Экспрессия глутатионпероксидазы и глутатионредуктазы при оксидативном стрессе различной этиологии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, кандидат биологических наук Искусных, Игорь Юрьевич

• Искусных, Игорь Юрьевич
• кандидат биологических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Искусных, Игорь Юрьевич

Содержание

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1 .Свободнорадикальное окисление биомолекул и система антиоксидантной защиты

1.1. Свободные радикалы и оксидативный стресс

1.2. Антиоксидантная система защиты

1.2.1.Ферментативные и неферментативные звенья антиоксидантной защиты

1.2.2.Роль глутатионредуктазы в механизмах защиты от клеточного стресса

1.2.3.Структурная организация и биохимические свойства глутатион-

пероксидаз

1.2.4. Физиолого-биохимическое значение глюкозо-6-фосфатдегидроге-назы

1.2.5. Кооперативность функционирования антиоксидантных ферментов

2. Патологии, сопряженные с оксидативным стрессом

2.1. Миокардит и его патогенез

2.1.2.Механизмы влияния адреналина на уровень свободных радикалов в

клеточных системах

2.2.Токсическое поражение печени

2.2.1.Общая характеристика гепатитов

2.2.2.Метаболические нарушения при токсическом гепатите

2.3.Сахарный диабет и его типы

2.3.1.Свободнорадикальное окисление в патогенезе сахарного диабета

2.4. Пероксид водорода как индуктор оксидативного стресса

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объект исследования

2.2. Методы исследования

2.3. Индукция экспериментального токсического гепатита

2.4. Создание модели адреналинового миокардита

2.5. Моделирование сахарного диабета 2-го типа

2.6. Получение тканевых гомогенатов

2.7. Определение интенсивности процессов свободнорадикального окисления биосубстратов методом биохемилюминесценции

2.8. Определение содержания диеновых конъюгатов

2.9. Определение активности глутатионредуктазы

2.1.0 Определение активности глутатионпероксидазы

2.1.1. Определение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы

2.1.2. Определение активности аланинаминотрансферазы и аспартат-

аминотрансферазы

2.1.3 .Определение активности креатинкиназы-МВ

2.1.4. Определение количества белка

2.1.5. Экстракция тотальной РНК тризоловым методом

2.1.6. Электрофорез РНК

2.1.7. Обратная транскрипция

2.1.8. ПЦР-амплификация в режиме реального времени

2.1.9. Определение уровня экспрессии генов глутатионредуктазы, глутатионпероксидазы и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы

2.2.0. Электрофорез ДНК

2.2.1. Среды для работы с культурами клеток

2.2.2. Оценка метаболической активности и жизнеспособности клеток

2.2.3. Оценка степени развития апоптоза в клеточной культуре фибробластов

2.2.4. Корреляционно-регрессионный анализ

2.2.5.Статистическая обработка экспериментальных данных

ГЛАВА 3. ИНТЕНСИВНОСТЬ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫХ ПРОЦЕССОВ И ЭКСПРЕССИЯ ГЛУТАТИОНПЕРОКСИДАЗЫ И ГЛУТАТИОН-РЕДУКТАЗЫ В СЕРДЦЕ КРЫС В ДИНАМИКЕ РАЗВИТИЯ АДРЕНАЛИНОВОГО МИОКАРДИТА

3.1. Активность ферментов-маркеров цитолиза кардиомиоцитов в сыворотке крови крыс при развитии адреналинового миокардита

3.2. Содержание диеновых конъюгатов в сердце крыс в динамике развития адреналинового миокардита

3.3. Динамика параметров биохемилюминесценции в сердце крыс при адреналиновом миокардите

3.4. Активность глутатионредуктазы и глутатионпероксидазы в сердце крыс в динамике развития адреналинового миокардита

3.5. Активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в сердце крыс при адреналиновом миокардите

3.6. Корреляционный анализ активностей глутатионредуктазы, глутатионпероксидазы и интенсивности свободнорадикальных процессов при адреналиновом миокардите

3.7. Экспрессия глутатионредуктазы в сердце крыс при адреналиновом миокардите

3.8. Экспрессия глутатионпероксидазы в сердце крыс в при адреналиновом миокардите

3.9. Уровень экспрессии глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в сердце крыс при

адреналиновом миокардите

ГЛАВА 4. ИНТЕНСИВНОСТЬ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ БИОСУБСТРАТОВ И ЭКСПРЕССИЯ ГЛУТАТИОНПЕРОКСИДАЗЫ И ГЛУТАТИОНРЕДУКТАЗЫ ПРИ ТОКСИЧЕСКОМ ПОРАЖЕНИИ

ПЕЧЕНИ КРЫС

4.1. Активность ферментов-маркеров цитолиза гепатоцитов в сыворотке крови крыс при токсическом поражении печени, индуцированном тетрахлорметаном

4.2. Содержание диеновых конъюгатов в печени крыс в динамике развития токсического гепатита

4.3. Параметры биохемилюминесценции в печени крыс в динамике развития токсического гепатита, индуцированного тетрахлорметаном

4.4. Активность глутатионредуктазы и глутатионпероксидазы при токсическом поражении печени

4.5. Активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в печени крыс при токсическом гепатите

4.6. Корреляционный анализ активностей глутатионредуктазы и глутатионпероксидазы и интенсивности свободнорадикальных процессов в печени крыс при экспериментальном токсическом гепатите

4.7. Экспрессия глутатионредуктазы при токсическом поражении печени

4.8. Экспрессия глутатионпероксидазы при токсическом поражении печени

4.9. Экспрессия глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы при экспериментальном

токсическом гепатите

ГЛАВА 5. ИНТЕНСИВНОСТЬ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ БИОСУБСТРАТОВ И ЭКСПРЕССИЯ ГЛУТАТИОНПЕРОКСИДАЗЫ И ГЛУТАТИОНРЕДУКТАЗЫ В ПЕЧЕНИ КРЫС В ДИНАМИКЕ РАЗВИТИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО САХАРНОГО ДИАБЕТА 2 ТИПА

5.1. Уровень глюкозы в сыворотке и моче крыс в динамике развития сахарного диабета 2 типа

5.2. Содержание диеновых конъюгатов в печени крыс в динамике развития экспериментального сахарного диабета 2 типа

5.3. Параметры биохемилюминесценции в печени крыс в динамике развития сахарного диабета 2 типа

5.4. Активность глутатионредуктазы и глутатионпероксидазы в печени крыс при сахарном диабете 2 типа

5.5. Активность глкжозо-6-фосфатдегидрогеназы в печени крыс при сахарном диабете 2 типа

5.6.Корреляционный анализ активностей глутатионредуктазы и глутатионпероксидазы и уровня свободнорадикальных процессов в печени крыс при сахарном диабете 2 типа

5.7. Экспрессия глутатионредуктазы в печени крыс при развитии сахарного диабета 2 типа

5.8. Экспрессия глутатионпероксидазы в печени крыс при сахарном диабете

2 типа

5.9.Экспрессия глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в печени крыс при сахарном

диабете 2 типа

ГЛАВА 6. ВЛИЯНИЕ ПЕРОКСИДА ВОДОРОДА НА ЭКСПРЕССИЮ ГЛУТАТИОНПЕРОКСИДАЗЫ И ГЛУТАТИОНРЕДУКТАЗЫ, МЕТАБОЛИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ И ПРОЛИФЕРАЦИЮ ФИБРОБЛАСТОВ ЛИНИИ L929

6.1. Уровень клеточной гибели в культуре фибробластов линии L929 при оксидативном стрессе, индуцированном пероксидом водорода

6.2. Дыхательная активность фибробластов линии L929 при оксидативном стрессе, индуцированном пероксидом водорода

6.3. Экспрессия гена глутатионредуктазы и глутатионпероксидазы при интенсификации свободнорадикального окисления в культуре фибробластов

линии L929 пероксидом водорода

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРНЫХ ИСТОЧНИКОВ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АДФ - аденозиндифосфат

АлАТ - аланинаминотрансфераза

АОС - антиоксидантная система

АсАТ- аспартатаминотрансфераза

АТФ - аденозинтрифосфат

АФК - активные формы кислорода

БХЛ - биохемилюминесценция

Г6ФДГ- глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа

ГП-глутатионпероксидаза

ГПС-глутатионпероксидазная система

ГР- глутатионредуктаза

ГСД- гистидинсодержащие соединения

ДК- диеновые коньюгаты

ДМСО-диметилсульфоксид

ИБС - ишемическая болезнь сердца

КК- креатинкиназа

КПНГ-продукты неферментативного гликозилирования ЛПВП -липопротеины высокой плотности Л11Ш1 -липопротеины низкой плотности МДА- малоновый альдегид

мтДНК - митохондриальная дезоксирибонуклеиновая кислота

НАДФ -никотинамидадениндинуклеотидфосфат окисленный

НАДФН-никотинамидадениндинуклеотидфосфат восстановленный

ПОЛ - пероксидное окисление липидов

рКПНГ- рецептор КПНГ

РКС - протеинкиназа С

САЗ - система антиоксидантной защиты

СД2 - сахарный диабет 2 типа

СО - свободнорадикальное окисление СОД- супероксиддисмутаза СР - свободные радикалы ФАД-флавинадениндинуклеотид ЦТК -цикл трикарбоновых кислот ЭТС- эмбриональная телячья сыворотка а-ТосН -токоферол в8Н - восстановленный глутатион в880- окисленный глутатион ЫБ-кВ- ядерный фактор транскрипции

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Экспрессия глутатионпероксидазы и глутатионредуктазы при оксидативном стрессе различной этиологии»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы. Окислительный стресс или некомпенсированное образование в клетке активных форм кислорода (АФК), является причиной систематического повреждения ДНК, белков и липидов, что может приводить к клеточной смерти и лежит в основе ряда патологических состояний, таких как сердечно-сосудистые заболевания, токсическое поражение печени и сахарный диабет, относящихся к свободнорадикальным патологиям. В ответ на интенсификацию свободнорадикального окисления (СО) биосубстратов происходит активизация антиоксидантной системы (АОС) клетки. Глутатионредуктазная/глутатионпероксидазная (ГР/ГП) система является важнейшим компонентом антиоксидантной защиты организма [18], поддерживающей на стационарном уровне интенсивность протекания свободнорадикальных процессов [18, 21, 81]. Благодаря функционированию ГР/ГП системы в клетках млекопитающих обеспечивается детоксикация гидроперекисей и перекисей, являющихся основным источником гидроксильного радикала, образующегося в реакции Фентона в присутствии ионов Ре [63, 241].Учитывая то обстоятельство, что большинство известных патологических состояний сопровождаются усилением СО [45, 126, 177] биосубстратов и изменением активности АОС, весьма актуальной проблемой представляется оценка состояния этих систем с целью ранней диагностики и выбора тактики лечения заболеваний.

Происходящее под влиянием негативных факторов повреждение мембраны кардиомиоцитов сопровождается выделением в межклеточное пространство биологически активных веществ, таких как гистамин, брадикинин, серотонин, лейкотриены. Под действием этих веществ увеличивается проницаемость сосудов микроциркуляторного русла, развивается отек ткани миокарда, наблюдаются точечные кровоизлияния, что приводит к развитию очагов ишемии, где развивается ацидоз, дегенерация и

некроз кардиомиоцитов. Существует мнение, что при адреналиновом миокардите в результате аутоокисления адреналина происходит интенсификация свободнорадикальных процессов. Усиление работы сердечной мышцы в результате введения адреналина приводит к гипоксии, что вызывает интенсификацию СО биосубстратов, благодаря активации N0-синтазы и ксантинооксидазы.

К числу ксенобиотиков с наиболее высокой степенью избирательной гепатотоксичности относятся хлорированные углеводороды, типичным представителем которых является тетрахлорметан (СС14). Имеющиеся данные свидетельствуют, что развитие СС14-гепатита сопряжено с интенсификацией СО биосубстратов [47, 3]. Организм человека и животных располагает целым рядом сложных биохимических систем (метаболизма ксенобиотиков, антирадикальной защиты и т.д.), во многом определяющих чувствительность к действию токсинов разного строения. К их числу относится и глутатионовая система.

