Эфирномасличные культуры и пищевые масла как источник получения биологически активных веществ и их роль в формировании костной ткани тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.14, кандидат наук Элбахнасави Амр Самир Маамун Абделджаффар

• Элбахнасави Амр Самир Маамун Абделджаффар
• кандидат наук
• 2021

Оглавление диссертации кандидат наук Элбахнасави Амр Самир Маамун Абделджаффар

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Растительные ресурсы и животные масла как источник природных биологически активных соединений и их использование

1.2. Тимьян обыкновенный (Thymus vulgaris L.)

1.2.1. Общая характеристика тимьяна обыкновенного

1.2.2. Состав и свойства тимьяна обыкновенного

1.2.3. Область произрастания тимьяна

1.2.4. Лекарственные свойства тимьяна обыкновенного

1.3. Розмарин обыкновенный (Rosmarinus officinalis L.)

1.3.1. Общая характеристика розмарина

1.3.2. Состав и свойства розмарина

1.3.3 Область произрастания розмарина

1.3.4. Лекарственные свойства розмарина

1.4. Соя культурная (Glycine max L. Merr.)

1.4.1 Общие характеристики сои

1.4.2. Состав соевого масла

1.4.3 Область произрастания сои

1.4.4. Свойства соевого масла

1.5. Лен обыкновенный (Linum usitatissimum L.)

1.5.1 Общая характеристика льна

1.5.2. Состав семян льна

1.5.3. Область произрастания льна

1.5.4. Лекарственные свойства льняного масла

1.6. Рыбий жир

1.6.1 Общая характеристика рыбьего жира

1.6.2. Состав и свойства рыбьего жира

1.7. Риск от воздействия контаминант при потреблении продуктов питания

1.8. Натуральные биоактивные соединения и их влияние на костную ткань в процессе контроля экспрессии генов

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ БИОЛОГИЧЕКИХ

ОБЪЕКТОВ

3.1. Особенности состава и свойств эфиромасличных тимьяна и розмарина

3.2. Влияние тимьяна и розмарина на состояние костной ткани у крыс с дефицитом кальция

3.2.1. Минералы в плазме крови, биомаркеры, связанные с метаболизмом кости, воспалением и окислительным стрессом

3.2.2. Изменения минеральной плотности кости, массы и длины бедреной кости на фоне применения розмарина и тимьяна

3.2.3. Результаты гистологических исследований бедренной кости на фоне применения эфирных масел розмарина и тимьяна

3.2.4. Влияние тимьяна и розмарина на уровень экспрессии мРНК изучаемых генов

3.2.5. Обсуждение о влиянии тимьяна и розмарина на формирование костной ткани у крыс с дефицитом кальция

3.3. Анализ состава рыбьего жира, соевого масла, льняного масла

3.4. Влияние рыбьего жира, соевого и льняного масла на профилактику остеропороза у крыс на фоне приема преднизолона

3.4.1. Изменения минеральной плотности кости, массы и длины бедренной кости на фоне примененияя рыбьего жира, соевого и льняного масла

3.4.2. Результаты исследования крови на содержание кальция, фосфора и магния

3.4.3. Биомаркеры, связанные с метаболизмом кости, воспалением и окислительным стрессом

3.4.4. Результаты гистологических исследований бедренной кости на фоне

применения рыбьего жира, соевого и льняного масла

3.4.5. Влияние рыбьего жира, соевого и льняного масла на уровне экспрессии мРНК генов-мишеней

3.4.6. Обсуждение о влиянии рыбьего жира, соевого и льняного масла на формирование костной ткани у крыс на фоне приема преднизолона

3.5. Особенности поступления тяжелых металлов в организм человека (кадмия, ртути, свинца, мышьяка) с пищевыми продуктами

ЗАКЛЮЧЕНИЕ И ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Приложение

Приложение

Приложение

Приложение

Приложение

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

льл а-линоленовая кислота

стх с-концевой телопептид

БИЛ докозагексаеновая кислота

ЕРЛ эйкозапентаеновая кислота

ЯЛЖЬ лиганд рецептора-активатора ядерного фактора каппа-В

БКМС болезни костно-мышечной системы

ГК глюкокортикоиды

ДК дефицит кальция

Л льняное масло

МДА малоновый диальдегид

МЕ международная единица

МКБ международная классификация болезней

МНЖК мононенасыщенные жирные кислоты

МПК минеральная плотность кости

К контроль

ОК оральный кальций

ОП остеопороз

П преднизолон

ПМК потеря массы костной

ПНЖК полиненасыщенные жирные кислоты

ПТГ паратиреоидный гормон

Р розмарин

РЖ рыбий жир

С соевое масло

НЖК насыщенные жирные кислоты

СРБ С-реактивный белок

Т тимьян

ФНО- а фактор некроза опухоли-альфа

ТМ твердые металлы

ТМВ 3,3',5,5'- тетраметилбензидин

1Ь интерлейкин

ТЯЛР тартратрезистентная кислая фосфатаза

МСББ макрофагальный колониестимулирующий фактов

М1ТБ фактор, ассоциированный с микрофтальмией

Рргау полифератор пероксисом

1^-1 инсулиноподобный фактор роста

COL I ген коллагена типа I

Runx 2 белок, ядро-связывающий фактор субъединицы альфа-1

VCAM I белок, васкулярная молекула клеточной адгезии

ERK внеклеточная регулируемая киназа

BMSC мезенхимальные клетки, происходящие из костного мозга

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Эфирномасличные культуры и пищевые масла как источник получения биологически активных веществ и их роль в формировании костной ткани»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования. Одной из актуальных проблем современной биологии и медицины является поиск новых источников лекарственного сырья, способных расширить ресурсную базу и обновить ассортимент лекарственных и профилактических средств растительного и животного происхождения. В настоящее время в научной и народной медицине, ветеринарии используется около двух тысяч видов растений, но потенциальное биоразнообразие лекарственных растений, используемых человеком значительно шире. Этот пробел связан с отсутствием данных о ресурсах, недостатком сведений о составе биологически активных веществах (БАВ) в объектах, обладающих активностью и малой изученностью фармакологических свойств природных биологических ресурсов.

Отказ от синтетических соединений, консервантов и красящих веществ в фармацевтической, пищевой промышленности и замена их природными соединениями, то есть природными биологическими активными веществами, имеет важное значение для достижения цели - оздоровления населения. Исследование полезных свойств природных биологически активных соединений вызывает большой интерес со стороны мирового сообщества биологов и медиков (Boy et al., 2018).

Изучение положительного воздействия природных биологических ресурсов на живой организм открывает большие возможности для разработки новых материалов, обладающих питательными и лечебными свойствами. Роль натуральных продуктов в питании и разработке лекарственных средств растет с каждым днем. Их ценность определяется, в первую очередь, составом важных компонентов метаболизма растительного и животного сырья, в частности разнообразием и качественным составом метаболитов. Биологически активные соединения природных ресурсов растительного и животного происхождения непосредственно используются как

терапевтические агенты, сырье для синтеза лекарств и в качестве базовой модели для создания новых лекарственных препаратов.

Костные заболевания, в первую очередь, остеопороз во многих странах мира, включая Россию, входит в четвёрку основных хронических неинфекционных болезней XXI века, наряду с сердечно-сосудистыми, онкологическими заболеваниями и сахарным диабетом. Это делает его социально значимым для системы здравоохранения. В развитии остеопороза существенную роль играют экологические факторы, главный из которых -загрязнение среды химическими веществами. Токсичные элементы, занимают ведущее место в комплексе антропогенных воздействий на функциональное состояние организма, на метаболизм различных органов и тканей, включая соединительную и костную (Нургалеев, 2013; Степанова, 2015).

Такие биологические ресурсы, как растения, издавна занимают прочную позицию в медицине. Многочисленные химические соединения, извлеченные из растений, обладают широким спектром биологической активности, в т.ч. влияют на метаболические заболевания костей.

В последние годы возродился интерес к исследованиям хозяйственно-полезных характеристик эфиромасличных растений и растительных жиров. Важнейшими параметрами, которые определяют ценность масличных растений, являются содержащиеся в них ароматические эфирные масла и другие полезные компоненты. На сегодняшний день созданы только предпосылки для изучения рационального использования биоресурсного потенциала ароматических растений в пищевом производстве (Герасименко с соавт., 2016; Mawalagedera et а1., 2019). Использование биологических ресурсов в качестве натурального продукта, требует поиска новых путей, в частности фундаментальных и прикладных исследований ученых, которые создали бы предпосылки рационального использования биоресурсного потенциала ароматических растений в производстве ингредиентов, необходимых для выпуска лекарственного сырья, биологических добавок и

пищевых продуктов, обогащенных незаменимыми компонентами растительного или животного происхождения. В связи с этим актуальным является всестороннее изучение биологической роли источников природных биологически активных веществ в живом организме.

Степень разработанности темы исследования. В период подготовки работы определен круг биологических объектов как потенциальных источников лекарственного сырья, которые в дальнейшем могут быть использованы как лекарственные или профилактические средства в профилактике и лечении остеопороза и других заболеваний костной ткани. В список исследуемых биологических объектов вошли тимьян, розмарин, соя культурная, лен обыкновенный, а также рыбий жир.

Тимьян (Thymus vulgaris L.) является ароматическим растением и принадлежит к семейству Lamiaceae. Тимьян широко применяется в традиционной медицине, пищевой и фармацевтической промышленности. Он признан важным источником многих биологически активных соединений, которые имеют многообещающий терапевтический потенциал в лечении различных заболеваний (Тевфик, Егорова, 2019). Полезные свойства тимьяна обусловлены вторичными метаболитами, в частности фенольными соединениями, такими как розмариновая, кофейная, гентизиновая, п-кумаровая, феруловая и п-гидроксибензойная кислоты. Эфирное масло, извлеченное из тимьяна, содержит также около 25 различных флавоноидов, среди которых есть флавоны (апигенин, лютеолин и 6-гидроксилютеолин), оказывающие антиоксидантное, противовоспалительное, антибактериальное и противогрибковое действие (Tohidi et al., 2017; Alsaraf et al., 2019).

Розмарин (Rosmarinus officinalis L.) - вечнозеленое многолетнее лекарственное растение, которое принадлежит к семейству Lamiaceae. Розмарин является естественным источником многих важных фитохимических веществ и широко используется в фармацевтической, пищевой и косметической промышленности (Kompelly et al., 2019).

Основными составляющими эфирного масла розмарина являются камфора, 1,8-цинеол, а-пинен, борнеол, камфен, Р-пинен и лимонен в пропорциях, которые варьируют в зависимости от вегетативной стадии и биоклиматических условий произрастания. Розмариновое масло часто используется в качестве приправы к пище. Благодаря своему химическому составу розмарин обладает антибактериальным, противогрибковым и антиоксидантным свойствами (Bouyahya et al. (Bouyahya et al., 2017; Bourhia et al, 2019).

Соя культурная (Glycine max (L.) Merr.) - травянистое растение из семейства Fabaceae. Это наиболее широко распространенная масличная культура, произрастающая в различных климатических условиях. Соевые бобы обеспечивают организм растительным белком и являются природным источником большого количества химических соединений (Рамазанова, 2016; Julia et al., 2019).

Лен обыкновенный (Linum usitatissimum L.) относится к семейству Linaceae. Льняное масло содержит большое количество биологически активных соединений, которые оказывают гиполипидемическое и антиоксидантное действие. Его широкое применение объясняется тем, что льняное масло в организме приводит к снижению окислительного стресса, артериосклероза, гиперхолестеринемии и стеатоза печени (Jeyapal et al., 2018).

Рыбий жир используется в пищевой и фармацевтической промышленности, в сельском хозяйстве и аквакультуре в качестве кормовой добавки. Высокий уровень ценных питательных длинноцепочечных полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК), в основном эйкозапентаеновой (EPA) и докозагексаеновой (DHA), наряду с их физико-химическими свойствами, определяет рыбий жир как перспективный и экономически ценный биологический продукт.

Тимьян, розмарин, соя и лен имеют широкий ареал произрастания, культивируются повсеместно и встречаются как на территории Египта, так и

на территории России, в частности Республики Татарстан (РТ)), что делает доступным и актуальным применение данных растений в различных регионах. На сегодняшний день отсутствует полноценная и исчерпывающая информация о влиянии эфирных масел тимьяна и розмарина, соевого, льняного масла и рыбьего жира на формирование костной ткани. В связи с этим, установление возможности применения и определения роли эфиромасличных растений в формировании костной массы требует получения новых данных и определяет актуальность проведенных исследований. Цель исследования. Изучение перспективных источников природных биологически активных веществ и определение биологической роли эфиромасличных растений и рыбьего жира в формировании костной ткани на основе биохимических, гистологических и молекулярно-генетических методов исследований.

Для достижения поставленной цели необходимо было выявлять перспективные биологические ресурсы и провести исследования химического состава и свойств избранных объектов. Задачи исследований:

1. Изучить состав и влияние эфирных масел тимьяна и розмарина на костную ткань крыс.

2. Провести определение жирно-кислотного состава льняного масла и его активных компонентов, выявить их влияние на костную ткань.

3. Оценить жирно-кислотный состав соевого масла, его активных компонентов и их влияние на костную ткань.

4. Установить жирно-кислотный состав рыбьего жира, его активных компонентов (Д3) и оценить влияние на костную ткань.

5. Определить экспрессию генов (остеокальцина и катепсина К), отвечающих за костеобразование и резорбцию кости, методом количественной полимеразной цепной реакции (RTqPCR) в реальном времени.

6. Выявить причины появления остеопораза, провести оценку риска от воздействия контаминант (тяжелых металлов (ТМ): ртути, свинца, мышьяка и кадмия), обусловленного продуктами питания населения. Научная новизна. Впервые с использованием биохимических и гистологических методов исследования на молекулярном и генетическом уровнях выявлено профилактическое действие природных биоактивных соединений растений, таких как тимьян, розмарин и пищевых масел, на критическую потерю костной массы у крыс.

Впервые изучены и экспериментально продемонстрированы механизмы действия биоактивных соединений рыбьего жира, льняного и соевого масла на экспрессию генов (остеокальцин и катепсин К). Определена эффективность действия биоактивных соединений натуральных масел на показатели биологических маркеров остеопороза (минеральная плотность кости, масса и длина бедренной кости) и биохимические показатели крови у экспериментальных животных.

Впервые установлено, что включение биологически активных соединений в рацион питания крыс на фоне приема преднизолона (глюкокортикоидного лечения), способствует утолщению и повышению минеральной плотности костной ткани.

На территории РТ (Республики Татарстан) установлено, что поступление кадмия, ртути, свинца, мышьяка с продуктами питания способствует риску формированию развития неблагоприятных эффектов, включая возникновение аномалий и заболеваний костной ткани. Теоретическая и практическая значимость. Роль вторичных метаболитов - эфирных масел тимьяна и розмарина, жирных кислот соевого, льняного масла и рыбьего жира, полученных в виде экстрактов определяют значение проведенного исследования и могут быть использованы для профилактики нормального роста и развития костей и лечения костных заболеваний.

