Экспрессия генов в эпидерме для исследования развития цветка львиного зева и выведения сортов методом трансформации тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.01.05, кандидат биологических наук Ефремова, Надежда Николаевна

• Ефремова, Надежда Николаевна
• кандидат биологических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Ефремова, Надежда Николаевна

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Львиный зев (Antirrhinum majus L.) и арабидопсис

Arabidopsis thaliana L.) как модельные растения в биологии развития для изучения морфогенеза цветка

1.1.1. Систематика, происхождение и биологические особенности львиного зева

1.1.2. Систематика, происхождение и биологические особенности арабидопсиса.

1.2. Цветковые морфогенетические мутанты львиного зева

1.3. Строение растительной меристемы и развитие львиного зева и арабидопсиса

1.3.1. Послойное строение растительной меристемы

1.3.2. Строение и функции эпидермы

1.3.3. Экспрессия эпидерма-специфичных генов

1.3.4. Механизм, определяющий тип цветковых органов в цветочной меристеме (АВС-модель)

1.3.5. Гомеотические гены львиного зева и арабидопсиса, имеющие В-функцию

1.3.6. Механизм, определяющий число и позицию примордий

1.3.7. Передача сигналов в меристеме из клетки в клетку и от клеток одного слоя к клеткам другого слоя

1.3:8. Раннее развитие цветка арабидопсиса 1.4. Трансформация растений

1.4.1. Трансформация растительных клеток бактериями из рода Agrobacterium.

1.4.2. Конструирование бинарных векторов Agrobacterium tumefaciens

1.4.3. Репортерные гены, используемые в генетической инженерии растений

1.4.4. Наследование полученных признаков и экспрессия генов, перенесённых в трансгенные растения

1.4.5. Трансформация львиного зева с помощью агробактерии 2. УСЛОВИЯ, МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Почвенно-климатические условия проведения опытов

2.2. Растительный материал

2.3. Бактериальные штаммы и вектора

2.4. Химические реагенты, энзимы и радиоизотопы

2.5. Среды, буферы и растворы

2.6. Антибиотики

2.7. Выделение ДНК

2.8. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

2.9. Ревертазная ПЦР (РТ-ПЦР)

2.10. Лигирование фрагментов ДНК в вектора для трансформации растений

2.11. Введение рекомбинантных плазмид в клетки E.coli и A. tumefaciens с помощью трансформации

2.12. Обработка ДНК ферментами рестрикции

2.13. Фракционирование ДНК методом электрофореза в агарозном геле

2.14. Перенос и гибридизация ДНК по Саузерну

2.15. Секвенирование ДНК

2.16. In vitro трансформация растений и культура тканей львиного зева

2.17. In planta трансформация растений арабидопсиса

2.18. Электронное сканирование растительных образцов (СЭ-микроскопия)

2.19. Анализ эффективности трансформации растений при помоши конфокальной лазерной сканирующей микроскопии (КЛС-микроскопии)

2.20. Анализ эффективности трансформации по окраске на

-глюкуронидазу (GUS)

2.21. In situ гибридизация мРНК

2.22. Скрининг геномной библиотеки львиного зева и 61 клонирование промотора AFI

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЯ

3.1. Разработка протокола трансформации и регенерации 63 львиного зева

3.1.1. Конструирование супервирулентных штаммов для 63 трансформации

3.1.2. Подбор сред для регенерации львиного зева

3.1.3. Трансформация львиного зева in planta

3.1.4. Практическое значение разработанного протокола 72 трансформации львиного зева

3.2. Изучение эпидерма-специфичной экспрессии двух 74 растительных промоторов гомологичных генов FDH и AFI

3.2.1. Конструирование векторов с промотором гена FDH, 74 экспрессирующих ген устойчивости к гигромицину в растениях

3.2.2. Активность промотора FDH в трансгенных растениях 76 львиного зева

3.2.3. Экспрессия мРНК гена AFI в тканях генеративной 81 меристемы и цветка львиного зева

3.2.4. Клонирование промотора AFI

3.2.5. Бинарные вектора с промотором AFI для трансформации 85 арабидопсиса и львиного зева

3.2.6. Активность промотора AFI трансгенных растениях 85 арабидопсиса

3.2.7. Активность промотора AFI трансгенных растениях 90 львиного зева

3.2.8. Научное значение и практическое использование специфичной экспрессии промотора AFI в эпидерме 3.3. Использование эпидерма-специфичной экспрессии для изучения межклеточных взаимодействий в меристеме

3.3.1. Цели и задачи экспрессии кДНК генов DEFICIENS и GLOBOSA под контролем AFI-промотора в трансгенных растениях

3.3.2. Конструирование бинарных векторов, экспрессирующих кДНК генов DEFr GLO под контролем AFI-промотора

3.3.3. Получение трансгенных растений арабидопсиса, экспрессируюших DEF и GLO кДНК львиного зева под контролем эпидерма-специфичного промотора

3.3.4. Фенотип трансгенных растений AFI-DEF арабидопсиса

3.3.5. Генетическая комплементация гомеотической мутации apetala3 арабидопсиса геном львиного зева DEF при его экспрессии в эпидерме

3.3.6. Фенотип трансгенных растений AFI-GLO арабидопсиса

3.3.7. Фенотип двойных трансгенных растений AFI-DEFxAFI-GLO арабидопсиса

3.3.8. Экспрессия мРНК генов DEF и GLO в тканях генеративных меристем и цветков трансгенных растений AFI-DEFxAFI-GLO арабидопсиса

3.3.9. Роль межклеточных взаимодействий и взаимодействий бежов MADS-бокс генов класса В в установлении типа цветковых органов во втором и третьем концентрических кольцах цветка

3.3.10. Трансформация львиного зева бинарными векторами с DEF и GLO под контролем промотора AFI и фенотип трансгенных растений

3.3.11. Перспективы анализа функций генов DEF и GLO в трансгенных растениях львиного зева

ВЫВОДЫ

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Экспрессия генов в эпидерме для исследования развития цветка львиного зева и выведения сортов методом трансформации»

Актуальность темы. Львиный зев (Antirrhinum majus L.), относящийся к семейству Scrophulariaceae, - широко распространённое декоративное растение закрытого и открытого грунта. Известно множество сортов и гибридов львиного зева, отличающихся по высоте растений, размеру, форме, махровости и окраске цветков. С начала века львиный зев является одним из главных объектов классической генетики /59/.

Наряду с арабидопсисом (Arabidopsis thaliana L.), относящимся к семейству Brassicaceae, львиный зев является модельным растением в биологии развития для изучения морфогенеза цветка /60, 61, 144/. Многие гены, вовлечённые в этот процесс уже клонированы и изучены у обоих растений. Один из классов генов контролирует образование и развитие органов цветка. Мутации в этом случае заключаются в гомеотических трансформациях различных типов органов цветка /46, 176/.

Генетический и молекулярный анализ мутантов, заложил основу ABC-модели развития цветка, согласно которой тип органов в цветке определяется комбинацией А-, В- и С- гомеотических генов, экспрессирующихся в соседних концентрических кольцах цветочной меристемы. Соответственно этому, в обоих видах растений мутации по этим генам затрагивают два соседних типа органов цветка: чашелистики и лепестки у мутантов по A-генам, лепестки и тычинки у мутантов по В-генам и тычинки и плодолистики у мутантов по С-генам /59/. Гены DEFICIENS (DEF) и GLOBOSA (GLO) львиного зева, также как и гены PISTILLATA (PI) и APETALA3 (АРЗ) арабидопсиса, принадлежат к В-классу генов. Потеря В-функции мутантами по любому из этих четырёх генов проявляется в гомеотической трансформации лепестков в чашелистики и тычинок в плодолистики. Гены DEF, GLO, PI и АРЗ кодируют ре1уляторные белки, относящиеся к так называемым MADS-box факторам транскрипции. С помощью исследований in vitro было установлено, что MADS-box факторы транскрипции связываются с похожими 8 последовательностями ДНК. Белки львиного зева GLO и DEF при связывании образуют гетеродимер, такой же гетеродимер образуют белки генов арабидопсиса PI и АРЗ. Функция одного из генов в этих парах не проявляется в мутантах по другому гену из-за отсутствия гетеродимера.