Сахарный диабет второго типа (СД2) характеризуется хронической гипергликемией, которая приводит к нарушению обмена веществ, влияя на него непосредственно или через изменение экспрессии генов различных белков, участвующих в патогенезе и механизмах развития осложнений при данной патологии. Гипергликемия сопровождается повышением скорости аутоокисления глюкозы с последующим увеличением уровня свободных радикалов и развитием окислительного стресса. Кроме того, ишемия, гипоксия и псевдогипоксия тканей, которые имеют место при СД2, являются дополнительными факторами, способствующими повышенному образованию свободных радикалов в организме. При этом значимость гипергликемии в инициации СО биосубстратов показана как на экспериментальных моделях, так и в клинических исследованиях [73, 9, 57, 6].

Установлено, что при патологиях, сопряженных с оксидативным стрессом, может изменяться гормональный статус организма, в связи с чем индукция оксидативного стресса может иметь опосредованный

нейрогуморальный характер. Клеточные культуры являются удобной модельной системой для исследования оксидативного стресса, поскольку их использование позволяет исключить многие неспецифические факторы, сопровождающие индукцию оксидативного стресса. В этой связи, изучение экспрессии ГП и ГР на клеточных культурах in vitro при оксидативном стрессе, индуцированном пероксидом водорода, является также актуальной задачей.

В настоящее время в литературе имеются данные относительно изменения функционирования некоторых звеньев антиоксидантной системы в тканях животных [220, 221, 222, 223] и человека [148, 147, 66] в условиях нормы и патологии. Однако имеющиеся сведения носят часто разрозненный, противоречивый и несистематизированный характер. Вместе с тем, представляет интерес выявление общих закономерностей и особенностей функционирования ГП/ГР АОС при оксидативном стрессе различной этиологии, в частности, вызванным развитием патологических состояний -адреналинового миокардита, токсического гепатита, СД 2 типа, а также индуцируемым АФК в клеточных культурах. Использование различных модельных систем позволяет выявлять важнейшие молекулярные механизмы регуляции глутатионовой АОС с одной стороны, а также ее специфические особенности - с другой.

Цель и задачи исследования. Цель данной работы - исследование экспрессии ГР и ГП в тканях крыс в условиях оксидативного стресса, вызванного индукцией свободнорадикальных патологий: адреналинового миокардита, токсического поражения печени, сахарного диабета 2 типа, а также воздействием пероксида водорода на клеточные культуры фибробластов.

В связи с поставленной целью решались следующие задачи: 1.Корреляционный анализ активностей ГР, ГП и интенсивности свободно-радикальных процессов в тканях крыс при адреналиновом миокардите, ЭТГ и СД2.

2.0ценка уровня экспрессии ГП, ГР и Г6ФДГ в тканях крыс при адреналиновом миокардите, ЭТГ и СД2.

3. Исследование влияния пероксида водорода на метаболическую активность, особенности пролиферации и клеточную гибель фибробластов мыши линии Ь929

4.Исследование уровня экспрессии ГП и ГР в фибробластах линии Ь929 при воздействии пероксида водорода.

Научная новизна. Впервые проведено комплексное исследование экспрессионной регуляции ГР, ГП и Г6ФДГ при патологиях, сопряженных с оксидативным стрессом, а также индукции апоптотических процессов в клеточных культурах. Выявлены особенности экспрессии данных ферментов и проведен сравнительный анализ активности ГР/ГП-системы при оксидативном стрессе, вызванном адреналиновом миокардитом, ЭТГ, СД2. Осуществлен компьютерный дизайн олигонуклеотидов для определения уровня экспрессии генов ГП, ГР и Г6ФДГ. Установлено, что пероксид водорода подавляет метаболическую активность клеток и индуцируют апоптоз фибробластов линии Ь929, что сопровождается повышением степени экспрессии ГР и ГП.

Полученные данные представляют интерес с точки зрения регуляции образования АФК за счет изменений активностей ГР и ГП, взаимосвязанных с модификацией их экспрессии. Проведенные исследования способствуют расширению и углублению фундаментальных представлений о механизмах регуляции образования АФК с помощью ключевых ферментов глутатионовой антиоксидантной системы при развитии свободнорадикальных патологий.

Практическая значимость.

Проведенные исследования способствуют расширению фундаментальных представлений о роли глутатионового антиоксидантного звена в регуляции свободнорадикальных процессов при социальнозначимых патологиях, сопряженных с оксидативным стрессом, таких как

адреналиновый миокардит, токсический гепатит и сахарный диабет, что создает основу для поиска наиболее эффективных путей коррекции патологических состояний. Созданные нами олигонуклеотиды могут быть использованы для изучения экспрессии ГП, ГР и Г6ФДГ в практике молекулярно-биологических исследований.

Материалы работы используются в учебном процессе на биолого-почвенном факультете Воронежского государственного университета при чтении курсов «Перенос генетической информации», «Свободнорадикальные процессы», «Медицинская энзимология», «Аналитическая биохимия». Кроме того, материалы работы используются при проведении практикумов, выполнении курсовых, дипломных работ и магистерских диссертаций студентами биолого-почвенного факультета Воронежского госуниверситета.

Апробация работы. Основные результаты, полученные при выполнении диссертационной работы, представлены на Всероссийской научно-методической конференции с международным участием «Фармобразование-2010» (Воронеж, 2010), на научно-практической конференции «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической онкологии» Томск, 2010), на научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы современной науки и образования» (УФА, 2010), на международной Пущинской школе-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2010), на школе-конференции «Фундаментальная наука для биотехнологии и медицины» (Москва, 2010), на конференции «Информационно-вычислительные технологии в решении фундаментальных проблем и прикладных научных задач», (Москва, 2010).

Публикации. Основные результаты диссертационной работы изложены в 13 публикациях - в 3 статьях и 10 тезисах.

На защиту выносятся следующие положения:

1. В условиях оксидативного стресса, вызванного развитием адреналинового миокардита, имеет место корреляционная зависимость уровня ДК, параметров БХЛ, отражающих скорость свободнорадикальных процессов, и активностей ГП и ГР в сердце крыс, возрастающих за счет индукции синтеза ферментов de novo.

2. При токсическом поражении печени крыс интенсификация свободнорадикального окисления биосубстратов коррелирует с возрастанием активностей ГП и ГР, что сопряжено с увеличением уровня их экспрессии.

3. Развитие СД2 сопровождается интенсификацией свободнорадикальных процессов, что коррелирует с активацией ГП/ГР- системы. Однако в условиях данной патологии происходит индукция синтеза ГР и снижение уровня экспрессии ГП.

4. Воздействие пероксида водорода на фибробласты линии L929 приводит к снижению метаболической активности, пикнозу и кариорексису, являющимися признаками апоптоза, развивающегося в клеточной культуре, и возрастанию степени экспрессии ГП и ГР.

5. Предложена схема процессов регуляции экспрессии ГП и ГР и их участия в контроле свободнорадикального гомеостаза при оксидативном стрессе различной этиологии.

Структура и объем работы. Диссертация представлена на 180 страницах текста, состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части и обсуждения полученных результатов (6 глав), заключения, выводов, списка литературы (272 источника). Иллюстративный материал включает 59 рисунков и 25 таблиц.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Искусных, Игорь Юрьевич

ВЫВОДЫ

1. Коэффициенты корреляции, отражающие зависимость между активностью ГР и содержанием ДК, Мах и 8 в сердце крыс при адреналиновом миокардите, имеют значения 0,9, 0,8, 0,6. Значения коэффициентов корреляции между концентрацией ДК, 1шах, 8 и активностью ГП: 0,7, 0,9, 0,8 соответственно.

2.При оксидативном стрессе, индуцированном развитием адреналинового миокардита, происходит увеличение уровня транскриптов с гена ГП в сердце крыс в 7,3 раза относительно нормы.

3.При адреналиновом миокардите в сердце крыс экспрессия ГР возрастает в

2.8 раза. Экспрессия Г6ФДГ, поставляющей НАДФН для ГР-реакции, увеличивается при патологии в 5,9 раз по сравнению с контролем.

4. Корреляционно-регрессивный анализ свидетельствует, что коэффициенты корреляции, отражающие зависимость между активностью ГР и содержанием ДК, 1шах, 8 в печени крыс при токсическом гепатите составляют: 0,5, 0,6, 0,9. Значения коэффициентов корреляции между активностью ГП и концентрацией ДК, 1шах, 8: 0,9, 0,9, 0,9, соответственно.

5.Содержание транскриптов ГП в печени крыс при токсическом гепатите возрастает в 2,5 раза относительно контрольных значений.

6.При экспериментальном токсическом гепатите происходит увеличение уровня транскриптов ГР в печени крыс в 3,0 раза относительно нормы. Экспрессия гена Г6ФДГ возрастает при патологии в 2,5 раза относительно контрольных значений.

7. Коэффициенты корреляции, отражающие зависимость между активностью ГР и содержанием ДК, 1тах, 8 в печени крыс при СД2 типа, имеют значения: 0,9, 0,6, 0,9. Значения коэффициентов корреляции между концентрацией ДК, 1шах, 8 и активностью ГП: 0,9, 0,8, 0,9 соответственно.

8. Установлено, что экспрессия гена ГП в печени крыс при СД2 снижается в

1.9 раза по сравнению с нормой.

9. Экспрессия ГР в печени крыс при СД2 типа увеличивается в 1,8 раза относительно нормы. Однако, содержание мРНК Г6ФДГ при патологии снижалось в 2,5 раза относительно контроля, что очевидно, было взаимосвязано с торможением пентозофосфатного пути.

10. Воздействие пероксида водорода на клеточную культуру фибробластов линии L929 приводит к уменьшению митохондриальной активности, пикнозу и кариорексису, что, по-видимому, связано с индуцированием апоптотических процессов.

11. При воздействии пероксида водорода экспрессия ГП в клеточной культуре фибробластов линии L929 увеличивается в 6,1 раза по сравнению с нормой. Уровень экспрессии ГР в фибробластах L929 при воздействии пероксида водорода возрастает в 1,7 раза относительно контрольных значений.

12. Предложена гипотетическая схема процессов регуляции экспрессии ГП и ГР и их участия в контроле свободнорадикального гомеостаза при оксидативном стрессе различной этиологии.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Многоступенчатая система антиоксидантной защиты выполняет в организме функцию контроля за уровнем клеточных АФК и является показателем резистентности клеток к окислительному стрессу. Специфичность в распределении отдельных компонентов САЗ в тканях и разных компартментах клеток указывает, что она выполняет роль не столько подавления, сколько регуляции образования и взаимопревращений АФК.

