Фармакогностическое изучение и биологическая активность боярышника приречного (Сrataegus rivularis Nutt.) тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Еникеева Кадрия Ильдаровна

• Еникеева Кадрия Ильдаровна
• кандидат наук
• 2023

Оглавление диссертации кандидат наук Еникеева Кадрия Ильдаровна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I АКТУАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ИССЛЕДОВАНИЙ В 15 ОБЛАСТИ ПРИМЕНЕНИЯ И АНАЛИЗА СЫРЬЯ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ РОДА БОЯРЫШНИК (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1 Ботаническая характеристика рода Crataegus L

1.2 Ареал обитания и культивирования боярышников

1.3 Данные о химическом составе боярышников

1.4 Стандартизация сырья боярышников в различных фармакопеях

1.5 Современные исследования биологических и фармакологических 35 свойств растений рода Crataegus L.

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ I 41 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА II ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Объекты исследования

2.2 Методы исследования

2.2.1 Определение подлинности сырья

2.2.2 Методы определения доброкачественности

2.2.3 Методы фитохимического анализа

2.2.3.1 Методы качественного анализа биологически активных 46 веществ

2.2.3.2 Методы количественного анализа биологически активных 47 веществ

2.2.4 Физико-химические методы исследования

2.2.5 Методы исследования биологической активности

2.2.6 Методы статистической обработки результатов исследований

ГЛАВА III МОРФОЛОГО-АНАТОМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ БОЯРЫШНИКА ПРИРЕЧНОГО (CRATAEGUS RIVULARIS

NUTT.)

3.1 Морфологическое исследование побегов, цветков и плодов 62 боярышника приречного

3.2 Анатомическое исследование побегов, цветков и плодов 63 боярышника приречного

3.3 Анатомическое исследование измельченных плодов и побегов 73 боярышника приречного

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ III

ГЛАВА IV ФИТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПОБЕГОВ, ЦВЕТКОВ И ПЛОДОВ БОЯРЫШНИКА ПРИРЕЧНОГО

(сCRATAEGUS RIVULARIS NUTT.)

4.1 Обоснование выбора объекта исследования

4.2 Исследование химического состава побегов боярышника приречного

4.2.1 Качественные реакции

4.2.2 Исследование химического состава побегов боярышника приречного методом тонкослойной хроматографии

4.2.3 Исследование химического состава липофильной фракции побегов боярышника приречного методом ГХ-МС

4.3 Исследование химического состава цветков боярышника приречного

4.3.1 Исследование химического состава цветков боярышника приречного методом тонкослойной хроматографии

4.3.2 Исследование химического состава липофильной фракции цветков боярышника приречного методом ГХ-МС

4.4 Исследование химического состава плодов боярышника приречного

76

82

83

87

87

88

100

101

4.4.1 Исследование химического состава плодов боярышника приречного методом тонкослойной хроматографии

4.4.2 Исследование химического состава липофильной фракции плодов боярышника приречного методом ГХ-МС

4.4.3 Исследование химического состава плодов боярышника приречного методом ВЭЖХ

4.5 Количественное определение биологически активных веществ

98

побегов, цветков и плодов боярышника приречного

4.5.1 Сравнительный анализ количественного содержания основных биологически активных веществ в побегах, цветках и плодах боярышника приречного

4.5.2 Определение количественного содержания других обнаруженных групп БАВ ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ IV

ГЛАВА V ИССЛЕДОВАНИЯ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ ПОБЕГОВ И ПЛОДОВ БОЯРЫШНИКА ПРИРЕЧНОГО

(CRATAEGUS RIVULARIS NUTT.)

5.1 Разработка методики качественного анализа побегов боярышника приречного

5.2 Разработка методики количественного определения флавоноидов в побегах боярышника приречного

5.2.1 Оптимизация методики определения

5.2.2 Подбор факторов экстракции

5.2.3 Валидация методики количественного определения

5.3 Разработка методики количественного определения сапонинов в побегах боярышника приречного

5.3.1 Подбор факторов экстракции

5.3.2 Валидация методики количественного определения

5.4 Разработка методики количественного определения антоцианов в 128 плодах боярышника приречного

103

103

105

118

127

5.4.1 Подбор факторов экстракции

5.4.2 Валидация методики количественного определения 137 5.5 Определение показателей качества плодов боярышника

приречного

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ V

ГЛАВА VI ИССЛЕДОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ 142 ПЛОДОВ И ПОБЕГОВ БОЯРЫШНИКА ПРИРЕЧНОГО

(CRATAEGUS RIVULARIS NUTT.)

6.1 Определение острой токсичности настоя побегов и отвара плодов боярышника приречного

6.2 Определение антиагрегационной активности побегов и плодов боярышника приречного

6.3 Определение антикоагуляционной активности побегов и плодов боярышника приречного

6.4 Определение антиоксидантных свойств побегов и плодов боярышника приречного

6.5 Определение гипотензивных и кардиотропных свойств побегов и 152 плодов боярышника приречного 148 ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ VI 153 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 154 ОБЩИЕ ВЫВОДЫ 154 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 157 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 158 ПРИЛОЖЕНИЯ

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Фармакогностическое изучение и биологическая активность боярышника приречного (Сrataegus rivularis Nutt.)»

Актуальность темы исследования

Перед современной фармацевтической промышленностью стоит ряд задач, одной из которой является расширение ассортимента используемых лекарственных средств. Стоит отметить все растущую потребность в препаратах, влияющих на сердечно-сосудистую систему и систему гемостаза, так как терапия заболеваний органов кровообращения на сегодняшний день является ключевой задачей мирового здравоохранения. Влияя на ключевые звенья системы гемостаза и гемореологию вкупе с антиишемическими, антиоксидантными эффектами, возможен комплексный подход в профилактике и своевременной фармакотерапии патологий сердечно-сосудистой системы. Среди множества растительных препаратов наиболее известными источниками являются растения рода боярышник, при этом направленный поиск новых, интродуцированных видов Crataegus L. позволит пополнить имеющуюся сырьевую базу боярышников. В Государственную Фармакопею включено сырье 12 официнальных видов боярышников, однако в Российской Федерации не все эти виды представлены в достаточном количестве, и не имеют необходимую сырьевую базу. Стоит отметить, что в Российской Федерации не предусмотрено использование листьев боярышника, тогда как в США и странах Европейского Союза они успешно применяются в медицинской практике. За рубежом изучается возможность применения в медицине побегов боярышника, а также лекарственных препаратов на их основе [64, 76]. На территории Российской Федерации лекарственное растительное сырье боярышника, заготавливаемое и разрешенное к медицинскому применению - это плоды и цветки [16].

В России интродуцируется более 90, особенно североамериканских видов [29]. Расширяя область изучения других видов рода Crataegus L. с известными фармакологическими эффектами и доказанной эффективностью, можно

обнаружить виды, перспективные для дальнейшего внедрения в медицинскую практику.

Таким образом, фармакогностическое исследование интродуцированных видов растений рода Crataegus L. - актуальная задача фармации.

Степень разработанности проблемы

Фитохимические исследования и биологические свойства растений рода боярышник Crataegus L. широко освещены в ряде российских и зарубежных публикаций. В числе российских ученых, работающих над разработкой и стандартизацией методик, исследованием биологических свойств сырья и препаратов на основе боярышника, стоит отметить Киселеву Т.Л., Самылину И.А., Куркина В.А., Саканян Е.И., Хасанову С.Р., Гусейнова Д.Я., Хаятуллу Н.М., Евдокимову О.В. и др.

Однако, исследование отечественных и зарубежных литературных данных показало, что ряд интродуцированных североамериканских видов боярышника, к которым относится боярышник приречный Crataegus rivularis Nutt. не имеет достаточной исследовательской базы, данные носят фрагментарный характер. Отсутствуют морфологические, фитохимические исследования и данные биологических свойств боярышника приречного. Из этого следует, что нехватка релевантных научных данных по теме исследования, значимость исследований в вопросах разработки современных лекарственных средств определили тему и цель данного диссертационного исследования.

Цель и задачи исследования

Целью настоящей исследовательской работы являлось фармакогностическое изучение боярышника приречного, его биологических свойств, как нового вида лекарственного растительного сырья.

Для реализации поставленной цели предстояло решить следующие задачи:

1. Провести морфолого-анатомическое исследование побегов, плодов и цветков боярышника приречного, определить диагностически-значимые признаки побегов и плодов.

2. Исследовать химический состав основных групп биологически активных веществ побегов, плодов и цветков боярышника приречного, определить их количественное содержание.

3. Установить соответствие плодов и цветков боярышника приречного требованиям частных фармакопейных статей «Боярышника цветки», «Боярышника плоды» ГФ XIV издания.

4. Разработать методы стандартизации побегов и плодов боярышника приречного.

5. Исследовать биологические свойства сырья боярышника приречного.

6. Установить критерии подлинности и показатели качества побегов боярышника приречного и составить на их основе проект фармакопейной статьи «Боярышника приречного побеги».

