: учеб. пособие / В.А. Куркин. - Самара, 2009. - 963 с.

38. Куркин, В.А. Фармакогнозия: Учебник для студентов фармацевтических вузов / В.А. Куркин. - Самара, 2004. - 1180 с.

39. Куркина, А.В. Экспериментально-теоретическое обоснование подходов к стандартизации сырья и препаратов фармакопейных растений, содержащих флавоноиды: автореф. дис. ... д-ра фарм. наук: 14.04.02 / Куркина Анна Владимировна. - Самара, 2013. - 48 с.

40. Лекарственные растения: справочное пособие / Н.И. Гринкевич, И.А. Баландин, В.А. Ермакова [и др.]. - М.: Высшая школа, 1992. - 398 с.

41. Лекарственные растения: Справочник / под ред. П.С. Чикова. - М.: Агропромиздат, 1989. - 431 с

42. Ляхова, Н.С. Фармакологическое изучение суммарных извлечений из плодов боярышника: автореф. дис. ... канд. фарм. наук: 14.00.25 / Ляхова Наталья Сергеевна. - Пятигорск, 2008. - 22 с.

43. Мироненко, Н.В. УФ-спектрофотометрическое определение тритерпеновых сапонинов - производных олеаноловой кислоты / Н.В. Мироненко, Т.А. Брежнева, В.Ф. Селеменев // Химия растительного сырья. - 2011. - №3.- С. 153-157.

44. Морозова, Т.В. Актуальные проблемы химической стандартизации сырья лекарственных растений рода боярышник Crataegus / Т.В. Морозова, В.А. Куркин, О.Е. Правдивцева // Фармация и фармакология. - 2018. -Т.6, № 2. - С. 104-120.

45. Мухаметова, С.В. Отбор и способы размножения представителей рода боярышник ( Crataegus L.) в условиях республики Марий Эл: автореф. дис. ... канд. с.-х. наук: 06.03.01/ Мухаметова Светлана Валерьевна. - Йошкар-Ола, 2017. - 25 с.

46. Мухаметова, С.В. Североамериканские боярышники в Среднем Поволжье / С.В. Мухаметова // Цветоводство. - 2014. - № 5. - С. 40-42.

47. О фармакологической активности препаратов боярышника / А.М. Анцышкина, Е.И. Барабанов, И.А. Самылина, Н.В. Каверина // Фармация. -1990. - № 2. - С. 63-65.

48. Оценка противоопухолевой и антикахексической активности экстракта аврана лекарственного (Gratiola officinalis L.) у крыс с перевитой саркомой / Н.А. Наволокин, Д.А. Мудрак, Н.В. Полуконова [и др.] // Сибирский онкологический журнал. - 2016. - Т. 15, № 1. - С. 37-43.

49. Поиск новых видов лекарственного сырья на основе боярышников / В. А. Гусакова, П.А. Андресова, С.Р. Хасанова [и др.] // Материалы международной научной конференции «IV Гаммермановские чтения». -СПб., 2019. - С.117-118.

50. Полетико, О. М. Боярышник — Crataegus L. // Деревья и кустарники СССР. Дикорастущие, культивируемые и перспективные для интродукции. - М.; Л.: АН СССР, 1954. — Т. III: Покрытосеменные. Семейства Троходендроновые

— Розоцветные / Ред. тома С. Я. Соколов. - С. 559-872 с.

51. Полирегионарная агрегатометрия крови пациентов с острым тромбозом, как потенциальная модель доклинических исследований новых корректоров системы гемостаза ex vivo / А.Л. Ураков, А.В. Самородов, Ф.Х. Камилов, Ф.А. Халиуллин // Регионарное кровообращение и микроциркуляция. - 2017.

- Т. 16, № 1 (61). - С. 65-71.

52. Потанина, О.Г. Оценка доброкачественности лекарственного растительного сырья с учетом диагностически значимых признаков / О.Г. Потанина, И.А. Самылина // Фармация. - 2003. - №4. - С. 12-14.

53. Пояркова, А. И. Род 733. Боярышник — Crataegus L. // Флора СССР : в 30 т. / гл. ред. В.Л. Комаров. - М.; Л.: Изд-во АН СССР, 1939. - Т.9. - С. 416-468.

54. Практикум по фармакогнозии: учеб. пособие для студ. вузов / В.Н. Ковалев [и др.]. - Харьков: Изд-во НФаУ; Золотые страницы, 2004. - 512 с.

55. Растительные ресурсы России: Дикорастущие цветковые растения, их компонентный состав и биологическая активность / под ред. А.Л. Буданцева.

- СПб.; М.: Товарищество научных изданий КМК, 2009. - Т.2. - 513 с.

56. Родионова, Т.В. Стандартизация листьев боярышника / Т.В. Родионова, О.М. Хишова // Вестник Фармации (Витебск). - 2008. - № 2 (40). - С. 70-79.

57. Русанов, Ф.Н. Интродуцированные боярышники Ботанического сада АН УзССР / Ф.Н. Русанов // Дендрология Узбекистана. - Ташкент: Наука, 1965. -Т. 1. - С.8-254.

58. Сагарадзе, В.А. Определение флавоноидов в цветках с листьями боярышника методом ВЭЖХ со спектрофотометрическим детектированием / В.А. Сагарадзе, Е.Ю. Бабаева, Е.И. Каленикова // Химико-фармацевтический журнал. - 2017. - Т.51, № 4. - С. 30-33.

59. Самородов, А.В. Поиск новых азотсодержащих гетероциклических соединений, влияющих на систему гемостаза: дис. ... канд. мед. наук: 03.01.04, 14.03.06 / Самородов Александр Владимирович. - Уфа, 2012. - 143 с.