Согласно полученным результатам к 24ч развития адреналинового миокардита происходит увеличение удельной активности ГР и ГП в сердце крыс в 1,8 в 1,4 раза соответственно по сравнению с контрольной группой животных. Также показано, что происходит активация процессов СО биосубстратов в сердце в условиях данного патологического состояния. Интенсивность патологического процесса в сердце при введении адреналина оценивали с помощью активностей АлАТ, АсАТ и сердечной изоформы креатинкиназы (КК-МВ) в сыворотке крови. Активность КК-МВ и АсАТ, являющихся маркерными ферментами повреждения миокарда, возрастала при адреналиновом миокардите в 7,2 и 2,6 раза соответственно по сравнению с контролем. Наблюдающиеся изменения активностей ферментов, являющихся критериями выраженности процессов цитолиза в тканях сердца (АсАТ, КК-МВ), свидетельствуют о нарушении функционирования сердца при патологии. Показано, что параметры биохемилюминесценции - 1шах и 8, отражающие уровень АФК, значительно возрастают к 24 часу развития адреналинового миокардита. Коэффициенты корреляции, отражающие зависимость между активностью ГР и содержанием диеновых конъюгатов, 1тах и 8 имеют значения 0,9, 0,8, 0,6. Значения коэффициентов корреляции между концентрацией диеновых конъюгатов, 1тах, 8 и активностью ГП: 0,7, 0,9, 0,8 соответственно. Таким образом, показано, что зависимость между содержанием диеновых конъюгатов, 1тах, 8 взаимосвязана с активностью ГР/ГП системы при адреналиновом миокардите. Необходимо отметить, что согласно результатам определения показателей биохемилюминесценции в сердце крыс при адреналиновом миокардите происходит мобилизация АОС. Об этом свидетельствует увеличение 1§а2 кривой биохемилюминесценции. При этом уровень компенсаторных механизмов, направленных на снижение интенсивности свободнорадикальных процессов, оказывается недостаточным и в клетках миокарда в условиях адреналинового миокардита происходит увеличение содержания продуктов ПОЛ. Исследование экспрессии ГР/ГП системы при адреналиновом миокардите у крыс показало, что активация ферментов происходит за счет гиперэкспрессии их генов в условиях патологии. По всей видимости, повышенная активность ГР и ГП необходима для подавления свободнорадикальных процессов.

Результаты проведенных исследований свидетельствуют об интенсификации процессов СО биосубстратов в печени в условиях ЭТГ, причем степень выраженности данных процессов коррелирует с активацией ферментов глутатионовой антиоксидантной системы. При токсическом поражении печени под действием ССЦ происходит увеличение активности АлАТ и АсАТ в сыворотке крови подопытных животных, что свидетельствует о развитии цитолитического синдрома к 96 часу развития ЭТГ. Установлено, что параметры биохемилюминесценции - светосумма и интенсивность максимальной вспышки, отражающие интенсивность СО, возрастают к 96 часу развития ЭТГ печени крысы по сравнению со значениями в норме. Рассчитаны коэффициенты корреляции, отражающие зависимость между активностью глутатионредуктазы и содержанием ДК, 1тах, Б в печени крыс при токсическом гепатите: 0,5, 0,6, 0,9. Значения коэффициентов корреляции между активностью глутатионпероксидазы и концентрацией ДК, 1шах, Б: 0,9, 0,9, 0,9, соответственно. Исследование экспрессии генов ГП и ГР с учетом эффективности амплификации показало, что при интенсификации СО биосубстратов уровень экспрессии ГР возрастал в 3,0 раза, а ГП в 2,5 раза по сравнению с контролем. Можно предположить, что интенсификация свободнорадикальных процессов способствует активизации ГР и ГП. Свободные радикалы способны активировать ОТ-кВ путем инактивации фактора 1кВа [199]. №-кВ также регулирует гены, участвующие в воспалении, апоптозе, пролиферации и регенерации печени [272, 149]. Можно предположить, что активация №-кВ индуцирует экспрессию ГП и ГР. Кроме того, высокая концентрация ГР и ГП при ЭТГ может быть связана с активацией белка №£ Согласно имеющимся данным, транскрипция антиоксидантных ферментов регулируется АКЕб -элементами. №£2 и №П являются транскрипционными факторами, которые могут связываться с АЛЕв и активировать гены ГП и ГР [175, 129, 204, 85, 163, 160, 235].

Рядом авторов показана интенсификация СО биомолекул в тканях печени при развитии СД2 [8, 56, 43, 209]. Кроме того, при оксидативном стрессе происходит усиленный синтез белков шаперонов, которые способствуют повышению внутриклеточной концентрации восстановленного глутатиона, необходимого для функционирования ГР/ГП-системы. Проведенные исследования свидетельствуют об активации свободнорадикальных процессов к 21 дню развития СД2, причем степень выраженности данных процессов коррелирует с активацией ферментов глутатионовой антиоксидантной системы. Установлено, что параметры биохемилюминесценции, отражающие интенсивность свободнорадикальных процессов, возрастают к 21 дню развития СД2 по сравнению со значениями в норме. Нами было показано, что при СД2 происходит повышение активностей ГР и ГП печени крыс по отношению к активности данного фермента в норме в 1,7 и 2,2 раза соответственно. Следует отметить, что наряду с интенсификацией процессов СО биосубстратов имела место мобилизация САЗ, направленная на снижение уровня протекания реакций с участием свободных радикалов, о чем свидетельствует возрастание такого параметра БХЛ, как тангенс угла наклона кинетической кривой О&аг). Однако действие компенсаторных механизмов оказывалось недостаточным, что приводило к дисбалансу между уровнем СО и активностью АОС, и как следствие, к развитию окислительного стресса. В ходе исследований было установлено, что на 21 сутки развития патологии уровень транскриптов ГР увеличивается. Однако уровень транскриптов ГП снижается. Экспрессия ГП снижалась в 1,9 раза, а ГР увеличивалась в 1,8 раза относительно нормы. Можно предположить, что уменьшение экспрессии ГП приводит к снижению инсулиновой резистентности клеток печени. Показано, что у мышей с гиперэкспрессией ГП наблюдалось развитие гипергликемии и увеличение резистентности к инсулину [128]. Взаимосвязь изменения уровня селена и селенсодержащих белков с инсулиновой резистентностью описана и в других работах [35, 180]. По-видимому, увеличение активности ГП может происходить не за счет синтеза de novo, а с помощью других механизмов. Возможно, это связано с конформационными перестройками в молекуле белка, вследствие фосфорилирования/дефосфорилирования [19]. Это согласуется с данными, свидетельствующими об изменении кинетических параметров и регуляторных свойств фермента при оксидативном стрессе [20], развивающимся, в частности, при токсическом поражении печени.

Установлено, что пероксид водорода в концентрации 50мкМ приводит к пикнозу и кариорексису клеток линии L929, являющимися признаками апоптоза. Нельзя исключить, что уменьшение митохондриальной активности клеток L929 происходит из-за интенсификации свободнорадикальных процессов. Оксидативный стресс, в свою очередь, способствует выходу цитохрома С из кристы митохондрий, который индуцирует запуск каскада реакций, ведущих к апоптозу [168, 72]. Показано, что при воздействии пероксида водорода происходит уменьшение сигнала МТТ в 1,4 у фибробластов линии L929. Это может быть связано с уменьшением митохондриальной активности клеток и их гибелью, вследствие интенсификации СО биосубстратов. При воздействии 50мкМ пероксида водорода уровень транскриптов ГР и ГП увеличивается. По-видимому, увеличение экспрессии ферментов направлено на коррекцию свободнорадикального гомеостаза.

Таким образом, полученные данные позволяют предполагать, что изменение функционирования ГР и ГП при патологии взаимосвязано со скоростью СО биосубстратов. На основании проведенных исследований была создана гипотетическая схема регуляции экспрессии и участия ГР и ГП в контроле свободнорадикального гомеостаза при оксидативном стрессе различной этиологии (Рис.59).

Ре»' + СС14 1 I I

Ре2- - СС14] акцептор 4 0 ♦

Ре2' - -ССу + С1*

02 т

Рег* -•СС130.г) е Озг Л

АФК<

1кВа

ШВ

Ре2' - .СС1,-021 Ф' АФК #4 ТМР ' )

Г. Л Аутоокисление адреналина

Работа сердечной мышцы

Гипоксия У Гипергликемия з Продукты неферментитивного гликозилирования Карбонильные интермедиаты л

НАДО

Г6ФДГ

НАДФН ч. к/47 к.

•С5Г д,

I/'

АФК

Швф' Инсулинорезистентность

АФК ф 11кВа ф ЫРкВ ф |1кВа-ф] АФК

Реакция Фентона

Н (Пеню;

Рис.59. Гипотетическая схема процессов регуляции экспрессии и участия глутатионредуктазы и глутатионпероксидазы в контроле свободнорадикального гомеостаза при оксидативном стрессе, индуцированном развитием патологических состояний: токсического гепатита (1), адреналинового миокардита (2), сахарного диабета 2 типа (3) и воздействием пероксида водорода на клеточную культуру фибробластов (4)

Условные обозначения: - Ингибирующий эффект; Активирующий эффект; - увеличение,

- уменьшение интенсивности процесса

Можно предполагать, что во всех исследуемых патологических состояниях интенсификация свободнорадикальных процессов способствует индукции ГР и ГП посредством активации ЫБ-кВ свободными радикалами. Однако, механизмы индукции оксидативного стресса при различных патологиях отличаются. При адреналиновом миокардите интенсификация СО происходит благодаря аутоокислению адреналина, усиленной работы сердечной мышцы и гипоксии, которая, как известно, сопровождается активацией М>синтазы и ксантинооксидазы, генерирующих АФК. В ходе развития ЭТГ происходит образование СС13'- продукта радикальной природы, обладающего высокой реакционной активностью и способностью эффективно взаимодействовать как с белками, так и с липидами, инициируя СО. В основе индукции оксидативного стресса при СД2 лежит образование продуктов неферментного гликозилирования и карбонильных интермедиатов на фоне гипергликемии, приводящих к генерации АФК. Воздействие пероксида водорода на клеточные культуры фибробластов линии Ь929 сопровождается интенсификацией СО биомолекул посредством вовлечения Н202 в реакцию Фентона. Однако, большинство исследованных путей индукции оксидативного стресса приводят к увеличению экспрессии ГР/ГП системы, направленной на коррекцию свободнорадикального гомеостаза. Исключением является подавление транскрипции ГП при СД2, которое, по всей видимости, связано с гипергикемией и существенными нарушениями метаболических процессов при патологии. Таким образом, развитие оксидативного стресса, как правило, сопровождается гиперэкспрессией ГР и ГП, что взаимосвязано с усилением синтеза Г6ФДГ, поставляющей восстановительные эквиваленты для ГР/ГП системы. Тем не менее, при патологических состояниях, сопряженных с многосистемными сдвигами в обменных процессах, таких как СД2, по-видимому, происходит нарушение согласованности экспрессии ГР и ГП. Характерно, что экспрессия Г6ФДГ при этом оказывается подавленной. Выявленные изменения в экспрессионной регуляции данных ферментов могут являться дополнительным негативным фактором, усугубляющим течение патологического процесса.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Искусных, Игорь Юрьевич, 2012 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРНЫХ источников

1 .Азизова O.A. Хемилюминесцентная оценка антиоксидантного статуса больных атеросклерозом / O.A. Азизова, А.П. Пирязев, М.П. Шерстнев // Бюлл. эксперим. биол. и мед. - 2001. - Т. 131, вып. 5. - С. 524-526.

2.Алмазов В.А. Роль гиперпероксидации липидов в нарушении структурной организации тромбоцитарных мембран / В.А. Алмазов, B.C. Гуревич, Л.В. Шаталина // Бюлл. экспер. биол. - 1992. - Т. 9. - С. 265-267.

3.Андреещева Е.М. Свойства и регуляция активности аконитатгидратазы и НАДФ-изоцитратдегидрогеназы в условиях интенсификации свободнорадикального окисления в печени крыс при токсическом гепатите: дис. ... канд. биол. наук / Е.М. Андреещева. - Воронеж, 2003. - 273 с.

4.Артюхов В.Г. Биологические мембраны (структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами) / В.Г. Артюхов, М.А. Наквасина. - Воронеж: Изд-во Воронеж.ун-та, 2000. - 296 с.

5.Арчаков А.И. Окисление чужеродных соединений и проблемы токсикологии /А.И. Арчаков, И.И. Карузина // Вест. АМН СССР. - 1988. -№.1. - С. 14-24.

6.Балаболкин М.И. Лечение сахарного диабета и его осложнений. Руководство для врачей / М.И. Балаболкин, Е.М. Клебанова, В.М. Креминская. -М.: Медицина, 2005.- 512 с.

7. Балаболкин М.И. Применение антиоксидантов из группы флавоноидов в лечении диабетической ретинопатии при сахарном диабете типа 2 / М.И. Балаболкин, М.С. Никишова, А.К. Волкова // Пробл. эндокринол. - 2003.— Т.З .— С. 3-6.