Научная новизна

Исследованы морфолого-анатомические особенности побегов, плодов и цветков боярышника приречного. При проведении микроскопического анализа побегов, плодов и цветков боярышника приречного впервые выявлены анатомо-диагностические признаки. Были исследованы диагностически-значимые признаки частей растения, на основании которых разработаны показатели, необходимые для стандартизации растительного материала боярышника приречного.

С использованием физико-химических методов анализа (ВЭЖХ, газовая хроматография с масс-спектрометрическим детектором, спектрофотометрия в УФ и видимой области), выявлен состав основных биологически активных веществ побегов, плодов и цветков боярышника приречного. В побегах обнаружено 16 химических соединений, среди которых выявлены соединения фенольной природы, сапонины, ароматические соединения. В плодах боярышника приречного было выявлено присутствие 21 соединения, изучен видовой состав антоцианового

комплекса и липофильного экстракта плодов. В цветках Crataegus rivularis впервые было выявлено присутствие 13 летучих соединений: компонентов эфирного масла - эфиров (2-(4-метил-3-циклогексен-1-ил)-2-пропанол), монотерпеновых углеводородов (а-терпинолен), алифатических монотерпеновых спиртов (гераниол), ароматических спиртов (тимол), а также - целидониола, фитостеринов (5-ситостерол), тритерпеновых сапонинов (а- амирин и Р-амирин).

Впервые побеги, плоды боярышника приречного исследованы на количественное содержание флавоноидов, антоцианов, органических кислот, суммы дубильных веществ, сапонинов, каротиноидов.

Установлены показатели качества - сроки годности сырья боярышника приречного. Впервые была исследована биологическая активность плодов и побегов боярышника приречного in vitro и in vivo. Установлена антикоагулянтная, антиагрегантная, кардиотропная активность.

Теоретическая и практическая значимость работы

Проведенные исследования биологических характеристик, а именно антиоксидантные свойства, способность к проявлению антикоагуляционной активности, антиагрегационные, гипотензивные, коронарорасширяющие и органопротективные свойства подтвердили целесообразность (in vivo) фармакологических исследований сырья на основе боярышника приречного как средства для использования с профилактической и лечебной целью при ряде патологий сердечно-сосудистой системы. Выполнены исследования по опреледению острой токсичности, по результатам которых побеги и плоды боярышника приречного являются малотоскичными.

Усовершенствованные нами методики качественного анализа и методы определения количественного содержания суммы флавоноидов и антоцианов спектрофотометрическим методом могут послужить заделом для разработки и валидации методик в рамках научно-исследовательских работ.

Анатомические признаки плодов боярышника приречного могут найти применение в рамках стандартизации нового вида лекарственного растительного сырья.

Внедрение в практику

Ключевые результаты настоящей диссертационной работы апробированы и внедрены в учебный процесс кафедры фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава России.

Методология и методы исследований

Методология работы основана на прицельном поиске и анализе современной литературы для отбора наиболее многообещающих растительных объектов, на основе особенностей их культивирования, степени изученности их токсичности, фитохимических, биологических свойств, а также возможности использования в экспериментальной и прикладной медицине; целенаправленном исследовании химического состава и биологических свойств плодов, побегов и цветков боярышника приречного; разработке методик стандартизации и технической документации на лекарственное растительное сырье; определение выводов, раскрывающих теоретическую и практическую значимость материалов данной диссертационной работы.

Анатомические исследования проводились с использованием микроскопов «Минимед-501» и «Микровизор» с цифровой камерой. Основными методами фитохимических исследований являлись высокоэффективная жидкостная хроматография, хроматография в тонком слое сорбента, газовая хроматография с масс-детектированием, спектрофотометрические методы анализа, титриметрия, гравиметрия. Изучение биологической активности проводили методом хемилюминесценции, методом Борна и клоттинговыми тестами, гипотензивные и кардиотропные свойства настоя побегов и отвара плодов боярышника приречного были изучены на модели изолированного миокарда по

методу Лангендорфа по открытому контуру с последующей окраской гематоксилином и эозином.

Основные положения, выносимые на защиту

• Результаты морфологического и анатомо-диагностического исследования побегов, цветков и плодов боярышника приречного.

• Результаты фитохимического изучения побегов, цветков и плодов боярышника приречного.

• Методики качественного и количественного анализа побегов, цветков и плодов боярышника приречного, показатели качества исследуемого сырья.

• Результаты биологических свойств побегов и плодов боярышника приречного.

Степень достоверности

Степень достоверности исследований, проводимых в рамках настоящей диссертационной работы, формируется на основе размера выборки анализируемых образцов. Для каждого из методов исследования было применимо соответствующее количество образцов, кратность повторения эксперимента и статистические методы анализа. Для обработки данных использовалось программное обеспечение «Statistica 10,0». По критерию Шапиро-Уилка проводили анализ на нормальность распределения, критерий Краскела-Уоллиса был выбран для проведения дисперсионного анализа. Статистически значимыми считались значения при доверительной вероятности 0,05. В пределах выборки степень достоверности различий осуществляли по по ^критерию Стьюдента и Ц-критерию Манна - Уитни. Изложенные нами выводы достаточно аргументированы и исходят из многочисленных результатов анализируемых выборок, а также фармакогностических, химических и фармакологических исследований.

Апробация результатов

Результаты, полученные в рамках настоящей диссертационной работы, были представлены на 83-й Всероссийской научной конференции студентов и молодых учёных «Вопросы теоретической и практической медицины» (Уфа, апрель 2018 г.), XIII Международной конференции молодых ученых и студентов «Медицинская наука: новые возможности» (г. Душанбе, Таджикистан, 2018 г.), Всероссийской научно-практической студенческой конференции с международным участием «Медицинская весна - 2018 (г. Москва, апрель 2018 г.), 84-й Всероссийской научной конференции студентов и молодых ученых «Вопросы теоретической и практической медицины (г. Уфа, апрель 2019 г.), Международном Фармацевтическом Конгрессе Pharmacy Updates 2019 (Иран, г.Тегеран, 2019 г.), 1-м Китайско-Российском Международном фармацевтическом форуме международного сотрудничества по сердечно-сосудистым заболеваниям в холодных регионах (Китай, г.Харбин, 2020 г.), 3-м Ежегодном Фармацевтическом Конгрессе IPharms, на базе Исследовательского центра фармацевтических наук Университета медицинских наук имени Шахида Бехешти (SBMU) (Иран,г.Тегеран, февраль, 2021 г.), 86-й Всероссийской научной конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Вопросы теоретической и практической медицины», секция «Фармация» (г.Уфа, ноябрь 2021 г.), Симпозиуме «Один пояс, один путь», Фуданьский университет, Фармацевтическая школа (Китай, г.Пекин, ноябрь 2021 г.), 5-м Международном Фармацевтическом Конгрессе Pharmacy Updates и 4-м Ежегодном Фармацевтическом Конгрессе IPharms, на базе Исследовательского центра фармацевтических наук Университета медицинских наук имени Шахида Бехешти (SBMU) (Иран,г.Тегеран, февраль, 2022 г.).

Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научных исследований ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава России по проблеме «Изыскание и изучение новых лекарственных средств».

Публикации

Результаты диссертационного исследования отражены в 8 научных работах, из них 3 статьи в отечественных изданиях, включенных в Перечень ВАК Министерства образования и науки РФ, а также 1 статья в журнале, реферируемом в наукометрических базах данных Web of Science, имеется положительное решение о выдаче патента № 2022100288, 11.01.2022.

Личный вклад автора

Личный вклад автора состоит в изучении и анализе актуальной литературы по теме настоящего диссертационного исследования. Соискатель самостоятельно определил ключевые задачи исследования, участвовал в планировании и выполнении экспериментальных работ. Автор самостоятельно проводил весь комплекс работ по сбору, заготовке растительного сырья; морфологическому описанию, фитохимическим исследованиям, пробоподготовке и дальнейшим качественным и количественным методам анализа сырья. Соискатель проводил работы по разработке методик стандартизации и их валидации. Исследования in vivo и in vitro проводились соискателем совместно с сотрудниками лаборатории фармакологии ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава России.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности

Диссертация соответствует паспорту специальности 3.4.2 -фармацевтическая химия, фармакогнозия, 3 пункту «Разработка новых, совершенствование, унификация и валидация существующих методов контроля качества лекарственных средств на этапах их разработки, производства, потребления»; 6 пункту «Изучение химического состава лекарственного растительного сырья, установление строения, идентификация природных соединений, разработка методов выделения, стандартизации и контроля качества лекарственного растительного сырья и лекарственных форм на его основе».

Методология и методы исследования

Работа представляет итог исследований, выполненный автором в творческом сотрудничестве с кафедрой фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии, кафедрой фармакологии с курсом клинической фармакологии и лабораторией ЦНИЛ ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава России.

Объем и структура диссертации Диссертационная работа изложена на 183 страницах печатного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, 4 экспериментальных глав, общих выводов, списка литературы и приложений. В работе содержатся 50 таблиц, 87 рисунков. Список цитируемой литературы включает 118 библиографических источников, из которых 67 на иностранных языках.

ГЛАВА I АКТУАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ИССЛЕДОВАНИЙ В ОБЛАСТИ ПРИМЕНЕНИЯ И АНАЛИЗА СЫРЬЯ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ РОДА БОЯРЫШНИК (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1 Ботаническая характеристика рода Crataegus L.