60. Самылина, И.А. Боярышник (Crataegus): возможности медицинского применения / И.А. Самылина, А.А. Сорокина, Н.В. Пятигорская // Фарматека.

- 2010. - № 8. - С. 83-85.

61. Самылина, И.А. Изучение химического состава нефармакопейных видов боярышника и оценка их фармакологической активности / И.А. Самылина, Т.Л. Киселева // Фармация. - 1990. - №1. - С.12-17.

62. Самылина, И.А. Количественное определение суммы флавоноидов в плодах боярышника / И.А. Самылина, Т.Л. Киселева // Фармация. - 1987. -№5. - С. 30 - 32.

63. Соколов, С.Я. Справочник по лекарственным растениям / С.Я. Соколов, И.П. Замотаев. - Москва: Медицина, 1984. - 464 с.

64. Сравнительный анализ химического состава липофильных фракций побегов трех видов рода Crataegus L. / С.Р. Хасанова, Н.В. Кудашкина, В.А. Гусакова, Н.Б.К. Жалалова // Химия растительного сырья. - 2021. - № 4. - С. 373-380.

65. Сравнительное исследование антидепрессантной и диуретической активности жидких экстрактов боярышника полумягкого / В.А. Куркин, Е.Н. Зайцева, Т.В. Морозова [и др.] // Медиаль. - 2019. - Т.23, № 1. - С.67-70.

66. Тарасова, В.Н. Роль экстракта плодов боярышника в рецептуре пектиносодержащих напитков иммуномодулирующего действия - Проблемы идентификации, качества и конкурентоспособности потребительских товаров / В.Н. Тарасова // Сборник статей V Международной конференции в области товароведения и экспертизы товаров. - Курск, 2017. - С. 302-304.

67. Тарасова, В.Н. Пектиносодержащие напитки иммунологического действия /

B.Н. Тарасова, Л.В. Донченко // Современная наука: актуальные проблемы и пути их решения. - 2016. - Т.30, № 3. - С. 18-21.

68. Трофимова, С.В. Фармакогностическое изучение боярышника кроваво-красного Crataegus sanguinea Pall.: дис. ... канд. фарм. наук: 14.04.02 / Трофимова Светлана Валерьевна. - Пермь, 2014. - 164 с.

69. Уфимов, Р.А. Род боярышник (Crataegus L., Rosaeae) во флоре Восточной Европы и Кавказа: автореф. дис.. канд. биол. наук: 03.02.01 / Уфимов Роман Александрович. - Санкт-Петербург, 2013. - 20 с.

70. Хасанова, С.Р. Изучение качественного состава липофильной фракции листьев боярышника кроваво-красного / С.Р. Хасанова, Н.В. Кудашкина // Традиционная медицина. - 2015. - Т.41, № 2. - С.53-55.

71. Хасанова, С.Р. Изучение компонентного состава липофильной фракции побегов боярышника мягковатого, интродуцированного в условиях Республики Башкортостана / С.Р. Хасанова, Н.В. Кудашкина, В.А. Гусакова // Научный и инновационный потенциал развития производства, переработки и применения эфиромасличных и лекарственных растений: материалы Международной научно-практической конференции. - Симферополь, 2019. -

C. 293-296.

72. Хасанова, С.Р. Исследование антиоксидантной активности листьев боярышника кроваво-красного методом хемилюминесценции / С.Р.

Хасанова, Н.В. Кудашкина, С.В. Трофимова // Традиционная медицина. -2012. - №5. - С. 316-317.

73. Хасанова, С.Р. Определение флавоноидного состава листьев боярышника кроваво-красного из флоры РБ методом ВЭЖХ / С.Р. Хасанова, С.В. Трофимова, Н.В. Кудашкина // Современная медицина и фармацевтика: анализ и перспективы развития: материалы 8 Международной научно-практической конференции. - М.: Спутник, 2013. - С. 36.

74. Хасанова, С.Р. Экспериментально-теоретическое обоснование создания и стандартизации лекарственных растительных препаратов с антиоксидантной активностью: дис. ... д-ра фарм. наук: 14.04.02 / Хасанова Светлана Рашитовна. - Самара, 2016. - 362 с.

75. Хаятулла, Н.М. Влияние экстракта боярышника на мозговое кровообращение и некоторые показатели метаболизма головного мозга: автореф. дис. ... канд. фарм. наук: 14.00.25/ Хаятулла Насрулла Масуди. -Пятигорск, 1995. - 18 с.

76. Химический анализ лекарственных растений: учеб. пособие для фармац. вузов/ Е.Я. Ладыгина, Л.Н. Сафронич, В.Э. Отряшенкова [и др.]; под ред. Н.И. Гринкевич , Л.Н. Сафронич. - М.: Высш. школа, 1983. - 176 с.

77. Цвелев, Н.Н. Боярышник - Crataegus L. Флора Восточной Европы / Н.Н. Цвелев. - СПб.: Мир и семья; изд-во СПХФА, 2001. - Т.10. - 670 с.

78. Шайхутдинов, И.Х. Исследование по стандартизации лекарственных растительных препаратов на основе сырья видов рода боярышник (Crataegus L.): дис. ... канд. фарм. наук: 14.04.02 / Шайхутдинов Ильнур Хясяинович. -Самара, 2021. - 181 с.

79. Шайхутдинов, И.Х. Разработка подходов к стандартизации плодов боярышника мягковатого / И.Х. Шайхутдинов, В.А. Куркин, О.Е. Правдивцева // Фармация. - 2020. - Т.69, № 6. - С.20-24.

80. Шаршунова, М. Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии / М. Шаршунова, В. Шварц, Ч. Михалец. - М.: Мир, 1980. - Т. 1, 2. - 296 с.

