Биогенез рибосом и экспрессия вителлогенинового гена в печени цыплят тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Карапетян, Рубен Ваагнович

• Карапетян, Рубен Ваагнович
• кандидат биологических наук
• 1984

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Карапетян, Рубен Ваагнович

ВВВДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Рибосомы и рибосомные гены.

2. Биосинтез вителлогенина.

3. Э с трог ениндуцированный вителлогенез как модель для изучения экспрессии генов.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Материалы и методы.

2. Определение рибонукяеазной активности в печени цыплят.

3. Динамика ответа печени цыплят на однократное введение эстрадиола и влияние дозы гормона.

4. Фракционный состав белков плазмы крови цыплят после введения эстрадиола.

5. Действие оС-аманитина, актиномицина Д, 5-бром-дезоксиуридина и тиоацетамида на эстрогенинду-цированный вителлогенез у цыплят.

6. Динамика ответа печени цыплят на однократное и повторное введение эстрадиола.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ. ПО

ВЫВОДЫ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ШЗДЮЖЕНШ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биогенез рибосом и экспрессия вителлогенинового гена в печени цыплят»

Необходимость дальнейшей интенсификации сельскохозяйственного производства, в частности птицеводства, ставит перед исследователями задачи разработки новых, более совершенных методов ранней оценки продуктивности животных, повышения ее, а также создания новых, более продуктивных пород, линий и кроссов, а в будущем, возможно, и видов сельскохозяйственных животных и растений. Для успешного решения этих задач необходимо знание многих фундаментальных механизмов организации и функционирования живых организмов. Одним из самых важных вопросов на сегодняшний день является вопрос организации и функционирования генома эукариотических организмов. Значение знаний в этой области трудно переоценить. Так, расшифровка многих механизмов функционирования генома прокариотов позволила быстро и направлено получать микроорганизмы с необходимыми свойствами и обусловило создание микробиологической промышленности и биотехнологии. В резерве имеются огромные возможности создания новых видов микроорганизмов с запрограммированными свойствами все развивающимися методами генетической инженерии. Помимо прямого использования фундаментальных знаний, которые непосредственно могут вылиться в новые методы, приемы и технологии, теория всегда позволяет правильнее интерпретировать результаты, даже полученные старыми, традиционными методами. Тем самым она ставит новые задачи, открывает перспективы и дает новые возможности, попутно сама обогащаясь. На сегодняшний день накоплено много знаний об отдельных аспектах регуляции активности генома эукариотов, поэтому имеется широкое поле деятельности для уточнения и расширения наших знаний и их приложения к конкретным живым объектам и задачам сельскохозяйственного производства.

Одним из факторов регуляции активности генома у высших эукариотов являются стероидные гормоны. С наступлением половой зрелости функциональная активность печени кур значительно усиливается. В ней начинается активный синтез и секреция в кровь будущих компонентов яичного желтка. Как известно, регуляция этих процессов находится под контролем эстрогенов. Этот процесс можно смоделировать, вводя эстрогены цыплятам. Под влиянием введенного гормона в печени цыплят начинается синтез предшественников желтка. Поскольку у цыплят отсутствует поглощение предшественников растущими фолликулами, они накапливаются в крови и их концентрация позволяет судить об активности соответствующих групп генов. Этот эффект лег в основу предложенного лабораторией генетических основ селекции ВНИТИП метода ранней оценки яичной продуктивности кур. Кроме прогнозирования продуктивности существует еще ряд возможностей использования этого эффекта, в частности в селекции птицы по определенным биохимическим показателям. Указанные возможности обусловливают повышенный интерес к модели эстрогениндуцированного вителлогенеза у цыплят и необходимость его изучения по возможно большему числу параметров.

Центральную роль в реализации генетической информации играют рибосомы, поскольку именно на них осуществляется синтез белка. Количество рибосом в клетках определяет потенциальный уровень белкового синтеза. Нами было проведено исследование сопряжения синтеза, белка, в печени цыплят, в частности вителлогенина - предшественника желточных белков фосвитина и липовителлина., с биогенезом рибосом после введения цыплятам эстрадиола. Кроме того изучался также ряд других параметров эстрогениндуцированного вителлогенеза, а также воздействие на него некоторых химических агентов.

Научная новизна полученных результатов:

I. Введение эстрадиола цыплятам увеличивает содержание рибосом в гепатоцитах, причем после повторной эстрогенизации рибосом больше.

2. Индукция эстрадиолом синтеза вителлогенина. и липопротеи-дов очень низкой плотности имеет разную кинетику.

3. Изменение рибонуклеазной активности в печени цыплят после эстрогенизации имеет более сложный характер, чем ранее полагалось.

4. Наряду с увеличением синтеза РНК, тиоацетамид увеличивает рибонуклеазную активность в печени цыплят, что является одним из возможных факторов его ингибирующего действия на эстрогениндуци-рованный вителлогенез.

5. В отличие от <^-аманитин-чувствительного синтеза РНК, биогенез рибосом в первые часы после введения эстрадиола. не является необходимым условием для становления вителлогенной функции.

На защиту выносятся следующие основные положения:

1. Введение эстрадиола цыплятам приводит к увеличению содержания общего белка плазмы крови, которое на 75$ обусловлено появлением вителлогенина и липопротеидов очень низкой плотности. Фракционный состав белков плазмы крови эстрогенизированных цыплят идентичен составу белков у несушек. Кинетики эстрогениндуцирован-ного синтеза вителлогенина. и липопротеида очень низкой плотности I различаются.

2. Введение эстрадиола цыплятам приводит к увеличению количества рибосом в гепатоцитах. В первой половине ответа печени на гормон, когда происходит увеличение количества рибосом, рибонук-леазная активность в печени ниже, а во второй, когда число рибосом в гепатоцитах уменьшается - выше уровня контроля. В первые 3-4 часа после введения эстрадиола рибонуклеазная активности резко и кратковременно повышается.

3. Необходимым условием развития ответа печени цыплят на эстрадиол является синтез мРНК непосредственно после введения гормона, блокирование которого сС-аманитином полностью снимает действие эстрадиола. Биогенез рибосом на начальных стадиях ответа не обязателен. Блокирование его актиномицином Д приводит лишь к равномерному снижению биосинтетических црцессов в печени за счет дефицита рибосом. Тиоацетамид, увеличивая ситез РНК в печени, увеличивает также активность рибонукяеаз, что является одним из возможных факторов его ингибирующего действия на эстрогениндуцированный виталлогенез.

4, Повторное введение эстрадиола цыплятам вызывает значительно более интенсивный синтез вителлогенина в их печени. Фракционный состав балков плазмы крови цыплят после повторной эстрогенизацсш качественно не отличается от такового после однократного введения гормона. Содержание рибосом в гепатоцитах после повторной эстроге-низации выше, чем после однократной.

5. Увеличение дозы эстрадиола не только увеличивает скорость синтеза и содержание вителлогенина на максимуме, но и передвигает максимум на более позднее время, что говорит об увеличении не только скорости, но и продолжительности синтеза вителлогенина. Большие дозы эстрадиола действуют на синтез вителлогенина угнетающе. Оптимальной дозой эстрадиола для цыплят 90 дневного возраста является ЗОмг/кг живой массы.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ I. Рибосомы и рибосомные гены Рибосомы, строение и функция

Рибосомы являются органеллами, которые присутствуют во всех живых клетках и играют ключевую роль в синтезе белка. Впервые рибосомы наблщцались в цитоплазме и на поверхности мембран эндоплаз-матической сети. Впоследствии, в опытах с бесклеточными системами синтеза белка было показано, что эти рибонуклеопротеидные частицы являются местом включения меченых аминокислот.