Боярышники - представители семейства Розоцветные (Rosaceae). Род боярышник (Crataegus L.) представлен кустарниками 5-6 м высотой, или невысокими деревьями 10-12 м высотой. Ветки прямые, реже зигзагообразно изогнуты. Опушение и цвет молодых побегов меняется в течение первых нескольких лет, нередко уменьшаясь к осени. Кора коричневая, либо серая, зачастую наблюдается отслаивание коры от стебля небольшими чешуйками. Подавляющее большинство видов имеет колючки, представленные двумя типами: боковыми безлистными колючками и конечными олиственными колючками [47]. Колючки длиной от 1 до 6-9 см. Листья отличаются полиморфизмом: расположенные спирально, широко- или обратнояйцевидные, округлые либо узкие, могут быть цельными с невыраженными лопастями, глубоко рассеченными и раздельными. Основание листовых пластинок клиновидное, край пластинки — пильчатый, крупнозубчатый, реже-цельнокрайний. У большинства видов прилистники опадают рано. Соцветие боярышника - ботриоидное щитковидное, реже цветки одиночные, расположены на коротких боковых побегах. Цветки небольшие, актиноморфные, белые, реже розоватые, иногда встречаются красные, около 1,5-5 см в диаметре, многочисленные, в соцветиии расположены в несколько кругов. Чашелистиков 5, они могут быть прямыми, распростертыми либо отогнутыми, у некоторых видов они отпадают. Тычинки расположены спирально, количество их варьируется от 5 до 20, реже 25. Пыльники белые, либо окрашены желтым, розовым или пурпурным цветом. Плодолистиков от 1 до 5, они, срастаясь с другими частями цветка образуют гипантий, и образуют нижнюю завязь. Цветки боярышника обладают специфическим запахом. Период цветения растения - май,

начало лета. Плод - костянковидное яблоко, шаровидной, грушевидной, либо яйцевидной формы, размеры варьируются от 6 мм до 40 мм в диаметре. Цвет плодов - от желтовато-красного до иссиня-черного, с сочной крахмалистой мякотью желтого, зеленого, розового и красного цветов. В плодах содержатся от 1 до 5 бороздчатых, ребристых или ямчатых косточек, с мучнистой или сочной мякотью [17, 19]. Плоды созревают в конце августа-сентябре, некоторые виды плодоносят к концу осени.

Боярышники возможно размножать как семенами, так и прививкой, зелеными отпрысками и отводками. Для улучшения показателей всхожести при посеве боярышников семенами используют годовую стратификацию. Молодые сеянцы боярышников в течение первых 2-2,5 лет растут в медленном темпе, годовой прирост при этом не более 7-20 см, затем наблюдается увеличение темпов роста, до 50-60 см в год. По достижении 6-8-летнего возраста рост боярышников замедляется. Исходя из темпов прироста боярышников, возможно выделить низкие серии (Tenuifoliae, Douglasianae Brainerdianae, Molles, Rotundifoliae, и др.), средневысокие (Macracanthae, Sanguineae Coccineae, Punctatae, и др.) и высокие (Oxyacanthae, Crus-gallianae, Nigrae и др.). Цветут и плодоносят боярышники в возрасте 10-15 лет, имеют хорошо развитую, глубокую корневую систему. Длительность жизни боярышников может достигать 300-400 лет. В культуре боярышники не требуют особенного ухода, неприхотливы, предпочитают хорошо увлажнённые почвы с высоким содержанием извести [1]. Североамериканские виды боярышника также можно размножать путем посева семян, однако всходы появляются лишь на второй-третий год. При использовании вегетативного размножения корневыми отпрысками, черенкованием и прививкой приживаемость ожидается на порядок выше. Североамериканские виды по сравнению с европейскими и азиатскими видами меньше повреждаются вредителями, более жизнеспособны и зимостойки, что оправдывает их интродукцию на территории Российской Федерации.

Вид Crataegus rivularis Nutt. входит в секцию Douglasii подрода Americanae, род Crataegus трибы Pyrea подсемейства Spiraeoideae семейства Rosaceae порядка Rosales [1,17, 27, 29].

В вопросах систематики наиболее целесообразным является деление рода Crataegus на три подрода - Crataegus (европейские), Sanguineae (азиатские) и Americanae (североамериканские). Ключевые отличия подродов затрагивают не только морфологические аспекты, но и молекулярно-генетические [47].

Североамериканские и европейские виды подрода, за некоторыми исключениями, имеют характерные черты, значительно выделяющиеся и в начале вегетационного периода. Стоит отметить крупные (до 10-15 см) безлистные колючки растений подрода Americanae с мутовчастым ветвлением и крупными цельными листьями, либо с лопастными, с неравномерными жилками. Прилистники растения опадают рано. Побеги ветвятся равномерно у ряда европейских видов подрода Crataegus, колючки мелкие, обычно расположенные в пазухах, листа либо на конце побега; чаще всего встречаются укороченные побеги. Листья небольшого размера, листовая пластинка раздельная, либо глубоко рассеченная. У видов подрода Crataegus наблюдаются хорошо сфомированные прилистники, неопадающие до осени.

В противовес вышеназванным видам, азиатские виды можно охарактеризовать как переходную группу по причине того, что подрод Sanguineae представлен видами как с безлистными колючками, так и с длинными и короткими. Побеги ветвятся равномерно, листья крупные, листовая пластинка лопастная, либо раздельная, с крупными прилистниками, остающимися до осени [47].

1.2 Ареал обитания и культивирования боярышников

Род Crataegus L. насчитывает до 1500 описанных видов и разновидностей. Ареал обитания растений рода Crataegus L. включает чаще умеренные, реже -субтропические области Северного полушария (рисунок 1) [29].

Рисунок 1 - Ареал распространения растений рода Crataegus L.

Исторической родиной боярышников является Северная Америка, где наблюдается наибольшее их видовое разнообразие. Также боярышники встречаются в Восточном полушарии (Юго-Восточная Европа, Кавказ, территория Турции) и на Дальнем Востоке. Учитывая разнообразие видов и разновидностей боярышников, стоит отметить неоднородную распространенность отдельных видов в дикой флоре. Так, например, боярышник однопестичный наиболее распространен в Европе, Северной Америке, реже встречается в Австралии и Новой Зеландии, а боярышник германский в диком виде можно наблюдать лишь на территории Германии. В диком виде боярышники обычно растут одиночно, либо небольшими группами. Во флоре Российской Федерации произрастает порядка 55 видов боярышников, чаще всего встречающихся в широколиственных и смешанных лесах, лесостепях и степях [27]. Боярышники, как светолюбивые растения, распространены на открытых местностях, редких лесах, полянах, и лишь С. rhipidophylla и С. laevigata предпочитают тенистные местности [47]. Боярышники можно встретить и в горных районах, также в разнообразных условиях рельефа, и на таких почвах, как известняки, песчаники, кварциты [18].

На территории Западной Европы интродукция боярышников началась в период колонизации Северной Америки, а на территории СНГ распространение боярышников началось с Прибалтики в 60-е года XIX века. В СССР с 30-х гг. XX века наступило активное внедрение боярышников в культуру. Таким образом, было введено в культуру около 90 отечественных и интродуцированных видов боярышников [43].

1.3 Данные о химическом составе различных видов боярышников

Боярышники имеют в своем составе широкий спектр биологически активных веществ, представляющих непосредственный интерес.

Наиболее характерными для рода Crataegus L. являются вещества флавоноидной природы. В побегах, плодах и листьях ряда боярышников обнаружены вещества флавоноидной природы, такие как флавоны (лютеолин, глюколютеолин, биокверцетин, апигенин, кетогексофуранозид апигенина, ториентин, витексин др.) и флавонолы (кверцетин, гиперозид, кемпферол, кверцитрин, рутин, а также различные гликозиды соответствующих агликонов) [37, 38].

Также в листьях, цветках и плодах боярышников содержатся гидроксикоричные кислоты (кофейная и хлорогеновая), органические кислоты (яблочная, лимонная, виннокаменная, аскорбиновая и др.), дубильные вещества, являющиеся димерами катехина и L-эпикатехина (процианидины). Стоит отметить также присутствие тритерпеновых сапонинов, представленных, преимущественно урсоловой, олеаноловой и кратегусовой кислотами. Плоды боярышников накапливают полисахариды, чаще пектиновые вещества, жирное масло (миристиновая, пальмитиновая, олеиновая кислоты). Также в плодах обнаружены сорбит, макроэлементы (железо, калий, кальций, магний), ряд микроэлементов, каротиноиды, ряд аминов (холин, ацетилхолин, триметиламин, фенилэтиламин, тирамин), производные пурина (аденозин, аденин, гуанин, кофейная кислота,

амигдалин). В цветках боярышников было выявлено присутствие эфирных масел [35, 38], алкалоидов и жирных кислот [3, 20, 38].

Сразу несколько групп фенольных соединений, включая процианидины, флаванолы, флавонолы, С-гликозилфлавоны, фенольные кислоты, антоцианы и лигнаны описаны в различных частях боярышника, при этом в плодах олигомерные процианидины и их гликозиды являются основными фенольными соединениями, тогда как флавонолы, гликозиды флавонолов и С-гликозилфлавоны преобладают в листьях [92].