8.Балаболкин М.И. Применение убихинона (коэнзима Q) в терапии сахарного диабета и его сосудистых осложнений/ М.И. Балаболкин, Е.М. Клебанова, В.М. Креминская // Сахарный диабет.- 2007.- Т. 4.- С. 37—42.

9.Балаболкин М.И. Роль гликирования белков, окислительного стресса в патогенезе сосудистых осложнений при сахарном диабете/ М.И. Балаболкин // Сахарный диабет.- 2002.- Т.4.- С. 5—16.

Ю.Балаболкин М.И. Роль окислительного стресса в патогенезе сосудистых осложнений диабета / М.И. Балаболкин, Е.М. Клебанова // Проблемы эндокринологии. - 2000. -Т. 6. - С. 29 -34.

П.Балябина М. Д. Методы определения глюкозы / М. Д. Балябина, В. В. Слепышева, А. В. Козлов/ Terra Medica. - 2008.- Т.1.- С. 3-12.

12. Барабой В. А. Перекисное окисление и стресс / В. А. Барабой, И. И. Брехман, В. Г. Голотин. - СПб.: Наука, 1992. - 148 с.

13.Болдырев А. А. Окислительный стресс и мозг / А. А. Болдырев // Соросовский Образовательный Журнал. - 2001. - Т. 7, вып. 4. - С. 21-28.

14.Бондарь H.A. Антиоксиданты в лечении и профилактике сахарного диабета / И.А. Бондарь, В.В. Климонтов // Сахарный диабет.- 2001.- Т.1.- С. 47—52.

15.Бондарь H.A. Оксид азота и диабетические ангиопатии / И.А. Бондарь, В.В. Климонтов, И.А. Поршенников // Сахарный диабет.- 1999.- Т. 4.- С. 11— 14.

16.Бурлакова Е.Б. Молекулярные механизмы действия антиоксидантов при лечении сердечно-сосудистых заболеваний / Е.Б. Бурлакова // Кардиология. -1980.-Т. 8.-С. 48-52.

17. Бурлакова Е.В. Изменение структуры и состава липидной фазы биологических мембран при действии синтетических антиоксидантов. Влияние на передачу информационного сигнала на клеточном уровне/ Е.В. Бурлакова, А.П. Хохлов // Биологические мембраны.- 1985.- Т. 2.- С. 557561.

18.Владимиров Ю.А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах / Ю.А. Владимиров, А.И. Арчаков. - М.: Наука, 1972. - 252с.

19.Владимиров Ю.А. Свободнорадикальное окисление липидов и физические свойства липидного слоя биологических мембран / Ю.А. Владимиров // Биофизика. - 1987. - Т. 32, вып. 5. - С. 830-844.

20.Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в живых системах / Ю.А. Владимиров, O.A. Азизова, А.И. Деев // Итоги науки и техники. Сер. Биофизика. - 1991. - Т. 29. - С. 110-122.

21. Влияние витамина D3 и экдистерона на свободно - радикальное окисления липидов / А.И. Кузьменко [и др.] // Биохимия. - 1997. - Т.62, вып.6. - С.712-715.

22. Воскресенский О.Н. Биоантиоксиданты - облигатные факторы питания / О.Н. Воскресенский, В.Н. Бобырев // Вопр. мед.химии. - 1992. - Т. 4. - С. 2126.

23. Воскресенский О.Н. Перекиси липидов в живом организме / О.Н. Воскресенский, А.П. Левицкий // Вопр. мед.химии. - 1970. - Т. 16, вып. 6. -С. 563-583.

24. Горбунов Н.В. Влияние структурной модификации мембранных белков на липид-белковое взаимодействие в мембранах эритроцитов человека / Н.В. Горбунов // Бюлл. экспер. биол. - 1993. - Т. 11. - С. 488-491.

25. Губский Ю.И. Коррекция химических поражений печени / Ю.И. Губский. -Киев: Здоровье, 1989. - 156с.

26. Гуревич B.C. Таурин и функция возбудимых клеток/ B.C. Гуревич - Л.: Медицина. - 1986. - С.34-40.

27. Гусев Н.Б. Внутриклеточные Са-связывающие белки. Ч. 1. классификация и структура. Ч. 2. Структура и механизм функционирования / Н.Б. Гусев // Соросовский образовательный журнал. - 1998. - № 5. - С. 2-16.

28. Гуткин Д.В. Активность антиоксидантных ферментов миокарда при его ишемии / Д.В. Гуткин, Ю.А. Петрович // Бюлл. эксперим. биол. и мед. - 1982. -Т. 1. - С. 33-35.

29. Журавлев А.И. Биохемилюминесценция / А.И. Журавлев. - М.: Наука, 1983.-С. 222-240.

30. Зенков Н.К. Активированные кислородные метаболиты в биологических системах / Н.К. Зенков, Е.Б. Меньшикова // Успехи современной биологии. -1993. - Т.113, вып.З. - С.286-296.

31. Зиямутдинова 3. К. Изменение процессов перекисного окисления липидов и содержания индивидуальных ганглиозидов, фосфолипидов в печени крыс с токсическим экспериментальным гепатитом / 3. К. Зиямутдинова, Н.М. Холмухамедова // Вопр. мед.хим. - 1991. - Т.37, вып.5. - С. 16-18.

32. Иванов В.В. Соотношение интенсивности перекисного окисления липидов и рецепции инсулина в адипоцитах /В.В. Иванов, М.П. Стенникова // Вопр. мед.химии. - 1993. -Т. 11.— С. 23-25.

33. Казачкина С.С. Оценка эффективности лечения и изучение функционального состояния эндотелия сосудов у больных ишемической болезнью сердца со стабильной стенокардией напряжения при применении современных форм нитратов / С.С. Казачкина. - М.: Рос.кардиол. науч.-произв. комплекс.— 21 с.

34. Карташова О .Я. Моделирование патологических процессов в печени / О.Я. Карташова; под ред. А.Ф. Блюгер. - Рига: Звайгзне, 1975. - 180 с.

35. Каталитические свойства глутатионпероксидазы в норме и при токсическом гепатите / В.Г. Артюхов [и др.] // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. - 2008.- Т. 3.-С.38-41.

36 Коган А.Х. Свободнорадикальное перекисное окисление липидов и патогенез коронароокклюзионного инфаркта миокарда / А.Х. Коган, А.Н. Кудрин, С.М. Николаев // Свободнорадикальное окисление в норме и патологии. -М., 1976. - С. 68-78.

37. Кожевников Ю.Н. О перекисном окислении липидов в норме и патологии / Ю.Н. Кожевников // Вопр. мед.химии. - 1985. - № 5. - С. 2-7.

38. Косолапов В. А. Хемилюминесцентные методы в оценке свободнорадикальных реакций / В.А. Косолапов, О.В. Островский, A.A. Спасов // Клиническая и лабораторная диагностика. -1991.-Т. 9.-С.41.

39. Костюк В.А. Биорадикалы и биоантиоксиданты / В.А. Костюк, А.И. Потапович // Минск: БГУ, 2004. - 174 с.

40. Кулинский В.И. Биологическая роль глутатиона / В.И. Кулинский, JI.C. Колесниченко // Успехи совр. биол. - 1990. - Т.110, №1(4). - С.20-33.

41. Ланкин В. 3. Свободнорадикальные процессы в норме и при заболеваниях сердечно-сосудистой системы / В. 3. Ланкин, А. К. Тихазе, Ю. Н. Беленков // Кардиология.- 2000.- Т. 40, вып. №7.- С.48-61.

42. Ланкин, В.З. Антиоксиданты в комплексной терапии атеросклероза: pro et contra / Ланкин В.З.,Тихазе А.К., Беленков Ю.Н. — М.: Медпрактика-М, 2005 .— 40 с.

43. Ланкин В.З. Особенности модификации липопротеинов низкой плотности в развитии атеросклероза и сахарного диабета типа 2 / В.З. Ланкин, А.К.

Тихазе, Е.М. Кумскова // Кардиологический вестник.- 2008.- Т. 3, вып.1.- С. 60-67.

44. Ланкин В.З. Роль перекисного окисления липидов в этиологии и патогенезе атеросклероза / В.З. Ланкин, A.M. Вихерт, А.К. Тихазе // Вопр. мед.химии. - 1989. - № 3. - С. 18-24.

45. Ланкин В.З. Свободнорадикальные процессы в норме и при патологических состояниях: пособие для врачей / В.З. Ланкин, А.К.Тихазе, Ю.Н. Беленков. - 2-е изд. - М.: Мир, 2001. - 78 с.

46. Ланкин В.З. Ферментативное перекисное окисление липидов (ФПОЛ) / В.З. Ланкин // Укр. биохим. журн. - 1984. - Т. 56, № 3. - С. 317-331.

47. Левенкова М.В. Свойства и регуляция активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в условиях оксидативного стресса при токсическом поражении печени крыс: дис. ... канд. биол. наук / М.В. Левенкова. -Воронеж, 2006. - 180 с.

48. Ливицкий П.Ф. О механизмах активации перекисного свободнорадикального окисления липидов при регионарной ишемии и последующей реперфузии сердца / П.Ф. Ливицкий, А.Х. Коган, А.Н. Кудрин // Бюлл. эксперим. биол. и мед. - 1981. - Т. 92, вып. 9. - С. 283-285.

49. Ллойд Э. Справочник по прикладной статистике / Э. Ллойд, У. Ледерман. - М.: Финансы и статистика.- 1990. - С. 493-513.

50. Лукомская И.С. Нейтральная глюкозидаза мочи человека как маркер повреждений почек / И.С. Лукомская, Т.П. Лавренева, H.A. Томилина// Вопр. мед.химии. - 1984. -Т.4. - С. 74-76.

51. Ляйфер А.И. Система перекисного окисления липоидов — антиоксидантная защита и роль ее нарушений в патогенезе сахарного диабета и ангиопатий / А.И. Ляйфер, М.Н. Солун // Проблемы эндокринологии.- 1993. -Т.1.-С. 57-59.

52. Меерсон Ф.З. Патогенез и предупреждение стрессорных и ишемических повреждений сердца / Ф.З. Меерсон. - М.: Медицина, 1984. - 272 с.

53. Меерсон Ф.З. Роль перекисного окисления липидов в патогенезе ишемического повреждения и антиоксидантная защита сердца / Ф.З. Меерсон, В.Е. Каган, Ю.П. Козлов // Кардиология. - 1982. - Т. 2. - С. 81-92.

54. Метаболические предикторы гепатоксического действия тетрахлорметана у крыс / Г.И. Блажиевская [и др.] // Токсикол. вести. - 1998. - Т. 1. - С.21 -22.

55. Митохондриальная дисфункция и сахарный диабет/ 1.Р. Азза1 [е1 а1.] // Метаболизм.- 2005.- Т. 6, вып. 42.- С. 36.

56. Недосугова Л.В. Окислительный стресс при сахарном диабете типа 2 и возможности его медикаментозной коррекции: дис. ... докт. мед. наук: 14.00.03: защищена 2006 г./ Л.В. Недосугова.- М, 2006,- 356 с.

57. Недосугова Л.В. Взаимосвязь между компенсацией углеводного обмена и выраженностью проявлений окислительного стресса при сахарном диабете II типа / Л.В. Недосугова // Бюлл. эксперим. биол. и мед. - 2003.— Т.8 .— С. 152-155.

58. Недосугова Л.В. Коррекция процессов свободнорадикального окисления на фоне применения биофлавоноида дигидрокверцетина при сахарном диабете типа 2 / Л.В. Недосугова // Вестн. восстанов. мед.- Т. 4 .— 2006 .— С. 51-54.

59. Непомнящих Л.М. Паренхиматозно-стромальные отношения в миокарде: альтернативная недостаточность кардиомиоцитов и морфогенез очагового кардиосклероза / Л.М. Непомнящих, Е.Л. Лушникова, Д.Е. Семенов // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.- 2002.-Т. 134.- С.219-226.

