Экспериментальное обоснование способа контрастирования структур стекловидного тела с использованием суспензии "Витреоконтраст" тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.07, кандидат медицинских наук Беликова, Светлана Валерьевна

• Беликова, Светлана Валерьевна
• кандидат медицинских наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Беликова, Светлана Валерьевна

Список сокращений

Введение

ГЛАВА 1. Обзор литературы

1.2. Топографическая анатомия стекловидного тела, его роль в нормальном функционировании глаза и развитии патологических процессов

1.2. Хромовитрэктомия

1.3 Характеристика интравитреальных красителей для визуализации 21 структур стекловидного тела и сетчатки

Резюме

ГЛАВА 2. Разработка суспензии для контрастирования структур ^ стекловидного тела

2.1. Разработка композиций для контрастирования структур СТ

Материалы и методы

2.1.1. Разработка способа препарирования СТ

2.1.2. Исследование способности к контрастированию (степени 38 контрастирования) неорганических соединений на основе сульфата бария с различной дисперсностью частиц и органических соединений с низкой плотностью.

2.1.3. Результаты

2.2 Изолированное контрастирование и выделение структур СТ (каналов, цистерн и их анастомозов).

Материалы и методы

2.2.1. Морфологические исследования ^

2.2.2. Результаты

2.3. Сравнительное контрастирование структур стекловидного 55 тела суспензией «Витреоконтраст» и суспензиями для контрастирования, применяемыми в витреоретинальной хирургии («кеналог-40»)

Материалы и методы ^

2.1.5. Результаты

2.4. Обсуждение результатов ^ Резюме ^

ГЛАВА 3. Клинико-морфологическое исследование влияния суспензии «Витреоконтраст» на ткани глаза кролика

3.1. Исследование влияния суспензии «Витреоконтраст» ^ на структуры переднего отрезка глаза кролика

3.1.1. Методика экспериментальных исследований

3.1.2. Результаты биомикроскопии и офтальмоскопии

3.1.3. Результаты световой микроскопии

3.2. Исследование влияния суспензии «Витреоконтраст» 72 на структуры заднего отрезка глаза кролика

3.2.1. Методика экспериментальных исследован

3.2.2. Результаты биомикроскопии, офтальмоскопии и ЭРГ

3.2.3. Результаты световой микроскопии

Резюме

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Экспериментальное обоснование способа контрастирования структур стекловидного тела с использованием суспензии "Витреоконтраст"»

Разработка новых хирургических подходов и методов лечения витреоретинальной патологии невозможна без знаний анатомии стекловидного тела (СТ) и его роли в нормальном функционировании глаза и развитии патологических процессов. Результаты исследований отечественных и зарубежных ученых не только расширили представления о структуре СТ, но и поставили под сомнение справедливость некоторых современных основополагающих концепций, характеризующих структуру и свойства СТ у человека [3,23,18,179]. Однако анатомический субстрат витреальных изменений и причинно-следственные связи между состоянием СТ и патологией прилегающих структур изучены недостаточно.

Одной из наиболее трудных задач для хирурга и одной из основных составляющих успеха хирургического лечения является безопасное удаление прозрачного, кажущегося бесструктурным стекловидного тела, и структур витреоретинального интерфейса: полупрозрачной ВПМ, эпиретинальных мембран в ходе субтотальной витрэктомии [209]. С целью интраоперационной визуализации стекловидного тела (СТ), контрастирования его нативных структур и патологически измененных участков используют биологические и синтетические красители.

Пиком развития направления интравитреального введения красителей явилось возникновение в 2000 году нового хирургического подхода -хромовитрэктомии, суть которого заключается в интраоперационном введении красителей для контрастирования структур заднего отрезка глаза. Данная методика обеспечивает лучшую визуализацию СТ и витреоретинального интерфейса во время операции, более тщательное удаление кортикальных слоев СТ, облегчает «пилинг» ВПМ и эпиретинальных мембран, снижая риск ятрогенного повреждения сетчатки.

На сегодняшний день в витреоретинальной хирургии для интраоперационной визуализации структур CT и витреоретинального интерфейса используют три основные красителя : индоцианин зеленый ((ИЦЗ) indocyanine green- ICG; Daiichi Sankyo, Tokyo, Japan), трипановый синий ((ТС) trypan blue -TB; Ophthalmos, Sa~o Paulo, Brazil), триамцинолона ацетонид ((ТА) triamcinolone acetonide - ТА; Bristol-Myers Squibb. USA). ИЦЗ впервые был использован для контрастирования ВПМ. Точкой приложения для ТС являются эпиретинальные мембраны. ТА используют для визуализации волокон СТ.

Следует отметить, что ИЦЗ и ТС неизбирательно окрашивают внутриглазные структуры, и, тем самым, затрудняют идентификацию СТ. Контрастирование CT с помощью ТА наиболее эффективно, так как благодаря кристаллической структуре частицы вещества проникают между волокнами CT, осаждаются на них, при этом прозрачная структура CT становится видимой [158].

Однако результаты экспериментальных и клинических исследований данных красителей свидетельствуют об их токсическом воздействии на сетчатку. ИЦЗ способен вызывать атрофию пигментного эпителия сетчатки ((ПЭС) retinal pigment epithelium - RPE) и повреждение фоторецепторов сетчатки [87,145,175,202]. ТС также оказывает цитотоксическое действие, вызывая апоптоз клеток ПЭС. Результаты экспериментальных и клинических исследований токсического действия ТА противоречивы. ТА оказывает цитотоксическое, катарактогенное действие, способен повышать внутриглазное давление, вызывать развитие эндофтальмита [135,143, 147,148,152,153,173,207,208].

Были предложены альтернативные красители для хромовитрэктомии: бриллиантовый синий (brilliant blue (BriB; Merck, Darmstadt, Germany)), бромофенол синий (bromophenol blue (BroB; Sigma-Aldrich, Munich, Germany)), конго красный (congo red (CR; Merck)), светлый зеленый (light green (LG; Merck)), индиго кармин (indigo carmine (1С; Merck)), эванс синий (evans blue (EB; Merck)) и другие; и число их постоянно увеличивается. Однако, по литературным данным, вышеперечисленные препараты обладают рядом побочных эффектов, и как результат, остается немало противоречий относительно потенциальной токсичности и безопасности использования данных веществ [71,92,93,116,150,151,152,153,163].

Таким образом, несмотря на большой накопленный в этой сфере опыт, ряд вопросов, связанных со свойствами интавитреальных красителей, с взаимодействием их с окружающими анатомическими структурами, побочными действиями данных веществ, остаются нерешенными до сих пор. Существует необходимость в разработке специализированного контрастного вещества (контрастной композиции) для хромовитрэктомии, которое отвечало бы всем требованиям для интравитреальных красителей, не обладало токсическими свойствами, обеспечивало изолированное контрастирование структур заднего отрезка глаза, что позволило бы выполнять витреоретинальные хирургические вмешательства максимально эффективно и наиболее безопасно. Кроме того, для повышения эффективности хирургического лечения необходимо совершенствование знаний об анатомо-топографических особенностях и взаимоотношениях СТ и сетчатки.

Цель настоящего исследования - разработать способ контрастирования структур стекловидного тела с использованием суспензии сульфата бария.

В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:

1. Провести в эксперименте ex vivo сравнительный анализ способности к контрастированию структур стекловидного тела суспензий на основе сульфата бария и метилцеллюлозы с различной дисперсностью частиц.

2. Разработать способ препарирования стекловидного тела с использованием композиции «Витреоконтраст», позволяющий изучать и анализировать анатомо-топографические особенности строения каждой из интравитреальных структур, взаимоотношения стекловидного тела и сетчатки.

3. Провести сравнительное изучение контрастирования структур стекловидного тела композицией «Витреоконтраст» и препаратом «Кеналог-40». 4.0ценить безопасность применения композиции «Витреоконтраст» при интраокулярном введении в эксперименте in vivo.

Научная новизна

Впервые разработана композиция для контрастирования структур стекловидного тела и витреоретинального интерфейса на основе сульфата бария, названная «Витреоконтраст», которая, за счет размера частиц 1-5 микрон и их удельного веса 4,4 г/см3, обуславливающих способность к высокой механической адгезии, позволяет изолированно контрастировать все интравитреальные структуры, без изменения степени их контрастирования с течением времени.

Предложенный способ препарирования трупных донорских глаз с сохранением взаиморасположения интравитреальных структур и использованием суспензии «Витреоконтраст» позволил выявить новый анатомический вариант расположения интравитреальных каналов, при котором оптико-цилиарный и лентико-макулярный каналы занимают центральное положение, проходят в едином кожухе и в верхней трети стекловидного тела

разделяются, оканчиваясь в ретроцилиарном и ретролентальном пространствах соответственно.

Впервые обнаружено, что при возникновении дефекта кортикальных слоев стекловидного тела интравитреальные структуры без нарушения анатомической целостности меняют свое расположение, образуя грыжу стекловидоного тела.

В эксперименте in vivo доказано, что суспензия «Витреоконтраст» не оказывает токсического влияния на структуры глазного яблока при интраокулярном введении.