Связываясь со своими промоторами, MADS-box белки способны после индукции поддерживать экспрессию своих генов. По аминокислотной последовательности белок АРЗ арабидопсиса гомологичен белку львиного зева DEF, также как белок PI арабидопсиса гомологичен белку львиного зева GLO. Считается, что белки АРЗ и PI арабидопсиса являются функциональными гомологами белков львиного зева DEF и GLO соответственно. Показано, что белок DEF львиного зева способен образовывать гетеродимер с белком PI в трансгенных растениях арабидопсиса и замешать АРЗ в образовании тычинок и лепестков в мутантах apetala3 у арабидопсиса. Неизвестно, может ли белок GLO львиного зева комплементировать белок PI, образуя гетеродимер с АРЗ в растениях арабидопсиса.

Важным свойством MADS-box факторов транскрипции является то, что они могут иметь неавтономно-клеточные функции в цветке /48, 92, 157/. Как было показано на химерах /106, 191/, в большинстве двудольных растений меристема состоит из трёх слоев клеток. Клетки внешнего слоя L1 дают начало эпидерме, клетки L2 образуют субэпидермальный мезофилл и клетки, из которых развиваются гаметы, клетки слоя L3 образуют внутренние и проводящие ткани /173/.

Механизм клеточных взаимодействий в растительной меристеме во время её формирования, роста и развития ещё до конца не понят и не изучен. Предполагается, что существует межклеточный транспорт, который осуществляется через плазмодесмы - межклеточные органеллы, связывающие цитоплазмы соседних клеток /124/. С помощью техники микроиньекций было показано существование межклеточного транспорта молекул мРНК и белка /136/. На периклинальных химерах defL2L3 и gloL2L3 львиного зева, у которых один слой клеток генетически по одному 9 или нескольким признакам отличается от других, было установлено существование межклеточного транспорта мРНК генов БЕЕ и СЕО и их белков из внутренних слоёв меристемы Ь2 и ЬЗ во внешний слой Ь1. Напротив, в периклинальных химерах с1е11Л мРНК и белок БЕБ были детектированы только в клетках Ы-слоя меристемы, что предполагает существование полярного переноса белка и мРНК ЭЕЕ. После изучения химер осталось множество невыясненных вопросов, на которые можно ответить с помощью других методов. Одним из таких методов является тканеспецифичная экспрессия в трансгенных растениях.

К сожалению, для львиного зева не была создана эффективная методика трансформации. До недавнего времени экспрессию генов львиного зева можно было изучать только трансформируя другие виды растений /62, 81, 107/, что не всегда даёт полную и достоверную картину экспрессии. По этой причине все исследовательские лаборатории, изучающие львиный зев, заинтересованы в воспроизводимом методе трансформации львиного зева с помощью Agrobacterium йш^ас1еп8. В Макс-Планк институте исследования по созданию такого метода длятся уже 15 лет. Низкая эффективность трансформации львиного зева обусловлена его устойчивостью к агробактериальной инфекции и низкой регенерационной способностью. Поэтому актуальным является как увеличение вирулентности агробактериальных штаммов, так и повышение способности к регенерации у трансгенных каллусов.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы являлось -разработка методов экспрессии генов в эпидерме для изучения клеточных взаимодействий в цветочной меристеме и создание исходного материала для селекции львиного зева с изменённой формой цветка. Исходя из этого, в задачи исследований входило:

1. Разработка методики трансформации львиного зева с помощью Agrobacterium Ште£ас1епз.

2. Анализ экспрессии эпидерма-специфичного промотора гена ЕЮПЕЕИЕАВ (ЕИН) арабидопсиса в трансгенных растениях львиного зева.

10

3. Анализ экспрессии гена ANTIRRHINUM FIDDLEHEAD HOMOLOG (AFI) в львином зеве при помоши in situ гибридизации мРНК.

4. Клонирование промотора гена AFI из геномной библиотеки львиного зева.

5. Конструирование бинарных векторов с генами-репортерами под контролем промотора AFI и анализ экспрессии промотора в трансгенных растениях арабидопсиса и львиного зева.

6. Изучение возможности использования GFP (зелёного флюоресцентного белка) в качестве репортера в трансгенных растениях львиного зева.

7. Конструирование бинарных векторов с MADS-бокс генами класса В GLO и DEF под контролем промотора AFI и трансформация растений арабидопсиса и львиного зева этими векторами.

8. Изучение фенотипа трансгенных растений арабидопсиса, экспрессирующих гены DEF и GLO в эпидерме.

9. Получение двойных трансгенных растений арабидопсиса AFI-DEFxAFI-GLO и анализ их фенотипа.

10. Анализ экспрессии генов DEF и GLO в двойных трансгенных растениях арабидопсиса при помощи in situ гибридизации мРНК.

11. Анализ фенотипа трансгенных растений арабидопсиса AFI-DEF на мутантной основе apetala3, экспрессирующих ген DEF в эпидерме.

12. Изучение фенотипа трансгенных растений львиного зева, экспрессирующих гены DEF и GLO в эпидерме.

Научная новизна работы.

1. Сконструирована супервирулентная плазмида pNA1289(TetR), которая совместима с большинством бинарных векторов, используемых в трансформации с помощью агробактерии. Супервирулентные штаммы, содержащие эту хелперную плазмиду, повышают эффективность трансформации львиного зева.

2. Подобран состав питательной среды для регенерации растений львиного зева из каллусов гипокотелей. Эта питательная среда является частью

11 протокола регенерации и трансформации львиного зева, разработанного в лаборатории.

3. Впервые, после арабидопсиса, получены трансгенные растения львиного зева методом in planta трансформации.

4. На трансгенных растениях показано, что GFP может использоваться в качестве гена-репортера при трансформации львиного зева.

5. На трансгенных растениях львиного зева показано, что эпидерма-специфичный промотор FDH арабидопсиса работает в львином зеве и сохраняет в нём свою специфичность.

6. Установлено, что ген AFI гомологичный эпидерма-специфичному гену FDH арабидопсиса экспрессируется только в эпидерме львиного зева.

7. Клонирован эпидерма-специфичный промотор гена AFI из львиного зева и изучена его экспрессия в трансгенных растениях арабидопсиса и львиного зева.

8. С помощью эпидерма-специфичной экспрессии в трансгенных растениях арабидопсиса установлено, что ген GLOBOSA львиного зева не замещает ген PISTILLATA арабидопсиса и не функционирует в арабидопсисе без гена DEFICIENS львиного зева.

9. На трансгенных растениях арабидопсиса, экспрессирующих гены DEF и GLO львиного зева, показана передача сигналов от клеток LI слоя во внутренние слои меристемы.

10. С помощью мРНК in situ гибридизации на трансгенных растениях установлено отсутствие межклеточного переноса мРНК генов DEF и GLO из клеток слоя LI в клетки внутрилежаших слоев L2 и L3 меристемы арабидопсиса.

11. Впервые получены трансгенные растения львиного зева, экспрессируюшие гомеотические гены DEF и GLO.

12. Установлено, что с помощью эпидерма-специфичной экспрессии можно изменять морфологию цветковых органов.

Практическая значимость работы. Сконструированная супервирулентная хелперная плазмида pNA1289 эффективна не только на львином

12 зеве, но и на табаке. Это свидетельствует о том, что она может успешно использоваться для повышения эффективности трансформации на других культурах.

