Эпидемиологический надзор за инфекциями torch-группы на основе современных технологий лабораторной диагностики тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.02.02, доктор наук Марданлы Сейфаддин Гашим оглы
Марданлы Сейфаддин Гашим оглы
доктор наук
2016
- Специальность ВАК РФ14.02.02
- Количество страниц 234
Оглавление диссертации доктор наук Марданлы Сейфаддин Гашим оглы
Стр.
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА, НАДЗОР И ДИАГНОСТИКА ИНФЕКЦИЙ TORCH-ГРУППЫ
1.1. Эпидемиологическая характеристика инфекций TORCH-группы
1.2. Распространенность инфекций TORCH-группы и эпидемиологический надзор за ними
1.3. Методы и средства клинической лабораторной диагностики инфекций TORCH-группы
1.4. Обеспечение эффективности лабораторного мониторинга инфекций TORCH-группы
1.4.1. Использование технологии иммунологических биочипов
1.4.2. Видеоцифровая регистрация результатов иммунохимических реакций
1.4.3. Комплекс приборов и методов клинико-лабораторной диагностики
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы и методы эпидемиологических исследований
2.2. Материалы и методы клинических лабораторных исследований
2.2.1. Общая характеристика материалов и методов исследований
2.2.2. Методы культивирования возбудителей и выделения антигенов
2.2.3. Методические подходы, использованные при разработке и конструировании тест-систем и диагностикумов
2.2.3.1. Иммуноферментные тест-системы
2.2.3.2. Диагностикумы для РИФ
2.2.3.3. Наборы для иммунного блоттинга в формате Вестерн-блот
2.2.4. Рабочие панели сывороток
2.2.5. Использованные тест-системы и диагностикумы
2.2.6. Технология иммунологических биочипов
2.2.7. Видеоцифровая регистрации результатов исследований
2.3. Статистические методы
ГЛАВА 3. СОСТОЯНИЕ УЧЕТА ЗАБОЛЕВАЕМОСТИ, ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ ПРОЯВЛЕНИЯ И ЗНАЧИМОСТЬ ИНФЕКЦИЙ TORCH-ГРУППЫ В РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
3.1. Динамика значимых демографических показателей
3.2. Токсоплазмоз
3.3. Краснуха
3.4. Цитомегаловирусная инфекция
3.5. Герпетическая инфекция
3.6. Алгоритм серологического мониторинга
ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА НАБОРОВ РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ДИАГ-
НОСТИКИ ИНФЕКЦИЙ TORCH-ГРУППЫ ИММУНОХИМИ-
ЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ
4.1. Разработка иммуноферментных тест-систем для диагностики ток-
соплазмоза, краснухи, цитомегаловирусной и герпетической инфекций
4.1.1.Определение общих принципов конструирования тест-систем
4.1.2. Выбор оптимального состава тест-систем
4.1.3. Сравнительные доклинические испытания тест-систем
4.1.4. Испытания тест-систем на клинических материалах
4.2. Разработка наборов для диагностики токсоплазмоза, цитомегало-
вирусной и герпетической инфекций с помощью реакции иммуноф-
люоресценции
4.3. Разработка наборов для диагностики токсоплазмоза, краснухи, ци-
томегаловирусной, герпетической инфекций и сифилиса методом им-
мунного блоттинга в формате Western-blot
4.4. Разработка наборов реагентов для диагностики инфекций TORCH-
группы с использованием технологии иммуночипов
4.4.1. Выбор оптимальной концентрации антигена
4.4.2. Технология приготовления и применения иммуночипов для вы-
явления антител класса G к антигенам возбудителей инфекций
TORCH-группы
4.4.3 Технология приготовления и применения иммуночипов для вы-
явления антител класса М к антигенам возбудителей инфекций
TORCH-группы
4.4.4. Выбор формата ИЧ для скрининговых исследований при диаг-
ностике инфекций TORCH-группы
ГЛАВА 5. ОПТИМИЗАЦИЯ ИММУНОХИМИЧЕСКИХ МЕТО-
ДОВ И РАЗРАБОТКА КОМПЛЕКСА РЕАГЕНТНЫХ И
ПРИБОРНЫХ СРЕДСТВ КЛИНИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРНОЙ
ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИЙ TORCH-ГРУППЫ
5.1. Совершенствование технологии регистрации и учета результатов
иммунохимических исследований
5.2. Создание комплекса иммунохимических реактивных и приборных
средств лабораторной клинической диагностики инфекций TORCH-
группы
ГЛАВА 6. ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ СЕРОЛОГИЧЕСКОГО
МОНИТОРИНГА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ НОВЫХ СРЕДСТВ
ДИАГНОСТИКИ НА ОТДЕЛЬНЫХ ТЕРРИТОРИЯХ РОССИЙ-
СКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ПРИЛОЖЕНИЕ
Рекомендованный список диссертаций по специальности «Эпидемиология», 14.02.02 шифр ВАК
Эпидемиология внутриутробных инфекций плодов и новорожденных и оптимизация системы слежения за ними2004 год, доктор медицинских наук Землянский, Олег Алексеевич
Эпидемиологическая характеристика инфекций, протекающих с TORCH - синдромом, у новорожденных0 год, кандидат наук Осьмирко, Татьяна Владимировна
Эпидемиологическая и клинико-иммунологическая характеристика актуальных оппортунистических инфекций в группах высокого риска2006 год, кандидат медицинских наук Запарий, Наталья Сергеевна
Внутриутробные инфекции, клинико-морфологическая оценка современной специфической диагностики2009 год, доктор медицинских наук Островская, Ольга Васильевна
Токсоплазмоз при ВИЧ-инфекции: эпидемиология, диагностика и профилактика.2014 год, кандидат наук Аббазова, Евгения Витальевна
Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Эпидемиологический надзор за инфекциями torch-группы на основе современных технологий лабораторной диагностики»
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность исследования. Внутриутробные инфекции (ВУИ) являются одной из приоритетных проблем здравоохранения во всем мире и сохраняют свою актуальность для Российской Федерации. Это обусловлено их широким распространением, негативным влиянием на течение беременности и родов, развитием патологии плода и новорожденного. В структуре смертности новорожденных ВУИ составляют от 6% до 70% (Шабунина-Басок Н.Р., 2005; Русакова Л.А., Хакназарова М.А., 2011; Shet A., 2011).
Особое положение среди ВУИ занимают инфекции TORCH-группы (Andre J.Nahmias, 1971): T (Toxoplasmosis — токсоплазмоз), О (Other diseases — другие инфекции, такие как сифилис, ВИЧ, ветряная оспа, опоясывающий герпес, хламидиоз, гонококковая инфекция, листериоз и др.), R (Rubella — краснуха), C (Cytomegalia — цитомегаловирусная инфекция - ЦМВИ) и H (Herpes simplex — инфекции, вызываемые вирусом простого герпеса 1 и 2 типов). Высокий удельный вес инфекций TORCH-группы сказывается как на демографической ситуации, так и на здоровье матери и ребенка.
В эпидемиологическом плане для инфекций этой группы характерна уби-квитарность, а также разнообразие механизмов, путей и факторов передачи возбудителей, что затрудняет реализацию профилактических и противоэпидемических мероприятий. Поскольку эффективные средства специфической иммунопрофилактики разработаны только для краснухи, восприимчивость населения к возбудителям TORCH-группы является высокой. Популяционный иммунитет, в основном, формируется как постинфекционный и не всегда обладает протектив-ной активностью. Кроме того, показана возможность пожизненного бессимптомного персистирования возбудителей инфекций TORCH-группы в организме человека, а, следовательно, наличие условий для поддержания эпидемического процесса неопределенно долгое время (Самохин П.А., 1987; Малышев Н.А. и др., 2001; Васильев В.В., 2004; Землянский О.А., 2004).
При этом эпидемический процесс TORCH-инфекций характеризуется отсутствием четко выраженной периодичности, сезонности и цикличности, поскольку главной мишенью возбудителей являются лица с иммунодефицитными состояниями. Наличие бессимптомных форм и невозможность дифференциальной диагностики манифестных форм только по их клиническим проявлениям стали причиной того, что данные официального учета заболеваемости инфекциями TORCH-группы не отражают их реальное распространение среди населения, что затрудняет своевременное принятие адекватных управленческих решений и проведение профилактических и противоэпидемических мероприятий.
Указанные особенности определяют необходимость совершенствования системы эпидемиологического надзора за инфекциями TORCH-группы среди населения, и, прежде всего, среди групп риска, к которым относятся женщины детородного возраста, беременные и новорожденные. Основой надзора должны стать современные чувствительные и специфичные методы лабораторной диагностики инфекций TORCH-группы, позволяющие своевременно выявлять маркеры активно текущей и латентной инфекции с целью дальнейшей разработки комплекса адекватных профилактических мероприятий.
Современные лабораторные технологии диагностики инфекционной патологии, основанные на иммунохимических методах исследования, позволяют оценивать наличие, уровень, авидность видоспецифических антител, что обеспечивает возможность проведения динамического наблюдения, оценки и прогнозирования течения эпидемического и инфекционного процессов (Адиева А.А. и др., 2009; Roberts C. et al., 2011).
Вместе с тем, существующее материально-техническое обеспечение лабораторной диагностики инфекций TORCH-группы не позволяет организовать эффективный мониторинг групп риска, прежде всего, по причине относительной затратности скрининговых методов исследования. Кроме того, отсутствуют унифицированные средства компьютерной регистрации и учета результатов, пригодные для всех используемых методов исследования. Сказывается также
необходимость применения наборов реагентов разных производителей, поскольку в настоящее время ни одна из отечественных фирм не выпускает весь перечень наборов, необходимых для лабораторной диагностики инфекций TORCH -группы. При этом, как показывает практика, существует неизбежность определенных расхождений результатов анализа одного и того же пула образцов с использованием тест-систем различных производителей.
Таким образом, проблема несоответствия между потребностями и возможностями надзора является актуальной и требует своего системного решения путем разработки научных, методических и организационных основ совершенствования его диагностической составляющей, позволяющей оценить реальную ситуация по инфекциям TORCH группы.
Цель работы: совершенствование информационно-диагностического блока системы эпидемиологического надзора за инфекциями TORCH-группы путем создания и внедрения в практику единого комплекса методических, реагентных и приборных средств клинической лабораторной диагностики инфекций TORCH-группы, оптимизирующих алгоритм обследования и наблюдения за группами риска.
Задачи исследования
1. Охарактеризовать современную ситуацию по инфекциям TORCH-группы на территориях отдельных регионов и Российской Федерации в целом по данным официальной статистики.
2. Определить научно-методические подходы к созданию комплекса современных реагентных и приборных средств клинической лабораторной диагностики инфекций TORCH-группы.
3. Разработать полный перечень наборов реагентов, необходимых для проведения скрининговых и подтверждающих лабораторных исследований с выбором адекватного способа регистрации и учета результатов.
4. Оптимизировать технологию и регламенты производства наборов реагентов для иммунохимической диагностики инфекций TORCH-группы с созданием научно-производственной базы для их промышленного выпуска.
5. Создать на основе результатов проведенных исследований Комплекс методических, реагентных и приборных средств лабораторной диагностики инфекций TORCH-группы.
6. Изучить истинную распространенность инфекций TORCH-группы среди населения отдельных регионов Российской Федерации при помощи разработанных для нужд серологического мониторинга наборов реагентов и диагностического оборудования.
Научная новизна
1. Представлены результаты анализа данных официальной статистики по заболеваемости инфекциями TORCH-группы в Российской Федерации. Установлены связанные с дефектами лабораторной диагностики значительные различия в максимальных уровнях регистрируемой заболеваемости токсоплазмозом и ЦМВИ в Российской Федерации, которые в 500-900 раз ниже аналогичных показателей в наиболее благополучных по этим инфекциям странах.
2. Определен оптимальный состав иммуноферментных тест-систем для выявления видоспецифических антител к возбудителям актуальных для Российской Федерации инфекций TORCH-группы - токсоплазмоза, краснухи, ЦМВИ и герпесвирусной инфекции.
3. Впервые разработаны отечественные наборы реагентов для диагностики инфекций TORCH-группы с помощью реакции иммунофлюоресценции и иммунного блоттинга.
4. Для повышения качества этиологической расшифровки инфекций ТОRCH-группы и реализации широкомасштабного сероэпидемиологического мониторинга групп риска разработан многофункциональный иммунохимический комплекс реагентных и технических средств клинической лабораторной диагностики.
5. Применение новых средств и методов лабораторной диагностики позволило повысить эффективность эпидемиологического надзора за инфекциями TORCH-группы с оценкой их реальной распространенности среди населения отдельных регионов Российской Федерации.
6. Показано несоответствие статистических показателей заболеваемости инфекциями TORCH-группы и их истинного распространения на отдельных территориях Российской Федерации на основании данных серологического мониторинга.
Практическая значимость
На основании проведенных исследований и полученных данных усовершенствован информационно-диагностический блок системы эпидемиологического надзора за инфекциями TORCH-группы за счет разработки и внедрения в практику комплекса современных реагентных и приборных средств клинической лабораторной диагностики.