Получены новые данные о положительном влиянии эфирных масел розмарина и тимьяна на формирование костной ткани крыс. Результаты исследований по применению биологически активных соединений в рационе крыс на фоне приема преднизолона (глюкокортикоидного лечения) говорят о повышении минеральной плотности костной ткани. Эксперименты по изучению механизмов действия биоактивных соединений доказывают влияние рыбьего жира, льняного и соевого масла на экспрессию генов (остеокальцин и катепсин К). На территории РТ впервые определены приоритетные химические загрязнители, поступающие с продуктами питания на уровне не превышающем гигиенические регламенты, но формирующих средний и высокий риск заболевания для населения.

Материалы настоящего исследования использованы в учебном процессе кафедры биоэкологии, гигиены и общественного здоровья ИФМиБ КФУ, ФГБОУ ДПО РМАНПО Минздрава России, Национального исследовательского центра (Каир, Египет).

Материалы и методы исследования. При выполнении диссертационной работы были применены следующие методы исследования: эпидемиологические, химико-аналитические, математические,

биохимические, гистопатологические, генетические, санитарно-гигиенические и статистические. Оценка значения пищевых масел для формирования костной ткани крыс подтверждено биохимическими и гистологическими методами, а также на молекулярно-генетическом уровне. Оценка риска проводилась по данным социально-гигиенического мониторинга (СГМ) ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии РТ» согласно «Руководства по оценке риска для здоровья населения (Р 2.1.10.1920-04)». Публикации по теме диссертации. Основные результаты диссертации изложены в 15 публикациях, из которых 3 статьи опубликованы в журналах из базы SCOPUS и Web of Science, 2 статьи опубликованы в журнале рекомендованных ВАК РФ.

Положения, выносимые на защиту:

1. Введение эфиромасличных растений в рацион крыс привело к достоверному улучшению минеральной плотности кости в группах с применением тимьяна на уровне Me (0,1357 ± 0,0051) и 95Perc (0,1577±0,0013) и в группах с применением розмарина на уровне Me (0,1305 ± 0,0064) и 95Perc (0,1581±0,0076).

2. Использование рыбьего жира в контрольной группе по результатам гистологических исследований бедренной кости крыс показало нормальную толщину кортикального слоя и остеоцитов без гистопатологических изменений.

3. В группах. потребляющих рыбий жир, соевое масло и льняное масло усиливается экспрессия мРНК остеокальцина , по сравнению с преднизолоновой группой.

Степень достоверности и апробация результатов. Научные положения и практические рекомендации, сформулированные в диссертации, подтверждаются достаточным количеством исследований в условиях эксперимента. Результаты настоящих исследований, представленные первичной документацией, диссертацей и статистическими анализами проверены и признаны достоверными.

Апробация. Материалы исследований доложены на следующих конференциях: «4th International Conference on Spine and Spinal Disorders», 0304 сентября 2019 г., Лондон, Великобритания; «Глобальная встреча экспертов по границам в области продовольственной безопасности и питания (Food Security 2019)», 09-11 сентября 2019 г., Эдинбург, Шотландия; «2я Евро-Глобальная Международная конференция по пищевой науке и технике (FAT2019)», 19-21 сентября 2019 г., Лондон, Великобритания; 77я Международная научно-практическая конференция молодых ученых и студентов «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины», 24-27 апреля 2019 г., Волгоград; Первая Бухарская

Международная конференция студентов-медиков и молодежи, 23-25 мая 2019 г., Бухара; Международная научная конференция (Молодые исследователи -регионам), 23-24 апреля 2019 г., Вологда; VIII Международная научно-практическая конференция «Стратегии устойчивого развития социально -экономических, биологических и технических систем: современная практика и концепции модернизации», 02 августа 2019, Воронеж; Всероссийский форум с Международным участием «Продуктивное долголетие: доказательная медицина и трансдисциплинарный синтез», 17-18 октября 2019 г., Москва; Международная конференция по клинической и фармацевтической микробиологии «Развитие исследований в области клинической и фармацевтической микробиологии», 23-25 октября 2019 г., Рим, Италия. Личный вклад автора заключается в разработке и проведении настоящей исследовательской работы по поиску и анализу научной литературы, обосновании и применений современных методик исследований, проведении экспериментальных работ на объектах, обработке, анализе, обобщении собранного материала и его изложении, а также разработке рекомендаций по применению результатов исследования.

Структура и содержание диссертации. Работа изложена на 151 страницах машинописного текста, содержит 15 таблиц, 33 рисунка. Настоящая диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, обсуждения результатов, заключения и выводов, списка литературы, который включает 210 источников

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Растительные ресурсы и животные масла как источник природных биологически активных соединений и их использование

Применение целебного потенциала растений известно с давних времен истории человечества. Широко использовались травы с лечебными свойствами и на Руси. Первые, книги - травники, появились в XI в., а XVIII в., с созданием Российской Академии наук, началось изучение лекарственных

15

растений. До настоящего времени растения являются неистощимым источником биологически активных веществ, на основе которых создаются лекарственные средства. На территории России произрастает более 20 тыс. видов низших и высших растений (травянистых, кустарниковых и древесных пород), из которых около 2500 видов отнесены к условно лекарственным, из них около 300 разрешены к использованию в медицинской практике (Сидельников, 2013). В настоящее время лекарственными называют растения, которые применяются для лечения и профилактики различных заболеваний людей, животных, или же употребляются в качестве сырья для производства лекарственных, лечебно-косметических средств, биологически активных добавок (БАД).

Многочисленные химические соединения, извлеченные из различных лекарственных растений, обладают различной биологической активностью. Во всем мире растет интерес к лекарственным травам, так как на основе их полезных терапевтических эффектов разрабатываются все новые и новые лекарства. Биологические ресурсы натуральных продуктов могут обеспечить новые и важные пути достижения различных фармакологических целей.

Лекарственные растения играют важную роль в лечении заболеваний человека и животных. Однако использование биологических ресурсов в качестве натурального продукта невозможно без проведения масштабных фундаментальных и прикладных исследований (Герасименко с соавт., 2016; Mawalagedera et al., 2019). Считается, что только около 10 % из 250 000 видов растений в мире изучались с целью дальнейшего использования их в здравоохранении. Существует мнение, что около 60 000 видов, вероятно, исчезнут к 2050 году, поэтому необходимо срочно искать новые биологически активные соединения с желаемой терапевтической активностью. Подход к поиску новых лекарств через натуральные продукты оказался единственной наиболее успешной стратегией. В последнее десятилетие исследования были сосредоточены на научной эволюции традиционных препаратов

растительного происхождения для лечения различных заболеваний (АпаМ а!, 2019; Бе ОИуеиа а а!, 2019).

Большинство натуральных продуктов содержит большое количество биологически активных соединений, от которых зависят питательные и терапевтические свойства лекарственных растений. Кроме того, данные полезные свойства лекарственных растений могут использоваться в других областях, таких как питание и общественное здравоохранение. Принимая во внимание природу растения, их способность создавать биологически активные веществ, с полезными свойствами необходимо проводить дополнительные исследования по использованию ресурсов растений для улучшения здоровья людей (Руе & а!., 2017; МШа1 & а!., 2019). Большинство современных функциональных пищевых продуктов разрабатывали из индивидуальных соединений лекарственных растений, основываясь на их питательное и этнофармакологическое применение. Роль натуральных продуктов в питании и разработке лекарственных средств возрастает не только тогда, когда биоактивные соединения непосредственно используются в качестве терапевтических агентов, но и тогда, когда они используются в качестве сырья для синтеза лекарств или в качестве базовой модели для поиска новых биологически активных соединений.

Сегодня пищевая промышленность старается двигаться в направлении чистой маркировки своей продукции. Поэтому удаление синтетических консервантов из пищевых рецептур и замена их натуральными консервантами - биологическими ресурсами - приобрели большое значение не только для достижения безопасности пищевых продуктов, но также для улучшения здоровья населения и лечения некоторых заболеваний природными средствами.

1.2 Тимьян обыкновенный (Thymus vulgaris L.) 1.2.1 Общая характеристика тимьяна обыкновенного

Тимьян обыкновенный (Thymus vulgaris L.) (рис.1) является ароматическим растением и относится к семейству Lamiaceae. Обладает ароматическим запахом, широко применяется в традиционной медицине, пищевых добавках и фитофармацевтических препаратах. Он признан важным источником многих биологически активных соединений, которые имеют многообещающий терапевтический потенциал для лечения различных типов заболеваний.

Систематическое положение тимьяна обыкновенного: Надцарство: Eukaryota (Эукариоты) Царство: Plantae (Растения)

Тип/Отдел: Angiosperms (Цветковые растения, или Покрытосеменные)

Класс: Magnoliopsida (Магнолиопсида)

Семейство: Lamiaceae (Губоцветные, или яснотковые)

Подсемейство: Nepetoideae (Котовниковые)

Род: Thymus (Тимьян)

Вид: Thymus vulgaris L. (Тимьян обыкновенный)

Рисунок 1. Тимьян обыкновенный (Thymus vulgaris L.)

Род Thymus насчитывает около 400 видов, распространенных в умеренном поясе Европы, Азии и Северной Африке. Полиморфный род, на Евроазиатском пространстве почти 200 видов. Наибольшее число видов произрастает в Европейской части.

В Татарстане встречается 6 представителей рода Thymus (Сосудистые растения Татарстана, 2000).

1.2.2. Состав и свойства тимьяна обыкновенного

В последние два десятилетия были предприняты определенные усилия для выявления и количественного определения биологически активных и фитохимических компонентов тимьяна, которые включают фенольные соединения и терпеноиды. Эфирное масло тимьяна богато тимолом, карвакролом, п-цименом и у-терпиненом. Высушенное растение Thymus vulgaris L. содержит 1-2,5 % эфирного масла. Большая часть летучих веществ, обнаруженных в тимьяновом масле, принадлежит к группе монотерпенов и фенольных монотерпенов в качестве основного представителя (30-55 %). Эти компоненты включают линалол, мирцен, камфару, борнеол, пинен, кариофиллен (6), п-цимен, карвакрол, тимол, терпинен, лимонен и терпинол. На основании тестов in vitro сообщалось, что эфирные масла и их химические составляющие, такие как тимол и карвакрол, обеспечивают антимикробные и антиоксидантные свойства, которые в санитарно-гигиенических целях используются в «активной упаковке» свежих продуктов и мяса (Шелегова с соавт., 2017; Skendi et al., 2017; Boskovic et al., 2019).

Кроме того, тимьян содержит фенольные соединения - розмариновую кислоту, наличие которой способствует коммерческому использованию травы, а также такие кислоты, как кофейная, гентизиновая, п-кумаровая, сириньяновая, феруловая и п-гидроксибензойная. Эфирное масло, извлеченное из тимьяна, содержит около 25 различных биоактивных флавоноидов, среди которых есть флавоны - апигенин, лютеолин и 619

гидроксилютеолин. Флавоны эфирного масла тимьяна оказывают антиоксидантное, противовоспалительное, антибактериальное и противогрибковое действие (Tohidi et al., 2017; Alsaraf et al., 2019).

В 2016 году была защищена диссертация на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук по специальности 14.04.02 -фармацевтическая химия, фармакогнозия Старчак Юлии Анатольевны «Фармакогностическое изучение растений рода Тимьян (Thymus l.) как перспективного источника получения фитопрепаратов»

1.2.3. Область произрастания тимьяна обыкновенного

Родиной вида считается Средиземноморье, где он растен в естественных условиях. Эфиромасличное растение тимьян, используемое в кулинарных и лечебных целях, произрастает практически повсеместно. Оно встречается во многих частях света, особенно в средиземноморском регионе. Тимьян можно обнаружить также дикорастущим на горной возвышенности (до 800 м над уровнем моря). Растение культивируется в большинстве европейских стран, таких как Франция, Испания, Италия, Болгария, но также хорошо культивируется в нескольких африканских странах: Египет, Марокко, Алжир, Тунис, Ливия, Камерун, Нигерия и Южная Африка (Wesolowska, Jadczak, 2019). Thymus vulgaris L. лучше всего выращивать в жарком солнечном месте с хорошо дренированной почвой. Обычно тимьян сажают весной. Растение может размножаться семенами, черенками или разделенными корневыми участками.

В течение многих веков люди использовали тимьян в качестве ароматизатора, кулинарной травы и в фитотерапии. Тимьян выращивается в коммерческих целях во многих странах для производства высушенных листьев, тимьянового масла, экстрактов тимьяна и олеорезинов. Сухие и свежие листья тимьяна широко используются для придания вкуса мясным блюдам, супам и салатам. В народной медицине из него готовят травяные чаи

для облегчения головной боли, зубной боли, простуды, астмы и ревматизма (Л^^ et al, 2019).

1.2.4. Лекарственные свойства тимьяна

Тимьян широко применяется в пищевой и ароматической промышленности в качестве пищевых добавок и усилителя вкуса. Тимьян является ценным источником эфирных масел, которые богаты тимолом, карвакролом, флованоидами а их экстракты - фенольными кислотами. Благодаря его антимикробным и антиоксидантным свойствам тимьян используют в качестве консерванта в напитках и кондитерских изделиях. Помимо этих эффектов, тимьян проявляет различные виды биологической активности. Следовательно, он может быть использован в качестве источника при разработке совершенно новых антиоксидантов и антибиотиков. Разработка пищевых добавок на основе эфирных масел тимьяна с антиоксидантными и антимикробными свойствами, в последние годы является важным шагом на пути к производству чистой маркировке и полезных пищевых продуктов. (ЕгШгк, et al., 2017; 7аш et al., 2020).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Элбахнасави Амр Самир Маамун Абделджаффар, 2021 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Аюпова Р.Б. Эфирные масла: достиженияи перспективы, современные тенденции изучения и применения / Р.Б. Аюпова, З.Б. Сакипова, Р.Д. Дильбарханов // Вестник КазНМУ, №5(3)- 2013. - 74-78.

2. Бакин О.В., Рогова Т.В., Ситников А.П. Сосудистые растения Татарстана. - Казань : изд-во КГУ, 2000. - 496 с.

3. Белопухов С.Л. Динамика накопления и компонентного состава эфирного масла розмарина (Rosmarinus officinalis L.), произрастающего на южном берегу Крыма / С.Л. Белопухов, Л.А. Хлыпенко, О.М. Шевчук, С.А. Феськов, Л.Б. Дмитриев, В.Л. Дмитриева // Известия ТСХА. - 2017. - вып. 6. - С. 129-140.

4. Буймова С.А. Оценка риска и ущерба здоровью населения при употреблении воды и продовольствия, содержащих химические загрязнения / С.А. Буймова, А.Г. Бубнов, Ю.В. Царев, А.О. Семенов // Известия высших учебных заведений. Серия: химия и химическая технология. - 2019. - Т. 62. - вып. 6. - С. 119-130.

5. Валеева Э.Р. Особенности пищевого поведения сельского населения Республики Татарстан / Э.Р.Валеева, Ф.М. Камалова // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. - 2015. - № 1. -С. 29-31.

6. Гайсин, Р.И. Размещение сельского населения и населенных пунктов республики Татарстан во второй половине XX и в начале XXI веков / Р.И. Гайсин, И.Т. Гайсин // Самарский научный вестник. - 2013. - № 3 (4). - С. 22-24.