Процианидины боярышника состоят в основном из (-) - эпикатехина в качестве флаван-3-ола. Лишь в нескольких статьях упоминается наличие катехина у некоторых видов боярышника либо в форме мономера или в виде составной части в олигомерных и полимерных процианидинах [85]. Выявленные до сих пор процианидины относятся исключительно к B-типу (флаван-3-ол, связанный через одиночные межфлаванольные связи C-4/C-8 или C-4/C-6) [88]. Было изучено более тридцати олигомерных процианидинов, обнаруженных в плодах и листьях видов рода Crataegus. Разные части растений и разные виды содержат те же соединения, что и основные процианидины, тогда как пропорции и содержание отдельных соединений значительно различаются [85, 91]. На рисунке 2 показаны общие структуры основных процианидинов в различных частях растения рода боярышник.

п£ ироцианидин CI

процианидин В5 1

Рисунок 2 - Структуры процианидинов боярышников.

Процианидины B2 и B5 были идентифицированы как основные димеры, а процианидин C1 является основным тримером плодов C. pinnatifida var. Стоит отметить, что были идентифицированы агликоны и гликозиды олигомерных процианидинов со степенью полимеризации 2-6 [91, 100, 101, 102]. Похожие профили процианидиновых агликонов обнаружены в плодах Crataegus scabrifolia, C. pinnatifida и Crataegus brettschneideri, тогда как содержание процианидиновых гликозидов варьировало среди видов [91, 100, 101, 102]. Таким образом,

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Еникеева Кадрия Ильдаровна, 2023 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Атлас лекарственных растений и примесей к ним / под ред. О. Л. Блиновой. -Москва: ГОЭТАР-Медиа, 2018. - 87 с.

2. Беленький, М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта / М.Л. Беленький. - 2-е изд., перераб. и доп. - Ленинград: Медгиз, 1963. - 146 с.

3. Буданцев, А.Л. Дикорастущие полезные растения России / А.Л. Буданцев, Е.Е. Лесиовская. - СПб.: СПХФА, 2001. - 663 с.

4. Вафин, Р.В. Боярышники. Интродукция и биологические особенности / Р.В. Вафин, В.П. Путенихин. - М., 2003. - 240 с.

5. Влияние некоторых видов лекарственного растительного сырья на систему гемостаза in vitro / Н.В. Кудашкина, Э.Х. Галиахметова, Л.И. Баширова [и др.] // Традиционная медицина. - 2021. - № 1 (64). - С. 38-42.

6. Георгиевский, В.П. Биологически активные вещества лекарственных растений / В.П. Георгиевский, П.Ф. Комиссаренко, С.Е. Дмитрук. - Новосибирск: Наука, Сиб. отд-ние, 1990. - 333 с.

7. Гончаров, Н.Ф. Гидроксикоричные кислоты Crataegus chlorocarpa Lenne et C. Koch., Crataegus rotundofolia Medic / Н.Ф. Гончаров // Кубанский научный медицинский вестник. - 2009. - № 3. - С. 42-43.

8. Гончаров, Н.Ф. Изучение эфирных масел цветков североамериканских видов боярышников / Н.Ф. Гончаров // Кубанский научный медицинский вестник. -2008. - № 5. - С. 52-55.

9. Гончаров, Н.Ф. Сравнительное изучение гидроксикоричных кислот и флавоноидных соединений плодов некоторых видов Crataegus L / Н.Ф. Гончаров // Кубанский научный медицинский вестник. - 2008. - № 5. - С. 4952.

10.Гончаров, Н.Ф. Фенольные соединения североамериканских видов рода боярышник / Н.Ф. Гончаров, А.М. Ковалева, А.Н. Комиссаренко // Российский

медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова . - 2008. - № 3.

- С. 150-154.

11.Государственная фармакопея Республики Беларусь: Разработана на основе Европейской фармакопеи : в 2 т. / Министерство здравоохранения Республики Беларусь, Республиканское унитарное предприятие «Центр экспертиз и испытаний в здравоохранении» ; под общ. ред. С.И. Марченко. - Молодечно: «Победа», 2016. - Т.2. Контроль качества субстанций для фармацевтического использования и лекарственного растительного сырья. - 1368 с.

12.Государственная фармакопея Республики Казахстан : в 3 т. / Министерство здравоохранения Республики Казахстан. - 1-ое изд. - Астана, 2009. - Т. 2. - 803 с.

13.Государственная Фармакопея Российской Федерации : в 4 т. [Электронный ресурс] / Министерство здравоохранения Российской Федерации. - 14-ое изд.

- Москва, 2018. - Т. 1. - 1814 с. - URL: https: //femb.ru/record/pharmacopea 14 (дата обращения 07.12.22).

14.Государственная Фармакопея Российской Федерации : в 4 т. [Электронный ресурс] / Министерство здравоохранения Российской Федерации. - 14-ое изд.

- Москва, 2018. - Т. 2. - С. 1815-3262. - URL: https://femb.ru/record/pharmacopea 14 (дата обращения 07.12.22).

15.Государственная Фармакопея Российской Федерации : в 4 т. [Электронный ресурс] / Министерство здравоохранения Российской Федерации. - 14-ое изд.

- Москва, 2018. - Т. 4. - С. 5188-7019. - URL: https://femb.ru/record/pharmacopea 14 (дата обращения 07.12.22).

16.Государственная фармакопея СССР : Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / Министерство здравоохранения СССР. - 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1989. - 400 с.

17.Губанов, И.А. Дикорастущие полезные растения СССР / И.А. Губанов, И.Л. Крылова, В.Л. Тихонова. - М. : Мысль, 1976. - 360 с.

18.Губергриц, А.Я. Лекарственные растения Донбасса / А.Я. Губергриц, Н.И. Соломченко. - 5-е изд., перераб. и доп. - Донецк, 1990. - 280 с.

19. Дендрология Узбекистана / под ред. Ф.Н. Русанова. - Ташкент: Наука, 1965. -Т. 1 : Проблемы современной ботаники. - 434 с.

20.Зинченко, Л.А. Изучение промышленных отходов фармацевтического производства как дополнительных источников биологически активных соединений: (на примере шрота плодов боярышника и шрота листьев мяты): автореф. дис. ... канд. фарм. наук: 15.00.02 / Зинченко Лариса Александровна. -Пятигорск, 2007. - 23 с.

21. Ивановская, А.М. Количественный анализ лекарственных средств органической природы: Пособие для студентов фармацевтического факультета / А.М. Ивановская, А.В. Воронин, А.Н. Серякова. - Самара, 2018. - 88 с.

22.Изучение состава липофильных соединений представителей рода боярышник / Н.Н. Гончаров, И.В. Михайлов, Н.Ф. Гончаров, Е.В. Терешонок // Фундаментальные науки. - 2014. - № 11. - С. 357-361.

23. Изучение черёмухи виргинской-Padus virginam как перспективного источника биологически активных полифенолов / Д.И. Писарев, О.О. Новиков, М.Д. Безменова [и др.] // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Серия: Естественные науки. - 2010. - № 21 (92). - С. 118-122.

24. Исследование метаболомного профиля побегов боярышника приречного Crataegus rivularis Nutt. и боярышника крупноколючкового Crataegus macracantha L. / К.И. Еникеева, Т.В. Шубина, С.Р. Хасанова, Н.В. Кудашкина // Традиционная медицина. - 2022. - № 2 (68). - С. 31-36.

25.Кудашкина, Н.В. Изучение химического состава плодов Crataegus rivularis Nutt / Н.В. Кудашкина, С.Р.Хасанова, К.И. Еникеева // Медицинский вестник Башкортостана. - 2022. - Т. 17, № 1 (97). - С. 42-45.

26.Кудашкина, Н.В. Фитохимический анализ по фармакогнозии для студентов / Н.В. Кудашкина, С.Р. Хасанова, С.А. Мещерякова. - Уфа: ГОУ ВПО БГМУ РОСЗДРАВа, 2007. - 281 с.

27.Маевский, П.Ф. Флора средней полосы европейской части России / П.Ф. Маевский. - 10-е изд. - М.: Товарищество научных изданий КМК, 2006. - 600 с.

28.Патент № 2144674 C1 Российская Федерация, МПК G01N 33/52, G01N 33/68. Способ определения антиоксидантной активности супероксиддисмутазы и химических соединений / Сирота Т.В.; заявители и патентообладатели: Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН, Сирота Т.В. -№ 99103192/14: заявл. 24.02.1999: опубл. 20.01.2000.

29.Полетико, О.М. Боярышник — Crataegus L. // Деревья и кустарники СССР. Дикорастущие, культивируемые и перспективные для интродукции: в 7-ми томах / под ред. С.Я. Соколова, Б.К. Шишкина. - Москва; Ленинград: Изд-во АН СССР, 1954. - Т. 3: Покрытосеменные. Семейства троходендроновые -розоцветные. - С. 559-872.