Принципы разработки и функционирования комплекса реагентных и технических средств клинической лабораторной диагностики инфекции ТОRCH-группы носят универсальный характер и применимы в иммунохимической диагностике любой иной инфекционной патологии, т.е. могут быть использованы для совершенствования лабораторной диагностики различных инфекций.
Впервые в Российской Федерации предложены новые оригинальные методические подходы к видеоцифровой обработке результатов лабораторных исследований, обеспечивающие возможность создания соответствующих баз данных и возможность доступа к ним медицинских работников.
Зарегистрированы в Российской Федерации и успешно применяются в клинических лабораториях учреждений здравоохранения 13 наборов реагентов для диагностики инфекций TORCH-группы иммунохимическими методами, для которых разработаны производственные регламенты и организовано их промышленное производство. Разработаны лабораторные регламенты для 27 наборов реагентов, находящиеся на различных этапах регистрации.
Разработаны, внедрены в производство и клинико-лабораторную практику аппаратно-программные комплексы "Эксперт-Лаб-TORCH" и "Диагем-TORCH", специализированные для иммунохимических методов диагностики инфекций TORCH-группы. Системы обеспечивают компьютерную обработку результатов исследований, полученных в видеоцифровом формате, что позволяет формировать соответствующие компьютерные базы данных с возможностью передачи необходимой информации любым участникам надзора.
Разработаны и внедрены в исследовательскую практику и учебно-образовательный процесс учебно-методические пособия по диагностике инфекций TORCH-группы.
Внедрение результатов работы
Разработанный комплекс методических приемов лабораторной диагностики инфекций TORCH-группы внедрен в практику работы Липецкого, Самарского и Калужского областных центров по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями (Акты внедрения от 15.11.2013 г., 03.12.2013 г., 21.01.2014 г.).
Все зарегистрированные в Российской Федерации диагностические наборы, разработанные в ходе настоящего исследования, используются в практике работы КЛД учреждений здравоохранения во всех регионах страны.
Методические рекомендации, изложенные в 7 учебно-методических пособиях по этиологии, эпидемиологии, патогенезу, клинике, лабораторной диагностике и профилактике инфекций группы TORCH (2006-2011 г.г.) используются в учебно-образовательном процессе на кафедре клинической лабораторной диагностики медико-биологического факультета РМАПО МЗ РФ, а также на кафедре эпидемиологии Института профессионального образования ГБОУ ВПО Первый МГМУ им.И.М.Сеченова.
Новые подходы и методические приемы, использованные в работе, защищены 10 патентами РФ (2012-2015 гг.).
Регламенты производства всех разработанных в ходе исследования диагностических наборов внедрены в практику работы предприятия ЗАО "ЭКОлаб".
Положения, выносимые на защиту:
- обоснованы подходы к оптимизации информационно-диагностической подсистемы эпидемиологического надзора за инфекциями TORCH-группы путем внедрения в практику современных технологий лабораторной диагностики этих инфекций;
- создана и внедрена в практику совокупность иммунохимических методов, позволяющих обеспечить широкомасштабный скрининг групп риска и необходимую эффективность подтверждающих исследований;
- возможность эффективного скрининга групп риска обеспечивается использованием технологии мультиплексного фосфоресцентного анализа (имму-ночипов);
- использование усовершенствованных технологий производства наборов реагентов для ИФА, РИФ и ИБ, защищенных патентами РФ, обеспечило создание полного спектра конкурентоспособных отечественных медицинских изделий, необходимых для эффективного наблюдения за группами риска;
- сочетание разработанной совокупности наборов реагентов с современными средствами видеоцифровой регистрации и учета результатов лабораторных диагностических исследований, адаптированными к данным наборам и выпускаемыми одним производителем, позволило создать Комплекс методических, реагентных и приборных средств клинической лабораторной диагностики инфекций TORCH-группы, оптимизирующий лабораторную компоненту эпидемиологического надзора за группами риска;
- использование разработанных средств диагностики инфекций TORCH-группы в практике работы отечественных КДЛ позволило получить объективную информацию о реальном распространении указанных инфекций в РФ;
- принципы работы как Комплекса в целом, так и отдельных его элементов носят универсальный характер и могут быть использованы для оптимизации
диагностической составляющей эпидемиологического надзора за любыми иными инфекциями.
Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и нашли положительную оценку на заседании кафедры клинической лабораторной диагностики и Ученого совета ГБОУ ДПО "РМАПО Минздрава России", кафедры клинической биохимии и лабораторной диагностики ФГБУ ВОУ ВПО "Военно-медицинская академия им. С.М.Кирова", кафедры инфекционных болезней Санкт-Петербургской Академии последипломного образования, кафедры клинической лабораторной диагностики ГБОУ "Ставропольская государственная медицинская академия", централизованной серологической лаборатории ГУЗ "Саратовский областной кожно-венерический диспансер".
Материалы диссертации освещались на:
III республиканском съезде эпидемиологов, микробиологов, паразитологов (Ереван, 7-8 июля 1983 г.);
Московской областной научно-практической конференции "Современные инфокоммуникационные технологии в системе охраны здоровья" (Москва, 13-14 ноября 2003 г.);
Всероссийской научно-практической конференции по проблеме ВИЧ-инфекции и вирусных гепатитов (Суздаль, 14-16 октября 2003 г.);
Всероссийской конференции, посвященной 100-летию филиала "Имму-нопрепарат" (Уфа 7-9 июня 2005 г.);
III съезде Общества биотехнологов России имени Ю.А.Овчинникова (Москва, 25-27 октября 2005 г.);
II съезде военных врачей медико-профилактического профиля ВС РФ "Современные проблемы военной профилактической медицины, пути их решения и перспективы развития"(СПб., 15-17 ноября 2006 г.);
IX съезде Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 26-27 апреля 2007 г.);
III Всероссийской научно-практической конференции с международным участием "Вакцинология"(Москва, 11-12 ноября 2008 г.);
VIII Российской научно-практической конференции с международным участием "Вирусные гепатиты, эпидемиология, диагностика и профилактика" (Москва, 26-28 мая 2009 г.);
научно-практической конференции дерматовенерологов и косметологов с международным участием, посвященной 85-летию Харьковского областного клинического кожно-венерологического диспансера №1 и дерматовенерологической службы Харьковской области (Харьков, 11-12 ноября 2009 г.);
Всероссийской научно-практической конференции "Вакцинология 2010. Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней" (Москва, 9-10 ноября 2010 г.);
III Ежегодном Всероссийском Конгрессе по инфекционным болезням (Москва, 28-30 марта 2011 г.);
II Конференции дерматовенерологов Сибирского Федерального округа (Иркутск, 1-14 сентября 2012 г.);
II Конгрессе Евроазиатской ассоциации дерматовенерологов (Москва, 2123 марта 2012 г.);
XIII Международной научно-практической конференции "Управление качеством" (Москва, 12-13 марта 2014 г.);
Российском конгрессе лабораторной медицины (Москва, 30 сентября - 2 октября 2015 г.).
Апробация диссертации состоялась на заседании апробационной комиссии при ФБУН Центральный НИИ эпидемиологии Роспотребнадзора 13 ноября 2015 г., протокол № ....
Личный вклад автора
Все представленные в диссертационной работе научные результаты получены автором как лично, так и под его руководством коллективом ЗАО "ЭКО-лаб". Автору принадлежит идея работы, им определены цели, задачи и методо-
логия исследования.
Автору принадлежит основная роль в постановке и решении проблемных практических и методических вопросов в области эпидемиологии и клинической лабораторной диагностики инфекций TORCH-группы, непосредственном выполнении теоретических и экспериментальных исследований, разработке методического и приборного обеспечения иммунохимических процессов, обобщении результатов и формулировке выводов.
Автор определил и обосновал выбор комплекса иммунологических технологий диагностики инфекций TORCH-группы, разработал стратегические направления исследований, сформулировал принципы видовой и групповой диагностики выбранной группы инфекций, последовательность разработки нормативной технологической документации (технические условия, инструкции, производственные регламенты), а также регламент проведения технических и клинических испытаний для внедрения новых наборов реагентов, приборных и программных компонентов; разработки и организации производства комплекса средств клинической лабораторной диагностики внутриутробных инфекций. Сформулировал требования и рекомендации для использования и внедрения результатов проведенных исследований в практику клинико-диагностических и испытательных лабораторий.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 94 работы в отечественной и зарубежной печати, монографиях, учебно-методических пособиях и руководствах, из них 35 работ в изданиях, входящих в "Перечень ведущих рецензируемых научных журналов, рекомендуемых ВАК Российской Федерации", в т.ч. патенты на 10 изобретений.
Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы (глава 1), описания материалов и методов (глава 2), изложения результатов собственных исследований (главы 3-6), общего заключения, выводов, библиографического указателя и приложения. Работа изложена на 234 страницах
машинописного текста, иллюстрирована 22 таблицами и 63 рисунками. Библиографический список содержит 299 наименований.
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА, НАДЗОР И ДИАГНОСТИКА ИНФЕКЦИЙ TORCH-ГРУППЫ
1.1. Эпидемиологическая характеристика инфекций TORCH-группы
Высокий удельный вес инфекций TORCH-группы сказывается как на демографической ситуации, так и на здоровье матери и ребенка. Наиболее значимой в медико-социальном плане особенностью инфекций TORCH-группы является их пагубное воздействие на все органы и системы плода, главным образом на его центральную нервную систему, повышающее риски выкидышей, мертво-рождения и врожденных уродств ребенка, формирования пороков его развития, вплоть до инвалидности [6, 52, 97, 177, 178, 244, 263- 264, 288]. С этой точки зрения среди инфекций TORCH-группы особую эпидемиологическую значимость представляют токсоплазмоз, краснуха, цитомегаловирусная инфекция, а также инфекции, вызываемые вирусом простого герпеса 1 и 2 типов.
Токсоплазмоз - зооноз, вызываемый внутриклеточно паразитирующим простейшим Toxoplasma gondii. Токсоплазмоз у взрослых, как правило, протекает бессимптомно, но врожденная патология может привести к аборту, мертворо-ждению или тяжелым неврологическим поражениям [5, 43, 59, 22, 17, 78, 107, 203, 208, 210, 260]. Путь передачи возбудителя, как правило, алиментарный. Основным хозяином паразита являются кошки, которые инвазируются, поедая зараженных мышей и других животных. Переносчиками возбудителя могут быть также сельскохозяйственные животные. Например, основным источником ток-соплазмоза в Республике Таджикистан является крупный и мелкий рогатый скот, пораженность которого токсоплазмой составляет 25,7% и 24,6%, соответственно; при этом частота заражения населения составляет в среднем 17,8 % [112].
Описаны случаи заражения человека контактным путем, например, при повреждении кожных покровов во время разделки сырого мяса, а также при
трансплантации зараженных органов или, что менее вероятно, при переливании крови [242].
Особое значение имеет вертикальный (от матери - плоду) механизм инвазии токсоплазмами, когда развитие паразитемии у беременной, переносящей раннюю фазу первичного заражения (манифестно или бессимптомно), в сочетании с низким уровнем антител класса G, обусловливает развитие плацентита и последующей инвазии плода токсоплазмами. При отсутствии терапии во время беременности данный путь реализуется в 40-50% случаев, а поражение плода обычно происходит в антенатальном периоде [9, 47, 60, 131]. Путь передачи возбудителя во многом определяет тяжесть течения токсоплазмоза. Так, если при алиментарном заражении инфекционный процесс развивается постепенно, параллельно с развитием иммунитета, то при вертикальном - токсоплазмы проникают непосредственно в кровяное русло плода, и инвазия с самого начала принимает генерализованный характер, и проявляется тем тяжелее, чем менее зрелой является иммунная система плода [9, 59, 250].
Частота инвазии и клиника токсоплазмоза у беременных женщин существенно не отличается от клиники у небеременных женщин соответствующего возраста, проживающих на одной территории. В большинстве случаев заболевание протекает бессимптомно. Если у беременной ранняя фаза токсоплазмоза имеет манифестный характер, она протекает, как правило, легко и может остаться недиагностированной. В обоих случаях верификация токсоплазмоза возможна при проведении систематического лабораторного контроля в течение беременности. Более того, она необходима, поскольку основной риск поражения плода связан с первичной инвазией женщины токсоплазмами в период беременности, а врожденный токсоплазмоз, как следствие заражения через плаценту, протекает всегда в виде генерализованного процесса. Тяжесть его определяется инфицирующей дозой возбудителя, количеством поступивших от матери к плоду про-тективных антител и периодом беременности, в котором произошло заражение
У детей и подростков возможно развитие поздних проявлений врожденного токсоплазмоза. Так, более чем у 85% детей с бессимптомным течением инвазии развивается ретинопатия. В других случаях наблюдаются повышенная утомляемость, лимфаденопатия, дефекты слуха, эндокринные нарушения. Судорожные припадки и слабоумие в ряде случаев обнаруживаются на 2-4, эпилептические припадки - на 7-12 году жизни. В связи с формированием органических поражений ряда жизненно важных органов специфическая терапия на этой стадии заболевания не эффективна [9, 241, 274]. В этой связи, очевидно, требуется увеличение сроков и этапности проведения лабораторной диагностики токсоплаз-моза.