7. Герасименко Н.Ф. Здоровое питание и его роль в обеспечении качества жизни / Н.Ф. Герасименко, В.М. Позняковский, Н.Г. Челнакова // Технологии пищевой и перерабатывающей промышленности АПК-продукты здорового питания. - 2016. - № 4(12). - С. 52-57.

8. Зайцева Н.В. Анализ рисков для здоровья населения Российской Федерации, обусловленных загрязнением пищевых продуктов / Н.В. Зайцева // Анализ риска здоровью. - 2018. - № 4. - С. 13-23.

9. Зайцева Н.В. Правовые аспекты оценки риска для здоровья населения при обеспечении без-опасности товаров: мировой зарубежный опыт и практика Таможенного союза / Н.В. Зайцева, И.В. Май // Анализ риска здоровью. - 2013. - № 3. - С. 4-16.

10. Зеленцов С.В. История культуры льна в мире и России / С. В. Зеленцов // Масличные культуры. - 2017. - № 1(169). - С. 93-103.

11. Кавтарашвили А.Ш. Производство функциональных яиц. Сообщение I. роль ю-3-полиненасыщенных жирных кислот / А.Ш. Кавтарашвили, И.Л. Стефанова, В.С. Свиткин, Е.Н. Новоторов // Сельскохозяйственная биология. - 2017. - Т. 52. - № 2. - С. 349-366.

12. Камалова Ф. М. Приоритетные факторы питания сельского населения Республики Татарстан /Ф.М. Камалова, Э.Р. Валеева // Проблемы социальной гигиены, здравоохранения и истории медицины. - 2015. - № 1. - C. 13-14.

13. Колупаева Е.А. Современный взгляд на рыбий жир / Е.А.Колупаева, Л.М.Беляева // Клиническая практика и здоровье. № 5. - 2013. - С. 100110.

14. Кундеева Г.А. Питание как фактор риска здоровья человека / Г.А. Кундеева // Здоровье - основа человеческого потенциала проблемы и пути их решения. - 2014. - Т. 9. - № 2. - 854 с.

15. Лесняк О.М. Остеопороз в Российской Федерации: эпидемиология, медико-социальные и экономические аспекты проблемы (обзор литературы) / О.М. Лесняк, И.А. Баранова, К.Ю. Белова, Е.Н. Гладкова, Л.П. Евстигнеева, О.Б. Ершова, Т.Л. Каронова, А.Ю. Кочиш, О.А. Никитинская, И.А. Скрипникова // Травматология и ортопедия России. - 2018. - Т. 24. - № 1. - С. 155-168.

16. Лесняк О.М. Профилактика, диагностика и лечение дефицита витамина D и кальция у взрослого населения России и пациентов с остеопорозом (по материалам подготовленных клинических рекомендаций) / О.М. Лесняк, О.А. Никитинская, Н.В. Торопцова, Ж.Е. Белая, К.Ю. Белова, Е.В. Бордакова, А.Ж. Гильманов, Е.Ю. Гуркина, В.В. Дорофейков, О.Б. Ершова // Научно-практическая ревматология. - 2015. - Т. 53. - № 4. -С. 403-408.

17. Немерешина О.Н. Изучение биологически активных веществ в растениях Veronica chamaedrys L. и v. officinalis L. / О.Н.Немерешина, Н.Ф.Гусев, Г.В.Петрова // Успехи современного естествознания. - 2013. - № 8 - С. 113-118.

18. Никитина А.С. Изучение фенольных соединений листьев розмарина лекарственного (Rosmarinus officinalis l.) из коллекции Никитского ботанического сада / А.С. Никитина, С.А. Феськов, Е.Р. Гарсия, А.А. Шамилов, Н.В. Никитина . - Сборник научных трудов ГНБС. 2018. Том 146. - С. 201-204.

19. Нуруллина, Г.М. Костное ремоделирование в норме и при первичном остеопорозе: значение маркеров костного ремоделирования / Г.М. Нуруллина, Г.М. Ахмадуллина // Архивъ внутренней медицины. - 2018. - Т. 8 - № 2(40). - С. 100-110.

20. Пузин С.Н. Оптимизация питания пожилых людей как средство профилактики преждевременного старения / С.Н. Пузин, А.В. Погожева,

B.Н. Потапов // Вопросы питания - 2018. - Т. 87 - № 4. - С. 69-77.

21. Рамазанова С.А. Идентификация сортов сои (Glycine max L.) с использованием микросателлитных локусов ДНК / С.А. Рамазанова // Масличные культуры. - 2016. - № 2(166). - С. 63-67.

22. Сидельников Н.И. Лекарственные растения и их значение / Н.И.Сидельников // Зернобобовые и крупяные культуры, №2. - 2013. -

C.141-146.

23. Синдирева А.В. Проблема нормирования содержания химических элементов в растительном организме / А.В. Синдирева, А.В. Ермохин // Биогеохимия химических элементов и соединений в природных средах.

- 2018. - Т.1. - С. 133-136.

24. Степанова Н.В. Основные тенденции здоровья детского населения Республики Татарстан / Н.В. Степанова, Э.Р. Валеева // Гигиена и санитария. - 2015. - Т. 94. - № 1. - С. 92-97.

25. Степанова Н.В. Оценка химической безопасности пищевых продуктов / Н.В. Степанова, В.М. Смирнов, Р.Я. Хамитова // Казанский медицинский журнал. - 2005. - Т. 86. - № 5. - С. 419-422.

26. Степанова Н.В. Подходы к ранжированию городской территории по уровню загрязнения тяжелыми металлами / Н.В.Степанова, Э.Р.Валеева, С.Ф.Фомина // Гигиена и санитария. - 2015. - №. 5. - С. 56-61.

27. Тевфик А.Ш. Влияние условий культивирования и гормонального состава питательной среды на микроразмножение in vitro тимьяна обыкновенного / А.Ш. Тевфик, Н.А. Егорова // Таврический вестник аграрной науки. - 2019. - № 1. - С. 93-102.

28. Тохсырова З.М. Изучение антимикробного действия эфирного масла из побегов Розмарина лекарственного (Rosmarinus Officinalis L., Lamiaceae). / З.М. Тохсырова, А.С. Никитина, О.И. Попова // Фармация и фармакология Т. 4 № 1 (14), - 2016. - С. 66-71.

29. Тутельян, В.А. Научные основы здорового питания / В.А. Тутельян, А.И. Вялков, А.Н. Разумов, В.И. Михайлов, К.А. Москаленко, А.Г. Одинец, В.Г. Сбежнева, В.Н. Сергеев. - М.: Издательский дом «Панорама. - 2010.

- 816 с.

30. Феттер В. В. Сравнительная оценка риска здоровью населения, детерминированного химической контаминацией пищевых продуктов различного происхождения / В.В. Феттер, А.Д. Поляков // Анализ риска здоровью. -2014. - № 2. -С. 55-56.

31. Фомина С.Ф. Неканцерогенный риск для здоровья детского населения г. Казани, обусловленный контаминацией пищевых продуктов и сырья /С.Ф.Фомина, Н.В. Степанова // Анализ риска здоровью. - 2017. - № 4. - С.42-48.

32. Фролова О.А. Оценка риска развития канцерогенных и неканцерогенных эффектов при употреблении продуктов питания / О.А. Фролова, М.В. Карпова // Гигиена и санитария. - 2012. - № 5. - С. 107108.

33. Цориев Т.Т. Оценка диагностических возможностей коллагенового маркера костеобразования (P1NP) в сравнении с остеокальцином при болезни Иценко-Кушинга / Т.Т. Цориев, Ж.Е. Белая, Л.Я. Рожинская, Л.В. Никанкина // Остеопороз и остеопатии. - 2019. - Т. 22. - № 1. - С. 10-17.

34. Шелегова Н.А. Характеристика свойств тимьяна (THYMUS) как пряно-ароматического сырья пищевых технологий / Н.А. Шелегова, А.Ю. Болотько, Т.В. Урбанович // Техника и технология пищевых производств. - 2017. - С. 393.

35. Abd El-Aziz, G.S. The prenatal toxic effect of methylmercury on the development of the appendicular skeleton of rat fetuses and the protective role of vitamin E / G.S. Abd El-Aziz, M.M.O. El-Fark, H.A.M. Saleh // Anat. Rec. Adv. Integr. Anat. Evol. Biol. - 2012. - Vol. 295. - №. 6. - P. 939-949.

36. Abdel-Naim, A.B. Rutin isolated from Chrozophora tinctoria enhances bone cell proliferation and ossification markers / A.B. Abdel-Naim, A.A. Alghamdi, M.M. Algandaby, F.A. Al-Abbasi, A.M. Al-Abd, B.G. Eid, H.M. Abdallah, A.M. El-Halawany // Oxid. Med. Cell. Longev. - 2018. - Vol. 2018. - P. 1-10.

37. Abou-Saleh, H. Bone Benefits of Fish Oil Supplementation Depend on its EPA and DHA Content / H. Abou-Saleh, A. Ouhtit, G.V Halade, M.M. Rahman // Nutrients. - 2019. - Vol. 11. - №. 11. - P. 2701.

38. Abu-Serie, M.M. The ameliorating effect of the combined extract from Greek Thymus vulgaris and bee's honey on the hydrocortisone-induced osteoporosis in rat bone cells via modulating the bone turnover, oxidative stress, and inflammation / M.M. Abu-Serie, N.H. Habashy // RSC Adv. - 2018. - Vol. 8. - №. 50. - P. 28341-28355.

39. Adami, G. Glucocorticoid-induced osteoporosis: 2019 concise clinical review / G. Adami, K.G. Saag // Osteoporos. Int. - 2019. - Vol. 30. - №. 6. - P. 1145-1156.

40. Akarirmak, U. LONG TERM FOLLOW-UP OF SUBJECTS FROM THE FRACTURK STUDY FOR NEW FRACTURES, MORTALITY AND MORBIDITY SPRINGER LONDON LTD 236 GRAYS INN RD, 6TH FLOOR, LONDON WC1X 8HL, ENGLAND. - 2017. - P. 404-405.

41. Akarirmak, U. Osteoporosis: a major problem-worldwide / U. Akarirmak // Arch Sport. Med. - 2018. - Vol. 2. - №. 1. - P. 106-108.

42. Ali, H. Environmental chemistry and ecotoxicology of hazardous heavy metals: environmental persistence, toxicity, and bioaccumulation / H. Ali, E. Khan, I. Ilahi // J. Chem. - 2019. - Vol. 2019. - P. 1-14.

43. Ali, H. Environmental chemistry in the twenty-first century / H. Ali, E. Khan // Environ. Chem. Lett. - 2017. - Vol. 15. - №. 2. - P. 329-346.

44. Almanea, A. The Potential Gastrointestinal Health Benefits of Thymus Vulgaris Essential Oil: A Review / A. Almanea, G.S.A. El-Aziz, M.M.M. Ahmed // Biomed. Pharmacol. J. - 2019. - Vol. 12. - №. 04. - P. 1793-1799.

45. Almeida Chuffa, L.G. Soybean seed oil: Nutritional composition, healthy benefits and commercial applications Nova Science Publishers, Inc. - 2014. -P. 1-24.

46. Alsaraf, S. Chemical composition, in vitro antibacterial and antioxidant potential of Omani Thyme essential oil along with in silico studies of its major constituent / S. Alsaraf, Z. Hadi, W.M. Al-Lawati, A.A. Al Lawati, S.A. Khan // J. King Saud Univ. - 2019. - Vol. 32. - №. 1. - P. 1021-1028.

47. Amiche, M.A. Fracture risk in oral glucocorticoid users: a Bayesian metaregression leveraging control arms of osteoporosis clinical trials / M.A. Amiche, J.M. Albaum, M. Tadrous, P. Pechlivanoglou, L.E. Levesque, J.D. Adachi, S.M. Cadarette // Osteoporos. Int. - 2016. - Vol. 27. - №. 5. - P. 1709-1718.

48. Amiche, M.A. Impact of cumulative exposure to high-dose oral glucocorticoids on fracture risk in Denmark: a population-based case-control study / M.A. Amiche, S. Abtahi, J.H. M. Driessen, P. Vestergaard, F. de Vries, S.M. Cadarette, A.M. Burden // Arch. Osteoporos. - 2018. - Vol. 13. - №. 1.

- 30 p.

49. Anand, U. A Comprehensive Review on Medicinal Plants as Antimicrobial Therapeutics: Potential Avenues of Biocompatible Drug Discovery / U. Anand, N. Jacobo-Herrera, A. Altemimi, N. Lakhssassi // Metabolites. - 2019.

- Vol. 9. - №. 11. - 258 p.

50. Andrade, J.M. Rosmarinus officinalis L.: an update review of its phytochemistry and biological activity / J.M. Andrade, C. Faustino, C. Garcia, D. Ladeiras, C.P. Reis, P. Rijo // Futur. Sci. OA. - 2018. - Vol. 4. - №. 4. -P. FSO283.

51. AOCS. 2009. Official Methods and Recommended Practices of the American Oil Chemists' Society, AOCS, Champaign, IL.

52. Banu, J. Alternative therapies for the prevention and treatment of osteoporosis / J. Banu, E. Varela, G. Fernandes // Nutr. Rev. - 2012. - Vol. 70. - №. 1. -P. 22-40.

53. Beier, E.E. Heavy Metal Ion Regulation of Gene Expression MECHANISMS BY WHICH LEAD INHIBITS OSTEOBLASTIC BONE-FORMING ACTIVITY THROUGH MODULATION OF THE Wnt/p-CATENIN SIGNALING PATHWAY / E.E. Beier, T. Sheu, D. Dang, J.D. Holz, R. Ubayawardena, P. Babij, J.E. Puzas // J. Biol. Chem. - 2015. - Vol. 290. - №. 29. - P. 18216-18226.

54. Berlin, T. On the regulatory importance of 1, 25-dihydroxyvitamin D3 and dietary calcium on serum levels of 25-hydroxyvitamin D3 in rats / T. Berlin, I. Bjorkhem // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1987. - Vol. 144. - №. 2. - P. 1055-1058.

55. Bomfim, F.R.C. Influence of low-level laser irradiation on osteocalcin protein and gene expression in bone tissue1 / F.R.C. Bomfim, V.R.G. Sella, R.L. Thomasini, H. Plapler // Acta Cir. Bras. - 2018. - Vol. 33. - №. 9. - P. 736743.

56. Borges, R.S. Rosmarinus officinalis essential oil: A review of its phytochemistry, anti-inflammatory activity, and mechanisms of action involved / R.S. Borges, B.L.S. Ortiz, A.C.M. Pereira, H. Keita, J.C.T. Carvalho // J. Ethnopharmacol. - 2019. - Vol. 229. - P. 29-45.

57. Boruga, O. Thymus vulgaris essential oil: chemical composition and antimicrobial activity / O. Boruga, C. Jianu, C. Mi§ca, I. Gole|, A.T. Gruia, F.G. Horhat // J. Med. Life. - 2014. - Vol. 7 - №. Spec Iss 3. - P. 56.