81. Шелепова, О.В. Региональные особенности формирования микроэлементного состава лекарственных растений. / О.В. Шелепова, М.Е. Пименова // Ботанические сады как центры сохранения биоразнообразия и рационального использования растительных ресурсов: матер. междунар. науч. конф., посвящ. 60-летию Главного ботанического сада им. Н.В. Цицина РАН. - М.: ГБС РАН, 2005. - С. 549-552.

82. Якубке, Х.-Д. Аминокислоты. Пептиды. Белки: пер. с нем. / Х.-Д. Якубке, Х. Ешкайт. - М.: Мир, 1985. - 456 с.

83. A diet formula of Puerariae radix, Lycium barbarum, Crataegus pinnatifida, and Polygonati rhizoma alleviates insulin resistance and hepatic steatosis in CD-1 mice and HepG2 cells / J. Liu, H. Zhang, B. Ji [et al.] // Food Funct. - 2014. - Vol.5, № 5. - Р. 1038-1049.

84. An extract of Crataegus pinnatifida fruit attenuates airway inflammation by modulation of matrix metalloproteinase-9 in ovalbumin induced asthma / I.S. Shin, M.Y. Lee, H.S. Lim [et al.] // PLoS One. - 2012. - Vol.7, № 9. - Р.45734.

85. Anti-inflammatory, gastroprotective, freeradical-scavenging, and antimicrobial activities of hawthorn berries ethanol extract / V.M. Tadic, S. Dobric, G.M. Markovic [et al.] // J. Agric. Food. Chem. - 2008. - Vol.56, № 17. - Р. 7700-7709.

86. Antioxidant activities of Crataegus monogyna extracts / T. Bahorun [et al.] // Planta Medica. - 1994. - Vol. 60. - P. 323-328.

87. Antioxidant activities of polyphenolic extracts from flowers, in vitro callus and cell suspension culture of Crataegus monogyna / D.A. Rakotoarison [et al.] // Pharmazie. - 1997. - Vol. 52. - Р. 60-64.

88. Antioxidant and anti-inflammatory neolignans from the seeds of hawthorn / Y. Peng, L.L. Lou, S.F. Liu [et al.] // Bioorg. Med. Chem. Lett. - 2016. - Vol.26, № 22. - Р. 5501-5506.

89. Antioxidant and anxiolytic activities of Crataegus nigra Wald. et Kit. Berries / M.T. Popovic-Milenkovic, M.T. Tomovic, S.R. Brankovic [et al.] // Acta Pol. Pharm. - 2014. - Vol. 71, № 2. - Р. 279-285.

90. Antioxidant and hepatoprotective effects of Crataegus songarica methanol extract / S.A. Ganie, T.A. Dar, B. Zargar [et al.] // J. Environ. Pathol. Toxicol. Oncol. -2014. - Vol. 33, № 2. - Р. 131-143.

91. Antiviral and antioxidant activity of flavonoids and proanthocyanidins from Crataegus sinaica / A.A. Shahat, P. Cos, T. De Bruyne [et al.]// Planta Med. - 2002. - Vol. 68, № 6. - Р. 539-541.

92. Blesken, R. Crataegus in cardiology / R. Blesken // Fortschr Med. - 1992. -Vol.110, № 15 - P. 290-292.

93. Borkowski, B. Diuretic action of several flavone drugs / B. Borkowski // Planta Med. - 1960. - №8. - Р. 95-104.

94. British Pharmacopeia 2009 / British Pharmacopoeia Commission. - London: Crown Copyright, 2009. - 10952 p.

95. Crataegus azarolus Leaves induce antiproliferative activity, cell cycle arrest, and apoptosis in human HT-29 and HCT-116 colorectal cancer cells / N. Mustapha, A. Pinon, Y. Limami [et al.] // J. Cell. Biochem. - 2016. - Vol. 117, № 5. - P. 12621272.

96. Effects of a methanolic extract from Crataegus oxyacantha blossoms on TXA2 and PGI2 synthesising activities of cardiac tissue / J. Vibes [et al.] // Med. Scien. Res. -1993. - Vol.21. - Р. 435-436.

97. European Pharmacopeia 6.0 / European Directorate for the Quality of Medicines & HealthCare. - Strasbourg, 2007. - 1129 с.

98. European Pharmacopoeia Online 9.0 [Электронный ресурс]. - URL: http://online6.edqm.eu/ep900/ (дата обращения 26.02.2019).

99. Elango, C. Immunomodulatory effect of Hawthorn extract in an experimental stroke model / C. Elango, S.N. Devaraj // J. Neuroinflammation. - 2010. - № 7. -P. 97.

100. Étude comparée de l'activité cardiovasculaire des jeunes pousses, des feuilles et des fleurs de Crataegus oxyacantha L. I. Activité electrique et tension arterielle chez le rat / F. Occhiuto [et al.] // Plant. Méd. Phytothér. - 1986. - Vol. 20. - P. 3751.

101. Étude des effets cardiovasculaires de l'hyperoside extrait de l'Aubépine chez le chien anesthésié / M. Liévre [et al.] // Annal. Pharm. Franç. - 1985. - № 5. - P. 471477.

102. Experimental research on the in vitro antitumor effects of Crataegus sanguinea / J. Sun, G. Gao, Y. Gao [et al.] // Cell Biochem. Biophys. - 2013. - Vol.67, № 1. -P.207-213.

103. Food byproducts as a new and cheap source of bioactive compounds: lignans with antioxidant and anti-inflammatory properties from Crataegus pinnatifida Seeds / X.X. Huang, M. Bai, L. Zhou [et al.] // J. Agric. Food. Chem. - 2015. - Vol.63, № 32. - P. 7252-7260.