Краснуха - воздушно-капельная инфекция, вызываемая РНК-содержащим вирусом, который относится к роду рубовирусов семейства тогавирусов. Основным источником возбудителя инфекции являются дети 7-14 лет. Возбудитель обладает выраженными тератогенными свойствами. Известно, что краснуха у беременной женщины чрезвычайно опасна для плода, особенно в первом триместре беременности. Заражение в этот срок в 60-85% случаев приводит к развитию генерализованной и персистирующей инфекции плода, которая течет как мультисистемное заболевание с множественными пороками развития в последующем. В этом случае около 3/4 детей рождается с синдромом врожденной краснухи (СВК): врожденные пороки сердца, катаракта, слепота, глухота, микроцефалия, умственная отсталость, поражение других органов. Среди таких младенцев отмечается очень высокий процент перинатальной смертности. Исключение составляют дети первого года жизни, имеющие пассивный иммунитет, переданный от матери [12, 50, 180]. Яркой иллюстрацией эпидемиологической значимости краснухи является описанная в США ситуация, когда в 1960-1964 гг. краснухой заболело 50 тыс. беременных женщин, что привело к рождению 20 тысяч детей с СВК и 10 тысячам выкидышей и мертворождений [88, 115, 194].
Более поздние сроки заражения беременной менее опасны, поражения плода в этот период развиваются реже (в 25-30% случаев) и они менее выражены [104, 180 и др.].
Переболевшие краснухой приобретают стойкий пожизненный иммунитет. Развитию продолжительного иммунитета также способствует вакцинация против краснухи. Однако, после вакцинации возможна как реинфекция, так и инфицирование. В этих случаях краснуха течет, как правило, бессимптомно и выявляется по резкому подъему титров антител после близкого контакта с больным. Отмечено, что такие случаи более часты у лиц с поствакцинальным иммунитетом, чем у людей с естественно приобретенным иммунитетом [7, 16, 32, 62, 82, 114-115, 174, 183, 188, 190, 213, 225, 229, 252, 269, 277].
Цитомегаловирусная инфекция (ЦМВИ) - заболевание, вызываемое цито-мегаловирусом (ЦМВ) из семейства герпесвирусов, для которого основными клетками-мишенями в организме человека являются моноциты, макрофаги, гра-нулоциты, эпителиальные и эндотелиальные клетки, фибробласты, гладкомы-шечные клетки. Инфицирование в большинстве случаев либо вообще не дает клинических проявлений, либо дает чисто неспецифическую симптоматику -повышение температуры, усталость, воспалительные процессы в носо- и ротоглотке, увеличение небных миндалин, которая может наблюдаться при многих заболеваниях инфекционной природы [11, 20-21, 33-34, 44, 65, 79, 84, 90, 113, 118, 132, 179, 189, 199, 205, 209, 211, 218, 232, 254, 258].
Похожие диссертационные работы по специальности «Эпидемиология», 14.02.02 шифр ВАК
Врожденные пороки развития у детей с внутриутробными инфекциями2014 год, кандидат наук Кабулова, Милана Айваровна
Разработка моделей влияния TORCH-инфекций и региональных экологических факторов на показатели здоровья беременных и детей2002 год, кандидат биологических наук Землянская, Наталья Олеговна
Разработка методологии многопрофильного выявления антител к возбудителям инфекционных заболеваний перинатального периода на основе белковых матриц2007 год, кандидат биологических наук Яковченко, Анна Михайловна
Разработка диагностического набора для выявления антител к возбудителям кори, краснухи и эпидемического паротита методом мультиплексного дот-анализа2015 год, кандидат наук Ерш, Анна Васильевна
Эпидемиологические и иммунологические аспекты токсоплазмоза в группах высокого риска2007 год, кандидат медицинских наук Калитин, Александр Владимирович
Список литературы диссертационного исследования доктор наук Марданлы Сейфаддин Гашим оглы, 2016 год
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Авдеева М.Г., Кончакова А.А. Клиническое значение иммуноцито-химических показателей больных токсоплазмозом // Эпидемиол. и инфекци-он. болезни. - 2008. - № 2. - С. 52-54.
2. Авторское свидетельство № 2013619833 RU. Программа для количественной обработки, документирования и автоматической интерпретации результатов серологических анализов на инфекции TORCH-группы / С.Г. Марданлы, А.Е. Туголуков, В.А. Кутвицкий и др. - Заявл. 28.10.13.
3. Авторское свидетельство №1596768. Способ получения диагности-кума для обнаружения HB-антигена / Марданлы С.Г. - 06.1990.
4. Аковбян В.А., Нестеренко В.Г. Сифилис. Диагностика. - М.: Медиа Сфера, 2007. - 323 с.
5. Алексеева М.Л., Колодько В.Г., Муллабаева С.М. и др. Некоторые инфекции TORCH-комплекса // Проблемы репродукции. - 2007. - №4 - С.12-20.
6. Анджапаридзе О.Г., Червонский Г.И. Краснуха. - М.: Медицина, 1975. - 102 с.
7. Антипова А.А. Значение лабораторной диагностики краснушной и паравирусной инфекций в период элиминации краснухи: Автореф. дисс. ... к -та. биол. наук. М, 2013. - 16 с.
8. Аппаратурно-программный комплекс «Эксперт-Лаб». Рег. Уд. № ФС 02012006/3617-06 от 10.08.2006 г.
9. Барычева Л.Ю. Клинические и иммунологические особенности врожденного токсоплазмоза // Росс. Вест. перинатологии и педиатрии. -2004. - № 2. - С. 55-59.
10. Бахарева И.В. Роль механизмов врожденного иммунитета в реализации внутриутробной инфекции при беременности высокого инфекционного риска: Автореф. дис. ... д-ра мед. наук. - М., 2009. - 40 с.
11. Безрукова Н.Д. Эпидемиологические и диагностические критерии ЦМВИ у детей: Дис.... к-та мед. наук. - М. - 1992. - 23 с.
12. Бектимиров Т.А. Мировой опыт иммунопрофилактики краснухи // Биопрепараты. - 2005.- №1. - С. 21-23.
13. Болотовский В.М., Михеева И.В., Лыткина К.Н. Корь, краснуха, эпидемический паротит: единая система управления процессами. - М. - 2004. - 224 с.
14. Бочарова И.И. Клинико-иммунологические варианты патологических состояний у новорожденных, родившихся у матерей с урогенитальной инфекцией (диагностика, прогнозирование, технологии ведения): Автореф. дис.... д-ра мед. наук. - М, 2008. - 44 с.
15 Бочарова И.И. Клинико-иммунологические варианты патологических состояний у новорожденных, родившихся у матерей с урогенитальной инфекцией (диагностика, прогнозирование, технологии ведения): Автореф. дис.... д-ра мед. наук. - М., 2008. - 42 с.
16. Брико Н.И. Критерии оценки эффективности вакцинации // Вакцинация. Новости вакцинопрофилактики. - 2000. - №36. - С.3-5.
17.Буданов П.В. Этиология, патогенез, диагностика и лечение внутриутробной инфекции: Автореф. дис.... д-ра мед. наук. - М., 2013, 40 с.
18. Бурдыгина И.Ф., Венгерова Н.А., Эльцефон Б.С. Изучение возможности модификации функциональных свойств отечественных планшетов //Биотехнология. - 1994. - №11-12. - С.36-39.
19 Быстрые простые методы в диагностике TORCH-комплекса. Практическое руководство для врачей/ С.Б. Ткаченко, А.М. Савичева, Е.В. Шипи-цына и др. - М. - 2006. -http://www.biograd.ru/publications/practical_guides_for_doctors/torch/contents
20 Вартанян Р.В. Проблемы цитомегаловирусной инфекции //Тез. докл. 5-го Российского съезда врачей-инфекционистов. - М., 1998. - 25-26 с.
21. Васильев В.В. Диагностика и прогнозирование некоторых врожденных инфекций в системе беременная-плод-ребенок первого года жизни// Росс. вестник перинатологии и педиатрии.- 2013. - №3. - 15-20 с.
22. Васильев В.В. Токсоплазмоз: современные научно-практические подходы // Http://www.infectology.ru/mnenie/index.asp - 2004.
23. Венгеров Ю.Ю. Иммунохимические "быстрые" тесты с компью-торной видеоцифровой регистрацией - эффективная лабораторная технология для массовых анализов // Клин. лаб. диагност. - 2008 - №9. - С. 19.
24. Венгеров Ю.Ю. Микроминиатюаризация лабораторных технологий: перспективы и проблемы // Клин. лаб. диагност. - 1999. - №9. - С. 5.
25. Видеоцифровой анализ для лабораторной диагностики: комплекс "Эксперт-Лаб" на основе сканера для документирования, объективизации и регистрации результатов латекс-агглютинационных, гемагглютинационных тестов, изосерологических и иммуноферментных исследований/ Старовойтова Т.А., Зайко В.В., Стериополо Н.А. и др. // Лаборатория. -2006. - №1. -С.19-22.
26. Видеоцифровой анализ для лабораторной диагностики: комплекс "Эксперт-Лаб" на основе сканера для документирования и регистрации результатов латекс-агглютинационных тестов и иммуноферментных исследований/ Т.А.Старовойтова, Н.А.Стериополо, В.В.Зайко и др. // Материалы докладов семинаров и конференции в рамках выставки "AnalyticaExpo-2006".- М. - 2006. - С. 42-43.
27. Висницкий Н.Н. Заболеваемость краснухой в Ленинграде и выявление групп риска при краснушной инфекции /В сб. Актуал. вопр. мед. виру-сол.- Свердловск, 1989. - С. 216-219.
28. Глобальная стратегия профилактики инфекций, передаваемых половым путем, и борьба с ними, 2006-2015 годы. - ВОЗ. - 2007 - 32 с.
29. Глазко И.И., Дмитриев Г.А. Современные подходы к молекулярной диагностике сифилиса // Венеролог. - 2006. - №10. - С.36-42.
30. Государственная программа Российской Федерации «Развитие фармацевтической и медицинской промышленности» на 2013-2020 годы».
31. Гущин А.Е., Фриго Н.В., Дударева Л.А. Перспективы применения полимеразной цепной реакции у больных ранними формами сифилиса // Вестник дерматологии и венерологии. - 2009. - №1. - С.46-51.
32. Дарвина О.В. Роль ПЦР-диагностики в проблеме верификации диагноза краснухи : Автореф. дис.... к-та мед. наук. - М., 2011. - 25 с.
33. Демидова С.А., Мартынова В.Н., Князева Л.Д. Выявление цитоме-галовируса при хронических заболеваниях слюнных желез // Вопр. вирусол. -1982. - № 4. - С. 96-99.
34. Детская смертность (тенденции, причины и пути снижения). М. -2001. - 150 с.
35. Диагностическая эффективность фосфоресцентных иммуночипов при серодиагностике клещевого энцефалита/ В.Г.Помелова, Т.А.Быченкова, Н.И. Бекман и др. // ЖЭМИ. - 2009. - №3.- С. 75.
36. Динамика инфекций, передаваемых половым путем, и ВИЧ инфекции в Европейском регионе, 1980-2005 гг. Док. техн. брифинга 01В/06 Копенгаген, 12.09.2006 г. // ВОЗ. - 2006. - (http://www.euro.who.int/aids)
37. Дмитриев Г.А., Глазко И.И. Диагностика инфекций, передаваемых половым путём. - М.: Бином. - 2007. - 319 с.
38. Дмитриев Г.А., Фриго Н.В. Сифилис. Дифференциальный клини-ко-лабораторный диагноз. - М.: Медицинская книга, 2004. - 363 с.
39. Долгих Т.И. Современные возможности лабораторной диагностики инфекционных заболеваний (методы, алгоритмы, интерпретации результатов). - Омск, 2005. - 27 с.
40. Долгих Т.И. Стратеги я и методическое обеспечение диагностики инфекционных заболеваний. Пособие для врачей. - Омская ГМА, 2007. - 57с.
41. Долгов В.В., Ованесов Е.Н., Щетникович К.А. Фотометрия в лабораторной практике. - СПб: Витал Диагностикс, 2004. - 192 с.
42. Долгушина Н.В., Макацария А.Д. Вирусные инфекции у беременных. Руководство для врачей. - М.: Триада-Х, 2004. - 144с.
43. Домонова И.А. Роль молекулярных методов диагностики TORCH-инфекций// www. md2010 .org/files/presents/s20/c20-5.pdf.
44. Дьячук Е.В. Клинико-лабораторная характеристика цитомегало-вирусной инфекции у беременных и детей первого года жизни: Автореф. дис.... к-та мед. наук. - С-Пб, 2012. - 23 с.
45. Европейские стандарты диагностики и лечения заболеваний, передаваемых половым путём. - М.: Мед. литература. - 2003. - 272 с.