Каждая рибосома состоит из двух субъединиц: большей и меньшей. Структурной основой каждой субъединицы является молекул a. (молекулы) РНК, "покрытая" различными белковыми молекулами. В природе имеется два основных класса рибосом: рибосомы с константой седиментации 70£ у прокариотов и рибосомы с константой седиментации 80$ у эукариотов. Между ними имеются значительные различия, причем как в рибосомных РНК, так и в белковой компоненте. 705 рибосос. мы прокариотов имеют массу примерно 2,8-10 дальтон; рибосомы эу-кариотов крупнее, масса, их 4,0*10 дальтон. Рибосомы прокариотов состоят из частиц с константами седиментации 30S и 503; у эукариотов соответственно 405 и 60S. Меньшая частица рибосом прокариотов состоит из одной молекулы РНК с константой седиментации 16 s , массой 0,6*106 дальтон, длиной в 1600 нуклеотидов и 21 молекулы белка. Большая частица рибосом прокариотов содержит две молекулы РНК: 236 и 5S, длиной в 3200 и 120 нуклеотидов и 34 молекулы белка. У эукариотов меньшая рибосомная частица имеет в составе также одну молекулу РНК с константой седиментации 17-185, длиной примерно 2000 нуклеотидов и 30 молекул балка. Большая рибосомная частица эукариотов состоит из трех молекул РНК: 26-285, 5,8S и 55, длиной в 4000-5000, 158 и 120 нуклеотидов соответственно и 40 молекул белка. Рибосомы эукариотов в среднем содержат равные количества РНК и балка, у прокариотов содержание РНК составляет примерно 65$. Для клеток печени высших эукариотов характерно следующее распределение РНК: около 11% приходится на ядро (в основном это мРНК), около 15$ на митохондрии (рРНК и тРНК), свыше 50$ на цитоплазма-тические рибосомы (в основном рРНК) и около 24% на цитозоль (в основном тРНК) (14, 29, 83, 129).

На структурном уровне между рибосомами прокариотических и эу-кариотических микроорганизмов существует гораздо больше отличий, чем мезду рибосомами сильно дивергировавшихся в ходе эволюции эукариотов. В чем причина этих отличий и почему они закрепились в ходе эволюции не известно, так как молекулярные механизмы синтеза балка у прокариотов и эукариотов практически одинаковы. Примечательно, с что размер меньшей субъединицы рибосом эукариотов (0,7*10 ) остается практически постоянным в эволюции, а РНК большей частицы варьирует в небольших пределах, от 1,3-10^ у дрожжей и растений до 1,7-Ю6 у млекопитающих (24, 29, 83). Таким образом, рибосомы представляют собой исключительно сложные образования для изучения их химического строения и пространственного расположения отдельных элементов структуры. Сложность заключается и в том, что для электронного микроскопа они малы, а для другого традиционного метода исследования структуры микрообъектов - рентгеновского рассеяния, - слишком велики и сложны, и пока не удавалось искусственно получить кристаллы рибосом. Когда впервые было выяснено, что рибосомы играют важную роль в синтезе белка, предполагалось, что рибосомная РНК служит матрицей. Но только в I960 году было однозначно показано, что рибосомная РНК матричными свойствами не обладает. Матричную функцию выполняет особая РНК (мРНК), на долю которой приходится не более нескольких процентов от общего содержания РНК в клетке (29). Все молекулы рРНК представляют собой цепи с неодинаковым числом оснований способных спариваться друг с другом, образуя двухцепоцечные шпильки. В частности, для большей рибосомной РНК (286 рРНК) точно установлено наличие нескольких последовательностей в 100-500 нуклеотидов, содержащих до 78$ гуа-нина(Г) + цитозина(Ц) и образующих характерные двухцепочечные петли (84). Эти богатые Г+Ц участки представляются более поздним приобретением эволюции, поскольку они лучше выражены в рРНК животных (83). До недавнего времени не существовало удовлетворительной гипотезы о том, почему рибосомы содержат как РНК, так и белок. Ныне полагают, что молекулы рибосомных РНК служат каркасом для сборки рибосомных субчастиц, так как имеют определенную трехмерную структуру и участки для специфического связывания рибосомных белков, что способствует образованию совершенно определенной трехмерной конфигурации рибосомы. Главная функция рибосом заключается в том, чтобы правильно ориентировать поступающие аминоацилтранспорт-ные РНК (АА-тРНК) относительно матричных РНК и таким образом обеспечивать точное считывание генетического кода. На. поверхности рибосом имеются особые участки, связывающие надлежащим образом мРНК, АА-тРНК и растущую полипептидную цепь. Матричные РНК прокариотов имеют один или несколько участков связывания; у эукариотов он только один. В пределах каждого участка связывания имеются нукле-отидные последовательности, единственная функция которых заключается в том, чтобы обеспечить правильное расположение молекул мРНК на поверхности рибосом перед началом синтеза белка. Стадия инициации синтеза белка начинается с образования комплекса между меньшей субъединицей рибосомы, мРНК и формилметионин-тРНК (у эукариотов метионин-тРНК не формулируется). Затем к этому комплексу присоединяется большая субъединица и образуется функционально активная рибосома. В процессе присоединения АА-тРНК и роста полипептидной цепи (фермент,осуществляющий образование пептидной связи, является неотъемлемой составной частью большей субъединицы) молекула мШК движется относительно рибосомы, и ее освободившийся участок связывания может присоединить следующую рибосому и так далее. Таким образом образуются полирибосомы или полисомы - структуры состоящие из нескольких рибосом, как бусы на нитку "нанизанные" на молекулу мРНК. Количество рибосом в полисоме зависит от длины мРНК. При этом каждая рибосома, учавствует в синтезе одной полипептвдной цепи и по завершению ее отдаляется от мРНК и распадается на субчастицы, которые затем опять могут участвовать в инициации белкового синтеза (29).