104. Gabard, B. Zur Pharmakologie von Crataegus. In: Reitbrock N et al., eds. Wandlungen in der Therapie der Herzinsuffizienz. / B. Gabard, G. Trunzler // Brauns. Fried. View. Sohn. - 1983. - Bd. 43. - S. 43-53.

105. Hawthorn (Crataegus oxyacantha L.) bark extract regulates antioxidant response element (ARE)-mediated enzyme expression via Nrf2 pathway activation in normal hepatocyte cell line / V. Krajka-Kuzniak, J. Paluszczak, J. Oszmianski, W. BaerDubowska // Phytother. Res. - 2014. - Vol.28, № 4. - P. 593-602.

106. High-performance liquid chromatography and diffuse reflectance spectroscopy of flavonoids in Crataegus oxycantha L. III. Analysis of 2-phenylchroman derivatives and caffeic acid. Il / P. Ficarra [et al.] // Farmaco. - 1990. - Vol. 45. - P. 237-255.

107. High-perfomance liquid chromatographic determination of oligomeric procyanidins from dimmers up to the hexamer in howthorn / U. Svedström [et al.] // J. Chromatogr. - 2002. - Vol.968. - P. 53-60.

108. Hypoglycemic effect of hawthorn in type II diabetes mellitus rat model / A. Aierken, T. Buchholz, C. Chen [et al.] // J. Sci. Food Agric. - 2017. - Vol.97, № 13. - P. 4557-4561.

109. Hypotensive effect of Crataegus oxyacantha / AS Abdul-Ghani [et al.] // Inter. J. Crude Drug Res. - 1987. - Vol.25. - P. 216-220.

110. Hypotensive and beta-blocking effect of procyanidins of Crataegus monogyna / E. Racz-Kotilla [et al.] // Planta Medica. - 1980. - Vol.39. - P. 239.

111. Identification of volatile compounds of hawthorn by gas chromatography/mass spectrometry (GC/MS) / L. Chen [et al.] // Se Pu. - 1997. - Vol.15, № 3. - P. 21921.

112. Immunomodulatory potencies of isolated compounds from Crataegus azarolus through their antioxidant activities / N. Mustapha, I. Mokdad-Bzeouich, A. Sassi [et al.] // Tumour. Biol. - 2016. - Vol. 37, № 6. - P. 7967-7980.

113. Inhibition of thromboxane A2 biosynthesis in vitro by the main components of Crataegus oxyacantha (hawthorn) flower heads. Prostaglandins / J. Vibes [et al.] // Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids. - 1994. - Vol. 50. - P. 173-175.

114. Isolation of cytotoxic compounds from the seeds of Crataegus pinnatifida / L.Z. Li, Y. Peng, C. Niu [et al.] // Chin. J. Nat. Med. - 2013. - Vol.11, № 4. - P. 411-414.

115. In vitro antidiabetic potential of the fruits of Crataegus pinnatifida / S.S. Chowdhury, M.N. Islam, H.A. Jung, J.S. Choi // Res. Pharm. Sci. - 2014. - Vol. 9, № 1. - P. 11-22.

116. Isolation and identification of oligomeric procyanidins from Crataegus leaves and flowers / U. Svedström H. Vuorela, R. Kostiainen [et al.] // Phytochemistry. -2002. - Vol. 60. - P. 821-825.

117. Kolodziej, H. Synthesis of condensed tannins. Part 12. Direct access to [4,6]- and [4,8]-all-2,3-cis procyanidin derivatives from (-)-epicathechin: assessment of bonding positions in oligomeric analogues from Crataegus oxycantha L. / H. Kolodziej, D. Ferreira, D.G. Roux // J. Chem. Soc. Per. Trans. I. - 1984. - Vol.34. -P. 343-350.

118. Krawczyk, U. HPLC analysis of procyanidins in Crataegus extract / U. Krawczyk, G. Pteri, A. Kery // Arch. Pharm. - 1991. - Vol.324. - P. 97-99.

119. Li, C.Q. Study on germicidal efficacy of extract of hawthorn fruit pit and its influencing factors / C.Q. Li, W. Wu, Y. Tong // Chin. J. Disinfect. - 2007. - Vol. 24. - P. 50-52.

120. Li, L. Anti-aging effect of total flavone of hawthorn leaf / L. Li, H. Lv, H. Pang // Lishizhen Med. Mater. Med. Res. - 2007. - Vol. 9. - P. 2143-2144.

121. Major triterpenoids in Chinese hawthorn "Crataegus pinnatifida" and their effects on cell proliferation and apoptosis induction in MDA-MB-231 cancer cells / L. Wen, R. Guo, L. You [et al.] // Food. Chem. Toxicol. - 2017. - Vol.100. - P. 149160.

122. Miettinen, T.A. Non-nutritive bioactive constituents of plan // Int. J. Vitam. Nutr. Res.- 2003. - Vol. 73, № 1. - P. 127-134.

123. Melikoglu, G. Flavonoids of Crataegus stevenii / G. Melikoglu, A.H. Mericli // Pharmazei. - 2000. - Vol.55, №4. - P. 326-327.

124. Mudge, E.M. Single-Laboratory Validation for the Determination of Flavonoids in Hawthorn Leaves and Finished Products by LC-UV / E.M. Mudge, Y. Liu, J.A. Lund // Planta Med. - 2016. - Vol. 82, № 17. - P. 1487-1492.

125. Oxygen species scavenging activity of phenolic extracts from hawthorn fresh plant organs and pharmaceutical preparations / T. Bahorun [et al.] // ArzneimittelForschung. - 1996. - Bd.46. - S. 1086-1089.