Разработанный протокол по регенерации и трансформации львиного зева успешно используется в лабораториях, изучающих развитие цветка львиного зева: Макс-Планк институте (Кёльн, Германия), в Джон-Иннес центре (Норвич, Англия), в университете г.Лидса (Лидс, Англия) и в Королевском колледже (Кембридж, Англия). Разработанный протокол имеет большое практическое значение в создании исходного материала для селекции с изменённой формой, размером и пигментацией цветков при помоши генетической трансформации.

Эпидерма-специфичный промотор AFI успешно используется в программах лаборатории по трансформации. Получены трансгенные растения арабидопсиса и львиного зева, экспрессирующие в эпидерме ген PLENA класса С под контролем промотора AFI. Промотор AFI может использоваться всегда, когда необходимо изменить признаки эпидермы, такие как устойчивость к патогенам, окраску, продукцию эфирных масел, образование кутикулы, устьиц и трихом. Он может использоваться и в том случае, когда экспрессии в эпидерме достаточно для изменения фенотипических признаков всего органа в растении. Практическим преимуществом тканеспецифичной экспрессии является уменьшение накопления чужеродных белков по сравнению с конститутивной экспрессией в растении. Уже получены трансгенные растения львиного зева, экспрессирующие под контролем промотора AFI в эпидерме один из цитохромов фиалки, кодирующий "Blue-gene". Этот фермент играет роль в образовании пигмента дельфидина, определяющего голубую окраску в лепесках цветков растений /101, 102/. У львиного зева, как и у многих других декоративных растений, этот пигмент отсутствует. Полученные растения могут иметь большое значение для выведения новых декоративных сортов львиного зева. Аналогичная стратегия может применяться и для создания плодов с определённой окраской кожуры /103/.

Создание и использование трансгенных декоративных растений, и львиного зева в частности, имеет большие перспективы. Поскольку

13 декоративные растения не используются в пищу, они могут быть легче допущены для коммерческого использования.

Использование промотора AFI вместе с промотором FDH для трансформации растений защищается Европейским патентом. Апробация работы. Основные результаты работы были доложены на 7-м и 8-м международных симпозиумах по львиному зеву (Севилья, Испания, 1997 г. и Кэмбридж, Англия, 1998 г.), ежегодно на заседаниях отдела молекулярной генетики Макс-Планк института селекции растений (Кёльн, Германия) и на заседаниях кафедры селекции и семеноводства КГАУ (Краснодар, Россия).

14

Заключение диссертации по теме «Селекция и семеноводство», Ефремова, Надежда Николаевна

125 ВЫВОДЫ

1. Эффективность трансформации львиного зева можно повысить до 2-х раз при использовании супервирулентного штамма Agrobacterium tumefaciens virGN54D, содержащего мутантный ген virG. Штамм virGN54D является эффективным не только на львином зеве, но и на табаке, поэтому он может использоваться для повышения эффективности трансформации на других культурах.

2. Лучшей средой для регенерации растений из каллусов львиного зева дикого типа 165Е является среда Litvays+ 0,05мг/л 2,4Д + 0,5 мг/л зеатина. Добавление в среду Litvays KCl в концентрации 1,5 г/л повышает эффективность регенерации львиного зева.

3. Львиный зев можно трансформировать не только в условиях in vitro, но и с помощью in planta трансформации. Однако для массового получения трасгенных растений этот метод является недостаточно эффективным и трудоёмким

4. Эпидерма-специфичный промотор гена FIDDLEHEAD арабидопсиса работает в львином зеве и сохраняет в нём свою специфичность. Ген GUSINT под контролем промотора FDH экспрессируется в львином зеве только в клетках эпидермы молодых быстро растущих органов.

5. мРНК гена AFI - гомолога гена FDH из львиного зева экспрессируется только в слое LI генеративной меристемы в примордиях всех цветковых органов в растениях дикого типа львиного зева.

6. Промотор AFI направляет экспрессию генов в LI слой меристемы и в эпидерму растущих органов и тканей трансгенных растений арабидопсиса и львиного зева. Разницы в экспрессии генов - репортеров GUS-INT и GFP в зависимости от длины фрагмента промотора AFI не наблюдается. Фрагмент промотора длиной 0,5 т.п.н. достаточен для специфичной экспрессии.

7. Ген GFP в версии mGFP5-ER работает в львином зеве.

Его экспрессия в львином зеве несколько слабее чем в арабидопсисе.

126

8. Эпидерма-специфичный промотор AFI может быть использован для трансформации не только львиного зева, но и растений других ботанических семейств.

9. Экспрессии MADS-бокс гена класса В львиного зева DEFICIENS под контролем промотора AFI в эпидерме трансгенных растений арабидопсиса достаточно для изменения фенотипа органов в четвёртом концентрическом кольце органов цветка. Ген львиного зева DEFICIENS при его экспрессии только в эпидерме частично комплементирует мутацию apetala3 в арабидопсисе, частично восстанавливая у растений фенотип дикого типа.

10. Ген львиного зева GLOBOSA в отсутствие гена DEFICIENS не работает в арабидопсисе, так как гомология его с геном PISTILLATA недостаточно сильна, для того, чтобы его белок образовывал гетеродимер с белком APETALA3, как это делает PISTILLATA. Экспрессии гена GLOBOSA под контролем промотора AFI в эпидерме в двойных трансгенных растениях арабидопсиса AFI -GLOxAFI -DEF достаточно для изменения фенотипа органов в первом концентрическом кольце органов цветка.

11. Достаточность экспрессии генов DEF и GLO в эпидерме для установления типа цветковых органов у трансгенных растений арабидопсиса свидетельствует о существовании индуктивных сигналов, передающихся из эпидермы во внутрилежащие ткани меристемы.

12. Анализ экспрессии генов львиного зева DEF и GLO в двойных трансгенных растениях арабидопсиса AFI-DEFxAFI-GLO свидетельствует об отсутствии межклеточного переноса мРНК генов DEF и GLO из слоя LI во внутрилежащие слои L2 и L3 растительной меристемы.

13. Экспрессии MADS-бокс генов класса В львиного зева GLOBOSA DEFICIENS под контролем промотора AFI в эпидерме трансгенных растений львиного зева достаточно для изменения фенотипа органов цветка. У трансгенных растений AFI-GLO может происходить частичная петализация чашелистиков. У трансгенных растений AFI-GLO и AFI-DEF может наблюдаться эффект суперэкспрессии генов GLO и DEF во втором и

127 третьем концентрических кольцах цветка. Промотор AFI может использоваться для изменения формы цветка у львиного зева. 14. Полученные трансгенные растения львиного зева и арабидопсиса имеют значительные отличия по форме цветков от дикого типа.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ

1. Рекомендуется использовать супервирулентную хелперную плазмиду, сконструированную нами, для повышения эффективности трансформации не только на львином зеве, но и на других культурах.

2. Модифицированная среда Litvays предлагается в качестве основной среды для каллусообразования и регенерации львиного зева.

3. Зелёный флюоресцентный белок предлагается для использования в качестве репортерного гена при трансформации львиного зева.

4. Промотор AFI может использоваться для изменения признаков эпидермы в трансгенных растениях, таких как устойчивость к патогенам, окраска, продукция эфирных масел, образование кутикулы, устьиц и трихом. Он может использоваться и для изменения признаков всего органа или ткани растения в том случае, когда экспрессии в эпидерме достаточно для этого.

5. Полученные трансгенные растения львиного зева с изменённой формой цветков рекомендуется использовать в качестве исходного материала для селекции.

128

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Ефремова, Надежда Николаевна, 1999 год

1. Беляева Р.Г. Анализ наследования и взаимодействия мутаций "пыльник в лепестке" и "рассечённые лепестки" у мака снотворного// Генетика.-1988.-Т14, №6,- с. 674-677.

