Фармакологическое изучение суммарных извлечений из плодов боярышника тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.25, кандидат фармацевтических наук Ляхова, Наталья Сергеевна

• Ляхова, Наталья Сергеевна
• кандидат фармацевтических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат фармацевтических наук Ляхова, Наталья Сергеевна

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Регуляция мозгового кровообращения.

1.2. Фармакология боярышника.

1.3. Краткая характеристика сырья и исследуемых суммарных извлечений из шрота боярышника.

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1. Методика регистрации параметров системной гемодинамики с помощью компьютерной программы «Bioshell.3.00».

2.2. Методика создания модели инсульта с использованием внутрикаротидного введения аутотромбов.

2.3. Методика регистрации объемной скорости мозгового кровотока с помощью водородного клиренса.

2.4. Методика создания гипоксии мозга

2.4.1. Циркуляторная гипоксия

2.4.2. Гипоксия с гиперкапнией.

2.4.3. Гемическая гипоксия

2.5.Методика «Открытое поле».

2.6. Антиоксидантная активность

2.6.1. Методика определения ТБК - активных продуктов в сыворотке крови

2.6.2. Определение спонтанного гемолиза по Ягеру

2.7.Микроморфологические методы исследования головного мозга.

2.7. Условия экспериментальных исследований.

Глава 3. Влияние извлечений из шрота боярышника (фракций) на сердечно-сосудистую систему

3.1. Изучение острой токсичности фракций боярышника.

3.2. Изучение влияния фракций боярышника на гемодинамические параметры артериального давления и частоты сердечных сокращений.

Глава 4. Влияние фракций из шрота боярышника на мозговой кровоток наркотизированных животных в условиях экспериментальной нормы

4.1. Влияние фракций боярышника на изменение объёмной скорости мозгового кровотока, сопротивление сосудов мозга и системное артериальное давление в условиях экспериментальной нормы.

4.2. Сравнительная характеристика влияния густого экстракта настройки боярышника и фракции, полученной с использованием 40% спирта в дозе 32,5 мг/кг на объемную скорость мозгового кровотока, системное артериальное давление и сопротивление сосудов мозга в условиях экспериментальной нормы.

Глава 5. Изучение влияния фракций боярышника на мозговой кровоток в условиях экспериментальной патологии (профилактическое и терапевтическое введение)

5.1. Влияние фракций боярышника на скорость мозгового кровотока на наркотизированных животных с моделированным ишемическим инсультом (лечебное введение)

5.2. Влияние фракций боярышника на скорость мозгового кровотока животных с моделированным ишемическим инсультом (профилактическое введение)

5.3. Экспериментальное доказательство ишемического инсульта.

Глава 6. Влияние фракций боярышника на функции центральной нервной системы и выживаемость крыс при гипоксических состояниях

6.1. Влияние фракции боярышника на двигательную активность крыс методом «Открытого поля».

6.2. Влияние фракции боярышника на устойчивость животных к гипоксическим состояниям.

6.2.1. Циркуляторная гипоксия.

6.2.2. Гипоксия с гиперкапнией.

6.2.3. Гемическая гипоксия.

6.4.4. Влияние исследуемой фракции на перекисное окисление липидов.-.'.".

Глава 7. Влияние фракции из шрота боярышника на клинические и биохимические показатели крови животных.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Фармакологическое изучение суммарных извлечений из плодов боярышника»

Актуальность темы

Одной из актуальных задач современной медицины является поиск растительных сырьевых источников фармакологически активных соединений и значительное место в этом отводится вторичному сырью, т.е. отходам фармацевтического и пищевого производства. Это позволяет рационально и полно использовать природные растительные ресурсы. При безотходной технологии используются все компоненты сырья и не наносится ущерб окружающей природной среде, следовательно, не нарушается экологическое равновесие. Глубокая переработка с полным безотходным производством, позволяет максимально сохранить в растительном продукте комплекс целительных уникальных соединений, столь необходимые организму биоэнергетический потенциал, микроэлементный и витаминный состав.

Применение лекарственных препаратов на растительной основе, обладающих гипотензивным действием в профилактических целях, позволяет снизить вероятность развития первичного инсульта и тем самым улучшить состояние хронических больных (Хаятулла Насрулла Масуди 1995). В настоящее время на современном фармацевтическом рынке представлены следующие лекарственные препараты, содержащие в своем составе БАВ боярышника: гранулы гомеопатические «Кратегус-плюс», таблетки «Фиторе-лакс» (Франция), эликсир «Демидовский», «Кралонин», «Пумпан», «Вена-ин», «Кардиин», «Фитоновосед», гранулированный экстракт боярышника, «Анти-инсульт», «Кратевалин» (чайный сбор), «Алфит 17», «Морфей», «Но-вопассит», «Биовиталь», «Геровитал», «Нортия», «Пасссилат», «Энерготоник», «Кратал» и др.

К таким средствам можно отнести и отходы переработки плодов боярышника, в которых после получения настойки остаются в значительных количествах ценные биологически активные вещества (Зинченко JI.A. 2007).

Следовательно, шрот из плодов боярышника может служить естественным источником биологически активных веществ. Поэтому, фармакологическое исследование шрота актуально.

Для проведения фармакологических исследований на кафедре органической химии под руководством профессора Э.Т.Оганесяна были получены суммарные извлечения из шрота плодов боярышника - фракции с лабораторными шифрами 2,5,6,7,8. Способы получения фракций и их различия приведены в разделе «Материалы и методы исследования».

Сосудистые заболевания головного мозга из-за высокой распространенности и тяжелых последствий для здоровья населения представляют важнейшую медицинскую и социальную проблему. По данным ВОЗ (Всемирная Организация Здравоохранения), ежегодно от цереброваскулярных заболеваний умирают около 5 миллионов человек [1,2]. Показатели смертности в России одни из самых высоких в мире, в отличие от большинства экономически развитых стран, они не только не снижаются, но и имеют тенденцию к увеличению. Количество инсультов ежегодно равняется около 450 тыс., причем лишь 8-10% инсультов оказываются относительно легкими и заканчиваются восстановлением нарушенных функций организма уже в первые 3 недели заболевания. В остальных случаях расстройства движений, речи, когнитивных функций более выраженные и стойкие [1].

Обоснованно считается, что инсульты легче предупредить, чем добиться восстановления утраченных функций, а тем более полного излечения пациента. Принимаются конкретные клинические рекомендации по профилактике инсульта у больных с артериальной гипертензией, нарушением ритма сердца, патологией магистральных артерий головного мозга [2,3].