126. Pharmacopoeia of the People's Republic of China. - Peoples Medical Publishing House, 2005. - Vol. 1. - 974 p.

127. Pittler, M.H. Hawthorn extract for treating chronic heart failure: meta-analysis of randomized trials / M.H. Pittler, K. Schmidt, E Ernst // Am. J. Med. - 2003. - Vol. 114, № 8. - P. 665-774.

128. Porter, L. J. The conversion of proanthocyanidins and prodelphinidins to cyanidin and delphinidin / L.J. Porter, L.N. Hrstich, B.G. Chan // Phytochemistry. - 1986. -Vol.25. - P. 223-230.

129. Prevention effect in selenite-induced cataract in vivo and antioxidative effects in vitro of Crataegus pinnatifida leaves / T. Wang, P. Zhang, C. Zhao [et al.] // Biol. Trace. Elem. Res. - 2011. - Vol.142, №1. - P. 106-116.

130. Rehwald, A. Qualitative and quantitative reversed-phase highperformance liquid chromatography of flavonoids in Crataegus leaves and flowers / A. Rehwald, B. Meier, O. Sticher // J. Chrom. A. - 1994. - Vol. 677. - P. 25-33.

131. Reuter, H. Crataegus (Hawthorn): a botanical cardiac agent / H. Reuter // Z Phytother. - 1994. - Vol.15, №2. - P.73-81.

132. Rhodiolae Kirliowii Radix et Rhizoma and Crataegus pinnatifida Fructus Extracts Effectively Inhibit BK Virus and JC Virus Infection of Host Cells / S.Y. Chen, R.H. Teng, M. Wang [et al.] // Evid. Bas. Compl. Alter. Med. - 2017. - Vol.34. -P. 5620-5867.

133. Steinegger, E. Pharmakognosie / E. Steinegger, R. Hänsel. - Berlin: SpringerVerlag, 1996. - 807 p.

134. Steinhoff, B. Herbal medicines increasingly preferred / B. Steinhoff // Pharmazeutische Zeitung. - 1998. - Bd. 142, № 49. - S. 4412- 4417.

135. Shalizar Jalali, A. Crataegus monogyna fruit aqueous extract as a protective agent against doxorubicin-induced reproductive toxicity in male rats / A. Shalizar Jalali, S. Hasanzadeh // Avicenna J. Phytomed. - 2013. - Vol. 3, № 2. - P. 159-170.

136. Structural analysis of proanthocyanidins isolated from fruit stone of Chinese hawthorn with potent antityrosinase and antioxidant activity / W.M. Chai, C.M. Chen, Y.S. Gao [et al.] // J. Agric. Food Chem. - 2014. - Vol. 62, № 1. - P. 123129.

137. Sydora, N.V. Phytochemical research of Crataegus submollis Sarg. leaves lipophilic complex and study of its antibacterial activity / N.V. Sydora, A.M. Kovaleva, V.K. Iakovenko // Der Pharmacia Lettre. - 2016. - Vol. 8, № 21. - P. 19-23.

138. Sydora, N.V. Research the antimicrobical activity of Crataegus submollis Sarg. fruits lipophylic extract / N.V. Sydora, O.V. Demechko // Topical issues of new

drugs development: abstracts of XXIII international scientific and practical conference of young scientists and student. - Kharkiv: NUPh, 2016. - Vol. 1. - P. 124-125.

139. The genus Crataegus: chemical and pharmacological perspectives / D. Kumar, V. Arya, Z.A. Bhat [et al.] // Rev. Bras. Farmacog. - 2012. - Vol. 22, №5. - P. 11871200.

140. Two new compounds from Crataegus pinnatifida and their antithrombotic activities / C.C. Zhou, X.X. Huang, P.Y. Gao [et al.] // J. Asian. Nat. Prod. Res. -2014. - Vol. 16, № 2. - Р. 169-174.

141. Two new sesquineolignans from the seeds of Crataegus pinnatifida and their ß-amyloid aggregation inhibitory activitiy / R. Guo, L. Zhou, P. Zhao [et al.] // Nat. Prod. Res. - 2018. - Vol. 46. - Р. 1-7.

142. United States Pharmacopoeia (USP 32 - NF 27). / V.: The United States Pharmacopeial Convention, 2009. - 815 p.

143. United States Pharmacopeia [Электронный ресурс]. - 32 ed. - URL: http://www.uspbpep.com/ (дата обращения 25.02.2019).

144. Valeriana officinalis et Crataegus oxyacantha toxicité par administrations réitérées et investigations pharmacologiques / B. Fehri [et al.] // J. Pharm. Belg. - 1991. -Vol.46. - Р.165-176.

145. WHO Monographs on Selected Medicinal Plants / World Health Organization. -Geneva, 2004. - Vol. 2. - 297 p.

146. Zhang, P. Isolation and structural identification of a new flavonoids from leaves of Crataegus pinnatifida / P. Zhang, S. Xu // Chem. Abstrs. - 1999. - Vol. 132. - P. 227-262.