58. Boskovic, M. Antioxidative Activity of Thyme (Thymus vulgaris) and Oregano (Origanum vulgare) Essential Oils and Their Effect on Oxidative Stability of Minced Pork Packaged Under Vacuum and Modified Atmosphere / M. Boskovic, M. Glisic, J. Djordjevic, M. Starcevic, N. Glamoclija, V. Djordjevic, M.Z. Baltic // J. Food Sci. - 2019. - Vol. 84. - №. 9. - P. 24672474.

59. Bourhia, M. Antioxidant and Antiproliferative Activities of Bioactive Compounds Contained in Rosmarinus officinalis Used in the Mediterranean Diet / M. Bourhia, F.E. Laasri, H. Aourik, A. Boukhris, R. Ullah, A. Bari, S.S. Ali, M.El Mzibri, L. Benbacer, S. Gmouh // Evidence-Based Complement. Altern. Med. - 2019. - Vol. 2019. - P. 1-7.

60. Boutekedjiret, C. Extraction of rosemary essential oil by steam distillation and hydrodistillation / C. Boutekedjiret, F. Bentahar, R. Belabbes, J.M. Bessiere // Flavour Fragr. J. - 2003. - Vol. 18. - №. 6. - P. 481-484.

61. Bouyahya, A. Chemical composition of Mentha pulegium and Rosmarinus officinalis essential oils and their antileishmanial, antibacterial and antioxidant activities / A. Bouyahya, A. Et-Touys, Y. Bakri, A. Talbaui, H. Fellah, J. Abrini, N. Dakka // Microb. Pathog. - 2017. - Vol. 111. - P. 41-49.

62. Boy, H.I.A. Recommended Medicinal Plants as Source of Natural Products: A Review / H.I.A. Boy, A.J.H. Rutilla, K.A. Santos, A.M.T. Ty, I.Y. Alicia, T. Mahboob, J. Tangpoong, V. Nissapatorn // Digit. Chinese Med. - 2018. -Vol. 1. - №. 2. - P. 131-142.

63. Bullon, P. Diets based on virgin olive oil or fish oil but not on sunflower oil prevent age-related alveolar bone resorption by mitochondrial-related mechanisms / P. Bullon, M. Battino, A. Varela-Lopez, P. Perez-Lopez, S. Granados-Principal, M.C. Ramirez-Tortosa, J.J. Ochoa, M.D. Cordero, A. Gonzalez-Alonso, C.L. Ramirez-Tortosa // PLoS One. - 2013. - Vol. 8. - №. 9. - P. 1-11.

64. Calder, P.C. Marine omega-3 fatty acids and inflammatory processes: effects, mechanisms and clinical relevance / P.C. Calder // Biochim. Biophys. Acta (BBA)-Molecular Cell Biol. Lipids. - 2015. - Vol. 1851. - №. 4. - P. 469484.

65. Cao, J.J. Increasing Dietary Fish Oil Reduces Adiposity and Mitigates Bone Deterioration in Growing C57BL/6 Mice Fed a High-Fat Diet / J.J. Cao, B.R. Gregoire, K.G. Michelsen, M.J. Picklo // J. Nutr. - 2020. - Vol. 150. - №. 1.

- P. 99-107.

66. Carmouche, J.J. Lead exposure inhibits fracture healing and is associated with increased chondrogenesis, delay in cartilage mineralization, and a decrease in osteoprogenitor frequency / J.J. Carmouche, J.E. Puzas, X. Zhang, P. Tiyapatanaputi, D.A. Cory-Slechta, R. Gelein, M. Zuscik, R.N. Rosier, B.F. Boyce, R.J. O'Keefe // Environ. Health Perspect. - 2005. - Vol. 113. - №. 6.

- P. 749-755.

67. Chandrasekaran, K. Effects of organic and inorganic salts on docosahexaenoic acid (DHA) production by a locally isolated strain of Thraustochytrium sp. T01 / K. Chandrasekaran, M. Dhanraj, A. Chadha // Prep. Biochem. Biotechnol. - 2018. - Vol. 48. - №. 7. - P. 599-604.

68. Chen, F. Flaxseed oil ameliorated high-fat-diet-induced bone loss in rats by promoting osteoblastic function in rat primary osteoblasts / F. Chen, Y. Wang, H. Wang, Z. Dong, M. Zhang, J. Li, S. Shao, C. Yu, Z. Huan, J. Xu // Nutr. Metab. (Lond). - 2019. - Vol. 16. - №. 1. - P. 1-13.

69. Chen, X. Bone mineral density is related with previous renal dysfunction caused by cadmium exposure / X. Chen, G. Zhu, T. Jin, L. Lei, Y. Liang // Environ. Toxicol. Pharmacol. - 2011. - Vol. 32. - №. 1. - P. 46-53.

70. Chen, X. Effects of lead and cadmium co-exposure on bone mineral density in a Chinese population / X. Chen, K. Wang, Z. Wang, C. Gan, P. He, Y. Liang, T. Jin, G. Zhu // Bone. - 2014. - Vol. 63. - P. 76-80.

71. Chiu P.-R. Osteoblasts activate the Nrf2 signalling pathway in response to arsenic trioxide treatment / P.-R. Chiu, Y.-C. Hu, B.-S. Hsieh, T.-C. Huang, H.-L. Cheng, L.-W. Huang, K.-L. Chang // Int. J. Biochem. Cell Biol. - 2016.

- Vol. 79. - P. 327-336.

72. Compston J. Glucocorticoid-induced osteoporosis: an update / J. Compston // Endocrine - 2018. - Vol. 61. - №. 1. - P. 7-16.

73. Compston, J. UK clinical guideline for the prevention and treatment of osteoporosis / J. Compston, A. Cooper, C. Cooper, N. Gittoes, C. Gregson, N. Harvey, S. Hope, J.A. Kanis, E.V McCloskey, K.E.S. Poole // Arch. Osteoporos. - 2017. - Vol. 12. - №. 1. - P. 43.

74. Cooper, C. Healthy nutrition, healthy bones. How nutritional factors affect musculoskeletal health throughout life / C. Cooper, B. Dawson-Hughes, C. Gordon, R. Rizzoli. - 2015. - P. 1-74.

75. Cooper C. IOF compendium of osteoporosis / C. Cooper, S. L. Ferrari. - 2017.

- P. 1-77.

76. Cosman, F. Clinician's guide to prevention and treatment of osteoporosis / F. Cosman, S.J. de Beur, M. S. LeBoff, E. M. Lewiecki, B. Tanner, S. Randall, R. Lindsay // Osteoporos. Int. - 2014. - Vol. 25. - №. 10. - P. 2359-2381.

77. Derakhshanian, H. Quercetin prevents experimental glucocorticoid-induced osteoporosis: a comparative study with alendronate / H. Derakhshanian, M. Djalali, A. Djazayery, K. Nourijelyani, S. Ghadbeigi, H. Pishva, A. Saedisomeolia, A. Bahremand, A.R. Dehpour // Can. J. Physiol. Pharmacol. - 2013. - Vol. 91. - №. 5. - P. 380-385.

78. Domazetovic V. Oxidative stress in bone remodeling: role of antioxidants / V. Domazetovic, G. Marcucci, T. Iantomasi, M.L. Brandi, M.T. Vincenzini // Clin. Cases Miner. Bone Metab. - 2017. - Vol. 1 - №. 2. - 209 p.

79. Dong, H. Effects of omega-3 polyunsaturated fatty acid supplementation on bone turnover in older women / H. Dong, H. Hutchins-Wiese, A. Kleppinger, K. Annis, E. Liva, C. Lammi-Keefe, H. Durham, R. Feinn, A.M. Kenny // Int J Vitam Nutr Res. - 2014. - Vol. 84. - №. 3(4). - P. 124-132.

80. Dongre, N.N. Biochemical effects of lead exposure on battery manufacture workers with reference to blood pressure, calcium metabolism and bone mineral density / N.N. Dongre, A.N. Suryakar, A.J. Patil, I.A. Hundekari, B.B. Devarnavadagi // Indian J. Clin. Biochem. - 2013. - Vol. 28. - №. 1. - P. 6570.

81. Dorni, C. Fatty acid profile of edible oils and fats consumed in India / C. Dorni, P. Sharma, G. Saikia, T. Longvah // Food Chem. - 2018. - Vol. 238. -P. 9-15.

82. Draper, H.H. Malondialdehyde determination as index of lipid Peroxidation / H.H. Draper, M. Hadley // In Methods in enzymology. - 1990. - Vol. 186. -P. 421-431. Elkomy M.M. Anti-osteoporotic effect of medical herbs and calcium supplementation on ovariectomized rats / M. M. Elkomy, F. G. Elsaid // J. Basic Appl. Zool. - 2015. - Vol. 72 - P. 81-88.

83. El-Saeed G.S.M. Phenotype of vitamin D receptor gene polymorphisms, impact of feeding flaxseed oil, and osteoporosis in ovariectomised diabetic rats / G.S.M. El-Saeed, E.A. Elghoroury, S. Morsy, H.M. Aly, H. Wafaey // Bull. Natl. Res. Cent. - 2018. - Vol. 42. - №. 1. - 11 p.

84. Fadil M. Optimization of parameters influencing the hydrodistillation of Rosmarinus officinalis L. by response surface methodology / M. Fadil, A. Farah, I. hssane, T. Haloui, and S. Rachiq // Journal of Materials and Environmental Science. - 2015. - Vol. 6. - №. 8. - P. 2328-2336.

85. Fan C.-M. Long chain omega-3 polyunsaturated fatty acid supplementation protects against adriamycin and cyclophosphamide chemotherapy-induced bone marrow damage in female rats / C.-M. Fan, Y.-W. Su, P. R. Howe, C. J. Xian // Int. J. Mol. Sci. - 2018. - Vol. 19. - №. 2. - 484 p.

86. Figueiredo P.S. Oxidative stability of sesame and flaxseed oils and their effects on morphometric and biochemical parameters in an animal model / P.S. Figueiredo, C.J. Candido, J.A.S. Jaques, A.A. Nunes, A.R.L. Caires, F.S. Michels, J.A. Almeida, W.F.O. Filiu, P.A. Hiane, V.A. Nascimento // J. Sci. Food Agric. - 2017. - Vol. 97. - №. 10. - P. 3359-3364.

87. Gao, H. Fish oil supplementation and insulin sensitivity: a systematic review and meta-analysis / H. Gao, T. Geng, T. Huang, Q. Zhao // Lipids Health Dis. - 2017. - Vol. 16. - №. 1. - 131 p.

88. Gaya M. Antiadipogenic effect of carnosic acid, a natural compound present in Rosmarinus officinalis, is exerted through the C/EBPs and PPARy pathways at the onset of the differentiation program / M. Gaya, V. Repetto, J. Toneatto, C. Anesini, G. Piwien-Pilipuk, S. Moreno // Biochim. Biophys. Acta (BBA)-General Subj. - 2013. - Vol. 1830. - №. 6.- P. 3796-3806.

89. Gedikoglu A. Evaluation of Thymus vulgaris and Thymbra spicata essential oils and plant extracts for chemical composition, antioxidant, and antimicrobial properties / A. Gedikoglu, M. Sokmen, A. Qivit // Food Sci. Nutr. - 2019. - Vol. 7. - №. 5. - P. 1704-1714.

90. Giangregorio, L.M. Too fit to fracture: exercise recommendations for individuals with osteoporosis or osteoporotic vertebral fracture / L.M. Giangregorio, A. Papaioannou, N.J. Macintyre, M.C. Ashe, A. Heinonen, K. Shipp, J. Wark, S. McGill, H. Keller, R. Jain // Osteoporos. Int. - 2014. - Vol. 25. - № 3. - P. 821-835.

91. Griz, L. Paget's disease of bone / L. Griz, G. Caldas, C. Bandeira, V. Assunfao, F. Bandeira // Arq. Bras. Endocrinol. Metabol. - 2006. - Vol. 50.-№. 4. - P. 814-822.

92. Guilbaud A. How can diet affect the accumulation of advanced glycation end-products in the human body? / A. Guilbaud, C. Niquet-Leridon, E. Boulanger, F.J. Tessier // Foods. - 2016. - Vol. 5. - №. 4. - 84 p.

93. Gulson, B. Bone remodeling during pregnancy and post-partum assessed by metal lead levels and isotopic concentrations / B. Gulson, A. Taylor, J. Eisman // Bone. - 2016. - Vol. 89. - P. 40-51.

94. Hagiwara, H. Carnosic acid inhibits the formation of osteoclasts through attenuation of expression of RANKL / H. Hagiwara, R. Basnet, S. I. Wiyasihati, K. Nakata, K. Hagiwara, H. Miyazaki, K. Yoshida // PharmaNutrition. - 2015. - Vol. 3. - №. 1. - P. 1-6.

95. Han, X. Essential oils diversely modulate genome-wide gene expression in human dermal fibroblasts / X. Han, T.L. Parker // Cogent Med. - 2017. - Vol. 4. - №. 1. - P. 1307591.

96. Harvey,N. Osteoporosis: impact on health and economics / N. Harvey, E. Dennison, C. Cooper // Nat. Rev. Rheumatol. - 2010. - Vol. 6. - №. 2. - 99 p.

97. Heaney, R.P. Roles of vitamin D, n-3 polyunsaturated fatty acid, and soy isoflavones in bone health / R.P. Heaney, R. Carey, L. Harkness // J. Am. Diet. Assoc. - 2005. - Vol. 105. - №. 11. - P. 1700-1702.

98. Hernlund, E. Osteoporosis in the European Union: medical management, epidemiology and economic burden / E. Hernlund, A. Svedbom, M. Ivergard,

J. Compston, C. Cooper, J. Stenmark, E.V McCloskey, B. Jonsson, J. A. Kanis // Arch. Osteoporos. - 2013. - Vol. 8. - № 1(2). -136 p.

99. Hu, Y.-C. Arsenic trioxide affects bone remodeling by effects on osteoblast differentiation and function / Y.-C. Hu, H.-L. Cheng, B.-S. Hsieh, L.-W. Huang, T.-C. Huang, K.-L. Chang // Bone.- 2012. - Vol. 50. - №. 6. - P. 1406-1415.

100. Huang T.-H. Cosmetic and therapeutic applications of fish oil's fatty acids on the skin / T.-H. Huang, P.-W. Wang, S.-C. Yang, W.-L. Chou, J.-Y. Fang // Mar. Drugs. - 2018. - Vol. 16. - № 8. -256 p.

101. Hunt, J.R. Calcium requirements of growing rats based on bone mass, structure, or biomechanical strength are similar / J.R. Hunt, C.D. Hunt, C.A. Zito, J.P. Idso, L.K. Johnson // J. Nutr. - 2008. - Vol. 138. - № 8. - P. 14621468.

102. Hutchins-Wiese, H.L. High-dose eicosapentaenoic acid and docosahexaenoic acid supplementation reduces bone resorption in postmenopausal breast cancer survivors on aromatase inhibitors: a pilot study / H.L. Hutchins-Wiese, K. Picho, B.A. Watkins, Y. Li, S. Tannenbaum, K. Claffey, A.M. Kenny // Nutr. Cancer. - 2014. - Vol. 66. - № 1. - P. 68-76.