30. Полирегионарная агрегатометрия крови пациентов с острым тромбозом, как потенциальная модель доклинических исследований новых корректоров системы гемостаза ex vivo / А.Л. Ураков, А.В. Самородов, Ф.Х. Камилов, Ф.А. Халиуллин // Регионарное кровообращение и микроциркуляция. - 2017. - Т.16, № 1 (61). - С.65-71.

31. Потанина, О.Г. Оценка доброкачественности лекарственного растительного сырья с учетом диагностически значимых признаков / О.Г.Потанина, И.А.Самылина // Фармация. - 2003. - № 4. - С. 12-14.

32.Пояркова, А.И. Род 733. Боярышник — Crataegus L. // Флора СССР: в 30 т. / гл. ред. В.Л. Комаров. - М. ; Л. : Изд-во АН СССР, 1989. - Т. 9. - С. 416-468.

33.Практикум по фармакогнозии для студ. вузов / В. Н. Ковалев [и др.]. - Харьков: Изд-во НФаУ; Золотые страницы, 2004. - 512 с.

34.Природные флавоноиды / Д.Ю. Корулькин, Ж.А. Абилов, Р.А. Музычкина, Г.А. Толстиков. - Новосибирск: Тео, 2007. - 232 с.

35.Растительные ресурсы России: Дикорастущие цветковые растения, их компонентный состав и биологическая активность / под ред. А.Л. Буданцева. -СПб.; М.: Товарищество научных изданий КМК, 2009. - Т.2. - 513 с.

36.Растительные ресурсы СССР: цветковые растения, их химический состав, использование. Семейства Hydrangeaceae-Haloragaceae / отв. ред. П.Д. Соколов. - Ленинград: Наука, 1987. - 326 с.

37.Родионова, Т.В. Сравнительная количественная оценка содержания флавоноидов в растительном сырье боярышника кроваво-красного / Т.В. Родионова, О.М. Хишова // Вестник фармации. - 2008. - № 1 (39). - С. 15-18.

38.Родионова, Т.В. Стандартизация листьев боярышника / Т.В. Родионова, О.М. Хишова // Вестник фармации. - 2008. - № 2 (40). - С.70-78.

39.Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая. - М.: Гриф и К, 2012. - 944 с.

40. Самородов, А.В. Поиск новых азотсодержащих гетероциклических соединений, влияющих на систему гемостаза: дис. ... канд. мед. наук: 03.01.04, 14.03.06 / Самородов Александр Владимирович. - Уфа, 2012. - 143 с.

41.Самылина, И.А. Изучение химического состава нефармакопейных видов / И.А. Самылина, Т.Л. Киселева // Фармация. - 1990. - № 1. - С.12-17.

42. Сапонины и их определение в корневищах аралии маньчжурской в условиях Белгородской области / Д.И. Писарев, Н.А. Мартынова, Н.Н. Нетребенко [и др.] // Химия растительного сырья. - 2009. - № 4. - С. 197-198.

43.Соловьёва, Н.М. Боярышник / Н.М. Соловьёва Н.В. Котелова. - М.: Агропромиздат, 1986. - 70 с.

44. Тринеева, О.В. Исследование спектральных характеристик антоциановых соединений плодов облепихи крушиновидной / О.В. Тринеева, А.И. Сливкин, М.А. Казьмина // Вестник ВГУ. - 2014. - № 3. - С. 118-122.

45.Трофимова, С.В. Фармакогностическое изучение боярышника кроваво-красного Crataegus sanguínea Pall.: дис. ... канд. фарм. наук: 14.04.02 / Трофимова Светлана Валерьевна. - Пермь, 2014. - 164 с.

46.Уфимов, Р. А. Заметки о роде Crataegus L. (Rosaceae) / Р.А. Уфимов // Новости систематики высших растений. - 2013. - Т. 44. - С. 113-125.

47.Уфимов, Р.А. Род боярышник (Crataegus L., Rosaeae) во флоре Восточной Европы и Кавказа: автореф. дис. ... канд биол. наук: 03.02.01 / Уфимов Роман Александрович. - Санкт-Петербург, 2013. - 20 с.

48. Флора Восточной Европы / под ред. Н.Н. Цвелева. - СПб.: Мир и семья; изд. СПХФА, 2001. - Т. 10: Покрытосеменные: двудольные. - 670 с.

49. Химический анализ лекарственных растений: Пособие для фармацевтических вузов / Е.Я. Ладыгина, Л.Н. Сафронич, В.Э. Отряшенкова [и др.]. - М.: Высш.школа, 1983. - 176 с.

50.Черепанов, С.К. Сосудистые растения России и сопредельных государств (в пределах бывшего СССР) / С.К. Черепанов. - 2-е изд. - Санкт-Петербург: Мир и семья-95, 1995. - 990 с.

51.4'''-Acetylvitexin-2''-O-rhamnoside, isoorientin, orientin, and 8-methoxykaempferol-3- O-glucoside as markers for the differentiation of Crataegus monogyna and Crataegus pentagyna from Crataegus laevigata (Rosaceae) / S. Prinz, A. Ringl, A. Huefner [et al.] // Chem. Biodivers. - 2007. - Vol. 4, № 12. - P. 29202931.

52.8-Methoxykaempferol 3-neohesperidoside and other flavonoids from bee pollen of Crataegus monogyna / J. Dauguet, M. Bert, J. Dolle [et al.] // Phytochemistry. -1993.

- Vol. 33, № 6. - P. 1503-1505.

53.A randomised double blind placebo controlled clinical trial of a standardised extract of fresh Crataegus berries (Crataegisan) in the treatment of patients with congestive heart failure NYHA II / F.H. Degenring, A. Suter, M. Weber [et al.] // Phytomedicine.

- 2003. - Vol. 10, № 5. - P. 363-369.

54. Antihypertensive effect of Iranian Crataegus curvisepala lind: a randomized, doubleblind study / S. Asgary, G.H. Naderi, M. Sadeghi [et al.] // Drugs. Exp. Clin. Res. -2004. - Vol. 30, № (5-6). - P. 221-225.

55.Anti-inflammatory potential of flavonoid contents from dried fruit of Crataegus pinnatifida in vitro and in vivo / E. Kao, C. Wang, W. Lin [et al.] // J. Agric. Food. Chem. - 2005. - Vol. 53, № 2. - P. 430-436.

56.Anti-inflammatory, gastroprotective, free-radical-scavenging, and antimicrobial activities of hawthorn berries ethanol extract / V.M Tadic, S. Dobric, G.M. Markovic [et al.] // J. Agric. Food. Chem. - 2008. - Vol. 56, № 17. - P. 7700- 7709.

57.British Pharmacopeia 2009 / British Pharmacopoeia Commission. - London: Crown Copyright, 2009. - 10952 p.

58. Cardioprotective properties of Crataegus oxycantha extract against ischemia-reperfusion injury / J.K. Swaminathan, M. Khan, I.K. Mohan [et al.] // Phytomedicine.

- 2010. - Vol. 17, № 10. - P. 744-752.

59. Characterization of antioxidants present in hawthorn fruits / Z. Zhang, Q. Chang, M. Zhu [et al.] // J. Nutr. Biochem. - 2001. - Vol. 12, № 3. - P. 144-152.

60.Characterization of hepatic nitric oxide synthase: identification as the cytokine-inducible form primarily regulated by oxidants / D.L. Duval, D.R. Miller, J. Collier, [et al.] // Mol. Pharmacol. - 1996. - Vol. 50, № 2. - P. 277-284.

61. Chemical composition of lipophilic fractions of raw material Crataegus rivularis Nutt / K. Enikeeva, S. Khasanova, N. Kudashkina [et al.] // J. Pharm. Res. Int. - 2022. -Vol. 34, № 42A. - P. 1-8.

62.Chemosystematic value of flavonoids from Crataegus x macrocarpa (Rosaceae) with special emphasis on (R)- and (S)-eriodictyol-7-O-glucuronide and luteolin-7- O-glucuronide / A. Ringl, S. Prinz, A. Huefner [et al.] // Chem. Biodivers. - 2007. - Vol. 4, № 2. - P. 154-162.

63. Chen, L. Identification of volatile compounds of hawthorn by gas chromatography/mass spectrometry (GC/MS) / L. Chen, B Xie, T Yu // Se Pu. - 1997.

- Vol. 15, № 3. - P. 219-21.

64. Comparison of the effects of Crataegus oxyacantha extract, aerobic exercise and their combination on the serum levels of ICAM-1 and E-Selectin in patients with stable angina pectoris / L. Jalaly, G. Sharifi, M. Faramarzi [et al.] // DARU. - 2015. - Vol. 23. - P. 54.

65.Consumption of dried fruit of Crataegus pinnatifida (hawthorn) suppresses high-cholesterol diet-induced hypercholesterolemia in rats / C. Kwok, C.N. Wong, Y. Yau [et al.] // J. Funct. Foods. - 2010. - Vol. 2, № 3. - P. 179-186.

66. Crataegus special extract WS 1442 induces an endothelium-dependent, NO-mediated vasorelaxation via eNOS-phosphorylation at serine 1177 / K. Brixius, S. Willms, A. Napp [et al.] // Cardiovasc. Drugs. Ther. - 2006. - Vol. 20, № 3. - P. 177-184.