Практическая значимость

Доказано, что в ходе препаровки стекловидного тела с использованием ультрадисперсной суспензии «Витреоконтраст», при оставлении интактными переднего отрезка глаза и участка склеры в заднем полюсе диаметром 10-11 мм, сохраняется взаиморасположение и целостность структур стекловидного тела, благодаря чему становится возможным их изолированное контрастирование с последующим выделением и изучением на микроскопическом уровне.

Разработанная композиция «Витреоконтраст» в отличие от суспензии «Кеналог-40» обладает более высокой адгезией и позволяет изолированно контрастировать каналы, цистерны стекловидного тела и их анастомозы.

Основные положения, выносимые на защиту

Созданная на основе сульфата бария композиция для контрастирования интравитреальных структур, названная «Витреоконтраст», позволяет изолированно контрастировать все оптически полупрозрачные структуры стекловидного тела и витреоретинального интерфейса.

Разработанный способ препарирования стекловидного тела с введением суспензии «Витреоконтраст» позволил выявить новые анатомо-топографические особенности его строения.

Отсутствие клинико-морфологических изменений со стороны оболочек и внутренних сред глаза подтверждает безопасность интраокулярного введения суспензии «Витреоконтраст» в условиях эксперимента in vivo.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены и обсуждены на IV Всероссийской научной конференции молодых ученых с участием иностранных специалистов « Актуальные проблемы офтальмологии» (г. Москва, 30 июня 2009 г.), на VIII научно-практической конференции «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии-2010» (г. Москва, 18 марта 2010 г.), на научно-клинической конференции ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздравсоцразвития России (г. Москва, 5 февраля 2010 г.), на IX съезде офтальмологов России (г. Москва, 17 июня 2010 г.), на 10ш EVRS Congress- Vascular Pathologies (Испания, г. Севилья 25 сентября 2010 г.), на IX научно-практической конференции с международным участием «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии-2011» (г. Москва, 11 марта 2011 г.), на11th EURETINA Congress - 2011 (Великобритания, г. Лондон, 27 мая 2011 г.), на Joint Congress of SOE/AAO 2011 ( Швейцария, г. Женева, 7 июня 2011 г.), на IX Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Федоровские чтения-2011» (г. Москва, 23 июня 2011 г.), на научно-практической конференции с международным участием «Современные технологии лечения витреоретинальной патологии-2012» (г. Москва, 22 марта 2012 г.).

Формы внедрения

Результаты проведенных исследований использованы при разработке патента на изобретении, изложены в докладах на научно-практических конференциях, публикациях, кандидатской диссертации.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 10 научных работ, из них 3 в журналах рецензируемых ВАК РФ. Имеется один патент РФ на изобретение № 2441629 от 10.02.2012.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 119 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, двух глав собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 47 рисунками, содержит одну таблицу. Указатель литературы включает 211 авторов, из них 32 отечественных и 189 зарубежных.

Заключение диссертации по теме «Глазные болезни», Беликова, Светлана Валерьевна

ВЫВОДЫ

1. Разработанная композиция «Витреоконтраст», на основе нейтральной нетоксичной неорганической соли сульфата бария в изотоническом растворе с осмолярностыо 300-350 мОсм, размером частиц 1-5 микрон и плотностью 4,4 г/см , позволяет изолированно контрастировать структуры стекловидного тела.

2. Разработан способ препарирования стекловидного тела с использованием суспензии «Витреоконтраст», заключающийся в максимальном сохранении целостности и взаиморасположения интравитреальных структур, за счет оставления интактным переднего отрезка глаза и участка склеры в заднем полюсе глаза диаметром 10-11 мм.

3. Суспензия «Витреоконтраст» за счет выраженной адгезии к структурным элементам стекловидного тела, не меняющейся с течением времени, позволяет изолированно контрастировать все интравитреальные структуры в отличие от препарата «Кеналог-40», осаждающегося на волокнах стекловидного тела.

4. Выявлен новый анатомический вариант расположения интравитреальных каналов, при котором оптико-цилиарный и лентико-макулярный каналы занимают центральное положение, проходят в едином кожухе и в верхней трети стекловидного тела разделяются, оканчиваясь в ретроцилиарном и ретролентальном пространствах соответственно.

5. Возникновение дефекта кортикальных слоев стекловидного тела вызывает изменение расположения интравитреальных структур с выходом их в ретрогиалоидное пространство без нарушения их анатомической целостности.

6. В эксперименте in vivo доказано, что интраокулярное введение суспензии «Витреоконтраст» не оказывает токсического влияния на структуры глазного яблока кролика.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Одним из основных факторов риска, ухудшающих результаты лечения пациентов с витреоретинальной патологией, является неполное удаление кортикальных слоев СТ и риск ятрогенного повреждения оптически полупрозрачных слоев тканей витреоретинального интерфейса в ходе хирургического вмешательства. При выполнении витрэктомии на интактном СТ, в условиях полного его прилежания к сетчатке, наибольшую трудность представляет отделение кортикальных слоев СТ от ВПМ, что связано с трудностью визуализации и интимным прилежанием кортикальных слоев к ВПМ. г

Безопасное удаление прозрачного, кажущегося бесструктурным стекловидного тела, ВПМ, эпиретинальных мембран в ходе субтотальной витрэктомии является одной из наиболее трудновыполнимых задач для хирурга и одной из основных составляющих успеха хирургического лечения [210]. Кроме того, с целью повышения эффективности хирургического лечения необходимо совершенствование знаний об анатомо-топографических особенностях и взаимоотношениях СТ и сетчатки.

Попытки визуализировать тонкие полупрозрачные структуры заднего отрезка глаза привели к возникновению новой хирургической тактики хромовитрэктомии, которая предполагает использование красителей с целью контрастирования этих структур и последующим их удалением в ходе хирургического вмешательства. Большинство используемых в современной витреоретинальной хирургии красителей диффузно контрастируют структуры витреоретинального интерфейса (кортикальные слои СТ, ВПМ, эпиретинальные мембраны). Ни один из существующих красителей не позволяет избирательно контрастировать структуры СТ и сетчатки. Кроме того, эти красители обладают рядом побочных эффектов и не разрешены для интравитреального использования в РФ.

Несмотря на накопленную в литературе обширную информацию о структурной организации СТ, полученные данные не могут дать целостного представления о его строении и взаимоотношении со структурами заднего отрезка глаза. Одна из основных причин - сложность и трудоемкость методов исследования СТ и структур витреоретинального интерфейса. Разработка новых способов изучения СТ позволяет как пополнить, так и детализировать накопленные знания, сохраняет свою актуальность и значимость на современном этапе развития офтальмохирургии.

Исходя из актуальности вопроса по поиску альтернативного нетоксичного красителя, позволяющего изолированно контрастировать структуры заднего отрезка глаза, мы провели серию экспериментальных исследований по разработке новой композиции для контрастирования интравитреальных структур.

Работа включает экспериментальные исследования ex vivo, in vivo, проводившиеся в несколько этапов.

На первом этапе исследовали физико-химические свойства и способность к контрастированию (степень контрастирования) неорганических соединений на основе сульфата бария с различной дисперсностью частиц и органических соединений с низкой плотностью. Исследования выполнены на 12 глазах трупов доноров, которые были разделены на 3 группы по 4 глаза в каждой группе. В 1-ой группе контрастирование СТ проводили с помощью суспензии №1 сульфата бария с размером частиц 10 - 15 микрон; 2-ой группе -суспензией №2 сульфата бария с размером частиц 1 - 5 микрон; , и в 3-ей группе - суспензией №3 на основе органических соединений с низкой плотностью с размером частиц 10-15 микрон: ГЭМЦ.

В ходе экспериметального исследования ex vivo был разработан способ препарирования СТ, заключающийся в максимальном сохранении целостности и взаиморасположения его структур путем оставления интактным переднего отрезка глаза и участка склеры в заднем полюсе глаза диаметром 10-11 мм.

В ходе контрастирования структур СТ было выявлено, что суспензия №3 на основе производных целлюлозы обладает способностью к гелеобразованию, что затрудняет ее интравитреальное введение. За счет небольшой плотности, сравнимой с плотностью воды, и размера частиц 10-15 микрон интенсивность окраски интравитреальных структур и степень адгезии уменьшается с течением времени. Производные целлюлозы проявляют низкую способность к контрастированию. Суспензия №1 сульфата бария контрастируют структуры СТ, но за счет большого размера и удельного веса частиц осаждается преимущественно на пленчатых структурах. Интенсивность окраски интравитреальных структур и степень адгезии не меняется с течением времени. Суспензия №2 на основе сульфата бария, за счет своих физико-химических свойств изолированно контрастирует все описанные в работе З.А. Махачевой структуры СТ [14], обладает выраженной адгезией к структурным элементам СТ. Интенсивность окраски интравитреальных структур выше при использования суспензии №2 сульфата бария, что обусловлено меньшим по-сравнению с суспензией №1 и №3 размером частиц. Основываясь на вышеизложенных результатах для изолированного контрастирования и дальнейшего изучения анатомо-топографических особенностей и взаимоотношений СТ и сетчатки была выбрана суспензия №2 сульфата бария, названная нами «Витреоконтраст».

Витреоконтраст» представляет собой ультрадисперсную суспензию на основе нерастворимой в воде и физиологических жидкостях нейтральной нетоксичной неорганической соли сульфата бария в изотоническом растворе с осмолярностыо 300 - 350 мОсм., размером частиц 1 - 5 микрон и плотностью 4.4 г\см3.