103. Iolascon, G. Are dietary supplements and nutraceuticals effective for musculoskeletal health and cognitive function? A scoping review / G. Iolascon, R. Gimigliano, M. Bianco, A. De Sire, A. Moretti, A. Giusti, N. Malavolta, S. Migliaccio, A. Migliore, N. Napoli // J. Nutr. Health Aging. -2017. - Vol. 21. - № 5. - P. 527-538.

104. Ivanovs, K. Extraction of fish oil using green extraction methods: A short review / K. Ivanovs, D. Blumberga // Energy Procedia. - 2017. - Vol. 128. -P. 477-483.

105. Jamilian, M. The effects of omega-3 fatty acids from flaxseed oil on genetic and metabolic profiles in patients with gestational diabetes mellitus: a randomized, double-blind, placebo-controlled trial / M. Jamilian, Z. Tabassi,

Z. Reiner, I. Panahandeh, F. Naderi, E. Aghadavood, E. Amirani, M. Taghizadeh, R. Shafabakhsh, M. Satari // Br. J. Nutr. - 2020. - P. 1-26.

106. Jeremiah, M.P. Diagnosis and management of osteoporosis / M.P. Jeremiah, B. K. Unwin, M.H. Greenawald, V.E. Casiano // Am. Fam. Physician. - 2015. - Vol. 92. - № 4. - P. 261-268.

107. Jeyapal, S. Substitution of linoleic acid with a-linolenic acid or long chain n-3 polyunsaturated fatty acid prevents Western diet induced nonalcoholic steatohepatitis / S. Jeyapal, S.R. Kona, S.V. Mullapudi, U.K. Putcha, P. Gurumurthy, A. Ibrahim // Sci. Rep. - 2018. - Vol. 8. - № 1. - P. 1-14.

108. Jordao Candido, C. Protective Effect of a-Linolenic Acid on Non-Alcoholic Hepatic Steatosis and Interleukin-6 and-10 in Wistar Rats / C. Jordao Candido, P. Silva Figueiredo, R. Del Ciampo Silva, L. Candeloro Portugal, J. Augusto dos Santos Jaques, J. Alves de Almeida, B. de Barros Penteado, D. Albuquerque Dias, G. Marcelino, A. Pott // Nutrients. - 2020. - Vol. 12. - № 1. -9 p.

109. Juergens, L.J. Anti-inflammatory effects of 1, 8-cineole (eucalyptol) improve glucocorticoid effects in vitro: a novel approach of steroid-sparing add-on therapy for COPD and asthma? / L.J. Juergens, K. Racke, I. Tuleta, M. Stoeber, U.R. Juergens // Synergy. - 2017. - Vol. 5. - P. 1-8.

110. Juergens, U.R. Anti-inflammatory properties of the monoterpene 1.8-cineole: current evidence for co-medication in inflammatory airway diseases / U.R. Juergens // Drug Res. (Stuttg). - 2014. - Vol. 64. - № 12. - P. 638-646.

111. Julia, N. Morphological and Anatomical Characteristics of leaves of Ten Soybean (Glycine max L. Merill) / N. Julia // Lines IOP Publishing. - 2019. -P. 120-127.

112. Kaczmarczyk-Sedlak, I. Effects of catecholamines on the intramedullary pressure in the femur in rats with prednisolone-induced osteoporosis / I. Kaczmarczyk-Sedlak, U. Cegiela, B. Nowinska, J. Folwarczna // Pharmacol. Reports. - 2006. - Vol. 58. - Julia, N.. 4. - 540 p.

113. Kaczmarczyk-Sedlak, I. Effects of thalidomide on the development of bone damage caused by prednisolone in rats / I. Kaczmarczyk-Sedlak, M. Zych, K. Rotko, L. Sedlak // Pharmacol. Reports. - 2012. - Vol. 64. - № 2. - P. 386-395.Karpouzos, A. Nutritional aspects of bone health and fracture healing / A. Karpouzos, E. Diamantis, P. Farmaki, S. Savvanis, T. Troupis // J. Osteoporos. - 2017. - Vol. 2017. - P. 1-10.

114. Kasem, M.A. Histological effect of bisphosphonate, vitamin D and olive oil on glucocorticoid induced osteoporosis (Gio) in Albino Rat / M.A. Kasem, A.M. Abdel-Aleem, A.S. Said, E.-S.G. Khedr // Egypt. J. Hosp. Med. - 2016.

- Vol. 6 - № 1. - P. 699-708.

115. Kim, T. ATP6v0d2 deficiency increases bone mass, but does not influence ovariectomy-induced bone loss / T. Kim, H. Ha, N. Kim, E.-S. Park, J. Rho, E.C. Kim, J. Lorenzo, Y. Choi, S.H. Lee // Biochem. Biophys. Res. Commun.

- 2010. - Vol. 403. - № 1. - P. 73-78.

116. Klein, K. Epigenetics in rheumatoid arthritis / K. Klein, S. Gay // Curr. Opin. Rheumatol. - 2015. - Vol. 27. - № 1. - P. 76-82.

117. Kompelly, A. Rosmarinus officinalis L.: an update review of its phytochemistry and biological activity / A. Kompelly, S. Kompelly, B. Vasudha, B. Narender // J. Drug Deliv. Ther. - 2019. - Vol. 9. - № 1. - P. 323-330.

118. Korolyov, K. A comparative study of morphophysiological characteristics of flax in controlled and natural environmental conditions. / K. Korolyov, N. Bome, L. Weisfeld // Zemdirbyste-Agriculture. - 2019. - Vol. 106. - № 1. -P. 29-36.

119. Lambert, M.N.T. Combined bioavailable isoflavones and probiotics improve bone status and estrogen metabolism in postmenopausal osteopenic women: a randomized controlled trial / M.N. T. Lambert, C.B. Thybo, S.Lykkeboe, L.M. Rasmussen, X. Frette, L.P. Christensen, P.B. Jeppesen // Am. J. Clin. Nutr. - 2017. - Vol. 106. - № 3. - P. 909-920.

120. Lane, N.E. Glucocorticoid-induced osteoporosis: new insights into the pathophysiology and treatments / N.E. Lane // Curr. Osteoporos. Rep. - 2019.

- Vol. 17. - № 1. - P. 1-7.

121. Lau, B.Y.Y. Investigating the role of polyunsaturated fatty acids in bone development using animal models / B.Y.Y. Lau, D.J.A. Cohen, W.E. Ward, D.W.L. Ma // Molecules. - 2013. - Vol. 18. - № 11. - P. 14203-14227.

122. Lavado-Garcia, J. Long-chain omega-3 polyunsaturated fatty acid dietary intake is positively associated with bone mineral density in normal and osteopenic Spanish women / J. Lavado-Garcia, R. Roncero-Martin, J.M. Moran, M. Pedrera-Canal, I. Aliaga, O. Leal-Hernandez, S. Rico-Martin, M.L. Canal-Macias // PLoS One. - 2018. - Vol. 13. - № 1. - P. 1-14.

123. Lee, S.M. The effects of omega-3 fatty acid on vitamin D activation in hemodialysis patients: a pilot study / S.M. Lee, Y.K. Son, S.E. Kim, W.S. An // Mar. Drugs. - 2015. - Vol. 13. - № 2. - P. 741-755.

124. Liu, X.L. Floral development of gymnospermium microrrhynchum (berberidaceae) and its systematic significance in the nandinoideae / X.L. Liu, J.H. Li, Y.F. Yang, J.Y. Zhu // Flora. - 2017. - Vol. 228. - P. 10-16.

125. Longo, A.B. Providing flaxseed oil but not menhaden oil protects against OVX induced bone loss in the mandible of Sprague-Dawley rats / A.B. Longo, W.E. Ward // Nutrients. - 2016. - Vol. 8. - № 10. - P. 597.

126. Lorenzo-Leal, A.C. Antimicrobial, Cytotoxic, and Anti-Inflammatory Activities of Pimenta dioica and Rosmarinus officinalis Essential Oils / A.C. Lorenzo-Leal, E. Palou, A. Lopez-Malo, H. Bach // Biomed Res. Int. - 2019.

- Vol. 2019. - P. 1-8.

127. Lu, D.-Y. Osteoporosis, importance for early diagnosis and treatment / D.-Y. Lu, J.Y. Che, Y. Shen // EC Orthop. - 2018. - Vol. 9. - № 9. - P. 624-625.

128. Lu J. Advances in the discovery of cathepsin K inhibitors on bone resorption / J. Lu, M. Wang, Z. Wang, Z. Fu, A. Lu, G. Zhang // J. Enzyme Inhib. Med. Chem. - 2018. - Vol. 33. - № 1. - P. 890-904.

129. Lu, K.D. Glucocorticoid receptor expression on circulating leukocytes in healthy and asthmatic adolescents in response to exercise / K.D. Lu, D. Cooper, F. Haddad, F. Zaldivar, M. Kraft, S. Radom-Aizik // Pediatr. Res. -2017. - Vol. 82. - № 2. - P. 261-271.

130. Lukas, R. Consumption of different sources of omega-3 polyunsaturated fatty acids by growing female rats affects long bone mass and microarchitecture / R. Lukas, J.C. Gigliotti, B.J. Smith, S. Altman, J.C. Tou // Bone. - 2011. -Vol. 49. - № 3. - P. 455-462.

131. Maditz, K.H. Feeding soy protein isolate and oils rich in omega-3 polyunsaturated fatty acids affected mineral balance, but not bone in a rat model of autosomal recessive polycystic kidney disease / K.H. Maditz, B.J. Smith, M. Miller, C. Oldaker, J. C. Tou // BMC Nephrol. - 2015. - Vol. 16. - № 1. -13 p.

132. Marty, M. Arsenic trioxide-induced osteo-necrosis treatment in a child: minireview and case report / M. Marty, E. Noirrit-Esclassan, F. Diemer // Eur. Arch. Paediatr. Dent. - 2016. - Vol. 17. - № 5. - P. 419-422.

133. Mawalagedera, S.M.U.P. Combining evolutionary inference and metabolomics to identify plants with medicinal potential / S.M.U.P. Mawalagedera, M.R.E. Symonds, D.L. Callahan, A.C. Gaskett, N. R0nsted // Front. Ecol. Evol. - 2019. - Vol. 7. -267 p.

134. Mazziotti, G. Glucocorticoid-induced osteoporosis: pathophysiological role of GH/IGF-I and PTH/VITAMIN D axes, treatment options and guidelines / G. Mazziotti, A.M. Formenti, R.A. Adler, J.P. Bilezikian, A. Grossman, E. Sbardella, S. Minisola, A. Giustina // Endocrine. - 2016. - Vol. 54. - № 3. -P. 603-611.

135. Meeran, M.F.N. Thymol, a dietary monoterpene phenol abrogates mitochondrial dysfunction in p-adrenergic agonist induced myocardial infarcted rats by inhibiting oxidative stress / M.F.N. Meeran, G.S. Jagadeesh, P. Selvaraj // Chem. Biol. Interact. - 2016. - Vol. 244. - P. 159-168.

136. Meeran, N. Pharmacological properties and molecular mechanisms of thymol: prospects for its therapeutic potential and pharmaceutical development / N. Meeran, M. Fizur, H. Javed, H. Al Taee, S. Azimullah, S.K. Ojha // Front. Pharmacol. - 2017. - Vol. 8. -380 p.

137. Menghini L. A natural formula containing lactoferrin, Equisetum arvensis, soy isoflavones and vitamin D3 modulates bone remodeling and inflammatory markers in young and aged rats. / L. Menghini, C. Ferrante, L. Leporini, L. Recinella, A. Chiavaroli, S. Leone, G. Pintore, M. Vacca, G. Orlando, L. Brunetti // J. Biol. Regul. Homeost. Agents. - 2016. - Vol. 30. -№ 4. - P. 985-996.

138. Millman, J. Metabolically and immunologically beneficial impact of extra virgin olive and flaxseed oils on composition of gut microbiota in mice / J. Millman, S. Okamoto, A. Kimura, T. Uema, M. Higa, M. Yonamine, T. Namba, E. Ogata, S. Yamazaki, M. Shimabukuro // Eur. J. Nutr. - 2019. - P. 1-15.

139. Mirfatahi, M. Effects of Flaxseed Oil on Serum Bone Turnover Markers in Hemodialysis Patients: A Randomized Controlled Trial / M. Mirfatahi, H. Imani, H. Tabibi, A. Nasrollahi, M. Hedayati // Iran. J. Kidney Dis. - 2018. -Vol. 12. - № 4. - 215 p.

140. Mittal, R.P. Essential oils: an impending substitute of synthetic antimicrobial agents to overcome antimicrobial resistance / R.P. Mittal, A. Rana, V. Jaitak // Curr. Drug Targets - 2019. - Vol. 20. - № 6. - P. 605-624.

141. Moghadam-Kia, S. Prevention and treatment of systemic glucocorticoid side effects / S. Moghadam-Kia, V.P. Werth // Int. J. Dermatol. - 2010. - Vol. 49. - № 3. - P. 239-248.

142. Moschen, A.R. The RANKL/OPG system is activated in inflammatory bowel disease and relates to the state of bone loss / A.R. Moschen, A. Kaser, B. Enrich, O. Ludwiczek, M. Gabriel, P. Obrist, A.M. Wolf, H. Tilg // Gut. -2005. - Vol. 54. - № 4. - P. 479-487.

143. Moyer, V.A. Vitamin D and calcium supplementation to prevent fractures in adults: US Preventive Services Task Force recommendation statement / V.A. Moyer // Ann. Intern. Med. - 2013. - Vol. 158. - № 9. - P. 691-696.

144. Muga M.A. Effects of fish oil and spirulina on oxidative stress and inflammation in hypercholesterolemic hamsters / M.A. Muga, J.C.J. Chao // BMC Complement. Altern. Med. - 2014. - Vol. 14. - № 1. - 470 p.

145. Muhlbauer, R.C. Common herbs, essential oils, and monoterpenes potently modulate bone metabolism / R.C. Muhlbauer, A. Lozano, S. Palacio, A. Reinli, R. Felix // Bone. - 2003. - Vol. 32. - № 4. - P. 372-380.

146. Nahashon S.N. Advances in Soybean and Soybean by-products in monogastric nutrition and health / S.N. Nahashon, A.K. Kilonzo-Nthenge // Soybean Nutr. - 2011. - P. 125-156.

147. Nakanishi, A. Fish oil suppresses bone resorption by inhibiting osteoclastogenesis through decreased expression of M-CSF, PU. 1, MITF and RANK in ovariectomized rats / A. Nakanishi, N. Iitsuka, I. Tsukamoto // Mol. Med. Rep. - 2013. - Vol. 7. - № 6. - P. 1896-1903.

148. Neves, J.A. Pharmacological and biotechnological advances with Rosmarinus officinalis L / J.A. Neves, J.A. Neves, R. de C.M. Oliveira // Expert Opin. Ther. Pat. - 2018. - Vol. 28. - № 5. - P. 399-413.

149. Noh, Y.-H. The effects of MS-10 dietary supplement, mixture of Korean thistle and thyme extracts, on bone health, and symptoms in menopausal women / Y.-H. Noh, S. Cheon, I.H. Kim, S. Lee, X. Yin, J. Jeong, H. Lee, J.H. Ahn, S.S. Han, Y. Bae // J. Funct. Foods. - 2019. - Vol. 52. - P. 680689.