46. Ермоленко М.В. Серологический мониторинг в системе эпидемиологического надзора за ветряной оспой: Автореф. дис.. канд. мед. на-ук:14.02.02 / М.В. Ермоленко. М., 2014.- 24 с.
47. Заец В.В. Особенности неонатальной адаптации новорожденных от матерей с токсоплазменной инфекцией (диагностика и лечение): Автореф. дис.... к-та мед. наук. - Киев, 2010. - 28 с.
48. ЗАО "Иммуноскрин" Продукция: http: //www.immunoscreen.ru/Items .aspx
49. Заргарьянц А.И., Селезнева Т.С., Титова Н.С. Краснуха: современная ситуация // Эпидемиология и Вакцинопрофилактика. - 2001. - № 1 (01). - С. 28-31.
50. Зверев В.В., Десятскова Р.Г. Врождённая краснуха // Вакцинопрофилактика. - 2004. -№ 6. - С. 11-12.
51. Землянская Н.О. Разработка моделей влияния TORCH-инфекций и региональных экологических факторов на показатели здоровья беременных и детей: Автореф. дис. ... к-та биол. наук. М., 2006. - 24 с.
52. Землянский О.А. Эпидемиология внутриутробных инфекций плодов и новорожденных и оптимизация системы слежения за ними: Автореф. дис.... д-ра. мед. наук. - М, 2004. - 33 с.
53. Иммунологические биочипы для исследования эритроцитов человека/ Шишкин А.В., Шмырев И.И., Кузнецова С.А. и др. // Биологические мембраны. - 2008. - №4. - С. 267-276.
54. Иммунологические биочипы для параллельного определения поверхностных антигенов и морфологического исследования клеток/ А.В. Шишкин, И.И. Шмырев, С.А. Кузнецова и др. // Биолог. мембраны. - 2008. -№4. - С. 277-284.
55. Иммунолюминесцентный анализатор для планшетных диагностических технологий/ Н.С. Осин, А.С. Соколов, В.А. Михайлов и др.|// Тезисы докл. конф. Биотехнологии-2001. - Пущино, 2001 - С. 175.
56. Инфекционная заболеваемость в Российской Федерации. - Информационные сборники статистических и аналитических материалов. М. -2000-2012.
57. Инфекционные болезни и эпидемиология: учебник / Покровский В.И., Пак С.Г., Брико Н.И., Данилкин Б.К. - 3-е изд., испр. и доп. - 2013. -1008 с.
58. Исаков В.А., Сафонова М.М. Клиника и лечение генитального герпеса. - СПб.: Медицина, 1997. - 33с.
59. Казанцев А.П. Токсоплазмоз. - Л.: Медицина, 1985. - 168 с.
60. Калитин А.В. Эпидемиологические и иммунологические аспекты токсоплазмоза в группах высокого риска: Автореф. дис. ... к-та мед. наук. -Омск, 2007. - 28
61. Кан Н.Е. Современные технологии в диагностике и прогнозировании внутриутробных инфекций: Автореф. дис. ... д-ра мед. наук. - М., 2005. - 43 с.
62. Канторович Р.А., Володина Н.И., Телешевская Э.А. Врожденная краснуха в СССР // Бюл. ВОЗ. - 1979. - Т. 57. - С. 103-106.
63. Каражас Н.В. Цитомегаловирусная инфекция - типичный представитель оппортунистических инфекций // Росс. Мед. вести. - 1997. - № 2. -С. 34-36.
64. Каражас Н.В. Эпидемиологическая характеристика цитомегалови-русной инфекции и пневмоцистоза как оппортунистических инфекций: Ав-тореф. дис. ... д-ра биол. наук. - М., 2002. - 45 с.
65. Каражас Н.В., Хаустов В.И. Выделение цитомегаловируса человека при первичной цитомегаловирусной инфекции // Вопр. вирусол. - 1994. -т.39. - № 6. - С.266-267.
66. Каталог продукции ЗАО "Вектор-Бест7/http://www.vector-Ьев1тЬо81:.ги/ргоё/са1:.рЬр?са:=0&1ё=00.
67. Каталог продукции ООО "НПО "Диагностические систе-мы"//http://www.npods.ru/?id=6395.
68. Кеннет Р. Г., Мак-Керн Т. Дж., Бехтол К. Б. Моноклональные антитела: Гибридомы: новый уровень биологического анализа. - М.: Медицина, 1983. - 342 с.
69. Кистенева Л.Б. Клинико-лабораторные особенности цитомегало-вирусной и ^-вирусной инфекции у беременных и новорожденных. Разработка системы лечебно-профилактических мер: Автореф. дис. ... д-ра мед. наук. - М, 2010. - 45 с.
70. Кистенева Л.Б. Клинико-лабораторные особенности цитомегало-вирусной и ^-вирусной инфекции у беременных и новорожденных. Разработка системы ЛП мер: Афтореф. дис. ... д-ра мед. наук. - М., 2010. - 45 с.
71. Китаева Н.В., Фриго Н.В., Мелехина Л.Е. Актуальные проблемы сифилидологии. Современные технологии диагностики сифилитической инфекции // Вестник дерматологии и венерологии. - 2008. - №5. - С.51-59.
72. Кишкун А.А. Иммунологические исследования и методы диагностики инфекционных заболеваний в клинической практике. - М.: МИА, 2009. - 712 с.
73. Кишкун А.А. Руководство по лабораторным методам диагностики. - М.: ГЕОТАР-Медиа, 2007. -798 с.
74. Клиническая лабораторная диагностика, Национальное руководство / Под ред. Долгова В.В., Меньшикова В.В. в двух томах // М.: Геотар-Медиа. - 2012. - Том 1. - 928 с. Том 2. - 808 с.
75. Комплекс аппаратно-программный для регистрации результатов латексных агглютинационных, гемагглютинационных анализов, изосероло-гических и иммуноферментных исследований «Эксперт-Лаб». - М., 2008. -25 с.
76. Концепция развития системы здравоохранения в Российской Федерации до 2020 года. http://federalbook.ru/files/FSZ/soderghanie/Tom%2012/1-9.pdf
77. Концепция развития службы клинической лабораторной диагностики Российской Федерации на 2003-2010 гг. - М., 2003.
78. Кончакова А.А. Иммуно-цитохимические критерии диагностики и прогнозирования течения хронического токсоплазмоза: Автореф. дис. ... к-та мед. наук. - Краснодар, 2008. - 26 с.
79. Коченгина С.А. Клинико-иммунологические особенности цитоме-галовирусной инфекции у детей первых месяцев жизни: Автореф. дис. ... к -та мед. наук. - Челябинск, 1998. - 25 с.
80. Кубанова А.А Тихонова Л.И. Дерматовенерология в России. Реальность и перспективы // Вестник дерматологии и венерологии. - 2004. -№2. - С. 411.
81. Кудашов Н.И., Помелова В.Г., Зубков В.В. Клинико-иммунологические критерии диагностики герпесвирусной инфекции новорожденных //Российский вестник перинатологии и педиатрии. - 1998. -№5.-С. 12-18.
82. Кузнецова Э.А., Гнетецкая В.А., Шипулина О.Ю. и др. Иммунологические и молекулярно-биологические методы диагностики краснухи у бе-
ременных женщин, плодов и новорожденных // Акушер. и гинекол. - 2007. -№4. - С.37-40.
83. Кузьмин В.Н., Музыкантова В.С., Семенова Т. Б. Герпетическая инфекция в акушерстве и перинатологии. - М.:Медицина, 1999. - 27с.
84. Кузьмин В.Н., Музыкантова В.С., Штыкунова Е.В. Цитомегалови-русная инфекция в акушерстве и перинатологии. - М.:Медицина, 2000. - 40 с.
85. Куликова И.Б., Лебедева Д.И., Миневцев С.В. Оптимизация лабо-раторно-диагностической службы в субъекте РФ (на примере Тюменской области) // Вопросы управления. - № 1 (18). - март. - 2012.
86. Куляш Г. Ю. Случай активного третичного сифилиса и специфического поражения нервной системы //Клиническая дерматология и венерология. - 2005. - № 5. - 39-42 с.
87. Лабораторная диагностика ИППП в РФ. Результаты национального исследования/ Н.В.Фриго, С.В.Ротанов, И.Н.Лесная и др. // Вестник дерматологии и венерологии. - 2008. - №5 - С.33-41.
88. Лаврентьева И.Н., Семериков В.В., Жебрун А.Б. и др. Краснуха в России: изменчивость возбудителя в период вакцинопрофилактики инфекции// ЖМЭИ - 2008. - № 3. - С. 26-31.
89. Лебедев В.В., Никулин Л.А., Александрова О.К. Герпетическая инфекция // www.infectology.ru/RUK/herpes/index.asp.
90. Лещинская Е.В., Мартыненко И.Н., Демидова С.А. Поражение центральной нервной системы у детей при цитомегалии // Вопр. охр. мат. -1985. - № 5. - С. 61-65.
91. Лосева О.К., Ловенецкий А.Н. Эпидемиология, клиника, диагностика и лечение сифилиса/ В кн.: Опыт организации борьбы с сифилисом в субъекте РФ // Екатеринбург: Чароид, 2002. - С. 159-248
92. Львов Д.К. Медицинская вирусология. - М.: МИА, 2008. - 656 с.
93. Лыткина И.Н. Создание унифицированной системы управления эпидемическим процессом кори, краснухи и эпидемическим паротита: Авто-реф. дис.... д-ра. мед. наук:14.00.30 /И.Н. Лыткина. М., 2011.- 44с.
94. Ляхов В.Ф., Борисенко К.К., Потекаев Н.С. Динамика трепоне-моспецифической иммуноглобулинемии при ранних формах сифилиса // Вестн. дерматол. и венерол. - 1990 - №8. - С.38-42.
95. Мазепкина И.Н. Возможности прогнозирования перехода внутриутробного инфицирования в инфекционно-воспалительные заболевания новорожденных: Автореф. дис.... к-та мед. наук. - Воронеж, 2011. - 24 с.
96. Максимова Т.А. Оптимизация диагностики и иммунокорриги-рующей терапии генитального герпеса II типа у женщин: Автореф. дис. ... к -та мед. наук. - СПб., 2005. - 20 с.
97. Малышев Н.А., Смагулов К.З., Каражас Н.В. Цитомегаловирусная инфекция. Эпидемиология, клиника, диагностика, лечение и профилактика. -М.: Медицина, 2001. - 303 с.
98. Малышева В.А. Системный анализ законодательства в области охраны и защиты материнства и детства // Соц. и пенсион. право. - 2009. -№2. - С.24-27.
99. Марданлы С.Г. Куляш Г.Ю. Проблемы достоверности и объективной оценки результатов лабораторной диагностики гонореи, трихомониаза и урогенитального хламидиоза. Методическое пособие. - Электрогорск, 2007. - 46 с.
100. Марданлы С.Г. Первушин Ю.В., Иванова В.Н. Спинномозговая жидкость, лабораторные методы исследования и их клинико-диагностическое значение. Методическое пособие для специалистов по клинической лабораторной диагностике. - Электрогорск, 2011. - 72 с.
101. Марданлы С.Г., Дмитриев Г.А. Лабораторная диагностика сифилиса. Методическое пособие. - М. Медицина, 2009. - 28 с.
102. Марданлы С.Г., Кирпичникова Г.И. Неверов В.А. Токсоплазмоз Этиология, эпидемиология, патогенез, клиника, лабораторная диагностика, профилактика. Методическое пособие. - Электрогорск, 2006. - 44 с.
103. Марданлы С.Г., Кирпичникова Г.И., Неверов В.А. Герпетическая инфекция (простой герпес). - Электрогорск: ISBN 5-8311-0201-7, 2011. - 48 с.
104. Марданлы С.Г., Кирпичникова Г.И., Неверов В.А. Краснуха. Этиология, эпидемиология, патогенез, клиника, лабораторная диагностика, профилактика. Методическое пособие. - Электрогорск, 2006. - 28 с.
105. Марданлы С.Г., Кирпичникова Г.И., Неверов В.А. Цитомегави-русная инфекция. Этиология, эпидемиология, патогенез, клиника, лабораторная диагностика, лечение. Методическое пособие. - Электрогорск, 2005. - 32 с.
106. Марданлы С.Г., Куляш Г.Ю. Реакция пассивной гемагглютина-ции в серологической диагностике сифилиса. Методическое пособие. - Элек-трогорск, 2011. - 40 с.
107. Марданлы С.Г., Симонов В.В., Помазанов В.В. Задачи и перспективы создания комплекса реактивных и технических средств клинической лабораторной диагностики инфекций TORCH-группы. Владимир-Электрогорск: Транзит-ИКС, 2012. -95 с.
108. Марра К. Нейросифилис // ИППП. - 2004.- № 4. - С. 7-11.
109. Медицинская лабораторная диагностика (программа и алгоритмы).- СПб: Интермедика. - 1999. - 656 с.