Сердечно-сосудистые заболевания являются актуальной проблемой здравоохранения и имеют тенденцию к росту в последние годы [4,5,6,7,8,9]. Артериальная гипертензия представляет собой самый распространенный и лучше всего поддающийся коррекции фактор риска ишемического инсульта (как первого, так и повторного) [10]. Распространенность артериальной гипертонии среди населения России в возрасте от 15 лет и старше составляет около 42 миллионов человек. По приблизительным оценкам, гипертензи-ей обусловлена половина всех случаев развития инсульта. Показано, что его риск удваивается при каждом повышении диастоличе-ского артериального давления на 7-10 мм рт.ст. выше нормального уровня (89мм рт.ст.) [11,12]. Систолическая или комбинированная гипертензия также ассоциируется с возрастанием риска инсульта. Имеются данные, что далее при легкой степени артериальной ги-пертензии вероятность инсульта увеличивается на 75% [13]. Кроме того, артериальная гипертензия сопровождается нарушением коронарного кровообращения [12], гипоксией [14], снижением сопротивляемости к эмоциональным стрессирующим воздействиям и другими патологическими изменениями в организме больного человека.

В настоящее время расширены представления о взаимозависимости кардиальной и церебральной патологии. Изменения в работе сердца при артериальной гипертензии участвуют в патогенезе острых нарушений мозгового кровообращения, в первую очередь ишемического инсульта. Среди заболеваний сердечно-сосудистой системы наиболее актуальной проблемой является лечение и профилактика нарушений мозгового кровообращения.

Поиск новых гипотензивных препаратов, с целью профилактики ишемических инсультов весьма актуален, что связано в первую очередь со значительной масштабностью развития заболевания, а также с омоложением возраста больных [11].

Цель исследования^ Изучить влияние суммарных извлечений из плодов боярышника на показатели системной гемодинамики и мозговой кровоток в условиях экспериментальной нормы и патологии.

Для реализации поставленной цели мы сочли целесообразным решение следующих задач:

1. Оценить перспективность использования шрота плодов боярышника в медицинской и фармацевтической практике.

2. Определить острую токсичность суммарных извлечений из шрота плодов боярышника.

3. Изучить фракции из шрота плодов боярышника на активность в отношении сердечно -сосудистой системы и выбрать наиболее активные из них.

4. Изучить влияние перспективных фракций из шрота плодов боярышника на мозговой кровоток в норме и выявить эффективную дозу.

5. Изучить влияние наиболее активной фракции в эффективной дозе в сравнении с настойкой боярышника на мозговой кровоток в условиях экспериментального ишемического инсульта (при лечебном и профилактическом применении).

6. Изучить влияние перспективной исследуемой фракции, на различных моделях гипоксии и неврологический статус.

7. Изучить антиоксидантное действие наиболее активной исследуемой фракции из шрота плодов боярышника.

8. Исследовать клинические и биохимические показатели периферической крови животных в условиях нормы и ишемии мозга на фоне введения наиболее активной исследуемой фракции из шрота плодов боярышника. Научная новизна

Полученные в экспериментальных исследованиях данные представляют научный интерес, поскольку раскрывают неизученные ранее эффекты извлечений из шрота плодов боярышника на мозговое кровообращение как в норме, так и при экспериментальном ишемическом инсульте.

Впервые изучено фармакологическое действие суммарных фракций отходов настойки боярышника на скорость мозгового кровотока на наркотизированных животных в норме и с моделью ишемического инсульта.

В результате проведённого исследования были получены данные, согласно которым, наиболее активная из 5 предложенных фракций, полученная с использованием 40% спирта, вызывает снижение мозгового кровотока у наркотизированных животных.

Длительное профилактическое введение вызывает улучшение мозгового кровообращения в условиях ишемии, что подтверждается биохимическими исследованиями. Все предложенные фракции обладают седативным, антигипоксическим эффектом: повышают устойчивость животных к гемической, гиперкапнической и цир-куляторной гипоксиям.

Практическая значимость результатов исследования

Практическая значимость работы заключается в том, что на основании выявленной биологической активности извлечений из шрота плодов боярышника появилось существенное обоснование для использования шрота плодов боярышника с целью создания официнальных препаратов. Для клинической медицины особое значение имеет выявленная нами способность извлечений (фракций) из шрота плодов боярышника улучшать мозговой кровоток при ишемическом инсульте у экспериментальных животных, что подтверждают биохимические исследования. Уровень внедрений

Результаты исследования нашли отражение в информационном письме: «О потенциальной фармакологической ценности отходов переработки плодов боярышника кроваво-красного», на которое получены 2 акта внедрения от Пятигорской и Ростовской фармацевтических фабрик (2006 г). Основные положения, выносимые на защиту

1. Исследуемые фракции обладают наличием гипотензивного эффекта, выраженного в разной степени. Более активно показали себя фракции №2 и №5.

2. Влияние фракций №2 и №5 из шрота боярышника на мозговой кровоток наркотизированным животных в условиях экспериментальной нормы и выявление дозозависимого эффекта.

4. Влияние фракции №2 из шрота боярышника на скорость мозгового кровотока на животных с моделированным ишемическим инсультом (лечебно-терапевтическое введение).

5. Исследуемая фракция №2, полученная с использованием 40% спирта, повышает выживаемость животных при гипоксии с гиперкапнией, гемической гипоксии, обладает седативным действием.

6. Исследуемая фракция №2 обладает антиоксидантной активностью.

7. Исследуемая фракция №2 обладает адаптогенной активностью, что подтверждают ряд биохимических исследований.

Апробация и публикация результатов исследования Материалы исследования доложены на 60-й и 61-й межрегиональной конференциях по фармации и фармакологии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2005, 2006 гг.).

По материалам диссертации опубликовано 11 печатных работ, из них в центральной печати 1 работа.

Объем и структура диссертации

Материал диссертации изложен на 153 страницах машинописного текста, иллюстрирован 31 таблицами и 24 рисунками. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, собственных результатов исследований, заключения, выводов и указателя литературы. Указатель литературы содержит 124 источника, из них 72 отечественных.

Заключение диссертации по теме «Фармакология, клиническая фармакология», Ляхова, Наталья Сергеевна

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Исследуемые на токсичность фракции боярышника по клас сификации Сидорова К.К. отнесены: к 6-му классу (относительно безвредные) - фракция №2,8, фракции №5,6,7 - к 5-му классу токсичности и являются практически нетоксичными веществами при пероральном пути введения.

2. Исследуемые фракции № 6,7,8 при пероральном введении белым беспородным крысам в дозе 10 мг/кг оказывают выраженный гипотензивный эффект. Фракции №2 и №5 проявили умеренную гипотензивную активность.

3. При однократном пероральном введении фракции №2 в трех дозах было установлено, что доза 32,5 мг/кг вызывала умеренное изменение МК.

Фракция шрота боярышника № 5 в трех дозах оказывало выраженное снижение мозгового кровотока в среднем на 50%.

4. Профилактическое введение фракции №2 в дозе 32,5 мг/кг повышает объёмную скорость мозгового кровотока относительно контрольных значений и однократного введения фракции в той же дозе в 1,7 раза, а препарат сравнения в 1,9 раза в условиях ишемического инсульта.

5. Профилактическое введение фракции №2 понижает двигательную и поисковую активность у нормотензивных животных, что говорит о выраженном седативном эффекте. Выявлена антигипоксическая активность при различных видах ги-поксий исследуемой суммарной фракции №2.