150. Odstrcil, A. del C.A. Effect of arsenic in endochondral ossification of experimental animals / A. del C.A. Odstrcil, S.N. Carino, J.C.D. Ricci, P.M. Mandalunis // Exp. Toxicol. Pathol. - 2010. - Vol. 62. - № 3. - P. 243-249.

151. Olchowiak, G. The influence of lead on the biomechanical properties of bone tissue in rats / G. Olchowiak, J. Widomska, M. Tomaszewski, M. Gospodarek,

M. Tomaszewska, E. Jagiello-Wojtowicz // Ann. Agric. Environ. Med. -2014. - Vol. 21. - №. 2. - P. 278-281.

152. Oliveira, J.R. De Rosmarinus officinalis L.(rosemary) as therapeutic and prophylactic agent / J.R. De Oliveira, S.E.A. Camargo, L.D. De Oliveira // J. Biomed. Sci. - 2019. - Vol. 26. - № 1. - P. 5.

153. Overman, R.A. Prevalence of oral glucocorticoid usage in the United States: a general population perspective / R.A. Overman, J. Yeh, C.L. Deal // Arthritis Care Res. (Hoboken). - 2013. - Vol. 65. - № 2. - P. 294-298.

154. Parikh, M. Dietary Flaxseed as a Strategy for improving human health / M. Parikh, T.G. Maddaford, J.A. Austria, M. Aliani, T. Netticadan, G.N. Pierce // Nutrients - 2019. - Vol. 11. - № 5. - 1171 p.

155. Parks, C.A. DHA and EPA in red blood cell membranes are associated with dietary intakes of omega-3-rich fish in healthy children / C.A. Parks, N.R. Brett, S. Agellon, P. Lavery, C.A. Vanstone, J.L. Maguire, F. Rauch, H.A. Weiler // Prostaglandins, Leukot. Essent. Fat. Acids. - 2017. - Vol. 124. - P. 11-16.

156. Peng, Y. Determination of active components in rosemary by capillary electrophoresis with electrochemical detection / Y. Peng, J. Yuan, F. Liu, J. Ye // J. Pharm. Biomed. Anal. - 2005. - Vol. 39. - № 3(4). - P. 431-437.

157. Pennisi, P. Supplementation of L-arginine prevents glucocorticoid-induced reduction of bone growth and bone turnover abnormalities in a growing rat model / P. Pennisi, M.A. D'Alcamo, C. Leonetti, A. Clementi, V.M. Cutuli, S. Riccobene, N. Parisi, C.E. Fiore // J. Bone Miner. Metab. - 2005. - Vol. 23. - № 2. - P. 134-139.

158. Perez-Fons, L. Relationship between the antioxidant capacity and effect of rosemary (Rosmarinus officinalis L.) polyphenols on membrane phospholipid order / L. Perez-Fons, M.T. Garzon, V. Micol // J. Agric. Food Chem. - 2010. - Vol. 58. - № 1. - P. 161-171.

159. Pipingas, A. Fish oil and multivitamin supplementation reduces oxidative stress but not inflammation in healthy older adults: a randomised controlled trial / A. Pipingas, A. Sinclair, K.D. Croft, A.S. Januszewski, A.J. Jenkins, T.A. Mori, R. Cockerell, N.A. Grima, C. Stough, A. Scholey // J. Funct. Foods. - 2015. - Vol. 19. - P. 949-957.

160. Pirbalouti, A.G. Essential oil and chemical compositions of wild and cultivated Thymus daenensis Celak and Thymus vulgaris L. / A.G. Pirbalouti, M. Hashemi, F.T. Ghahfarokhi // Ind. Crops Prod. - 2013. - Vol. 48. - P. 4348.

161. Pye, C.R. Retrospective analysis of natural products provides insights for future discovery trends / C.R. Pye, M.J. Bertin, R.S. Lokey, W.H. Gerwick, R.G. Linington // Proc. Natl. Acad. Sci. - 2017. - Vol. 114. - № 22. - P. 5601-5606.

162. Rahman, M.M. Omega-3 fatty acid-rich fish oil supplementation prevents rosiglitazone-induced osteopenia in insulin resistant C57BL/6 mice / M. M. Rahman, G. Halade, P. Williams // FASEB J. - 2016. - Vol. 30. - № 1. - P. 692-693.

163. Reeves, P.G. AIN-93 purified diets for laboratory rodents: final report of the American Institute of Nutrition ad hoc writing committee on the reformulation of the AIN-76A rodent diet / P.G. Reeves // The Journal of Nutrition. - 1993. - Vol. 123. - № 11. - P. 1939-1951.

164. Rodriguez, J. A review of metal exposure and its effects on bone health / J. Rodriguez, P. M. Mandalunis // J. Toxicol. - 2018. - Vol. 2018. - P. 1-11.

165. Rodriguez, J. Effect of cadmium on bone tissue in growing animals / J. Rodriguez, P.M. Mandalunis // Exp. Toxicol. Pathol. - 2016. - Vol. 68. - № 7. - P. 391-397.

166. Rojas, A. M., U.S. Patent No. 10,196,583. Washington, DC: U.S. Patent and Trademark Office. Glade, T. F. H., & Eckman, S. L. H. - 2019.

167. Sapkota, M. Thymol inhibits RANKL-induced osteoclastogenesis in RAW264. 7 and BMM cells and LPS-induced bone loss in mice / M. Sapkota, L. Li, S.-W. Kim, Y. Soh // Food Chem. Toxicol. - 2018. - Vol. 120. - P. 418-429.

168. Sato, A.Y. Glucocorticoids induce bone and muscle atrophy by tissue-specific mechanisms upstream of E3 ubiquitin ligases / A.Y. Sato, D. Richardson, M. Cregor, H.M. Davis, E.D. Au, K. McAndrews, T.A. Zimmers, J.M. Organ, M. Peacock, L.I. Plotkin // Endocrinology. - 2017. - Vol. 158. - № 3. - P. 664677.

169. Shan, C. Roles for osteocalcin in brain signalling: implications in cognition-and motor-related disorders / C. Shan, A. Ghosh, X. Guo, S. Wang, Y. Hou, S. Li, J. Liu // Mol. Brain. - 2019. - Vol. 12. - № 1. - 23 p.

170. Shea J.E. Skeletal function and structure: implications for tissue-targeted therapeutics / J.E. Shea, S.C. Miller // Adv. Drug Deliv. Rev. - 2005. - Vol. 57. - № 7. - P. 945-957.

171. Shinoki, A. Calcium deficiency in the early stages after weaning is associated with the enhancement of a low level of adrenaline-stimulated lipolysis and reduction of adiponectin release in isolated rat mesenteric adipocytes / A. Shinoki, H. Hara // Metabolism. - 2010. - Vol. 59. - № 7. - P. 951-958.

172. Silverman S. International management of bone health in glucocorticoid-exposed individuals in the observational GLOW study / S. Silverman, J. Curtis, K. Saag, J. Flahive, J. Adachi, F. Anderson, R. Chapurlat, C. Cooper, A. Diez-Perez, S. Greenspan // Osteoporos. Int. - 2015. - Vol. 26. - № 1. -P. 419-420.

173. Simat, V. Production and refinement of omega-3 rich oils from processing byproducts of farmed fish species / V. Simat, J. Vlahovic, B. Soldo, D. Skroza, I. Ljubenkov, I. Generalic Mekinic // Foods. - 2019. - Vol. 8. - № 4. - 125 p.

174. Skendi A. Analysis of phenolic compounds in Greek plants of Lamiaceae family by HPLC / A. Skendi, M. Irakli, P. Chatzopoulou // J. Appl. Res. Med. Aromat. Plants. - 2017. - Vol. 6. - P. 62-69.

175. Soliman, K.M. Effect of oil extracted from some medicinal plants on different mycotoxigenic fungi / K.M. Soliman, R.I. Badeaa // Food Chem. Toxicol. -2002. - Vol. 40. - № 11. - P. 1669-1675.

176. Spitalniak-Bajerska K. Lyophilized apples on flax oil and ethyl esters of flax oil-stability and antioxidant evaluation / K. Spitalniak-Bajerska, R. Kupczynski, A. Szumny, A.Z. Kucharska, A. Vogt // Open Chem. - 2019. -Vol. 17. - № 1. - P. 831-840.

177. Stepanova, N.V Heavy metals as criteria of health and ecological well-being of the urban environment / N.V Stepanova, S.F. Fomina, E.R. Valeeva, A.I. Ziyatdinova // J. Trace Elem. Med. Biol. - 2018. - Vol. 50. - P. 646-651.

178. Stepanova, N.V. Regional assessment of the impact of mercury on the health of children / N.V. Stepanova, S.F. Fomina // Trace elements and electrolytes. - 2018. - V. 35(4). - P.187 - 189.

179. Suarez-Bregua, P. Stress, glucocorticoids and bone: a review from mammals and fish / P. Suarez-Bregua, P.M. Guerreiro, J. Rotllant // Front. Endocrinol. (Lausanne). - 2018. - Vol. 9. -526 p.

180. Suvarna, V. Bone health and natural products-an insight / V. Suvarna, M. Sarkar, P. Chaubey, T. Khan, A. Sherje, K. Patel, B. Dravyakar // Front. Pharmacol. - 2018. - Vol. 9. - 981 p.

181. Taha, M. Prevalence of osteoporosis in Middle East systemic literature review, 10th ECOO, April 2011 // - 2011.

182. Taku, K. Effects of soy isoflavone supplements on bone turnover markers in menopausal women: systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials / K. Taku, M.K. Melby, M.S. Kurzer, S. Mizuno, S. Watanabe, Y. Ishimi // Bone. - 2010. - Vol. 47. - № 2. - P. 413-423.

183. Tannenbaum, C. Yield of laboratory testing to identify secondary contributors to osteoporosis in otherwise healthy women / C. Tannenbaum, J. Clark, K. Schwartzman, S. Wallenstein, R. Lapinski, D. Meier, M. Luckey // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 2002. - Vol. 87. - № 10. - P. 4431-4437.

184. Tanrikulu, G.i. Chemical compositions, antioxidant and antimicrobial activities of the essential oil and extracts of Lamiaceae family (Ocimum basilicum and Thymbra spicata) from Turkey / G.i. Tanrikulu, O. Erturk, C. Yavuz, Z. Can, H.E. Qakir // Int. J. Second. Metab. - 2017. - Vol. 4. - №. 3. Special Issue 2. - P. 340-348.

185. Tezval, M. Effect of parathyroid hormone on hypogonadism induced bone loss of proximal femur of orchiectomized rat / M. Tezval, G. Serferaz, T. Rack, L. Kolios, S. Sehmisch, U. Schmelz, H. Tezval, K.M. Stuermer, E.K. Stuermer // World J. Urol. - 2011. - Vol. 29. - № 4. - P. 529-534.

186. Tohidi, B. Essential oil composition, total phenolic, flavonoid contents, and antioxidant activity of Thymus species collected from different regions of Iran / B. Tohidi, M. Rahimmalek, A. Arzani // Food Chem. - 2017. - Vol. 220. -P. 153-161.

187. Ton, F.N. Effects of low-dose prednisone on bone metabolism / F.N. Ton, S.C. Gunawardene, H. Lee, R.M. Neer // J. bone Miner. Res. - 2005. - Vol. 20. - № 3. - P. 464-470.

188. Upadhyay, S. Variability studies in yellow seeded linseed (Linum usitatissimum L.) genotypes of chhattisgarh plains / S. Upadhyay, N. Mehta // J. Pharmacogn. Phytochem. - 2019. - Vol. 8. - № 2. - P. 1647-1649.

189. Uysal, B. Comparative antibacterial, chemical and morphological study of essential oils of Thymbra spicata var. spicata leaves by solvent-free microwave extraction and hydro-distillation / B. Uysal, A. Gencer, B.S. Oksal // Int. J. Food Prop. - 2015. - Vol. 18 - № 11. - P. 2349-2359.

190. Valeeva, E.R. Evaluation of Chemical safety of Food Products / E.R. Valeeva, A.S. Elbahnasawy, A.I. Ziyatdinova // IOP Conf. Ser.: Earth Environ. Sci. -2019. - Vol. 272 (022186). - P. 1-7.

191. Valle, H.B. Dietary reference intakes for calcium and vitamin D / H.B. Del Valle, A.L. Yaktine, C.L. Taylor, A.C. Ross. - National Academies Press. -2011.

192. Varela-Lopez, A. Age-related loss in bone mineral density of rats fed lifelong on a fish oil-based diet is avoided by coenzyme Q10 addition / A. Varela-Lopez, J.J. Ochoa, J.M. Llamas-Elvira, M. Lopez-Frias, E. Planells, Mc. Ramirez-Tortosa, C.L. Ramirez-Tortosa, F. Giampieri, M. Battino, J.L. Quiles // Nutrients. - 2017. - Vol. 9. - № 2. - P. 176.

193. Varela-Lopez, A. Loss of bone mineral density associated with age in male rats fed on sunflower oil is avoided by virgin olive oil intake or coenzyme Q supplementation / A. Varela-Lopez, J.J. Ochoa, J.M. Llamas-Elvira, M. Lopez-Frias, E. Planells, L. Speranza, M. Battino, J.L. Quiles // Int. J. Mol. Sci. - 2017. - Vol. 18. - № 7. - 1397 p.

194. Veronezi, C.M. Basil (Ocimum Basilicum L.) as a Natural A ntioxidant / C.M. Veronezi, T. Costa, N. Jorge // J. food Process. Preserv. - 2014. - Vol. 38. -№ 1. - P. 255-261.

195. Wakf, A.M. El Osteoprotective effect of soybean and sesame oils in ovariectomized rats via estrogen-like mechanism / A.M. El Wakf, H.A. Hassan, N.S. Gharib // Cytotechnology. - 2014. - Vol. 66. - № 2. - P. 335343.

196. Wallin, M. Low-level cadmium exposure is associated with decreased bone mineral density and increased risk of incident fractures in elderly men: the MrOS Sweden Study / M. Wallin, L. Barregard, G. Sallsten, T. Lundh, M.K. Karlsson, M. Lorentzon, C. Ohlsson, D. Mellstrom // J. Bone Miner. Res. -2016. - Vol. 31. - № 4. - P. 732-741.

197. Wang, T. Pro-inflammatory cytokines: cellular and molecular drug targets for glucocorticoid-induced-osteoporosis via osteocyte / T. Wang, X. Yu, C. He // Curr. Drug Targets. - 2019. - Vol. 20. - № 1. - P. 1-15.

198. Weaver, C.M. Calcium plus vitamin D supplementation and risk of fractures: an updated meta-analysis from the National Osteoporosis Foundation / C.M. Weaver, D.D. Alexander, C.J. Boushey, B. Dawson-Hughes, J.M. Lappe, M.S. LeBoff, S. Liu, A.C. Looker, T.C. Wallace, D.D. Wang // Osteoporos. Int. - 2016. - Vol. 27. - № 1. - P. 367-376.

199. Weaver, C.M. Nutrition and bone health / C. M. Weaver // Oral Dis. - 2017. - Vol. 23. - № 4. - P. 412-415.

200. Wei, H.-K. A carvacrol-thymol blend decreased intestinal oxidative stress and influenced selected microbes without changing the messenger RNA levels of tight junction proteins in jejunal mucosa of weaning piglets / H.-K. Wei, H.-X. Xue, Z.X. Zhou, J. Peng // Animal. - 2017. - Vol. 11. - № 2. - P. 193-201.