60. Николайчик Е.А. Регуляция метаболизма клетки / Е.А. Николайчик. -Минск: БГУ, 2007. - 165 с.

61. Обухова Л.К. Токсические продукты метаболизма миокарда и возрастная утрата функциональной активности / Л.К. Обухова // Надёжность и элементарные события процессов старения биологических объектов. - Киев, 1986. - С.89-96.

62. Окислительный стресс у больных сахарным диабетом типа 2 с различной длительностью заболевания и разной степенью компенсации углеводного обмена. / М.А. Панкратова [и др.] // Сахарный диабет.- 2006.- Т. 2.- С. 12—15.

63. Осипов А.Н. Активные формы кислорода и их роль в организме / А.Н. Осипов, Ю.А. Азизова, Ю.А. Владимиров // Успехи биологической химии. -1990. - Т.31, вып. 2. - С. 180-208.

64. Пат. 94026117 РФ, МКИ 009В23/28. Способ создания модели гепатита и цирроза печени млекопитающих /Я.В. Кауров, Г.А. Бояринов, В.П. Смирнов. - 1996.

65.Пат. 94026117 РФ, МКИ 009В23/28. Способ создания модели гепатита и цирроза печени млекопитающих / Я.В. Кауров, Г.А. Бояринов, В.П. Смирнов. -1996.

66.Перекисное окисление и стресс / В. А. Барабой [и др.] - СПб.: Наука, 1992. -148 с.

67. Перекисное окисление липидов и состояние системы антиоксидантной защиты у больных инсулинзависимым сахарным диабетом / О.Н. Никифоров //Проблемы эндокринологии.- 1997.- Т.43, №5.- С. 16—18.

68. Регуляция ферментативной активности при оксидативном стрессе: монография / Т.Н. Попова [и др].— Воронеж: ИПЦ ВГУ. - 2009 .— 344 с.

69. Самуилов В.Д. Биохимия программируемой клеточной смерти (апоптоза) у животных / В.Д. Самуилов // Сор. Обр. Жур. - 2001. - Т 7, вып. 10. - С. 1825.

70. Свободнорадикальные процессы в биосистемах: учеб. пособие / Т.Н. Попова [и др]. — Старый Оскол: ИПК Кириллица, 2008 .— 192 с.

71.Сидорова В.Ф. Регенерация печени у млекопитающих / В.Ф. Сидорова, З.А. Рябинина, Е.М. Лейкина. - Л.: Медицина, Ленинградское отделение, 1966.-210 с.

72.Скулачев В.П. Явления запрограммированной смерти. Митохондрии, клетки и органы: роль активных форм кислорода / В.П. Скулачев // Соросовский образовательный журнал. - Т.7, вып. 6.- С.4-10.

73 .Смирнова О.М. Свободно-радикальное окисление и антиоксидантная защита при сахарном диабете / О.М. Смирнова, Т.В. Никонова.- М: Медицина, 2003.- 40с.

74.Стальная И.Д. Метод определения диеновой конъюгации ненасыщенных высших жирных кислот / И.Д. Стальная // Современные методы в биохимии / Под ред. Ореховича В.Н. - М.: Медицина, 1977. - С. 63-64.

75. Токсикологические последствия окислительной модификации белков при различных патологических состояниях/ Ю.И. Губский [и др.] // Журнал АМН Украши.- 2008.- Т. 814, вып. 7.- С. 49—54.

76.Ульянов A.M. Инсулярная система животных при хроническом дефиците гепарина / A.M. Ульянов, Ю.А. Тарасов // Вопросы медицинской химии. — 2000. — Т. 46, № 2. — С. 149-154.

77.Федорова Н.Ю. Состояние системы глутатионпероксидазы-глутатионредуктазы в стимулированном к регенерации органе и ее роль в клеточной пролиферации: дис. ... канд. биол. наук / Н.Ю. Федорова. -Воронеж, 1999. - 186 с.

78.Фильченков А.А. Апоптоз и рак / А.А. Фильченков, Р.С. Стоика. - Киев: Морион, 1999. - 184 с.

79. Ченас Н.К. Нефизиологические редокс-агенты восстанавливаются в центре связывания НАДФН глутатионредуктазы / Н.К. Ченас, Ю.Ю. Кулис // Биохимия. - 1992. - Т.57, вып.8. - С. 1192-1195.

80.Шаповал Г.С. Механизмы антиоксидантной защиты организма при действии активных форм кислорода / Г.С. Шаповал, В.Ф. Громовая // Укр. 6ioxiM. журн. -2003. -Т.75, вып. 2.- С.5-13.

81.Шишкина JI.H. Связь повреждения мембраны с процессом перекисного окисления липидов при слабых воздействиях / J1.H. Шишкина, М.А. Смотряева//Биохимия. - 2000. - Т.45, вып. 5. - С. 844-852.

82.Ames В. N. Oxidants, antioxodants and the degenerative diseases of ageing / B.N. Ames, M.K. Shigenaga, T.M. Hagen // PNAS.- 1993. - V. 90. - P. 79157922.

83.17P-Estradiol preserves endothelial vasodilator function and limits low-density lipoprotein oxidation in hypercholesterolemic swine/ J. F. Keaney // Circulation. -1994.-V. 89.-P. 2251-2259.

84. A study of the kinetic mechanism followed by glutathione reductase from mycelium of Phycomyces blakesleeanus / S. Montero [et al.] // Biochim Biophys Acta. - 1982. - V.3, вып. 705. - P. 348-356.

85.Activation of mitogen-activated protein kinase pathways induces antioxidant response element-mediated gene expression via a nr£2-dependent mechanism/ R. Yu [et al.]// J. Biol. Chem. - 2000.- V. 275. - P. 39907-39913.

86.Activation of the receptor for advanced glycation end products triggers a p21(ras)-dependent metogenactivated protein kinase pathway regulated by oxidant stress / H.M. Lander [et al.] // J. Biol. Chem.- 1997.- V. 272.- P. 17810-17814.

87.Adamson G.M. Tumor necrosis factor induced oxidative stress in isolated mouse hepatocytes / G.M. Adamson, R.E. Billings // Arch. Biochem. Biophys.-1992. - V. 294.- P. 223-229.

88.Advanced glycation end products (AGEs) induced activation of NF-кВ is suppressed by alpha-lipoic acid in cultured endothelial cells/ A. Bierhaus [et al].// Diabetes.- 1997.- V. 46.- P. 1481-1490.

89. Advanced oxidation protein products as a novel molecular basis / V. Witko-Sarsat [et al.] // Nephrol. Dial. Transplant.- 1999.- V.14.- P. 76-78.

90.Ahmed N. Роль конечных продуктов гликирования в патогенезе осложнений сахарного диабета / N. Ahmed, P.J. Thornalley // РМЖ. - 2009.-С.642.

91.Anderson N. Oxiding and restore semireactions glutathionereductase from E.coli / N. Anderson, G. Nerski // Biochemistry. - 1994. - V.35, №23. - P. 57275732.

92.Arabidopsis chloroplastic glutathione peroxidases play a role in cross talk between photooxidative stress and immune resposes / C. Chang [et al.] // Plant Physiol.- V. 2 .— 2009 .— P. 670-683.

93.Arrigo A. P. Regulation of mammalian gene expression by free radicals / A. P. Arrigo, C. Kretz-Remmy // In: Molecular Biology of Free Radicals in Human Disease. - London: Oica International, Saint Lucia. - 1998. - P. 183-223.

94.Arrigo A. P. Regulation of mammalian gene expression by free radicals / A. P. Arrigo, C. Kretz-Remmy // In: Molecular Biology of Free Radicals in Human Disease. - London: Oica International, Saint Lucia. - 1998. - P. 183-223.

95.Aruoma O. L. Carnosine, homocarnosine and anserine: could they act as antioxidants in vivo? / O. L. Aruoma, M. J. Laughton, B. Halliwell // Biochem. J. - 1989. -V. 264. - P. 863-869.

96.Balance between oxidative damage and proliferative potential in an experimental rat model of CC14 - induced cirrhosis: protective role of adenosine administration / R. Hernandez-Vunoz [et al.] // Hepatology. - 1997. - V.26, №5. -P.1100-1110.

97.Barja G. Oxidative damage to mitochondrial DNA is inversely related to maximum life span in the heart and brain of mammals / G. Barja, A. Herrero // FASEB J. -2000. - V. 14.-P. 312-318.

98.Bast A. Oxidants and antioxidants: State of the art / A. Bast, G. Haenen, C. Doelman // Amer. J. Med.- 1991.- V. 91.- P. 2-13.

99.Baynes J.W. The Maillard reaction in Aging, diabetes and medicine/ J.W. Baynes, V.M. Monnier // Alan R. Liss, NY.- 1989.- P. 1-22.

100. Baynes J.W. Role of oxidative stress in development of complications in diabetes / J.W. Baynes // Diabetes.- 1991.- V. 40.- P. 405—412.

101. Baynes J.W. Glycoxidation and lipoxidation in atherogenesis / J.W. Baynes, S.R.Thorpe //Free Radic. Biol. Med. - 2000.- V. 28.- P. 1708-1716.

102. Baynes J.W. From life to death - the struggle between chemistry and biology during aging: the Maillard reaction as an amplifier of genomic damage / J.W. Baynes // Biogerontology.- 2000.- V. 1.- P. 235-46.

103. Baynes J.W. Role of oxidative stress in diabetic complications. A new perspective from an old paradigm / J.W. Baynes, J.W. Thorpe // Diabetes. - 1999. -V. 48.-P. 1-9.

104. Beneficial effects of antioxidants in diabetes: possible protection of pancreatic P-cells / H. Kaneto [et al.] // Diabetes.- 1999.- V.48.- P. 2398-2406

105. Bessho M. NAD and NADH values in rapidly sampled dog heart tissues by two different extraction methods / M. Bessho, T. Tajima, S. Hori // Anal. Biochem. - 1989. -V. 162, № 2. - P. 304-308.

106. Beyer W.F. The relative essentiality of the antioxidative function of coenzyme Q - the interactive role of DT-diaphorase / W.F. Beyer [et al.] // Mol. Asp. Med.-1994.-V. 15.-P. SI 17.

107. Bidlack W.R. Fluorescent products of phospholipids during lipid peroxidation / W.R. Bidlack, A.L. Tappel // Lipids. - 1973. - V. 8, № 4. -P. 203-207.

108. Bohme C.C. Kinetic characterization of glutathione reductase from the malarial parasite Plasmodium falciparum. Comparison with the human enzyme / C.C. Bohme, L. D Arscott., K. Becker // J. Biol. Chem. - 2000. - V.275, №48. - P. 37317-37323.

109. Bourdon E. Glucose and free radicals impair the antioxidant properties of serum albumin / E. Bourdon, N. Loreau, D. Blache // FASEB J.- 1999.- V. 13.- P. 233—244.

110. Boyer S.H. Electrophoretic heterogeneity of glucose-6-phosphate dehydrogenase and its relationship to enzyme deficiency in man / S.H. Boyer, I.H. Porter, R.G. Weilbacher//Proc.Natl.Acad.Sci. -1967.-V. 48.- P. 1868-1876.

111. Brownlee M. Biochemistry and molecular cell biology of diabetic complications / M. Brownlee // Nature.- 2001.-V. 414.-P. 813-820.

112. Buczynski A. Aktywnosc dysmutazy ponadtlenkowej (SOD-1) oraz stezenie dialdenydu malonowego (MDA) w krwinkach ptytkowich u osob z choroba niedokrwienna serca / A. Buczynski, M. Dziedziczak-Buczynska, H. Kedziora // Pol. Tyg. Iek. - 1989. - V. 44, № 23. - P. 548-550.