2. Беляева Р.Г. Генетическое изучение мутации махровость у растений с монокарпическим побегом // Генетика.-1995.- Т31, №5.- с. 1072-1080.

3. Винетский Ю.П. Молекулярная структура транспозонных элементов высших растений // Сельскохозяйственная биология. 1986.-Т.4, №3. -с.23-30.

4. Гартель A.JL, Аветисов В.А., Соболькова Г.И., Газарян К.Г. Мелик-Саркисов О.С. Изучение действия промотора 35S РНК в различных органах трансгенных растений картофеля // Молекулярная биология.- 1991.-Т.25, вып. 5.-е. 1372-1376.

5. Генная инженерия растений. Лабораторное руководство // Пер.с англ. Под ред. Дрейпера Дж., Скотта Р., Армитиджа Ф., Уолдена Р. М.: Мир, 1991- 407 сс.

6. Ефремова H.H., Ефремов A.A. Создание и использование супервирулентного штамма агробактерии для повышения эффективности трансформации львиного зева и табака // Тр. КГАУ, 1999.- Вып.372 (400). -Краснодар, 1999. с.158-164.129

7. Ефремова Н.Н. Использование метода in planta для трансформации львиного зева // Кубанский ГАУ. -1999.- 7с.- Рус. Деп. в ВИНИТИ 28.07.99 № 2469-В99.

8. Кучук Н.В. Генетическая трансформация высших растений, опосредованная бактериями из рода Agrobacterium // Успехи современной биологии. -1997.- Т. 117, вып. 6.-е. 645-659.

9. Кучук Н.В. Каневский И.Ф. Методы генетической трансформации растений // Биотехнология.-1987.- Т.З, № 3.- с. 365-369.

10. Кучук Н.В., Глеба Ю.Ю. Применение трансгенных растений для целей практической селекции // Цитология и генетика. -1997.- Т.31, №4. с. 102 -114.

11. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы гентической инженерии. Молекулярное клонирование. М.; Мир, 1984 - 447 сс.

12. Мирошниченко Г.П., Волков P.JL, Борисюк Н.В. Структура геномов турнепса, арабидопсиса и их соматического гибрида // Биохимия.-1986.-Т.51,Вып.1. -с. 84-93.

13. Мухамедшин Э.К., Дидишвили Т.З., Кубанейшвили М.Г., Агробактериальная трансформация незрелых эмбрионов Arabidopsis thaliana L.// Генетика.-1992,- Т28, №12.- с. 110-121 .

14. Николаевская Т.С. Строение эпидермы цветковых чешуй некоторых видов злаков в сканирующем электронном микроскопе // Ботанический журнал,- 1989. -Т.74, №5.- с. 684-693.

15. Новое в клонировании ДНК. Методы.// Пер.с англ. Под ред. Д. Гловера -М.: Мир, 1989- 367 сс.

16. Паушева З.П. Практикум по цитологии растений. М.: Колос. 1974.247 сс.

17. Пирузян Э. С., Андрианов В.М. Плазмиды агробактерий и генетическая инженерия растений. М: Наука. 1985.-321сс.

18. Погребняк Н.Я., Шиша JI.H., Стороженко С.В., Юзефович Л.И., Диттрих Б., Глеба Ю.Ю. Генетическая трансформация Digitalis purpurea с130помощью Agrobacterium tumefaciens //Биополимеры и клетка.-1997.-Т. 13, №. 2,- с. 60-62.

19. Рачек Л.И., Стороженко С.В., Кучук Н.В. Получение и молекулярно-генетический анализ трансгенных растений гороха (Pisum sativum L.), содержащих Ds элемент кукурузы // Биополимеры и клетка.-1995.-Т.11, №. З.-с. 82-87.

20. Рейвн П., Эверт Р., Айкхорн С. Современная ботаника. М.: Мир, 1990 -344 сс.

21. Ревенкова Е.В., Краев А.С., Скрябин К. Г. Трансформация хлопчатника (Gossypium Hirsutum L.) при помощи супервирулентного штамма Agrobacterium tumefaciens А281 // Молекулярная биология.-1990.-Т24, Вып.4.-с. 1017-1023.

22. Шабарова З.А., Богданов А.А., Золотухин А.С. Химические основы генетической инженерии. М.: Издательство Московского университета. 1994. 267 сс.

23. Яковлев Г.П., Челобитько В.А. Ботаника. М: Высшая школа. 1990. -359 сс .

24. Almeida J., Rocheta M. and Galego L. Genetic control of flower shape in Antirrhinum majus //Development.- 1997.- Y.124, N.7.-P.1387-1392.

25. An G. Development of plant promoter expression vectors and their use for analysis of differential activity of nopaline synthase promoter in transformed tobacco cells //Plant Physiology.- 1986.- V.81, N.1.-P.86-91.

26. Angenent G. C., Busscher M., Franken J., Dons H. J. M. and Van T. A. J. Functional interaction between the homeotic genes fbpl and pMADSl during petunia floral organogenesis //Plant Cell.- 1995,- V.7, N.5.-P.507-516.131

27. Atkinson N. J., Ford L. B. V. and Newbury H. J. Regeneration of plants from Antirrhinum majus L. callus //Plant Cell Tissue & Organ Culture.- 1989.-V.17, N.1.-P.59-70.

28. Barnes W. M. The fidelity of Taq Polymerase catalyzing PCR is improved by an N-terminal deletion //Gene.- 1992.- V.112, N.1.-P.29-35.

29. Baulcombe D. C., Chapman S. and Cruz S. S. Jellyfish green fluorescent protein as a reporter for virus infections //Plant Journal.- 1995.- V.7, N.6.-P.1045-1053.

30. Bechtold N., Ellis J. and Pelletier G. In planta Agrobacterium mediated gene transfer by infiltration of adult Arabidopsis thaliana plants //Comptes132

31. Rendus de L'Academie des Sciences Serie III Sciences de la Vie.- 1993.- V.316, N.10.-P.1194-1199.

32. Becker D., Kemper E., Schell J. and Masterson R. New plant binary vectors with selectable markers located proximal to the left T-DNA border //Plant Molecular Biology.- 1992.- V.20, N.6.-P.1195-1197.

33. Bernhard W. R., Thoma S., Botella J. and Somerville C. R. Isolation of a complementary DNA clone for spinach lipid transfer protein and evidence that the protein is synthesized by the secretory pathway //Plant Physiology.- 1991.-V.95, N.l.-P.164-170.

34. Boevink P., Santa C. S., Hawes C., Harris N. and Oparka K. J. Virusmediated delivery of the green fluorescent protein to the endoplasmic reticulum of plant cells //Plant Journal.- 1996.- V.10, N.5.-P.935-941.

35. Bossinger G. and Smyth D. R. Initiation patterns of flower and floral organ development in Arabidopsis thaliana //Development.- 1996.- V.122, N. 4.-P. 1093-1102.

36. Bowman J. L., Alvare J., Weigel D., Meyerowitz E. M. and Smyth D. R. Control of flower development in Arabidopsis thaliana by APETALA1 and interacting genes //Development.- 1993.- V. 119, N. 3.-P.721-743.

37. Bowman J. L., Smyth D. R. and Meyerowitz E. M. Genes directing flower development in Arabidopsis //Plant Cell.- 1989.- V.l, N.1.-P.37-52.

38. Bowman J. L., Smyth D. R. and Meyerowitz E. M. Genetic interactions among floral homeotic genes of arabidopsis //Development.- 1991.- V.112, N.1.-P.1-20.