Рибосомные гены эукариотов

Поскольку рибосомные РНК выполняют при биосинтезе балка совершенно особую роль, существовало предположение, что молекулы рРНК не синтезируются на матрицах ДНК, а подобно одноцепочечным вирусным РНК обладают способностью к самовоспроизведению. Опыты по молекулярной гибридизации рибосомных РНК и ДНК показали, что это предположение не верно. Особый интерес вызывает тот факт, что хотя рРНК и тРНК составляют в сумме около 98% всей РНК клетки, для синтеза их используется в качестве матриц менее 1% всей клеточной ДНК. Гены, кодирующие рРНК у эукариотов, организованы в виде кластеров, содержащих сотни и даже тысячи копий. В часности, участок генома дрожжей, кодирующий рРНК, состоит из более чем сотни тандемно повторяющихся единиц, разделенных нетранскрибиру-емой спейсерной последовательностью. Каждая повторяющаяся единица кодирует большой предшественник рРНК (пре-рРНК), содержащий последовательности 185, 5,85 и 28 S рибосомных РНК, a, также последовательности, не входящие в дальнейшем в состав рибосомных РНК, которые деградируют в процессе созревания рибосом (83, 129, 155). Примечательно, что 5S РНК синтезируется независимо (188). У большинства эукариотов ген 55 РНК не связан с рибосомными генами и имеет различную хромосомную локализацию, однако у дрожжей он физически связан с рибосомными генами, то есть его копии расположены на тех же участках хромосом, что и рибосомные гены. Но и в этом случае 5 S ген транскрибируется РНК полимеразой III, тогда как транскрипция рибосомных генов осуществляется РНК полимеразой 1.(154, 159). Гены всех рибосомных РНК в геноме эукариотов в значительной степени повторены. Структура рибосомных РНК чрезвычайно стабильна в эволюционном плане, однако она все же претерпела определенную эволюцию. Изменялась также степень множественности рибосомных генов в геноме организмов: в настоящее время лишь у мико-плазм рибосомный цистрон содержится в одном экземпляре на геном, у остальных организмов имеются множественные копии рибосомных генов, число которых на гаплоидный геном изменяется от 4-6 у кишечной палочки до сотен тысяч у растений (24). В течение жизненного цикла организмов, стоящих на разных эволюционных ступенях, происходит избирательное изменение числа рибосомных генов, не связанное ;с изменением числа других генов. Это явление получило название амплификации или, в некоторых случаях, магнификации. Амплификация, то есть многократное, даже тысячекрактое, увеличение содержания рибосомных генов (рДНК) на ядро с образованием экстрахромосомных копий, наблюдается в ооцитах. Магнификацией называется наследуемое увеличение рЦНК у мутантов с дефицитом по этому гену. . Селективное увеличение рЦНК было показано для ооцитов амфибий (46), зародышей пшеницы (51), у дрозофилы (181). Амплификация специфического гена рассматривается многими исследователями как механизм, позволяющий достигать очень высоких скоростей белкового синтеза в определенные критические стадии развития. То, что количество рибосомных генов может быть ключевым фактором ограничения функционирования организмов, показано на мутантах, дефицитных по рЦНК. Например, дефицитный по рибосомным генам мутант низкую плодовитость, низкую скорость роста и развития, укороченное время жизни и много анатомических дефектов (77, 140). Время жизни этих мутантов снижается как функция от степени недостатка этих генов (174). У некоторых высших эукариотов были также обнаружены мутации с недостатком рибосомных генов. У африканской шпорцевой лягушки ксенопуса получены индивиды, которые имеют только 35$ рЦНК от ее нормального содержания на диплоидный геном. Скорость синтеза рРНК у этих мутантов снижена в два раза по сравнению с нормальной (135). Такое снижение приводит к тощ", что эти вдутан-ты погибают до завершения ранних стадий развития.

Снижение числа рибосомных генов было показано для постмито-тических тканей стареющих организмов. При исследовании числа рибосомных генов в возрастном аспекте гибридизацией меченой радиоизотопом рРНК с ДНК печени и мозга собаки, селезенки, мозга, миокарда и скелетных мышц козы было показано, что снижение дозы ДНК, гибридизуемой с рРНК наблюдается только в постмитотических тканях - миокарде, скелетных мышцах и мозге (98, 100). Для человеческого миокарда скорость снижения составила 0,5$ в год, мозга - 0,9$ (99, 173, 174). Приведенные данные указывают, что в процессе онтогенеза, старения, происходит снижение содержания этих ключевых генов или гибридизуемости рЩЖ в постмитотических тканях долгоживущих млекопитающих. Молекулярные механизмы изменения числа копий рибоимеет пониженную жизнеспособность, сомных генов остаются пока невыясненными.

Биогенез рибосом

Рибосомы эукариотических клеток состоят из четырех видов ри-босомных РНК - 53, 5,83, 17-18$, 25-285, а также из 70 различных белков. Поэтоцу образование рибосом является очень сложным процессом, для которого необходимо:

- синхронная продукция всех рибосомных составных элементов и координированная экспрессия большого числа различных генов;

- сборка всех компонентов в так называемые прерибосомные частицы в определенной последовательности;

- последующий строго контролируемый процессию? прерибосом-ных частиц в зрелые рибосомные субъединицы.

Первые экспериментальные свидетельства об определенной локализации рибосомных генов были получены при разрушении ядрышка клетки \\tla. микролучем ультрафиолетового света (183). Другим свидетельством было отсутствие синтеза рРНК у зародышей ксенопуса., гомозиготных по безъядрышковой мутации (45). Эта мутация связана с полной делецией рДНК (135). Однако прямые доказательства о локализации рДНК и месте синтеза рибосом были-получены при использовании гибридизации высокомеченной рРНК непосредственно на препаратах ядер (72) и окрашивании их серебром (87, 91, 191). Было показано, что серебром окрашиваются только активные ядрышки и степень окрашивания зависит от функциональной активности ядрышек (90).

Значительно меньше известно о генах, кодирующих рибосомные белки у эукариотов. Получены доказательства, что дрожевые мРНК для рибосомных белков транскрибируются с транскрипционной единицы, которая в 12 раз длиннее, чем можно было предполагать (186). Возможно, что гены рибосомных белков, как и гены рРНК образуют кластерные структуры. Такая генетическая организация генов рибосом-ных белков может объяснить строгую коорцинированность синтеза ри-босомных балков, как это было показано для, по меньшей мере, 40 балков мутантных дрожжей, неспособных синтезировать рибосомы при повышенной температуре (74). Подобная кластерная организация известна не только для генов рШК и тРНК. Известны повторяющиеся гены с конечным белковым продуктом, например гены гистонов (89, 108). Биогенез рибосом у эукариотов начинается с транскрипции генов рРНК высокоселективной РНК полимеразой I. Этот большой транскрипт содержит последовательности для I8S, 5,8s и 28S рРНК, а также значительные участки транскрибируемого спейсерного материала, которые элиминируются в процессе созревания этого предшественника, (83,129, 155). У клеток HeLd эта молекула содержит 13000 нуклеотидов и имеет константу седиментации 455. Длина предшественника варьирует у разных видов эукариотов в основном за счет длины транскрибируемого спейсера и в меньшей мере за счет длины большей рРНК (25-28S). Для простоты термин 45s РНК применяется для обозначения первичного транскрипта у всех эукариотов. Роль транскрибируемого спейсера. неясна. Поскольку у всех изученных эукариотов имеется пул 45S пре-РИК, следует, что образование рибосомы может начаться только после полного завершения транскрипции и образования молекулы 45 S РНК с правильной структурой. Более того, точно установлено, что растущая пре-рРНК связывается с балками (134). Таким образом, наличие дискретного рибонуклеопротеинового комплекса (пре-рРНП) является важной начальной стадией биогенеза рибосом.

Применение электронного микроскопа для прямого наблюдения вторичной структуры пре-рРНК и рРНК (202) явилось важным инструментом для изучения структурной организации молекулы пре-рРНК. Вжо показано, что большая и меньшая молекулы рРНК в составе предшественника. разделены внутренним транскрибируемым спейсером, а относительно большой внешний транскрибируемый спейсер находится на 5'-конце. Этот принцип организации является общим для всех эу-кариотов, хотя внешний транскрибируемый спейсер у некоторых низших эукариотов отсутствует (85). Транскрипция начинается с промотора, расположенного на внешнем транскрибируемом спейсере и заканчивается на участке, соответствующем з'- концу 28Э рШК. Особенностью молекулы пре-рРНК является ее характерная первичная и вторичная структура. Участки 285 и 185 рРНК в предшественнике полностью структурированы уже на ранних стадиях биогенеза и в дальнейшем подвергаются лишь незначительным модификациям при процессинге. Последовательности рРНК в предшественнике претерпевают интенсивное посттранскрипционное метилирование и псевдоуридилирование, которое завершается на. стадии пре-рРНК. Так, для клеток из 116 метальных групп предшественника НО групп найдены в специфических местах 18 Э и 28 Й рРНК (130). Двухцепочечные, богатые гуанином и цитозином петли, которые находятся в пре-рРНК, в процессинге не изменяются и входят в состав зрелых рРНК.

Сложный механизм процессинга рибосом может быть разделен на три основные стадии:

- начальный разрыв цепи молекулы 455 пре-рРНК в таком месте, чтобы убрать внешний трансксибируемый спейсер;

- внутренний разрыв, приводящий к образованию двух молекул, пре-285 рРНК и пре-183 рРНК;

- конечная "отделка" промежуточных пре-рРНК, приводящая к зрелым молекулам рибосомных РНК.