110. Методические указания «Организация и проведение серологического мониторинга состояния коллективного иммунитета к инфекциям, управляемым средствами специфической профилактики (дифтерия, столбняк, коклюш, корь, краснуха, эпидемический паротит, полиомиелит, гепатит B)». МУ 3.1.2943-11.
111. Минакова Е.Ю. Герпесвирусные инфекции и токсоплазмоз в системе эпидемиологического надзора за оппортунистическими инфекциями: Автореф. дис. ... к-та мед. наук. - Омск, 2011. - 30 с
112. Муллоджанова М.М. Эпидемиологические и иммунологические аспекты токсоплазмоза в Республике Таджикистан: Автореф. дис. ... к-та мед. наук. - Душанбе, 2005. - 30 с.
113. Неонатология - национальное руководство. - М.: ГЭОТАР - Медиа. - 2008 - 749 с.
114. Нисевич Л.Л., Бахмут Е.В., Королькова Е.Л. и др. К вопросу о диагностике внутриутробной инфекции у новорожденных // Акушерство и гинекология. - 1998. - № 3. - С. 16-20.
115. Нисевич Л.Л., Бахмут Е.В., Талалаев А.Г. и др. Врожденная краснуха и ее роль в развитии внутриутробной патологии /В сборнике: Краснуха. Синдром врожденной краснухи. - М.-СПб. - 1997. - С.31-39.
116. Новая технология фосфоресцентного иммуноанализа для обнаружения микроорганизмов и вирусов/ Н.С.Осин, В.Г.Помелова, Т.А. Бычен-кова и др. // Современные технологии в диагностике особо опасных инфекционных заболеваний: Материалы 4-й Межгосударственной науч.-практ. конф. стран СНГ (29 сент. - 2 окт. 2003 г., Саратов). - 2003. - С.138-142.
117. Овчинников Н.М., Беднова В.Н., Делекторский В.В. Лабораторная диагностика заболеваний, передающихся половым путем. - М.: Медицина, 1987. - 303 с.
118. Одинаева Н.Ф. Урогенитальные инфекции у женщин репродуктивного возраста, проживающих в регионе влияния вредных выбросов лю-миниевого производства (современные аспекты диагностики, профилактики и лечения): Афтореф. дис. ... д-ра мед. наук. - М., 2010. - 43 с.
119. ООО «НИАРМЕДИК ПЛЮС». Лабораторное оборудование: http: //www.nearmedic.ru/equipment/.
120. Опыт организации борьбы с сифилисом в субъекте Российской Федерации/ Кунгуров Н.В., Хальфин Р.А., Сырнева Т.А., Марченко Н.В. -Екатеринбург: Чароид, 2002. - 249 с.
121. Осин Н.С. Инновационные методические разработки ЗАО "Им-муноскрин" (технология ФОСФАН) // Медико-фармацевтический вестник. -№36 (510). - 2011. - 30 с.
122. Осин Н.С. Способ многоаналитного анализа с использованием микрочастиц // Патент RU 2339951 - 2007.
123. Осин Н.С. Способ многоаналитного анализа с использованием микрочастиц// Патент RU 2379691 - 2008.
124. Осин Н.С., Миронов А.Ф., Румянцева В.Д. Маркер для люминесцентного микроанализа// Патент RU 2066455. - 1994.
125. Осин Н.С., Помелова В.Г. Мультиплексный планшетный микроанализ с фосфоресцентной детекцией сигнала для диагностики инфекционных заболеваний // Молекулярная диагностика. - 2007. - Том I. - С. 83.
126. Осин Н.С., Помелова В.Г., Быченкова Т.А. Способ многоаналитного анализа // Патент RU 2184970. - 2002.
127. Осин Н.С., Помелова В.Г., Быченкова Т.А. Фософоресцентный микроанализ (ФОСФАН) как новая технология для диагностики инфекций // Арбовирусы и арбовирусные инфекции. Материалы расширенного пленума проблемной комиссии «Арбовирусы» и научно-практической конференции «Арбовирусы и арбовирусные инфекции».- М., 2007. - С.79-80.
128. Осин Н.С., Помелова В.Г., Быченкова Т.А. Фосфоресцентный микроанализ (ФОСФАН) как новая технология для диагностики инфекций. В кн.: Арбовирусы и арбовирусные инфекции. - М.:Медицина, 2007. - С. 79-87.
129. Осин Н.С., Помелова В.Г., Соколов А.С. Биочипы с фосфорес-центной детекцией для индикации патогенов // Международные медико-санитарные правила и реализация глобальной стратегии борьбы с инфекционными болезнями в государствах-участниках СНГ. Материалы VIII Межго-
сударственной научно-практической конференции государств-участников СНГ (25-26.09.07. Саратов). - 2007. - С. 263-264.
130. Островская О.В. Внутриутробные инфекции, клинико-морфологическая оценка современной специфической диагностики: Авто-реф. дис. ... д-ра мед. наук. - Хабаровск, 2009. - 43 с.
131. Островская О.В. Внутриутробные инфекции, клинико-морфологическая оценка современной специфической диагностики: Авто-реф. дис. ... д-ра мед. наук. - Хабаровск, 2009. - 42 с.
132. Островская О.В., Когут Е.Т., Сысолетина И.П. Перинатальная диагностика цитомегаловирусной инфекции // Клинич. лаб. диагностика. -2001. - №2. - С. 20-23.
133. Патент Китая №1286403 «Process for preparing reagent kit to detect 4 pathogen antibodies», G 01 № 33/53.
134. Патент Китая №1340712 «Reagent kit for ELISA of rubella, macro-cell and monosper mouse viruses and Toxoplasma antibody», G 01 N 33/569.
135. Патент на изобретение № 2013116455 RU. МПК G 01 N 33/53. Способ автоматизированной оценки и документирования результатов реакции микропреципитации для диагностики сифилиса/ Ю.Ю. Венгеров, А.Е. Туголуков, С.Г. Марданлы и др. - Заявл. 11.04.13
136. Патент на изобретение № 2013133579. RU. МПК G 01 N 33/53.Способ получения иммуносорбента для диагностики вируса простого герпеса 1 типа/ С.Г. Марданлы, В.В. Помазанов, Р.Р. Гафаров и др. - Заявл. 19.07.13.
137. Патент на изобретение № 2013154726 RU. Способ получения тест-системы для диагностики цитомегаловирусной инфекции методом им-муноблоттинга/ А.С. Авдонина, С.Г. Марданлы. - Заявл. 11.12.13
138. Патент на полезную модель № 134328. RU. МПК G01N33/53. Тест-набор для иммунологического анализа антител класса M на наличие возбудителей инфекций TORCH-группы / С.Г. Марданлы, В.В. Помазанов,
Р.Р. Гафаров и др. - № 2013132886. - Заявл. 17.07.13. - опубл. 10.11.2013. -Бюл. №31.
139. Патент на полезную модель № 134329. RU. МПК G01N33/53.Тест-набор для иммунологического анализа антител класса G на наличие возбудителей инфекций TORCH-группы/ С.Г. Марданлы, В.В. По-мазанов, Р.Р. Гафаров и др. - №2013132887. - Заявл. 17.07.13. - опубл. 10.11.2013. - Бюл. №31.
140. Патент на полезную модель № 2013148129. RU. МПК G 01 N 33/50 Система лабораторной клинической диагностики инфекций TORCH-группы / С.Г. Марданлы. - Заявл. 30.10.13.
141. Патент на полезную модель №132210. RU. МПК G01N33/53 (2006.01). B01L3/00 (2006.01). Планшет "ИФА-ВПГ-2-IgG" для выявления иммуноглобулинов класса G к вирусу простого герпеса II типа/ С.Г. Мардан-лы - №2012154240/15(086103). - Заявл. 14.12.12. - опубл. 10.09.2013. -Бюл.№25
142. Патент РФ № 2298795. 2004. Набор для многопрофильного анализа сыворотки крови с целью одновременного выявления специфических антител к возбудителям TORCH-инфекций методом дот-иммуноанализа G01N33/53.
143. Патент РФ №2125829. 1996. Интегрированный модуль оценки здоровья семьи. А6185/00.
144. Патент США №5486452 "Devices and kits for immunological analysis".
145. Патент США №5486452 "Devices and kits for immunological analysis.
146. Патент США №5508168 "Method and reagents for the detection of Herpes simplex virus, Treponema pallidum and Haemophilus duecreyi" С 12 Q 1/70.
147. Патент США №6265176 «Dot immunoassay on plastic sheets".
148. Перспективы внедрения принципов общественного здравоохранения в профилактику и лечение инфекций, передаваемых половым путем, в странах Восточной Европы и Центральной Азии / Отчет о совещании. ЕШ/02/5031803 // Берлин, Германия. - 2002. - 21 с.
149. Перспективы серодиагностики природноочаговых инфекций методом мультиплексного фосфоресцентного микроанализа/ В.Г.Помелова, Н.С.Осин, Э.И. Коренберг и др. // Актуальные проблемы природной очаговости болезней. - 2009. - №2 (2).- С. 61-63.
150. Петришина С.В. Лабораторная диагностика сифилиса // Российский журнал кожных и венерических болезней. - 2004. - №2. - С.46-49.
151. Петухова И.И. Возможности полимеразной цепной реакции в детекции бледной трепонемы у больных сифилисом: Автореф. дис. ... к-та мед. наук. - М, 2002. - 18с
152. Помелова В.Г. Планшетная технология иммуночипов ФОСФАН для серологической диагностики клещевого энцефалита и иксодовых клещевых боррелиозов// Молекулярная диагностика. - 2010. - Том II. - С. 259-261.
153. Помелова В.Г., Быченкова Т.А., Ларичева С.Ю. Иммуночип на основе планшетной технологии ФОСФАН для определения IgG-антител к вирусам Западного Нила и Крымской-Конго геморрагической лихорадки // М. Вопросы вирусологии.- 2010. - №2. - С. 14-16.
154. Помелова В.Г., Осин Н.С. Перспективы интеграции технологии сухого пятна крови в популяционные исследования здоровья и среды обитания человека //Вестник РАМН. - 2007. - №12. - С.10-16.
155. Помелова В.Г., Осин Н.С. Перспективы применения фосфорес-центного мультикомпонентного микроанализа для сероэпидемиологического мониторинга инфекционных заболеваний. В кн.: Материалы IX съезда Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. - М., 2007. - С.218-219.
156. Попова А.Ф. Оптимизация специфических лабораторных методов диагностики и лечения рецидивирующего генитального герпеса у женщин: Автореф. дис. ... к-та мед. наук. - СПб., 2012. - 23 с.
157. Постановление Правительства РФ от 01.12.2004 № 715. "Об утверждении перечня социально значимых заболеваний и перечня заболеваний, представляющих опасность для окружающих".
158. Приказ Минздрава РФ от 26 марта 2001 №87 года "О совершенствовании серологической диагностики сифилиса".
159. Приказ Минздрава РФ от 28.12.2000 № 457 «О совершенствовании пренатальной диагностики в профилактике наследственных и врожденных заболеваний у детей»
160. Приказ Министерства здравоохранения РФ от 01.11.2012 № 572н "Об утверждении Порядка оказания медицинской помощи по профилю "акушерство и гинекология (за исключением использования вспомогательных репродуктивных технологий)"
161. Приказ Министерства здравоохранения РФ от 13 февраля 2013 г. № 66 "Об утверждении Стратегии лекарственного обеспечения населения Российской Федерации на период до 2025 года и плана ее реализации"
162. Приказ Министерства здравоохранения РФ от 30 апреля 2013 г. № 281 "Об утверждении научных платформ медицинской науки".
163. Применение сканера для регистрации результатов иммунофер-ментного анализа в стандартных микропланшетах/ Н.А.Стериополо, В.В.Зайко, О.С.Калачева и др. // Клиническая лабораторная диагностика. -М. - 2006. - № 11. - С. 44-46.
164. Применение фосфоресцентных иммуночипов для серологической диагностики иксодовых клещевых боррелиозов/ В.Г.Помелова, Э.И.Коренберг, Н.С.Осин и др. // Эпидемиол. и вакцинопроф. - 2010. - №1 (50).- С. 22-23.
165. Приоритетный национальный проект «Здоровье». Распоряжение Правительства от 9 декабря 2010 г. № 2302-р «Об утверждении Программы развития перинатальных центров в Российской Федерации».
166. Раевская Г.Е. Специфическая лабораторная диагностика TORCH-инфекций. Практическое пособие. - Киев: Диапроф-Мед, 2004. - 55 с.
167. Разработка экспериментальной тест-системы на основе иммуно-чипа для серодиагностики сифилиса/ Г.А.Шипулин, А.Е.Гущин, М.А Смер-дова и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -2008. - № 6. - С.54-58.
168. Распоряжение Правительства РФ от 28 декабря 2012 года №2580-р "Стратегия развития медицинской науки в РФ на период до 2025 года"
169. Рахманова А.Г., Кирпичникова Г.И., Неверов В.А. Этиопатоге-нез, лабораторная диагностика и терапия герпесвирусных инфекций. - СПб.: Питер, 2003. - 47 с.