6. Густой экстракт настойки боярышника и фракция №2 из шрота боярышника оказывают антиоксидантное и мембраностабилизирующее действие. 7. Исследуемая фракция №2 оказывает выраженное адаптоген-ное действие.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Статистика инсультов весьма удручающая для нашей страны.

Это касается распространенности инсульта и смертности от него. Среди европейских стран по этим показателям наша страна на втором месте (впереди только Болгария). Последствия инсульта всем хорошо известны. Инвалидность с потерей трудоспособности по разным данным составляет от 40 до 80%. Единой статистики по этому вопросу в нашей стране нет. Патогенетическое обоснование лечения острой ишемии мозга, представляется тем, что инфаркт мозга как нозологическая группа полиморфна и имеет различные подтипы. Почти 40% инфарктов мозга не дифференцированы по своему происхождению, то есть мы не знаем тромбоз это или эмболия, поскольку нет надежных методов диагностики. Особенно это касается мелких артерий, которые не доступны для ангиографии и в таких случаях наше суждение является предположительным. Очень большая доля принадлежит лакунарным инфарктам — 26,1%. Кардиоэмболические инфаркты составляют 19%. По другой статистике до 30% ишемических инсультов — это кардиоэмболические осложнения. Геморрагический инфаркт — 9% и сочетанные инфаркты — около 5,5%. Вот основные подтипы инфарктов. Эта статистика достаточно условна, так как клинические исследования, проведенные на большом и верифицированном клиническом материале, отсутствуют. При общей нозологической форме инфаркта мозга эти подтипы влияют на клинические проявления и характер проводимого лечения, поскольку эмболия и тромбоз — это два состояния разные по патогенезу и в этих случаях могут быть разные клинические подходы.

Среди этиологических факторов наибольшее значение имеют атеросклероз и гипертоническая болезнь как наиболее значимые сосудистые заболеваниям. Необходимо подчеркнуть, что к настоящему времени накоплен значительный объем экспериментальных данных, свидетельствующий о сложной перестройке мозгового метаболизма в условиях как острой так пролонгированной и хронической ишемии, приводящее к активации свободно-радикальных процессов и гибели нейронов (Педаченко Е.Г., 1999; Камчатнов П.Р. и др., 2005).

Профилактика и лечение сосудистых заболеваний головного мозга, и особенно ишемических поражений, является весьма актуальным и привлекает специалистов разного профиля. Наиболее опасной для жизни является ишемия головного мозга и постише-мический период (Верещагин Н.В., Гулевская Т.С. и соавт.,2000). Фармакопрофилактика заключается в назначении фармакологических средств, являющихся составной частью комплекса профилактических мероприятий и предусматривает коррекцию метаболических сдвигов, окислительно-восстановительных процессов, регуляцию эмоциональной сферы и вегетативных функций.

В настоящее время достаточно большое внимание привлекают различные вещества и соединения на основе растительных объектов.

Препараты боярышника используются для лечения нарушений сердечно-сосудистой системы и мозгового кровообращения. Наиболее активно его фармакодинамические свойства стали изучаться в прошлом веке, к концу которого были исследованы эффекты боярышника как сердечного и успокаивающего средства, с успешностью применяли для лечения стенокардии и других форм ИБС. В литературе накоплен широкий опыт его применения при повышенном артериальном давлении, неврозах сердца, нарушениях сердечного ритма (в основном тахикардического характера). Однако в литературе мы не нашли данных о влиянии боярышника на бодрствующих животных. Одной из задач наших исследований явилось оценка влияния различных фракций боярышника на системную гемодинамику. По литературным данным, наиболее важным проявлением боярышника является некоторое усиление сокращение сердечной мышцы и вместе с тем, уменьшение ее возбудимости [О.С.Медведев и соавт.,1986].

Ранее проведенными исследованиями выявлено, что действующие вещества боярышника понижают возбудимость ЦНС и сердечной мышцы, способствуют повышению сократимости последней, улучшению коронарного и мозгового кровообращения, нормализации сердечного ритма, устраняют головокружение. Благодаря наличию тритерпеновых соединений и флавоноидов оказывает спазмолитическое действие, избирательно расширяя сосуды сердца и головного мозга; гипотензивное действие; способствует нормализации венозного давления, улучшает функции сосудистых стенок. В экспериментальных исследованиях показано, что гале-новые препараты боярышника и тритерпеновые гликозиды оказывают выраженное антиатеросклеротическое действие.

Настои и экстракты плодов и соцветий боярышника обладают спазмолитическими свойствами, избирательно расширяя коронарные сосуды и сосуды головного мозга. Это позволяет направленно использовать препараты растения для улучшения снабжения кислородом миокарда и нейронов головного мозга. Спазмолитический, гипотензивный эффекты препаратов связывают с наличием в растении тритерпеновых соединении и флавоноидов.[С.Я.Соколов,

И.П.Замотаев, 1991].

Экспериментальные исследования на животных показали, что экстракт боярышника малотоксичен, оказывает стимулирующее действие на утомленное сердце, понижает артериальное давление, в больших концентрациях расширяет периферические сосуды и сосуды внутренних органов

С целью более рациональной утилизации лекарственного сырья была исследована возможность переработки и дальнейшего использования многотоннажных отходов плодов боярышника кроваво-красного (Crataegus sanguinea) после получения настойки. Больше всего в шроте содержится сапонинов - 4,7%. В состав водных экстрактов входят в большом количестве полисахаридно-белковые комплексы, свободные сахара (глюкоза, фруктоза, галактоза, рамноза, арабиноза, рибоза), аминокислоты. Помимо органических соединений шрот содержит значительные количества минеральных веществ - кальция, калия, магния, натрия и фосфора.

Для изучения фармакологической активности использовались фракции плодов боярышника №2, №5, №6, №7, №8 (лабораторные шифры), предоставленные кафедрой органической химии (зав. каф. - проф. Э.Т.Оганесян).

Исследуемые фракции № 2 и № 5 (из шрота плодов боярышника кроваво-красного) вводились перорально в виде водного раствора. Фракция № 2 в дозах 325,0 мг/кг, 32,0 мг/кг и 3,0 мг/кг и фракция №5 в дозах 240,0 мг/кг, 24,0 и 2,5, мг/кг вводились после записи исходных значений эксперимента. Указанные дозы рассчитывали, учитывая LD50 - 1/10, 1/100 и 1/1000.

Контролем являлось влияние введения 0,9% физиологического раствора, вводимого в эквивалентном объеме на указанные параметры - ОСМК и САД. В качестве препарата сравнения использовали настойку боярышника (упаренную от спирта). Фармакологический скрининг исследуемых фракций выявил выраженную гипотензивную активность 40% - го этанольного извлечения. Исследования проводились на бодрствующих нормотензивных крысах. Снижение артериального давления наблюдалось уже на 5-й минуте опыта и достигало максимума на 60 минуте. Следует отметить, что падение давления происходило плавно без резких скачков. Под влиянием этой же фракции происходило достоверное снижение частоты сердечных сокращений. Брадикардический эффект наблюдали с 5 по 60 мин регистрации гемодинамических параметров.