ПРИЛОЖЕНИЯ

ООО «ТРАВЫ БАШКИРИИ»

Яуаллылыгы сиклэнгэн йэмкгиэтэ 450095 Башкортостан РеспубликаЪы, 0фе к Глазов ур., 1/3 Тел. [phone] e-mail: [e-mail]. www.ufafito.ru

Общество с ограниченной ответственностью 450095, Республика Башкортостан, г.Уфа ул.Глазовская, 1 /3 Тел. [phone] e-mail: [e-mail]. www.ufafito.ru

ИНН 0275000936 КПП 027201001 ОКПО 26795008 ОГРН 1020202359649

/

УТВЕРЖДАЮ Генеральный директор о<равы Башкирии» A.A. Иванов « \ » 2021 г

2021 г

АКТ

О внедрении результатов диссертационной работы Гусаковой Валерии

Андреевны «Фитохимическое изучение и перспективы использования боярышника мягковатого Crataegus submollis Sarg.» на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук по специальности 3.4.2 -«Фармацевтическая химия, фармакогнозия» (фармацевтические науки) в работу

ООО «Травы Башкирии»

Комиссия в составе главного технолога Елеминой Натальи Евгеньевны, заведующего производством Цаплиной Людмилы Александровны, заведующего лабораторией Веселовой Оксаны Михайловны подтверждает использование материалов диссертационного исследования Гусаковой В.А., посвященного изучению возможностей использования боярышника мягковатого в качестве сырья для получения цветков, плодов и побегов боярышника в работе ООО «Травы Башкирии».

Полученные автором результаты качественного и количественного анализа используются с целью определения качества лекарственного растительного сырья. Методики являются экспрессными, точными, нетрудоемкими и достоверными.

Внедрение результатов диссертационных исследований Гусаковой В.А. способствует повышению объективности анализа лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов. Члены комиссии:

1. Главный технолог

ООО «Травы Башкирии»

2. Заведующий производством ООО «Травы Башкирии»

3. Заведующий лабораторией ООО «Травы Башкирии»

Елемина Н.Е.

Цаплина Л.А.

Веселова О.М.

«

»

2021 г.

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ

УТВЕРЖДАЮ Ф.И.О.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ КАЧЕСТВА ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА ПРОЕКТ ФАРМАКОПЕЙНОЙ СТАТЬИ

СгМаецг тЬтоШв согпп ФС 42-ХХХХ-ХХ

Боярышника мягковатого побеги

Срок введения установлен

«_»_20_года

Срок действия до «_»_20_года

Настоящая фармакопейная статья распространяется на побеги заготовленные с культивируемых растений, высушенные воздушно-теневым способом боярышника мягковатого - Crataegus submollis Sarg., сем. розоцветных -Rosaceae, цельные или измельченные и расфасованные в пачки и применяемые в качестве антиагрегантного и антиоксидантного лекарственного средства.

ИЗДАНИЕ ОФИЦИАЛЬНОЕ ПЕРЕПЕЧАТКА ВОСПРЕЩЕНА

ФСП 42- с.2

Показатели качества Методы испытания Нормы

1 2 3

Внешние признаки Визуальный (с помощью микроскопа и лупы), органолептический, ГФ XIV Соответствует ФС

Микроскопия ГФ XIV, вып. 1 Соответствует ФС

Качественные реакции тех Соответствует ФС

Числовые показатели: Содержание флавоноидов в пересчете гиперозид дзп Влажность Золы общей Органическая примесь Минеральная примесь Измельченность: частиц, не проходящих сквозь сито с!=4,5 мм частиц, проходящих сквозь сито с!=0,5 мм Дифференциальная спектрофотометрия Микродиагностический ГФ XIV, т. 1 ГФ XIV, т. 1 ГФ XIV, т. 1 ГФ XIV, т. I ГФ XIV, т. 1 ГФ XIV, т. 1 Не менее 1,0 % не менее 70% не более 10% не более 10% не более 1,0% не более 0,5% не более 10% не более 4%

Микробиологическая Чистота ГФ XIV Соответствует категории 4А

Упаковка ГФ XIV, т. 1 Цельное сырье упаковывается по 15 кг в мешки бумажные многослойные; в мешки полипропиленовые из пропилена окрашенного; по 20 кг в мешки тканевые продуктовые.

Маркировка ГФ XIV, т. 1 Соответствует ФС

Транспортирование ГФ XIV, т. 1

Хранение ГФ XIV, т. 1 В сухом, защищенном от света месте, при температуре не выше 25°С

Срок годности

3 года

Внешние признаки. Цельное сырье. Листья очередные без прилистников, простые, короткочерешковые длиной 2,5 - 5 см; яйцевидные, с острой верхушкой, с широко-клиновидным основанием, с крупнозубчатым краем; жилкование перисто-краевое. Жилки зеленые, выдаются с нижней стороны листа. Цвет листьев зеленый с верхней стороны и светло-зеленый - с нижней стороны. Соцветия 10-15 цветковые, войлочно-опушенные. Цветки с белыми лепестками, имеющие 10 тычинок. Чашелистики яйцевидной формы с острой верхушкой и зубчатым краем. Стебли темно-зеленые, густо серо-войлочно опушенные.

Измельченное сырье. Кусочки листьев различной формы и размера, обломки черешков, прилистников, проходящие сквозь сито размером 4,5 мм, цвет кусочков листьев зеленый с верхней стороны и светло-зеленый - с нижней. Запах слабый. Вкус водного извлечения слабо-горьковатый. Микроскопия. Цельное сырье. 3

Клетки верхнего эпидермиса листа с поверхности многоугольные, прямостенные; с четковидными утолщениями (рис.1); нижнего - с извилистыми стенками (рис. 2). Кутикула на обеих сторонах образует складки. Устьица крупные, многочисленные, располагаются на нижней стороне листа окружены 3-5 околоустьичными клетками (аномоцитный тип) (рис. 3). На обеих сторонах листа встречаются многочисленные волоски -простые одноклеточные, толстостенные с основанием, погруженным в эпидермис (рис. 4). В месте прикрепления волоска эпидермис образует розетку из 5-7 округлых клеток, окрашенных в бурый цвет. Клетки эпидермиса, окружающие розетку клеток также окрашены в бурый цвет (рис. 5). В мезофилле листа и вдоль жилок встречаются крупные друзы (рис. 6.) и кристаллы оксалата кальция (кубические и цилиндрические) в виде кристаллоносной обкладки жилок (рис. 7). На верхушке листовой пластинки

и сегментах листа имеются многоклеточные железки с бурым содержимым (рис. 8). Край листовой пластинки цельный без волосков (рис. 9).