Следующий этап экспериментальных исследования ex vivo заключался в исследовании анатомо-топографических особенностей СТ в ходе его препарирования путем изолированного контрастирования и выделения структур СТ (каналов, цистерн и их анастомозов). Исследование проведено на 18 глазах доноров - трупов.

Предложенные ранее J. Worst и З.А. Махачевой [14,205]способы препаровки СТ нарушали целостность и взаиморасположение интравитреальных структур, а красители, использованные авторами, обладали слабой адгезией к структурным элементам СТ и не контрастировали избирательно его структуры, в следствие чего было невозможно выделить и провести гистологическое исследование интравитреальных структур.

Нами разработан способ препарирования СТ, заключающийся в максимальном сохранении целостности и взаиморасположения его структур с дополнительным введением суспензии «Витреоконтраст», позволяющим изолированно контрастировать все структуры СТ и определить анатомо-топографические особенности каналов, цистерн и других структурных элементов. Благодаря выраженной адгезии, не меняющейся с течением времени, суспензия «Витреоконтраст» осаждается на стенках интравитреальных структур и не перемещается при движениях СТ, что позволяет отсепаровать, выделить данные структуры и провести их гистологическое исследование.

В ходе исследования было выявлено, что структуры СТ представляют собой замкнутые или сообщающиеся между собой каналы и цистерны неправильной цилиндрической формы, полые внутри, имеют четко очерченные стенки, отличающиеся по плотности от матрикса и кортикальных слоев СТ. Были определены размеры интравитреальных структур: средний размер ретроцилиарных цистерн составил 10-12мм, экваториальных 15-17мм, лепестковых цистерн 8-10мм при длине глаза 21,5-23,5мм, а также выявлен анатомический вариант расположения интравитреальных каналов, при котором оба канала занимают центральное положение, проходят в едином кожухе и в верхней трети СТ разделяются, оканчиваясь в ретроцилиарном и ретролентальном пространствах.

В ходе препарирования отсепаровывали и выделяли предварительно контрастированные с помощью суспензии «Витреоконтраст» лентико-макулярный, оптико-цилиарный канал и ретроцилиарные цистерны. При гистологической и гистохимической окраске этих структур с эффектом метахромазии световая микроскопия подтверждала наличие стенок контрастированных каналов и цистерн. Они были структурированы и отличались от внутреннего матрикса стекловидного тела.

В ходе препарирования выявлена способность стенок цистерн СТ к растяжению без нарушения целостности структур. Отмечено что при образовании дефекта в КС образуется грыжа СТ. При этом изменяется конфигурация и взаиморасположение каналов и цистерн СТ. При увеличении давления путем введения дополнительного количества суспензии в СТ происходит разрыв КС в области дефекта с опорожнением интравитреальных структур и последующим сокращением КС.

Необходимо отметить, что при формировании и отсечении лепестков сетчатой оболочки во всех случаях было выявлено полное или частичное расслоение КС. Расслоенные участки имеют гладкую, блестящую поверхность, не контрастируются суспензией «Витреоконтраст», нерасслоенные КС представляют собой шероховатую поверхность матового цвета, контрастируются снаружи вышеуказанной суспензией. Выявленное расслоение КС и их способность к сокращению может служить приспособительным механизмом для предотвращения развития витреоретинальной патологии (отслойка сетчатки, витрео-макулярный тракционный синдром, макулярный разрыв и др.). Данное состояние (расслоение КС) не выявляется современными диагностическими методами и может быть ошибочно интерпретировано как ЗОСТ.

Третий этап исследования состоял в сравнительном контрастировании структур СТ суспензиями «Витреоконтраст» и «кеналог-40». Исследование проведено на 24 глазах трупов-доноров, разделенных на 3 группы по 8 глаз в каждой группе. В 1-ой группе проводили контрастирование интравитреальных структур при помощи суспензии «Витреоконтраст», в глаза 2-ой группы вводили суспензию «кеналог-40», в 3-ей группе проводили одновременное сравнительное контрастирование вышеуказанными суспензиями.

При контрастировании интравитреальных структур суспензией «кеналог-40» стенки каналов и цистерн четко не визуализируются, суспензия не удерживается в полости структур СТ, перемещается при движении СТ, постепенно осаждаясь в задних его слоях. Это связано со слабой адгезией суспензии, обусловленной размером частиц 10-15 микрон и плотностью 1,1 г\см3, сравнимой с плотностью воды.

При контрастировании структур СТ суспензией «Витреоконтраст» были контрастированы все интравитреальные структуры: каналы, цистерны и их взаимоотношения, кортикальные слои СТ. Она заполняет интравитреальные структуры, фиксируется на стенках, очерчивая их рельеф, не перемещается при движениях СТ, вследствие чего возможно избирательное окрашивание структур СТ. При этом каналы, цистерны и их анастомозы четко отличаются от прозрачного матрикса СТ.

Сравнительное контрастироание стекловидного тела суспензиями «Витреоконтраст» и «кеналог-40» подтвердило, что «Витреоконтраст» за счет размера и удельного веса частиц, обуславливающих его высокую механическую адгезию, контрастирует интравитреальные каналы, цистерны и их взаимоотношения; интенсивность окраски структур СТ не меняется с течением времени; по данным литературы является биологически инертным веществом. Также было выявлено, что суспензия «кеналог-40» не контрастирует снаружи КС СТ. С помощью же суспензии «Витреоконтраст» можно выявить расслоенные участки КС.

Вышеизложенные результаты позволяют выделить суспензию «Витреоконтраст» как более оптимальную для визуализации интравитреальных структур.

На основании полученных данных можно заключить, что суспензия «Витреоконтраст» является наиболее оптимальной для контрастирования структур СТ, что указывает на целесообразность ее внедрения в офтальмологическую практику с целью использования в качестве агента для контрастирования структур СТ и витреоретинального интерфейса в ходе хромовитрэктомии.

Изолированное контрастирование интравитреальных структур суспензией «Витреоконтраст» дает возможность разработки новых подходов селективного воздействия на интравитреальные структуры в ходе хромовитрэктомии.

Витреоконтаст» прошел успешные доклинические испытания на базе «Института медико-биологических исследований и технологий» испытательной лаборатории доклинических исследований «Биомир (г. Москва). Согласно результатам токсикологических испытаний (заключение по испытаниям №463 от 17.06.2009), образцы раствора для контрастирования структур СТ «Витреоконтраст» не обладают сенсибилизирующим, местнораздражающим и токсическим действием, стерильны, соответствуют требованиям, предъявляемым к изделиям, длительно контактирующим с внутренней средой глаза.

С целью изучения безопасности применения суспензии «Витреоконтраст» при интраокулярном введении нами проведены экспериментальные исследования in vivo, проводившиеся в несколько этапов.

Исследование проводилось на 16 кроликах (32 глаза) породы шиншилла, весом 2-2,5кг в возрасте 6 месяцев.

На первом этапе исследовали действие суспензии «Витреоконтраст» на структуры переднего отрезка глаза кролика (8 кроликов 8 глаз). Для этого производили инъекцию 0,1 мл суспензии «Витреоконтраст» в переднюю камеру глаза. Контролем служили парные глаза кроликов, которым в переднюю камеру вводили 0,1 мл физиологического сбалансированного раствора. Инъекцию выполняли на 3 часах с использованием игл 30 в одноразового инсулинового шприца. Через 1,7,14 и 30 суток после инъекции на всех глазах экспериментальных животных проводили биомикроскопию, непрямую офтальмоскопию и морфологические исследования.

При клиническом наблюдении ни в одном глазу первой и второй группы не было выявлено воспалительной реакции и видимых изменений структур глаза. Элиминация суспензии «Витреоконтраст» из передней камеры происходила постепенно в течение 10-14 дней. При исследовании глазных яблок 1-й опытной группы в раннем послеоперационном периоде (1-3 сутки) выявляли небольшое скопление суспензии в нижних отделах передней камеры. К 7 суткам отмечалось уменьшение уровня суспензии в нижних отделах передней камеры, а к 14 суткам суспензия «Витреоконтраст» не обнаруживалась в передней камере глаза кролика.

Морфологические исследования глаз опытной группы на ранних сроках исследования (1 и 7 сутки) выявило наличие суспензии «Витреоконтраста» без воспалительных явлений и механического повреждения структур. В отдаленные (14 сутки) сроки следов пребывания суспензии не обнаружено. При введении в переднюю камеру на протяжении всего эксперимента изменений структуры роговицы, радужки и цилиарного тела не выявлено.

Полученные результаты инъекции суспензии «Витреоконтраст» в переднюю камеру подопытных животных свидетельствуют об отсутствии повреждающего действия на структуры переднего отрезка глаза кролика.

Второй этап исследований, посвященный определению влияния суспензии «Витреоконтраст» на внутриглазные структуры при интравитреальном введении, выполняли на 8 глазах 8 кроликов, разделенных на опытную и контрольную группы по 8 глаз в каждой группе.

Прокол оболочек глазного яблока при введении суспензии в стекловидное тело осуществляли инъекционной иглой 30 в одноразового инсулинового шприца через конъюнктиву на расстоянии 2,0 мм от лимба в направлении к экватору в верхнее-наружном квадранте. Иглу проводили вглубь стекловидного тела параллельно хрусталику. Медленно вводили 0.1 мл суспензии «Витреоконтраст» в верхней трети стекловидного тела.