Изучение дозозависимого однократного влияния шрота из фракции боярышника № 2 в дозах 325,0; 32,0; и 3,0 мг/кг на динамику объёмной скорости МК, САД наркотизированных животных * показало, что наименьшее влияние на скорость мозгового кровотока оказала доза 32,0 мг/кг, оказавшая достоверное снижение скорости МК (на 9,0-14,6%) с 5-60 мин относительно исходных и контрольных данных.

При однократном введении фракции № 5 во всех исследуемых дозах 240,0 ,24,0 и 2,5 мг/кг у наркотизированных крыс наблюдалось резкое значительное снижение скорости МК с 5 по 60 мин эксперимента (в среднем на 20,2 - 60,0%) относительно исходных значений и контрольных значений.

Системное артериальное давление снижалось достоверно (на 15,2-23,9%) по отношению к исходным данным, контрольным опытам.

Сравнительный анализ, полученный в ходе проведенных фармакологических исследований, показал необходимость дальнейшего более углубленного изучения фракции №2 шрота боярышника на центральную гемодинамику и мозговой кровоток при патологии.

На основании полученных данных (доза-эффект) в качестве дальнейшего изучения выбрана фракция № 2 шрота боярышника в дозе 32,5 мг/кг, оказавшая наименьшее снижение скорости мозгового кровотока, по сравнению с контрольными опытами. Учитывая полученные данные, выбранная доза наиболее интересна для дальнейшего изучения.

Таким образом, данные эффекты шрота №2 из экстракта плодов боярышника можно считать положительными, так как в условиях экспериментальной нормы не вызывает существенных изменений церебральной гемодинамики.

Наибольшее внимание привлекают препараты, которые являются корректорами нарушений мозгового кровообращения и нормализуют его в постишемический период .Трудно провести грань между нейропротекцией и репаративной терапией. Большинство вторичных нейропротекторов обладают и нейрорепаративны-ми свойствами. Все нейротрофические факторы, модуляторы функционального состояния мембран и рецепторов (ганглиозиды, флавоноиды, сапонины, гесперидины), эндогенные регуляторы (нейропептиды) оказывают мощное влияние на выраженность восстановительных процессов, что объясняет преобладание у большинства из них клинического воздействия на очаговый неврологический дефект (в отличие от первичных нейропротекторов). В тоже время преимущественно «репаративные» средства могут оказывать и некоторое нейропротективное действие. Таким образом, выделение «репаративной» терапии носит весьма условный характер, подчеркивая лишь важность этой терапевтической стратегии. Полученные данные коррелируют с выявленным защитным эффектом изучаемых веществ в условиях циркуляторной и гипоксиче-ской гипоксии мозга. Теоретически метаболические эффекты изучаемых веществ разнообразны, их можно сгруппировать в следующие аспекты: а) быстрое влияние на окислительно-восстановительные процессы и б) энергетический обмен и отсроченное регенераторно-репаративное действие.

Установлено, что фракция №2 шрота из экстракта боярышника усиливает коронарное кровообращение в постишемическом периоде, улучшает процессы постишемического периода, снижает фазу гиперперфузии и сглаживает фазу гипоперфузии (невосстановления мозгового кровотока). По нашему мнению, данный эффект обуславливается влиянием суммы флавоноидов шрота боярышника.

В контрольных опытах исходные значения ОСМК и САД были соответственно равны: 106,9 ± 5,7 мл/100г/мин, 123,0 ± 1,4 мм рт. ст.

Фракция № 2 в дозе 32,0 мг/кг оказывала мягкое снижение системного артериального давления (21,0-29,5%) и объёмной скорости мозгового кровотока (в среднем на 20,3 - 25,7%). Данные достоверны на 30-60 мин записи экспериментов. Отмечено, что шрот из фракции № 2 в дозе 325,0 мг/кг вызывал резкое угнетение функций сердечно-сосудистой системы (ОСМК и САД).

Объёмная скорость мозгового кровотока при однократном пероральном введении фракции № 2 в дозе 32,5 мг/кг достоверно снижалась (на 17,8-24,8%) относительно исходных данных с 15-60 мин, системное артериальное давление достоверно снижалось относительно исходных и контрольных значений (от 6,6 до 29,5%) с 15 мин и до конца эксперимента. Под влиянием настойки боярышника наблюдалось достоверное снижение объёмной скорости мозгового кровотока (в среднем на 30,7-37,3%) относительно исходных и контрольных значений.

При сравнительном анализе выявлено, что при влиянии настойки боярышника и фракции №2 в дозе 32,5 мг/кг в условиях экспериментальной нормы менее выраженное снижение скорости мозгового кровотока отмечено при введении фракции №2.

В опытах на наркотизированных крысах при экспериментальной норме однократное введение фракции № 2 (шрота из плодов боярышника) в дозе 32,0 мг/кг, вызывает снижение мозгового кровотока, с одновременным, незначительным снижением системного артериального давления.

Для медикаментозных профилактических вмешательствах при вторичной профилактике обычно используют клинический опыт и клинические схемы применения лекарственных средств, только более продолжительное время.

Представлял интерес сравнительного изучения настойки боярышника в сравнении с фракцией №2 при профилактическом введении (пероральное введение животным исследуемых объектов в течение 14 дней) в условиях ишемического инсульта.

Профилактическое введение фракции №2 шрота боярышника уменьшает снижение скорости мозгового кровотока и системного артериального давления при экспериментальном ишеми-ческом инсульте подобно действию настойки боярышника, достоверное относительно контрольных опытов, что перспективно при профилактике патологии инсульта мозга.

Доказательством экспериментального ишемического инсульта являются цитовазальные взаимоотношения в головном мозге через 48 часов после моделирования аутотромбоза правой сонной артерии.

При макроскопии головного мозга в области правой геми-сферы виден участок, где контуры серого и белого вещества размыты и имеют нечеткие границы. Описанный участок локализуется ближе к поверхности вещества энцефалона. В левом полушарии, визуально заметно, равномерное темно-диффузное окрашивание пиальных сосудов, тогда как правая гемисфера выглядит более бледной (обесцвеченной) в отличие головного мозга интакт-ных животных.

При микроскопическом исследовании в субстанции головного мозга, ближе к кортикальной зоне, заметен интенсивно-красный очаг ее деструкции, который, скорее всего, образован в результате слияния нескольких фокусов повреждения.

В очагах альтерации уменьшено количество клеточных элементов, вплоть до полного их исчезновения. Чаще здесь видны «осколки» базофильного материала, деформированные или упло-щенно-веретенообразные ядерноподобные структуры, а также единичные клетки глии с признаками кариопикноза. В некоторых участках сохраняются тени сосудов (vaso vasorum), главным образом по периферии очага деструкции. Оксифильная краевая зона или зона коагуляции в этой серии опыта слабо выражена. Там, где она заметна, оксифильное вещество либо гомогенно-бесструктурное, либо мелко-глыбчатое.