113. Burt A.D. Diagnostic and interpretation of steatosis and steatohepatitis / A.D. Burt, A. Mutton, C.P. Day // Semin. Diagn.Pathol. - 1998. -V.15. - P. 246-258.

114. Cadenas E. Mitochondrial free radical generation, oxidative stress, and aging / E. Cadenas, K. J. A. Davies // Free Rad. Biol. Med. - 2000. - V. 29. - P. 222-230.

115. Catalase, superoxide dismutase, and glutathione peroxidase activities in various rat tissues after carbon tetrachloride intoxication / S. Szymonik-Lesiuk [et al.] // J. Hepatobiliary Pancreat. Surg. - 2003. - V.10, №4. - P.309-315.

116. Ceriello A. Hyperglycaemia: the bridge between non-enzymatic glycation and oxidative stress in the pathogenesis of diabetic complication / A. Ceriello // Diabetes Nutr. Metab.- 1999.- T.12.- C. 42-46.

117. Ceriello A. Oxidative stress and glycemic regulation / A. Ceriello // Metabolism.- 2000.- V. 49.- P. 27—29.

118. Chance B. Hydroperoxide metabolism in mammalian organs/ B. Chance, H. Sies, A. Boveris // Physiol. Rev. - 1979. - V. 59. - P. 527-605.

119. Chance B. In vivo detection of radicals in biological reactions / B. Chance, G. Gao // Environ. Health Perspect.- 1994.- V.102.- P. 29-32.

120. Changes in lipid environment decrease Na/K-ATPase activity in obstructive nephropathy / N. Brunskill [et al.] // Kidney Int. - V. 39. - P. 843-849.

121. Charles E. M. Hepatic glutathione reductase I. Purification and general kinetic properties / E. M. Charles, G.R. Langdon // J. Biol. Chem. - 1962. - V. 237, № 5. -P.1589-1595.

122. Charles E. M. Hepatic Glutathione Reductase II. PHYSICAL PROPERTIES AND MECHANISM OF ACTION / E. M. Charles, E.T. Thompson, G.R. Langdon //J. Biol. Chem. - 1962. - V. 237, № 5. - P. 1596-1600.

123. Chrungoo V.J. Differential biochemical response of freshly isolated rat hepatocites to paracetamol, carbon tetrachloride and D-galactosamine toxicity / V.J. Chrungoo, K. Singh, J. Singh // Indian J. Exp. Biol. - 1997. - V.35, № 6. -P.603-610.

124. Clawson, G.A. Mechanisms of carbon tetrachloride hepatotoxicity/ G.A. Clawson // Pathol. Immunopathol. Res. - 1989.- V. 8.- P. 104-112.

125. Cohen P. Human glucose-6-phosphate dehydrogenase: purification of the erythrocyte enzyme and the influence of ions on its activity/ P. Cohen, M.A. Rosemyer // Eur.J.Biochem.-1969.-V. 8.-P. 1-7.

126. Cytosolic triglycerides and oxidative stress in central obesity: the missing link between excessive atherosclerosis, endothelial dysfunction, and beta-cell failure. / S.J. Bakker [et. al.] // Atherosclerosis. - 2000. - V. 148, № 1. - P. 17-21.

127. Czaja M.J. Induction and regulation of hepatocyte apoptosis by oxidative stress / M.J. Czaja // Antioxid. Redox Signal. - 2002. - V. 4. - P. 759-767.

128. Development of insulin resistance and obesity in mice overexpressing cellular glutathione peroxidase / J.P. McClung [et al.] // Proc Natl Acad Sci USA. - 2004. V. 101.-P. 8852-8857.

129. Dhakshinamoorthy S. Small maf (MafG and MafK) proteins negatively regulate antioxidant response element-mediated expression and antioxidant induction of the NAD(P)H: Quinone oxidoreductasel gene / S. Dhakshinamoorthy, A. Jaiswal // J. Biol. Chem.- 2000.- V. 275, №51.- P. 40134-40141.

130. Diagnostic evaluation of carbon tetrachloride- induced rat hepatic cirrhosis model / G.P. Lee [et al.] // Anticancer Res. - 2005. - V.25, № 2A. - P.1029-1038.

131. Differential antioxidant status among indoasians compared with Caucasians with and without diabetes/ Y. Wen [et al.]// Diabetes Care.- 2000.- V. 22.- P. 254255.

132. Early midsonal oxidative stress preceding cell death in hypoperfused rat liver / M. Suematsu [et al] // Gastroenterology. - 1992. - Y.103, № 3. - P. 994-1001.

133. Effect of oral dosing vehicles on the subchronic hepatotoxicity of carbon tetrachloride in the rat / K. P. Koporec [et al.] // J. Toxicol. Environ.Health. - 1995. - V.44, № 1. -P.13-27.

134. Effect of route and pattern of exposure on the pharmacokinetics and acute hepatotoxicity of carbon tetrachloride / U.Y. Sanzgiri [et al.] // Toxicol. Appl. Pharmacol. - 1995. - V.134, V. 1. -P.148-154.

135. Evaluation of oxidative stress during apoptosis and necrosis caused by carbon tetrachloride in rat liver / F. Sun [et al.] // Biochim. Biophys.Acta. - 2001. -V.1535, № 2. -P.186-191.

136. Evaluation of the antioxidant activity of melatonin in vitro / K. A. Marshall [et al.] // Free Rad. Biol. Med. - 1996. - V. 21. - P. 307-315.

137. Evans P. H. Free radicals in brain metabolism and pathology / P. H. Evans// Br. Med. Bull. - 1993. - V. 49. - P. 577-587.

138. Evidence of hepatocyte apoptosis in rat liver after the administration of carbon tetrachloride / J. Shi [et al.] // Am. J. Pathol. - 1998. - V.153. - P.515-525.

139. Finkel T. Oxidants, oxidative stress and the biology of ageing / T. Finkel, N. J. Holbrook // Nature. - 2000. - V. 408. - P. 239-247.

140. Flohe 1. Superoxide dismutase assays / L. Flohe, F. Otting // Methods Enzymol. - 1984. - V. 105.-P. 93-105.

141. Fridovich I. Superoxide radical and superoxide dismutases/ I. Fridovich // Annu. Rev. Biochem. - 1995. - V. 64. - P. 97-112.

142. Gaetani G. F. Importance of catalase in the disposal of H202 within human erythrocytes/ G. F. Gaetani [et al.] // Blood. - 1994. - V. 84. - P. 325-330.

143. Ganguly N.K. Free radicals in myocardial injury: experimental and clinical studies / N.K. Ganguly, K. Nalini, S. Wahi // Mol. Cell Biochem. - 1992. - V. 111. -P. 71-76.

144. Geller B. L. Subcellular distribution of superoxide dismutase in rat liver/ B. L. Geller, D. R. Winge// Methods Emzymol. - 1984. - V. 105. - P. 105-114.

145. Giugliano D. Oxidative stress and diabetic vascular complication/ D. Giugliano, A. Ceriello, G. Paolisso // Diabetes Care.- 1996.- V. 19.- P. 257-267.

146. Glucose-induced protein kinase C activation regulates vascular permeability factor mRNA expression and peptide production by human vascular smooth muscle cells in vitro/ B. Williams [et ak] // Diabetes.- 1997.- 46.- P. 1497-1503.

147. Glutathione reductase from human erythrocytes. The sequences of the NADPH domain and of the interface domain / R.L. Krauth-Siegel [ et ak] // Eur. J. Biochem. - 1982. - V. 121. - P. 259-267.

148. Glutathione reductase from human erythrocytes: amino-acid sequence of the structurally known FAD-binding domain / R. Untucht-Grau [et al.] // Eur. J. Biochem. - 1981. -V. 120. - P. 407-419.

149. GPx-1 gene delivery modulates NFkB activation following diverse environmental injuries through a specific subunit of the IKK complex / Li Qiang [et ak] // Antioxid. Redox Sign.-2001.-V.3, №3.- P. 415-432.

150. Green M.J. Chemistry of dioxygen / M.J. Green, H.A. Hill // Methods in Enzymology.- 1984. - V. 105. - P. 3-22.

151. Gruebele A. Cytochrome P4502E1 - and cytochrome P4502Bl/2B2-catalyzed carbon tetrachloride metabolism: effects on signal transduction as demonstrated by altered immediate-early (c-Fos and c-Jun) gene expression and nuclear AP-1 and NF-kappa B transcription factor levels/ A. Gruebele, K. Zawaski,. D. Kaplan// Drug Metab. Dispos.-1996.- V. 24, № 1.- P. 15-22.

152. Grune T. Degradation of oxidized proteins in mammalian cells / T. Grune, T. Reinheckel, K. J. Davies // The FASEB J. - 1997. - V. 11. - P. 526-534.

153. Gutteridge J.M.C. Lipid peroxidation and antioxidants as biomarkers of tissue damages / J.M.C. Gutteridge // Clin. Chem. - 1995. - V. 41, № 12b. - P. 18191828.

154. Halliwell B. Oxygen toxicity, oxygen radicals, transition metals and disease / B. Halliwell, J. M. Gutteridge // Biochem. J. - 1984. - V. 219. - P. 1-14.

155. Halliwell B. Free radicals in biology and medicine / B. Halliwell, J. M. Gutteridge. - Oxford and New York: Clarendon Press.- 1999.- P.936.

156. High glucose level and free fatty acid stimulate reactive oxygen species production through protein kinase C-dependent activation of NAD(P)H oxidase in cultured vascular cells / T. Inoguchi [et al.] // Diabetes.- 2000.- V. 49.- P. 19391945.

157. Hinson J.A. Phase II enzymes and bioactivation / J.A. Hinson, P.G. Forkert // Can. J. Physiol Pharmacol. - 1995. - V.73, № 10. - P.1407-1413.

158. Hirichi N. A molekular dynamics study of glutathione reductase // N. Hirichi, M. Pauliko, M. Hansz // S. Mol. Stuct. Theochem. - 1995. - V.335. - P. 243-254.

159. Improvement of myocardial ischemia by human superoxide dismutase in coronary microembolizasion / M. Hori [et al.] // Med., Biochem. and Chem. Aspects Free Radicals: Proc. 4th Biennial Gen. Meet. Soc. Free Radical Res., Kyoto, 9-13 Apr., 1988. - V.l. - Amsterdam, 1989. - P. 663-666.

160.Huang, H.C. Regulation of the antioxidant response element by protein kinase C-mediated phosphorylation of NF-E2-related factor 2/ H.C. Huang, , T. Nguyen, C.B. Pickett // Proc Natl Acad Sei USA.- 2000.- 97, № 23.- P. 12475-12480.

161. Huhn M. Ability of SOD to protect the ischemic and reperfusion injured heart / M. Huhn, E. Ostling, E. Fellenius // Acta Physiol. Scand. - 1985. - V. 124, Suppl. № 542. - P. 340.

162. Hydrogen peroxide-mediated Cu,Zn-superoxide dismutase fragmentation: protection by carnosine, homocarnosine and anserine/ S.Y. Choi [et al.] // Biochim. Biophys. Acta. - 1999. - V. 14723. - P. 651-657.

163. Identification of activating transcription factor 4 (ATF4) as an Nrf2-interacting protein. Implication for heme oxygenase-1 gene regulation / C.H. He [et al.] // J. Biol. Chem.-2001.- 276 (24).- P. 20858-20865.

164. Imaging myocardial apoptosis with 99mTc-annexin in experimental myocarditis / C. Peker [et al.] // Eur. J. Nucl. Med. and Mol. Imag.— 2002 .—P. 137.

165. Impaired endothelium-dependent and independent vasodilatation in patients with type 2 (non-insulin-dependent) diabetes mellitus / G.E. McVeigh // Diabetologie- 1992.- V. 35.- P. 771—776.

166. Increase of lipid hydroperoxides in liver mitochondria and inhibition of cytochrome oxidase by carbon tetrachloride intoxication in rats / K. Ikeda [et al.] // Free. Radic.Res. - 1998. - V.28, № 4. - P.403-410.