Анатомо-диагностические признаки цветков: у лепестков венчика видны клетки эпидермиса, с наружной стороны имеющие складчатую кутикулу, а с внутренней - сосочковидные выросты (рис. 10; 11). Пыльца цветков боярышника мягковатого овальная с гладкой поверхностью (рис. 12). При рассмотрении чашелистиков с верхней стороны можно увидеть вытянутые клетки эпидермиса с слабоизвилистыми стенками и крупные устьица (рис. 13). Устьица окружены 3-5 околустьичными клетками (аномоцитный тип). По краю и на поверхности чашелистиков расположены многоклеточные шаровидные железки с желтовато-коричневым содержимым; на поверхности - многочисленные простые, одноклеточные волоски (рис. 14). В мезофилле чашелистиков имеются друзы, изредка встречаются призматические кристаллы оксалата кальция (рис. 15). При микроскопии поперечного среза черешка видно клетки эпидермиса, а также несколько рядов уголковой колленхимы, паренхима коры, центральный цилиндр с коллатеральным серповидно-изогнутым, имеющим склеремхимную обкладку, пучком (рис. 16).

Анатомо-диагностические признаки черешка: вытянутые клетки эпидермиса с не извилистыми стенками. На нем видны многочисленные волоски - простые, одноклеточные, тонкостенные и устьичный аппарат аномоцитного типа (рис. 17).

При рассмотрении поперечного сечения стебля можно увидеть покровную ткань перидерму, а также слой коры, одно годичное кольцо древесины и сердцевину (рис. 18).

Рис. 1 - Верхний эпидермис листа (1- складчатость кутикулы, 2— четковидные утолщения клеточной стенки)

Рис. 3 - Устьичный аппарат аномоцитного типа (3-5 околоустьичных клеток)

Рис. 2 - Нижний эпидермис листа ( 1 -устьица, 2 - извилистые стенки клеток)

Рис. 4 - Простые одноклеточные волоски

Рис. 5 - Основание волоска с розеткой клеток

Рис. 7 - Кристаллоносная обкладка сосудов по жилкам листьев

Рис. 8 - Желёзка с бурым содержимым

Рис. 9 - Край листовои пластинки

Рис. 10 - Эпидермис венчика (1 -

сосочковидные выросты клеток

эпидермиса, 2 - складчатая кутикула)

Рис. 11 - Край лепестка венчика

Рис. 12. - Пыльца цветков

боярышника мягковатого

Рис. 13 - устьица

Рис. 14 - Эпидермис чашелистиков с

шаровидными

железками

одноклеточными волосками

Рис. 15 - Эпидермис чашелистиков с друзами и призматическими кристаллами

Рис. 16 - Поперечный срез черешка (1- эпидермис, 2 - уголковая колленхима, 3 - паренхима коры, 4 - склеренхимная обкладка, 5 -серповидно-изогнутый коллатеральный проводящий пучок)

Рис. 17 - Эпидермис черешка (1 - простой одноклеточный волосок, 2 устьице)

Рис. 18 - Поперечный срез стебля (1 - перидерма, 2 - вторичная кора, 3 - древесина, 4 -сердцевина).

Качественные реакции.

На линию старта пластинки Сорбфил ПТСХ-АФ-А капилляром наносят 0,02 мл подготовленного извлечения и по 0,02 мл 0,05% растворов СО гиперозида, витексина и хлорогеновой кислоты. Пластинку с нанесенными пробами высушивают на воздухе, затем помещают в предварительно насыщенную смесью растворителей камеру, и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 12 см, пластинку вынимают из камеры, сушат на воздухе в течение 5 минут. При просмотре хроматограммы в УФ-свете при длине волны 365 нм обнаруживаются 6 основных зон адсорбции, 3 из которых на уровне зон адсорбции стандартных образцов витексина, гиперозида и хлорогеновой кислоты. После проявления пластинки 3% спиртовым раствором алюминия хлорида происходит изменение или усиление окраски. Примечание:

1. Подготовка пластинок. Пластинки Сорбфил ПТСХ-АФ-А вырезают размером 14><5 см, наносят линию старта на расстоянии 1 см от края и перед использованием активируют в сушильном шкафу при 100-105 °С в течение 1 часа.

2. Приготовление системы растворителей для хроматографирования. Для проведения ТСХ-анализа рекомендуется система растворителей: этилацетат-

метанол-вода-муравьиная кислота (50:2:3:6). Система используется свежеприготовленная. Насыщение камеры для хроматографирования системой растворителей в течение 1 часа.

3. Приготовление раствора проявителя. 5,4 г алюминия хлорида 6-водного растворяют в 80 мл 95% этилового спирта в мерной колбе вместимостью 100 мл при нагревании на водяной бане, охлаждают, доводят этиловым спиртом до метки, перемешивают.

4. Приготовление растворов сравнения.

Растворы витексина и гиперозида: около 0,05 г (точная навеска) СО, предварительно высушенного при температуре 130-135°С (100-105°С для гиперозида) в течение 3 часов, растворяют в 85 мл 95% этилового спирта в мерной колбе вместимостью 100 мл при нагревании на водяной бане, охлаждают, доводят этиловым спиртом до метки и перемешивают. Раствор хлорогеновой кислоты: около 0,05 г (точная навеска) СО растворяют в 95% этиловом спирте в мерной колбе вместимостью 100 мл, доводят до метки.