На третьей стадии образуется 5,8$ РНК, которая остается связанной водородными связями с 28$ рРНК в составе большой субчастицы рибосом (83). Детали всех трех стадий остаются еще не выясненными. В частности, существует предположение, что поскольку внешний транкрибируемый спейсер находится на 5*-конце 45S РНК, возможен начальный разрыв еще до окончания транскрипции, что наверное имеет место у некоторых низших эукариотов (85). Специфическая нарезка молекул предшественника требует точного узнавания эндонук-леазой по меньшей мере пяти из нескольких тысяч фосфодиэфирных связей. Это говорит о том, что в молекуле предшественника имеются специфические маркерные участки, служащие дал точной локализации эндонуклеазной атаки. Устройство этих маркерных участков еще не выяснено, но исследование терминальных нуклеотидов в зрелых 285 и 18 £ рРНК показало,что у разных организмов в этой позиции находятся одни и те же нуклеотиды (85). Возможно, что метилирование и псевдоуридилирование нуклеотидов в специфических местах вдоль цепи пре-рРНК служит для обозначения маркерных участков. Около 80$ метальных групп в молекуле пре-рРНК связаны с рибозой в 2*-0--положении и, следовательно, защищают фосфодиэфирные связи от эндонуклеазной атаки. Маркерами могут служить и высокоспирализован-ные и богатые Г+Ц участки молекулы предшественника (83). Однако это пока только предположения. Возможность образования 16S и 23S молекул из пре-рРНК é. coll при воздействии на него рибонуклеазы (150), показало, что селективность эндонуклеазной атаки определяется первичной и вторичной структурой пре-рРНК. Но попытки про-цессинга w- tfitzo депротеинизированной эукариотической пре-рРНК успеха не имели. Некоторые авторы полагают, что в образовании маркерных сайтов для эндонуклеазы участвуют белки первичной пре-рРНК частицы. Это подтверждается наблюдениями, что различные ри-босомные белки добавляются в процессе биогенеза рибосомы (112).

В клетках млекопитающих разных видов скорость продукции рибосом тесно связана со скоростью роста (127, 137, 185). Среди регулирующих биогенез рибосом факторов наиболее предпочтительными представлялись белковый синтез (169, 205) и метилирование пре-рРНК (33, 195), Было показано, что в клетках, не получающих метио-нин, происходит блок синтеза рибосом (180), хотя 45S предшественник продолжает синтезироваться. Однако, подавление синтеза рибосом, полученное в этой работе, может быть отнесено не за счет недоме-тшшрования пре-рРНК, а за счет подавления синтеза белка из-за недостатка метионина. Позднее, в работе с циклолейцином, специфическим и обратимым ингибитором метилирования нуклеиновых кислот, бшо показано, что нет прочной связи между метилированием и транскрипцией (48). Во время интенсивного (95$) блока метилирования синтез 45 S предшественника продолжался с почти прежней скоростью. Недометилированная пре-рИЖ подвергается точно такому же процес-сингу, как и в контроле. Однако было отмечено значительное влияние недометилирования на последние стадии созревания рибосом. Выход 28S РНК в цитоплазму значительно замедляется (85-90$ ингиби-рования). Нормальный уровень метилирования пре-рИЖ представляется не строго необходимым для полного созревания рРНК. Существует точка зрения, что контроль биогенеза рибосом у прокариотов осуществляется на стадии транскрипции, а у эукариотов главные контролируемые стадии биогенеза рибосом посттранскрипционные (83, 85). Эксперименты на различных эукариотах с ингибиторами белкового синтеза циклогексимидом и пуромицином показали, что ингибирование белкового синтеза блокирует образование зрелых рибосом, в то время, как транскрипция 45S РНК практически не меняется (30, 73, 172). Однако существенно изменяется при этом последовательность отдельных этапов процессинга и содержание различных промежуточных продуктов. Так, в результате действия циклогексимцца, снижается образование 185 и 28S рРНК, a, также наблюдается блокирование образования 41$ и 21Б пре-рРНК. Хотя образование 365 и 325 пре-рРНК происходит с нормальной скоростью в присутствии циклогексимида, их превращение в ядрышковую 285 рРНК замедляется (172). Полученные данные о влиянии ингибиторов биосинтеза белка на биогенез рибосом подтверждают вывод, что для нормального процессинга пре-рРНК необходимо постоянное поступление одного ш нескольких белков. Этими белками могут быть рибосомные белки, модифицирующие пре-рРНК (198). Какие именно белки играют эту важную роль пока не выяснено, однако ясно, что ограниченная доставка одного или нескольких белков может препятствовать правильному процессу созревания и приводить к деградации или избыточному количеству промежуточных пре-рРНК.

Эксперименты с использованием ингибиторов показывают, что последние стадии образования рибосом находятся под строгим контролем, тогда как начальные стадии процессинга характеризуются большой гибкостью. Изменение структуры пре-рРНК включением 5-фтороротата или тойокамицина (201) не влияет на транскрипцию и начальный процессинг, в то время как образование зрелых рибосом полностью останавливается. Блокирование именно последних стадий созревания рибосом характерно и для действия ингибиторов белкового синтеза - циклогексимида и пуромицина (85).

Итак, рибосомы играют важную роль в экспрессии генов. Они являются тем механизмом клетки, который осуществляет-перевод информации, закодированной последовательностью нуклеотидов матричных РНК в последовательность аминокислот белковой молекулы. Структурную основу рибосом составляют РНК. Размер и вторичная структура рибосомных РНК несмотря на высокую стабильность, претерпели, однако, в ходе эволюции определенные изменения. Изменялась в ходе эволюции и степень множественности рибосомных генов. У эукариотов рибосомные гены в геноме образуют блоки с тандемной структурой. Принципиальным отличием рибосомных генов является то, что их число может сильно варьировать как в филогенезе, так и онтогенезе. Число рибосомных генов определяет скорость синтеза рРНК, то есть определяет потенциальный уровень содержания рибосом в клетке. Количество рибосом в клетке определяет потенциальный уровень белкового синтеза и, в свою очередь, зависит от белкового синтеза и ряда других, менее ясных параметров клетки или организма.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Карапетян, Рубен Ваагнович

ВЫВОДЫ

1. Введение эстрадиола цыплятам приводит к увеличению содержания общего белка в плазме крови, которое на 1Ъ% обусловлено появлением вителлогенина и липопротеидов очень низкой плотности.

2. Содержание фосфопротеидного фосфора и общего кальция в крови эстрогенизированных цыплят связаны линейной зависимостью. На две фосфатные группы вителлогенина приходятся три атома кальция.

3. Введение эстрадиола вызывает увеличение массы печени цыплят за счет пролиферации и гипертрофии гепатоцитов. Увеличивается также содержание в гепатоцитах рибосом.

4. Изменение рибонуклеазной активности в печени цыплят после эстрогенизации имеет двухфазный характер. В первой половине ответа, когда происходит увеличение числа рибосом, она ниже, а во второй, когда число рибосом в гепатоцитах уменьшается - выше уровня контроля. В первые часы после введения эстрадиола рибонукле-азная активность резко и кратковременно повышается, что сопровождается уменьшением количества рибосом в гепатоцитах.

5. Необходимым условием для развития ответа печени на эстро-генизацию является синтез мРНК в первые часы после введения гормона. Биогенез рибосом в это время не является необходимым.