201. Wesolowska, A. Comparison of the Chemical Composition of Essential Oils Isolated from Two Thyme (Thymus vulgaris L.) Cultivars / A. Wesolowska, D. Jadczak // Not. Bot. Horti Agrobot. Cluj-Napoca. - 2019. - Vol. 47. - № 3. - P. 829-835.

202. Wong, A.K.O. Bone lead (Pb) content at the tibia is associated with thinner distal tibia cortices and lower volumetric bone density in postmenopausal women / A.K.O. Wong, K.A. Beattie, A. Bhargava, M. Cheung, C.E. Webber, D.R. Chettle, A. Papaioannou, J.D. Adachi, C.M.O.S. (CaMos) R. Group // Bone. - 2015. - Vol. 79. - P. 58-64.

203. Wright, N.C. The recent prevalence of osteoporosis and low bone mass in the United States based on bone mineral density at the femoral neck or lumbar spine / N.C. Wright, A.C. Looker, K.G. Saag, J.R. Curtis, E.S. Delzell, S. Randall, B. Dawson-Hughes // J. Bone Miner. Res. - 2014. - Vol. 29. - № 11. - P. 2520-2526.

204. Wu, C.-T. Effects of arsenic on osteoblast differentiation in vitro and on bone mineral density and microstructure in rats / C.-T. Wu, T.-Y. Lu, D.-C. Chan, K.-S. Tsai, R.-S. Yang, S.-H. Liu // Environ. Health Perspect. - 2014. - Vol. 122. - № 6. - P. 559-565.

205. Yachiguchi, K. Effects of inorganic mercury and methylmercury on osteoclasts and osteoblasts in the scales of the marine teleost as a model system of bone / K. Yachiguchi, T. Sekiguchi, M. Nakano, A. Hattori, M. Yamamoto, K. Kitamura, M. Maeda, Y. Tabuchi, T. Kondo, H. Kamauchi // Zoolog. Sci. - 2014. - Vol. 31. - № 5. - P. 330-337.

206. Yang, M. Effects of omega-3 fatty acids and aspirin on Porphyromonas gingivalis-induced periodontitis in rats / M. Yang, L. Li, Y. Soh, S. Heo // J. Periodontol. - 2019. - Vol. 90. - № 11. - P. 1307-1319.

207. Yu, Y.-M. Thymol reduces oxidative stress, aortic intimal thickening, and inflammation-related gene expression in hyperlipidemic rabbits / Y. -M. Yu, T.-Y. Chao, W.-C. Chang, M. J. Chang, M.-F. Lee // J. food drug Anal. -2016. - Vol. 24. - № 3 .- P. 556-563.

208. Yuan, G. Toxicological assessment of combined lead and cadmium: acute and sub-chronic toxicity study in rats / G. Yuan, S. Dai, Z. Yin, H. Lu, R. Jia, J. Xu, X. Song, L. Li, Y. Shu, X. Zhao // Food Chem. Toxicol. - 2014. - Vol. 65. - P. 260-268.

209. Zairi, A. Phytochemical Analysis and Assessment of Biological Properties of Essential Oils Obtained from Thyme and Rosmarinus Species / A. Zai'ri, S. Nouir, M. A. Khalifa, B. Ouni, H. Haddad, A. Khelifa, L. Achour, M. Trabelsi // Curr. Pharm. Biotechnol. - 2020. - Vol. 21- № 11. - P. 414-424.

210. Zofkova, I. Trace elements have beneficial, as well as detrimental effects on bone homeostasis. / I. Zofkova, M. Davis, J. Blahos // Physiol. Res. - 2017. -Vol. 66 - № 3. - P. 391-402.

Принцип метода. Наиболее широко используемый метод определения МДА в биологических материалах основан на его реакции с TBA с образованием розового комплекса с максимумом поглощения при 532-535 нм. Нагрев образца до рН 3 или ниже необходим для образования комплекса и для высвобождения МДА из связанных форм. Процедура включает нагревание экстракта образца трихлоруксусной кислоты (ТСА) с ТБК и измерение оптической плотности неочищенной смеси на спектрофотометре.

Определение С-телопептидов коллагена типа I (CTX). С-концевой телопептид оценивали с использованием одностадийного ELISA для плазменных перекрестных кругов (Osteometer BioTech, Herlev, Denmark).

Принцип метода. Это иммуноанализ для измерения маркеров костной резорбции С-концевого телопептида. В этом новом анализе представлено применение моноклональных антител (mAbs) для количественного определения продуктов распада С-концевых телопептидов коллагена типа I. Этот метод ELISA основан на использовании двух высокоспецифичных mAb против аминокислотной последовательности AHD-b-GGR. Молекулы, измеренные в анализе, состоят из двух цепей EKAHD-b-GGR (bCTX), которые ковалентно сшиты через остатки лизина. Этот анализ является надежным, легко выполняемым анализом с высоким потенциалом для оценки скорости резорбции кости.

Гистопатологическое исследование. Бедренные кости помещали в 10 % формалин в физиологическом растворе на 48 часов, затем начинали декальцинацию этилендиаминтетрауксусной кислотой (EDITA) 10 % через 7 -7,4 ч в течение 4 недель. После промывки фиксированных тканей в проточной водопроводной воде, чтобы удалить с них фиксатор, дегидратацию проводили постепенно в возрастающих сортах спирта, помещая ткани в 50 %о спирт, затем в 70 % спирт и, наконец, в 100% спирт. Была проведена очистка тканей с

помощью ксилола. Каждая бедренная кость была разрезана поперек посередине стержня. Очищенные фиксированные ткани помещали в теплый расплавленный мягкий парафин в печь при 50° С на один день. Затем ткани переносили в расплавленный твердый парафин в сушильном шкафу при 57° С в течение одного часа. Затем образцы переносили в отливки, наполненные расплавленным твердым парафином. Слитки с их содержимым охлаждали на льду до полного затвердевания парафина, образуя блоки из твердого парафина с тканями в его центрах. Каждый блок из твердого парафина разрезали на тонкие срезы (толщиной 6 микрометров) с помощью вращательного микротома. Парафиновые срезы, представляющие все группы, затем помещали на чистые предметные стекла, смазанные глицерином-альбумином. Предметные стекла нагревали на горячей плите, затем оставляли на несколько часов в инкубаторе для сушки. Предметные стекла окрашивали гематоксилином и эозином (H&E). Окрашенные срезы исследовали гистологически и фотографировали. Изображения анализировали с помощью Optima (Media Cybernetics, 1998 г., версия 6.21.19) и с помощью светового микроскопа (Kim et al., 2010).

Определение экспрессии генов РНК экстракция и очистка.

Бедренные кости крыс удаляли и хранили при - 80° С до выделения РНК, которое проводили с использованием набора (Direct-zol ™, РНК MiniPrep, каталог R2050, Zymo Research Corp., Ирвин, Калифорния, США), следующим образом:

1. Лизировать образец ткани 25 мг в 600 мкл TRI Reagent® и гомогенизировать. Для удаления твердых частиц из гомогенизированной ткани центрифугируйте 16000 об/мин в течение 1 минуты и перенесите супернатант в пробирку без РНКазы.

2. Добавить 600 мкл этанола (95 - 100 %) к образцу, лизированному в TRI Reagent®, и тщательно перемешать.

3. Перенесите смесь в колонку Zymo-Spin ™ IIC в пробирку для сбора и центрифугируйте 16 000 х g в течение 1 минуты. Перенесите колонку в новую пробирку для сбора и откажитесь от проточной.

4. Добавьте 400 мкл РНК-промывочного буфера в колонку и центрифугируйте 16000 х g в течение 1 минуты.

5. В пробирку без РНКазы добавьте 5 мкл ДНКазы I (6 Ед / мкл), 75 мкл буфера для расщепления ДНК и перемешайте. Добавьте смесь непосредственно в матрицу столбца. Инкубировать при комнатной температуре (20 - 30° С) в течение 15 минут.

6. Добавьте 400 мкл Direct-zol ™ РНК PreWash в колонку и центрифугируйте 16000 х g в течение 1 минуты. Откажитесь от потока и повторите этот шаг.

7. Добавьте 700 мкл РНК-промывочного буфера в колонку и центрифугируйте 16000 х g в течение 2 минут, чтобы обеспечить полное удаление промывочного буфера.

8. Осторожно перенесите колонку в пробирку без РНКазы.

9. Добавьте 50 мкл воды, не содержащей ДНКазы / РНКазы, непосредственно

в матрицу колонки и центрифугируйте 16000 х g в течение 1 минуты.

135

Обратная транскрибированная полимеразная цепная реакция (ОТ-

ПЦР). Комплементарную ДНК (кДНК) получали с использованием ОТ-ПЦР (набор для синтеза кДНК SensiFAST ™, каталожные номера ВЮ-65053, Bioline Reagents Ltd., Великобритания) следующим образом: 1. Перед использованием приготовьте мастермикс на льду, растворы Vortex и центрифугу.

Общая РНК (200 нг) 5 мкл

5x TransAmp Buffer 4 мкл

Обратная транскриптаза 1 мкл

DNase / RNase свободной воды 10 мкл

Всего 20 мкл

2. Аккуратно перемешайте с помощью пипетки.

3. Настройте следующую программу в термоцикле:

• 25° C в течение 10 минут (отжиг праймера)

• 42° С в течение 15 мин (обратная транскрипция)

• 85° C в течение 5 минут (инактивация)

• охладить на льду

Количественная полимеразная цепная реакция (КПЦР) в реальном времени (RTqPCR). КПЦР в режиме реального времени выполнялась с использованием системы КПЦР Mx3000p (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). с помощью (SensiFASTTM SYBR Lo-ROX Kit, каталожные номера BIO-94002, Bioline Reagents Ltd., Великобритания), следующим образом: 1. Состав реакционной смеси: приготовить мастер-смесь для ПЦР

реактив объем

2x SensiFAST SYBR Lo-ROX Mix 10 мкл

Прямой праймер (10 мкМ) 0,5 мкл

Обратный праймер (10 мкМ) 0,5 мкл

кДНК 2 мкл

DNase / RNase свободной воды 7 мкл

Всего 20 мкл

2. 2-ступенчатая езда на велосипеде

Температура Время Циклы Заметки

95 & deg; С 2мин 1 Активация полимеразы

95 & deg; С 10s 40 Денатурация

60 & deg; С 1 минута Отжиг / расширение

В качестве контрольного гена использовали в-актин, относительные уровни мРНК к гену бета-актина были нормализованы в контрольной группе и рассчитаны по методу 2-АА ct.

Последовательности и размер ампликона для праймеров (Integrated DNA Technologies, Coralville, IA, USA)) перечислены в Таблице 1. Последовательности праймеров были сконструированы в соответствии с базой данных GeneBank с использованием веб-сайта Premier BLAST, NCBI, Invitrogen.

Таблица 1 - Последовательности праймеров, используемые для КПЦР

в реальном времени

Ген Прямой праймер (5'-3') Обратный праймер (5'-3') Номер доступа Размер ампликона (базовые пары)

в - актин TGACCGAGCGT GGCTACAG GGGCAACATAGCA CAGCTTCT V01217 302

остеокальцина GAGGACCCTCT CTCTGCTCA TCCTGGAAGCCAA TGTGGTC XM 00535 6875.2 264

Катепсин К CCCAGACTCCA TCGACTATCG CTGTACCCTCTGC ACTTAGCTGCC AF010306 330

Оценка риска здоровью проводилась в соответствии с «Руководством 2.1.10.1920-04 по оценке риска для здоровья населения при воздействии химических веществ, загрязняющих окружающую среду». Для расчета экспозиции и уровней риска использовали 50-й (медиана) и 95-й процентиль концентрации загрязняющих веществ в пищевых продуктах. В основу исследования заложены два временных периода: 2008-2012 гг. и 2013-2017 гг.

Для определения риска определялась среднесуточную дозу вещества (ДОО), поступающую в организм человека с пищевыми продуктами. Стандартное уравнение для расчета среднесуточной дозы при пероральном поступлении химических веществ с пищевыми продуктами имело следующий вид:

АБВ=(С-С^ЕВ^^)А^-АТ-365), где С - средняя концентрация вещества в продукте, мг/кг; СЯ - среднесуточное потребление продукта, кг/день;

БЭ - продолжительность воздействия, лет (30 - при хроническом воздействии; Б - доля потенциально загрязненных продуктов в суточном рационе ББ — частота воздействия, дней/год (стандартное значение 365);

BW - масса тела человека, кг (использовалась средняя масса тела по выборке, 70,8 кг);

АТ - период осреднения экспозиции, лет (30 лет, при расчете канцерогенного риска — 70 лет);

Риск развития неканцерогенных эффектов проводится с использованием величины коэффициента опасности (Н^, который определяет вероятность развития неспецифических реакций со стороны организма человека в ответ на воздействия факторов окружающей среды. Коэффициент опасности определялся по уравнению: где:

АО - средняя доза, мг/кг;

ЯЮ - референтная (безопасная) доза, мг/кг;

Референтная доза контаминанта - доза, при воздействии которой на человеческую популяцию, включая ее наиболее чувствительные подгруппы, не ожидается риска развития каких-либо вредных эффектов на протяжении всего периода жизни. При коэффициенте опасности равном или меньшем 1,0 риск вредных эффектов рассматривался как пренебрежимо малый. С увеличением коэффициента вероятность развития вредных эффектов возрастает, однако, точно указать величину этой вероятности невозможно. При комбинированном поступлении нескольких веществ каким-либо путем, суммарный индекс опасности определяется для веществ влияющих на одну систему (орган).

При комплексном поступлении одного вещества опасности для каждого пути (с каждой группой продуктов) коэффициенты опасности суммировались, и оценивался полученный индекс опасности (Н1): Ш=Н01+Нд2...+ ИОп

Оценка риска производится в соответствии с критериями коэффициента опасности: менее 0,1 минимальный, пренебрежимый; 0,1-1 низкий; 1-5

средний ; 5-10 высокий; более 10 чрезвычайно высокий.

ПРИЛОЖЕНИЕ 4

Объектом исследования явилось сельское население, проживающее на территории Республики Татарстан. Республика Татарстан расположена в Европейской части Российской Федерации, в месте слияния рек Волги и Камы. Общая площадь Татарстана — 67 836 км2. Протяженность территории республики — 290 км с севера на юг и 460 км с запада на восток.