По периферии очага повреждения в большинстве сохранив шихся нервных клеток заметно набухание цитоплазмы и гомогенизация ядерного материала. В некоторых случаях клетки приобретают пикноморфный вид («темные нейроциты»). В отдельных нейроцитах контуры их тела неотчетливые, плохо воспринимают красители и имеют перинуклеарную вакуолизацию цитоплазмы. Выраженной активной микроглиальной (фагоцитарной) реакции вокруг очагов альтерации в этой серии опытов не обнаружено. В участках оксифилии и в нейропиле можно встретить единичные аксональные шары. Этот микроморфологический признак свидетельствует о деградации миелина в структурных компонентах нервных проводников ЦНС.

У животных с моделированным аутотромбозом правой внутренней сонной артерии в веществе головного мозга, судя по макро - микроморфологическим данным, через 48 часов формируется очаг некроза коагуляционного характера, в ареал которого вовлекаются не только нервные клетки, но и проводящие пути ЦНС. В этой ситуации не обнаружено активной компенсаторной (в ответ на повреждение) микроглиально-макрофагальной реакции. Течение процесса альтерации, вероятно, усугубляется выраженными нарушениями кровоснабжения серого вещества головного мозга на уровне его гемомикроциркуляторных звеньев.

Таким образом, при макро- и микрокопировании наблюдалось значительное изменение гистологической картины в мозге крыс после внутрикаротидного введения аутотромбов, что подтверждает наличие ишемического очага.

Учитывая известный седативный эффект настойки боярышника представляло интерес изучение влияния всех полученных фракций на функции центральной нервной системы исследовали методом « Открытого поля », предложенного Холлом. Все фракции в дозе 100 мг/кг снижали уровень тревожности крыс и их поисковую активность, что характерно для седации.

Исследовали влияние фракции №2 из шрота плодов боярышника на изменение клинических и биохимических показателей крови экспериментальных животных в норме и при ишемии мозга в сравнении с физиологическим раствором и густым экстрактом из настойки плодов боярышника. В крови животных, получавших физиологический раствор, подверженных ишемии, отмечалось достоверное повышение содержания эритроцитов (+6,89% при р<0,02). Профилактическое введение фракции №2 препятствовало изменению данного показателя - он достоверно не отличался от контроля первой серии. Введение препарата сравнения густого экстракта из настойки боярышника оказывало такое же действие. Таким образом, животные, получавшие профилактически фракцию №2, не имели достоверных отличий от показателей групп контрольных животных без ишемии, получавших физиологический раствор. Содержание гемоглобина у ишемизированных животных, получавших настойку боярышника, также достоверно не отличалось от показателей здоровых животных. Эти полученные данные свидетельствуют о нормализующем влиянии биологически активных соединений на показатели картины крови у экспериментальных животных. Профилактическое введение фракции №2 (суммарное извлечение из шрота плодов боярышника) и густого экстракта из настойки плодов боярышника предотвращают увеличение содержания гемоглобина, вызванное ишемией мозга.

Введение фракции №2 и густого экстракта из настойки плодов боярышника уменьшает гипокеическое воздействие на систему эритропоэза, возникающее после билатеральной окклюзии общих сонных артерий и уменьшает повышение содержания эритроцитов, гемоглобина. Ишемия мозга вызывает уменьшение осмотической резистентности эритроцитов (-5,13%) однако без статистической достоверности. Введение фракции №2 препятствует изменению данного показателя (-2,56%). Введение густого экстракта из настойки плодов боярышника влияния на изменение данного показателя не обнаружило. Ишемия мозга вызвала повышение относительного содержания палочкоядерных нейтрофилов в периферической крови (+19,23%, относительно контроля первой серии), однако недостоверно. Профилактическое введение фракции и настойки боярышника в условиях ишемии мозга достоверного влияния на эти показатели не оказали.

Введение фракции №2 препятствовало повышению содержания глюкозы в сыворотке при ишемии - показатель повысился на 28,13% (р<0,001 относительно контрольных групп обеих серий). Введение густого экстракта из настойки плодов боярышника оказало еще более выраженное влияние - показатель повысился на 2,89% относительно контроля первой серии при р<0,01, и относительно контроля второй серии р<0,001.

Таким образом, профилактическое введение исследуемых веществ понижает содержание глюкозы в крови как у интактных животных, так и в условиях ишемии мозга. Это влияние более выражено у густого экстракта из настойки плодов боярышника Полученные данные коррелируют с выявленным защитным эффектом изучаемых веществ в условиях циркуляторной и гипоксиче-ской гипоксии мозга. Теоретически метаболические эффекты изучаемых веществ разнообразны, их можно сгруппировать в следующие аспекты: а) быстрое влияние на окислительно-восстановительные процессы и б) энергетический обмен и отсроченное регенераторно-репаративное действие [Devuyst G. Neurol Neurosurg Psychiatr 1999; 67; 419-427].

Установлено, что фракция №2 шрота из экстракта боярышника усиливает коронарное кровообращение в постишемическом периоде, улучшает процессы постишемического периода, снижает фазу гиперперфузии и сглаживает фазу гипоперфузии (невосстановления мозгового кровотока). По нашему мнению, данный эффект обуславливается влиянием суммы флавоноидов шрота боярышника.

Таким образом, результаты проведенного нами исследования свидетельствуют, что шрот №2 из плодов экстракта боярышника оказывает церебропротекторный эффект, примерно равный эффекту официнальному препарату - настойке боярышника. Следовательно, шрот №2 (из экстракта плодов боярышника) в дозе 32,5 мг/кг представляет несомненный интерес для дальнейших клинических исследований при ишемических состояниях мозга.

Список литературы диссертационного исследования кандидат фармацевтических наук Ляхова, Наталья Сергеевна, 2008 год

1. Верещагин, Н.В. Патология головного мозга при атеросклерозе и артериальной гипертонии/ Н.В. Верещагин. В.А. Моргунов. Т.С. Гулевская- М.,1997. 228 с.

2. Обзор подходов к терапии острого инсульта: прошлое, настоящее и будущее / М. Фишер и др.//Журн. неврол. психиатрии. Инсульт (прилож к журн).- 2001 Вып. 1 - С.2-23.

3. Folkow, В. How hypertension develops: the latest theory / B. Folkow // Am. in Mid-life Male. 1990. - Vol.11. - P. 3 - 4.

4. Изменения ренин-ангиотензин-альдостероновой системы и иммунологических показателей при эссенциальной и симптоматической артериальной гипертензии/ Б.И. Шулутко и др. // Клинич. медицина. 1993. - Т.71, N 6. - С.24-27.

5. Сердюк ,И.Е. Гемодинамические показатели у больных с ише-мическим инсультом и хронической ишемической болезнью мозга/И.Е.Сердюк и др.человек и лекарство сб. материалов

6. Рос. Нац. Конгр. (тез. докл) 14-18 апр. 2008 г. М., 2008 -С. 416-417.

7. Primary prevention of ischemic stroke: a statement for healthcare professionals from the Stroke Council of the American Heart Association/ Goldstein L.B. et al.// Circulation -2001- Vol, 103, №163, P 135-137.

8. Артериальные гипертензии / С.Б. Шустов и др.. СПб.: Спец. Лит., 1997.-320с.