39. Bradley D., Carpenter R., Elliott R., Simon R., Romero J., Hantke S., Doyle S., Mooney M. and Luo D. Gene regulation of flowering //Philosophical Transactions of the Royal Society of London Biological Sciences.- 1993.-Y.339, N.1288.-P.193-197.

40. Carpenter R. and Coen E. S. Transposon induced chimeras show that floricaula, a meristem identity gene, acts non-autonomously between cell layers //Development.- 1995.- V. 121, N.1.-P.19-26.

41. Chien J. C. and Sussex I. M. Differential regulation of trichome formation on the adaxial and abaxial leaf surfaces by gibberellins and photoperiod in Arabidopsis thaliana L. //Plant Physiology Rockville.- 1996,- V. Ill, N.4.-P.1321-1328.

42. Christensen K. I. and Hansen H. V. SEM-studies of epidermal patterns of petals in the angiosperms //Opera Botanica.- 1998.- V.135, N.5 .-P.5-91.

43. Clark A. M. Plant epidermis-specific promoter: Potential for altering the plant-insect interaction //In Annual Meeting of the American Society of Plant Physiologists Portland, USA: Plant Physiology, Rockville.- 1994,- P. 160.

44. Clark A. M. and Bohnert H. J. Epidermis-specific transcripts. Nucleotide sequence of a full-length cDNA of EPI12, encoding a putative lipid transfer protein //Plant Physiology Rockville.- 1993.- V.103, N.2.-P.677-678.

45. Clark A. M., Bohnert H. J. and Verbeke J. A. Tissue specificity what makes an epidermis // Plant Physiology.- 1991.- V.105, N.3.- P.73.

46. Clark A. M., Verbeke J. A. and Bohnert H. J. Epidermis-specific gene expression in Pachyphytum //Plant Cell.- 1992.- V.4, N.10.-P.1189-1198.

47. Clark A. M., Verbeke J. A. and Bohnert H. J. Epidermis-specific genes //Plant Physiology.- 1992.- V.12. N.6.-P.90.134

48. Coen E., Carpenter R., Doyle S., Magrath R., Romero J., Elliott R., Goodrich J. and Bradley D. Homeotic genes controlling flower development in Antirrhinum //Journal of Cellular Biochemistry.- 1991.V.7, N.4.- P.33.

49. Coen E. S. Floral symmetry //EMBO Journal.- 1996.- V.15, N.24.-P.6777-6788.

50. Coen E. S. and Carpenter R. Transposable elements in Antirrhinum majus generators of genetic diversity//Trends in Genetics.- 1986.- V.2, N.11.-P.292-296.

51. Coen E. S. and Meyerowitz E. M. The war of the whorls genetic interactions controlling flower development //Nature.- 1991.- V.353, N.6339.-P.31-37.

52. Coen E. S. and Nugent J. M. Evolution of flowers and inflorescences //Development.- 1994,- V.15, N.2.-P.107-116.

53. Coen E. S., Nugent J. M., Luo D., Bradley D., Cubas P., Chadwick M., Copsey L. and Carpenter R. Evolution of floral symmetry //In Philosophical Transactions of the Royal Society of London : Biological Sciences.- 1995.1. P.35-38.

54. Davies B., Di Rosa A., Eneva T., Saedler H. and Sommer H. Alteration of tobacco floral organ identity by expression of combinations of Antirrhinum MADS-box genes //Plant Journal.- 1996,- V.10, N.4.-P.663-677.

55. Day C. D., Galgoci B. F. C. and Irish V. F. Genetic ablation of petal and stamen primordia to elucidate cell interactions during floral development //Development.- 1995.- V.121, N.9.-P.2887-2895.

56. De G. F., Brini M., Bastianutto C., Marsault R., Montero M., Pizzo P., Rossi R. and Rizzuto R. Targeting aequorin and green fluorescent protein to intracellular organelles //Gene.- 1996.- V.173, N.1.-P.113-117.

57. DeWitt N. D. and Sussman R. Immunocytological localisation of an epitope-tagged plasma membrane proton pump in phloem companion cells // Plant Cell.- 1995.- Y.7, N.5 .-P.2053-2067.135

58. Dhalluin K., Van G. J., De G. W., Jacobs M. and Ceulemans E. Culture of sugar beet Beta vulgaris in-vitro // HOGENBOOM- V. XII.- 1983.

59. Doty S. L., Yu M. C., Lundin J. I., Heath J. D. and Nester E. W. Mutational analysis of the input domain of the VirA protein of Agrobacterium tumefaciens //Journal of Bacteriology.- 1996.- V.178, N.4.-P.961-970.

60. Elowitz M. B., Surette M. G., Wolf P. E., Stock J. and Leibler S. Photoactivation turns green fluorescent protein red //Current Biology.- 1997.-V.7, N.10.-P.809-812.

61. Endress P. K. Evolution and floral diversity the phylogenetic surroundings of Arabidopsis and Antirrhinum //International Journal of Plant Sciences.- 1992.- V.8, N.2.- P. 106-122.

62. Eneva T. Etablierung eines Geniibertragungssystems fur Antirrhinum majus Koln.- 1995.-130 PP.

63. Eneva T., Efremova N., Heidmann I. and Schwarz-Sommer Z. Agrobacterian mediated gene transfer into Antirrhinum majus // Report to the Scientific Advisory Board.Max-Planck-Institut fur Ziichtungsforschung // Koln Vogelsang.- 1995.-P150.

64. Fedoroff N. Comparison of host strains for cloning maize DNA into bacteriophage Lambda//Plant Mol. Biol. Reporter.- 1983.- V.l, N.1.-P.27-29.

65. Fleming A. J., Manzara T., Gruissem W. and Kuhlemeier C. Fluorescent imaging of GUS activity and RT-PCR analysis of gene expression in the shoot apical meristem //Plant Journal.- 1996.- V.10, N.4.-P.745-754.

66. Fortin C., Nester E. W. and Dion P. Growth inhibition and loss of virulence in cultures of Agrobacterium tumefaciens treated with acetosyringone //Journal of Bacteriology.- 1992.- V.174, N.17.-P.5676-5685.136

67. Frischauf A. M., Lehrach H., Poutska A. and Murray N. Lambda replacement vectors carrying polylinker sequensis //J. Mol. Biol.- 1983.-V.170, N.6.-P.827-842.

68. Gamborg O. L. and Phillips G. C. Basal media for plant cell and tissue culture //In Plant cell, tissue and organ culture: Fundamental methods. Berlin, Germany: Springer-Verlag:- 1995. -P.301-325.

69. Gamborg O. L. and Phillips G. C. Sterile techniques //In Plant cell, tissue and organ culture: Fundamental methods. Berlin Germany: Springer-Verlag.-1996. -P.35-42.

70. Geisler M., Yang M. and Sack F. D. Divergent regulation of stomatal initiation and patterning in organ and suborgan regions of the Arabidopsis mutants too many mouths and four lips //Planta.- 1998.- V. 205, N.4.-P.522-530.

71. Glover B. J. and Martin C. The role of petal cell shape and pigmentation in pollination success in Antirrhinum majus //Heredity.- 1998.- V.80, N.6.-P.778-784.

72. Glover B. J., Perez R. M. and Martin C. Development of several epidermal cell types can be specified by the same MYB-related plant transcription factor //Development.- 1998.- V.125, N.17.-P.3497-3508.

73. Godwin I., Todd G„ Ford L. B. and Newbury H. J. The effects of acetosyringone and pH on Agrobacterium mediated transformation vary according to plant species //Plant Cell Reports.- 1991.- V.9, N.12.-P.671-675.

74. Goffreda J. C., Symkowiak E. J., Sussex I. M. and Mutschler M. A. Chimeric tomato plants show that aphid resistance and triacylglucose production are epidermal autonomous characters //Plant Cell.- 1990.- V.2, N.7.-P.643-650.