170. Рахманова А.Г., Кирпичникова Г.И., Неверов В.А. Этиопатоге-нез, лабораторная диагностика и терапия герпесвирусных инфекций. - СПб.: Питер, 2003. - 47 с.
171. Рахманова А.Г., Неверов В.А., Пригожина В.К. Инфекционные болезни: руководство для врачей общей практики (2 изд.) - СПб: Питер, 2001. - 576 с.
172. Рейтинг стран мира по уровню младенческой смертности.The UN Inter-Agency Group for Child Mortality Estimation. Levels and Trends in Child Mortality Report, 2011. Информация об исследовании. [Электронный ресурс] // Центр гуманитарных технологий. URL: http://gtmarket.ru/ratings/child-mortality-rate/info
173. Ротанов С.В. Организация системы контроля качества современных серологических исследований для диагностики сифилиса: Автореф. дис. ... д-ра мед. наук. - М., 2009. - 43 с.
174. Руководство ВОЗ по лабораторной диагностике кори и краснухи. Вторая редакция. Женева. - 2007. - 115 с.
175. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии. - М: Медицина, 2002. - 352 с.
176. Руководство по лабораторной диагностике сифилиса в странах Восточной Европы/ Е.В.Соколовский, Н.В.Фриго, С.В.Ротанов и др. // Вестник дерматологии и венерологии. - 2008. - №5. - С.87-96.
177. Русанова Н.Н., Теплова С.Н., Коченгина С.А. Цитомегаловирус-ная инфекция у детей. - СПб.: Медицина, 2001. - 150 с.
178. Самохин П.А. Цитомегаловирусная инфекция у детей. - М.: Медицина - 1992. - 149 с.
179. Самохин П.А. Цитомегаловирусная инфекция у детей. - М.: Медицина, 1987. - 160 с.
180. Селезнева Т.С., Заргарьянц А.И., Яковлева И.В. и др. Современная ситуация по заболеваемости краснухой на территории РФ // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. - 2009. - №5.- С. 9-19.
181. Семейство иммобилизирующих поверхностей Nunc. Стрептави-диновые и аминогруппы// www.bioscreen.ru/files/upload/15/streptamin.doc.
182. Семенова Т.Б. Клинико-эпидемиологические особенности гени-тального герпеса // ЗППП. - 1995. - №3. - С. 8-11.
183. Семериков В.В. Оптимизация системы эпидемиологического надзора за краснушной инфекцией: Автореф. дис. ... д-ра мед. наук. - М, 2007. - 36 с.
184. Семериков В.В., Попов В.Ф., Седельникова Т.А. и др. Краснуха в России: выявление врожденной краснухи, стратегия и тактика вакцинации // Журн. микробиологии. - 1998. - № 1.- С. 46-49.
185. Серологическая диагностика TORCH-инфекций в новом формате иммуночипа/ Т.А.Чеканова, М.Л.Маркелов, Е.А. Пудова и др. // Инфекция и иммунитет. - 2012. - Т.2. - №1-2. - С. 339-340.
186. Сидорова И.Ф. Аналитические подходы к лабораторной диагностике социально значимых вирусных заболеваний: Автореф. дис. ... д-ра мед. наук. - Саратов, 2010. - 43 с.
187. Симонова Е.Г. Научно-методические и организационные основы системы управления эпидемическим процессом: Автореф. дис. ... д-ра мед. наук. - М., 2010. - 48 с.
188. Скрипченко Е.Ю., Тимченко В.Н., Гузева В.И. Краснушная инфекция в системе «Мать-плод-ребенок» // Детские инфекции. - 2009. - №4. -С.58-63.
189. Скурник А.Р. Цитомегаловирусная инфекция у женщин: Автореф. дис. ... к-та мед. наук. - М., 1993. - 26 с.
190. Смердова М.А., Гришаев М.П. Краснуха и её диагностика // Новости Вектор-Бест. - 2002. - №1(23). С. 10-18.
191. Соколова З.А. Иммунофлуоресцентный анализ общей и свободной форм простат-специфического антигена и других опухолевых маркеров в формате биочипа: Автореф. дис. ... к-та мед. наук. - М., 2010. - 23 с.
192. Соколовский Е.В., Савичева А.М. Лабораторная диагностика сифилиса: методические рекомендации. - СПб.: Н-Л. - 2009. - 72 с.
193. Старовойтова Т.А. Видеоцифровая регистрация для иммунологических и биохимических исследований в практике клинической лабораторной диагностики // Автореф. дис. ... д-ра мед. наук. - М.: ГОУ "РГМУ" Росз-драва, 2010. - 36 с.
194. Стратегический план Европейского региона на 2005-2010 г.г. -Женева: ВОЗ. - 200 с.
195. Суслопаров М.А. Конструирование рекомбинантных антигенов и выявление генетических маркеров для диагностики герпесвирусных инфекций человека. Автореферат на соискание ученой степени доктора медицинских наук. Кольцово. 2008. 58 с.
196. Теория и практика иммуноферментного анализа / А.М.Егоров, А. П.Осипов, Б. Б.Дзантиев, Е.М. Гаврилова. - М.: Высшая школа, 1991. - 288 с.
197. Тихомиров Д.С. Лабораторная диагностика герпесвирусных инфекций у гематологических больных: Автореф. дис. ... к-та мед. наук.- М., 2009. - 23 с.
198. Ткачев В.К., Вяткина Т.Г. ИФА-диагностика сифилиса: информационно-методическое пособие. 3-е изд.// 2005. http://www.vector-best.ru/brosh/9607.htm.
199. Ткаченко Е.Г., Тидир А.А., Леванюк В.Ф. Врожденная цитомега-лия у недоношенных детей / В кн.: Актуальные вопросы патологической анатомии детского возраста/ - Саратов. - 1980. - С.59-60.
200. Ткаченко С.Б. Быстрые простые методы в диагностике TORCH-инфекций. Практическое руководство для врачей. - М.: Астер-Х, 2006. - 104 с.
201. Указ Президента Российской Федерации от 12 мая 2009 г. № 537 «О Стратегии национальной безопасности Российской Федерации до 2020 года»
202. Указ Президента РФ от 9 октября 2007 г. № 1351 «Об утверждении Концепции демографической политики Российской Федерации на период до 2025 года».
203. Ушакова Г. М. Клинико-лабораторная характеристика токсо-плазменной инфекции у детей и терапевтическая тактика: Автореф. дис. ... к-та мед. наук. - СПб., 2006. - 30 с
204 Фарбер Н.А. Цитомегаловирусная инфекция в клинической медицине // Тер. Архив. - 1989. - №11. - С. 6-11.
205. Фарбер Н.А., Кетиладзе Е.С., Демидова С.А. Цитомегалия у новорожденных - трудности диагностики клинически манифестных и латентных форм инфекции. // Сов. мед. - 1982. - № 1. - С.68-71.
206. Фософоресцентный иммуноанализ - новая диагностическая на-нотехнология/ Н.С.Осин, В.Г.Помелова, А.С.Соколов и др.// Тезисы докл. конф. Биотехнологии-2001. - Пущино, 2001. - С. 36-37.
207. Фосфоресцентный микроанализ как новая технологическая платформа для молекулярной диагностики/ Н.С.Осин, В.Г.Помелова, А.С. Соколов и др. // Вестн. РАМН. - 2007. - №12. С. 3-8.
208. Фризе К., Кахель В. Инфекционные заболевания беременных и новорожденных. Пер. с нем. - М.: Медицина, 2003.- 424 с.
209. Хахалин Л.Н. ЦМВ-инфекция у беременных и новорожденных. Неизвестная инфекция: герпес. - Смоленск: Фармаграфикс. - 1999. - 25 с.
210. Холлиман Р.Е. Врожденные, перинатальные и неонатальные инфекции.: Пер.с англ. М.: Медицина, 2000. - 288 с.
211. Цитомегаловирусная инфекция. Методическое пособие /Малышев Н.А., Смагулов К.З., Каражас Н.В. и др. - М. - 2001. - 75 с.
212. Цурикова Е.Ю. Особенности диагностики и иммунореабилита-ции генитального герпеса у мужчин: Автореф. дис. ... к-та мед. наук. - Ростов-на-Дону, 2007. - 23 с.
213. Цыбалова Л.М., Тимофеева Е.В., Бузицкая Ж.В. и др. Эпидеми-ол. процесс при краснухе в условиях массовой иммунизации детей // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунол. - № 5.- 2009. - С. 47-51.
214. Чакова Т.В. Клинико-эпидемиологическая характеристика сифилиса у беременных и оценка диагностических возможностей иммунофер-ментного анализа: Автореф. дис. ... к-та мед. наук. - Новосибирск, 2009. - 24 с.
215. Чеканова Т. А., Маркелов М.Л., Манзенюк И.Н. Разработка им-муночипа для раздельной детекции антител к вирусу гепатита С // Клиническая лабораторная медицина. - 2008. - №6. - С. 25.
216. Чеканова Т.А. Иммуночипы - новый формат тест-систем для серологической диагностики инфекционных заболеваний // М. - Клиническая лабораторная диагностика. - 2011. - № 10. - С. 3.
217. Черкасский Б.Л. Руководство по общей эпидемиологии. — М.: Медицина, 2001. — 558 с.
218. Шахгильдян В.И. Клинико-лабораторная характеристика, диагностика и лечение цитомегаловирусной инфекции у больных ВИЧ-инфекцией: Автореф. дис. ... к-та мед. наук. - М., 1992. - 27 с.
219. Шинкаренко Н.Н. Эпидемиологические особенности герпетической и цитомегаловирусной инфекций и совершенствование эпидемиологического надзора за ними: дис. к-та биол. наук. -Белгород, 2006.- 132 с.
220. Шишкин А.В. Иммунологические биочипы для определения поверхностей антигенов // http://www.medsaic.com.
221. Шишкин А.В. Иммунологический биочип для определения им-мунофенотипа клеток и их морфологического исследования // Морфологические ведомости. - 2008. - №1-2. - С. 135-137.
222. Юминова Н.В. Диагностика краснухи в Российской Федерации // Вакцинопрофилактика. - 2004. - № 6. - С. 11-12.
223. Ярославский В.К. Герпетическая инфекция и беременность. -СПб.: Медицина, 1996. - 32с.
224. Ярославский В.К. Простой герпес. - Л.: Медицина, 1988. - 159 с.
225. Ясинский А.А., Михеева И.В., Лыткина И.Н. и др. Проблемы профилактики краснухи в России // Детские инфекции. - 2004. - № 2. - С. 1113.
226. Ades А.Е., Peckham C.S., Dalt G.E. Prevalence of antibodies to herpes simplex virus types 1 and 2 in pregnant women and estimated rates of infection// Journal of Epidemiology and Community Health. - 1989. - № 43. -р. 53 -60.
227. Alford C.A., Stagno S., Pass R.F, Britt W.J. Congenital and perinatal cytomegalovirus infections// Reviews of Infectious Diseases. - 1990. - №12. - p. 745-753.
228. Aral S.O., Determinants of STD epidemics: implications for fhase appropriate intervention strategies. // STI. - 2002. - Vol.78, suppl.1. - P. 3-13.
229. Banatvala JE, Best JM Rubella. In: Principles of bacteriology, virology and immunity, Volume 4, 8th edn. - Edward Arnold, London, 1990. - P. 501531.
230. Binkin N.J., Koplan J.P., Gates W. Preventing neonatal herpes. The value of weekly viral cultures in pregnant women with recurrent genital herpes//Journal of the American Medical Association. - 1984. - № 251. - p. 28162821.
231. Chee MS, Bankier AT, Beck S, Bohni R, Brown CM, Cerny R, Hors-nell T, Hutchison CA 3rd, Kouzarides T, Martignetti JA, et al.Analysis of the protein-coding content of the sequence of human cytomegalovirus strain AD 169. Curr Top Microbiol Immunol. 1990;154:125-69.
232. Cheshik S.G., Farber N.A., Savitsky G.I. Cytomegalovirus infection in pregnant women and in infant.// Sov. Med. Rew. E: Virology Reviews. - 1993. -№5. - p.103-133.
233. CombiScan 500 Urin Test Analyzer. Technical Features Description // Analyticon Biotechnologies AG. - 2003.
234. CombiScan 500 Urin Test Analyzer. Technical Features Description // Analyticon Biotechnologies AG - 2003.
235. Committee on Fetus and Newborn, Committee on Infectious Diseases 1980 Perinatal herpes simplex virus infections//Pediatrics. - 1980. - № 66. - p.147-149.
236. Cooper L.Z, Krugman S. Clinical manifestations of postnatal and congenital rubella// Archives of Ophthalmology. - 1967. - №77. - p. 434-439.
237. Cooper L.Z. Congenital rubella in the United States/ In: Infections of the fetus and the new-born infant. Progress in Clinical and Biological Research, Vol. 3. AR Liss, New York, 1975. - P. 1-21.
238. Corey L., Spear P.G. Infections with herpes simplex viruses: Parts 2// New England Journal of Medicine. - 1986. -№ 314. - p. 749-757.