9. PROGRESS Management Committee. Blood pressure lowering for the secondary prevention of stroke: rationale and design for PROGRESS (Perindopril Protection Against Recurrent Stroke Study)// J. Hypertens 1996- Vol, 14, №. 2- P 41-46.

10. Collins, R. Blood pressure, antihypertensive drug treatment and the risk of stroke and coronary heart disease / Collins R., MacMahon S. // Br. Med. Bull.-1994.-N.50.-P.277-298.

11. Гогин, E.E. Гипертоническая болезнь / E.E. Гогин M., 1997.-C 400.

12. Шведов, Г.И.Анализ структуры фармакотерапии больных артериальной гипертензией/Г.И. Шведи др.человек и лекарство сб. материалрв Рос. Нац. Конгр. (тез. докл) 14-18 апр. 2008 г. -М„ 2008 -С. 368.

13. Основы физиологии человека: в 2 т. /под ред. Б.И. Ткаченко.-СПБ, 1994.-Т.1 .-566с.

14. Гаевый, М.Д. Основы клинической фармакологии и фармакотерапии / М.Д. Гаевый. -и др..М »Альянс В».-2002. 815с.

15. Акопян,. В.П. Гипокинезия и мозговое кровообращение /В.П. Акопян-М.: Медицина,1999.-240с.

16. Исмагилов М. Ф. Нарушение мозгового кровообращения:организация и перспективы развития помощи больным / М. Ф. Исмагилов //Казанский медицинский журнал. 2003. - Т. 84, N 6. - С. 429-432.

17. Зотова Н. П. Цереброваскулярные заболевания: медико-социальные аспекты / Н. П. Зотова //Здравоохранение Дальнего Востока. 2004. - N 4. - С. 104-105.

18. Струков, А.И. Патологическая анатомия /А.И. Струков. В.В. Серов М.: Медицина, 1993. - 668с.

19. Серов, В.А. Соответствие врачебных назначений реальной практике приема гипотензивных препаратов/В. А.Серови др.человек и лекарство сб. материалрв Рос. Нац. Конгр. (тез. докл) 18-22 апр. 2008 г. М., 2005 -С. 235.

20. Агаджанян, Н.А.Физиология человека-и др..М. «Медицинская книга», Н. Новгород. «Издательство НГМА,-2001». 527с.

21. Гусев, Е.И. Динамика функционального состояния головного мозга при острой локальной ишемии /Е.И. Гусев// Пат. физиология и эксперим.терапия.-1992.-№4.-С.44-46.

22. Инсульт: практическое руководство для ведения больных / Ч.П. Ворлоу и др..-Спб.: Политехника, 1998.- 629с

23. Владимиров,В.И. Влияние риколина на напряжение кислорода в мозговой ткани в эксперименте/В.И.Владимирови др.человек и лекарство сб. материалов Рос. Нац. Конгр. (тез. докл) 3-7 апр. 2006 г. М., 2006 -С. 505

24. Фишер М. Нейропротекция при остром ишемическом инсульте / М. Фишер //Инсульт: приложение к Журналу неврологии и психиатрии . 2003. - N 9. - С. 41-43. - Библиогр.: с. 43.

25. Судаков, К.В. Нормальная физиология /К.В. Судаков- М.:1. МИА, 1999. -С.193-197.

26. Гришина, Т.Р. Зависимость цереброваскулярных эффектов магне^Вб от солевого режима на модели ишемии мозга/Т.Р.Гришинаи др.человек и, лекарство сб. материалов Рос. Нац. Конгр. (тез. докл) 3-7 апр. 2006 г. М., 2006 -С. 515.

27. Нейротрансмиттерная организация двигательных систем головного и спинного мозга в норме и патологии / В.П. Бархато-ва и др.// Журн. неврологии и психиатрии. 2004. - №8. - С. 77-82.

28. Карпов Ю. Некоторые аспекты профилактики мозговых ин сультов / Ю . Карпов, Е. Сорокин //Врач. 2004. - N 1. - С. 43-45. - Библиогр.: с. 45.

29. Шмидт, Е.В. Сочетанная патология сердца и мозга. Сосудистые заболевания нервной системы. /Е.В. Шмидт М.: Медицина, 1975.-С. 348-357.

30. Бархатова, В.П. Нейротрансмиттерная организация двигательных систем головного и спинного мозга в норме и патологии /

31. B.П. Бархатова, И.А. Завалишин // Журн. неврологии и психиатрии. 2004. - №8. - С. 77-82.

32. Исследование биохимических особенностей плодов боярышника, интродуцированных в Беларуссии /И.И.Чекалинская и др.//Интродукция растений и оптимизация окружающей среды средствами озеленения. Минск, 1977. - С. 187-193.

33. Гликофлаваноиды Crataegus monogyna и С. Pentagyna/ Н.Николов и др.// Химия природ соединений.-1973.-№1,1. C.116-117.

34. Кратезид новый флавонолгликозид из Crataegus monogyna и С. Pentagyna /Н.В.Николов и др.//Химия природ, соединений.-1973.-№2.-С. 148-1 51.

35. Recent investigations grataegus Flavonoids/ N.Wagner, et al.// Flavonoids and Bioflavonoids. Proc. Int. Bioflavonoid Symp.: 6 Hyng. Bioflavonoide symp.- Munisch. Sept.6-9 1981.-Budapest, 1982.-S.325-344.

36. Полисахариды плодов Crataegus orientalis / В.В.Кулиев и др.// Химия природ, соединений. 1982. - №5.-С.647.

37. Полисахариды плодов Crataegus Meyeri / В.В. Кулиев и др. // Химия природ, соединений . 1984. - №1. - С.104.

38. Стериновые и тритерпеновые гликозиды Crataegus pentagina / Г.Б. Искандеров и др. //Химия природ, соединений. 1974. -№1. С.103-104

39. Baechlert, L. Chemische unteresuchungen uber die Fruchte von Crataegus oxyacantha /L. Baechlert, L.- Basel: Diss. Univtrsital, 1967. P. 46-47.

40. Чекалинская, И.И. Сырапушчинская В.А. Трытэрпеноиды у плодах 1ртрадуцированных у Веларуссп вщоу сем. Rosaceae Juss./ И.И Чекалинская. //Изв. АН ВССР. Сер. Биол. Наук. -1980.- № 4-С. 73-76.

41. Herbet, A. Auer wei dorn ais Arzneipflanse. /Herbet A. //Carinthia II. 1972.- № 8- P.228-233.

42. Акопов, И.Е. Важнейшие отечественные растения и их применение. /И.Е.Акопов Ташкент, 1986. - С. 28-36

43. Соколов,С.Я. Справочник по лекарственным растениям. / С.Я. Соколов. И.П. Заматаев. М.: Медицина, 1984 - С.662v/ 48. Турова, А.Д. Лекарственные растения СССР и их применение. /А.Д Турова. М.: Медицина , 1974. - 322с.