В послеоперационном периоде оценку состояние внутренних структур глаза в обеих группах осуществляли на 1,7,14 и 30 сутки. Методы исследования включали биомикроскопию, офтальмоскопию, электроретинографию, фоторегистрацию изображений с глазного дна и морфологические исследования.

Во П-й группе после интравитреальной инъекции «Витреоконтраст» определялся в канале стекловидного тела глаза кролика в виде гомогенной суспензии белого цвета, полностью прокрасив стенки канала. В течение всего периода наблюдения происходила постепенная элиминация суспензии «Витреоконтраст» из витреальной полости. На 30-й день исследования суспензии «Витреоконтраст» в полости стекловидного тела не определялось. Видимых изменений структур переднего отрезка глаза, СТ и сетчатки отмечено не было (воспалительной реакции, дегенераций и помутнения СТ, отека сетчатки, геморрагий и др.).

При анализе ЭРГ сетчатки опытных и контрольных глаз П-ой группы на 1-е сутки после интравитреальной инъекции суспензии «Витреоконтраст» отмечалось умеренное снижение биоэлектрической активности сетчатки, что проявлялось в снижении амплитуды в-волны в белом свете до ЗЗмс - 97 мкВ (норма Збмс - 125 мкВ), что свидетельствует о ее легком повреждении вследствие операционной травмы. Через 7 дней отмечалось увеличение амплитуд в-волн до 35,5мс-124,3 мкВ. Через 1 месяц не выявлено значимых отклонений Ь-волны от нормы.

Согласно результатам гистологического исследования в глазах с интравитреальным введением препарата структурных изменений и пролиферативных процессов со стороны сетчатки не отмечено. Суспензия диффузно распространенная в матриксе СТ кроликов опытной группы сохранялась в витреальной полости не более 7 суток. Лишь в одном случае на 7 сутки, «Витреоконтраст» был обнаружен в замкнутой «мешковидной» структуре СТ, предположительно определенной нами как прокрашивание канала СТ, так как достоверных данных о строении СТ кролика нет. Вокруг сконденсированного сухого остатка не выявлено фиброзных изменений СТ, только стенка самого канала.

Анализ результатов клинико-морфологических исследований свидетельствует о безопасности интраокулярного введения суспензии «Витреоконтраст».

Суспензия «Витреоконтраст» отвечает всем современным медицинским требованиям, предъявляемым к изделиям долговременно контактирующим с тканями организма. Она обладает рядом преимущественных положительных свойств, которые определяются химическими и физическими характеристиками.

Таким образом, проведенный комплекс разносторонних экспериментальных исследований по разработке нетоксичной композиции для контрастирования структур СТ и витреоретинального интерфейса свидетельствует о перспективности использования суспензии «Витреоконтраст» в качестве агента для контрастирования в ходе витрэктомии.

Выявленные при помощи разработанного способа контрастирования структур СТ с использованием суспензии «Витреоконтраст» анатомо-топографические и морфологические особенности СТ, взаимоотношение СТ и сетчатки позволяют по-новому оценить его роль в нормальном функционировании глаза, а также определить возможные механизмы, лежащие в основе витреоретинальных заболеваний.

Известно, что качество удаления структур СТ и атравматичность вмешательства определяют анатомический и функциональный прогноз операции. Благодаря физико-химическим свойствам суспензия «Витреоконтраст» избирательно контрастирует все структуры заднего отрезка глаза. С помощью данной суспензии возможно прицельное изолированное контрастирование структур витреоретинального интерфейса, что, на современном этапе развития витреоретинальной хирургии, является актуальным направлением в совершенствовании хирургической техники лечения витреоретинальной патологии.

Кроме того, «Витреоконтраст» контрастирует эпиретинальные слои СТ, которые не визуализируются ни одним современным красителем.

Использование суспензии «Витреоконтраст» для выявления остатков СТ после витрэктомии и индукции ЗОСТ, в свете выявленной нами способности КС СТ к расслоению, позволит провести максимальное их удаление с поверхности сетчатки и, таким образом, снизить риск возникновения рецидивов отслойки сетчатки, формирования эпиретинальных мембран, развития пролиферативной витреоретинопатии, улучшив, тем самым, качество хирургического лечения больных с витреоретинальной патологией.

94

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Беликова, Светлана Валерьевна, 2012 год

1. Балашевич Л. И., Гацу М. В., Байбородов Я. В. Эффективность интравитреального введения кеналога при лечении рефрактерного диффузного диабетического макулярного отека, осложненного наличием твердых экссудатов // Офтальмохирургия. -2006. -№ 2. С. 25-29.

2. Бабич М.Е. Гистофизиология стекловидного тела глаза человека в норме и при патологии // Фундаментальные исследования.- Москва, 2005.- №3.-С.115-117.

3. Батманов Ю. Е., Серебряков Г. В. Тотальная витрэктомия в глазах с рецидивирующими гемофтальмами. // Вестн. Офтальмологии. 1985. -№1.- С. 24-25.

4. Вит В.В. Строение зрительной системы человека // Одесса: Астропринт, 2003.- 226 с.

5. Краснов M. M. Сдобникова C.B., Федоров A.A. Заднегиалоидная мембрана как структурная основа роста новообразованной ткани при пролиферативной диабетической ретинопатии // Вестн. офтальмологии.-1998.- Т. 114, № 3.- С. 16-20.

6. Кривицкий А. К. Эффективность витрэктомии при тяжелой пролиферативной диабетической ретинопатии // Офтальмол. журн.-1990.-№7.- С. 385-389.

7. Лыскин П.В., Захаров В.Д., Лозинская О.Л., Назарян М.Г. Патогенез и лечение идиопатических макулярных разрывов// Офтальмохирургия.-20Ю.-№3.-58 с.

8. Лыскин П.В., Захаров В.Д., Письменская В.А. Микроанатомия витреоретинальных взаимоотношений в аспекте практической хирургии // Сб. тезисов Современные технологии лечения витреоретинальной патологии 2010.- Москва, 2010.- С.97-98.

9. Мармур З.К. Ультразвук в офтальмологии.- Киев: Здоров'я, 1987.-С.71-74.

10. Махачева З.А. Анатомо-функциональное обоснование хирургических вмешательств на стекловидном теле при витреальной деструкции: Дис. док. мед. наук.- Москва, 1994.- 220с.

11. Махачева 3. А. Анатомия стекловидного тела // Офтальмохирургия.-1994.-№2.- С. 38-42.

12. Махачева 3. А. Стекловидное тело: новые анатомо-физиологические данные: Лекция для врачей-офтальмологов, интернов, клинических ординаторов // М.: Изд-во МНТК «Микрохирургия глаза», 1996.- 11 с.

13. Морозова И.В., Киселева O.A. Некоторые аспекты патогенеза витреоретинальной пролиферации // Вестн. Офтальмол.- 1991.- Т.117.-№6.- С. 75-77.

14. Нероев В. В., Рябина М. В., Азим Заде А. А. Влияние интравитреального введения кеналога на морфофункциональное состояние сетчатки у пациентов с диабетическим макулярным отеком // Глаукома. 2006. -№ 4. - С. 38-40.

15. Рева Г.В. Развивающийся глаз//Владивосток, 1998г.- 131с.

16. Рева Г.В., Рева И.В., Ямамото Т. Структура стекловидного тела глаза человека // Тихоокеанский медицинский журнал. 2011. - №1. - С. 6569.

17. Родин С.С., Назаренко Н.И., Левицкая Г.В. Факторы риска послеоперационной пролиферативной витреоретинопатии при регматогенной отслойке сетчатки // Пролиферативный синдром в офтальмологии / Российский гос. мед. ун-т, М., 2000.- С. 13-14.

18. Сдобникова С. В., Столяренко Г.Е., Федоров A.A. Особенности течения пролиферативного процесса при диабетической ретинопатии, осложненного гиалошизисом // Пролиферативный синдром в офтальмологии . Российский гос. мед. ун-т, М., 2000.- С. 17-18.

19. Сдобникова С. В., Столяренко Г.Е. Роль задней гиалоидной мембраны в патогенезе и трансцилиарной хирургии пролиферативной диабетической ретинопатии // Вестн. офтальмологии,- 1999.- №1.- С. 11-15.

20. Сдобникова С. В., Мазурина Н.К., Столяренко Г.Е. Современный поход к лечению пролиферативной диабетической ретинопатии // Российский мед. журн.- 2002.- Т. 3.- № 3.- С. 99-105.

21. Селиванова И.Н. К морфологии стекловидного тела у детей и взрослых (по данным аутопсических исследований) // Стекловидное тело в клинической офтальмологии : сб. науч. тр.-Ленинград, 1979.-выпуск II.-С.19.

22. Старков Г.Л. Биомикроскопия как основной метод диагностики патологии стекловидного тела // Офтальмол. журн.- 1980.-№4.- С. 455456.

23. Старков Г.Л. Патология стекловидного тела М.,Медицина .- 1967.200 с.

24. Стебнев С.Д., Стебнев B.C. Хромовитректомия с Trypan blue в хирургии эпимакулярных мембран// Современные технологии лечения витреоретинальной патологии-2010.- С. 150-152.