167. Increased in vivo apoptosis in cells lacking mitochondrial DNA gene expression/ J. Wang [et al.] // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. - 2001. - V. 98. - P. 4038-4043.

168. Induction of apoptosis cell death be methylglyoxal and 3-deoxyglucosone in macro-phage-derived cell lines / A. Okado [et al.] // Biochem. Biophys. Res. Commun.- 1996.- V. 225.- P. 219—224.

169. Isolation of human glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) cDNA clones: primary structure of the protein and unusual 5' noncoding region / M.G. Pérsico [et al.] // Nucleic Acid Res.- 1986.- V. 14.- P. 2511-2522.

170. Influence of superoxide dismutase and iloprost on ischemia-induced arrhythmias and postishemic myocardial function / F. Janichen [et al.] // Radie. Ions and Tissue Damage: 3th Oxygen Radie., Szeged, 12-14 Jan., 1989. -Budapest, 1990. - P. 109-116.

171. Johnston D.E. Mechanism of early carbon tetrachloride toxicity in cultured rat hepatocytes / D.E. Johnston, C. Kroening // Pharmacol. Toxicol. - 1998. - V.83. -P.231-239.

172. Karplus P.A. A crystallographic study of the glutathione binding site of glutathione reductase at 0.3-nm resolution / P.A. Karplus, E.F. Pai, G.E. Schulz // Eur. J. Biochem. - 1989. - V. 178. - P. 693-703.

173. Karplus P.A. Substrate binding and catalysis by glutathione reductase as derived from refined enzyme: substrate crystal structures at 2 A resolution / P.A. Karplus, G.E. Schulz // J. Mol. Biol. - 1989. - V. 210. - P. 163-180.

174. Kaul S. Reversal of changes of lipid peroxide, xanthine oxidase and superoxide dismutase by cardio-protective drugs in isoproterenol induced myocardial necrosis in rats / S. Kaul, N.K. Kapoor // Indian J. Exp. Biol. - 1989. -Y. 27.-P. 625-627.

175. Keapl represses nuclear activation of antioxidant responsive elements by Nrf2 through binding to the amino-terminal Neh2 domain/ K. Itoh [et al.] // Genes Dev.- 1999.- 13, №1.- P. 76-86.

176. Kinetic characterization of glutathione reductase from the malarial parasite Plasmodium falciparum comparison with the human enzyme / C.C. Bome [et al.] // J. Biol. Chem. - 2000. - V. 275, № 48. - P. 37317-37323.

177. Kowaltowski A.J. Mitochondrial damage induced by conditions of oxidative stress / A.J. Kowaltowski, A.E. Vercesi // Free Radical Biology & Medicine. -1999.-V. 26.-P. 463-471.

178. Lardinois O.M. Reactions of bovine liver catalase with 02- and H2O2. / O.M. Lardinois // Free Rad. Res. - 1995. - V. 22. - P. 251-274.

179. Lee W.M. Drag-induced hepatotoxicity / W.M. Lee // New England Journ. Med.- 1995. -V.333,№ 17.-P. 1118-1127.

180. Lei X.G. New roles for an old selenoenzyme: evidence from glutathione peroxidase-1 null and overexpressing mice / X.G. Lei, W.H. Cheng // J. Nutr. -2005. - V. 135. - P. 2295-2298.

181. Levels of reactive oxygen species and primary antioxidant enzymes in WI38 versus transformed WI38 cells following bleomcyin treatment / Yen Hsiu-Chuan [et al.] // Free Radic. Biol, and Med.- V. 7 .— 2005 .— P. 950-959.

182. Lipoproteins, glycoxidation and diabetic angiopathy/ J. Jenkins [et al.]// Diabetes Metab Res Rev.- 2004.- V. 20.- P. 349-368.

183. Lopez-Barea J. Mouse-liver glutathione reductase. Purification, kinetics, and regulation. / J. Lopez-Barea, C.Y. Lee // Eur. J. Biochem. - 1979. - V.2, № 98 -P.487-499.

184. Lori A. Myocarditis / A. Lori, T. Leslie // Progress in Cardiovascular Diseases.- 2010.- V.52.- P. 274-288.

185. Protein measurement with the Folin-Phenol reagent / O.H. Lowry, N.J. Rosebrough, A.L. Farr [et al.] // J. Biol. Chem. - 1951. - V. 194, № 1. - P. 265271.

186. MacRury S.M. Seasonal and climatic variation in cholesterol and vitamin C: effect of vitamin C suppltmentation/ S.M. MacRury, M. Muir, R. Hume // Scott Med J.- 1992.- №37.-P. 49-52.

187. Malshet V.G. Fluorescent products of lipid peroxidation. I. Structural requirement for fluorescence in conjugated Shiff bases / V.G. Malshet, A.L. Tappel // Lipids. - 1973. - V. 8, № 4. - P. 194-198.

188. Mannervik B. A branching reaction mechanism of glutathione reductase / B. Mannervik // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1973. - V. 53. - P. 1151-1158.

189. Mapping of Cu/H202-induced DNA damage at nucleotide resolution in human genomic DNA by ligation-mediated polymerase chain reaction / H. Rodriguez // J. Biol. Chem. - 1995. - V. 270. - P. 17633-17640.

190. Margolis F. L. Carnosine in the primary of olfactory pathway / F. L. Margolis // Science. - 1974. -V. 184. - P. 909-914.

191. Marklund S.L. Copper- and zinc-containing superoxide dismutase, manganese-containing superoxide dismutase, catalase, and glutathione peroxidase in normal and neoplastic human cell lines and normal human tissues/ S.L. Marklund // Cancer Res. - 1982. - Y. 42. - P. 1955-1961.

192. Massey V. On the reaction mechanism of yeast glutathione reductase / V. Massey, C.H. Jr. Williams // J. Biol. Chem. - 1965. - V. 240. - P. 4470-4480.

193. Melov S. Mitochondrial oxidative stress. Physiologic consequences and potential for a role in aging/ S. Melov // Ann. N Y Acad. Sci. - 2000. - V. 908. -P. 219-225.

194. Mihajlovic R. Proizvodnja superoksidnog anjona u ishemicnoj bolesti miokarda / R. Mihajlovic, D. Micic, M. Jovanovic // Jugosloven. med. biohem. -1996. -T.15, № 4. - P. 288.

195. Millerand H. Peroxide modification of monoalkylated glutathione reductase stabilization of an active-site cysteine-sulfenic acid / H. Millerand, A. Claibornej // J. Biol. Chem. - 1991. - V. 266, № 29. - P. 19342-19350.

196. Mitochondrial targeting of glutathione reductase requires a leader sequence / Tamura Toshiya [et al.] // Biochem. And Biophys. Res. Commun. - 1996. - V.222, №3.-P.659-663.

197. Janisch S. Mitochondrial respiratory and antioxidative enzyme activities in turkey meat / S. Janisch, M. Wicke, C. Krischek// Animal.- 2012.-V. 6.- P. 346352.

198. Morrow J. D. Mass spectrometric quantification of F2-isoprostanes in biological fluids and tissues as measure of oxidative stress/ J. D. Morrow, L. J. Roberts // Methods of Enzymology. - 1999. - V. 300. - P. 3-13.

199. Nam H. The role of nitric oxide in the particulate matter (PM2.5)-induced NF kappa B activation in lung epithelial cells / H. Nam, B. Choi, J. Lee // Toxicol. Lett.-2004.- V. 1, №2 .- P. 95-102.

200. Nath K. A. a-Ketoacids scavenge H202 in vitro and in vivo and reduce menadione-induced DNA injury and cytotoxicity / K. A. Nath [et ah] // Am. J. Physiol. - 1995. - V. 268. - P. 227-236.

201. Neuzil J. Bilirubin attenuates radical-mediated damage to serum albumin / J. Neuzil, R. Stocker// FEBS Lett. - 1993. -V. 331. -P. 281-284.

202. Newcomb T. G. Mechanisms of mutagenicity of oxidatively-modified bases/ T. G. Newcomb, L. A. Loeb // In: Molecular Biology of Free Radicals in Human Disease. - London: Oica International. - 1998. - P. 139-166.

203. Newcomb T.G. Detection of tandem CC->TT mutations induced by oxygen radicals using mutation-specific PCR / T.G. Newcomb, K.J. Allen, L. Tkeshelashvili, L.A. Loeb // Mutat. Res.- 1999.- V. 427, №1.- P. 21-30.

204. Nguen T. Transcriptional regulation of the antioxidant response element. Activation by Nrf2 and repression by MafK / T. Nguen, H. Huang, B. Cecil // J. Biol. Chem.- 2000.- V. 275.- P. 15446-15473.

205. Nrf2-regulated glutathione recycling independent of biosynthesis is critical for cell survival during oxidative stress/ C. Harvey [et ah] // Free Radical Bio. Med.- 2009.- V. 46.- P. 443-453.

206. Oral administration of RAC lipoic acid modulates insulin sensitivity in patients with type 2 diabetes mellitus: a placebo-controlled pilot trial / S. Jacob [et ak] // Free Radic Biol Med.- 1999.-V. 27.- P. 309-314.

207. Oxidant stress-induced liver injury in vivo: role of apoptosis, oncotic necrosis, and c-Jun NH2-terminal kinase activation / J.Y. Hong [et al.] // Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. - 2009. - V. 296. - P. G572-G581.

208. Oxidative stress and stress-activated signaling pathways: a unifying hypothesis of type 2 diabete s/ J.L. Evans [et al.] // Endocrine Reviews.- 2002.- V. 23.- P. 599-622.

209. Vasumathy R. Oxidative stress-mediated apoptotic death in human peripheral blood lymphocytes treated with plasma from gamma-irradiated blood / R.

Vasumathy, B.N. Pandey, K.P. Mishra // J. Environ. - Pathol. Toxicol. Oncol.-2012.-V. 31, №1.- P. 1-6.

210. Packer L. a-lipoic acid as a biological antioxidant. / L. Packer, E. H. Witt, H. J. Tritschler // Free Rad. Biol. Med. - 1995. - V. 19. - P. 227-250.

211. Pai E.F. The catalytic mechanism of glutathione reductase as derived from x-ray diffraction analyses of reaction intermediates / E.F. Pai, G.E. Schulz // J. Biol. Chem. - 1983. - V. 3, № 258. - P. 1752-1757.

212. Parkes T. L. Extension of Drosophila life span by over expression of human SOD1 in motor neurons/ T. L. Parkes [et al.] // Nat. Genet. - 1998. - V. 19. - P. 171-174.

213. Pasaoglu H. Lipid peroxidation and resistance to oxidation in patients with type 2 diabetes mellitus/ H. Pasaoglu, B. Sancak, N. Bukan //J. Exp Med.- 2004.-V. 203.- P. 211—218.

214. Pelkonen O. Inhibition and induction of human cytochrome P450 (CYP) enzymes / O. Pelkonen, J. Maenpaa, P. Taavitsainen // Xenobiotica. - 1998. -V.28.-P. 1203-1253.

215. Pfaffl M.W. Relative expression software tool (REST) for group-wise comparison and statistical analysis of relative expression results in real-time PCR / M.W. Pfaffl, G.W. Horgan, Leo Dempfle // Nucleic Acids Research.-2002.- V. 30.- P. E36.

217. Phillips S. The formation of methylglyoxal from triose phosphates. Investigation using a specific assay for methilglyoxal./ S. Phillips, P. Thornalley // Eur. J. Biochem.- 1993.-V. 212.- P. 104-105.

218. Picaud T. Electrostatic Control of the Isoalloxazine Environment in the Two-electron Reduced States of Yeast Glutathione Reductase / T. Picaud, A. Desbois // J. Biol. Chem.-2002. - V. 277, № 35 - P. 31715-31721.

219. Platelet surface glutathione reductase-like activity / D.W. Essex [et al.] // J. Hemostasis, Thrombosis, And Vascular Biology. - 2004. - V. 104, № 5. - P. 13831385.