В Республике Татарстан имеется 2 городских округа (г. Казань - 1143,5 тыс. человек и г. Набережные Челны - 513,2 тыс. человек) и 43 муниципальных района, состоящих из 38 городских и 906 сельских поселений. Население по территории республики размещено неравномерно. Средняя плотность населения республики составляет 55,8 чел. на 1 км2. Более точно степень заселённости и освоенности территории отражает показатель плотности сельского населения. В Республике данный показатель составляет лишь 13,7 чел. на 1 км2, что свидетельствует о высоком уровне урбанизации населения и продолжающемся сокращении численности сельского населения. Наиболее густонаселенными являются районы Предволжья: в Зеленодольском-44 чел/км2., Дрожжановском- 27 чел/ км2., Апастовском-22чел/км2., и западного Предкамья: в Арском - 28 чел/км2., Высоркогорском-28 чел/км2., Атнинском-21 чел/км2. Северные районы Предкамья, удаленные от больших городов, также имеют высокую плотность - это Кукморский-36 чел/км2., Балтасинский-30 чел/ км2., Сабинский-28 чел/км2. К менее населенным относятся районы восточного Предкамья, крайнего юго-востока и территория у места слияния рек Волги и Камы (Территориальный орган Федеральной службы государственной статистики по Республике Татарстан).

Анализ заболеваемости населения Республики Татарстан (РТ) остеопорозом проводился по материалам официальной статистической информации «Статистика здоровья населения и здравоохранения» (по материалам РТ) за 2006 - 2018 гг., изданный Минздравом РТ и Республиканским медицинским информационно-вычислительным центром.

Диапазоны выбраны в соответствии с процентилями общего объема данных за изучаемый период и представленная раскраска примерно соответствует следующим границам: до 5 % процентиля (Perc) (наименьшие значения до 5 % от всего объема данных); до 25 % Perc (1 квартиль); до 50 % Perc (2 квартиль - медиана); до 75 % Perc (3 квартиль); до 95 % Perc и свыше 95 % Perc. Для отображения изменений добавлены графические изображения в виде столбиков, в которых производится соответствующая окраска по следующим четырем годам (2008, 2010, 2012, 2014), а окрашивание всего района соответствует 2018 году. Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием пакета программ «Microsoft Office Excel 2010».

Способ оценки индивидуального потребления пищи проводили методом 24-часового (суточного) воспроизведения питания. Изучение питания населения проводилось методом 24-часового (суточного) воспроизведения питания, рекомендованным для этих целей Научно-исследовательским институтом питания Российской академии медицинских наук (РАМН).

«Метод 24 часового (суточного) воспроизведения питания» используется в рамках реализации концепции государственной политики в области здорового питания. Авторы метода - А.Н. Мартинчик, А.К. Батурин, А.И. Феоктистова, И.В. Свяховская. Метод утвержден первым заместителем Главного государственного санитарного врача РФ Г.Г. Онищенко 26.02.1996 г. (№С119/14-17). Сущность метода заключается в установлении количества фактически потребляемых пищевых продуктов и блюд посредством опроса (опрашиваемый воспроизводит по памяти то, что он съел за предшествующие опросу сутки). К достоинствам метода относится необременительность для респондента, простота и экспрессность в осуществлении, точное определение периода времени, за который собирается информация, количественная и качественная оценка потребления пищи и нутриентов. Метод не изменяет

привычное питание респондента, пригоден для исследования питания больших групп населения, т.е. в целях СГМ.

Планирование опроса и требования к его участникам. Опрашиваемый не должен заранее знать, что будет проводиться опрос о потреблении им пищи за данный конкретный день, ибо это может привести к изменению его обычного пищевого режима и характера потребления пищи.

Интервьюирование проводится утром или в первой половине дня. Как следует из названия метода, опрос должен охватывать предшествующие сутки (24 часа) от первого приема пищи утром предыдущего дня до последнего приема пищи вечером или ночью, предшествующими дню опроса. Пища, принятая утром текущего дня после пробуждения, не учитывается в опросе. Интервью должно начинаться с вопроса о том, что человек ел первый раз вчера после пробуждения, и закончится вопросом о потребленной пище прошедшей ночью.

Метод 24-часового воспроизведения питания может использоваться для непосредственного опроса лиц в возрасте от 10 до 75 лет. Метод воспроизведения питания требует определенной работы памяти и зависит от способностей обследуемого вспомнить и должным образом описать свой рацион. Поэтому такой метод не рекомендуется применять у детей в возрасте до 10 лет, у престарелых людей при нарушении памяти и речи, у лиц, имеющих тяжелые физические недостатки, тяжелых больных, у лиц с умственными расстройствами, с нарушениями памяти и речи, у глухонемых и слепых.

Весьма целесообразным является привязка вопроса о приемах пищи к определенным видам активности человека в течение суток (перед выходом на работу, после прогулки, на работе, после просмотра телепередачи, до или после похода в магазин, после занятия спортом и т.д.). Как правило, до или после определенных видов активности принимается пища, которая легко запоминается и вспоминается при напоминании об определенных видах активности человека. Каждый такой случай приема пищи детализируется.

Необходимо обратить внимание на так называемые перекусы, т.е. приемы небольших количеств пищи по дороге на работу, во время работы и т.д. (как-то съеденная конфета, печенье, фрукты, выпитый стакан лимонада, молока и т.д.).

Оценка количества пищи. Оценка количества потребленной респондентом пищи является одним из ответственейших этапов 24-часового воспроизведения питания. Для оценки количества потребляемой пищи используются альбомы с рисунками или фотографиями различной величины порций продуктов и блюд, изображенных в натуральную величину. Количество жидких и сыпучих продуктов оценивают в привычных и знакомых для опрашиваемого, применяемых в домашнем хозяйстве чашках, стаканах, тарелках и ложках (чайных, столовых). Эти предметы имеют стандартный объем, который соответствует определенному количеству в мл или граммах не только жидких (чай, кофе, компоты, молоко и жидкие молочные продукты, газированные и тонизирующие напитки и др.), сыпучих (сахар, растворимый кофе, мука) продуктов, но и некоторых других блюд/продуктов (например, каш или гарниров). Если опрашиваемый ел в столовой, кафе и др. месте общественного питания исследователь может определить средние размеры порций по меню. В случаях затруднений в оценке количества съеденной пищи, может помочь сравнение величины съеденной дома порции с порцией, обычно подаваемой в столовой. Так, всем хорошо известно, что полная порция 1-ого блюда в столовой имеет объем 500 мл, а 1/2 порции - 250 мл. В итоге интервьюирования вопросник должен содержать информацию о времени приема пищи, месте приготовления и употребления пищи, описание характера блюда и продукта, способа его приготовления, и, наконец, количество продукта/блюда.

Источники и метод анализа риска для здоровья населения. Питание является фактором, посредством которого возможна реализация влияние химического загрязнения окружающей среды на здоровье конкретного

индивидуума и популяции в целом. Пища может быть источником и носителем потенциально опасных для здоровья химических веществ, которые попадают в продукты питания по ходу биологических цепочек в процессе сельскохозяйственного производства, хранения, упаковки.

Эпидемиологические исследования заболеваемости остерпорозом

в Республике Татарстан

Ретроспективный анализ показателей заболеваемости в г.Казань и РТ по классу БКМС свидетельствует о низком уровне данного класса болезней в структуре заболеваемости. Сравнительный анализ первичной заболеваемости среди взрослого населения (18 лет и старше) Республики Татарстан показал достоверное снижение ^2= 0,87). В 2006 году был зафиксирован самый высокий показатель первичной заболеваемости болезней костно-мышечной системы (БКМС) 55,9 (на 1000 соответствующего населения) в г. Казани, в то время как в 2015 году был самый низкий показатель в Республике Татарстан и составил 34,5 случаев (на 1000 населения) (рис. 3).

Анализ распространенности болезней БКМС демонстрирует (рис. 4) достоверное снижение как по республике Татарстан, так и по Казани (линия аппроксимации составила R2 = 0,3447 и R2 = 0,4326 соответственно). По РТ с 2006 распространенность болезней БКМС снизилась с 161,7 до 147,1 случаев (на 1000 населения), в г. Казани с 179,9 до 32,9 случаев (на 1000 населения).

2017 2016 2015 2012 2011 2010 2009 2008 2007 2006

Ъ

y = -1,457x+\55,273

R2 = 0,28В1

y = -ttK618x + 55,3 ^ 0,8728

I г.Казань

lРеспублика Татарстан

- Linear (Республика Татарстан)

- Linear (г.Казань)

Linear (г.Казань)

20

40

60

80

Рисунок 3 - Первичная заболеваемость БКМС среди взрослых (18 лет и старше) за период с 2006-2018 гг. на территории Республики Татарстан и г. Казань

0

г.Казань

Республика Тататрстан

Linear (Республика Тататрстан)

Linear (Республика Тататрстан)

Linear (г.Казань)

Рисунок 4 - Распространенность БКМС среди взрослых (18 лет и старше) за

период

с 2006-2018 гг. на территории Республики Татарстан и г. Казань

Уровень колебаний первичной заболеваемости остеопорозом взрослого населения находилось в РТ от 1,5 до 13,2 и от 6,1 до 69,2 случаев в Казани. В то же время значение медианы (95 % ДИ) распространенности заболеваний у взрослого населения г. Казани выше в 3,5 раза, чем в РТ соответственно (45,41 и 12,37 случаев) (табл. 2).

Таблица 2 - Значение медианы (95 % ДИ) первичная заболеваемость болезней среди взрослых (18 лет и старше) в 2006-2018 гг.

Нозологии М±т Ме 95% ДИ верхний 95% ДИ нижний

Республика Татарстан

БКМС 6482,08±1698,06 7285,8 7493 3624,9

Остеопорозы 12,37±8,34 10,3 13,2 1,5

г. Казань

БКМС 16789,78±1118,76 17269 17550,5 15319

Остеопорозы 45,41±22,57 43,6 69,2 6,1

Диапазон колебаний первичной заболеваемости БКМС взрослого

населения как в республике, так и в г. Казань находился на одном уровне (РТ

146

2017 2016 2015 2012

о

L-

2010 2009 2008 2006

?,467x + 211,67 j 0,3447

y = -14,262x +V46,52

50

100

150

200

250

0

3,9 и 3,2 и от 3,5 до 3 случаев в Казани). Динамика показателей распространенности несколько выше по г. Казани и составляет 15,8 случаев на 1000 населения соответствующего возраста (табл. 3). По БЭС обращает на себя внимание высокие показатели уровни первичной заболеваемости в РТ, где показатель верхней границы на уровне 95 % ДИ составил 12,1 случай (табл. 3). Распространенность по данному классу заболеваний на уровне 95 % ДИ верхней границы составила 83,3, тогда как в г. Казани лишь 69,4 (табл. 4).

Уровень колебаний распространенности заболеваний БК взрослого населения в РТ находилось от 13,8 и 13,4 и от 15,8 до 12,7 случаев в Казани. В то же время значение медианы (95 % ДИ) распространенности заболеваний у взрослого населения г. Казани выше, чем в РТ соответственно (14,53 и 13,57 случаев) (табл.4).

Таблица 3 - Первичная заболеваемость среди взрослых (18 лет и страше) Республики Татарстан в 2006-2018гг.

Классы болезней М±т Ме 95% ДИ верхний 95% ДИ нижний

Республика Татарстан

БКМС 3,56±0,32 3,5 3,9 3,2

БЭС 8,71±2,22 7,7 12,1 7,2

г. Казань

БКМС 3,25±0,36 3,2 3,5 3

БЭС 5,64±0,75 5,8 6,4 4,7

Таблица 4 - Распространенность болезней среди взрослых (18лет и старше) Республики Татарстан в 2006-2018гг.

Классы болезней М±т Ме 95% ДИ верхний 95% ДИ нижний

Республика Татарстан

БКМС 13,57±0,22 13,6 13,8 13,4

БЭС 63,96±14,05 59,4 83,3 50,5

г. Казань

БКМС 14,53±1,26 15,2 15,8 12,7

БЭС 63,97±6,68 65,9 69,4 59,1

На сегодняшний день, в связи с тенденцией старения населения планеты идет дальнейший рост частоты заболевания класса КМС и в частности остеопороза. Интересным оказался факт того, что анализ по регионам выявил снижение только по пяти регионам республики (СЗ, СВ, Предкамский, ЮВ, Закамский) (рис. 5), тогда как, в Предволжском регионе остался на прежнем уровне.

Рисунок 5 - Распространенность БКМС по регионам Республики Татарстан

Нами проведено ранжирование районов РТ по уровням первичной

заболеваемости остеопорозом взрослого населения. В группу с постоянно

низким уровнем относятся: Апастовский, Камско-Устьинский, Рыбно-

Слободский, Заинский, Муслюмовский, Пестречинский, Кукморский

Тетюшский, Бугульминский, Азнакаевский, Сабинский, Тукаевский.

Постоянно высокий уровень определён среди районов: Елабужский,

Спасский, Ютазинский, Арский, Балтасинский, Буинский, Новошешминский,

Казань. К территориям с большим разбросом показателей заболеваемости

остеопорозом относятся Лениногорский, Альметьевский, Атнинский,

Сармановский, Алексеевский и Кайбицкий районы (рис. 6).

148

Рисунок 6 - Распределение муниципальных районов Республики Татарстан по уровню первичной заболеваемости взрослого населения остеопорозами за 20072018 гг.

К районам с низким уровнем первичной заболеваемости остеопопрозом относятся: Муслюмовский, Бавлинский, Набережные Челны, Тетюшский, Пестречинский, Арский, Алькеевский, Балтасинский, Азнакаевский и Казань (рис.4). Последние три района имеют значения заболеваемости в диапазоне 2-го квартиля (выше 25 процентиля, но ниже медианы). Районы с высоким уровнем распространённости остеопороза: Алексеевский, Менделеевский, Нурлатский, Высокогорский, Апастовский, Зеленодольский, Новошешминский, Елабужский. Буинский, Нижнекамский, Тукаевский относятся к 3 квартилю (выше медианы, но ниже 75 процентиля). Существенный разброс значений распространённости остеопорозом определяется в Лаишевском, Лениногорском, Альметьевском, Сармановском (с положительной динамикой), Агрызком, Актанышском, Мамадышском (с отрицательной динамикой) и Дрожановском районах (Рис.7).

Рисунок 7 - Распределение муниципальных районов Республики Татарстан по уровню распространенности взрослого населения остеопорозами за 2007-2018 гг.

Уровень колебаний первичной заболеваемости остеопорозом взрослого населения находится в РТ от 1,5 и 13,2 случаев, в Казани от 6,1 до 69,2 случаев на 1000 населения соответствующего возраста. В то же время значение медианы (95 % ДИ) распространенности заболеваний у взрослого населения г. Казани в 3,8 раза выше, чем в РТ (соответственно: 45,41 и 12,37 случаев на 1000 населения).

Анализ общей и первичной заболеваемости между муниципальными образованиями республики, прежде всего, свидетельствует о недостаточно полном выявлении больных данным классом болезней по ряду причин (выявление и лечение в ранний период преклинических форм, нагрузка врачей, их квалификация и др.). С другой стороны, полученные результаты позволяют придти к выводу о том, что заболеваемость остеопорозом относится к той группе мультифакторных метаболических костных патологий, которая зависит от различных предрасполагающих факторов и определяется тесным взаимодействием между наследственными, гормональными

факторами, образом жизни и внешнесредовыми причинами. Усредненные показатели на республиканском уровне нивелируют эффекты воздействия отдельных факторов на территориях районов, и усложняет выделение приоритетного из них.

Таким образом, в целом по республике, среди взрослого населения, в большей степени, выросла первичная заболеваемость, чем распространенность болезнями КМС и остеопорозом, в определенной мере отражая влияние факторов окружающей среды.