25. Унгурьянов О.Д. Интраоперационная диагностика ретинальных разрывов и контрастирование структур стекловидного тела при лечении регматогенной отслойки сетчатки : Дис. кан. мед. наук.-Челябинск, 2005.-С. 39.

26. Федоров С. Н. Вопросы витреальной хирургии. // Всесоюзный съезд офтальмологов, 6-й: Тез. Докл. М., 1985. - Т. 6. - С. 139-147.

27. Хорошилова-Маслова И.П., Зуева М.В., Цапенко И.В., Нероев В.В., Танковский В.Э., Мизерова О.В. Топография и динамика функциональных изменений сетчатки кролика при однократной инъекции триамцинолона // Вестник офтальмол.- 2006.-№ 5.- С. 31-35.

28. Шульпина Н.Б. Биомикроскопия глаза.- М: Медицина, 1974.- С. 264.

29. Юдина H.H. Интравитреальное применение электролизисного раствора гипохлорита натрия в ходе витрэктомии при лечении экзогенного бактериального эндофтальмита: Дисс. канд. мед. наук.- М., 2005.- 148с.

30. Abdelkader E., Lois N. Internal Limiting Membrane Peeling in Vitreo-retinal Surgery // Survey of Ophthalmol.- July 2008.- Vol. 53, Issue 4.- P. 368-396.

31. Abrams G.W., Topping T., Machemer R. An improved method for practice vitrectomy // Arch Ophthalmol.- 1978.-.Vol.96.-.P.521-525.

32. Ando F., Sasano K., Ohba N., Hirose H., Yasui O. Anatomic and visual outcomes after indocyanine green-assisted peeling of the retinal internal limiting membrane in idiopathic macular hole surgery // Am J Ophthalmol.-2004.- Vol. 137(4).- P.609-614.

33. Antcliff R.J., Spalton D.J., Stanford M.R., Graham E.M., Ffytche T.J.,

34. Marshall J. Intravitreal triamcinolone for uveitic cystoid macular edema: an optical coherence tomography study // Ophthalmology.- 2001.-Vol. 108.-P.765-772.

35. Antoszyk A. N., Gottlieb J. L., Machemer R., Hatchell D. L. The effects of intravitreal triamcinolone acetonide on experimental preretinal neovascularization // Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. -1993. -Vol. 231. -P. 34-40.

36. Augustin A.J., Schmidt-Erfurth U. Verteporfin therapy combined withintravitreal triamcinolone in all types of choroidal neovascularization due to age-related macular degeneration // Ophthalmology.- 2006.-Vol.l 13.-P.14-22.

37. Bakri S.J., Beer P.M. The effect of intravitreal triamcinolone acetonide onintraocular pressure // Ophthalmic Surg Lasers Imag.- 2003.-Vol.34.- P.386-390.

38. Bakri S.J., Beer P.M. Choroidal neovascularization after radial opticneurotomy for central retinal vein occlusion // Retina.- 2004,- Vol.24.- P.610-611.

39. Balayre S., Boissonnot M., Curutchet L., Dighiero P. Role of trypan blue in epiretinal membrane surgery // J. Fr. 0phtalmol.-2005.-Vol.28.- P.290-297.

40. Bandello F., Polito A., Pognuz D.R., Monaco P., Dimastrogiovanni A., Paissios J. Triamcinolone as adjunctive treatment to laser panretinal photocoagulation for proliferative diabetic retinopathy// Arch Ophthalmol. 2006.-Vol. 124.-P.643-650.

41. Beer P.M., Bakri S.J., Singh R.J., et al. Intraocular concentration and pharmacokinetics of triamcinolone acetonide after a single intravitreal injection // Ophthalmology.- 2003.- Vol.110.- P.681-686.

42. Boscia .F, Furino C., Dammacco R., Ferreri P., Sborgia L., Sborgia C.1.travitreal triamcinolone acetonide in refractory pseudophakic cystoid macular edema: functional and anatomic results // Eur. J. Ophthalmol.- 2005.-Vol.15.- P.89-95.

43. Braziticos P.D., Katsimprs J.M., Tsironi E., Androudy S. Retinal nerve fiber layer thickness evaluation after trypan blue- assisted macular surgery// Retina.-2010.- Vol. 30(4).- P.640-647.

44. Burk S.E., Da Mata A.P., Snyder M.E., et al. Visualizing vitreous using Kenalog suspension // J Cataract Refract Surg.- 2003.-№29 .-P. 645-651.

45. Cacciatori M., Chadha V., Bennett H.G., Singh J. Trypan blue to aid visualization of the vitreous during anterior segment surgery// J. C. ataract Refract. Surg.-2006.- №32.- P. 389-391.

46. Cardillo J.A., Melo L.A., Jr, Costa R.A., et al. Comparison of intravitreal versus posterior sub-Tenon's capsule injection of triamcinolone acetonide for diffuse diabetic macular edema // 0phthalmology.-2005.- Vol. 12.-P. 15571563.

47. Ceki? O., Chang S., Tseng J.J., Akar U., Barile G.R., Schiff W.M. Cataract progression after intravitreal triamcinolone acetonide injection // American Journal of Ophthalmology.- 2005 .- Vol. 139, Issue 6.- P. 993-998.

48. Chang Y.S.,Wu C.L., Tseng S.H., Kuo P.Y., Tseng S.Y. Cytotoxicity of Triamcinolone Acetonide on Human Retinal Pigment Epithelial Cells // Invest. Ophthalmol.- 2007.- Vol. 48.-№ 6.- P. 2792-2798.

49. Cheng S.N., Yang T.C., Ho J.D., Hwang J.F., Cheng C.K. Ocular toxicity of intravitreal indocyanine green // J. Ocul. Pharmacol. Ther.- 2005.- №21.-P.85-93.

50. Chung K.T. The significance of azo-reduction in the mutagenesis and carcinogenesis of azo dyes // Mutat Res.- 1983.- №114.- P.269-281.

51. Coats M. L., Peyman G. A. Intravitreal corticosteroids in the treatmentof exogenous fungal endophthalmitis // Retina. 1992. -Vol. 12. -P. 46-51.

52. Conway M.D., Canakis C., Livir-Rallatos C., Peyman G.A. Intravitreal triamcinolone acetonide for refractory chronic pseudophakic cystoid macular edema//J. Cataract. Refract. Surg.- 2003.-Vol.29.-P.27-33.

53. Danis R. P., Bingaman D. P., Yang Y., Ladd B. Inhibition of preretinaland optic nerve head neovascularization in pigs by intravitreal triamcinolone acetonide//Ophthalmology. -1996. Vol. 103. -P. 2099-2104.

54. Danis R. P., Ciulla T. A., Pratt L. M., Anliker W. Intravitreal triamcinolone acetonide in exudative age-related macular degeneration // Retina. -2000. -Vol. 20.- P. 244-250.

55. Dierks D., Lei. B., Zhang K. Electroretinographic effect of the intravitrealinjection of triamcinolone on rabbit retina //Arch. Ophthalmol.- 2005.-Vol.123.- P. 1563-1569.

56. Eisner G. Biomicroscopy of the Peripheral Fundus // Springer-Verlag.- New York, 1973.

57. Enaida H., Sakamoto T., Hisatomi T., Goto Y., Ishibashi T. Morphological and functional damage of the retina caused by intravitreous indocyanine green in rat eyes // Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol.- 2002.- № 240.- P. 209-213.

58. Enaida H., Hata Y., Ueno A., et al. Possible benefits of triamcinolone-assisted pars plana vitrectomy for retinal diseases // Retina.- 2003.-Vol.23 .- P.764-770.

59. Engelbrecht N.E., Freeman J., Sternberg P. Jr. Retinal pigment epithelial changes after macular hole surgery with indocyanine green-assisted internal limiting membrane peeling // Am. J. Ophthalmol.- 2002.-Vol. 133(1).- P.89-94.

60. Farah M., Maia M., Rodrigues E.B. Dyes in Ocular Surgery: Principles for Use in Chromovitrectomy // Am. J. of Ophthalmol.- 2009.- Vol. 148, Issue 3.-P.332-340.

61. Feron E.J., Veckeneer M., Parys-Van Ginderdeuren R., Van Lommel A, Melles G.R., Stalmans P. Trypan blue staining of epiretinal membranes in proliferative vitreoretinopathy // Arch. 0phthalmol.-2002.- №120.- P.141-144.

62. Flower R.W. Injection technique for indocyanine green and sodium fluorescein dye angiography of the eye // Invest. Ophthalmol.- 1973.- Vol.12.- P.881-895.

63. Fritz W.L. Fluorescein blue, light-assisted capsulorhexis for mature or hypermature cataract//J. Cataract Refract. Surg.- 1998.- Vol.24.- P.19-20.

64. Mayer C.H. Vital dyes in vitreoretinal surgery- chromovitrectomy // Develop in Ophthalmol.- 2008.- Vol.42.- P. 5-7.

65. Furino C., Micelli Ferrati T., Boscia F. Triamcinolone assisted pars plana vitrectomy for proliferative vitreoretinopathy // Retina.- 2003.- Vol. 23.- P. 771-776.

66. Gale J.S., Proulx A.A., Gonder J.R., Mao A .J., Hutnik C.M. Comparison of the in vitro toxicity of indocyanine green to that of trypan blue in human retinal pigment epithelium cell cultures // Am. J. Ophthalmol.- 2004.- Vol.138(1).-P.64-69.