239. Corey L., Spear P.G. Infections with herpes simplex viruses: Parts 1// New England Journal of Medicine. - 1986. - № 314. - p. 686-691.
240. Daffos F. Prenatal diagnosis of congenital rubella// Lancet. - 1984. -№2. - P. 1-3.
241. Daffos F., Forestier F., Capella-Pavlovsky M. et al. Prenatal management of 746 pregnancies at risk for congenital toxoplasmosis//New England Journal of Medicine. - 1998. - № 318. - P. 271-275.
242. Dubey J.P., Beattie G.P. Toxoplasmosis in man (Homo sapiens)/ In: Toxoplasmosis of animals and man. CRC Press, Florida. - 1988. - P. 41-60.
243. Freij B.J., Sever J.L. Herpes virus infections in pregnancy: risks to embryo, fetus and neonate//Clinics in Perinatology. - 1988. - №15. - p. 203-231.
244. Gammon J., Nahmias A. Herpes simplex ocular infections in the newborn/ In: Viral Diseases of the Eye . - Lea and Febiger, Philadelphia, 1985. -P. 46-58.
245. Gelb L. The human herpesviruses. - N.York: Raven Press, 1993. 145
p.
246. Grose C., Weiner C.P. Prenatal diagnosis of congenital cytomegalovirus infection: Two decades later// American Journal of Obstetrics and Gynecology. - 1990. - № 163. - p. 447-450.
247. Guidelines for surveillance of congenital rubella syndrome and rubel-la/ Cutts F.T., Best J., Sdiquiira M.M., Engstrom K. - Department of Vaccines and Biologicals, World Health Organization, Geneva, 1999. - 250 p.
248. Halwachs-Baumann G., Genser B. Die konnatale zytomegalievirus Infection// Clin. Microbiol. Rev. - 2002. - №10. - P. 680-715 .
249. Ho M. Cytomegalovirus, Biology and infection. - N.York: Plenum Press, 1991. - 250 p.
250. Hohfeld P., Daffos F., Thulliez P. et al. Fetal toxoplasmosis: outcome of pregnancy and infant follow-up after in utero treatment// J. of Pediatrics. - 1989. - № 115.- P. 765-769.
251. Holliman R.E. Serological study of the prevalence of toxoplasmosis in asymptomatic patients infected with human immunodeficiency vi-rus//Epidemiology and Infection. -1990. - № 5.- P. 415-418.
252. Horstmann D.M. Rubella: thechallenge of its control // Rev.Infect. Dis. - 1971.- № 123. - P. 640-654.
253. Infection with cytomegalovirus during pregnancy: specific IgM antibodies as a marker of recent primary infection/ Griffiths P.D., Stagno S., Pass R.F., Smith R.J., Alford C.A.// Journal of Infectious Diseases. - 1982. - № 145. - P. 647-653.
254. Jethon C., Doerr H.W., Weber B. Serodiagnosis of Human Cytomegalovirus infection: Evaluation of Three Enzyme Immunoassays for the Detection of HCMV-specific Ig-M antibodies in immunocompetent and immunodeficit Patients. // J.Lab.Med. - 1996. -№ 20(9). - P.480-484.
255. John P Tomtishen III. Human cytomegalovirus tegument proteins (pp65, pp71, pp150, pp28) / Virology Journal, 2012, doi: 10.1186/1743-422x-9-22. http://www.virologyj.com/content/9/1/22.
256. Kennedy E.J. Darkfield microscopy for the detection and identification of Treponema pallidum/ In: Manual of tests for syphilis. 9-th Ed. - Washington: DC, 1998. - P.119-134.
257. Kern A. Fundamentals and prospects of syphilis serology // Dermatol Monatsschr. - 1979. - № 165 (11). - P.769-782.
258 Landini M.P. Humoral Immune Response to Proteins of Human Cy-tomegalovirus Latency - Associated Transcripts. // Biol. of Blood and Marrow Transplantation. - 2000. - v.6. - P. 100-108.
259. Larsen S. Laboratory diagnosis and interpretation of test for syphilis. // Clin. Microbiol. Rev. - 1995. - Vol.8, №1 - P.1-21.
260. Mead P.S., Slutsker L., Griffin P.M., Tauxe R.V. Food-Related Illness and Death in the United States//Emerg. Infect. Dis. - 1999. - № 5(6). - P. 841-842.
261. Mosarski E.S. The human herpesviruses. - N.York: Raven Press, 1993. - 334 p.
262. Nahmias A. J., Lee F. K., Beckman-Nahmias S. Sero-epidemiological and -sociological patterns of herpes simplex virus infection in the world // Scand. J. Infect. Dis. -1990. - № 69. - p. 19-36.
263. Nahmias A. The TORCH syndrome of perinatal infections//Hosp. Pract. - 1974. - № 9. -P. 65-72.
264. Nahmias A., Keyserling H. Neonatal herpes simplex in context of the TORCH complex. In: Sexually transmitted diseases. - New York: McGraw Hill, 1984. - P. 816-826.
265. Nakane P. K., Kawoi A. Peroxidase-labelled antibody a new method of conjugation// J. Histochem. Cytochem. - 1974. - №22. P. 1084-1091.
266. Osin N.S., Pomelova V.G. Multi-array immunophosphorescence technology for the detection of pathogens// Frontiers in research. - 2008. - Vol.24.
- P. 233-240.
267. Parker S.P., Cubitt W.D. The use of dried blood spot sample in epidemiological studies//J. Clin. Pathol. -1999. - № 5 - P. 633-639.
268. Plotkin S et al. Rubella vaccine. In: Plotkin S, Orenstein W, Offit P, eds. Vaccines, 5th ed. Philadelphia, Saunders, 2008:467-517.
269. Plotkin S.A., Farkuhar J.D., Katz M., Bauer F.// Am. J. Dis. Child. -1969. - № 118. - P. 409-439.
270. Pope V., Fears V.B. Comparison of the Serodia Treponema pallidum particle agglutination, Captia Syphilis-G, and SpiroTek Reagin II test with standard test techniques for diagnosis of syphilis // J. Clin.Microbiology. - 2000. - №7.
- P. 2543-2545.
271. Prenatal diagnosis of congenital toxoplasmosis/ G.Desmonts, F.Daffos, F.Forestier et al. // Lancet. - 1985.-№ 1: 500-504.
272. Randolph A. G., Washington A. E., Prober C. H., Cesarean delivery for women presenting with genital herpes lesions // JAMA. — 1993. - №270. - p. 77-82.
273. Randolph A. G., Washington A. E., Prober C. H., Cesarean delivery for women presenting with genital herpes lesions // JAMA. — 1993. - № 270. - p. 77-82
274. Remington J.S., Desmonts G. 1990 Toxoplasmosis/In: Infectious diseases of the fetus and newborn infant, 3rd edn. - WB Saunders, Philadelphia, 1990. - P.143-263.
275. Remington J.S., Desmonts G. Toxoplasmosis/ In: Infectious diseases of the fetus and newborn infant, 3rd edn. - WB Saunders, Philadelphia. - 1990. - P. 143-263.
276. Robert F. Kalejta. Tegument Proteins of Human Cytomegalovirus / Microbiol Mol Biol Rev. 2008 June; 72(2): 249-265, doi: 10.1128/MMBR.00040-07. http: //www.ncbi.nlm.nih. gov/pmc/articles/PMC2415745/.
277. Robertson S. // Pan-American J. Public Health. - 2003. - № 14. - P. 306-315.
278. Sexually Transmitted Disease. Syphilis Surveillance Report 2007. // Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention; Division of STD Prevention.; Atlanta, Georgia, U.S.: March 2009. - P.30 (httm:// www.cdc.gov/std/Syphilis2007/defoult.htm).
279. Sexually Transmitted Disease. Syphilis Surveillance Report 2007. // Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention; Division of STD Prevention.; Atlanta, Georgia, U.S.: March 2009. - P.30 (httm:// www.cdc.gov/std/Syphilis2007/defoult.htm).
280. Shornick J. K. Herpes gestations // Dermatologic Clinics. - 1993. -№11(3). - p.527-533.
281. Stability and inactivation of HTLV III/LAV under clinical and laboratory environments/ L.Resnisk, K.Veren, S. Salahuddin et al. // J. A. M. A. - 1986. № 6 - P. 1887-1891.
282. Stagno S. Cytomegalovirus/ In: Infectious diseases of the fetus and newborn infant. - WB Sauders, Philadelphia, 1990. - p. 150-189
283. Stagno S., Pass R.F. Primary CMV infection in pregnancy: incidence, transmission to fetus, and clinical outcome//JAMA. - 1986. -№256. - p.1904-1908.
284. Stagno S., Pass R.F., Dworsky M.E. Congenital cytomegalovirus infection; the relative importance of primary and recurrent maternal infection// New England Journal of Medicine. - 1982. № 306. - p. 945-949.
285. Sullender W.M., Yasukawa L.L., Schwartz M. Type specific antibodies to herpes simplex virus type 2 (HSV-2) glycpprotein G in pregnant women, infants exposed to maternal HSV-2 infection at delivery and infants with neonatal herpes//Journal of Infectious Diseases. - 1988. - №157. - p. 164-171.
286. Surveillance of antibody to measles, mumps, and rubella by age/ Morgan-Capner P., Wright J., Miller C.L., Miller E.// British Medical Journal. -1988. -№297. - p. 770-772.
287. Teutsch S.M., Sulzer A.J., Ramsey J.E.et al. Toxoplasma gondii isolated from amniotic fluid// Obstetrics and Gynecology. - 1980. - № 55. - P. 28-48.
288. The TORCH complex: perinatal infections associated with toxoplas-ma and rubella, cytomegalo- and herpes simplex viruses/ A.Nahmias, K.Walls, J.Stewart et al.// Pediatr. Res. - 1971/ -№ 5. - P. 405-406.
289. UK National Guidelines on the Management of Syphilis, 2008 // (http://www.bashh.org/documents/1879).
290. Use of PCR in the diagnosis of early syphilis in the United Kingdom / H.M. Palmer, S.P. Higgins, A.J. Herring, M.A. Kingston. // Sex. Transm. Infect. -2003. - Vol.79. - P.479-483.
291. Wheeler H.L. Dark ground microscopy and treponemal serological tests in the diagnosis of early syphilis// Sex. Transm. Infect. - 2004. - Vol.80. -P.411-414.
292. Whitley R.J. Herpes simplex viruses/ In: Virology. - Raven Press, New York, 1980. - p. 1843-1887.
293. Whitley R. J. Neonatal herpes simplex virus infections // J. Med. Virol. Suppl. -1993. - № 1. - p. 13-21.
294. Yeager A.S., Arvin A.M. Reasons for the absence of a history of recurrent genital infections in mothers of neonates infected with herpes simplex vi-rus// Pediatrics. - 1984. - №73. - p. 188-193.
295. Yeager A.S., Arvin A.M., Urbani L.J., Kemp J.A. Relationship of antibody to outcome in neonatal herpes simplex virus infections//Infection and Immunity. - 1980. - №29. - p. 532- 538.
296. Ynouve S., Hasegava A., Matsuno S. and oth. Changes in antibody avidity after virus infection: detection by an immunosorbent assay in which a mild protein-denaturing agent is employed // J. Clin. Microbiol. - 1984. -V. 20. - P. 525 - 529.
297. Ynouye S., Hasegava A., Matsuno S. Changes in antibody avidity after virus infections: detection by an immunosorbent assay in which a mild protein-denaturing agent is employed // J.Clin.Microbiol. - 1984. - V. 20. - P. 525-529
298. Young H. Guidelines for serologic testing for syphilis. // Sex. Transm. Inf. - 2000. - Vol. 76. - P. 403-405.
299. Young H. Syphilis: new diagnostic directions // Int. J. of STD & AIDS. - 1992. - №3. - 391-413.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ДО иммуноглобулины класса G
1вЫ иммуноглобулины класса М
ТОЯСН-группа (ТОЯСН-инфекции) группа инфекций, включающая токсоплазмоз, краснуху, цитомегаловирусную инфекцию и герпес-вирусную инфекцию
АПК аппаратно-программный комплекс
БСА бычий сывороточный альбумин
ВПГ вирус простого герпеса
ВПГ-1 вирус простого герпеса 1 типа
ВПГ-2 вирус простого герпеса 2 типа
ВУИ внутриутробные инфекции
ВЦР видеоцифровая регистрация
ИБ иммунный блоттинг
ИК инфракрасный
ИМПиТМ Институт медицинской паразитологии и тропической медицины
ИФА иммуноферментный анализ
ИФТС иммуноферментная тест-система
ИЧ иммуночип
К- контрольный отрицательный образец
К+ контрольный положительный образец
КАГ контроль специфичности реакции
Кво контроль внесения образца
КДЛ клинико-диагностическая лаборатория
Кпор контрольный образец уровня "среза"
МО медицинская организация
ОП оптическая плотность
(ОР)к концентрат отмывающего раствора
ОРВИ острая респираторная вирусная инфекция
ОСО отраслевой стандартный образец
ПЗС прибор с зарядовой связью
ПО программное обеспечение
ПР промывочный раствор
ПС полистирол
ПХВ поливинилхлорид
ПЭТФГ полиэтилентерефталатгликоль
РБР разводящий буферный раствор
РИ раствор индикаторный
РИА радиоиммунологический анализ
РИФ реакция иммунофлюоресценции
РРО раствор для разведения образцов
РРСК раствор для разведения сывороток и конъюгата
СВК синдром врожденной краснухи
СМЖ спинно-мозговая жидкость
СР субстратный раствор
ТМБ трис(гидроксиметиламинометан)
УФ ультрафиолетовый
ФИТЦ флюоресцеина изотиоцианат
ФСБ фосфатно-солевой буферный раствор
ЦМВ цитомегаловирус
ЦМВИ цитомегаловирусная инфекция, цитомегалия
ЦПД цитопатогенное действие
Приложение
Технология производства тест-системы для выявления отдельных
антигенов ЦМВ
1. Получение очищенного вирусного лизата
Приготовление рабочей питательной среды. Приготовление питательной среды проводили в ламинар-боксе предварительно подготовленном для работы. Вносили в ламинар-бокс все необходимые компоненты: ростовую питательную среду и фосфатно-солевой буферный раствор. Обрабатывали снаружи все емкости с компонентами раствором пурсепта, выдерживали в течение 15-20 сек, убирали излишки дезсредства с помощью бумажного полотенца. Вносили в ростовую питательную среду 10% фетальной сыворотки, 1% антибиотика и 1% глютамина от объема питательной среды.