67.Cultivars of apple fruits that are not marketed with potential for anthocyanin production / V. Mulabagal, S.V. Nocker, D.L. Dewitt, M.G. Nair // J. Agric. Food. Chem. - 2005. - Vol. 55, № 20. - P. 8165-8169.

68.Ebrahimzadeh, M.A. Antioxidant activity of Crataegus pentaegyna subsp. elburensis fruits extracts used in traditional medicine in Iran / M.A. Ebrahimzadeh, F. Bahramian // Pak. J. Biol. Sci. - 2009. - Vol. 12, № 5. - P. 413-419.

69.Effect of hawthorn (Crataegus oxycantha) crude extract and chromatographic fractions on multiple activities in a cultured cardiomyocyte assay / S.R. Long, R.A. Carey, K.M. Crofoot [et al.] // Phytomedicine. - 2006. - Vol. 13, № 9-10. - P. 643650.

70.Effect of ShanZha, a Chinese herbal product, on obesity and dyslipidemia in hamsters receiving high-fat diet / D. Kuo, C. Yeh, P. Shieh [et al.] // J. Ethnopharmacol. - 2009.

- Vol. 124, № 3. - P. 544-550.

71.Effect of tincture of Crataegus on the LDL-receptor activity of hepatic plasma membrane of rats fed an atherogenic diet / S. Ye, P.D. Deepalakshmi, K. Parasakthy [et al.] // Atherosclerosis. - 1996. - Vol. 123, № 1-2. - P. 235-241.

72.Effects of extracts from flowering tops of Crataegus meyeri A. Pojark on ischaemic arrhythmias in anaesthetized rats / A. Garjani, H. Nazemiyeh, N. Maleki [et al.] // Phytother. Res. - 2000. - Vol. 14, № 6. - P. 428-431.

73. Effects of four medicinal herbs on human vascular endothelial cells in culture / S. Ling, L. Nheu, A. Dai [et al.] // Int. J. Cardiol. - 2008. - Vol. 128, № 3. - P. 350-358.

74.Effects of hawthorn on cardiac remodeling and left ventricular dysfunction after 1 month of pressure overload-induced cardiac hypertrophy in rats / H.S. Hwang, B.E. Bleske, M.M.J. Ghannam [et al.] // Cardiovasc. Drugs. Ther. - 2008. - Vol. 22, № 1.

- P. 19-28.

75.Effects of hawthorn on the progression of heart failure in a rat model of aortic constriction / H.S. Hwang, M.O. Boluyt, K. Converso [et al.] // Pharmacotherapy. -2009. - Vol. 29, № 6. - P. 639-648.

76.Efficacy of the hawthorn (Crataegus) preparation LI 132 in 78 patients with chronic congestive heart failure defined as NYHA functional class II / U. Schmidt, U. Kuhn, M. Ploch [et al.] // Phytomedicine. - 1994. - Vol. 1. - P. 17-24.

77.European Pharmacopeia 6.0 / European Directorate for the Quality of Medicines & Health Care. - Strasbourg: Coucil of Europe, 2007. - 1129 p.

78.European Pharmacopoeia Online 9.0 [Электронный ресурс] // European Directorate for the Quality of Medicines & HealthCare. - Strasbourg, 2020. - URL: http://online6.edqm.eu/ep900/ (Дата обращения 01.03.2020)

79.Fractionation of polyphenols in hawthorn into polymeric procyanidins, phenolic acids and flavonoids prior to high-performance liquid chromatographic analysis / U. Svedström, H. Vuorela, R.Kostiainen [et al.] // J. Chromatogr. А. - 2006. - Vol. 1112, № 1-2. - P. 103-111.

80. Frey, N. Cardiac hypertrophy: the good, the bad, and the ugly / N. Frey, E. N. Olson // Annu. Rev. Physiol. - 2003. - Vol. 65. - P. 45-79.

81.Furey, A. Towards a systematic scientific approach in the assessment of efficacy of an herbal preparation: Hawthorn (Crataegus spp.) / A. Furey, M. Tassell // Eur. J. Heart. Fail. - 2008. - Vol. 10, № 12. - P. 1153-1157.

82.Gu, F.F. Adsorption of ursolic acid with macro-porous resins / F.F. Gu, F.L Ren, M. L. Wu // Guangzh. Chem. (in Chinese). - 2006. - Vol. 31, № 2. - P. 23-27.

83.Guo, R. Hawthorn extract for treating chronic heart failure (review) / R. Guo, M. H. Pittler, E. Ernst // Cochrane Database Syst. Rev. - 2008. - Vol. 23, № 1. - P. CD005312.

84.Hawthorn fruit is hypolipidemic in rabbits fed a high cholesterol diet / Z. Zhang, W.K.K. Ho, Y. Huang [et al.] // J. Nutr. - 2002. - Vol. 132, № 1. - P. 5-10.

85. High- performance liquid chromatographic determination of oligomeric procyanidins from dimers up to the hawthorn / U. Svedström, H. Vuorela, R. Kostiainen [et al.] // J. Chromatogr. - 2002. - Vol. 968, № 1-2. - P. 53-60.

86.Hsu, H.Y. Effects of oleanolic acid and ursolic acid on inhibiting tumor growth and enhancing the recovery of hematopoietic system postirradiation in mice / H.Y. Hsu, J.J. Yang, C.C. Lin // Cancer Lett. - 1997. - Vol. 111, № 1. - P. 7-13.

87. Hypotensive effects of hawthorn for patients with diabetes taking prescription drugs: a randomised controlled trial / A.F. Walker, G. Marakis, E. Simpson [et al.] // Br. J. Gen. Pract. - 2006. - Vol. 56, № 527. - P. 437-443. 88.Isolation and identification of oligomeric procyanidins from Crataegus leaves and flowers/ U. Svedström, H. Vuorela, R.Kostiainen [et al.] // Phytochemistry. - 2002. -Vol. 60, № 8. - P. 821-825.

89.Levitzki, A. PDGF receptor kinase inhibitors for the treatment of restenosis / A. Levitzki // Cardiovasc. Res. - 2005. - Vol. 65, № 3. - P. 581-586.

90.Liu, J. Pharmacology of oleanolic acid and ursolic acid / J. Liu // J. Ethnopharmacol.

- 1995. - Vol. 49, № 2. - P. 57-68.

91.Liu, P. Characterization of phenolic compounds in Chinese hawthorn (Crataegus pinnatifida Bge. var. major) fruit by high performance liquid chromatography-electrospray ionization mass spectrometry / P. Liu, B. Yang, H. Kallio // Food Chem.

- 2010. - Vol. 121, № 4. - P. 1188-1197.

92.Liu, P. Phenolic Compounds in hawthorn (Crataegus grayana) fruits and leaves and changes during fruit ripening / P. Liu, B. Yang, H. Kallio // J. Agric. Food. Chem. -2011. - Vol. 59, № 20. - P. 11141-11149.

93.Liu, Q.J. Studies on the composition of fruit nutrition matters and make use of resources in hawthorn germplasm / Q.J. Liu, G.Q. Wang // J. Agric. Univ. Hebei. -2005. - Vol. 28, № 1. - P. 21-23.

94.Ma, M. Chemical composition of water-soluble parts of Crataegus cuneata / M. Ma, Z. Gu // China Pharmaceutic. - 2003. - Vol. 12, № 12. - P. 35-35.

95.Monoterpene and lignan glycosides in the leaves of Crataegus pinnatifida / P. Gao, L. Li, Y. Peng [et al.] // Biochem. Syst. Ecol. - 2010. - Vol. 38, № 5. - P. 988-992.

96. Oh, I. Constituents of Crataegus pinnatifida var. psilosa leaves (II) - Flavonoids from BuOH fraction / I. Oh, W. Whang, I. Kim // Arch. Pharm. Res. - 1994. - Vol. 17, № 5. - P. 314-317.

97.Petereit, F. Crataegus from the analytical viewpoint: official contents of hawthorn drugs / F. Petereit, A. Nahstedt // Pharm. Unserer Zeit. - 2005. - Bd. 34, № 1. - S. 22-26.

98.Pittler, M.H. Hawthorn extract for treating chronic heart failure: meta-analysis of randomized trials / M.H. Pittler, K. Schmidt, E. Ernst // Am. J. Med. - 2003. - Vol. 114, № 8. - P. 665-674.

99.Polyphenol contents and antioxidant activities of extracts from flowers of two Crataegus azarolus L. varieties / R. Bahri-Sahloul, S. Ammar, R. B Fredj [et al.] // Pak. J. Biol. Sci. - 2009. - Vol. 12, № 9. - P. 660-668.

100. Polyphenolic content and physiological activities of Chinese hawthorn extracts / T. Cui, K. Nakamura, S.Tian [et al.] // Bioscience. - 2006. - Vol. 70, № 12. - P. 29482956.

101. Quantification of the polyphenols and triterpene acids in chinese hawthorn fruit by high-performance liquid chromatography / T.Cui, J. Li, H.Kayahara [et al.] // J. Agric. Food. Chem. - 2006. - Vol. 54, № 13. - P. 4574-4581.