44. Турова, А.Д. Лекарственные растения СССР и их применения./Турова А.Д., Сапожникова Э.Н. М.: Медицина, 1982. -288с.j 50. Турова, А.Д. Лекарственные растения СССР и их применение:./ Турова А.Д 2-е изд., перераб. М.: Медицина. 1974. -С.197-198.

45. Соколов, С.Я. Справочник по лекарственным растениям: Фитотерапия. Справочник/ С.Я. Соколов Алма-ата: Казахстан,1991. 90с.

46. Hawthorn extract for treating chronic heart failure: metaanalysis of randomized trials/Pittler M.H. et al.// Am J Med.-2003- Vol. 115(7) № 585.- P 585-586.

47. Actions of standardized extracts of Crataegus berries on exercise tolerance and quality of life in patients with congestive heart failure. /Rietbrock N et al. ,// Arzneimittelforschung. -2001- Vol 51, №10 P 793-798.

48. Pittler, MH. Hawthorn extract for treating chronic heart failure: meta-analysis of randomized trials./ Pittler M.H., Schmidt K., Ernst E. //Am J Med. 2003- Vol 1 №114(8) - P. 665-674.

49. Fong, HH. Hawthorn. / Fong H.H., Bauman J.L. //J Cardiovasc Nurs. 2002- Vol 16, №4- P 1-8.

50. Сиверцева. И.И. Фармакологические исследования настойки боярышника./ И.И.Сиверцева// Бюл. эксперим. биологии, и медицины,- 1938. Т. 6.- С.452-453.

51. RInteraction study between digoxin and a preparation of hawthorn (Crataegus oxyacantha)./ Tankanow R. et al. //J. Clin Pharmacol. 2003- Vol 43, № 6-P. 637-42.

52. Гусейнов, Д.Я. Фармакология боярышника /Гусейнов Д.Я Баку, 1985. - 150с.

53. Гусейнов, Д.Я. Клиническое изучение боярышника / Д.Я. Гусейнов// Азерб. мед. журн. 1962. - № 7. - С.3-9.

54. Effects of extracts from flowering tops of Crataegus meyeri A. Pojark. on ischaemic arrhythmias in anaesthetized rats./ Garjani A et al.// Phytother Res.- 2000- Vol 14, №6- P. 428-31.

55. Eaton, LJ . Hawthorn extract improves chronic heart failure./Eaton LJ, Kinkade S.// J Fam Pract. 2003- Vol 52, №10 P. 753-754.

56. Research of the amounts of flavonoids accumulated in the crude drug of single-styled hawthorn/Jakstas V. et al.// Medicina.-2003-Vol. 39, № 2 P. 45-49.

57. Fong ,HH. Hawthorn./ Fong HH, Bauman JL//J Cardiovasc Nurs. 2002 -Vol. 16, №4-P. 1-8.

58. Hawthorn/ Chang Q. et al..// J Clin Pharmacol 2002-Vol 42, №6- P 605-612.

59. Promising hypotensive effect of hawthorn extract: a randomized double-blind pilot study of mild, essential hypertension./ Walker AF.fet al..// Phytother Res.- 2002.- Vol 161,№1. P 48-54.

60. Zapatero, JM. Selections from current literature: effects of hawthorn on the cardiovascular system./ Zapatero JM.// Fam Pract. 1999,- Vol. 16, №5 - P 534-538.

61. Weihmayr, T. Therapeutic effectiveness of Crataegus /Weihmayr T, Ernst E.// Fortschr Med. -1996 Vol 20, №114(1-2).- P. 27-9.

62. Schussler ,M. Myocardial effects of flavonoids from Crataegus species./ Schussler M, Holzl J, Fricke U.// Arzneimittelforschung.- 1995- Vol 45, №8 P 842-845.

63. Lievre ,M. Cardiovascular effects of hyperoside extracted from hawthorn in anesthetized dogs/Lievre M, Andrieu JL, Baconin A.// Ann Pharm Fr. 1985- Vol 43,№5- P. 471-477.

64. Min ,B. Hawthorn./ Min В ,White CM//Conn Med. 2004 - Vol 68, № 3.- P. 161-164

65. Rigelsky, JM. Hawthorn: pharmacology and therapeutic uses./ Rigelsky JM Sweet BV //Am J Health Syst Pharm.- 2002.-№59(5).- P. 417-422.

66. Носаль. M.A. Лекарственные растения и способы их применения в народе /Носаль И.М. Киев: Госмедиздат УССР, 1960. -256с.

67. Современная фитотерапи / под ред. И.И.Петкова София, 1988.- С. 46-49

68. Chang, WT., Hawthorn: potential roles in cardiovascular disease. / Chang WT, Dao J, Shao ZH// Am J Chin Med. 2005- № 33- P. 1-10

69. Pittler, MH. Meta-analysis of randomized clinical studies. Hawthorn extract for treatment of chronic cardiac insufficiencyio //Pittler MH, Schmidt K, Ernst E// Pharm Unserer Zeit. 2005- № 34(1) P. 66-71.

70. Brixius, K. The basis for treatment of cardiovascular diseases: cellular and molecular mechanisms of Crataegus extract/ Brixius К Willms S Schwinger RH// Pharm Unserer Zeit.- 2005 Vol 34, (1) - P. 48-51.

71. Ju ,LY. Crataegus oxyacantha (aubepine) in the use as herb medicine in France/ Ju ,LY // Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 2005 Vol 30, №8- P. 634-40.

72. Соколов,С.Я. Справочник по лекарственным растениям/ С.Я.Соколов. И.П. Замотаев.-М.:Медицина, 1984. 463с.

73. Pittler, МН. Hawthorn extract for treating chronic heart failure:meta-analysis of randomized trials./ Pittler M.H., Schmidt K., Ernst E. //Am J Med. 2003- Vol №114 №8 - P. 665-674.

74. Anti-inflammatory potential of flavonoid contents from dried fruitof Crataegus pinnatifida in vitro and in vivo./ Kao ES et al. //J. Agric Food Chem. 2005.- Vol. 26, №53(2)- P. 430-436.

75. Phenolic constituents and antioxidant capacities of Crataegus monogyna (Hawthorn) callus extracts./ Bahorun T. et al.. 2003- Vol. 47, №3 P 191-198.

76. Effect of a hawthorn extract on contraction and energy turnover ofisolated rat cardiomyocytes / Popping S. et al. //Arzneimittelforschung. -1995- Vol 45, №11-P.l 157-1161.

77. Veveris ,M. Crataegus special extract WS 1442 improves cardiacfunction and reduces infarct size in a rat model of prolonged coronary ischemia and reperfusion./ Veveris M, Koch E, Chatterjee SS.// Life Sci. 2004- Vol 27, № 74- P. 1945-1955.

78. Studies on hawthorn and its active principle. II. Effects oncultured rat heart cells deprived of oxygen and glucose./ Li LD et al. //J. Tradit Chin Med. 1984- Vol 4, №4- P. 289-292.

79. Piotti, LE. The therapeutic effect of hawthorn extract in myocardial hypoxia. / Piotti L.E., Ghiringhelli F., Locatelli GR //Med Klin. 1965.- Vol 31, №60 -P. 2142-2145.