220. Purification of glutathione reductase from bovine brain, generation of an antiserum, and immunocytochemical localization of the enzyme in neural cells / J.M. Gutterer [et al.] // J. Neurochem. - 1999. - V. 73. - P.1422-1430.

221. Purification of glutathione reductase from porcine erythrocytes by the use of affinity chromatography on 2',5'-ADP-sepHarose 4B and crystallization of the enzyme / V. Boggaram [et al.] // Anal. Biochem. - 1979. - V. 98. - P. 335- 340.

222. Purification of multiple forms of glutathione reductase from pea (Pisum sativum L.) seedlings and enzyme levels in ozone-fumigated pea leaves / N.R. Madamanchi [et al.] // Plant Physiology. - 1992. - V. 100, №1. -P. 138-145.

223. Purification, properties, and oligomeric structure of glutathione reductase from the cyanobacterium Spirulina maxima / J.L. Rendon [et al.] // Arch Biochem. Biophys.- 1986. - V.l, №248. - P.215-223.

224. Raha S. Mitochondria, oxygen free radicals, disease and aging / S. Raha, B. H. Robinson // Trends in Biochem. Sci. - 2000. - V. 25. - P. 502-508.

225. Raha S. Mitochondria, oxygen free radicals, and apoptosis/ S. Raha, B.H. Robinson // Am J Med Genet.- 2001.- V. 106, № 1.- P. 62-70

226. Ray S.D. A hepatotoxic dose of acetaminophen modulates expression of BCL - 2, BCL - X (L), and BCL - X(S) during apoptotic and necrotic death of mouse liver cells in vivo / S.D. Ray, N.A. Jena // Arch.Toxicol. - 2000. - V.73, № 10-11. -P. 594-606.

227. Regulation of the yeast phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase GPX2 by oxidative stress is mediated by Yapl and Skn7 / Tsuzi Daisuke [et al.] // FEBS Lett. V.l-3 .— 2004 .— P. 148-154.

228. Ren S. Impact of antioxidants and HDL on glycated LDL-induced generation of fibrinolytic regulators from vascular endothelial cells / S. Ren, G.X. Shen // Arterioscler. Thromb Vase. Biol.- 2000.-V. 20.- P. 1688-1693.

229. Requirement for protein kinase C in reactive oxygen species-indused apoptosis of vascular smooth muscle cells / P.-F. Li [et al.] //Circulation.- 1999.-V.100.- P. 967—973.

230. Richter C. Biophysical consequence of lipid peroxidation in membranes / C. Richter // Chem. Phys. Lipids. - 1987. - V. 44. - P. 175-189.

231. Richter C. Normal oxidative damage to mitochondrial and nuclear DNA is extensive / C. Richter, J. W. Park, B. N. Ames // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1988.-V. 85.-P. 6465-6467.

232. Richter C. Normal oxidative damage to mitochondrial and nuclear DNA is extensive / C. Richter, J. W. Park, B. N. Ames // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1988. - V. 85. - P. 6465-6467.

233. Role of Ca2+ in toxic cell killing / S. Orrenius [et al.] // Trends in Pharmacolog. Sci. - 1989. - V. 10. - P. 281-285.

234. Role of oxidants in NF-kB activation and TNFgene transcription induced by hypoxia and endotoxin / N.S. Chandel [et al.] // J. Immunol.- 2000.- V.165.- P. 1013-1021.

235. Role of phase 2 enzyme induction in chemoprotection by dithiolethiones / M.K. Kwak [et al.] //Mutat. Res.-2001.- P. 305-315.

236. Selective induction of heparin-binding epidermal growth factor by methylglyoxal and 3-deoxyglucosone in rat smooth muscle cells: the involvementof reactive oxygen species formation methylglyoxal and a possible implication for atherogenesis in diabetes / W. Che [et al.] // J. Biol. Chem.- 1997.-272.-P. 18453-18459.

237. Serrano A. Purification and properties of glutathione reductase from the Cyanobacterium anabaena sp. strain 7119 / A. Serrano, J. Rivas, M. Losada // J. Bacteriol. - 1984. -V.158. -P.317-324.

238. Severin S.E. Problems concerned with the biological activity of naturally occuring imidazole compounds / S.E. Severin // Proc. Plen. Sess. Vlth Int. Biochem.Congr. - NY. - 1964. - P. 45-61.

239. Sies H. Oxidative Stress II / H. Sies // Oxidants and antioxidants. - London: Academic Press. - 1991. - 380 p.

240. Singh R. Regulation of hepatocyte apoptosis by oxidative stress / R. Singh, MJ. Czaja // J. Gastroenterol. Hepatol. - 2007. - V. 22, Suppl. 1. - P. S45-S48.

241. Skulachev V.P. Membrane-linked systems preventing superoxide formation / V.P. Skulachev // Bioscience Reports. - 1997. - V.17. - P.347-366.

242. Slot J. W. Crapo Intracellular localization of the copper-zinc and manganese SODs in rat liver parenchymal cells/ J. W. Slot, H. J. Geuze, B. A. Freeman // Lab. Invest. - 1986. - V. 35. - P. 363-371.

243. Spector A. Variation in cellular glutathione peroxidase activity in lens epithelial cells, transgenic and knochouts does not significantly change the

response to oxidative stress/ A. Spector [et al.] // Exp. Eye Res. - 1996. - V. 62. -P. 521-540.

244. Staal G.E. The reaction mechanism of glutathione reductase from human erythrocytes / G.E. Staal, C. Veeger // Biochim Biophys Acta. - 1969. - V. 185. -P.49-62.

245. Stapleton S.R. Selenium: an insulin-mimetic / S.R. Stapleton // Cellular and Molecular Life Sciences. - 2000. - V. 57. - P. 1874-1879.

246. Stuart R.L. Isoniazid toxicity in health care workers / R.L. Stuart, J.Wilson, M.L.Grayson // Clin. Infect. DIS. - 1999. - V.28, № 4. - P. 895-897.

247. Sundari P.N. Does oxidative stress damage play role in the pathogenesis carbon tetrachloride-indused liver injury in the rat / P.N. Sundari, G. Wilfred, B. Ramakrishna // Biochim. Biophys.Acta. - 1997. - Y.1362, № 2-3. - P.169-176.

248. Susin S. A. Molecular characterization of mitochondrial apoptosis-inducing factor/ S.A. Susin [et al.] // Nature. - 1999. - V. 397. - P. 441-446.

249. The protective effects of Curcuma longa Linn, extract on carbon tetrachloride-induced hepatotoxicity in rats via upregulation of Nrf2 / H.S. Lee [et al.] // J. Microbiol. Biotechnok-2010.- V. 20, №9.- P. 1331-1338.

250. The role of oxidative stress in the onset and progression of diabetes and its complications: a summary of a Congress Series sponsored by UNESCO-MCBN, the American Diabetes Association and the German Diabetes Society / P. Rosen [et al.] // Diabetes Metab. Res. Rev.- 2001.- V. 17.- P. 189-212.

251. Theodore W. R. Glutathione reductase of animal tissues / W. R. Theodore, L.A. Lehninger // J. Biol. Chem. - 1952. - V.3. - P. 119-130.

252. Thounaojam T.C. Excess copper induced oxidative stress and response of antioxidants in rice / T.C. Thounaojam, P. Panda, P. Mazumdar // Plant Physiol. Biochem.- 2012.- P. 33-39.

253. Thomas E. L. Evidence for a role of taurine in the vitro oxidative toxicity of neutrophils toward erythrocytes / E. L. Thomas // J. Biol. Chem. - 1985. - V. 260. -P. 3321-3329.

254. Touyz R.M. Growth factors mediate intracellular signaling in vascular smooth muscle cells through protein kinase C-linked pathway / R.M. Touyz, E. Schiffrin // Hypertension.- 1997.- V. 30.- P. 1440-1447.

255. Traber M.G. Determinants of plasma vitamin E concentrations / M.G. Traber // Free Rad. Biol. Med. - 1994. - V. 16. - P. 229-239.

256. Transgenic mice overexpressing glutathione peroxidase 4 are protected against oxidative stress-induced apoptosis / Ran Qitao [et al] // J. Biol. Chem. -V.53 .— 2004.—P. 55137-55146.

257. Trapani J. A. Lymphocyte-mediated cytolisis: dual apoptotic mechanisms with overlapping cytoplasmic and nuclear signalling pathways / J. A. Trapani, D. A. Jans // In: Apoptosis: Biology and Mechanisms / Kumar S. (Ed). - NY: Springer, 1999. - P. 77-94.

258. Turrens J. F. Protection against oxygen toxicity by intravenous injection of liposome-entrapped catalase ans SOD / J. F. Turrens, J. D. Crapo, B. A. Freeman // J. Clin. Invest. - 1984. - V. 73. - P. 87-95.

259. Uptitchard J.E. Effect of supplementation with tomato juice, vitamin E, and vitamin C on LDL oxidation and products of inflammatory activity in type 2 diabetes / J.E. Uptitchard, W.H. Sutherland, J.I. Mann // Diabetes Care.- 2000.- V. 23.- P. 733-738.

260. Venditti P. Oxidative stress in cold-induced hyperthyroid state / P. Venditti, L. Di Stefano, S. Di Meo // J. Exp. Biol. - 2010. - V. 213, №17. - P. 2899-2911.

261. Verhagen A. M. Molecular mechanisms of apoptosis: an overview / A. M. Verhagen, D. V. Vaux // In: Apoptosis: Biology and Mechanisms. - Kumar S. (Ed).-NY: Springer, 1999.-P. 11-20.

262. Vermes I. Molecular biology of apoptosis and programmed cell death / I. Vermes, C. Haanen, C. Rentelingsperser // In: Molecular Biology of Free Radicals in Human Disease. - London: Oica International, Saint Lucia. - 1998. -P. 226-286.

263. Vincent H.K. Mechanism for obesity-induced increase in myocardial lipid peroxidation / H.K. Vincent, S.K. Powers, A.J. Dirks // Int. J. Obesity. - 2001. -V.25, № 3. - P. 378-388.

264. Vladimirov Y. Studies of antioxidants with chemiluminescence / Y. Vladimirov, L. Packer, M. Traber // Molecular Mechanisms and Health Effects. -Proceedings of the International Symposium on Natural Antioxidants. - 1996. - P. 125-144.

265. Wautier J.L. Blood cells and vascular cell interactions in diabetes / J.L. Wautier, M.P. Wautier // Clin. Hemorheol. Microcirc. - 2001.- V. 25. - P. 49-53.

266. Weisel R.D. Myocardial free-radical injury after cardioplegia / R.D. Weisel, D.A.G. Mickle, C.D. Finkle // Circulation. - 1989. - V. 80, № 5. - P. 14-18.

267. Will J.C. Does diabetes mellitus increase the requirement for vitamin C?/ J.C. Will, T. Byers // Nutr. Rev. - 1996. - V.54. - P. 193-202.

268. Wolf P.A. Prevention of stroke / P.A. Wolf// Lancet. - 1998. - V.352. - P. 1518.

269. Wolff S.P. Diabetes mellitus and free radicals / S.P. Wolff// Br. Med. Bull. -1993. - V. 49. - P. 642—652.

270.Wolff S.P. Protein glycation and oxidative stress in diabetes mellitus and ageing / S.P. Wolff, Z.Y. Jiang, J.V. Hundt // Free Radic. Biol. Med. - 1991. -V.10.-P. 339-352.

271. Wong K.K. Glutathione reductase: solvent equilibrium and kinetic isotope effects / K.K. Wong, M.A. Vanoni // Blanchard Biochemistry. - 1988. - V.18, № 27. -P.7091-7096.

272. Yamada Y. Deficient liver regeneration after carbon tetrachloride injury in mice lacking type 1 but not type 2 tumor necrosis factor receptor / Y. Yamada, N. Fausto // Am. J. Pathol. - 1998. - V. 152, № 6. - P. 1577-1589.