102. Quantitative analysis of phenolic compounds in Chinese hawthorn (Crataegus spp.) fruits by high performance liquid chromatography - electrospray ionisation mass spectrometry / P. Liu, H. Kallio, D. Lü [et al.] // Food Chem. - 2011. - Vol. 127, № 3. - P. 1370-1377.

103. Radioprotective effects of hawthorn fruit extract against gamma irradiation in mouse bone marrow cells / S.J. Hosseinimehr, M. Azadbakht, S.M. Mousavi [et al.] // J. Radiat. Res. - 2008. - Vol. 48, № 1. - P. 63-68.

104. Rehwald, A. Qualitative and quantitative reversed-phase high-performance liquid chromatography of flavonoids in Crataegus leaves and flowers / A. Rehwald, B. Meier, O. Sticher // J. Chromatogr. - 1994. - Vol. 677, № 1. - P. 25-33.

105. Ren, F.L. Determination of ursolic acid in hawthorn leaves (Crateagus pinnatifida) by HPLC / F.L. Ren, M.L. Wu, F.F. Gu // Nat. Prod. Res. - 2007. - Vol. 19. - P. 303-305.

106. Rigelsky, J.M. Hawthorn: pharmacology and therapeutic uses / J.M. Rigelsky, B.V. Sweet // Am. J. Health Syst. Pharm. - 2002. - Vol. 59, № 5. - P. 417- 422.

107. Simultaneous determination of vitexin-4''-O-glucoside and vitexin-2''-O-rhamnoside from Hawthorn leaves flavonoids in rat plasma by HPLC method and its

application to pharmacokinetic studies / G. Ma, X.H. Chen, Z. Ren [et al.] // J. Pharm. Biomed. Anal. - 2007. - Vol. 44, № 1. - P. 243-249.

108. Sun, B.H. Apple anthocyanins: identification of cyanidin-7-arabinoside / B.H. Sun, F.J. Francis // Food Sci. - 1967. - Vol. 32, № 6. - P. 647-649.

109. Synergetic effect and structure-activity relationship of 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase inhibitors from Crataegus pinnatifida Bge / X.L. Ye, W.W. Huang, Z. Chen [et al.] // J. Agric. Food. Chem. - 2010. - Vol. 58, № 5. - P. 31323138.

110. The Crataegus extract WS 1442 inhibits balloon catheter-induced intimal hyperplasia in the rat carotid artery by directly influencing PDGFR-beta / R. Furst, U. Zirrgiebel, F Totzke [et al.] // Atherosclerosis. - 2010. - Vol. 211, № 2. - P. 409-417.

111. The effect of crataegus fruit extract and some of its flavonoids on mitochondrial oxidative phosphorylation in the heart / J. Bernatoniene, S. Trumbeckaite, D. Majiene [et al.] // Phytother. Res. - 2009. - Vol. 23, № 12. - P. 1701-1707.

112. The effect of extractions from some hepatotropic medicinal plants on free-radical oxidation / M.A. Ryzhikova, R.R. Farkutdinov, S.V. Sibiryak, Sh.Z. Zagidullin // Exp. Clin. Pharmacol. - 1999. - Vol. 62, № 2. - P. 36-38.

113. United States Pharmacopeia 32 Edition / Washington, D.C.: The United States Pharmacopeial Convention, 2008. - 3577 p.

114. United States Pharmacopeia 32 - National Formulary 27 / Washington, D.C.: The United States Pharmacopeial Convention, 2009. - 815 p.

115. Weintraub, W.S. The pathophysiology and burden of restenosis / W.S. Weintraub // Am. J. Cardiol. - 2007. - Vol. 100, № 5A. - P. 3K-9K.

116. Zhang. P.C. C-glucoside flavonoids from the leaves of Crataegus pinnatifida Bge. var. major N.E.Br / P.C. Zhang, S.X. Xu // J. Asian Nat. Prod. Res. - 2003. - Vol. 5, № 2. - P. 131-136.

117. Zhang. P.C. Chemical constituents from the leaves of Crataegus pinnatifida Bge. var. major N.E.Br / P.C. Zhang, S.X. Xu // Yao. Xue. Xue. Bao. - 2001. - Vol. 36, № 10. - P. 754-7.

118. Zou, S.Q. Determination of two components in Crataegus cuneata Sieb. et Zucc. by HPLC-PAD / S.Q. Zou, W. Chen // Food Sci. (in Chinese). - 2006. - Vol. 27, № 11. - P. 438-440.

ПРИЛОЖЕНИЯ

У I Ш Л'ЖДЛЮ 1'ск юр ФГБОУ ИОБГМУ Минздрава России, Академик РАН. профессор

¡Из.Н. 11авлов «¿2 » ис&кл- ___2022 г.

АКТ ВНЕДРКНИЯ

результатов диссертационной работы Глшксевой Кадрим Ильдаровны «Фармак<м ностичсское изучение п бнолотическаы активность Гюмрышннка приречного (Crataegus rivulciris Nutt.)» представленной па соискание ученой ciciiciin кандидата фармацевтических наук 3.4.2 - фармацевтическая химии, фармакогнозии

Комиссия в составе: председатель - заведующий кафедрой фармакси иозии с курсом ботаники и основ фитотерапии, д.фарм.п., профессор Кудашкипа I I.B.

члены комиссии: профессор кафедры фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии, д.фарм.п Пупыкина К.А., доцент кафедры фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии, к.фарм.н. Галиахметова D.X.

составили настоящий акз о том, что результаты диссертационной работы Нпикеевой Кадрин Ильдаровны «Фармако! ностичсское изучение и биологическая активность боярышника приречного (Crataegus rivularis Null.)», внедрены в учебный и научно-исследовательский процесс кафедры фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии федерального государственного оку [женкн о образовательного учреждения высшего образования «Башкирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации. (450008, г. Уфа, ул. Ленина, 3) и применяются при изучении вопросов качественного и количественного анализа лекарственного растительного сырья, содержащею флавоноиды и при разработке методов стандартизации лекарственного растительного сырья и средств расти тельного происхождения.

I ]редседатель комиссии Члены комиссии:

1IB. Кудашкипа К. А. 1 [упыкина D.X.! алиахмстова

РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ

(19)

RU

un

2 785 678(П C1

(51) МПК

А6IK36/714 (2006.01) А61К135/00 (2006.01) BOlDll/02 (2006.01) А61Р7Ю2 (2006.01) A61P39/06 (2006.01)

ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ

(52) СП К

А61К 36/734 <2022.08): ВОЮ 11/02 <2022.08): А 61Р 7/02 (2022.08): А 61Р 39/06 (2022.08)

О

со ью ю со

(М

э

û£

(21)(22) Заявка: 2022100288. И 01.2022

(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 11 01.2022

Дата регистрации: 12.12.2022

Приоритет(ы):

(22) Дата подачи заявки: 11.01.2022

(45) Опубликовано: 12.12.2022 Бюл. № 35

Адрес для переписки:

450008, г.Уфа, ул.Ленина, 3,

БА ШГОСМЕДУ Н ИВЕРС ИТЕТ, Патентный

отдел

(72) Автор(ы):

Кудашкина Наталья Владимировна (RU), Хасанова Светлана Рашитовна (RU), Жалалова Надира Бегим Курсановна (RU), Гусакова Валерия Андреевна (RU), Еникеева Кадрия Ильдаровна (RU), Сулейманова Далила Рустемовна (RU), Андресова Полина Анатольевна (RU)

(73) Патентообладатель(и): федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Башкирский государственный медицинский университет'1 Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

(56) Список документов, цитированных в отчете о поиске: RU2342942 С1,10 01.2009 ЖАЛАЛОВА Н. К, и др. Разработка методики количественного определения флавоноидов в побегах Crataegus ALmaatensis Pojark //Башкирский химический журнал. 2021, Том 28. N 1, стр.83 89. ГАЙНЕТДИНОВА А А и др. Изучение антиоксидантной аткивносги боярышника Алма Атинского // ВЕСТНИК БАШКИРСКОГО ГОСУДАРСТВЕННОГО МЕДИЦИНСКОГО (см. прод.)

ТУ С

м -g

СО СП

О) -J

со

о

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РАСТИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА,ОБЛАДАЮЩЕГО БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ

(57) Реферат:

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения средства, обладающего антиагрегантиой и антиоксидантной активностью. Способ получения средства, обладающего антиагрегантиой и антиоксидантной активностью, включающий измельчение растительного сырья, экстракцию методом мацерации, сгущение в роторном испарителе и высушивание в сушильном шкафу.

причем в качестве растительного сырья используют побеги боярышника кроваво-красного (Crataegus sanguinea Pall.), или боярышника мягковатого (Crataegus submollis Sarg.), или боярышника алма-атинского (Crataegus almaatensis Pojark ), или боярышника приречного (Crataegus rivularis Nutt. ex Torr, et A. Gray), проводят мацерацию измельченных воздушно-сухих побегов водой в соотношении сырье -

ПОДЛИННОСТЬ

Внешние признаки. Цельное сырье. Кусочки стеблей, кора на молодых ветвях толщиной 0,3-0.8 см. темно-серо-коричневая, шипы на ветвях прямые, реже загнутые. Листья очередные, простые, голые, черешок около 1-2,5 см. листовая пластинка от эллиптической до продолговато-обратнояйпевидной. 3—8 см в длину, 2—3 см в ширину, основание клиновидное, края крупнозубчатые, зубцы многочисленные, обычно острые, жилкование перисто-краевое, жилок по 4 или 5 с каждой стороны, более крупные часто разветвляются прокснмальнее концов, верхушка листа острая, абакснальная поверхность голая. Цвет листьев с верхней стороны 5е.леный, с нижней - светло-зеленый.