67. Gass C.A., Haritoglou C., Schaumberger M., Kampik A. Functional outcome of macular hole surgery with and without indocyanine green-assisted peeling of the internal limiting membrane // Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol.-2003.-№241.- P.716-720.

68. Gandorfer A., Haritoglou C., Gass C.A., Ulbig M.W., Kampik A. Indocyanine green-assisted peeling of the internal limiting membrane may cause retinal damage//Am. J. Ophthalmol.- 2001 .-Vol. 132(3).- P.431^133.

69. Gandorfer A., Haritoglou C., Gandorfer A., Kampik A. Retinal damage from indocyanine green in experimental macular surgery // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci.- 2003.- Vol.44(l).- P.316-323.

70. Georgiadis N., Kardasopoulos A., Bufidis T. The evaluation of corneal graft tissue by the use of trypan blue // Ophthalmologica.- 1999.- Vol.213.- P.8 -11.

71. Graham R. O., Peyman G. A. Intravitreal injection of dexamethasone. Treatment of experimentally induced endophthalmitis // Arch. Ophthalmol.-1974. -Vol. 92.-P. 149-154.

72. Grisantia S., Altvatera F., Petersa S. Safety Parameters for Indocyanine Green in Vitreoretinal Surgery //Dev. Ophthalmol.- 2008.-Vol 42.- P. 43-68.

73. Guo S., Tutela A.C., Wagner R., Caputo A.R. A comparison of the effectiveness of four biostains in enhancing visualization of the vitreous // J. Pediatric Ophthalmol. Strabismus.- 2006.- Vol. 2,- P. 281-284.

74. Han D.P., Abrams G.W., Aaberg T.M. Surgical excision of the attached posterior hyaloids//Arch. Ophthalmol.- 1988,- №106.- P.998-1000.

75. Haritoglou C., Eibl K., Schaumberger M., et al. Functional outcome after trypan blue-assisted vitrectomy for macular pucker: a prospective, randomized, comparative trial // Am. J. Ophthalmol.- 2004.- Vol.138.- P. 1-5.

76. Haritoglou C., Kampik A., Langhals II. indocyanine green should not be used to facilitate removal of the internal limiting membrane in macular hole surgery // Survey of Ophthalmol.- 2009,-Vol. 54, Issue 1.- P. 138-141.

77. Haritoglou C., Yu A., Freyer W., Priglinger S.G., Alge C., Eibl K., May K.A., Welge-Luessen U., Kampik A. An Evaluation of Novel Vital Dyes for Intraocular Surgery // Invest. Ophthalmol.- 2005.- Vol. 46.- P. 3315-3322.

78. Heilweil G., KomarowskaL, Zemel E., Loewenstein A., Perlman I. Normal Physiological and Pathophysiological Effects of Trypan Blue on the Retinas of Albino Rabbi // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci.- August 2010 .-Vol. 51(8).- P. 4187-4194.

79. Hida T., Chandler D., Arena J.E., Machemer R. Experimental and clinical observations of the intraocular toxicity of commercial corticosteroid preparations//Am. J. Ophthalmol.- 1986.-Vol.l01.-P.190-195.

80. Hida T., Chandler D., Arena J.E. Experimental and clinical observations of theintraocular toxicity of commercial corticosteroid preparations // Am. J. Ophthalmol.- 1982.- Vol.93.- P.415-417.

81. Hirata A., Inomata Y., Kawaji T., Tanihara H. Persistent subretinal indocyanine green induces retinal pigment epithelium atrophy // Am. J. Ophthalmol.- 2003.- № 136 (2).- P. 353-355.

82. Ho J.D., Tsai R.J., Chen S.N., Chen H. Toxic effect of indocyanine green on retinal pigment epithelium related to osmotic effects of the solvent.// Am. J. Ophthalmol.- 2003.- Vol.l35(2).- P.258.

83. Horiguchi M. Staining of the lens capsule for circular continuous capsulorrhexis in eyes with white cataract // Arch. Ophthalmol.-1998.- № 116.-P. 535-537.

84. Horio N., Horiguchi M., Yamamoto N. Triamcinolone acetonide- assisted the internal limiting membrane peeling during idiopathic macular hole surgery // Arch. Ophthalmol.- 2005.- Vol. 123.- P. 96-99.

85. Jacob S., Agarwal A., Agarwal S., Chowdhary S., Chowdhary R., Bagmar A.A. Trypan blue as an adjunct for safe phacoemulsification in eyes with white cataract//J. Cataract. Refract. Surg.- 2002.- Vol.28.- P. 1819-1825.

86. Jackson T.L. Vital Staining and Retinal Detachment Surgery // Dev. Ophthalmol.- 2008.- Vol 4.- P. 126-140.

87. Jackson T.L., Hillenkamp J., Knight B.C., et al. Safety testing of indocyanine green and trypan blue using retinal pigment epithelium and glial cell cultures // Inves.t Ophthalmol. Vis. Sci.- 2004.- Vol.45(8).- P. 2778-2785.

88. Jackson T.L., Kwan A.S., Laidlaw A.H., Aylward W. Identification of retinal breaks using subretinal trypan blue injection // Ophthalmology.- 2007.-Vol.l 14.- P. 587-590.

89. Jin Y., Uchida S., Yanagi Y., Aihara M., Araie M. Neurotoxic effects of trypan blue on rat retinal ganglion cells // Exp. Eye Res.- 2005.- №81.-P.395-400.

90. Jonas J.B. Concentration of intravitreally injected triamcinolone acetonide in aqueous humour // Br. J. Ophthalmol.- 2002.-Vol.86.- P. 1066.

91. Jonas J.B. Concentration of intravitreally injected triamcinolone acetonide inintraoculor silicone oil // Br. J. Ophthalmol.- 2002.-Vol.86.-P.1450-1451.

92. Jonas J.B, Degenring R.F, Kamppeter BA, Kreissig I., Akkoyun I. Duration of the effect of intravitreal triamcinolone acetonide as treatment for diffuse diabetic macular edema // Am. J. Ophthalmol.- 2004.-Vol.138.-P.158-160.

93. Jones J.B., Degenring R. Intraocular pressure after intravitreal ingection of triamcinolone acotinide// Br. J. Ophthalmol.- 2003.- Vol.87.- P.24-26.

94. Joondeph B. Use of membrane blue in ILM and ERM peeling // Retinal Physician.- 2009, September.- 54-56.

95. Kadonosono K., Itoh N., Uchio E., Nakamura .S., Ohno S. Staining of internal limiting membrane in macular hole surgery // Arch. Ophthalmol.-2000,-№118.- P.l 116-1118.

96. Kanda S., Uemura A., Yamashita T., Kita H., Yamakiri K., Sakamoto T. Visual field defects after intravitreous administration of indocyanine green in macular holesurgery. //Arch. Ophthalmol.- 2004.- Vol.122.- P. 1447-1451.

97. Kampik A., Haritoglou C., Gandorfer A. What Are Vitreoretinal Surgeons Dyeing for? // Retina.- July/August 2006.- Vol. 26(6).- P.599-601.

98. Kampougeris G., Cheema R., McPherson R., Gorman C. Safty of Triamcinolone acetonide- assisted pars plana vitrectomy in macular hole surgery // Eye.-2007.- №21.- P.591 -594.

99. Karacorlu M., Ozdemir H., Karacorlu S.A. Does intraocular Triamcinolone acetonide -assisted peeling of the internal limiting membrane effect the outcome of macular hole surgery? // Graefes. Arch. Clin. Exp. Ophthalmol.- 2005.- Vol. 243.- P. 754-757.

100. Kazuhiro T., Zorumski C. F., Izumi Y. Involvement of illumination in indocyanine green toxicity after its washout in the ex vivo rat retina // Retina.-2009.- Vol. 29(3).- P.371-379.

101. Kersey T.L., Bolton A., Patel Tognetto D., Haritoglou C., Kampik A., Ravalico G. Macular edema and visual loss after macular pucker surgery with ICG-assisted internal limiting membrane peeling // Eur. J. Ophthalmol.- 2005,-Vol.15.- P.289-291.

102. Kim J. The use of vital dyes in corneal disease // Curr. Opin. Ophthalmol.- 2000.-Vol. 11.-P.241-247.

103. Kimura H., Kuroda S., Nagata M. Triamcinolone acetonide -assisted peeling of the internal limiting membrane // Am. J. Ophthalmol .- 2004 .-Vol. 137, Issue l.-P. 172-173.

104. Kok H., Lau C., Maycock N., McCluskey P., Lightman S. Outcome of intravitreal triamcinolone in uveitis // Ophthalmology.- 2005.- Vol.112.-P.1916-1921.

105. Kozak I., Cheng L., Mendez T., Davidson M.C., Freeman W.R. Evaluation of the toxicity of subretinal triamcinolone acetonide in the rabbit // Retina.- 2006.-Vol. 26(7).- P. 811-817 .

106. Kusaka S., Nobutsugu H., Ohji M., Hayashi A., Kamei M., Tano Y. Indocyanine green facilitates removal of epiretinal and internal limiting membranes in myopiceyes with retinal detachment // Am. J. Ophthalmol .-2001.-№131.- P.388-390.