6. Введение сс-аманитина на фоне индуцированного эстрадиолом вителлогенеза в печени цыплят в разной степени ингибирует синтез вителлогенина и триглицеридов, что связано с различной чувствительностью этих биосинтезов к изменениям метаболизма РНК.

7. Тиоацетамид, увеличивая скорость синтеза РНК в печени цыплят не увеличивает ее содержания, что объясняется параллельным увеличением им РНК-азной активности. Это является одним из возможных факторов его ингибирующего действия на эстрогениндуци-рованный вителлогенез у цыплят.

8. Индукция экзогенным эстрадиолом вителлогенеза в печени цыплят по всем изученным параметрам полностью обратима. Однако имеет место "эффект памяти" на эстроген, который выражается в значительно большем ответе на повторное введение гормона. Содержание рибосом в печени после повторной эстрогенизации выше, чем после однократной.

9. Синтез вителлогенина увеличивается с увеличением дозы эстрадиола, но до определенных пределов. Высокие дозы действуют угнетающе. Увеличение дозы гормона не только увеличивает содержание вителлогенина на максимуме, но и передвигает максимум на более позднее время.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЙ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

1. При прогнозировании продуктивности кур с помощью модели эстрогениндуцированного вителлогенеза нет неоходимости использовать в качестве показателей фосфопротеидный фосфор и общий кальций одновременно, достаточно одного из них. Использование в качестве показателя общего кальция из соображений методического характера является предпочтительным.

2. Данные об относительно независимом контроле эстрогенами синтеза вителлогенина и липопротеидов очень низкой плотности используются в исследованиях отдела разведения и генетики с.-х. птиц Всесоюзного научно-исследовательского института разведения и генетики с.-х. животных и лаборатории биохимической генетики Белорусской зональной опытной станции по птицеводству.

3. Данные о том, что биогенез рибосом является одним из факторов, определяющих количественную сторону ответа печени цыплят на эстрадная, используются при изучении множественности рибосом-ных генов у кур в лаборатории генетических основ селекции ВНИТИП.

4. Модификации методик определения РНК-азной активности, общего белка, фосфора, электрофореза белков плазмы крови, а также некоторые данные о возможностях использования эстрогениндуцированного вителлогенеза, как модели для изучения метаболизма, применяются в работе лаборатории генетических основ селекции ВНИТИП и проблемной лаборатории обмена веществ Ереванского ордена Знак Почета зоотехническо-ветеринарного института.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Карапетян, Рубен Ваагнович, 1984 год

1. Абакумова О.Ю. Метод фракционирования меченых клеточных макромолекул с помощью миллипоровых фильтров. В кн.: Современные методы в биохимии / Под ред. В.Н.Ореховича. М.: Медицина,1977, с. 338-342.

2. Арбузов В. А. Метаболизм информационных РНК мембраносвязанных и свободных полирибосом в клетках печени крыс в процессе трансляции и при ее ингибировании. Биохимия, 1977, т. 42, № 2, с. 338-349.

3. Арбузов В.А. Стабилизация мРНК полирибосом в клетках печени крыс при ингибировании бежового синтеза циклогексимидом. -Биохимия, 1978, т. 43, 5, с. 838-850.

4. Бойков П.Я., Сидоренко Л.И., Тодоров И.Н. Биогенез хроматина в клетках высших животных. Активация синтеза ядерных белков и ДНК гепатоцитов после импульсного торможения трансляции циклогексимидом. Биохимия, 1979, т. 44, 16 6, с. 963-974.

5. Гааль Э., Медьеши Г., Верецкеи Л. Электрофорез в разделении биологических макромолекул. М.: Мир, 1982. - 448 с.

6. Влурман В.Е. Теория вероятностей и математическая статистика. М.: Высшая школа, 1972. - 368 с.

7. Гоулдинг К. Методы практической биохимии. М.: Мир,1978. 272 с.

8. Грибанов Г.А., Сергеев С.А., Алексеенко А.С. Микротонкослойная хроматография фосфолипидов сыворотки крови и их количественное определение с помощью малахитового зеленого. Лабораторное дело, 1976, № 12, с. 724-727.

9. Ельцина Н.В. Биохимические аспекты действия эстрогенов на нормальные компетентные ткани и механизм участия их в канцерогенезе. Успехи современной биологии, 1975, т. 80, вып. 3(6), с. 339-413.

10. Ельцина Н.В. Рецепторы эстрогенов в опухолях молочных желез животных и человека. Вопросы онкологии, 1975, т. 21,5, с. 118-126.

11. Журавлев И.В., Фисинин В.И. Итоги и перспективы■генетики сельскохозяйственной птшщ. Сб. науч. тр. / Всесоюз. н.-и. и технол. ин-т птицеводства, 1980, т. 50, Проблемы промышленного производства яиц и мяса птицы, с. 21-27.

12. Изучение некоторых структурных форм цитоплазматических рецепторов к эстрадиолу матки, почек и печени крыс / О.Б.Смирнова, А.Н.Смирнов, У.М.Фишер, В.Б.Розен. Докл. АН СССР, 1976, т. 226, & 2, с. 474-477.

13. Лениндаер А.Л. Биохимия. М.: Мир, 1976. - 960 с.

14. Марибона Р., Корнева С.Б., Копылов А.М. Выделение рибосом с интактной рРНК из дрожжей. Биохимия, 1979, т. 44, 9,с. I70I-I705.

15. Мецлер Д. Биохимия. М.: Мир, 1980. - т. 3, 487 с.

16. Нейфах A.A., Тимофеева М.Я. Проблемы регуляции в молекулярной биологии развития. М.: Наука, 1978, - 312 с.

17. Пикер Е.Г., Уманский С.Р. Модель регуляции активности генома в клетках эукариотов. Молекулярная биология, 1976,т. 10, вып. 3, с. 633-640.

18. Полирибосомы, синтезирующие тиреоглобулин в клетках щитовидной железы. Выделение и определение размера популяции / Д.А.Кадырова, Е.В.Любимова, Б.А.Атаханова, В.Л.Лейтин. Докл. АН СССР, 1978, т. 239, №5, с. I25I-I254.

19. Смирнов А.Н. Проблема гетерогенности рецепторов стероидных гордонов. Проблемы эндокринологии, 1978, т. 24, JS 6,с. 98-107.

20. Смирнов А.Н., Смирнова О.В., Розен В.Б. Выявление и предварительная характеристика особого эстрогенсвязывающего бежа в печени самцов крыс. Биохимия, 1977, т. 42, й 3, с. 560-571.

21. Спирин A.C. Спектрофотометрическое определение суммарного количества нуклеиновых кислот. Биохимия, 1958, т. 23,с. 656-662.

22. Сравнительный анализ изучения взаимодействия различных форм эстрогенных рецепторов с клеточным ядром./ Г.Д.Матарадзе, Е.В.Гонтарь, Я.Ю.Кондратьев, В.Б.Розен. Биохимия, 1982, т. 47, № 5, с. 869-878.

23. Стрелков Л.А., Кафиани К.А. Молекулярная биология генов, программирующих рибосомные РНК животных. Успехи биологической химии, 1978, т. 19, с. 32-60.

24. Татарская Р.И. Нуклеазы. Биологическая роль. Молекулярная биология, 1976, т. 10, вып. 2, с. 235-259.

25. Трудолюбова М.Г. Количественное определение РНК и ДНК в субклеточных фракциях клеток животных. В кн.: Современные методы в биохимии / Под ред. В.Н.Ореховича. М.: Медицина, 1977, с. 313-316.

26. Уотсон Д.Д. Молекулярная биология гена. М.: Мир, 1978. - 720 с.