Соцветия щитковидные, 6—12-цветковые; цветки 14-17 мм в диаметре: чашелистики короткие, 6—8 мм д.чиной, края целънокрайнне, на верхушке узкие, голые: тычинок 10. пыльники розовые, столбиков от 3 до 5. Цветки от белых до бледно-розовых. Запах водного извлечения побегов слабый, травяной. Вкус водного извлечения слабо-горьковатый.

Измельченное сырье Кусочки листьев и молодых стеблей различной формы и размера, черешки и прилистники, фрагменты цветков, проходящих сквозь снто с отверстиями размером 5 мм. Цвет зеленовато-серый с белыми, коричневыми вкраплениями. Запах слабый, вкус водного и звлечения слабо-горьковатый. Микроскопические признаки. Цельное сырье. Эпндермнс верхней поверхности листа представлен многоугольными клетками, с легкими четковиднымн утолщениями (рис. 1): эпидермис нижней стороны листа имеет клетки со слабонзвилнстымн стенками, при этом на обеих сторонах листа наблюдается складчатость кутикулы (рис. 2). Устьнчный аппарат анамоцитного типа (устьица окружены 2-5 околоустъичнымн клетками), чаще встречаются на нижней стороне листа (рис. 4). Наблюдается присутствие волосков разных типов — как тонкостенных простых, длинных одноклеточных, так и толстостенных (рис.3. рис.7). По краю листовой пластинки волоски редкие, при приближении к

Рисунок 5 - Жнлка листа

Рисунок 6 - Край листовой

(кристаллоносыая оокладка)

пласгньшн (в основании листа)

(ув.20х40).

(ув_20х40)

Рисунок 7 - Простые одноклеточные волоски (ув.20^40).

Рисунок 8 — Основание волоска с

Рисунок У - Многочисленные

розеткой из 6 клеток (ув.20х40)

клетки с оурым содержимым

(ув. 20x40).

Рисунок 14 - Клетки

Рисунок 15 - Эпидермис чашелистика

эпидермиса чашелистика (ув.20*40)

с клетками, заполненными Ьурым

содержимым

призматическими

кристаллами (ув20*40).

Рисунок 16 - Простые волоски

Рисунок 17 - Место прикрепления

чашелистика (ув.20х40).

волоска (ув-20*40).

Микроскопия поперечного среза черешка и стеоля С. гпшотта.

Отмечается присутствие клеток покровной ткани

эпидермиса, ряды

уголковой колленхимы, паренхима коры, а также специфически изогнутый

закрытый коллатеральный пучок (рнс. 18)

Рисунок 18 - Поперечный срез черешка (1- эпидермис, 2 - уголковая колленхима. 3 - паренхима коры. 4 -изогнутый закрытый коллатеральный проводящий пучок), 5—колленхима (ув_20х10).

При рассмотрении поперечного сечения стебля боярышника приречного визуализируется перидерма, слой коры, сплошной слон вторичной кснлемы. и остатки первичной кснлемы Флозма отражена в виде отдельных фрагментов над пучковым камбием, визуализируется сердцевинная паренхима (рис. 19).

Рисунок 19 - Поперечный срез стебля (1 -вторичная кора. 2 — древесина 3 -сердцевинная паренхима) (ув.20*10).

Определение основных групп биологпческп активных веществ:

Тонкослойная хроматография_

§

Спиртовой раствор алюминия хлорида 5,4 г алюминия хлорида б-водного растворяют в 80 мл 95% этилового спирта в мерной колбе вместимостью 100 м.т при этом нагревая смесь на водяной {мне, затем охлаждают н доводят этиловым спиртом до метки: перемепшвают до однородности.

Рас шор СО рутина. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0Г05 г (точная навеска) рутнна. предварительно высушенного прн температуре 100-105 °С е течение 1.5 ч. растворяют в 20 мл спирта 70 %, доводят объем раствора спиртом 70 % до метки, перемешивают. Срок годности раствора 30

Рас шор СО гиперозида. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,05 г (точная навеска) пшерозида. предварительно высушенного прн температуре 100-105 °С в течение 1.5 ч. растворяют в 20 мл спирта 70 %, доводят обьем раствора спиртом 70 % до метки, перемепшвают. Срок годности раствора 30 сут.

Рас шор СО кверцигтта. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,05 г (точная навеска) кверщгснна. предварительно высушенного прн температуре 100-105 °С в течение 1.5 ч, растворяют в 20 мл спирта 70 %, доводят объем раствора спиртом 70 % до мешн. перемешивают Срок годности раствора 30 суток.

Капилляром на линию старта хроматографнческой пластинки наносят 0,02 мл исследуемого извлечения и по 0.02 мл стандартных образцов. Пластинку с анализируемыми пробами высушивают и помещают в камеру, предварительно насыщенную смесью растворителей этипацетат-муравьиная кислота-вода (7:1,5:1.5). Хрс ма тогра фирс ванне проводят воскодящим способом. Когда фронт растворителей проходит около 80-90% высоты

9

пластинки, ее вынимают нз камеры н сушат на воздухе в течение 5 минут. Высушенные хромдтограмыы просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм. После проявляют пластинки 3% спиртовым раствором алюминия хлорида и наблюдают изменение окраски пятен.

В процессе детектирования хроматограммы при длине волны 365 нм в УФ-свете должны визуализироваться не менее 4 зон адсорбции с флуоресценцией желтого, желто-зеленого, голубого цветов, соответствующих таковым зонам адсорбции стандартных образцов.

ИСПЫТАНИЯ Влажность. Цельное сырье, порошок— не более 10%.

Зола общая. Цельное сырье, порошок - не более 10%.

Залп, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Цельное сыры, порошок не более 3 %.

Измельченность сырья. Цельное сырье: частиц, проходяших сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм - не более 5%.

Измельченное сырье: частиц, не проходяших сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм, - не более 5%; частиц, проходящих сквозь сиго сотверстием размером 0,18 мм. - не более 4% Посторонние примеси.

Части сырья, изменившие окраску. Цельное сырье —к? более 2%. Другие части растения. Цельное сырье - не более 2%. Органическая примесь. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 2%.

Минеральная примесь. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 1 %.

Тяжелые металлы. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах» (ГФ РФ XIV издания).

10

Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах;) (ГФ РФ XIV издания). Остаточные количества пестицидов В соответствии с требованнямнОФС «Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах» (ГФ РФ XIV издания).

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическаячистота}} (ГФ РФXIVиздания).

Количественное определение

Цельное сырье, измельченное сырье: суммы флдвонондов в пересчете на пшерознд не менее 1,5 %

5Г0 г сырья (точная навеска) измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. Сырье помещают в колбу со шлифом объемом 250 мл. прибавляют 50 мл 96% этилового спирта, н. присоединив к обратному холодильнику, нагревают на кипящей водяной бане в течение 1 часа. Затем содержимое колбы охлаждают до комнатной температуры и профильтровывают через бумажный фильтр в мерную колбу объемом 100 мч. В колбу с оставшимся сырьем прибавляют 30 мч 96% лилового спирта, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипяшей водяной бане в течение 1 часа. Полученный раствор охтаждаюг и профнльтровают через тот же фильтр в ту же мерную колбу на 10 0 мл. В колбу со итогом прибавляют 20 мл 96% этилового спирта, присоединяют к обратному холодильнику и вновь кипятят в течение 1 часа на водяной бане. После охлаждения раствор профильтровают в ту же колбу и доводят спиртом этиловым 96% до метки (раствор А).

10 мл раствора А помещают в мерную колбу на 25 мл добавляют б мл 2% спиртового раствора хлорида алюминия и доводят 96% спиртом этиловым

до метгкн. перемешивают (раствор Б). Раствор сравнения готовят следующим образом: в мерную колбу вместимостью 25 мт добавляют 10 мл раствора А. прибавляют 0.1 мл уксусной кислоты концентрированной и доводят 96% спиртом этиловым до меткн: перемешивают. Оптическую плотность растворов определяют на спектрофотометре «5Ыта(1ги ЦЛМЗОО» при длине волны 410 нм относительно раствора сравнения в иовете толщиной слоя 1 см.

Содержание суммы флавонондов в пересчете на пшерознд и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

„ Л 100-2 5-1 ОС

л __ где

■Л10 1_0(100—*0'

А оптическая плотность раствора Б испытуемого раствора

А] -удельный показатель поглощения комплекса алюминия хлорида с гнперозндом при длине волны 410 нм. а-навеска сырья ^'-влажность сырья. %

Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с требованиями ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов»

Хранение. В соответствии с требованиями ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья н лекарственных растительных препаратов»