Инфицирование клеточных линий. Размораживали музейную культуру вирусного штамма «СМУ ДО». Вносили вирус в дозе 0,4 ТЦД90/клетку и проводили его адсорбцию в течение 2 ч при 37еС.
Далее удаляли вируссодержащую питательную среду и вносили ростовую. Зараженную культуру инкубировали 2 сут. до полного разрушения монослоя в результате ЦПД вируса. С поверхности инфицированного клеточного монослоя удаляли ростовую среду и вносили 10 мл фосфатно-солевого буферного раствора. После этого содержимое матраса подвергали однократному замораживанию при -40еС и оттаиванию при комнатной температуре. Сливали содержимое в стерильную центрифужную пробирку и обрабатывали ультразвуком в течение 2 мин. Центрифугировали вируссодер-жащую жидкость при 8000 об/мин в течение 30 мин, при 4+1еС. Готовую ви-руссодержащую жидкость (лизат) хранили до использования при - 70еС.
2. Приготовление растворов для электрофореза
Приготовление Трис-солянокислого буферного раствора (ТБР-1) в
концентрации 1,25 моль/л. 15,14 г трис-(оксиметил)-аминометана растворяли в 80 мл очищенной воды (2-ой ступени очистки) в мерном стакане при пере-
мешивании на магнитной мешалке. Доводили рН раствора до 8,8, добавляя по каплям концентрированную соляную кислоту (1300-1500 мкл). Объем раствора доводили водой до 100 мл. Фильтровали через бумажный фильтр.
Приготовление Трис-солянокислого буферного раствора (ТБР-2) в концентрации 0,5 моль/л. 6,057 г трис-(оксиметил)-аминометана растворяли в 80 мл очищенной воды (2-ой ступени очистки) в мерном стакане при перемешивании на магнитной мешалке. Доводили рН раствора до 6,8, добавляя по каплям концентрированную соляную кислоту (3,5-4 мл). Объем раствора довести водой до 100 мл. Фильтровали через бумажный фильтр.
Приготовление диссоциирующего буферного раствора (ДБР). Готовили 0,5% раствор бромфенолового синего, для чего 0,1 г бромфенолового синего растворяли в 20 мл очищенной воды (2-й ступени очистки). Полученный раствор фильтровали через бумажный фильтр. Во флакон из темного стекла с помощью мерного цилиндра отмеряли 30 мл очищенной воды (2-ой ступени очистки), добавляли 10,6 мл ТБР-2, 16,8 мл 10% раствора додецилсульфа-та натрия (SDS), 21 мл глицерина и 1,6 мл 0,5%-ного раствора бромфенолового синего. Все тщательно перемешивали.
Приготовление 30%-ного раствора акриламида/бис-акриламида. 29,2 г акриламида и 0,8 г бисакриламида вносили в стеклянную колбу с 80 мл очищенной воды (2-ой ступени очистки), растворяли навески при перемешивании на магнитной мешалке и доводили объем раствора до 100 мл. Полученный раствор фильтровали через бумажный фильтр.
Приготовление 10%-ного раствора додецилсульфата натрия (SDS). 10 г додецилсульфата натрия (SDS) растворяли в 90 мл очищенной воды (2-ой ступени очистки).
Приготовление 10%-ного раствора персульфата аммония (APS). 0,1 г персульфата аммония растворяли в 900 мкл очищенной воды (2-ой ступени очистки).
Приготовление 10-кратного концентрата электродного буферного раствора. 30 г трис-(оксиметил)-аминометана; 144 г глицина вносили в стеклянную колбу с 800 мл очищенной воды (1 -й категории), растворяли навески и доводили объем раствора до 1 л. Измеряли рН (значение рН должно составлять 8,2-8,4). Затем добавляли 10 г додецилсульфата натрия (SDS), тщательно перемешивали на магнитной мешалке до полного растворения. Полученный раствор фильтровали через бумажный фильтр.
Приготовление раствора для окраски мембраны. Готовили 3% раствор трихлоруксусной кислоты, для чего 30 г концентрированной трихлорук-сусной кислоты растворяли в 970 мл очищенной воды (1 категории) при перемешивании на магнитной мешалке. 1 г Пунцового S растворяли в 1000 мл 3%-ного раствора трихлоруксусной кислоты. Хорошо перемешивали и фильтровали через бумажный фильтр.
Приготовление 10-кратного концентрата буферного раствора для электропереноса. В стеклянную колбу отмеряли мерным цилиндром 800 мл очищенной воды 1 категории. Вносили в колбу 28,8 г трис-(оксиметил)-аминометана и 140 г глицина, растворяли их при тщательном перемешивании. Объем раствора доводили до 1 л и тщательно перемешивали на магнитной мешалке.
Приготовление однократного буферного раствора для электропереноса. Для приготовления 5 л однократного буферного раствора для электропереноса в стеклянную колбу вместимостью 6 л отмеряли мерным цилиндром 500 мл 10-кратного концентрата, 1000 мл метанола и доводили объем раствора до 5000 мл очищенной водой 1 ступени. Полученный раствор тщательно перемешивали стеклянной палочкой.
Приготовление раствора сыворотки диагностической моноспецифической против IgG человека (Анти- ^О). В карбонат-бикарбонатный буферный раствор (КББ) вносили краситель Пунцовый S из расчета 0,001 г красителя на 10 мл КББ. Перемешивали на магнитной мешалке в течение 30 мин.
Сыворотку диагностическую моноспецифическую (лиофилизированную) разводили в 1 мл очищенной воды (2 ступени очистки) и тщательно встряхивали на вортексе. 0,1 мл полученного раствора разводили в 6 мл КББ.
3. Приготовление иммуносорбента
Иммуносорбент (стрипы из нитроцеллюлозной мембраны, на которой сорбированы антигены ЦМВ) готовили электрофоретическим разделением на антигены в двухфазном полиакриламидном геле лизата ЦМВ и электропереносом антигенов ЦМВ из геля на нитроцеллюлозную мембрану.
Приготовление полиакриламидного геля (ПААГ) проводили в соответствии с инструкцией производителя. Готовили раствор для полимеризации нижней фазы двухфазного полиакриламидного геля, смешивая ингредиенты в бакпечатке.
Нижняя фаза (11,7%): для приготовления одного полиакриламидного геля смешивали 5,68 мл воды II степени очистки, 6,4 мл 30%-ного раствора акриламида/бисакриламида, 4,1 мл трис-солянокислого буферного раствора (ТБР-1) в концентрации 1,25 моль/л, 0,17 мл 10%-ного раствора додецил-сульфата натрия и 0,65 мл глицерина. После тщательного перемешивания дбавляли 11,4 мкл ТЕМЕД (^Ы,№№-тетраметил-этилендиамина) и 74,3 мкл 10% раствора персульфата аммония. Раствор переливали в прибор для формирования геля. В него помещали магнит для перемешивания. Конец отводной трубки соединяли шлангом с перистальтическим насосом, установливали регулятором скорости режим работы 4 ед. Включали мешалку, открывали кран отводной трубки и включали насос. Заливали нижнюю фазу ПААГ между стеклами столика. Сверху при помощи ручной пипетки наслаивали 1мл дистиллированной воды. Оставляли ПААГ полимеризоваться на 4-5 ч при температуре 18-22°С. Через 4-5 ч после заливки нижней фазы ПААГ готовили раствор для формирования верхней фазы.
Верхняя фаза (4%): для приготовления одного полиакриламидного геля смешивали 4,88 мл воды II степени очистки, 1,04 мл 30%-ного раствора
акриламида/бисакриламида, 2,0 мл трис-солянокислого буферного раствора (ТБР-2) в концентрации 0,5 моль/л, 0,09 мл 10%-ного раствора додецилсуль-фата натрия, тщательно перемешивали и добавляли 5,26 мкл ТЕМЕДа (К,К,К'К'-тетраметилэтилендиамина) и 33,8 мкл 10% раствора персульфата аммония.
Раствор тщательно перемешивали и с помощью ручной пипетки заливали верхнюю фазу ПААГ между стеклами столика. В заполненную камеру вставляли спейсер таким образом, чтобы на поверхности не образовывались пузырьки. Растворы выдерживали в камере 16-18 ч при температуре 18-22°С. Завершение полимеризации контролировали визуально.
Непригодными для электрофореза считали гели, в которых не произошла полимеризация (жидкие гели), и гели с наличием пузырьков воздуха и неровностями поверхности (ямки, бороздки).
Подготовка образцов. Готовили рабочий раствор антигена (лизата)
Л
ЦМВ в зависимости от концентрации белка (из расчета 1 мкг на 1 мм ПААГ). Ширина рабочей поверхности сплошного геля составляет 130 мм, толщина - 1мм.
Для загрузки в один ПААГ в микропробирке типа Эппендорф смешивали:
-0,108 мл лизата ЦМВ ([С]=1,2 мг/мл),
-0,216 мл диссоциирующего буферного раствора,
-0,010 мл 2-меркаптоэтанола.
Тщательно перемешивали, пробирку помещали на водяную баню и выдерживали при температуре 95-100°С в течение 4 мин.
Проведение электрофореза. Извлекали спейсер из камеры с гелем. Вычищали карман от остатков геля при помощи бумаги. В полученный карман вносили 1 мл однократного буферного раствора для электрофореза. Затем с помощью микрошприца вносили рабочий раствор антигена. Готовили однократный электродный буферный раствор (2500 мл на одну камеру). Для
этого в стеклянный стакан вносили 250 мл 10-кратного концентрата электродного буферного раствора и доводили объем раствора до 2500 мл очищенной водой 1 категории. Собирали камеру для проведения электрофореза, в соответствии с инструкцией фирмы-производителя. Заливали 2000 мл однократного электродного буферного раствора в нижнюю часть камеры. В верхнюю часть заливали 500 мл буфера. Ставили камеру на магнитную мешалку и включали мешалку. Подключали камеру для электрофореза к охлаждающей циркуляционной бане в соответствии с инструкцией фирмы-производителя. Включали циркуляционную баню в режим охлаждения.
Прибор для электрофореза подключали к источнику питания в соответствии с инструкцией фирмы-производителя. Электрофорез проводили при температуре 6-8 °С. Рабочее напряжение в начале процесса 100 В. Через 3040 мин напряжение увеличивали до 150 В, еще через 60 мин напряжение увеличивали до 250 В. Электрофорез останавливали после того, как фронт бромфенолового синего достигал нижнего края ПААГ или совсем выходил из него. По окончании электрофореза гель извлекали из камеры и использовали для электропереноса.
Проведение электропереноса. В камеру для проведения электропереноса помещали 5,0 л однократного буферного раствора для электропереноса (БП-1х). К камере подключали охлаждающую циркуляционную водяную баню с температурой охлаждающей жидкости 14-16°С.
Лист нитроцеллюлозной мембраны, размером 15х14 см, маркировали карандашом, помещали рабочей поверхностью вверх в буферный раствор для электропереноса и выдерживали в течение 30 мин. Собирали "сэндвич" «гель-мембрана», используя бумагу для блоттинга или фильтровальную бумагу и губку, входящую в комплект ячейки для переноса. Собранный блок-"сэндвич" помещали в ячейку камеры для электропереноса, ориентируя мембрану в сторону анода.
Прибор для электропереноса подключали к источнику питания в соответствии с инструкцией фирмы-производителя. Процесс электрофоретиче-ского переноса белковых комплексов проводили при напряжении 100 В в течение 3 ч.
Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.