27. Фельдкорен Б.И., Зшгьбер М.Л., Рогозкин В.А. Синтез белков скелетных мышц и ДНК-зависимая РНК-полимеразная активность ядер при действии циклогексимида. Украинский биохимический журнал, 1978, т. 50, № 3, с. 292-295.

28. Черновская Т.В., Любимова Е.В., Лерман М.И. Метаболизм мРНК в клетках регенерирующей печени: ускорение процессинга и распада мРНК. Молекулярная биология, 1976, т. 10, вып. 6,с. I36I-I368.

29. Шапот B.C. Цуклеазы. М.: Медицина, 1968. - 212 с.

30. Acrilamide gel electrophoressis of HeLa cell nuc~ leolar RNA / R.A.Weinberg, U.Loening, M.Willems, S.Pen-mas. ~ Proc. Nat. Acad. Sei. USA, 1967, v. 58, N 3,p. 108 8" 109 5 .

31. Andersen M.W., Ballal N.R., Busch H. Nucleoli of t h i o a c e t am i d e—t r e at e d liver as a model for studying regulation of ribosomal RNA synthesis. Biochem. Biophys, Res. Commun.,19 77, v. 78, N 1, p. 12 9-13 5.

32. Borthwick N.M., Smellic R. M„ The effect of oest-radiol-17 on the ribonucleic acid polymerasis of immature rabbit uterus. Biochem. J., 19 7 5, v. 147, p. 91-101.

33. Brown D.D., Gurdon J.B. Absence of ribosomsl RNA synthesis in the anucleolate mutant of Xenopus lae-vis. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1964, v. 51, p. 139-146.

34. Brown D.D., Igor B.D. Specific gene amplification in oocytes. Science, 1968, v. 160, N 3825, p. 272-279.

35. Busch H. The current excitement about gene controls of nucleolar rDNA. Life Science, 19 7 8, v. 23, N 26, p. 2543-2554.

36. Caboche M., Bachellerie J.P. RNA methylation and control of eukaryotic RNA biosynthesis. Effects of cyclolauc ine, a specific inhibitor of metilation on riboso-mal RNA maturation. Eur. J. Biochem., 1977, v. 74, n 1, p. 19-29.

37. Chromy V., Fischer J. Photometric deter minationof total protein in lipemic sera. Clinical Chemistry, 1977, v. 23, N 4, p. 754-756.

38. Chromy V., Fischer J., Kulhanek V. Re-evaluation of E DTA» chelated biuret reagent. Clinical Chemistry,19 7 4, v. 2 0, p. 13 62-13 6 5.

39. Chung R.A., Ning J.M.J., Tsae Y.C. Effect of d i-ethylstilbestrol on the fatty met ab olism of cocherels. -Poultry Science, 1966, v. 45, p. 6 61-667.

40. Clark R.C. The isolation and composition of two ph o s pho p r ote in s from hen's egg. Biochem. J,, 19 7 0,v. 118,. N 3, p. 5 3 7-542.

41. Comparative analysis of the structural organization of two closely related vitellogenin genes in Xenopus laevis / W.Wahli, I.B.Dawid, T.Wyler, R. Weber, G.U.Ryffel. Cell, 1980, v. 20, p. 107-117.

42. Cox R., Haines M., Carey N. Modification of the template capacity of chick oviduct chromatin for form B RNA polymerase by estradiol. Eur. J. Biochem., 1973, v. 32, p. 513-524.

43. Difference in susceptibility to sonic at ion of chromatins containing transcriptionally active and inactive genes / K.Higashi, N.Hanasaki, A.Nakanishi, et al. BBA,19 78, v. 52 0, N 3, p. 6 12-622.

44. Differential effect of d imethylsulf oxide on S—ade-n o sy Im eth i on ine synthetase from rat liver and hepatoma / G.Ok ad a, Y.Sawai, T.Teraoka, K.Tsukada. FEB S Lett,, 1979, v. 106, N 1, p. 25-28.

45. Effect of ^«amanitin, cy c 1 o he x i m i d e and tioaceta-mide on low molecular weight nuclear RNA / Ro—Choi T.S.,

46. N.B.K.Raj, L.M.Pike, H.Busch. Biochemistry, 19 76,v. 15, N 17, p. 3823-3828.

47. Effect of estradiol on the RNA content and the activity of nucleolar RNA polymerase from rooster liver / J.A.Van den Berg, T.Kooistra, G.Ab, M.Gruber. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1974, v. 61, N 1, p. 367-374.

48. Estrsdiol- induced synthesis of vitellogenin. III. The isolation and characterization of vitellogenin messenger RNA from avian liver / G.Ab, W. G . D i j k s t r a, J.Mulder et al. BBA, 1976, v. 454, N 1, p. 67-78.

49. E s t r ad i o 1-in d u c e d synthesis of vitellogenin. IV. The isolation of non—degraded polysomes from avian liver using an endogenous ribonucle as e inhibitor / J.Dijkstra, J.Toum, I.Haisema et al. BBA, 1 978,v.! 5^1, N1, p. 363« -373.

50. Estradiol—induced vitellogenin synthesis in duck liver / P.Vein den Boogaart, J.Mulder, I.Haisema et al. -BBA, 1981, v. 654, N 1, p. 1-10.

51. E st r o g e n-in d u c e d p h o s p h o p r ot e i n synthesis in roosters / Bergink E.W., H.J.Kloosterboer, M.Gruber, G.Ab. BBA, 1973, v. 294, p. 497-506.

52. E st r o ge n-in d u c e d synthesis of yolk proteins in roosters / E.W. Bergink, R.A.Wallace, J.A.Van den Berg et al. Am. Zool., 1974, v.14, p. 1177-1193.

53. Gall J.G., Pardue M.L. Form at ion an d detection of RNA-DNA hybrid molecules in cytological preparations. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 19 6 9, v. 63, N 2, p. 378383.

54. Goldblatt P.J., Archer J., Eastwood C. The effect of hight an d low doses of cycloheximide on nucleolar ribonucleic acid synthesis. — Laboratory Investigan tion, 1975, v. 33, N 2, p. 117-124.

55. Gorenstein C. , Warner J.R., Coordinate regulation of the synthesis of eukaryotic ribosomal proteins.- Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1976, v. 73, N 5, p. 1547-1551.

56. Grove D., Nair K.G., Zak R. Biochemical correlates of cerdiac hypertrophy. III. Changes in DNA content the relative contribution of polyploidy and mitotic activity. Circ. Res., 1969, v. 25, p. 463-472.

57. Grover A., Sundharadas G., Talwar G.P. Estrogen action in rooster liver. — Eur, J. Biochem,, 1979, v. 100, N 2, p. 477-481.

58. Hadjiolov A.A., Cox R. A., Huvos P. The presence of a high-mole cular«weight ( guanin-plus—cyto sine )-r ich segment at the 3'end of rabbit 28S ribosomal ribonucleic acid. Biochem. J., 1975, v. 147, N 3, p. 625-628.

59. Henderson L.M., Bruere A.N. Association of nucleolus organizer chromosomes in domestic sheep (Ovis aries) shown by silver staining. Cytogenetics and Cell Genetics, 1977, v. 19, N 6, p. 326-334.

60. Hepatic nucle as es. 1. Methods for the specificd e t e r m in at i o n and characterization in rat liver / J.Bartho-leyns, C.PeeterswJoris, H.Reychler, P.Baudhuin. Eur. J. Biochem., 1975, v. 57, N 1, p. 205-211.

61. Histone genes are clustered with a 15-kilobase repeat in the chicken genome / R.J.Crawford, P.Krieg, R.P.Harvey et al. Nature, 1979, v. 279, N 5709, p. 132« «13 6.