107. Kutschera E. Vital staining of the detached retina with retinal breaks // Albrecht Von Graefes Arch. Klin. Exp. Ophthalmol.- 1969.- Vol.178.- P. 7287.

108. Kwok A., Lai T., Yew D., Li W. Internal limiting membrane staining with various concentrations of indocyanine green dye under air in macular surgeries // Am. J. Ophthalmol.- August 2003.- Vol.136, Issue 2.- P.223-230.

109. Kwok A., Lai T., Li W., Woo D., Chan N.R. Indocyanine green-assisted internal limiting membrane removal in epiretinal membrane surgery: A clinical and histologic study // Am. J. Ophthalmol.- August 2004,- Vol. 138, Issue 2.-P. 194-199.

110. Kwok A.K., Yeung C.K., Lai T.Y., Chan K.P., Pang C.P. Effects of trypan blue on cell viability and gene expression in human retinal pigment epithelial cells // Br. J. Ophthalmol.- 2004.-Vol.88.- P. 1590-1594.

111. Lang Y., Zemel E., Miller B., et.al. Retinal toxicity of intravitreal kenalog in albino rabbits // Retina.- 2007 .-Vol. 27(6).- P.778-788.

112. Lee K.L., Dean S., Guest S. A comparison of outcomes after indocyanine green and trypan blue assisted internal limiting membrane peeling during macular hole surgery // Br J Ophthalmol.-2005.-Vol. 89(4).- P.420^122.

113. Li Q., Wang J., Yang L., Mo B., Zeng H., Wang N., Liu W. A Morphologic study of retinal toxicity induced by Triamcinolone Acetonide vehicles in rabbit eyes // Retina.- 2008.- Vol. 28(3).- P.504-510.

114. Lochhead J., Jones E., Chui D. Outcome of ICG-assisted ILM peel in macular hole surgery // Eye.-2004.- №18.- P. 804-808.

115. Maia M., Kellner L., de Juan E. Jr. Effects of indocyanine green injection on the retinal surface and into the subretinal space in rabbits // Retina.- 2004.- Vol. 24(1).- p.80-91.

116. Maia M., Margalit E., Lakhanpal R. Effects of intravitreal indocyanine green injection in rabbits.// Retina.- 2004.- Vol.24(l).- P.69-79.

117. Machemer R., Sugita G., Tano Y. Treatment of intraocular proliferations with intravitreal steroids // Trans. Am. Ophthalmol. Soc. -1979. -Vol. 77. -P. 171—180.

118. Machemer R. Proliferative vitreoretinopathy (PVR): a personal account of its pathogenesis and treatment. Proctor lecture // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. -1988.- Vol. 29. P. 1771-1783.

119. Machemer R. The importance of fluid absorbrption, traction, intraocular currents, and chorioretinal scars in the therapy of regmatogenus retinal detachment // XLI Edward Jackson Memorial Lecture // Am. J. Ophthalmol.-1984.- Vol.98.- P.681-693.

120. Macky T.A., Helmy D., El Shazly N. Retinal toxicity of triamcinolone's vehicle (benzyl alcohol): an electrophysiologic and electron microscopic study // Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol .-2007 .-Vol. 245(6).-P.817-824.

121. Massin P., Audren F., Haouchine B., et al. Intravitreal triamcinolone acetonide for diabetic diffuse macular edema: preliminary results of a prospective controlled trial // Ophthalmology.- 2004.- Vol.111.- P.218-224.

122. Matsumoto H., Yamanaka I., Hisatomi T. Triamcinolone acetonide-assisted pars plana vitrectomy improves residual posterior vitreous hyaloids removal: ultrastructural analisis of the inner limitimg membrane // Retina.-2007,-Vol. 27.-P. 174-179.

123. Mayer C.H. Vital dyes in vitreoretinal surgery- chromovitrectomy // Develop, in Ophthalmol.- 2008.- Vol.42.- P. 5-7.

124. McCuen B.W., Bessler M., Tano Y., et al. The lack of toxicity of intravitreal administered triamcinolone acetonide //Am. J. Ophthalmol.- 1981.-Vol. 91.- P.785-788.

125. Mein C.E., Flynn H.W. Recognition and removal of the posterior cortical vitreous during vitreoretinal surgery for impending macular hole // Am. J. Ophthalmol-. 1991.- Vol.111.- P.611-613.

126. Melles G.R., de Waard P.W., Pameyer J.H., Houdijn Beekhuis W. Trypan blue capsule staining to visualize the capsulorhexis in cataract surgery // J. Cataract. Refract. Surg.- 1999.- № 25.- P.7-9.

127. Meyer C.H., Mennel S., Schmidt J.C. Intravitreal Triamcinolone acetonide may increase the Intraocular Pressure even in vitrectomized eyes after more than 3 months // American Journal of Ophthalmology .- 2005 .- Vol. 140, Issue 4.-P. 766-767.

128. Missel P., Horner M., Muralikrishnan R. Simulating dissolution of intravitreal triamcinolone acetonide suspensions in an anatomically accurate rabbit eye model // Pharmaceutical Research.- 2010.- Vol. 27, Issue: 8.-P.1530-1546.

129. Mitry D., Fleck B.W., Wright A. F., Campbell H., Charteris D. G. Pathogenesis of rhegmatogenous retinal detachment // Predisposing Anatomy and Cell Biology Retina.- 2010.-Vol.30(10).- P.l561-1572.

130. Morales M-C., Freire V., Asumendi A., Araiz J., Herrera I., Castiella G., Corcystegui I., Corcystegui G. Comparative effects of six intraocular vital dyes on retinal pigment epithelial cells// Invest. Ophthalmol.- 2010.-№21.- P. 60186029.

131. Morrison, V.L. Hyoung K.J., Lingyun C., Kenichiro B., Davidson M.C. Freeman W. R. Intravitreal toxicity of the kenalog vehicle (benzyl alcohol) in rabbits // Retina.-2006.- Vol. 26(3).- P. 339-344.

132. Moshfeghi D.M., Kaiser P.K., Scott I.U., et al. Acute endophthalmitis following intravitreal triamcinolone acetonide injection // Am. J. Ophthalmol.- 2003.- Vol.136.- P.791-796.

133. Murata M., Shimizu S., Horiuchi S., Sato S. The effect of indocyanine green on cultured retinal glial cells // Retina.- 2005.- Vol. 25,- P.75-80.

134. Narayanan R., Kenney M.C., Kamjoo S., Trinh T.H., Seigel G.M., Resende G.P., Kuppermann B.D. Trypan blue: effect on retinal pigment epithelial and neurosensory retinal cells // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci.-2005,- №46.-P.304-309.

135. Narayanan R., Mungcal J.K., Kenney M.K., Seigel G.M., Kuppermann B.D. Toxicity of Triamcinolone Acetonide on Retinal Neurosensory and Pigment Epithelial Cells // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci.- February 2006.- Vol. 47.-№. 2,- P.722-728.

136. Nelson M.L., Tennant M.T., Sivalingam A., et al. Infectious and presumed noninfectious endophthalmitis after intravitreal triamcinolone acetonide injection // Retina.- 2003.- Vol.23.- P.686-691.

137. Oksala A. Ultrasonic findings in the vitreous body at various ages // Albrecht Von Graefes Arch. Klin. Exp. Ophthalmol.- 1978.- Vol.207.- P. 275280.

138. Pandey S.K., Werner L., Escobar-Gomez M., Roig-Melo E.A, Apple D.J. Dye-enhanced cataract surgery. Part 1: anterior capsule staining for capsulorhexis in advanced/white cataract.// J. Cataract Refract. Surg.- 2000.-Vol.26.- P. 1052-1059.

139. Perrier M., Sebag M. Epiretinal membrane surgery assisted by trypan blue //Am. J. Ophthalmol.- 2003.- №135.- P.909-911.

140. Perrier M., Sebag M. Trypan blue-assisted peeling of the internal limiting membrane during macular hole surgery// Am. J. Ophthalmol.- 2003.-Vol.135 (6).- P.903-905.

141. Peyman G.A., Cheema R., Conway M.D. Triamcinolone acetonide as an aid to visualization of the vitreous and the posterior hyaloid during pars plana vitrectomy// Retina.- 2000.- №20.- P. 554-555.

142. Posselt D., Rahman R., Smith ML, Simcock P.R. Visual outcomes following ICG assisted ILM peel for macular hole // Eye.- 2005.-Vol.19.-P.279-283.

143. Proulx A., Gonder J.R. Comparison of in vitro toxicity of single vs double exposures of indocyanine green in human retinal pigment epithelial cell cultures // Am. J. Ophthalmol.- 2007.- Vol. 143, Issue 2.- P.- 353-354.

144. Redslob E. Le corps vitre // Soc. Fr .Ophtalmol. Monogr.- Paris, Masson.- 1932.-P. 174-178.

145. Rezai K.A., Farrokh-Siar L., Ernest J.T., van Seventer G.A. Indocyanine green induces apoptosis in human retinal pigment epithelial cells // Am. J. Ophthalmol.- 2004.- №137.-P. 931-933.

146. Rezai K., Farrokh-Siar L., Gasyna E., Ernest J. Trypan blue induces apoptosis in human retinal epithelial cells// Am. J. Ophthalmol.-2004.-Vol. 138,- P.492-495.