Верх хроматотрафической пластинки

Витексин (Флуоресцирующая зона желто-зеленого цвета) Зона голубого цвета (вещество 3) Флуоресцирующая зона желтого цвета (вещество 2) Флуоресцирующая зона желто-зеленого цвета(витексин)

Гиперозид (Флуоресцирующая зона желтого цвета) Флуоресцирующая зона желтого цвета(гиперозид)

Хлорогеновая к-та (Флуоресцирующая зона голубого цвета) Флуоресцирующая зона голубого цвета (хлорогеновая к-та) Флуоресцирующая зона светло-желтого цвета (вещество 1)

Pací воры сравнения Испытуемый рас i вор

Рис. . Схема хроматограммы побегов боярышника в системе этилацетат-метанол-вода-муравьиная кислота (50:2:3:6) после окраски раствором

алюминия хлорида

Числовые показатели.

Цельное сырье. Содержание флавоноидов в пересчете на гиперозид не менее 1,0 %, ДЗП не менее 70%, влажность не более 10%, золы общей не более 10%, органическая примесь не более 1,0%, минеральная примесь не более 0,5%.

Измельченное сырье. Содержание флавоноидов в пересчете на гиперозид не менее 1,0 %, ДЗП не менее 70%, влажность не более 10%, золы общей не более 10%, органическая примесь не более 1,0%, минеральная примесь не более 0,5%, частиц, не проходящих сквозь сито с1=4,5 мм не более 10%, частиц, проходящих сквозь сито ё=0,5 мм не более 4%.

Микробиологическая чистота. Испытания проводят в соответствии со ст.32 ГФ XIV «Микробиологическая чистота». Побеги боярышника мягковатого соответствуют категории 4А. Количественное определение.

Аналитическую пробу побегов боярышника мягковатого измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм. Около 1 г (точная навеска) сырья помещают в колбу термостойкого стекла со шлифом вместимостью 200-250 мл, прибавляют 50 мл 80 % этилового спирта, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 минут. Затем полученное извлечение осторожно фильтруют через бумажный складчатый фильтр в мерную колбу на 100 мл, избегая попадания частиц сырья в воронку. К оставшемуся в колбе сырью прибавляют 50 мл 80 % этилового спирта, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 минут. Колбу охлаждают в течение 15 минут. Содержимое колбы фильтруют в мерную колбу с первой порцией извлечения через тот же бумажный фильтр.

Оставшееся в колбе сырье ополаскивают 20 мл 80 % этилового спирта и

фильтруют в мерную колбу. Полученное извлечение доводят в мерной колбе

до 100 мл (раствор А).

В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 3 мл раствора А,

прибавляют 3 мл 3% спиртового раствора хлорида алюминия и 0,1 мл 30%

уксусной кислоты и доводят раствор до метки 95% этиловым спиртом

(раствор В). Через 45 минут измеряют оптическую плотность раствора на

спектрофотометре при длине волны 410 нм в кювете толщиной слоя 1 см. В

качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 3 мл

раствора А, 0,1 мл 30 % раствора уксусной кислоты, доведенный 95 %

этиловым спиртом до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл.

Параллельно измеряют оптическую плотность комплекса раствора СО

гиперозида с раствором алюминия хлорида: к 1 мл 0,05 % раствора

гиперозида прибавляют 3 мл 3 % спиртового раствора алюминия хлорида,

0,1 мл 30 % раствора уксусной кислоты и доводят раствор этиловым спиртом

95 % до 25 мл в мерной колбе (раствор С).

Содержание суммы флавоноидов (X) в пересчете на гиперозид и

абсолютно сухое сырье (в %) вычисляют по формуле:

„ _ А-т0-100 -100 X — ---- , где

А0 -т-3 -(100-ИО

А - оптическая плотность анализируемого раствора (раствор В);

А0 - оптическая плотность комплекса СО гиперозида с алюминия хлоридом

(раствор С);

т - навеска сырья в граммах;

то- навеска СО гиперозида в граммах;

XV - потеря в массе сырья при высушивании, %.

Также допускается расчет содержания суммы флавоноидов (X) в пересчете на гиперозид и абсолютно сухое сырье (в %) с использованием удельного показателя поглощения гиперозида с алюминия хлоридом, равным 380, и вычисляют по формуле:

_ А-то-100 -100

л — ---г , где

А0 -т-3 -(100-ИО

А - оптическая плотность анализируемого раствора (раствор В);

380 - удельный показатель поглощения гиперозида с алюминия хлоридом;

т - навеска сырья в граммах;

XV - потеря в массе сырья при высушивании, %.

Примечание.

1. Приготовление раствора стандартного образца (СО) гиперозида: около 0,05 г (точная навеска) СО гиперозида, предварительно высушенного при температуре 130-135°С в течение 3 часов, растворяют в 85 мл 95 % этилового спирта в мерной колбе вместимостью 100 мл при нагревании на водяной бане, охлаждают, доводят этиловым спиртом до метки и перемешивают.

2. Приготовление 3% спиртового раствора алюминия хлорида: 5,4 г алюминия хлорида 6-водного растворяют в 80 мл 95 % этилового спирта в мерной колбе вместимостью 100 мл при нагревании на водяной бане, охлаждают, доводят этиловым спиртом до метки, перемешивают. Упаковка. В соответствии с требованиями ГФ XIV, т. I. Маркировка. В соответствии с требованиями ГФ XIV, т. 1. Транспортирование. В соответствии с требованиями ГФ XIV, т. 1. Хранение. В соответствии с ГФ XIV, т. 1.

Срок годности. 3 года.

Фармакологическая группа. Антиагрегантное, антиоксидантное средство.

Ректор ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава России

СОГЛАСОВАНО: Директор ЦФиМС ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России