62. FEBS Lett., 1979, v. 107, N 2, p. 281-284.

63. Identification of a large precursor of vitellogenin mRNA in the liver of estradiol~treated chicks / J.P.Jost, G.Pehling, T.Ohno, P. Cozens. Nucleic Acid Research, 1978, v. 5, N 12, p. 4781-4793.

64. In vitro translation of avian vitellogenin messenger R N A / J.I.Gordon, R.G.Deeley, A.T.H.Burns et al. -J. Biol. Chem., 1977, v. 252, N 2 2, p. 8320-8327.

65. Induction of vitellogenin synthesis by estrogenin avian liver: Relationship between level of vitellogenin mRNA and vitellogenin synthesis / K . P. Mullin ix, W.Wete« kam, R.J.Delley et al. Proc. Nat. Acad. Sci, USA, 1976, v. 73, N 5, p. 14 4 2» 14 4 6,

66. Jacob S.T., Saijdel E.M., Munro H.N. Specific action of oC—am an it in on mammalian RNA polymerase protein. Nature, 1970, v. 225, p. 60-62.

67. Jaikhani B.L., Talwar G,P. The role of estroge« nes in differentiation and growth of target tissues. Molecular mechanisms of gonadal hormone action. Advances in sex hormone research, 1975, v. 1, p. 359—395.

68. Johnson R., Chrisp C., Strehler B.L. Selective loss of ribosomal RNA genes during the aging of postmitotic tissues. Mech. Ageing Dev., 1972, v. 1,p. 18 3« 19 8,

69. Johnson L.K., Johnson R.W., Strehler B.L. Cardiac hypertrophy, aging and changes in cardiac ribosomal RNA gene dosage in man. J. Mol. Cell. Cardiol., 1975, v. 7, p. 125-133.

70. Johnson R., Strehler B.L. Loss of genes coding for ribosomal RNA in aging brain cells. Nature, 1972, v. 2 4 0, p. 412« 4 14.

71. Joss U., Bassand C., D i e r k s« Ve ntl i n g C. Rapid appearance of estrogen receptor in chick liver nuclei: partial inhibition by cy cloheximide. FEBS Lett., 1976, v. 6 6, N 2, p. 2 93-2 98.

72. Jost J.P., Keller R., D ie r k s«Ve ntling K. Deoxyribonucleic acid and ribonucleic acid synthesis during phosvitin induction by 17ji-estr ad i ol in immature chicks. J. Biol. Chem., 1973, v. 248, N 15, p. 5262-5266.

73. Jost J.P., Pehling G. Organization of vitellogenin polysomes, size of the mRNA and p oly ad e n ilat e fragment. Eur. J. Biochem., 1976, v. 62, p. 299-306.

74. Jost J.P., Pehling G. Immunochemical isolation and c har acte r i zat i on of vitellogenin mRNA from liver of estradiol-treated chicks. Eur. J. Biochem., 1976, v. 6 6, p. 339-346.

75. Jost J.P., Pehling G., Baca O.G. Rate of synthesis of J3«lip ovitellin in the liver of immature chicks treated with 17j$-e str ad i ol. Biochem. Boiphys. Res. Commun., 1975, v. 62, N 4, p. 957-965.

76. Kanerva P.A., Maenpaa P.H. C o d o n-s p e c if i c serine transfer ribonucleic acid degradation in avian liver during vitellogenin induction, Acta Chemica Scan-dinavica, 1981,v. 35, N 5, p. 379-385.

77. Kasupski G.J., Mukherjee B.B. Effect of controlled exposure of L cells to b r o m o d e oxyu r i d in e . I. Evi— denee for ordered gene replication during S phase, -Exp. Cell Res,, 1977, v. 106, N 2, p. 327-338,

78. Kedes L.H. Histone messengers and histone genes. Cell, 197 6, v. 8, N 3, p. 3 2 1-3 31,

79. Kinetics of avian vitellogenin messenger RNA induction. Comparison between primary and secondary response to estrogen / Deeley R.G., D.S.Udell, A.T.H. Burns et al. J. Biol. Chem., 1977, v. 252, N 22,p. 7 913^.7 915.

80. Klukas C.K. Regulating gene expression in differentiation. Nature, 1977, v. 265, N 5592, p. 297

81. Knowler J.T., Moses H.L., Spelberg T.C. Comparison and characterization of nuclear isolation procedures as applied to chick oviduct. >- J. Cell Biol.,1973. v. 59, N 3, p. 6 8 5- 6 9 5.

82. Kumar A., Sub ram am an A.R. Ribosome assembly in HeLa cells. Labeling pattern of ribosomal proteins by two-dimensional resolution. J. Mol, Biol., 1975, v. 9 4, N 3, p. 409-423.

83. Lempert A., Feige'lson P. A short liver polypeptide component of one of two discrete functional pools of hepatic nuclear — amanitin resistant RNA poly— merasis. Biochem. Bi ophys. Res. Commun., 1974, v. 58, p. 1030-1038.

84. L as tic S.M., McConkey E.H. Exch an g e an d s t ability of HeLa ribosomal proteins in vivo. J. Biol. Chem, 1976, v. 251, p. 2867-2875.

85. Lazier C. / H/—estradiol binding by chick liver nuclear extracts: mechanism of increase in binding following estradiol injection. Steroids, 1975, v. 26, N 3, p. 281-298.

86. Lazier C.B. Ontogeny of the vitellogenic response to o estradiol and of the soluble nuclear oestrogen receptor in embryonic«chick liver. Biochem. J., 1978, v. 17 4, p. 143-15 2.

87. Leonard T.B., Jacob S.T. Alteration in DNA— dependent RNA polymerases I and II from rat liver by thyoacetamide: Preferential increase in the level of chro-matin-associated nucleolar RNA polymerase IB. Biochemistry, 1977,v. 16, N 20, p. 4538-4544.

88. Lindberg U., Persson T. Isolation of mRNA from KB—cells by affinity chromatography on polyuridi—lie acid covalently linked to sepharose. Eur. J. Biochem., 19 7 2, v. 3 1, p. 24 6-2 5 4.

89. Lindell T.J. Inhibition of eukariotic DNA»depen-dent RNA polymerase release from isolated nuclei and nucleoly by phenylmethylsulfonilfluoride. Archives of Biochemistry and Biophysics, 19 75, v. 171, N 1, p. 2 6 8— 2 7 5.

90. Lindell T.J. Evidence for an extranucle olar mechanism of actinomycin D action. Nature, 1976, v. 263, p. 347-350.

91. Lipid and polypeptide components of the crystalline yolk system from Xenopus laevis / D.H.Ohlendorf, G . R . B ar bar as h, A.Trout et al. J. Biol. Chem., 1977, v. 252, N 22, p. 7992-8001.

92. Lipovitellin synthesizing polysomes: specific and quantitative isolation / E.S.Bos, R.J.Vonk, M.Gruber, G.Ab. FEBS Lett., 1972, v. 24, p. 197-200.

93. Loening U.E. Molecular weights of ribosomal RNA in relation to evolution. J. Mol. Biol., 1968,v. 38, N 3, p. 355-365.

94. Luck D.N., Hamilton T.H. Early estrogen action; stimulation of the methabolism of high molecular weight and ribosomal R N A s.- Proc. Nat. Acad. Sei. USA, 1972, v. 69, N 1, p. 157-161.

95. Nuclear location of ribonuclease H and increase level of magnesium-dependent ribonuclease H in rat liver of thioacetamide treatment / Y.Sawai, N.Kitahara, W.L.Thang et al. J. Biochem., 19 81, v. 90, N 1, p. 11-16.

96. On the chromosomal distribution of DNA complementary to ribosomal and stable RNA / P.M.Ritossa, K.C. Atwood, Lindsley , S . S p i e g e lm an. Proc. Nat. Cancer Inst. Monogr., 1966, v. 23, p. 449-474.