80. Гусейнов, Д.Я. Влияние пятипестичного боярышника на холестериновый атеросклероз у кроликов /Д.Я.Гусейнов// Фармакология и токсикология . 1963.- №4-С.435-439.

81. Не, G. Effect of the prevention and treatment of atherosclerosis ofa mixture of Hawthorn and Motherworn/He G.I/ Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 1990 Vol 10, №6- P 361

82. Hawthorn fruit is hypolipidemic in rabbits fed a high cholesterol diet./ Zhang Z. et al.// J. Nutr. 2002- Vol 32,№1- P. 5-10.

83. Гусейнов, Д.Я. Влияние боярышника пятипестичного на биоэлектрическую активность коры головного мозга кроликов /Д.Я.Гусейнов// Фармакология и токсикология. -1964.-№4,-С. 394-396.

84. Antioxidant activity of Crataegus aronia aqueous extract used intraditional Arab medicine in Israel/ Ljubuncic P et al. // J Ethnopharmacol. 2005.- Vol. 18-P. 211-213

85. Antiviral and antioxidant activity of flavonoids and proanthocyanidins from Crataegus sinaica./ Shahat A.A. et al.// Planta Med. 2002,- Vol. 168, №6. - P. 539-541.

86. Hawthorn extracts inhibit LDL oxidation. /Quettier-Deleu С etal.// Pharmazie. 2003.- Vol 58, №8,- P.577-581.

87. Schussler,M. Myocardial effects of flavonoids from Crataegus species./ Schussler M, Holzl J, Fricke U. //Arzneimittelforschung.- 1995- Vol 45, №8- P. 842-845.

88. Phenolic extracts from meadowsweet and hawthorn flowers have antioxidative properties./ Sroka Z et al..- 2001.- Vol. 56, №9-10- P. 739-744.

89. Characterization of antioxidants present in hawthorn fruits./ Zhang

90. Z. et al.//J Nutr Biochem. 2001.- Vol 12, №3. -P.44-2.

91. Hawthorn extracts inhibit LDL oxidation./ Quettier-Deleu et al. //Pharmazie. 2003.- Vol. 58, №8. - P. 577-81.

92. Protective effect of hawthorn fruit on murine experimental colitis. /Fujisawa M. et al. // Am. J. Chin. Med. -2005. Vol.33, №2.-P. 167-80.

93. Endothelium-dependent relaxation induced by hawthorn extract in rat mesenteric artery./ Chen ZY et al. // Life Sci. 1998- Vol 63, № 22- P.1983-1991.

94. Anti-inflammatory potential of flavonoid contents from dried fruit of Crataegus pinnatifida in vitro and in vivo./ Kao ES et al. //J. Agric Food Chem. 2005- Vol. 26, №53(2)- P. 430-436.

95. Brixius ,K. The basis for treatment of cardiovascular diseases: cellular and molecular mechanisms of Crataegus extract/ Brixius K, Willms S, Schwinger R.H//Pharm Unserer Zeit. 2005.- Vol. 34, №1- P. 48-51

96. Effect of tincture of Crataegus on the LDL-receptor activity of hepatic plasma membrane of rats fed an atherogenic diet./ Rajendran S. et al..// Atherosclerosis. 1996-.Vol 123, №1-2-P. 235-241.

97. Schimtrt, G. Pharmacology of Crataegus substances; effect of triterpenic acids on circulatory system./ Schimtrt, G. Blomer H // Naunyn Schmiedebergs Arch Exp Pathol Pharmakol. -1953-Vol 217, №4- P. 337-347.

98. Шток, B.H. Лекарственные средства в ангиологии / В.Н.

99. Шток- М.: Медицина, 1984.-308 с.106 . Лысенко, Т.А. Влияние новых производных бензимидазола на системную и регионарную гемодинамику: автореф. дис. . канд.фармац.наук: 14.00.25/ Лысенко Татьяна Александровна. Пятигорск, 1999.-23 с

100. Многократные измерения параметров системной и регионарной гемодинамики у бодрствующих крыс /О.С.Медведев и др.// Физиол.журн.СССР.-1986.-Т.72, №5.-С.253-256.

101. Изучение центральной гемодинамики с использованием компьютерной программы «ВЕАТ»/М.Н. Ивашев и др.// Человек и лекарство: тез.докл. 4 Рос.нац.конгр.8-12 апр. 1997г.-М. 1997,- С.263.

102. Kido, М. An animal model of cerebral infarction homologous blood clot emboli in rast / M. Kido, A. Aoyama, S. Ichimori // Stroke.- 1993.-Vol. 13.,№ 4.- P.505-508.

103. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под. ред. В.П. Фисенко и др.- М.: Ремедиум, 2000,- С. 220-224.

104. Мурашев, А.И. Руководство по экспериментальной физиологии кровообращения / А.И. Мурашев, О.С. Медведев, С.А. Давыдова- Саратов: Изд-во Саратов.ун-та, 1992.-42с.

105. Роль оринтеровочного и оборонительного компонентов в поведении белых крыс в условиях «открытого поля» / С.А.Титов и др.// Журн.высш.нервн.деятельности им. Павлова.-1980.-Т.30, вып.4.-С.704-708.

106. Гистология: учеб.-./ под ред. Э.Г. Улумбекова, Ю.А. Челышева -2-е изд.,перераб. и доп.- М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001.-672 с.

107. Макарова, Н.В. Статистика в Excel: учеб. пособие /Н.В. Макарова. В .Я. Трофимец М.: Финансы и статистика, 2002. -368с.

108. Ван дер Варден, Б.Л. Математическая статистика / Б.Л. Ван дер Варден.-М.: Изд-во иностр. лит., I960.-56 с.

109. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ /под. ред. В.П.Фисенко.-М.: Медицина, 2000.-С. 18-22.

110. Методические рекомендации по изучению общетоксического действия фармакологических средств. Утв. 25.12.97// Вестн. Фармакоп. Ком.- 1998. № 1. - С. 27-32.

111. Меркулов, Г. А. Курс патогистологической техники. /Г.А.Меркулов-Л.: Медицина., 1969.-424 с.

112. Гипоксии. Адаптация, патогенез, клиника / под ред. Ю.Л.

113. Шевченко. СПб.: ЭЛБИ, 2000. - 384с.

114. Плотников, М.В. Антиокислительные эффекты антигипоксан-тов при ишемии мозга / М.В. Плотников, Е.А. Кобзева, Т.М. Плотникова // Бюл. экспирим. биологии и медицины. 1992. -№5. - С. 504-506.

115. Факторный анализ поведения крыс в тесте открытого поля /АЛ. Map-кель и др.//Журн. высш. нервн. деятельности им. Павлова.-1988.-Т.ЗЗ, вып.5.-С.855-863.

116. Лесиовская.Е.Е. Фармакотерапия с основами фитотерапии: учеб. пособие /Е.Е.Лесиовская. Л.В.Пастушенков. 2-е изд.-М.: ГЭОТАР-МЕД, 2003. - 592с.