75. Gonzalez B. M. E., Tapia J., Rodriguez N. and Iriondo J. M. Micropropagation of commercial and wild genotypes of snapdragon //Journal of Horticultural Science.- 1996.- V.71, N.1.-P.11-15.137

76. Goodrich W. J., Almeida J., Robbins T. P., Carpenter R. and Coen E. S. Molecular cloning and characterization of delila a gene regulating the anthocyanin biosynthesis pathway in Antirrhinum majus //Journal of Cellular Biochemistry.- 1991.- P. 114.

77. Goto K., and Meyerowitz E. M. Function and regulation of the Arabidopsis floral homeotic gene PISTILLATA //Genes & Development. -1994,- V.8, N.13.-P.1548-1560.

78. Gowda J. V. N. Genotypic and phenotypic correlations in Antirrhinum (Antirrhinum majus L.) //Crop Research.- 1997.- V.13, N.2.-P.409-414.

79. Hagemann R. and Hagemann M. Transposable elements in higher plants. //Biologisches Zentralblatt.- 1987.- V.106, N.5.-P.505-531.

80. Halfter U., Ali, N., Stockhaus J., Ren L. and Chua N. H. Ectopic expression of a single homeotic gene, the Petunia gene green petal, is sufficient to convert sepals to petaloid organs //EMBO Journal.- 1994.- V.13, N.6.-P. 1443-1449.

81. Han D. C., Chen C. Y., Chen Y. F. and Winans S. C. Altered-function mutations of the transcriptional regulatory gene VirG of Agrobacterium tumefaciens //Journal of Bacteriology.- 1992.- V.174, N.21.-P.7040-7043.

82. Hantke S. S., Carpenter R. and Coen E. S. Expression of floricaula in single layers of periclinal chimeras activates downstream homeotic genes in all layers of floral meristems //Development.- 1995.- V. 121, N.1.-P.27-35.

83. Harte C., Lennartz G. and Schwenzer R. N. Time correlations and gene action in growth and differentiation of regeneration callus on stem explants of Antirrhinum majus L. and some mutants //Biologisches Zentralblatt.- 1991,-V.110, N.4.-P.263-283.138

84. Haseloff J. and Amos B. GFP in plants //Trends in Genetics.- 1995.- V. 11, N.8.-P.328-329.

85. Heidmann I., Efremova N., Saedler H. and Schwarz- Sommer Z. A protocol for transformation and regeneration of Antirrhinum majus //Plant Journal.- 1998.- V.13, N.5.-P.723-728.

86. Hicks G. S. and Sussex I. M. Organ regeneranion in sterile culture after median bisection of the flower primordia of Nicotiana tabacum //Bot. Gaz.-1971.- V.132,N.4.-P.350-365.

87. Hill J. and Lord E. Floral development in Arabidopsis thaliana, a comparison of the wild type and the homeotic pistilata mutant //Can. J. Bot.-1989,- V.67, N.2.-P.2922-2936.

88. Holder N. Positional information and patern formation in plant morphogenesis and a mechanism for the involvement of plant hormones //J. Theor. Biol.- 1979,- V.77, N.6.-P. 195-212.

89. Holford P., Hernandez N. and Newbury H. J. Factors influencing the efficiency of T-DNA transfer during co-cultivation of Antirrhinum majus with Agrobacterium tumefaciens //Plant Cell Reports.- 1992.- V.ll, N.4.-P.196-199.

90. Holton T. A. Modification of flower colour via manipulation of P450 gene expression in transgenic plants //Drug Metabolism & Drug Interactions.-1995.- V.12, N.34.-P.359-368.

91. Holton T. A. and Cornish E. C. Genetics and biochemistry of anthocyanin biosynthesis //Plant Cell.- 1995,- V.7, N.7.-P.1071-1083.

92. Holton T. A. and Tanaka Y. Blue roses a pigment of our imagination? //Trends in Biotechnology.- 1994.- V.12, N.2.-P.40-42.

93. Hu W. and Cheng C. L. Expression of Aequorea green fluorescent protein in plant cells //FEBS Letters.- 1995,- V.369, N.2-3.-P.331-334.

94. Huala E. and Sussex I. M. Determination and cell interactions in reproductive meristems //Plant Cell.- 1993.- V.5, N.10.-P.1157-1165.

95. Huijser P., Klein J., Loennig W. E., Meijer H., Saedler H. and Sommer, H. Bracteomania an inflorescence anomaly is caused by the loss of function of the MADS-Box gene squamosa in Antirrhinum majus //EMBO Journal.- 1992.-V.ll, N.4.-P. 1239-1249.

96. Irish V. F. and Yamamoto Y. T. Conservation of floral homeotic gene function between Arabidopsis and Antirrhinum //Plant Cell.- 1995.- V.7, N.10.-P. 1635-1644.

97. Itaya A., Woo Y. M., Masuta C., Bao Y., Nelson R. S. and Ding B. Developmental regulation of intercellular protein trafficking through plasmodesmata in tobacco leaf epidermis //Plant Physiology.- 1998.- V.118, N.2.-P.373-385.

98. Jack T., Brockman L. L. and Meyerowitz E. M. The homeotic gene Apetala3 of Arabidopsis thaliana encodes a MADS-box and is expressed in petals and stamens //Cell.- 1992.- V.68, N.4.-P.683-697.

99. Jack T., Fox G. L. and Meyerowitz E. M. Arabidopsis homeotic gene APETALA3 ectopic expression: Transcriptional and posttranscriptional regulation determine floral organ identity //Cell.- 1994,- V.76, N.4.-P.703-716.140

100. Jackson D. P., Culianez M. F., Prescott A., Roberts K. and Martin C. Expression patterns of structural and regulatory genes in Antirrhinum flowers //Journal of Cellular Biochemistry.- 1991.- V.6, N.1.-P.132.

101. Jacob F., Jager E. and Ohmann E. Botanik // Jena: VEB Gustav Fischer Verlag.- 1987,- P.200-220.

102. James D. W., Lim E., Keller J., Plooy I., Ralston E., and Dooner H. K. Directed tagging of the Arabidopsis FATTY ACID ELONGATION 1 (FAE1) gene with the maize transposon Activator //Plant Cell.- 1995.- V.7, N.3.-P.309-319.

103. Jefferson R. A., Kavanagh T. A. and Bevan M. W. GUS fusions: Beta-glucuronidase as a sensitive and versatile gene fusion marker in higher plants //EMBO.- 1987.- V.6, N.13.-P.3901-3908.

104. Jin S., Komari T., Gordon M. P. and Nester E. W. Genes responsible for the supervirulence phenotype of Agrobacterium tumefaciens A281 //Journal of Bacteriology.- 1987.- V.169, N.10.-P.4417-4425.

105. Kain S. R., Adams M. A., Kondepudi A., Yang T. T., Ward W. W. and Kitts P. Green fluorescent protein as a reporter of gene expression and protein localization//Biotechniques.- 1995.- V.19, N.4.-P.650-655.

106. Katavic V., Haughn G. W., Reed D., Martin M. and Kunst L. In planta transformation of Arabidopsis thaliana //Molecular & General Genetics.-1994,- V.245, N.3.-P.363-370.

107. Koetsier P., Schorr J. and Doerfler W. A rapid optimized protocol for downward alkaline Southern blotting of DNA //BioTechniques.- 1993.- V.15, N.2.-P.260-262.

108. Kohler R. H„ Zipfel W. R., Webb W. W. and Hanson M. R. The green fluorescent protein as a marker to visualize plant mitochondria in vivo //Plant Journal.- 1997.- V.ll, N.3.-P.613-621.

109. Koncz C., Langridge W. H. R., Olsson O., Schell J. and Szalay A. A. Bacterial and firefly Luciferase genes in transgenic plants advantages anddisadvantages of a reporter gene //Developmental Genetics.- 1990.- V.ll, N.3.-P.224-232.