97. On the structure of transcriptional unit in mammalian cells / G.P.Georgiev, A.P.Ryskov, C.Coutelle et eil.

98. B B A, 1972, v. 259, N 2, p. 259-283.

99. Palmiter R.D. Magnesium precipitation of ribonuc-leo protein complex. Expedient techniques for the isolen tion of undegraded polysomes and messenger ribonucleic acid. Biochemistry, 1974, v. 13, N 17, p. 3606-3615.

100. Peacock A.C., Dingman C.W, Resolution of multiple ribonucleic acid species by Polyacrylamide gel electrophoresis. Biochemistry, 1967, v. 6, N 6, p. 1818« 182 7.

101. Pearce J,, Balnave D. The effect of estradiol administration on the hepatic activities of some enzymes of carbohydrate, am i n o ac i d an d lipid m et ab olism in the immature pullet. Horm. Metab. Res., 1976, v. 8, p. 181« - 183.

102. Perry R.P., Kelly D.E. Inhilition of RNA synthesis by actinomycin D : characteristic dose—response of different RNA species. J. Cell. Physiol., 19 7 0, v. 76, p. 175-184.

103. Processing of RNA / N.Nicolaev, C.H.Birge, S. Gotoh et al. Brookh av en Symp. Biol., 1975, y. 25,p. 17 5- 19 3.

104. Purification of vitellogeni n m RNA and serum albumin mRNA from avian liver by preparative gel electrophoresis / B. Wi e r i ng a, J.Mulder, A.Van Der E n d e et al. -Eur. J. Biochem., 1978, v. 89, N 1, p. 67-79.

105. Retel J., Planta R.J. Nuclear satellite DNAs of yest. BBA, 1972, v. 2 8 1, N 3, p. 299-309.15 5. Ribosomal ribonucleic acid in eukariotes / R.J. Planta, J.Retel, J.Klootwijk et al. Biochem. Soc. Trans., 197 7, v. 5, p. 4 6 2-4 6 6.

106. Roeder R.G., Rutter W.J. Multiple forms of D N A— dependent RNA polymerase in eukaryotic organisms. — Nature, 1969, v. 224, p. 234-237.

107. Rubin G.M., Sulston J.E. Physical linkage of the 5S cjstrons to the 18 S and S8 S ribosomal RNA cistronsin Sac char omyce s cerevisiae. J. Mol, Biol., 1973, v. 79, N 3, p. 5 21^.530.

108. Ryffel G.U. Synthesis of vit e 11 o g e n in, an attractive model for inve stigating hormone-induced gene active^ tion. Molecular and Cellular Endocrinology, 1978, v. 12, N 3, p. 2 3 7-246.

109. Schjeide O.A., Lai G.B. E str o g e n-d ir e cted redifferentiation of the avian liver. In; Cell Differentiation, New York, 19 7 0, p. 447-475.

110. Seifart K.H., Benecke B.J., Juhasz P.P. Multiple RNA polymerase species from rat liver tissue: possible existence of a cytoplasmic enzyme. Arch. Biochem. Biophys., 1972, v. 151, p. 519-532.

111. Selection of albumin mRNA by Thioa c e t am i d e / A.M.S.Stolf, F.H.D'Abr onzo, L.Wang et al. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1976, v. 72, N 4, p. 1576-1584.

112. Shapiro D.J., Baker H.J. Purification and characterization of Xenopus laevis vitellogenin messenger RNA.- J. Biol, Chem., 1977, v. 252, N 15, p. 5244-5250.

113. Size, complexity and abundance of a specific poly (A ) —c ont ain in g RNA of liver from male Xenopus induced to vitellogenin synthesis by estrogen

114. W.Wahly, T.Wyler , R.Weber, G.U.Ryffel. Eur. J.

115. Biochem., 1976, v. 66, p. 457-465.

116. Smith R.G., Schwartz R.J. Isolation and purification of a hen nuclear oestrogen receptor and its effect on t r an scription of chick chromatin. Biochem. J., 1979, v. 184, N 2, p. 3 3 1-3 43.

117. Soeiro R., Vaughan M.H., Darnell J.E. The effect of puromycin on intranuclear steps in ribosome biosynthesis. J. Cell. Biol., 1968, v. 36, N 1, p. 91-102.

118. Specific inhibition of nuclear RNA polymerase II by c(«amanitin / T.J.Lindell, P.Weinberg, P.W.Morris et al. Science, 1970, v. 17 0, p. 447-449.

119. Strehler b.l., Chang M.P., Johnson L.K. Loss of hybridizable ribosomal DNA from human postmitotic tussues during aging: I. Age-de p e nd ent loss in human myocardium,.; Mech. Ageing Devel., 19 79, v. 11, N 6, p. 371- 378.

120. Translation of rat liver fatty acid synthetase mRNA in a cell-free system derived from wheat germ / P.K.Flick,' J.Chen, A.W.Alberts, P.R.Vagelos. Proc. Nat. Acad. Sci . USA, 1978, v. 75, N 2, p. 730-734.

121. Van den Berg J.A., Gruber M., Ab G. Estradiol-induced enhancement of the processing of the 32S ribosomal precursor in rooster liver. FEBS Lett., 1976,v. 6 3, N 1, p. 6 5-7 0.

122. Variation in ribosomal RNA gene number in mouse chromosomes / A. S. He n d e r s o n, E.M.Eicher, M.T.Yu, K.C.Atwood. Cytogenet. Cell Genet., 1976, v. 17, N 6, p. 3 07-3 16.

123. Villalobos J.G., Steel W.J., Busch H. Effects of t h i o ac e t am i d e on 1 ab eling of ribonucleic ac id of isolated nucleoli in vitro. B B A, 1964, v. 91, N 2, p. 233-238.

124. Vitellogenin synthesis in the avian liver / R.G. Deeley, K.P.Mullinix, W. We tekam et al. J. Biol. Chera,, 19 75, v. 250, N 23, p. 9 060^9066.

125. Wachmuth E.D., Jost J.P. Localization of vitellogenin and serum albumin in hepatic parenchymal cells of normal and e str ad i ol-tr e at e d immature chickens. BBA, 1976,' v. 437,' p. 454-461.

126. Wagner E., Penman S., Ingram V. M ethylati on patterns of HeLa cell ribosomal RNA and its nucleolarprecursors. J. Moli Biol., 1967, v. 29, N 3, p. 371-387.

127. Wang S.Y., Williams D.L. Id ent if i c at i on , purificar-tion and characterization of two distinct avian vitellogenins. Biochemistry, 1980, v. 19, N 8, p. 1557-1563.

128. Wiley H.S., Wallace R. A. Three different molecular weight forms of the vitellogenin peptide from Xenopus 1 a ev is. Biochem. Biop hy s. Res. Commun., 1978, v. 85,p. 153-159.

129. Wiley H.S., Wallace R. A, The structure of vitellogenin. Multiple vitellogenins in Xenopus laevis give rise to multiple forms of the yolk proteins. J. Biol. Chem., 1981, v. 256, N 16, p. 8626-8634.

130. Williams D.L., Wang S.Y., Capony P. Multiple response patterns to oestrogenic stimulation in the av j an liver. Steroid Biochemistry, 1979, v. 11, N 12, p. 2 3 1^- 23®.

131. Williams D.L.,' Wang S., Klett H. Decrease in functional albumin mRNA during e s tr o g e n in d u c e d vitellogenin biosynthesis in avian liver. - Proc. Nat, Acad, Sci, USA, 1978, v. 75, N 12, p. 5974- 5978,