147. Rodrigues E.B., Meyer C.H., Maia M., Penha F.M., Dib E., Farah M.E. Vital dyes for chromovitrectomy // Curr. Opin. Ophthalmol.- 2007.- №18.-P. 179-187.

148. Rodrigues E.B., Meyer C.H., Kroll P. Chromovitrectomy: a new field in vitreoretinal surgery // Graefe's Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology.- 2005.-Vol.243.- №4.- P.291-293.

149. Rodrigues E., Costa E., Penha F., Meló G., Botty J., Dib E., Furlani B., Lima V., Maia M., Meyer C., Hufling-Lima A.L., Farah M. The use of vital dyes in ocular surgery // Survey of Ophthalmology .- 2009 .-Vol. 54.- Issue 5.-P.576-617.

150. Rodrigues E.B., Meyer C.H., Mennel S., Farah M.E. Mechanisms of intravitreal toxicity of indocyanine green dye: implications for chromovitrectomy // Retina.- 2007.- №27.- P.958-970.

151. Rodrigues E.B., Meyer C.H., Schmidt J.C., Kroll P. Trypan blue stains the epiretinal membrane but not the internal limiting membrane // Br. J. 0phthalmol.-2003.- Vol.7(l 1).- P. 1431-1432.

152. Rodrigues E.B., Meyer C.H., Maia M., Penha F.M., Dib E., Farah M.E. Historical aspects and evolution of the application of vital dyes invitreoretinal surgery and chromovitrectomy // Develop, in Ophthalmol.- 2008.- Vol.42.-P.29-34.

153. Rodrigues E.B., Penha F.M., Farah M.E., et al. Preclinical investigation of the retinal biocompatibility of six novel vital dyes for chromovitrectomy. Journal Article, Research Support, Non-U.S. Gov't. // Retina.- 2009.- Vol. 29(4).- P.497-510.

154. Roe R., Boyer D. The use of Triamcinolone for visualization during vitreoretinal surgery // Retinal Physician .- Special issue 2009.- P.50-25.

155. Roth D.B., Chieh J., Spirn M.J., et al. Noninfectious endophthalmitis associated with intravitreal triamcinolone injection // Arch. Ophthalmol.-2003.-Vol.121.- P.1279-1282.

156. Sato T., Ito M., Ishida M., Karasawa Y. Phototoxicity of Indocyanine Green under Continuous Fluorescent Lamp Illumination and Its Prevention by Blocking Red Light on Cultured Muller Cells // August 2010.-Vol. 51.-№. 8.-P. 4337-4345.

157. Sato Y.,Tomita H., Sugano E., Tsago H., Yoshida M., Tamai M. Evaluation of indocyanine green toxicity to rat retinas // Ophthalmologica.-2006.- Vol.220(3).- P. 153-158.

158. Schepens C.L., Trempe C.L., Takahashi M. Atlas of Vitreous Biomicroscopy // Boston, Butterworth Heinemann.- 1999.

159. Schmidt K.L., Milner K., Hilbum P.J., Schmidt W.A. Ultrastructure of trypan blue induced ocular defects // I. Retina and Lens. Teratology.- 1998.-Vol.28.-P.131-144.

160. Sebag J. Anatomy and pathology of vitreoretinal interface // Eye.- 1992.-Vol. 6.-P. 135-162.

161. Sebag J. Surgical anatomy of vitreous and vitreoretinal interface // In: Tasman W, Jaeger EA, eds: Clinical Ophthalmology. Vol 6. Philadelphia: JB Lippincott, 1994, chap 51.

162. Sebag J, Balazs E.A. Morphology and ultrastructure of human vitreous fibers //Invest. Ophthalmol. Vis. Sci.- 1989.- Vol.30.- P. 1867-1871.

163. Sekiryu T., Iida T. Long-term observation of fundus infrared luorescence after indocyanine greenassisted vitrectomy // Retina.- 2007.- Vol.27.-P. 190-197.

164. Simon R. B., Sebag J. Chromodissection of the Vitreoretinal interface// Retinal Physician.- April 2009.- P. 16-21.

165. Sippy B.D., Engelbrecht N.E., Hubbard G.B. Indocyanine green effect on cultured human retinal pigment epithelial cells: implication for macular hole surgery//Am. J. Ophthalmol. -2001.- Vol. 132(3).- P.433-435.

166. Shah G.K., Rosenblatt B.J., Smith M. Internal limiting membrane peeling using triamcinolone acetonide: Histopathologic confirmation // Am. J. Ophthalmol.- 2004 .-Vol. 138, Issue 4.- P. 656-657.

167. Shah G.K., Rosenblatt B.J., Blinder K.J., Grand M.G., Smith M. Triamcinolone-assisted internal limiting membrane peeling // Retina .- 2005 .-Vol.25.-P. 972-975.

168. Slaughter K., Lee I.L. Macular hole surgery with and without indocyanine green assistance // Eye.- 2004,- №18.- P. 376-378.

169. Sorsby A. Vital staining of the fundus // Trans. Ophthal. Soc UK.- 1939.-Vol.59.- P.727-730.

170. Stalmans P., Van Aken E.H., Melles G., Veckenee M., Feron E.J., Stalmans I. Trypan blue not toxic for retinal pigment epithelium in vitro //Am. J. Ophthalmology.- 2003,-Vol. 135- Issue 2.- P. 234-236.

171. Sutter F.K., Gillies M.C. Pseudo-endophthalmitis after intravitreal injection of triamcinolone // Br. J. Ophthalmol.- 2003.- Vol.87.- P.972-974.

172. Teba F.A., Mohr A., Eckardt C., Wong D., Kusaka S., Joondeph B.C., Feron E.J., Stalmans P., Van Overdam K., Melles G.R. Trypan blue staining in vitreoretinal Surgery// Ophthalmology.- 2003.- №110.- P.2409-2412.

173. Tognetto D., Zenoni S., Sanguinetti G., Haritoglou C., Ravalico G. Staining of the internal limiting membrane with intravitreal triamcinolone acetonide // Retina.- 2005.-Vol. 25.- P.462-467 .

174. Tsuiki E., Fujikawa A. Miyamura N., Yamada K., Mishima K., Kitaoka T.Visual field defects after macular hole surgery with indocyanine green-assisted internal limiting membrane peeling // Am. J. 0phthalmol.-2007.-№143.- P.704-705.

175. Uemoto R., Yamamoto S., Takeuchi S. Changes in retinal pigment epithelium after indocyanine green assisted internal limiting lamina peeling during macular hole surgery // Am. J. Ophthalmol.- 2005.- №140.- P. 752-755.

176. Uemura A., Kanda S., Sakamoto Y., Kita H. Visual field defects after uneventful vitrectomy for epiretinal membrane with indocyanine green-assisted internal limiting membrane peeling //Am. J. Ophthalmol.- 2003.-Vol. 136(2).- P.252-257.

177. Veckeneer M., van Overdam K., Monzer J., Kobuch K., van Marie W., Spekreijse H., van Meurs J. Ocular toxicity study of trypan blue injected into the vitreous cavity of rabbit eyes// Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol.-2001.- Vol.239.- P. 698-704.

178. Verma L., Prakash G., Tewari H.K. Trypan blue enhanced vitrectomy in clear gel vitrectomy // Indian J. Ophthalmol.- 2003.- №51.- P. 106.

179. Vote B.J., Russell M.K., Joondeph B.C. Trypan blue-assisted vitrectomy // Retina.- 2004.- Vol.24(5).- P. 736-738.

180. Weinberger A.W., Kirchhof B., Mazinani B.E., Schräge N.F. Persistent indocyanine green (ICG) fluorescence 6 weeks after intraocular ICG administration for macular hole surgery // Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol.- 2001,- Vol. 239(5).- P.388-390.

181. Williamson T.H., O'Donnell A. Intravitreal triamcinolone acetonide for cystoid macular edema in nonischemic central retinal vein occlusion // Am. J. Ophthalmol.- 2005.-Vol.139.- P.860-866.

182. Wong K.L., Hiscott P., Stanga P., et al. Trypan blue staining of the internal limiting membrane and epiretinal membrane during vitrectomy: visual results and histopathological findings // Br. J. Ophthalmol.- 2003.- Vol. 87.- P.216-219.

183. Worst J. Cisternal systems of the fully developed vitreous body in the young adult // Trans. Ophthalmol. Soc UK.- 1977.- Vol.97.- P.550-554.

184. Yetik H., Devranoglou K., Ozkan S. Determining the lowest trypan blue concentration that satisfactorily stains the anterior capsule // J. Cataract. Refract. Surg.- 2002.- Vol.28.- P.988-991.

185. Yeung C.K., Chan K.P., Chiang S.W., et al. The toxic and stress responses of cultured human retinal pigment epithelium (ARPE19) and human glial cells (SVG) in the presence of triamcinolone // Invest. Ophthalmo.l Vis. Sci.-2003.- Vol.44.- P.5293-5300.

186. Yoon S.J., Rhee D.Y., Marx J.L., Blaha G., Rogers A.H., Baumal C.R., Jay E.R., Duker S. Anatomic and visual outcomes of noninfectious endophthalmitis after intravitreal triamcinolone // Am. J. Ophthalmol. 2009.-Vol. 147, Issue 6.-P. 1031-1036.

187. Yudkin Arthur. The normal vitreous humor a critical study// Arch. Ophthalmol.- 1931Vol.6(5).- P.754-765.