110. Koncz C. and Schell J. The Promoter of T-L DNA gene 5 controls the tissue-specific expression of chimeric genes carried by a novel type of Agrobacterium binary vector //Molecular & General Genetics.- 1986.- V.204, N.3.-P.383-396.

111. Kragler F., Monzer J., Shash K., Xoconostle C. B. and Lucas W. J. Cell-to-cell transport of proteins: Requirement for unfolding and characterization of binding to a putative plasmodesmal receptor //Plant Journal.- 1998.- V.15, N.3.-P.367-381.

112. Krizek B. A. and Meyerowitz E. M. The Arabidopsis homeotic gene APETALA3 and PISTILLATA are sufficient to provide the B class organ identity function //Development.- 1996.- V. 122, N.1.-P.11-22.

113. Kunz C., Schob H., Stam M„ Kooter J. M. and Meins F. Developmentally regulated silencing and reactivation of tobacco chitinase transgene expression //Plant Journal.- 1996.- V.10, N.3.-P.437-450.

114. Larkin J. C., Young N., Prigge M. and Marks M. D. The control of trichome spacing and number in Arabidopsis //Development.- 1996.- V. 122, N.3.-P.997-1005.

115. Litvay J. D., Verma D. C. and Johnson M. A. Influence of a loblolly pine Pinus taeda culture medium and its components on growth and somatic embryogenesis of the wild carrot Daucus carota //Plant Cell Reports.- 1985.-V.4, N.6.-P.325-328.142

116. Liu C. N., Li X. Q. and Gelvin S. B. Multiple copies of VirG enhance the transient transformation of celery, carrot and rice tissues by Agrobacterium tumefaciens //Plant Molecular Biology.- 1992,- V.20, N.6.-P.1071-1087.

117. Liu C. N., Steck T. R., Habeck L. L., Meyer, J. A. and Gelvin S. B. Multiple copies of VirG allow induction of Agrobacterium tumefaciens Vir genes and T-DNA. //Molecular Plant-Microbe Interactions.- 1993.- V.6, N.I.-P.144-156.

118. Lolle S. J., Cheung A. Y. and Sussex I. M. Fiddlehead an Arabidopsis mutant constitutively expressing an organ fusion program that involves interactions between epidermal cells //Developmental Biology.- 1992.- V.152, N.2.-P.383-392.

119. Lorow D. and lessee J. Comparison of strains for cloning DNA into bacteriophage Lambda //Focus.- 1990.- V.12, N.1.-P.19.

120. Lucas W. J. Plasmodesmata and macromolecular trafficking: New perspectives for plant biology //In Annual Meeting of the Society for Experimental Biology St. Andrews, Scotland, UK: Journal of Experimental Botany.- 1995,- P.59.

121. Lucas W. J. Plasmodesmata: Intercellular channels for macromolecular transport in plants //Current Opinion in Cell Biology.- 1995.- V.7, N.5.-P.673-680.

122. Lucas W. J., Bouche P. S., Jackson D. P., Nguyen L., Baker L., Ding B. and Hake S. Selective trafficking of KNOTTED 1 homeodomain protein and its mRNA through plasmodesmata //Science.- 1995.- V.270, N.5244.-P.1980-1983.

123. Maiti D., List A. and Dobres M. S. Transcripts for a lectin-like gene accumulate in the epidermis but not the protodermis of the Pea shoot apex //Planta.- 1993,- V. 190, N.2.-P.241-246.

124. Manianis T., Fritsch E. E. and Sambrook J. Molecular cloning

125. A laboratory manual : Cold Spring Hardor Laboratory.- 1989. -P. 250-300.143

126. Martin C., Carpenter R., Sommer H., Saedler H. and Coen E. S. Molecular analysis of instability in flower pigmentation of Antirrhinum majus following isolation of the Pallida locus by transposon tagging //EMBO Journal.-1985.- V.4, N.7.-P.1625-1630.

127. Martin C. and Gerats T. Control of pigment biosynthesis genes during petal development//Plant Cell.- 1993.- V.5, N.10.-P.1253-1264.

128. Matzke M. A. and Matzke A. J. M. Homology-dependent gene silencing in transgenic plants: What does it really tell us? //Trends in Genetics.- 1995.-V.ll, N.1.-P.1-3.

129. McLean B. G., Greene E. A. and Zambryski P. C. Mutants of Agrobacterium VirA that activate vir gene expression in the absence of the inducer acetosyringone //Journal of Biological Chemistry.- 1994.- V.269, N.4.-P.2645-2651.

130. Meyerowitz E. M. and Pruitt R. E. Arabidopsis thaliana and plant molecular genetics //Science.- 1985.- V. 229, N.4719.-P.1214-1218.

131. Murashige T., and Skoog F. A revised medium for rapid growth and bio-assay with tobacco tissue cultures //Physiologia Plantarum.- 1962,- Y.15, N.6.-P.473-497.

132. Neuhuber F., Park Y. D., Matzke A. J. M. and Matzke M. A. Susceptibility of transgene loci to homology-dependent gene silencing //Molecular & General Genetics.- 1994.- V.244, N.3.-P.230-241.

133. Newbury H. J. Multiplication of Antirrhinum majus L. by shoot-tip culture //Plant Cell Tissue & Organ Culture.- 1986.- V.7, N.1.-P.39-42.

134. Niedz R. P., Sussman M. R. and Satterlee J. S. Green fluorescent protein: An in vivo reporter of plant gene expression //Plant Cell Reports.- 1995.-V.14, N.7.-P.403-406.144

135. Oparka K. J., Roberts A. G., Santa C. S., Boevink P., Prior D. A. and Smallcombe A. Using GFP to study virus invasion and spread in plant tissues //Nature.- 1997.- V. 388, N.6640.-P.401-402.

136. Ormo M., Cubitt A. B., Kallio K., Gross L. A., Tsien R. Y. and Remington S. J. Crystal structure of the Aequorea victoria green fluorescent protein //Science.- 1996.- V. 273, N.5280.-P.1392-1395.

137. Pang P. P. and Meyerowitz E. M. Arabidopsis thaliana a model system for plant molecular biology //Biotechnology.- 1987.- V. 5, N.ll.-P.l 177-1181.

138. Pang S. Z., Deboer D. L., Wan Y., Ye G., Layton J. G., Neher M. K., Armstrong C. L., Fry J. E., Hinchee M. A. and Fromm M. E. An improved green fluorescent protein gene as a vital marker in plants //Plant Physiology.-1996.- V.112, N.3.-P.893-900.

139. Pazour G. J., Ta C. N. and Das A. Constitutive mutations of Agrobacterium tumefaciens transcriptional activator VirG //Journal of Bacteriology.- 1992.- Y.174, N.12.-P.4169-4174.

140. Pazour G. J., Ta C. N. and Das A. Mutants of Agrobacterium tumefaciens with elevated Vir gene expression //Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America.- 1991.- V.88, N.16.-P.6941-6945.

141. Perbal M. C., Haughn G., Saedler H. and Schwarz S. Z. Non-cell-autonomous function of the Antirrhinum floral homeotic proteins DEFICIENS145and GLOBOSA is exerted by their polar cell-to-cell trafficking //Development.- 1996.- V.122, N.11.-P.3433-3441.

142. Prasher D. C. Using GFP to see the light //Trends in Genetics.- 1995.-V.ll, N.8.-P.320-323.

143. Prasher D. C., Eckenrode V. K., Ward W. W., Prendergast F. G. and Cormier M. J. Primary structure of the aequorea victoria green fluorescent protein //Gene.- 1992.- V.lll, N.2.-P.229-233.

144. Raman S. The trichomes on the corolla of the Scrophulariaceae V. Tribe Antirrhineae Chavannes //Beitraege zur Biologie der Pflanzen.- 1990.- Y.64, N.3.-P.357-376.

145. Reid B. G. and Flynn G. C. Chromophore formation in green fluorescent protein //Biochemistry.- 1997.- V.36, N.22.-P.6786-6791.

146. Rizzuto R., Brini M., De G. F., Rossi R., Heim R., Tsien R. Y. and Pozzan T. Double labelling of subcellular structures with organelle-targeted GFP mutants in vivo //Current Biology.- 1996.- V.6, N.2.-P.183-188.

147. Rogers S. O., and Bendich A. J. Extraction of DNA from milligram amounts of fresh herbarium and mummified plant tissues //Plant Molecular Biology.- 1985.- V.5, N.2.-P.69-76.

148. Rouwendal G. J. A., Mendes O., Wolbert E. J. H. and De B. A. D. Enhanced expression in tobacco of the gene encoding green fluorescent protein by modification of its codon usage //Plant Molecular Biology.- 1997.- V.33, N.6.-P.989-999.

149. Saedler H. and Huijser P. Molecular biology of flower development in Antirrhinum majus (snapdragon) //Gene.- 1993.- V.135, N.1-2.-P.239-243.

150. Samach A., Kohalmi S. E„ Motte P., Datta R. and Haughn G. W. Divergence of function and regulation of class B floral organ identity genes //Plant Cell.- 1997,- V.9, N.4.-P.559-570.

151. Sangwan R. S. and Harada H. Chemical regulation of callus growth, organogenesis, plant regeneration and somatic embriogenesis in Antirrhinum majus tissue and cell caltures //Jornal of Experimental Botany.- 1975.- V.26, N.95.-P.868 881.

152. Sangwan R. S. and Sangwan J. S. Snapdragon. //In Handbook of Plant Cell Culture- .- 1976 -P.745-762.

153. Satina S. Periclinal chimeras in Datura in relation to development and structure (A) of the style and stigma (B) of calyx and corolla //Am. J. Bot.-1944. v.31, N.3.-P.493-502.

154. Satina S., Blakeslee A. and Avery A. Demonstration of the Three germ layers in the shoot apex of Datura by means of unduced polyploidy in periclinal chimeras //Am. J. Bot.- 1940.- V.27, N.8.-P.895-905.

155. Schwarz S. Z., Huijser P., Nacken W., Saedler H. and Sommer H. Genetic control of flower development by homeotic genes in Antirrhinum majus //Science.- 1990,- V.250, N.4983.-P.931-936.

156. Senior I., Holford P., Cooley R. N. and Newbury H. J. Transformation of Antirrhinum majus using Agrobacterium rhizogenes //Journal of Experimental Botany.- 1995.- V.46, N.290.-P. 1233-1239.

157. Sessions A., Yanofsky M. F. and Weigel D. Patterning the floral meristem //Seminars in Cell & Developmental Biology.- 1998.- V.9, N.2.-P.221-226.

158. Sheen J., Hwang S., Niwa Y., Kobayashi H. and Galbraith D. W. Green-fluorescent protein as a new vital marker in plant cells //Plant Journal.- 1995.-V.8, N.5.-P.777-784.

159. Sinha N. Organ and cell fusion in the adherent 1 mutant in maize //International Journal of Plant Sciences.- 1998.- V.159, N.5.-P.702-715.

160. Smyth D. R., Alvarez J., Yu X. H. and Guli C. L. Mutations affecting inflorescence development in Arabidopsis thaliana //Journal of Cellular Biochemistry.- 1991.-V.12, N.3.- P.140.

161. Smyth D. R., Bowman J. L. and Meyerowitz E. M. Early flower development in Arabidopsis //Plant Cell.- 1990.- V.2, N.8.-P.755-768.

162. Sommer H., Bonas U., Krebbers E., Piotrowiak R., Upadhyaya K. and Saedler H. Structure of the Nivea locus of Antirrhinum majus and characterization of 3 transposable elements Taml, Tam2, Tam3 //In Symposium On Plant Genetics Held.- 1985.- P.223.148

163. Sommer H., Carpenter R., Harrison B. J. and Saedler H. The transposable element Tam-3 of Antirrhinum majus generates a novel type of sequence alterations upon excision //Molecular & General Genetics.- 1985.-V.199, N.2.-P.225-231.

164. Stachel S. E. and Nester E. W. The genetic and transcriptional organization of the Vir region of the A6 Ti plasmid of Agrobacterium tumefaciens //EMBO Journal.- 1986,- V.5, N.7.-P.1445-1454.

165. Sterk P., Booij H., Schellekens G. A., Van K. A. and De V. S. Cell-specific expression of the carrot Ep2 lipid transfer protein gene //Plant Cell.-1991.- V.3, N.9.-P.907-922.

166. Stubbe H. Genetik und Zytologie von Antirrhinum majus L. sect. Antirrhinum//Kulturpflanze.- 1966.- V.12, N.4 .-P.189-213.

167. Stubbe H. Neue Mutanten von Antirrhinum majus L. .- 1974.- , 191. Sussex, I. M. Developmental programming of the shoot meristem //Cell.-1989.- V.56, N.2.-P.225-230.

168. Szymkowiak E. J. and Sussex I. M. The internal meristem layer L3 determines floral meristem size and carpal number in tomato periclinal chimeras //Plant Cell.- 1992.- V.4, N.9.-P.1089-1100.

169. Szymkowiak E. J. and Sussex I. M. What chimeras can tell us about plant development //Annual Review of Plant Physiology and Plant Molecular Biology.- 1993.-P.47.

170. Szymkowiak G. and Sussex I. The study of cell layer interactions using graft chimeras of Lycopersicon esculentum //In Symposium On the Molecular Basis Of Plant Development Held At the 17th Annual: Journal of Cellular Biochemistry.- 1988.- P. 167.149

171. Thoma S., Hecht, U., Kippers A., Botella J., De V. S. and Somerville C. Tissue-specific expression of a gene encoding a cell wall-localized lipid transfer protein from Arabidopsis //Plant Physiology.- 1994.- V.105, N.1.-P.35-45.

172. Van de Krol S., Van Leeuven W., De Ruijter N., Spoelstra P., and Verhes, J. Sensible application of reporter genes in plants //T. G. S. EPS, ed. Wageningen.- 1999.- P.6-47.

173. Veluthambi K., Ream W. and Gelvin S. B. Virulence genes borders and overdrive generate single-stranded T-DNA molecules from the A6 Ti plasmid of Agrobacterium tumefaciens //Journal of Bacteriology.- 1988.- V.170, N.4.-P.1523-1532.

174. Wardlaw C. W. The floral meristem as a reaction sistem //Proc. Roy. So. Edin.- 1957.- V.66, N.2 .-P.394-408.

175. Weigel D. and Meyerowitz E. M. Genetic hierarchy controlling flower development //In Symposium of the Society for Developmental Biology Seattle, Waschington, USA.- 1992,- P. 1992.

176. Yephremov A., Scholisch K. and Wisman E. Molecular mechanism of postgenital fusion and de-differentiation of carpel epidermis //Report to the150

177. Scientific Advisory Board. Max-Planck-Institut für Züchtungsforschung KölnVogelsang.- 1997.- P.114-116.

178. Zachgo S., Loennig W. E., Saedler H., Sommer H. and Schwarz S. Z. Characterisation of the temperature-sensitive deficiens mutant DefAlOl //Journal of Cellular Biochemistry. V.3, N.4.- 1993,- P. 17.

179. Zylka M. J. and Schnapp B. J. Optimized filter set and viewing conditions for the S65T mutant of GFP in living cells //Biotechniques.- 1996.-V.21, N.2.-P. 224-226.151